一种氟代丙烯酰胺的衍生物.pdf

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1、(10)申请公布号 CN 102675311 A (43)申请公布日 2012.09.19 CN 102675311 A *CN102675311A* (21)申请号 201210148814.0 (22)申请日 2012.05.03 201110160055.5 2011.06.14 CN C07D 471/04(2006.01) A61K 31/4375(2006.01) A61P 31/04(2006.01) A61P 35/00(2006.01) (71)申请人 苏春华 地址 510620 广东省广州市天河区中海康城 风信街 5 栋 302 申请人 张哲峰 (72)发明人 苏春华 张哲。

2、峰 (54) 发明名称 一种氟代丙烯酰胺的衍生物 (57) 摘要 一种具有显著抗菌及抗肿瘤活性的新化合 物， 结构如下 ( 式 I)， 对耐甲氧西林金黄色葡 萄球菌 (MRSA) 及甲氧西林敏感金黄色葡萄球 菌 (MSSA) 具有很好的抗菌作用， 对于人宫颈 癌 Hela 细胞、 人肝癌 BEL-7402 细胞、 人粘液性 表 皮 样 肺 癌 A549 细 胞， 人 乳 腺 癌 MCF-7/s 细 胞， 人神经胶质瘤 U251 细胞具有较好的抗肿 瘤 作 用。 ( 式 I)R -CH3 或 CF3X O、S 或 NR1 -Cl、 -F、 -CH3、 -CF3、 -OCH3、 -OCF3。 (6。

3、6)本国优先权数据 (51)Int.Cl. 权利要求书 1 页 说明书 10 页 (19)中华人民共和国国家知识产权局 (12)发明专利申请 权利要求书 1 页 说明书 10 页 1/1 页 2 1. 式 I 所示的化合物及其在药学上可以接受的酸的盐及水合物 ： 式 I R -CH3 或 CF3 ； X O、 S 或 N ； R1 -Cl、 -F、 -CH3、 -CF3、 -OCH3、 -OCF3。 2. 如权利要求 1 所述的式 I 化合物， 其中 R -CH3， X O、 S、 N， R1 -H。 3. 如权利要求 1 所述的式 I 化合物， 其中 R -CF3， X O、 S、 N， R。

4、1 -H。 4. 如权利要求 1 所述的式 I 化合物， 其中 R -CH3， X O， R1 -H。 5. 如权利要求 1 所述的式 I 化合物， 其中 R -CH3， X S， R1 -H。 6. 如权利要求 1 所述的式 I 化合物， 其中 R -CH3， X N， R1 -H。 7. 如权利要求 1 所述的式 I 化合物， 其中 R -CF3， X O， R1 -H。 8. 如权利要求 1 所述的式 I 化合物， 其中 R -CF3， X S， R1 -H。 9. 如权利要求 1 所述的式 I 化合物， 其中 R -CF3， X N， R1 -H。 10. 如权利要求 1-9 所述的化。

5、合物及其在药学上可以接受的酸的盐及水合物和其它药 用辅料组成的药物组合物在制备用于治疗癌症、 肿瘤或其相关病症的药物中的用途。 权 利 要 求 书 CN 102675311 A 2 1/10 页 3 一种氟代丙烯酰胺的衍生物 技术领域 ： 0001 本发明涉及一种用于抗菌作用的新化合物， 该化合物对 MRSA、 MSSA 具有很好的抗 菌活性。 背景技术 ： 0002 近年来， 随着抗生素的广泛应用 ( 包括人和动物 )、 糖皮质激素及免疫抑制剂应用 的增加以及老年患者的增多， 肺部耐药菌感染问题日益突出。这些耐药菌常见的有耐青霉 素肺炎链球菌、 耐甲氧西林金黄色葡萄球菌 (MRSA)、 耐万。

