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1、(19)中华人民共和国国家知识产权局 (12)发明专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请号 201810177057.7 (22)申请日 2018.03.04 (71)申请人 河南亿万中元生物技术有限公司 地址 450000 河南省郑州市新郑市龙湖镇 鸿鹄路(原荆沙路)与祥云路交叉口向 北800米西侧 (72)发明人 郑文革雷元培王馨悦王丽 潘桂霞焦江涛李萍郑瑞 (51)Int.Cl. C12N 1/20(2006.01) A23L 5/20(2016.01) A23K 50/75(2016.01) C12R 1/125(2006.01) (54)发明名称 一种禽用型饲。
2、料霉菌毒素降解剂及其制备 方法 (57)摘要 本发明创造涉及一种禽用型饲料霉菌毒素 降解剂及其制备方法， 将奶粉管保藏的降解AFB1 的枯草芽孢杆菌接种于LB液体培养基中， 接种量 为1%， 于恒温摇床中37、 200r培养24h， 将活化 好的种子液再次接种于LB液体培养基中， 接种量 为1%， 37、 200r培养18h， 用于上罐接种； 其中LB 培养基的配制方法： 胰蛋白胨10g， 氯化钠10g， 酵 母浸粉5g， 用蒸馏水定容到1000mL， 调节pH=7.4， 16层纱布， 8层牛皮纸封口后， 于121， 高压灭菌 20min； 本发明具有不仅可以抑制动物体内大肠 杆菌、 沙门氏菌。
3、、 金黄色葡萄球菌等有害菌的生 长， 还可以清除体内有害物质即毒素产生的过氧 化物和自由基， 增强免疫功能的优点。 权利要求书1页 说明书3页 附图1页 CN 108456647 A 2018.08.28 CN 108456647 A 1.一种禽用型饲料霉菌毒素降解剂及其制备方法， 其特征在于： 将奶粉管保藏的降解 AFB1的枯草芽孢杆菌接种于LB液体培养基中， 接种量为1%， 于恒温摇床中37、 200r培养 24h， 将活化好的种子液再次接种于LB液体培养基中， 接种量为1%， 37、 200r培养18h， 用于 上罐接种。 2.根据权利要求1所述的一种禽用型饲料霉菌毒素降解剂及其制备方法。
4、， 其特征在于： 其中LB培养基的配制方法： 胰蛋白胨10g， 氯化钠10g， 酵母浸粉5g， 用蒸馏水定容到1000mL， 调节pH=7 .4， 16层纱布， 8层牛皮纸封口后， 于121， 高压灭菌20min。 3.根据权利要求1所述的一种禽用型饲料霉菌毒素降解剂及其制备方法， 其特征在于： 将二次活化后的种子液1L接种于盛放有培养基的500L一级发酵罐中， 发酵温度为37、 ph 为7.2左右， 转速200r， 发酵时间略12h， 并在发酵过程中不断通入空气， 保证其容氧充足。 4.根据权利要求3所述的一种禽用型饲料霉菌毒素降解剂及其制备方法， 其特征在于： 其中一级发酵罐中发酵培养基成。
5、分为： 豆粕粉15kg， 中性蛋白酶150g， 玉米粉10kg， 中温淀 粉酶100g， 葡萄糖1kg， 硫酸锰0.1kg， 消泡剂300ml， 上罐之前要提前消罐。 5.根据权利要求3所述的一种禽用型饲料霉菌毒素降解剂及其制备方法， 其特征在于： 将一级发酵罐中发酵完成的种子液通过无菌管道移种至9500L二级发酵罐中， 调节培养基 温度、 ph， 发酵罐转速、 通风量， 使枯草芽孢杆菌发酵最优化。 6.根据权利要求5所述的一种禽用型饲料霉菌毒素降解剂及其制备方法， 其特征在于： 其中二级发酵罐培养基成分为： 豆粕粉200kg， 中性蛋白酶3.6kg， 玉米粉130kg， 中温淀粉酶 1.5k。
