一种细菌性阴道病系列妇检试剂盒及其应用方法.pdf

《一种细菌性阴道病系列妇检试剂盒及其应用方法.pdf》由会员分享，可在线阅读，更多相关《一种细菌性阴道病系列妇检试剂盒及其应用方法.pdf（7页完整版）》请在专利查询网上搜索。

1、(10)申请公布号 CN 102690861 A (43)申请公布日 2012.09.26 CN 102690861 A *CN102690861A* (21)申请号 201110073246.8 (22)申请日 2011.03.25 C12Q 1/44(2006.01) C12Q 1/34(2006.01) C12Q 1/28(2006.01) C12Q 1/04(2006.01) (71)申请人 安徽深蓝医疗科技有限公司 地址 230031 安徽省合肥市蜀山新产业园振 兴路 6 号厂房三层 (72)发明人 张超 陈奉玲 洪莲 (54) 发明名称 一种细菌性阴道病系列妇检试剂盒及其应用 方法。

2、 (57) 摘要 本发明公开了一种细菌性阴道病系列妇检试 剂盒， 包括盒体， 在所述的盒体上表面设置有四个 反应孔， 这四个反应孔分别是 ： 过氧化氢反应孔、 白细胞酯酶反应孔、 唾液酸苷酶反应孔、 多胺反应 孔， 在所述的四个反应孔下面对应安装有过氧化 氢活性试剂垫、 白细胞酯酶活性试剂垫、 唾液酸苷 酶活性试剂垫、 多胺活性试剂垫， 所述的四个反应 孔的上面设置有一封条， 所述的盒体为长方体。 本 发明还公开了一种细菌性阴道病系列妇检试剂盒 的应用方法， 本发明具有体积小、 快速、 操作简单、 结果稳定、 易判读， 指标更客观， 无需特殊设备的 优点。 (51)Int.Cl. 权利要求书 。

3、1 页 说明书 4 页 附图 1 页 (19)中华人民共和国国家知识产权局 (12)发明专利申请 权利要求书 1 页 说明书 4 页 附图 1 页 1/1 页 2 1. 一种细菌性阴道病系列妇检试剂盒， 包括盒体， 其特征在于 ： 在所述的盒体上表面 设置有四个反应孔， 这四个反应孔分别是 ： 过氧化氢反应孔、 白细胞酯酶反应孔、 唾液酸苷 酶反应孔、 多胺反应孔， 在所述的四个反应孔下面对应安装有过氧化氢活性试剂垫、 白细胞 酯酶活性试剂垫、 唾液酸苷酶活性试剂垫、 多胺活性试剂垫， 所述的四个反应孔的上面设置 有一封条， 所述的盒体为长方体。 2. 根据权利要求 1 所述的一种细菌性阴道病。

4、系列妇检试剂盒， 其特征在于 ： 所述的过 氧化氢活性试剂垫、 白细胞酯酶活性试剂垫、 唾液酸苷酶活性试剂垫、 多胺活性试剂垫， 均 为活性试剂加在载体垫上干燥而成。 3. 根据权利要求 2 所述的一种细菌性阴道病系列妇检试剂盒， 其特征在于 ： 所述的载 体垫为吸水纸、 聚酯膜、 玻璃纤维膜中的任意一种。 4. 根据权利要求 1 所述的一种细菌性阴道病系列妇检试剂盒， 其特征在于 ： 所述的唾 液酸酶活性试剂垫是由 5- 溴 -4 氯 -3- 吲哚神经氨酸、 糖、 血清蛋白、 PH 60.5 的磷酸 盐或醋酸盐缓冲液组成， 其中5-溴-4氯-3-吲哚神经氨酸在溶液中的浓度是0.12g/L， 。

5、糖在溶液中的浓度是 50 200g/L， 血清蛋白在溶液中的浓度是 5 30g/L ； 所述的白细胞酯酶活性试剂垫是由5-溴-4氯-3-吲哚乙酯、 糖、 血清蛋白、 乙醇、 PH 60.5 的磷酸盐缓冲液组成， 其中 5- 溴 -4 氯 -3- 吲哚乙酯在溶液中的浓度是 20 100g/ L， 糖在溶液中的浓度是 50 200g/L， 血清蛋白在溶液中的浓度是 5 30g/L， 乙醇在溶液 中的浓度是 10 50 ； 所述的过氧化氢活性试剂垫是由辣根过氧化物酶、 乙醇、 PH 70.5 的磷酸盐缓冲 液组成， 其中辣根过氧化物酶在溶液中的浓度是 0.1 2g/L， 乙醇在溶液中的浓度是 50 。