6、古霉素肠球菌 (VRE)、 产超广谱 内酰胺酶 (ESBL) 革兰阴性菌等。有关耐甲氧西林金黄色葡萄球菌也是比较棘手的问题， 自首株 MRSA 检出以来的 40 余年， MRSA 感染在世界各地一直呈上升趋势， 美国国家院内感 染监测 (NNIS) 报道， 1975 年 182 所医院 MRSA 占金葡菌感染总数的 2.4， 1997 年上升至 24.8。国内 90 年代后京、 沪等地大型医院 MRSA 分离率均超过金葡菌感染总数的 50以 上。MRSA 具有多重耐药性， 对所有 内酰胺类抗生素 ( 包括含酶抑制剂 ) 耐药， 并常对喹 诺酮类、 氨基糖苷类、 大环内酯类抗生素及克林霉素等耐药。

7、。临床证实， 糖肽类抗生素 ( 万 古霉素、 去甲万古霉素、 替考拉宁)对MRSA敏感， 目前已成为临床上首选药物。 1997年日本 发现对万古霉素中度敏感的金黄色葡萄球菌 (VISA)， 2002 年 美国发现耐万古霉素的金黄 色葡萄球菌 (VRSA)， 迄今为止， 全世界已报道多例 VISA 及 2 例 VRSA 感染的病例。VISA 感 染可选用糖肽类与其他抗生素联合治疗， 如利福平、 阿米卡星 / 阿贝卡星等， 亦可选用新型 抗生素， 如奎奴普丁/达福普丁(quinupristin/dolfopristin)、 利奈唑胺(linezolid)等， VRSA感染可选用新型抗生素。 然而这。

8、些药物在临床应用一段时间后均产生了不同程度的耐 药性， 因此探究针对耐药菌的新抗生素成为了必要。我们合成了一系列如权利要求 1 所述 的化合物， 经过实验证明具有较好的抗菌作用和一定的抗肿瘤作用。 发明内容 0003 我们提供了一种氟代丙烯酰胺化合物， 这种化合物对耐甲氧西林金葡菌 (MRSA)、 甲氧西林敏感金葡菌 (MSSA) 的抑菌效果显著， 优于去甲基万古霉素等抗生素， 同时通过实 验证明该化合物具有抗肿瘤作用。这种化合物可通过下列的路线来制备 ： 0004 说 明 书 CN 102675311 A 3 2/10 页 4 0005 其中化合物 1a-f 指 R -CH3 或 CF3、 。

9、X O、 S 或 N、 R1 -H 时 6 个不同的化合 物。 具体实施例 ： 0006 实施例 1 ： 化合物 1a 的合成 0007 0008 1) 化合物 3 的合成 ： 0009 将 45.4 克原料 2， 20.6 克丙烯酸甲酯和 1.26 克三苯基磷溶于 100.0mL 的 DMF 和 200.0mL 的乙腈中， 加入醋酸钯 0.66 克， 反应体系用氮气置换三次， 在氮气氛围下， 100中 搅拌过夜。停止反应， 冷却至室温， 抽滤， 滤液减压蒸馏除去溶剂后加入 400.0mL 10.0的 氢氧化钠溶液， 搅拌 3 小时后， 浓盐酸调节 pH 3.0 左右， 有大量的固体析出， 抽。

10、滤， 滤饼用 乙醇重结晶， 50下真空干燥 5 小时后得到 26.5 克化合物 3， 产率为 61。HNMR(400Hz， CDCl3) ： 11.01(s， 1H)， 8.91(s， 1H)， 8.37(s， 1H)， 8.02(s， 1H)， 7.61(d， J 13.6Hz， 1H)， 6.42(d， J13.6Hz， 1H)， 2.84(t， J4.8Hz， 2H)， 2.51(t， J4.8Hz， 2H) ； MS(m/z) ： 219.2。 0010 2) 化合物 4 的合成 ： 0011 将 26.4 克化合物 3 加入到 100.0mL 的氯化亚砜中， 在 80下回流 3 小时。

11、， 减压蒸 说 明 书 CN 102675311 A 4 3/10 页 5 馏除去没有反应完的氯化亚砜后得到化合物 4， 产品不经后处理， 用氮气保护低温保存备用 即可。 0012 3) 化合物 6a 的合成 ： 0013 将 0.2mol 的原料 5a， 0.24mol 的溴乙酸甲酯和 0.6mol 的无水碳酸钾在 200mL 的 乙腈中回流过夜。 停止加热， 冷却至室温， 抽滤， 滤液减压蒸馏后用乙醇重结晶， 得到化合物 6a。 C11H7F3O3， 33.2克， 产率为68。 HNMR(400Hz， CDCl3) ： 7.49(m， 1H)， 7.42(m， 1H)， 7.19(m， 1。