6、g， 硫酸锰1kg， 消泡剂30L,碳酸钙71kg， 硫酸铵10kg， 磷酸二氢钾3kg， 发酵罐提前消罐。 7.根据权利要求5所述的一种禽用型饲料霉菌毒素降解剂及其制备方法， 其特征在于： 将二级发酵罐发酵完成后的发酵液通过高速离心机离心浓缩， 并将浓缩得到的菌体通过闪 蒸机迅速蒸干， 得到降解黄曲霉毒素B1枯草芽孢杆菌菌粉。 8.根据权利要求7所述的一种禽用型饲料霉菌毒素降解剂及其制备方法， 其特征在于： 将降解黄曲霉毒素B1的菌粉与降解玉米赤霉烯酮的菌粉按7:3的比例混合成禽用型霉菌毒 素降解剂半成品。 9.根据权利要求4所述的一种禽用型饲料霉菌毒素降解剂及其制备方法， 其特征在于： 将。
7、玉米淀粉、 免疫增强酶、 氧化自由基清除剂、 禽用型霉菌毒素降解剂半成品按照4:2:1:3 比例用混合机充分混匀后做成禽用型霉菌毒素降解剂， 此降解剂对黄曲霉毒素B1和玉米赤 霉烯酮的降解率均在80%以上， 其中各组分的占比可以根据家禽品种、 类型、 饲料配方等适 当调整。 权利要求书 1/1 页 2 CN 108456647 A 2 一种禽用型饲料霉菌毒素降解剂及其制备方法 技术领域 0001 本发明属于霉菌毒素降解剂技术领域， 具体涉及一种禽用型饲料霉菌毒素降解剂 及其制备方法。 背景技术 0002 霉菌毒素是丝状真菌产生的次级代谢产物， 广泛存在于粮油、 食品及饲料中， 根据 联合国粮食。
8、农业组织统计， 全世界每年约25% 的谷物被霉菌所污染， 平均有2%的粮食由于 霉变不能食用， 造成巨大的经济损失。 菌毒素被动物摄入后能引起多种不良的生理反应如 厌食、 消化障碍、 神经系统障碍、 颤抖和虚弱、 降低怀孕率和流产、 免疫抑制、 器官损伤和癌 症等。 物采食了受霉菌毒素污染的饲料会导致毒素在组织中残留， 通过肉、 蛋、 奶和奶酪等 畜产品给人类健康带来危害， 引起代谢紊乱、 免疫抑制、 致癌、 致畸和活性诱变等因而霉菌 毒素成为影响食品安全的一个重要因素。 0003 黄曲霉毒素B1的毒性比氰化钾大100倍， 仅次于肉毒毒素， 在所有霉菌毒素中毒性 最强， 致癌作用比已知的化学致。
9、癌物都强， 比二甲基亚硝胺强75倍。 其中家禽对黄曲霉毒素 B1最为敏感， 黄曲霉毒B1会导致禽类采食量下降、 体增重下降、 产蛋率下降、 出血、 胚胎中毒 和对环境及微生物等应激因子的敏感性增加等。 0004 目前市场上的脱霉剂大都是吸附剂类型， 效果不稳定， 且影响维生素及微量元素 等吸收， 不仅会对环境造成污染， 也会影响养殖者的经济效益。 而霉菌毒素生物降解剂是一 种新型的霉菌毒素脱毒方式， 利用微生物代谢产生的酶与毒素作用， 使其分子结构中毒性 基团被破坏而生成无毒降解产物的过程， 选用稳定性高、 耐受性强的枯草芽孢杆菌不仅可 以高效降解饲料中的黄曲霉毒素B1和玉米赤霉烯酮， 还具有。
10、益生作用， 具有很大的应用前 景。 发明内容 0005 本发明提供一种可以直接添加至禽用饲料中的霉菌毒素降解剂及其制备工艺； 本 发明提供一种降解黄曲霉毒素B1和玉米赤霉烯酮的两株枯草芽孢杆菌的发酵技术， 并将其 发酵液处理形成产品添加到饲料里， 进入到动物体内后， 枯草芽孢杆菌会进一步生长代谢 产生降解黄曲霉毒素B1和玉米赤霉烯酮的酶， 并将其分解为无毒物质， 达到去除毒素的目 的。 0006 本发明的目的是这样实现的： 一种禽用型饲料霉菌毒素降解剂及其制备方法， 将 奶粉管保藏的降解AFB1的枯草芽孢杆菌接种于LB液体培养基中， 接种量为1%， 于恒温摇床 中37、 200r培养24h， 。
