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1、(10)授权公告号 CN 101056977 B (45)授权公告日 2013.01.30 CN 101056977 B *CN101056977B* (21)申请号 200580033781.3 (22)申请日 2005.10.04 60/615,729 2004.10.04 US 11/243,094 2005.10.04 US C12N 7/06(2006.01) A61K 39/21(2006.01) (73)专利权人 拜欧瓦克西姆有限公司 地址 英国伦敦 (72)发明人 J安德里厄 L魏 - 卢 (74)专利代理机构 永新专利商标代理有限公司 72002 代理人 林晓红 US 200。
2、4009194 A1,2004.01.15, 全文 . WO 02088328 A,2002.11.07, 全文 . Lapenta Caterina ET-AL.Potent immune respone against HIV-1 and protection fromvirus challenge in hu-PBL-SCID mice immunizd withinactivated virus-pulsed dendritic cells generated in thepresence of IFN-alpha.The Journal of Experimental Medicin。
3、e198 2.2003,198(2),361-367. (54) 发明名称 用于治疗 HIV 感染患者的亚型匹配的灭活全 病毒疫苗 (57) 摘要 将灭活的特定亚型的全 HIV 用于制备疫苗和 含有该疫苗的药物组合物。该疫苗可通过诱导抗 用以制备该疫苗的相同 HIV 亚型的保护性细胞免 疫应答治疗慢性 HIV 感染个体。 (30)优先权数据 (85)PCT申请进入国家阶段日 2007.04.04 (86)PCT申请的申请数据 PCT/IB2005/003384 2005.10.04 (87)PCT申请的公布数据 WO2006/038124 EN 2006.04.13 (51)Int.Cl. (。
4、56)对比文件 审查员 于娜 权利要求书 1 页 说明书 9 页 附图 1 页 (19)中华人民共和国国家知识产权局 (12)发明专利 权利要求书 1 页 说明书 9 页 附图 1 页 1/1 页 2 1. 通过 Aldrithiol-2 处理灭活的 A、 B、 C 或 E 亚型的全 HIV-1 在制备通过皮内施用治 疗慢性 HIV 感染个体的无细胞疫苗中的用途， 其中该疫苗在所述个体中诱导针对与用来制 备该疫苗的 HIV 亚型相同的 HIV 亚型的保护性细胞免疫应答。 2. 权利要求 1 的用途， 其中所述灭活的特定亚型的全 HIV-1 不是受治疗的慢性 HIV 感 染个体自体的。 3. 权。
5、利要求 1 的用途， 其中所述疫苗还包含佐剂。 4. 权利要求 3 的用途， 其中所述佐剂刺激树突细胞的成熟。 5. 权利要求 3 的用途， 其中所述佐剂能够刺激树突细胞以抑制 CD4-Th2 模式中的细胞 分化。 6. 权利要求 5 的用途， 其中所述佐剂能够刺激树突细胞以激活 CD4-Th1 模式中的细胞 分化。 7. 权利要求 4 的用途， 其中所述树突细胞是郎格汉斯细胞。 权 利 要 求 书 CN 101056977 B 2 1/9 页 3 用于治疗 HIV 感染患者的亚型匹配的灭活全病毒疫苗 技术领域 0001 本发明涉及用于治疗病毒感染的疫苗， 尤其是用于治疗人类 HIV 感染的疫。