12、H)， 7.13(m， 1H)， 3.88(s， 3H) ； MS(m/z) ： 245.2。 0014 4) 化合物 7a 的合成 0015 将 0.05mol 化合物 6a， 0.1mol 甲胺盐酸盐和 0.1mol 三乙胺加入到 100.0mLd 的 甲醇中， 在 60下搅拌 5 小时。停止反应， 反应液冷却至室温， 减压蒸馏除去甲醇， 加入 100.0mL 冰水， 有大量的固体析出， 抽滤， 得到固体， 用水洗涤 (50mL3) 后用乙醇重结晶后 得到化合物 7a。C11H8F3NO2， 11.2 克， 产率为 92， MS(m/z) ： 244.2。 0016 5) 化合物 8a 的。

13、合成 ： 0017 将 0.04mol 化合物 7a 溶于 80mL 的 THF 中， 在冰水浴中分批加入 0.02mol 四氢铝 锂， 加毕， 在 70下回流 3 小时， 冷却至室温， 在冰水浴中慢慢滴加 100.0mL 氯化铵饱和溶 液， 抽滤， 滤液分层， 取上层有机相， 水相用 DCM 萃取 (30mL3)， 合并有机相， 无水硫酸钠干 燥， 抽滤， 滤液减压蒸馏后得到固体， 乙醇结晶后得到化合物 8a。C11H10F3NO， 8.1 克， 产率为 88， MS(m/z) ： 230.1。 0018 6) 化合物 1a 的合成 ： 0019 将 10.0mmol 化合物 4 和 12.。

14、0mmol 化合物 8a 溶于 50.0mL 的 THF 中， 在冰浴下滴 加 15.0mmol 三乙胺的 20.0mL 的 THF 溶液。滴加完毕后， 反应液在室温下继续搅拌 3 小时， 停止反应， 倒入100mL水， 分层， 水层用DCM萃取(50mL3)， 合并有机相， 无水硫酸钠干燥后 减压蒸馏得到化合物 1a 的粗产品， 经无水乙醇重结晶后得到目标化合物 1a。C22H18F3N3O3， 3.3 克， 产率为 79， HNMR(400Hz， CDCl3) ： 8.51(s， 1H)， 8.01(s， 1H)， 7.89(s， 1H)， 7.50(d， J 13.6Hz， 1H)， 7。

15、.49(m， 1H)， 7.42(m， 1H)， 7.19(m， 1H)， 7.13(m， 1H)， 6.98(d， J 13.6Hz， 1H)， 4.07(s， 2H)， 2.90(s， 3H)， 2.83(t， J 4.8Hz， 2H)， 2.51(t， J 4.8Hz， 2H) ； MS(m/z) ： 430.4。 0020 实施例 2 ： 化合物 1b 的合成 0021 0022 1) 化合物 6b 的合成 ： 0023 将 0.2mol 的原料 5b， 0.24mol 的溴乙酸甲酯和 0.6mol 的无水碳酸钾在 200mL 的 乙腈中回流过夜。 停止加热， 冷却至室温， 抽滤， 滤。

16、液减压蒸馏后用乙醇重结晶， 得到化合物 说 明 书 CN 102675311 A 5 4/10 页 6 6b。C11H7F3O2S， 37.4 克， 产率为 72。MS(m/z) ： 261.2。 0024 2) 化合物 7b 的合成 ： 0025 将 0.05mol 化合物 6b， 0.1mol 甲胺盐酸盐和 0.1mol 三乙胺加入到 100.0mLd 的 甲醇中， 在 60下搅拌 5 小时。停止反应， 反应液冷却至室温， 减压蒸馏除去甲醇， 加入 100.0mL 冰水， 有大量的固体析出， 抽滤， 得到固体， 用水洗涤 (50mL3) 后用乙醇重结晶后 得到化合物 7b。C11H8F3N。