11、将活化好的种子液再次接种于LB液体培养基中， 接种量为1%， 37、 200r培养18h， 用于上罐接种。 0007 其中LB培养基的配制方法： 胰蛋白胨10g， 氯化钠10g， 酵母浸粉5g， 用蒸馏水定容 到1000mL， 调节pH=7 .4， 16层纱布， 8层牛皮纸封口后， 于121， 高压灭菌20min。 0008 将二次活化后的种子液1L接种于盛放有培养基的500L一级发酵罐中， 发酵温度为 说明书 1/3 页 3 CN 108456647 A 3 37、 ph为7.2左右， 转速200r， 发酵时间略12h， 并在发酵过程中不断通入空气， 保证其容氧 充足。 0009 其中一级发。
12、酵罐中发酵培养基成分为： 豆粕粉15kg， 中性蛋白酶150g， 玉米粉 10kg， 中温淀粉酶100g， 葡萄糖1kg， 硫酸锰0.1kg， 消泡剂300ml， 上罐之前要提前消罐。 0010 将一级发酵罐中发酵完成的种子液通过无菌管道移种至9500L二级发酵罐中， 调 节培养基温度、 ph， 发酵罐转速、 通风量， 使枯草芽孢杆菌发酵最优化。 0011 其中二级发酵罐培养基成分为： 豆粕粉200kg， 中性蛋白酶3.6kg， 玉米粉130kg， 中 温淀粉酶1.5kg， 硫酸锰1kg， 消泡剂30L,碳酸钙71kg， 硫酸铵10kg， 磷酸二氢钾3kg， 发酵罐 提前消罐。 0012 将二。
13、级发酵罐发酵完成后的发酵液通过高速离心机离心浓缩， 并将浓缩得到的菌 体通过闪蒸机迅速蒸干， 得到降解黄曲霉毒素B1枯草芽孢杆菌菌粉。 0013 将降解黄曲霉毒素B1的菌粉与降解玉米赤霉烯酮的菌粉按7:3的比例混合成禽用 型霉菌毒素降解剂半成品。 0014 将玉米淀粉、 免疫增强酶、 氧化自由基清除剂、 禽用型霉菌毒素降解剂半成品按照 4:2:1:3比例用混合机充分混匀后做成禽用型霉菌毒素降解剂， 此降解剂对黄曲霉毒素B1 和玉米赤霉烯酮的降解率均在80%以上。 其中各组分的占比可以根据家禽品种、 类型、 饲料 配方等适当调整。 0015 本发明的有益效果： 本发明采用生物降解的方式去除家禽饲。
14、料中的黄曲霉毒素和 玉米赤霉烯酮， 降解率高， 稳定性强， 克服吸附剂类脱霉剂的弊端； 本发明根据家禽对AFB1 易感性强的特点， 制备专门的禽用型饲料霉菌毒素降解剂、 针对性强、 效果好； 本发明利用 降解霉菌毒素的有益菌进行发酵， 并且加入免疫增强酶和氧化自由基清除因子， 不仅可以 抑制动物体内大肠杆菌、 沙门氏菌、 金黄色葡萄球菌等有害菌的生长， 还可以清除体内有害 物质即毒素产生的过氧化物和自由基， 增强免疫功能。 附图说明 0016 图1是本发明一种禽用型饲料霉菌毒素降解剂及其制备方法的工艺流程图。 具体实施方式 0017 下面结合附图对本发明做进一步的说明。 0018 实施例1 如。
