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1、(10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请号 201510847214.7 (22)申请日 2015.11.27 C12P 19/08(2006.01) (71)申请人 山东金洋药业有限公司 地址 255086 山东省淄博市淄博高新区鲁泰 大道 1 号 （医药生物产业创新园科研中 心 19 层） (72)发明人 魏哲 王京光 刘焕钦 蒲刚 (54) 发明名称 一种定向发酵生产右旋糖酐的方法 (57) 摘要 本发明公开了一种定向发酵生产右旋糖酐 的方法， 包括如下步骤 ： (1) 菌种培养 : 将肠膜状 明串珠菌接入种子培养基培养， (2) 发酵 ： 以 8 的接种量泵入含有发酵培养基。
2、的发酵罐中， 控制 pH7-7.4， 在 30-35下培养 20-24h， 发酵后得到 右旋糖酐发酵液 ； (3) 过滤 (4) 喷雾干燥 (5) 包 装。本发明优点是 ： 本发明采用定向发酵策略， 可 以根据需要控制发酵产物的分子量范围， 有效降 低发酵液的粘度系数， 可以直接从发酵液中庸超 滤膜、 纳滤膜分离提取不同分子量规格的右旋糖 酐组份。 (51)Int.Cl. (19)中华人民共和国国家知识产权局 (12)发明专利申请 权利要求书1页 说明书3页 CN 105385721 A 2016.03.09 CN 105385721 A 1/1 页 2 1.一种定向发酵生产右旋糖酐的方法， 。
3、其特征在于 ： 包括如下步骤 ： (1) 菌种培养 将肠膜状明串珠菌接入种子培养基培养， 于27-28下培养24h ； 控制pH7-7.4 ； 所述的 种子培养基是 ： 蔗糖 15.0、 蛋白胨 0.2、 Na2HPO4 0.3、 MnCl2 0.002、 MgSO4 0.010、 CaCO3 0.002、 其余为饮用水 ； (2) 发酵 以 8的接种量泵入含有发酵培养基的发酵罐中， 控制 pH7-7.4， 在 30-35下培养 20-24h， 发酵后得到右旋糖酐发酵液 ； 所述的发酵培养基是 ： 蛋白胨 1， 小分子葡萄糖 10， 无机盐 0.3， 饮用水余量 ； (3) 过滤 将发酵液通过。
4、过滤器， 得到滤液 ； 滤液通过一级超滤膜， 去除菌丝体， 不溶性杂质， 得到 透析液 ； 透析液和纯水通过二级超滤膜， 得到截留液和果糖过滤液 ； 截留液再进入水解灌 与 6mol/L HCL 发生水解反应， 反应结束后， 使用 6mol/L NaOH 中和多余的 HCL ； 将反应液通 过三级超滤膜 ； 将得到的滤液泵入脱色罐， 同时加入活性炭溶液， 进行脱色 ； 脱色后的溶液 通过过滤器， 滤去活性炭 ； 再通过离子交换柱 ； 通过四级超滤膜 ； 再进行除热， 除菌过滤 ； (4) 喷雾干燥 将得到的最终滤液通过喷雾干燥塔， 干燥 ； (5) 包装。 2.根据权利要求 1 所述的一种定向。
5、发酵生产右旋糖酐的方法， 其特征在于， 所述的步 骤 (3) 得到的果糖过滤液通过纳米过滤和反渗透得到果糖。 权 利 要 求 书 CN 105385721 A 2 1/3 页 3 一种定向发酵生产右旋糖酐的方法 技术领域 0001 本发明属于医药技术领域域， 尤其涉及一种定向发酵生产右旋糖酐的方法。 背景技术 0002 右旋糖酐 (Dextean) 主要是 -1,6- 糖苷键连接的葡萄糖。右旋糖酐酶 (Dextran ase,-D-1,6-Glucan-6-D-Glucanohydrolase,EC3.2.1.11)， 又叫 - 葡聚糖 酶， 是专一切割右旋糖酐中 -1,6 糖苷键的水解酶。目。