17、OS， 12.5 克， 产率为 96， MS(m/z) ： 260.2。 0026 3) 化合物 8b 的合成 ： 0027 将 0.04mol 化合物 7b 溶于 80mL 的 THF 中， 在冰水浴中分批加入 0.02mol 四氢铝 锂， 加毕， 在 70下回流 3 小时， 冷却至室温， 在冰水浴中慢慢滴加 100.0mL 氯化铵饱和溶 液， 抽滤， 滤液分层， 取上层有机相， 水相用 DCM 萃取 (30mL3)， 合并有机相， 无水硫酸钠干 燥， 抽滤， 滤液减压蒸馏后得到固体， 乙醇结晶后得到化合物 8b。C11H10F3NS， 9.3 克， 产率为 95， MS(m/z) ： 24。

18、6.2。 0028 4) 化合物 1b 的合成 ： 0029 将 10.0mmol 化合物 4 和 12.0mmol 化合物 8b 溶于 50.0mL 的 THF 中， 在冰浴下滴 加 15.0mmol 三乙胺的 20.0mL 的 THF 溶液。滴加完毕后， 反应液在室温下继续搅拌 3 小时， 停止反应， 倒入100mL水， 分层， 水层用DCM萃取(50mL3)， 合并有机相， 无水硫酸钠干燥后 减压蒸馏得到化合物 1b 的粗产品， 经无水乙醇重结晶后得到目标化合物 1b。C22H18F3N3O2S， 3.6 克， 产率为 81， HNMR(400Hz， CDCl3) ： 8.51(s， 1。

19、H)， 8.01(s， 1H)， 7.89(s， 1H)， 7.86(m， 1H)， 7.78(m， 1H)， 7.50(d， J 13.6Hz， 1H)， 7.33(m， 1H)， 7.31(m， 1H)， 6.98(d， J 13.6Hz， 1H)， 4.22(s， 2H)， 2.90(s， 3H)， 2.83(t， J 4.8Hz， 2H)， 2.51(t， J 4.8Hz， 2H) ； MS(m/z) ： 446.5。 0030 实施例 3 ： 化合物 1c 的合成 ： 0031 0032 1) 化合物 6c 的合成 ： 0033 将 0.2mol 的原料 5c， 0.24mol 的溴。

20、乙酸甲酯和 0.6mol 的无水碳酸钾在 200mL 的 乙腈中回流过夜。 停止加热， 冷却至室温， 抽滤， 滤液减压蒸馏后用乙醇重结晶， 得到化合物 6c。C11H8F3O2N， 27.2 克， 产率为 56。MS(m/z) ： 244.2。 0034 2) 化合物 7c 的合成 ： 0035 将 0.05mol 化合物 6c， 0.1mol 甲胺盐酸盐和 0.1mol 三乙胺加入到 100.0mLd 的 甲醇中， 在 60下搅拌 5 小时。停止反应， 反应液冷却至室温， 减压蒸馏除去甲醇， 加入 100.0mL 冰水， 有大量的固体析出， 抽滤， 得到固体， 用水洗涤 (50mL3) 后用。

21、乙醇重结晶后 得到化合物 7c。C11H9F3N2O， 11.1 克， 产率为 91， MS(m/z) ： 243.2。 说 明 书 CN 102675311 A 6 5/10 页 7 0036 3) 化合物 8c 的合成 ： 0037 将 0.04mol 化合物 7c 溶于 80mL 的 THF 中， 在冰水浴中分批加入 0.02mol 四氢铝 锂， 加毕， 在 70下回流 3 小时， 冷却至室温， 在冰水浴中慢慢滴加 100.0mL 氯化铵饱和溶 液， 抽滤， 滤液分层， 取上层有机相， 水相用 DCM 萃取 (30mL3)， 合并有机相， 无水硫酸钠干 燥， 抽滤， 滤液减压蒸馏后得到固。