6、90 ； 所述的多胺活性试剂垫是由亚硝基铁氰化钠、 乙醇、 水组成， 其中亚硝基铁氰化钠在溶 液中的浓度是 0.1 1.0g/L， 乙醇在溶液中的浓度是 50 90。 5. 根据权利要求 1 所述制得一种细菌性阴道病系列妇检试剂盒应用方法， 其特征在 于 ： 应用步骤为 ： 步骤 1、 取出反应装置、 稀释液、 显色液等试剂恢复置室温 ； 步骤 2、 样本采集 ： 插入窥阴器， 长棉拭子从阴道侧壁或后穹窿处尽可能多采集分泌 物， 滴加样本稀释液洗涤得样本液 ； 步骤 3、 在反应装置的四个反应孔中每孔滴加样本液， 之后在过氧化氢反应孔滴加过氧 化氢显色液， 在唾液酸酶反应孔中滴加唾液酸酶显色液。

7、， 在多胺反应孔中滴加多胺显色液， 置 37温育 10 分钟， 观察显色结果。 6. 根据权利要求 5 所述的一种细菌性阴道病系列妇检试剂的应用方法， 其特征在于 ： 所述的唾液酸酶显色液是0.052重氮试剂 ； 所述的过氧化氢显色液是0.010.1四 甲基联苯胺溶液 ； 所述的多胺显色液是15的苯酚溶液和含0.11次氯酸钠、 0.1 1氢氧化钠的溶液。 7. 根据权利要求 5 所述的一种细菌性阴道病系列妇检试剂的应用方法， 其特征在于 ： 所述的稀释液是 0.8 0.9氯化钠溶液。 权 利 要 求 书 CN 102690861 A 2 1/4 页 3 一种细菌性阴道病系列妇检试剂盒及其应用方。

8、法 技术领域 0001 本发明涉及一种细菌性阴道病系列妇检试剂盒及其应用方法， 应用于妇科阴道分 泌物的细菌感染的快速筛查领域。 背景技术 0002 细菌性阴道病 (Bacterial Vaginosis， 简称 BV) 是育龄妇女最常见的阴道感染 性疾病， 占外阴阴道感染的 40 -50， 近年来研究发现细菌性阴道病不仅与盆腔炎、 阴道 炎、 泌尿系感染等妇科疾病有关， 还可以引起羊膜腔感染、 胎膜早破、 产褥感染、 低出生体 重、 新生儿感染及新生儿黄疸等导致不良围产结局， 因此越来越被人们重视。 0003 此病的典型临床症状为阴道异常分泌物明显增多， 呈稀薄均质状或稀糊状， 为灰 白色、。

9、 灰黄色或乳黄色， 带有特殊的鱼腥臭味。由于碱性前列腺液可造成胺类释放， 故表现 为性交时或性交后臭味加重。月经期阴道 PH 值升高， 故经期时或经期后臭味也可加重。患 者外阴有不适感， 包括不同程度的外阴瘙痒， 一般无明显时间性， 但在休息状态及心情紧张 状态下痒感更加明显。尚有不同程度的外服灼热感， 有的患者出现性交痛。极少数患者出 现下腹疼痛、 性交困难及排尿异常感。阴道粘膜上皮在发病时无明显充血表现。 0004 本病常可合并其它阴道性传播疾病， 故其临床表现可受到合并症的影响而有所不 同。如当合并淋球菌感染时， 阴道分泌物可表现为明显脓性状， 并可出现尿痛、 排尿困难等 尿路刺激症状 。

10、； 合并滴虫感染时， 可 出现泡沫状阴道分泌物， 且瘙痒加剧， 呈奇痒 ； 合并念 珠菌感染时， 阴道分泌物可呈现为凝乳状或豆腐渣样。 0005 Amsel 法是目前作为诊断 BV 传统的使用方法， 该方法提供了以下四点诊断标准并 规定至少三点标准符合， 则可诊断为 BV ： (1) 薄均质的阴道分泌物， 粘附于阴道壁但易于擦 拭。(2) 阴道 PH 大于 4.7。(3) 在阴道分泌物中见到线索细胞 (clue cell)。(4) 氨气味试 验 (whiff test) 阳性。但四项指标均受外来因素的影响， pH 与胺实验敏感性不足、 特异性 差， 并受月经、 精液、 阴道灌洗、 取材部位等多。