6、苗。 背景技术 0002 在发现人类免疫缺陷性病毒 (HIV) 二十年后， 迄今为止还没有可利用的有效的预 防性或治疗性疫苗。来自世界卫生组织和联合国艾滋病毒 / 艾滋病项目的最新预测表明， 如果按照目前艾滋病的流行趋势， 到 2010 年将出现 4,500 万新感染者 1。尽管通过抗逆转 录病毒治疗在延长 HIV 感染者的存活时间和减少母婴 HIV 传播方面取得了重大进展， 但在 长期抗逆转录病毒治疗的情况下出现药物抗性和 / 或与药物相关的严重副作用的患者的 数目不断增加。因此急需其他的替代治疗策略以保护 HIV 感染个体使其免于疾病发展。 0003 在一个大规模的人类 III 期试验中，。
7、 一种用以诱发体液免疫以中和 HIV 的候选疫 苗最近被证明是无效的 2。这种保护作用的缺乏与已知的现有疫苗不能在体内诱发有效的 抗 HIV 中和抗体 (Nab) 是一致的 3。这种诱发有效的 Nab 的能力的缺失可能是由感染原的 性质决定的。例如， 迄今为止还没有用于慢性感染 ( 例如结核、 麻风和丙型肝炎病毒感染 ) 的成功的预防性疫苗。相反， 成功的疫苗可以通过诱导 Nab 预防急性传染病 ( 例如脊髓灰 质炎、 麻疹、 白喉、 破伤风或天花 )， 其中 Nab 也可经胎盘或经乳汁传递以保护胎儿或新生儿 免遭感染。 0004 众所皆知， 持久性细胞免疫可潜在地控制处于感染原未被清除的状态。
8、的疾病， 例 如结核、 麻风、 乙型或丙型肝炎病毒和 HIV 慢性感染。在这点上， 已表明强烈的病毒特异性 CD4+辅助性 T 细胞 1(Th1) 和效应物 ( 穿孔素 +) 细胞毒性 T 淋巴细胞 (CTL) 应答与慢性 HIV-1 感染个体中病毒血症的控制和长期不进展有关 4-10。此外， 在急性感染期或急性感染 后不久采用高活性抗逆转录病毒治疗 (HAART) 早期介入可增强 HIV-1 特异性 CD4+Th1 细胞 应答 11， 12。相反， HAART 在之后的阶段导致 HIV-1 特异性 CD4+Th1 细胞和 CTL 应答的降低5， 13， 14， 这表明捕获 HIV-1 的抗原。
9、呈递细胞 (APC) 的功能活性 ( 这是诱导免疫应答必需的 ) 随 感染进程逐渐丧失 15-18。 由此可见， 用于诱发HIV特异性持久性细胞免疫应答的治疗性疫苗 在以下两个先决条件下是可行的 ： 1) 发现能够诱发强烈、 广泛和持续的保护性细胞免疫的 合适的免疫原 ； 和 2) 通过离体激活的 APC 的过继转移 ( 即， 替代策略 )， 或通过所述免疫原 与合适的细胞因子或佐剂同时联用在体内直接激活损伤较小的树突细胞 ( 例如郎格汉斯 细胞)， 重建体内损伤的APC的功能。 成功的治疗性疫苗的最终目标是持续地将HIV-1感染 患者的病毒载量降低至尽可能低的水平。这将阻止他们的疾病进展， 。
10、并因此可以减少对有 害的和昂贵的抗逆转录病毒药物的需求。此外， 持续地降低 HIV 病毒载量可以将该病毒性 传播给健康人的风险降至最小 19。 0005 根据免疫原的性质， 疫苗诱导的保护性免疫应答可以完全不同。减毒活疫苗诱发 体液和细胞免疫应答， 而灭活病毒疫苗和纯化的合成蛋白质更倾向于诱发体液 ( 抗体 ) 应 答。 在一个旨在激发免疫系统的细胞免疫方面的多中心临床试验中， 研究人员失望地发现， 用含 HIV 基因的细菌 DNA 制备的实验性疫苗免疫的 205 个志愿者中， 只有 20具有显著的 说 明 书 CN 101056977 B 3 2/9 页 4 HIV 特异性细胞免疫应答 ( 。
11、尽管该 DNA 初始免疫 (DNA prime) 在小鼠实验中确实表现良 好 )20。本申请发明人 ( 以及其他人 ) 最近发现其中保留了包膜蛋白 gp120 的构象结构的 灭活的全HIV-1(例如在通过Aldrithiol-2AT-2处理病毒的情形)可被树突细胞(DC， 最 有效的 APC) 加工和呈递， 用于体外诱导有效的 HLA-I 限制性 CTL 应答 21， 22。几项研究还证 明灭活的全HIV-1体外负载的自体树突细胞的过继转移能够在hu-PBL-SCID小鼠中诱导保 护性抗病毒免疫 23， 24。 本申请发明人先前已证明在没有任何其他抗病毒治疗的情况下， 由灭 活的全猿猴免疫缺陷。