22、体， 乙醇结晶后得到化合物 8c。C11H11F3N2， 8.4 克， 产率为 92， MS(m/z) ： 229.2。 0038 4) 化合物 1c 的合成 ： 0039 将 10.0mmol 化合物 4 和 12.0mmol 化合物 8c 溶于 50.0mL 的 THF 中， 在冰浴下滴 加 15.0mmol 三乙胺的 20.0mL 的 THF 溶液。滴加完毕后， 反应液在室温下继续搅拌 3 小时， 停止反应， 倒入100mL水， 分层， 水层用DCM萃取(50mL3)， 合并有机相， 无水硫酸钠干燥后 减压蒸馏得到化合物 1c 的粗产品， 经无水乙醇重结晶后得到目标化合物 1c。C22H。

23、19F3N4O2， 3.1 克， 产率为 73， HNMR(400Hz， CDCl3) ： 10.01(s， 1H)， 8.51(s， 1H)， 8.01(s， 1H)， 7.89(s， 1H)， 7.50(d， J 13.6Hz， 1H)， 7.26(m， 1H)， 7.18(m， 1H)， 6.98(d， J 13.6Hz， 1H)， 6.86(m， 1H)， 6.71(m， 1H)， 4.26(s， 2H)， 2.90(s， 3H)， 2.83(t， J 4.8Hz， 2H)， 2.51(t， J 4.8Hz， 2H) ； MS(m/z) ： 429.4。 0040 实施例 4 ： 化合。

24、物 1d 的合成 ： 0041 0042 1) 化合物 7d 的合成 ： 0043 将 0.05mol 化合物 6a， 0.1mol 三氟甲胺盐酸盐和 0.1mol 三乙胺加入到 100.0mLd 的甲醇中， 在 60下搅拌 5 小时。停止反应， 反应液冷却至室温， 减压蒸馏除去甲醇， 加入 100.0mL 冰水， 有大量的固体析出， 抽滤， 得到固体， 用水洗涤 (50mL3) 后用乙醇重结晶后 得到化合物 7d。C11H5F6NO2， 13.3 克， 产率为 89， MS(m/z) ： 298.1。 0044 2) 化合物 8d 的合成 ： 0045 将 0.04mol 化合物 7d 溶于。

25、 80mL 的 THF 中， 在冰水浴中分批加入 0.02mol 四氢铝 锂， 加毕， 在 70下回流 3 小时， 冷却至室温， 在冰水浴中慢慢滴加 100.0mL 氯化铵饱和溶 液， 抽滤， 滤液分层， 取上层有机相， 水相用 DCM 萃取 (30mL3)， 合并有机相， 无水硫酸钠干 燥， 抽滤， 滤液减压蒸馏后得到固体， 乙醇结晶后得到化合物 8d。C11H7F6NO， 9.9 克， 产率为 88， MS(m/z) ： 284.1。 0046 3) 化合物 1d 的合成 ： 0047 将 10.0mmol 化合物 4 和 12.0mmol 化合物 8d 溶于 50.0mL 的 THF 中。

26、， 在冰浴下滴 说 明 书 CN 102675311 A 7 6/10 页 8 加 15.0mmol 三乙胺的 20.0mL 的 THF 溶液。滴加完毕后， 反应液在室温下继续搅拌 3 小时， 停止反应， 倒入100mL水， 分层， 水层用DCM萃取(50mL3)， 合并有机相， 无水硫酸钠干燥后 减压蒸馏得到化合物 1d 的粗产品， 经无水乙醇重结晶后得到目标化合物 1d。C22H15F6N3O3， 3.7 克， 产率为 77， HNMR(400Hz， CDCl3) ： 8.51(s， 1H)， 8.01(s， 1H)， 7.89(s， 1H)， 7.50.(d， J 13.6Hz， 1H)。

27、， 7.49(m， 1H)， 7.42(m， 1H)， 7.19(m， 1H)， 7.13(m， 1H)， 6.98(d， J 13.6Hz， 1H)， 4.10(s， 2H)， 2.83(t， J 4.8Hz， 2H)， 2.51(t， J 4.8Hz， 2H) ； MS(m/z) ： 484.4。 0048 实施例 5 ： 化合物 1e 的合成 ： 0049 0050 1) 化合物 7e 的合成 ： 0051 将 0.05mol 化合物 6b， 0.1mol 三氟甲胺盐酸盐和 0.1mol 三乙胺加入到 100.0mLd 的甲醇中， 在 60下搅拌 5 小时。停止反应， 反应液冷却至室温，。