11、种因素影响， 作为四项指标敏感度、 特异性最 高的线索细胞识别时主要受检验者的经验所限。ES-chenbaeh 认为， 将 pH 提高到 4.7 诊断 可能更准确。Spiegel 等提出 Gram 染色诊断 BV ： Gardner 菌及其他致病菌存在 ； 每个油镜 视野乳酸杆菌 5 个， Krohn 等调查表明该实验特异性为 95， 但敏感度只有 62， 阳性预 测值为 76。国产细菌性阴道病 (BV) 多胺快速检测试剂盒的原理是检测分泌物中胺的含 量， 但几乎所有的阴道感染都伴有胺的增加， 其灵敏度可达98， 但特异度仅有50左右。 0006 细菌性阴道病系列妇检试剂盒选取阴道分泌物的 H。

12、2O2 浓度、 唾液酸苷酶、 白细胞 酯酶和多胺作为检测指标。 H2O2直接由产H2O2的乳酸杆菌分泌， 其浓度与乳酸杆菌的数量 成正比， 直接反应维持阴道正常内生态的乳酸杆菌数量， 能直接反应阴道内生态状况。 唾液 酸酶是由阴道菌群中厌氧菌分泌的， 其活性与厌氧菌数量成正比， 酶活性高反映阴道内厌 氧菌过度生长， 特异性较好。 临床资料分析结果显示 ： 与Amsel法比较， 其灵敏度89.4、 特 异度 95.8、 阳性预测值 82.0、 阴性预测值 97.7、 符合率 94.7， 基本达到对 BV 筛查 诊断要求。但有部分引发 BV 的厌氧菌不产生唾液酸酶或产酶量少， 造成部分 BV 漏检。

13、。故 说 明 书 CN 102690861 A 3 2/4 页 4 将 唾液酸酶活性与 H2O2 浓度结合分析作为临床诊断 BV 的指标， 兼顾阴道内产 H2O2 乳酸 杆菌的数量， 减少了部分造成唾液酸酶假阴性或假阳性的发生， 使诊断 BV 指标更客观。白 细胞酯酶属广泛的非特异性指标， 较敏感， 阳性者提示阴道分泌物内有大量多核白细胞， 结 合清洁度结果， 可帮助临床医生了解患者阴道壁有无实质性粘膜受损， 给予消炎治疗。 多胺 是由阴道细菌自营酶分解阴道黏液蛋白， 产生该类细菌的营养物质为多胺。正常阴道分泌 物中只能检出少量的单胺， 少数人可检测到多胺。 阴道感染时， 分泌物中可检出大量的。

14、单胺 和多胺， 这些胺类是阴道分泌物产生异味的主要原因。胺是碱性的， 使分泌物 pH 增加。由 于几乎所有的阴道感染都伴有胺的增加， 因此， 胺测定已在妇科检查中得到广泛使用。 0007 使用 BV 系列妇检试剂盒可帮助医生了解疗效和治愈标准的判定， 给予重建阴道 微生态平衡治疗。与传统检验方法相比， 细菌性阴道病系列妇检试剂盒具有快速、 操作简 单、 结果稳定、 易判读， 指标更客观， 无需特殊设备等特点， 可作为临床妇科评估患者阴道内 微生态环境状况、 白带异常病原体的初步确定、 疗效的观察和治愈标准判定的指标。 结合阴 道分泌物的清洁度、 滴虫、 霉菌检查， 可取代传统白带常规检查的旧指。

15、标。在基层医院妇产 科作为阴道分泌物异常患者、 孕妇、 妇科手术之前的常规筛及治愈标准的判定， 有较好的临 床应用价值。 发明内容 0008 本发明是为避免上述细菌性阴道病传统诊断方法所存在的不足之处， 提供一种快 速、 操作简单、 结果稳定、 易判读， 指标更客观的一种细菌性阴道病系列妇检试剂盒及其应 用。 0009 本发明提供了一种细菌性阴道病系列妇检试剂盒， 包括盒体， 在所述的盒体上表 面设置有四个反应孔， 这四个反应孔分别是 ： 过氧化氢反应孔、 白细胞酯酶反应孔、 唾液酸 苷酶反应孔、 多胺反应孔， 在所述的四个反应孔下面对应安装有过氧化氢活性试剂垫、 白细 胞酯酶活性试剂垫、 唾。