12、性病毒(SIV)株mac251(SIVmac251)负载的树突细胞制备的治疗性疫 苗对已感染 SIVmac251 的中国恒河猴免疫两个月后， 可导致显著的病毒抑制 25。综上所述， 这些发现表明AT灭活的全病毒可用作有效的疫苗免疫原， 在慢性HIV-1感染人群中诱发保 护性 HIV-1 特异性 CTL 应答。但是， HIV-1 在全球范围的广泛的变异性表明将 GMP 级的灭 活全病毒制品用作 HIV-1 的通用型治疗性疫苗的观念是行不通的。 0006 发明概述 0007 本发明提供一种疫苗， 其包含灭活的特定亚型的灭活的全 HIV， 任选地还包含佐 剂。该疫苗可通过诱导抗用以制备该疫苗的相同 。
13、HIV 亚型的保护性细胞免疫应答治疗慢性 HIV 感染个体。 0008 本发明还提供一种药物组合物， 其包含疫苗和药学上可接受的载体的， 所述疫苗 包含灭活的特定亚型的全 HIV。 0009 本发明还提供灭活的特定亚型的全HIV在制备用于治疗慢性HIV感染个体的药物 中的用途。所述药物可通过诱导抗用以制备该疫苗的相同 HIV 亚型的保护性细胞免疫应答 治疗慢性 HIV 感染个体。 0010 本发明还提供一种治疗慢性 HIV 感染个体的方法， 包括给个体施用包含灭活的特 定亚型的全 HIV 的疫苗， 任选地还包括施用一种佐剂， 以在该个体中诱导抗用以制备该疫 苗的相同 HIV 亚型的保护性细胞免。
14、疫应答。在一个实施方式中， 灭活的 HIV 被离体负载于 抗原呈递免疫细胞 (APC)， 然后将其施用给个体。 附图说明 0011 图 1 显示本发明疫苗的细胞毒性 T- 淋巴细胞 (CTL) 的杀伤活性。 0012 图 2 显示用 AT-2 灭活的 SIVmac251 皮内免疫对慢性 SIVmac251 感染的恒河猴的 血浆病毒载量的影响。数据表示免疫前后每毫升血浆中 SIVRNA 拷贝数的几何平均数。P 值 代表 Wilcoxon 检验对免疫前、 和免疫后第 3 或第 6 个月的配对数据的统计分析。 0013 发明详述 0014 由于 HIV 基因组经常发生突变， 存在两个主要的 HIV 。
15、群 (HIV-1 和 HIV-2) 和许多 亚群。群和亚群间的主要区别在于病毒包膜。HIV-1 被分入主要亚群 (M) 和第十局外亚群 (10th outlier subgroup)(O)， 其中 M 亚群被分为 9 个亚型 ( 分化单位 )， 命名为 A 到 J28-29。 HIV 基因组中出现的遗传变异是突变、 重组、 插入和缺失的结果 29。 0015 本发明的抗 HIV、 优选地抗 HIV-1 亚型 ( 例如亚型 A、 B、 C 或 E) 的疫苗显示出对 亚型匹配的病毒株具有高 CTL 杀伤活性， 但只显示出低的亚型间杀伤活性。尽管在个别情 况中观察到了亚型间杀伤活性， 但与亚型匹配的。
16、病毒株相比， 在亚型不匹配的病毒株中 CTL 杀伤效力差异很大 ( 参见下面实施例 1 和图 1)。因此， 本发明提供了由灭活的特定亚型的 说 明 书 CN 101056977 B 4 3/9 页 5 全 HIV 制品制备的抗 HIV 的亚型特异性治疗性疫苗。本发明的疫苗可用于治疗慢性 HIV 感 染个体， 其中所述疫苗诱导抗用以制备该疫苗的相同 HIV 亚型的保护性细胞免疫应答。 0016 本申请所用术语 “疫苗” 指被施用以产生或者人为增加对特殊疾病的免疫性的组 合物。 0017 优选地， 用不是受治疗个体自体的 HIV 亚型制备疫苗。事实上， 发明人已证明， 不 是受治疗个体自体的 HI。
17、V 亚型疫苗能够出乎意料地显著降低所述个体的病毒载量。 0018 根据本发明， 可以治疗任何 HIV 亚型的慢性感染， 例如选自 M 群的 A、 B、 C 或 E( 和 其他 ) 亚型以及 HIV-2 群和 HIV O 亚群的 HIV 病毒的慢性感染。 0019 在一个实施方式中， 本发明的组合物可包含几种灭活的 HIV 亚型， 例如两种、 三 种、 四种或更多种不同的灭活 HIV 亚型。 0020 在本申请中，“治疗” 慢性 HIV 感染个体意指预防、 减轻或抑制 HIV 感染的症状 ； 在 施用疫苗后病毒载量 ( 尤其是血浆病毒载量 ) 降低 ； 和 / 或在该个体中诱导抗 HIV 的 C。