28、 减压蒸馏除去甲醇， 加入 100.0mL 冰水， 有大量的固体析出， 抽滤， 得到固体， 用水洗涤 (50mL3) 后用乙醇重结晶后 得到化合物 7e。C11H5F6NOS， 15.0 克， 产率为 94， MS(m/z) ： 314.2。 0052 2) 化合物 8e 的合成 ： 0053 将 0.04mol 化合物 7e 溶于 80mL 的 THF 中， 在冰水浴中分批加入 0.02mol 四氢铝 锂， 加毕， 在 70下回流 3 小时， 冷却至室温， 在冰水浴中慢慢滴加 100.0mL 氯化铵饱和溶 液， 抽滤， 滤液分层， 取上层有机相， 水相用 DCM 萃取 (30mL3)， 合并。

29、有机相， 无水硫酸钠干 燥， 抽滤， 滤液减压蒸馏后得到固体， 乙醇结晶后得到化合物 8e。C11H7F6NS， 10.1 克， 产率为 84， MS(m/z) ： 300.2。 0054 3) 化合物 1e 的合成 ： 0055 将 10.0mmol 化合物 4 和 12.0mmol 化合物 8e 溶于 50.0mL 的 THF 中， 在冰浴下滴 加 15.0mmol 三乙胺的 20.0mL 的 THF 溶液。滴加完毕后， 反应液在室温下继续搅拌 3 小时， 停止反应， 倒入100mL水， 分层， 水层用DCM萃取(50mL3)， 合并有机相， 无水硫酸钠干燥后 减压蒸馏得到化合物 1e 的。

30、粗产品， 经无水乙醇重结晶后得到目标化合物 1e。C22H15F6N3O2S， 4.2 克， 产率为 84， HNMR(400Hz， CDCl3) ： 8.51(s， 1H)， 8.02(s， 1H)， 7.89(s， 1H)， 7.86(m， 1H)， 7.78(m， 1H)， 7.50(d， J 13.6Hz， 1H)， 7.33(m， 1H)， 7.31(m， 1H)， 6.98(d， J 13.6Hz， 1H)， 4.22(s， 2H)， 2.83(t， J 4.8Hz， 2H)， 2.51(t， J 4.8Hz， 2H) ； MS(m/z) ： 500.4。 0056 实施例 6 ：。

31、 化合物 1f 的合成 ： 0057 说 明 书 CN 102675311 A 8 7/10 页 9 0058 1) 化合物 7f 的合成 ： 0059 将 0.05mol 化合物 6c， 0.1mol 三氟甲胺盐酸盐和 0.1mol 三乙胺加入到 100.0mLd 的甲醇中， 在 60下搅拌 5 小时。停止反应， 反应液冷却至室温， 减压蒸馏除去甲醇， 加入 100.0mL 冰水， 有大量的固体析出， 抽滤， 得到固体， 用水洗涤 (50mL3) 后用乙醇重结晶后 得到化合物 7f。C11H6F6N2O， 13.6 克， 产率为 90， MS(m/z) ： 297.2。 0060 2) 化合。

32、物 8f 的合成 ： 0061 将 0.04mol 化合物 7f 溶于 80mL 的 THF 中， 在冰水浴中分批加入 0.02mol 四氢铝 锂， 加毕， 在 70下回流 3 小时， 冷却至室温， 在冰水浴中慢慢滴加 100.0mL 氯化铵饱和溶 液， 抽滤， 滤液分层， 取上层有机相， 水相用 DCM 萃取 (30mL3)， 合并有机相， 无水硫酸钠干 燥， 抽滤， 滤液减压蒸馏后得到固体， 乙醇结晶后得到化合物 8f。C11H8F6N2， 9.4 克， 产率为 83， MS(m/z) ： 282.2。 0062 3) 化合物 1f 的合成 ： 0063 将 10.0mmol 化合物 4 。