15、图1所示， 一种禽用型饲料霉菌毒素降解剂及其制备方法， 将奶粉管保藏的降解AFB1 的枯草芽孢杆菌接种于LB液体培养基中， 接种量为1%， 于恒温摇床中37、 200r培养24h， 将 活化好的种子液再次接种于LB液体培养基中， 接种量为1%， 37、 200r培养18h， 用于上罐接 种； 其中LB培养基的配制方法： 胰蛋白胨10g， 氯化钠10g， 酵母浸粉5g， 用蒸馏水定容到 1000mL， 调节pH=7 .4， 16层纱布， 8层牛皮纸封口后， 于121， 高压灭菌20min。 0019 本发明采用生物降解的方式去除家禽饲料中的黄曲霉毒素和玉米赤霉烯酮， 降解 率高， 稳定性强， 克。
16、服吸附剂类脱霉剂的弊端； 本发明根据家禽对AFB1易感性强的特点， 制 备专门的禽用型饲料霉菌毒素降解剂、 针对性强、 效果好； 本发明利用降解霉菌毒素的有益 菌进行发酵， 并且加入免疫增强酶和氧化自由基清除因子， 不仅可以抑制动物体内大肠杆 说明书 2/3 页 4 CN 108456647 A 4 菌、 沙门氏菌、 金黄色葡萄球菌等有害菌的生长， 还可以清除体内有害物质即毒素产生的过 氧化物和自由基， 增强免疫功能。 0020 实施例2 如图1所示， 一种禽用型饲料霉菌毒素降解剂及其制备方法， 将奶粉管保藏的降解AFB1 的枯草芽孢杆菌接种于LB液体培养基中， 接种量为1%， 于恒温摇床中3。
17、7、 200r培养24h， 将 活化好的种子液再次接种于LB液体培养基中， 接种量为1%， 37、 200r培养18h， 用于上罐接 种； 其中LB培养基的配制方法： 胰蛋白胨10g， 氯化钠10g， 酵母浸粉5g， 用蒸馏水定容到 1000mL， 调节pH=7 .4， 16层纱布， 8层牛皮纸封口后， 于121， 高压灭菌20min； 将二次活化 后的种子液1L接种于盛放有培养基的500L一级发酵罐中， 发酵温度为37、 ph为7.2左右， 转速200r， 发酵时间略12h， 并在发酵过程中不断通入空气， 保证其容氧充足； 其中一级发酵 罐中发酵培养基成分为： 豆粕粉15kg， 中性蛋白酶1。
18、50g， 玉米粉10kg， 中温淀粉酶100g， 葡萄 糖1kg， 硫酸锰0.1kg， 消泡剂300ml， 上罐之前要提前消罐； 将一级发酵罐中发酵完成的种子 液通过无菌管道移种至9500L二级发酵罐中， 调节培养基温度、 ph， 发酵罐转速、 通风量， 使 枯草芽孢杆菌发酵最优化； 其中二级发酵罐培养基成分为： 豆粕粉200kg， 中性蛋白酶 3.6kg， 玉米粉130kg， 中温淀粉酶1.5kg， 硫酸锰1kg， 消泡剂30L,碳酸钙71kg， 硫酸铵10kg， 磷酸二氢钾3kg， 发酵罐提前消罐； 将二级发酵罐发酵完成后的发酵液通过高速离心机离心 浓缩， 并将浓缩得到的菌体通过闪蒸机迅速。
19、蒸干， 得到降解黄曲霉毒素B1枯草芽孢杆菌菌 粉； 将降解黄曲霉毒素B1的菌粉与降解玉米赤霉烯酮的菌粉按7:3的比例混合成禽用型霉 菌毒素降解剂半成品； 将玉米淀粉、 免疫增强酶、 氧化自由基清除剂、 禽用型霉菌毒素降解 剂半成品按照4:2:1:3比例用混合机充分混匀后做成禽用型霉菌毒素降解剂， 此降解剂对 黄曲霉毒素B1和玉米赤霉烯酮的降解率均在80%以上； 其中各组分的占比可以根据家禽品 种、 类型、 饲料配方等适当调整。 0021 具体实施方式是对本发明的进一步说明而非限制， 对本领域普通技术人员来说在 不脱离本发明实质内容的情况下对结构做进一步变换， 而所有这些变换都应属于本发明所 附权利要求的保护范围。 说明书 3/3 页 5 CN 108456647 A 5 图1 说明书附图 1/1 页 6 CN 108456647 A 6 。