18、TL 应答。当然 “治疗” 慢性 HIV 感染个体并不需要从个体中完全清除 HIV。 0021 在本申请中，“慢性 HIV 感染个体” 指可被诊断为被 HIV 感染的个体。 0022 在本申请中，“灭活的全 HIV” 指已灭活的、 不再具有感染性的完整 HIV 颗粒。 0023 在实施本发明时， 可通过本领域技术人员已知的任何合适的技术手段 ( 例如紫外 照射、 加热或化学处理 ( 如甲醛、 多聚甲醛、 propiolactene 或 AT-2 处理 ) 灭活特定亚型 的 HIV。 0024 优选地， 通过化学处理灭活特定亚型的 HIV， 更优选用 AT-2 处理进行灭活。出乎 意料的是， 这。
19、种 AT-2 灭活能够维持 HIV 蛋白的构象结构并以非自体的 HIV 诱导切实有效的 CTL 应答。 0025 亚型特异性的灭活的全病毒免疫原可用于抗原呈递免疫细胞 ( 例如成熟的或未 成熟的树突细胞(DC)或郎格汉斯细胞(LC)的离体负载(也称 “脉冲式处理(pulsing)” )， 以制备基于APC的治疗性疫苗 ； 或者可用于直接皮内注射到体内以使LC在体内负载以产生 无细胞疫苗。 0026 在一个实施方式中， 可采用本领域中的方法， 例如通过将灭活的亚型特异性 HIV 直接 ( 优选不用针 ) 递送 ( 例如通过皮内注射器 ) 至患者皮肤的方式施用本发明的无细胞 疫苗。用于皮内施用疫苗。
20、的无针装置是本领域技术人员公知的， 包括例如 US 6,933,319 和 国际专利申请 WO2004/101025 中所描述的装置， 在此通过引用并入本申请。通过皮肤 ( 皮 内施用 ) 进行免疫是特别有益的， 因为表皮中含有大量 LC。已知 LC 是 DC 的未成熟形式， DC 位于最接近皮肤最表层 ( 角质层 ) 的区域。这些 LC 代表了一个占皮肤表面积 25的免疫 细胞网络 26， 并在慢性HIV/SIV感染的早期或无症状期保持功能完整性27。 发明人已证明皮 内施用本发明的无细胞疫苗能够显著降低 SIV 病毒载量。 0027 在另一个实施方式中， 可通过本领域中的方法， 例如通过将。
21、用灭活的亚型特异性 HIV 负载的 APC 直接递送 ( 例如通过皮下注射器 ) 给患者的方式施用本发明的基于 APC 的 疫苗。 0028 在一个实施方式中， 所述方法包括在施用本发明的组合物前， 检测待治疗的患者 所感染的 HIV 亚型的预步骤。可采用本领域公知的方法实施这种检测， 如通过分析所述患 者的血液样品中存在的 HIV 对 HIV 序列的特定区域进行基因分型。优选地， 在该 HIV 亚型 说 明 书 CN 101056977 B 5 4/9 页 6 检测步骤之后， 施用本发明的基于 APC 的疫苗或无细胞疫苗， 所述疫苗包含与感染待治疗 的患者的 HIV 亚型相同的 HIV 亚型。
22、。 0029 在另一个实施方式中， 用灭活的特定亚型的 HIV 负载的 APC 治疗个体。首先用灭 活的 HIV 离体负载 APC， 然后采用任何合适的技术将负载的 APC 施用给患者。优选地， 负载 的 APC 通过皮下、 皮内或者肌内方式注射给该个体， 优选采用皮下注射。更优选地， 通过之 前从待治疗的个体采集 PBMC 以分离单核细胞 (CD14+) 而获得 APC， 然后依次用未成熟的和 成熟的树突细胞中已知的细胞因子进行转化。这些方法是本领域技术人员公知的， 例如实 施例 1 中描述的方法。 0030 与细菌产物不同， 灭活的全HIV单用不能有效诱导DC的成熟 25， 不能使这些细胞。