33、和 12.0mmol 化合物 8f 溶于 50.0mL 的 THF 中， 在冰浴下滴 加 15.0mmol 三乙胺的 20.0mL 的 THF 溶液。滴加完毕后， 反应液在室温下继续搅拌 3 小时， 停止反应， 倒入100mL水， 分层， 水层用DCM萃取(50mL3)， 合并有机相， 无水硫酸钠干燥后 减压蒸馏得到化合物 1f 的粗产品， 经无水乙醇重结晶后得到目标化合物 1f。C22H16F6N4O2， 3.5 克， 产率为 74， HNMR(400Hz， CDCl3) ： 10.01(s， 1H)， 8.51(s， 1H)， 8.01(s， 1H)， 7.89(s， 1H)， 7.50(。

34、d， J 13.6Hz， 1H)， 7.26(m， 1H)， 7.18(m， 1H)， 6.98(d， J 13.6Hz， 1H)， 6.86(m， 1H)， 6.71(m， 1H)， 4.26(s， 2H)， 2.83(t， J 4.8Hz， 2H)， 2.51(t， J 4.8Hz， 2H) ； MS(m/z) ： 482.4。 0064 实施例 7 ： 实施例 1 中化合物 1a 的抗菌活性研究 0065 材料与方法 0066 抗菌药物 ： 实施例 1 中的 1a 化合物， 下面以 1a 代替。 0067 对照药 ： 盐酸去甲基万古霉素购自武汉远城化工有限公司 0068 被测菌株 ： 1。

35、01 株 MRSA 和 105 株 MSSA 均获赠于广东药学院。 0069 培养基 ： 购自法国生物梅里埃公司， 批号 ： 811813401。 0070 方法 ： 采用二倍琼脂稀释法测定 1a 化合物和盐酸去甲基万古霉素对所有菌株的 最低抑菌浓度 (MIC)。即先将两种抗生素分别以不同浓度 PH 的无菌磷酸盐缓冲液倍比稀 释成 12 个浓度， 将各浓度的药液各 10ml， 分别加入到已溶化并冷至 50左右的 M-H 琼脂 中， 立即倾注平皿， 使培养基的抗生素最终浓度依次为 0.0625、 0.125、 0.25-128mg/L。用微 说 明 书 CN 102675311 A 9 8/10。

36、 页 10 量多点接种仪将 108-109CFU/ml 菌悬液接种到含不同浓度抗生素的上述琼脂平板表面， 置 35培养 24h 观察结果， 以抑制细菌声场的最低抗生素浓度确定为 MIC。分别统计 MIC 范 围、 MIC50、 MIC90， 并根据抗菌药物敏感的临界浓度， 计算对细菌的敏感率， 同时描绘浓度积 累抑菌百分率曲线。 0071 结果 ： 1a 化合物和盐酸去甲基万古霉素抗菌效果比较如表 1(MIC， mg/L) ： 0072 0073 1a 化合物的抗菌活性优于盐酸去甲基万古霉素的抗菌活性， 对 MRSA、 MSSA 的敏感 率也体现出了 1a 化合物相对于盐酸去甲基万古霉素的优势。

37、。 0074 实施例 8 ： 本实施例采用本发明提供的化合物进行了体外抗肿瘤作用的筛选研 究。 0075 实验材料 ： 试验样品 ： 实施例1、 实施例2、 实施例3中制备的1a化合物， 1b化合物， 1c 化合物 ； 0076 对照 ： N， N - 二 3-( 乙基氨基 ) 丙基 -( 顺 )-1， 4- 丁二胺 -2- 烯， 如权利要求 书中式 (I) 化合物， 其中 R -CH2CH3； 、 X O ； R1 -H 0077 试验样品和对照均为申请人实验室合成样品。所用药物称取 0.1g， 加入 DMSO 1ml， 配成 100mg/ml 原液， 4保存。临用前融化后取适量以完全培养液。