16、液酸苷酶活性试剂垫、 多胺活性试剂垫， 所述的四个反应孔的上面设 置有一封条， 所述的盒体为长方体。 0010 所述的唾液酸酶活性试剂垫是由 5- 溴 -4 氯 -3- 吲哚神经氨酸、 糖、 血清蛋白、 PH 60.5 的磷酸盐或醋酸盐缓冲液组成， 其中 5- 溴 -4 氯 -3- 吲哚神经氨酸在溶液中的浓 度是0.12g/L， 糖在溶液中的浓度是50200g/L， 血清蛋白在溶液中的浓度是530g/ L ； 0011 所述的白细胞酯酶活性试剂垫是由 5- 溴 -4 氯 -3- 吲哚乙酯、 糖、 血清蛋白、 乙醇、 PH 60.5 的磷酸盐缓冲液组成， 其中 5- 溴 -4 氯 -3- 吲哚乙。

17、酯在溶液中的浓度是 20 100g/L， 糖在溶液中的浓度是 50 200g/L， 血清蛋白在溶液中的浓度是 5 30g/L， 乙醇在 溶液中的浓度是 10 50 ； 0012 所述的过氧化氢活性试剂垫是由辣根过氧化物酶、 乙醇、 PH 70.5 的磷酸盐 缓冲液组成， 其中辣根过氧化物酶在溶液中的浓度是 0.1 2g/L， 乙醇在溶液中的浓度是 50 90 ； 0013 所述的多胺活性试剂垫是由亚硝基铁氰化钠、 乙醇、 水组成， 其中亚硝基铁氰化钠 在溶液中的浓度是 0.1 1.0g/L， 乙醇在溶液中的浓度是 50 90。 0014 所述的活性试剂垫由活性试剂加在载体垫上干燥而成。 说 明。

18、 书 CN 102690861 A 4 3/4 页 5 0015 所述的载体垫可以是吸水纸、 聚酯膜、 玻璃纤维膜中的任意一种。 0016 本发明的另一技术方案是公开了一种细菌性阴道病系列妇检试剂的应用方法， 其 应用步骤为 ： 0017 步骤 1、 取出反应装置、 稀释液、 显色液等试剂恢复置室温 ； 0018 步骤 2、 样本采集 ： 插入窥阴器， 长棉拭子从阴道侧壁或后穹窿处尽可能多采集分 泌物， 滴加样本稀释液洗涤得样本液 ； 0019 步骤 3、 在反应装置的四个反应孔中每孔滴加样本液， 之后在过氧化氢反应孔滴加 过氧化氢显色液， 在唾液酸酶反应孔中滴加唾液酸酶显色液， 在多胺反应孔。

19、中滴加多胺显 色液， 置 37温育 10 分钟， 观察显色结果。 0020 所述的唾液酸酶显色液是 0.05 2重氮试剂 ； 0021 所述的过氧化氢显色液是 0.01 0.1四甲基联苯胺溶液 ； 0022 所述的多胺显色液是 1 5的苯酚溶液和含 0.1 1次氯酸钠、 0.1 1氢 氧化钠的溶液。 0023 所述的稀释液是 0.8 0.9氯化钠溶液。 0024 本发明具有以下明显的优势和有益效果 ： 0025 1、 细菌性阴道病系列妇检试剂盒具有快速、 操作简单、 结果稳定、 易判读， 指标更 客观， 无需特殊设备等特点。 0026 2、 可作为临床妇科评估患者阴道内微生态环境状况、 白带异。

20、常病原体的初步确 定、 疗效的观察和治愈标准判定的指标。 0027 3、 结合阴道分泌物的清洁度、 滴虫、 霉菌检查， 可取代传统白带常规检查的旧指 标。 0028 4、 在基层医院妇产科作为阴道分泌物异常患者、 孕妇、 妇科手术之前的常规筛及 治愈标准的判定， 有较好的临床应用价值。 附图说明 0029 图 1 为本发明一种细菌性阴道病系列妇检试剂盒的结构示意 图 ； 0030 图 2 为本发明一种细菌性阴道病系列妇检试剂盒的侧面剖示图。 0031 其中 ： 1- 盒体 ； 2- 多胺反应孔 ； 3- 唾液酸苷酶反应孔 ； 4- 白细胞酯酶反应孔 ； 5-过氧化氢反应孔 ； 6-封条 ； 2。