23、向 它们在其中行使免疫刺激功能的引流淋巴结有效迁移。因此， 优选将一类称作佐剂的有效 分子与灭活的全 HIV 组合以激发最佳的免疫细胞 ( 例如 LC) 的成熟， 从而产生抗 HIV-1 的 有效的细胞免疫应答。 0031 术语 “佐剂” 指加入疫苗以增强免疫应答的物质。 0032 合适的佐剂包括完全弗氏佐剂、 不完全弗氏佐剂、 皂苷、 矿物胶如氢氧化铝、 表面 活性物质如溶血卵磷脂、 多聚醇、 聚阴离子、 肽、 油或碳氢化合物乳液、 钥孔血蓝蛋白、 二硝 基酚、 常规细菌产物 ( 如霍乱毒素、 热不稳定肠毒素、 减毒或灭活的 BCG( 卡介苗 (bacille Calmette-Guerin。
24、) 和短小棒状杆菌， 或 BCG 衍生蛋白 )、 生化分子 ( 如 TNF-、 IL-1-、 IL-6、 PGE2， 或 CD40L)、 或含 CpG 基序的寡脱氧核苷酸。适合在疫苗组合物中使用的材 料的例子已公开， 例如在 Osol， A.， ed.， Remington sPharmaceutical Sciences， Mack Publishing Co.， Easton， Pa.(1980)， 第 1324-1341 页公开的材料， 该文献通过引用以其全 文并入本申请。 0033 树突细胞在单核细胞的分化调节中， 更尤其是在调节 CD4-Th1 模式 (profile) 相 对于 C。
25、D4-Th2 模式的分化中， 起关键作用。优选地， 本发明的无细胞疫苗组合物包含能够 刺激树突细胞以抑制 CD4-Th2 模式中的细胞分化的佐剂， 这种模式通常在慢性感染中被诱 导 ； 同时还能够刺激树突细胞以激活 CD4-Th1 模式中的细胞分化。这种佐剂是本领域技 术人员公知的， 其包括细菌产物 ( 例如， 一些 BCG 衍生蛋白， 如 Ag85B) 或化合物 ( 如具有 抗 COX 活性的化合物， 尤其是具有抗 COX2 活性的化合物 ( 例如 VIOX、 CELEBREX或 RIBAVERIN)。 0034 本发明的疫苗可配制成用于治疗慢性 HIV 感染个体的药物组合物 ( 也称为 “。
26、药 物” )。本发明的药物组合物优选是无菌的且不含致热原， 还包括药学上可接受的载体。合 适的药学上可接受的载体包括水、 盐溶液 ( 例如生理盐水 )、 粘度调节剂和其他常规的制 备人用药物组合物所使用的药物赋形剂和 / 或添加剂。合适的药物赋形剂包括稳定剂、 抗氧化剂、 等渗调节剂、 缓冲液和 pH 调节剂。合适的添加剂包括生理相容性缓冲液 ( 例 如盐酸氨丁三醇等 )， 螯合剂 ( 例如 DTPA、 DTPA- 双酰胺等 ) 或螯合钙复合物 ( 例如钙 DTPA、 CaNaDTPA- 双酰胺等 )， 或者可选地， 添加钙或钠盐 ( 例如氯化钙、 抗坏血酸钙、 葡萄 糖酸钙、 乳酸钙等 )。。
27、制备本发明的药物组合物是本领域公知的， 例如在 Remington s Pharmaceutical Science， 17th ed.， Mack Publishing Company， Easton， Pa.(1985) 中所 有描述的， 其完整公开内容通过引用并入本申请。 0035 一种可以通过细胞免疫应答主动疗法减轻慢性 HIV 感染个体症状的典型方案包 说 明 书 CN 101056977 B 6 5/9 页 7 括施用有效量的上述疫苗组合物， 可以单次使用， 或者以增强的或加强免疫 (booster) 剂 量重复使用， 治疗周期持续一周至约 24 个月。 0036 根据本发明， 疫。
28、苗组合物的 “有效量” 是指足以获得所需生物学效应 ( 在本申请中 指抗 HIV 的细胞或体液免疫应答中的至少一种， 优选细胞免疫应答 ) 的量。当然， 有效剂 量将取决于受者的年龄、 性别、 健康状况和体重， 同期治疗的方式， 如果还有就是治疗频率 以及所需的疗效。下面提供的有效剂量的范围不是用于限定本发明， 而是代表了优选的剂 量范围。但是， 最优选的剂量要因个体而定， 这是本领域技术能够理解并确定的。例如， 参 见以下文献， Berkow(1987)， Goodman(1990)， Avery(1987)， Ebadi， Pharmacology， Little， Brown and C。