38、稀释成相应浓度应 用。 0078 DMEM 培养液 (GIBCO， Invitrogen， U.S.A) ； 胎牛血清 (FBS ； GIBCO， Invitrogen) ； 100U/ml of penicillin， and 100g/ml of streptomycin(GIBCO， Grand Island， NY， USA) ； 甲基噻唑蓝 MTT(thiazolyl blue， Sigma， MO， U.S.A.) ； 胰蛋白酶 (0.25 Trypsin， GIBCO， InVitrogen) ； DMSO(100ml， sigma分装)为北京鼎国有限公司产品 ； 其余试剂均为化。

39、 学分析纯。 0079 人宫颈癌 Hela 细胞、 人肝癌 BEL-7402 细胞、 人粘液性表皮样肺癌 A549 细胞， 人乳 腺癌 MCF-7/s 细胞， 人神经胶质瘤 U251 细胞， 人正常胚肾 HEK-293 细胞， 均购于美国模式培 养物保藏中心 (American Type Culture Collection， ATCC)， 所有肿瘤细胞用 DMEM 培养基 ( 含 10 FBS， 100U/ml 青霉素和 100g/ml 链霉素 )、 人正常胚肾细胞用 RPMI1640 培养基 (10 FBS， 100U/ml 青霉素和 100g/ml 链霉素 ) 培养、 传代， 置于 37。

40、， 5 CO2培养箱中 正常培养。 说 明 书 CN 102675311 A 10 9/10 页 11 0080 实 验 仪 器 ： 酶 标 仪 ( 美 国 Bio-Rad， Model 550) ； 培 养 箱 (Thermo Forma， Incubator， USA) ； 离心机(HITACHI， RX系列， Himac CF 16RX) ； 倒置显微镜(leika TE2000， 日本 )， Thermo 可调式移液枪 ； SW-CJ-IFD 型单人单面净化工作台 ( 苏州净化设备有限公 司， NO ： 070587) ； 细胞培养瓶 (Costar， USA)， 96 孔细胞培养板 。

41、(Costar， USA)， Delta320 梅 特勒 - 托利多 METTLER 台式 pH 计。 0081 实验方法 ： 将处于对数生长期， 贴壁率达 80左右状态良好的上述细胞进行传 代。 弃培养基， 以PBS冲洗1-2次除去血清， 加入1ml 0.25胰蛋白酶-0.01EDTA(37孵 育)消化1-2min， 加入含FBS培养基终止消化， 800r/min以下离心2-3min弃上清， 重悬细胞 于 10 FBS 的培养基中， 取细胞悬液进行细胞计数， 调整密度， 以 1105/ml 接种于 96 孔板 (100l/well)， 并于 5 CO237培养箱培养过夜。次日向细胞中加入不同。

42、浓度的 1a 化合 物， 1b化合物， 1c化合物和对照药物， 100l/well(使其终浓度为30， 60， 120， 240， 480g/ ml) ； 同时设空白对照组 (0M)， 复设 3 孔， 继续培养。于药物作用 48h 后， 弃培养基， 每孔 加入100l含0.5mg/ml MTT的PBS(PH7.2)， 培养4h后， 贴壁细胞快速翻板法去除培养基， 每孔加入 100l 的 DMSO， 微量振荡仪振荡 5min， 于 490nm 波长测定 OD 值， 实验重复三次取 平均值， 计算 1A 化合物， 1B 化合物， 1C 化合物和对照各浓度药物对肿瘤细胞体外增殖的抑 制率 (IR )。

43、， 按以下公式计算各浓度药物对肿瘤细胞体外增殖的抑制率 (IR ) ： IR (1-OD样品/OD对照)100， 并用 SPSS11.5 软件计算 1a 化合物， 1b 化合物， 1c 化合物和对照 组 (CONTROL) 的半数抑制浓度 IC50。 0082 实验结果 ： 试验结果(表1)表明 ： 系列化合物1a化合物， 1b化合物及1c化合物对 所选 5 株肿瘤细胞的增殖抑制作用高于对照组。其中 1a 化合物， 1b 化合物和对照对 Hela 和 A549 细胞的抑制作用较为显著， 而对正常细胞 (HEK-293) 的增殖抑制作用较小， 实验结 果见下表 1 ： 说 明 书 CN 102675311 A 11 10/10 页 12 0083 说 明 书 CN 102675311 A 12 。