本实用新型涉及生物组织细胞的分离装置。
据美国《神经科学杂志》(1983年第3卷1888-1899页)报道，目前，应用于果蝇幼 虫中枢神经元获取单细胞的分离方法是通过各种蛋白酶和胶原酶等酶类对组织进行酶 解，但这种常规的酶解方法代价高昂且费时。英国《自然》杂志(1977年第265卷751- 753页)指出，酶解方法中用到的蛋白酶和胶原酶等酶类对细胞表面的一些蛋白有一定的 消化作用，因而使分离出的单细胞并不能很好地反映生理状态下细胞的活性。英国《细 胞培养进展》(1981年第1卷125-182页)指出，虽然目前对果蝇卵、幼虫、蛹均有系统 的研究，然而由于成虫中枢神经元单细胞用常规酶解方法难以获得，所以至今尚未见到 对果蝇成虫单个神经元研究的报道。
本实用新型提出一种将单细胞从生物组织中分离出来的震动分离装置，以克服现有酶 解分离方法的上述缺陷。
图1是本实用新型生物组织单细胞震动分离装置的示意图；
图2是震动分离装置的震荡器电路图。
这种生物组织单细胞的震动分离装置，其特征在于在震荡器(I)上固定可随之而震动 的震动指针(II)，并将震荡器(I)固定在操纵器(III)上；所述震荡器(I)由稳压电源 (V)、波形发生器(VI)、功率放大器(VII)和热笔记录器(VIII)依次串联组成；其中波形发 生器(VI)由芯片ICL8038及外围电路组成；通过外围电路中配置的电阻和可变电容来改 变震荡的频率；波形发生器(VI)发出的波形经功率放大器(VII)放大后通过一个电位器W 与热笔记录器(VIII)相连，用于改变震荡的幅度。
使用时，将所需分离的生物组织固定之后，调节震动分离装置使震动指针以频率为5- 10Hz、幅度为100-200μm在组织上震动，即可获取分离的单细胞。
与现有的酶解分离相比较，采用本实用新型震动分离装置对生物组织进行的是机械分 离，不需要酶的作用，故可省去酶解所需花费的时间和精力，既非常经济，又方便快捷； 更为重要的是，机械分离方法克服了酶解带给细胞本身消化作用造成的不利影响，使分 离出的单细胞更接近在体的生理状态且具有更高的活性。
本实用新型震动分离装置可用于各种生物组织的单细胞分离。特别是，发明人利用本 实用新型震动分离装置已分离出前人从未分离过的果蝇成虫的中枢神经元；通过电生理 学和药理学的鉴定，证明这些果蝇中枢神经元具有良好的生理活性。这是用常规酶解分 离方法所难以获得的。
以下结合附图说明本实用新型的具体实施方式。
图1是本实用新型实施例中用于分离果蝇中枢神经元的机械震动分离装置示意图。
图2是本实施例机械震动分离装置中的震荡器的电路图。
图3是采用本实用新型震动分离装置分离的果蝇三龄蚴中枢神经元放大600倍的相差 显微镜像。
实施例1：果蝇中枢神经元的机械震动分离
一、分离装置
本实施例中采用的机械震动分离装置，在震荡器I上固定可随之而震动的震动指针II， 并将震荡器固定在操纵器III上；其中的震荡器I由L7809型稳压电源V、波形发生器VI、 TDA2030型功率放大器VII和上海七一医疗设备厂生产的热笔记录器VIII依次串联组成；本实 施例中的操纵器III采用的是日本那瑞氏(Narishige)公司生产的MM-3型机械式的微操 纵器；也可选用其它如电动式的、液压式的或压电陶瓷式的微操纵器。热笔式记录器VIII 固定在微操纵器III上，由玻璃管或玻璃棒拉制成的尖端约5-10μm的震动指针II固定在 热笔式记录器VIII上；由波形发生器VI控制震荡器II的频率和幅度；将震荡器I用铆钉固 定在微操纵器III上。
震荡器是利用热笔式记录器描记波形的原理，通过一个波形发生器来控制热笔式记录 器以一定频率和幅度震动的机电装置；其中波形发生器VI由芯片ICL8038及外围电路组 成，从芯片ICL8038的管脚2输出正弦波，正弦波的频率由R1和总电容决定：两个8.2K Ω的电阻R1分别接在芯片管脚4、5和电源正极之间；3μF的电容C连接在芯片管脚10 和电源负极之间，由0.1μF的C1、0.2μF的C2、0.4μF的C3和0.8μF的C4一端与 3μF的电容C共接，另一端分别通过选择开关K将电容组中的任何一个电容与电容C并 联组成选择电容组，用来改变总电容以改变频率，也即改变震动指针的震动频率；电阻 为30KΩ的R3和8.2KΩ的R4用来调整正弦波的波形，一组R3接在管脚1和电源正极 之间、R4接在管脚1和电源负极之间，另一组R3接在管脚12和电源负极之间、R4接在 管脚12和电源正极之间；电阻为1KΩ的负载电阻R2接在管脚9和正极之间；管脚6和 正极短接；管脚7和8短接；管脚11接负极。通过调节电位器W可改变正弦波的输出幅 度，以达到改变震动指针震动的幅度。
二、震动分离操作过程及效果：
标本：果蝇品系为美国依阿华(Iowa)大学生物科学系吴春放教授提供的野生型 Canton-S和Oregon-R株。将果蝇三龄蚴用去离子水清洗后，放在滴有的载玻片上进行解 剖，分离出其剪刀状的中枢神经系统。果蝇成虫用CO2麻醉后，用解剖针切下头部，再除 去口器和复眼即可剔出整脑。将分离出的果蝇三龄蚴中枢神经系统和成虫的脑后，放入 盛有标准细胞外液的培养皿中进行机械震动分离。
将放在培养皿中果蝇的脑组织用一个U形金属网格IV固定，通过选择电容组中的电容 C1、C2、C3或C4与电容C并联来调节震荡器I使震动指针II以频率为5-10Hz、幅度为 100μm在组织上轻轻震动，同时通过微操纵器III逐渐调节震荡器I以保证指针II一直与 组织接触。通过显微镜可以看到许多组织块纷纷脱离组织并悬浮在溶液中。10分钟后， 停止震动，再放置20分钟使细胞及组织块贴壁后开始进行电生理学记录。
图3是采用本实用新型震动分离装置分离的果蝇三龄蚴中枢神经元放大600倍的相差 显微镜像，从图3可见，采用本实用新型震动分离的果蝇三龄蚴中枢神经元状态良好、 形态完整且种类齐全；利用全细胞记录的电压钳模式在室温(22-25℃)下对果蝇中枢神 经元进行电生理学记录，细胞的钳制电位为-70mV，可见采用本实用新型震动装置分离 的果蝇三龄蚴中枢神经元具有良好的电生理学特征。
本实用新型震动分离装置还可广泛应用于其他生物组织单细胞的分离，如我们还曾利 用本实用新型震动分离装置成功地分离了大鼠脊髓神经元、大鼠海马神经元和豚鼠心肌 细胞等。