29、o.， Boston， Mass.(1985)， 和 Katsung(1992)， 这些文献及其所引用的文献通过 引用完整地并入本申请。 0037 一般来说， 用于成人的剂量范围是每剂约106至1014个灭活的全HIV颗粒， 优选108 至 1012个。无论使用什么剂量， 其都应该是如通过已知方法以及本申请所描述的方法所确 定的安全和有效的剂量。 0038 本发明将通过以下限制性的实施例进行阐述。 0039 实施例 0040 实施例 1 0041 方法 0042 病毒和细胞样品 0043 通过来自感染 HIV-1 亚型 A(n 10)、 B(n 10)、 C(n 10) 或 E(n 10) 的。
30、患 者的去除 CD8 的外周血单个核细胞 (PBMC) 培养物获得 HIV-1 株。然后如文献 21 中所述， 通过 AT-2(Sigma， St Louis， Missouri) 灭活这些 HIV-1 亚型 (A、 B、 C 或 E) 株， 文献 21 通 过引用以其整体并入本申请。在 GMP 条件下采用标准的 7 天培养 25 从每位患者制备衍生 自单核细胞的 DC。简而言之， 在存在 0.5临床用人血清白蛋白 (LFB， Les Ulis， France) 的条件下， 以 106个细胞 /cm2的密度将新采集的 PBMC 进行塑料粘附。在 5 CO2、 37的条 件下温育 2 小时后， 。
31、用无菌 PBS 缓冲液漂洗掉未粘附的细胞。然后， 在含有添加了 2000U/ ml GM-CSF(Schering-Plough， Brinny， Ireland) 和 50ng/ml 临床级 IL-4(CellGenix) 的临 床级 CellGroDC 培养基的完全培养基中培养被粘附的细胞 5 天。在第 5 天， 于 37将 DC 暴露于 AT-2 灭活的自体病毒 (109个病毒颗粒 /ml)2 小时。洗涤两次除去未结合的灭活 病毒后， 将细胞在添加了临床级细胞因子 IL-1(10ng/ml)(CellGenix)、 IL-6(100ng/ml) (CellGenix) 和 TNF-(50。
32、ng/ml)(CellGenix) 的完全培养基中再培养 2 天。在第 7 天， 通 过流式细胞仪进行 DC 的质量控制 (QC)25， 该文献通过引用以其整体并入本申请。然后用上 述文献 21 中所描述的共培养方案， 将经 QC 证明的活 DC 扩增自体病毒特异性 CTL。 0044 细胞毒性检测 0045 用 AT-HIV-1(109/ml) 脉冲式处理 DC 90min， 然后用 CFSE(Molecular Probes， PoortGebouw， The Netherlands)(10nM) 标记 15min， 洗涤两次。未脉冲式处理的 DC 用 CFSE 标记作为特异性对照。在存在。
33、 CFSE- 标记的亚型匹配的或不匹配的 AT-2-HIV-1 脉冲 式处理的树突细胞 (DC) 的条件下， 将 HIV-1 亚型株特异性 CTL 以 E T 比例 10 1 置于 MicroTubes-Bulk(Bio-Rad， Hercules， CA) 中， 于 37温育 4 小时。温育结束时， 每管加入 10l碘化丙啶(PI， Sigma)(20g/ml)。 在FACSCalibur(BDImmunocytometry System， San 说 明 书 CN 101056977 B 7 6/9 页 8 Jose， CA) 上分析靶细胞溶解。在扣除未脉冲式处理 DC 的非特异性 CFS。
34、E/PI 染色后， 通过 计算 CFSE/PI 染色 DC 的百分比测定病毒特异性细胞溶解活性。 0046 统计学分析 0047 通过 Mann-Whitney 检验比较 HIV-1 亚型匹配的和亚型不匹配的细胞杀伤活性之 间的非配对数据。 0048 结果 0049 本发明的对 HIV-1 亚型 A、 B、 C 或 E 具有特异性的疫苗在体外对亚型匹配的病毒 株 (n 10) 显示出高 CTL 杀伤活性 (28-37 )， 但仅观察到低亚型间杀伤活性 (5-17 ) (P 0.001)。尽管在个别情况中观察到了亚型间杀伤活性， 但与亚型匹配的病毒株 ( 标准 差 / 平均值 20 )(P 0.。