21、1-多胺活性试剂垫 ； 31-唾液酸苷酶活性试剂垫 ； 41-白细胞 酯酶活性试剂垫 ； 51- 过氧化氢活性试剂垫。 具体实施方式 0032 如图 1、 图 2 所示， 一种细菌性阴道病系列妇检试剂盒， 包括盒体 1， 在所述的盒体 上 1 表面设置有四个反应孔， 这四个反应孔分别是 ： 过氧化氢反应孔 5、 白细胞酯酶反应孔 4、 唾液酸苷酶反应孔 3、 多胺反应孔 2， 在所述的四个反应孔下面对应安装有过氧化氢活性 试剂垫51、 白细胞酯酶活性试剂垫41、 唾液酸苷酶活性试剂垫31、 多胺活性试剂垫21， 所述 的四个反应孔的上面设置有一封条 6， 所述的盒体 1 为长方体。 0033 。

22、所述的唾液酸酶活性试剂垫 31 是由 5- 溴 -4 氯 -3- 吲哚神经氨酸、 糖、 血清蛋白、 PH 60.5 的磷酸盐或醋酸盐缓冲液组成， 其中 5- 溴 -4 氯 -3- 吲哚神经氨酸在溶液中 说 明 书 CN 102690861 A 5 4/4 页 6 的浓度是 0.1 2g/L， 糖在溶液中的浓度是 50 200g/L， 血清蛋白在溶液中的浓度是 5 30g/L ； 0034 所述的白细胞酯酶活性试剂垫 41 是由 5- 溴 -4 氯 -3- 吲哚乙酯、 糖、 血清蛋白、 乙醇、 PH 60.5 的磷酸盐缓冲液组成， 其中 5- 溴 -4 氯 -3- 吲哚乙酯在溶液中的浓度是 20。

23、 100g/L， 糖在溶液中的浓度是 50 200g/L， 血清蛋白在溶液中的浓度是 5 30g/L， 乙醇在溶液中的浓度是 10 50 ； 0035 所述的过氧化氢活性试剂垫 51 是由辣根过氧化物酶、 乙醇、 PH 70.5 的磷酸 盐缓冲液组成， 其中辣根过氧化物酶在溶液中的浓度是 0.1 2g/L， 乙醇在溶液中的浓度 是 50 90 ； 0036 所述的多胺活性试剂垫 21 是由亚硝基铁氰化钠、 乙醇、 水组成， 其中亚硝基铁氰 化钠在溶液中的浓度是 0.1 1.0g/L， 乙醇在溶液中的浓度是 50 90 ； 0037 所述的活性试剂垫由活性试剂加在载体垫上干燥而成。 0038 所。

24、述的载体垫可以是吸水纸、 聚酯膜、 玻璃纤维膜中的任意一种。 0039 本发明的另一技术方案是公开了一种细菌性阴道病系列妇检试剂的应用， 其应用 步骤为 ： 0040 步骤 1、 取出反应装置、 稀释液、 显色液等试剂恢复置室温 ； 0041 步骤 2、 样本采集 ： 插入窥阴器， 长棉拭子从阴道侧壁或后穹窿处尽可能多采集分 泌物， 滴加样本稀释液洗涤得样本液 ； 0042 步骤 3、 在反应装置的四个反应孔中每孔滴加样本液， 之后在过氧化氢反应孔滴加 过氧化氢显色液， 在唾液酸酶反应孔中滴加唾液酸酶显色液， 在多胺反应孔中滴加多胺显 色液， 置 37温育 10 分钟， 观察显色结果。 004。

25、3 所述的唾液酸酶显色液是 0.05 2重氮试剂 ； 0044 所述的过氧化氢显色液是 0.01 0.1四甲基联苯胺溶液 ； 0045 所述的多胺显色液是 1 5的苯酚溶液和含 0.1 1次氯酸钠、 0.1 1氢 氧化钠的溶液。 0046 所述的稀释液是 0.8 0.9氯化钠溶液。 0047 最后应说明的是 ： 以上实施例仅用以说明本发明而并非限制本发明所描述的技术 方案 ； 因此， 尽管本说明书参照上述的各个实施例对本发 明已进行了详细的说明， 但是， 本 领域的普通技术人员应当理解， 仍然可以对本发明进行修改或等同替换 ； 而一切不脱离本 发明的精神和范围的技术方案及其改进， 其均应涵盖在本发明的权利要求范围中。 说 明 书 CN 102690861 A 6 1/1 页 7 图 1 图 2 说 明 书 附 图 CN 102690861 A 7 。