35、001) 相比， 在亚型不匹配的病毒株中 CTL 杀伤效率差异很大 ( 标准差 / 平均值 50 )( 图 1)。这些发现表明药用 HIV-1 亚型特异性治疗性疫苗可通 过 GMP 级的灭活全病毒制品而制得。 0050 实施例 2 0051 鉴定慢性 HIV 感染个体， 并测定感染个体的 HIV 亚型。在用本发明的疫苗进行治 疗之前先测定每一个体的血浆病毒载量。 获得与感染个体的HIV亚型具有相同亚型的HIV， 按照上述实施例 1 所述的方法进行培养并用 AT-2 进行灭活。 0052 通过无针皮内递送方式将灭活 HIV 亚型施用给一组慢性感染个体， 然后测量血浆 病毒载量。可以预期一旦施用本。
36、发明的疫苗， 所述慢性感染个体的血浆病毒载量将显著降 低。 0053 给另一组慢性感染者施用树突细胞， 所述树突细胞按上述实施例1所述用AT-2灭 活的 HIV 进行负载。给个体施用 HIV 负载的树突细胞。可以预期一旦施用负载过的树突细 胞， 所述慢性感染个体的血浆病毒载量将显著降低。 0054 实施例 3 0055 将 40 只血浆病毒载量 1000 拷贝 /ml 的慢性 ( 1 年 )SIVmac251 感染的恒 河猴随机分组， 或接受自动注射枪 (AKRADERMOJET， Pau， France) 每月一次皮内注射 ( 背 部 25cm2)SIVac LA2.1(2.5ml 含 10。
37、10AT-2 灭活的 SIVmac251 的 0.9 NaCl 溶液 )5 个月 (100l/cm2/ 注射 )(n 20) ； 或接受每月一次皮内注射安慰剂 ( 单独的 2.5ml 的 0.9 NaCl 溶液 )， 共 5 个月 (n 20)。之后每个月直至第 6 个月， 自基线收集血浆样品， 并保存 于 -80直至使用。最后， 通过定量 RT-PCR 分析 (MUPROVAMA) 测定血浆 SIV RNA 载量。 0056 结果 0057 根据本发明的 SIV 亚型特异性的无细胞疫苗在第 3 个月 (P 0.037) 和第 6 个月 (P 0.013) 诱导血液病毒载量降低近 30 ( 图。
38、 2)。这些发现表明药用的亚型特异的 SIV 治疗性疫苗可通过 GMP 级灭活的全病毒制品而制得。 0058 实施例 4 0059 将 140 只血浆病毒载量 1000 拷贝 /ml 的慢性 ( 1 年 )SIVmac251 感染的恒 河猴随机分组， 或接受自动注射枪 (AKRADERMOJET， Pau， France) 每月一次皮内注射 ( 背部 25cm2)SIVac LA2.1(2.5ml 含 1010AT-2 灭活的 SIVmac251 的 0.9 NaCl 溶液 ) 和不同的佐 剂 (105UFC 减毒或热灭活 BCG、 BCG 衍生的重组 Ag85B)5 个月 (100l/cm2。
39、/ 注射 )， 同时每 天口服或不口服 200mg CELEBREX4 周 ( 每组 n 20) ； 或接受每月一次皮内注射安慰剂 说 明 书 CN 101056977 B 8 7/9 页 9 ( 单独的 2.5ml 的 0.9 NaCl 溶液 )， 共 5 个月 (n 20)。之后每个月直至第 6 个月， 自基 线收集血浆样品， 并保存于-80直至使用。 最后， 通过定量RT-PCR分析(MUPROVAMA)测定 血浆 SIVRNA 载量。 0060 参考文献 0061 1.Stover， J.et al.Can we reverse the HIV/AIDS pandemic with a。
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