6、前国内外报道的产生右旋糖酐酶 微生物主要为青霉 (Penicillium sp.)、 斯达油脂酵母 (Lipomycesstarkeyi)、 对角毛壳 菌 (Chaetomiumgracile)、 曲霉 (Aspergillusustus)、 芽孢杆菌 (Bacillus sp.)、 链球菌 (Streptococcus sp.)均能产生右旋糖酐酶。 右旋糖酐酶有很重要的应用价值， 右旋糖酐酶 在制糖工业中降解多糖聚合物， 降低多糖的相对分子质量， 从而降低糖的黏性。 右旋糖酐酶 还可以用于口腔医用制品和代血浆右旋糖酐的酶法生产。 右旋糖酐酶在口腔医用制品中的 应用。 口腔中的细菌发酵食物中的。
7、蔗糖， 生成右旋糖酐(-D-glucan)。 右旋糖酐在牙齿面 形成牙菌斑， 它是导致细菌在牙齿表面积累的决定因素。菌斑中微生物则在网状结构保护 下大量繁殖， 其酸性代谢物破坏牙釉质， 从而导致龋齿， 造成无法再生的牙齿损伤， 同时也 给患者带来巨大痛苦。牙菌斑是龋齿和牙周病重要的致病因素之一。因此为了预防和控制 龋齿和牙周病， 抑制牙菌斑的发生和发展是至关重要的。 0003 系蔗糖经肠膜状明串珠菌 -1226(Leucon05tocmesenteroides) 发酵后生成的一 种高分子葡萄糖聚合物， 经处理精制而得。 由于聚合的葡萄糖分子数目不同， 而产生不同分 子量的产品。有高分子右旋糖酐。
8、 ( 平均分子量 10 万 -20 万 )、 中分子右旋糖酐 ( 平均分子 量 6 万 -8 万 )、 低分子右旋糖酐 ( 平均分子量 2 万 -4 万 ) 小分子右旋糖酐 ( 平均分子量 1 万 -2 万 )。右旋糖酐系蔗糖经肠膜状明串珠菌 -1226(Leuconostoc mesenteroides) 发酵 合成的一种高分子葡萄糖聚合物， 是目前最佳的血浆代用品之一。临床上常用的有中分子 右旋糖酐， 主要用作血浆代用品， 用于出血性休克、 创伤性休克及烧伤性休克等。 低、 小分子 右旋糖酐， 能改善微循环， 预防或消除血管内红细胞聚集和血栓形成等， 亦有扩充血容量作 用， 但作用较中分子。
9、右旋糖酐短暂 ； 用于各种休克所致的微循环障碍、 弥漫性血管内凝血、 心绞痛、 急性心肌梗塞及其他周围血管疾病等。 0004 目前常使用的制备方法有化学合成法和生物合成法， 使用生物方法得到的是不同 分子量的右旋糖酐， 含量不明确。 发明内容 0005 本发明的目的在于提供一种能够控制糖酐分子量范围的方法， 技术方案是 ： 0006 一种定向发酵生产右旋糖酐的方法， 包括如下步骤 ： 0007 (1) 菌种培养 0008 将肠膜状明串珠菌接入种子培养基培养， 所述的种子培养基是 ： 蔗糖 15.0、 蛋 白胨 0.2、 Na2HPO4 0.3、 MnCl2 0.002、 MgSO4 0.010。
10、、 CaCO3 0.002其余为饮用 说 明 书 CN 105385721 A 3 2/3 页 4 水 ； 于 27-28下培养 24h ； 控制 pH7-7.4 ； 0009 (2) 发酵 0010 以 8的接种量泵入含有发酵培养基的发酵罐中， 控制 pH7-7.4， 在 30-35下培 养 20-24h， 发酵后得到右旋糖酐发酵液 ； 所述的发酵培养基是 ： 蛋白胨 1， 小分子葡萄糖 10， 无机盐 0.3， 饮用水余量 ； 0011 (3) 过滤 0012 将发酵液通过过滤器， 得到滤液 ； 滤液通过一级超滤膜， 去除菌丝体， 不溶性杂质， 得到透析液 ； 透析液和纯水通过二级超滤膜，。
11、 得到截留液和果糖过滤液 ； 截留液再进入水 解灌与 6mol/L HCL 发生水解反应， 反应结束后， 使用 6mol/L NaOH 中和多余的 HCL ； 将反应 液通过三级超滤膜 ； 将得到的滤液泵入脱色罐， 同时加入活性炭溶液， 进行脱色 ； 脱色后的 溶液通过过滤器， 滤去活性炭 ； 再通过离子交换柱 ； 通过四级超滤膜 ； 再进行除热， 除菌过 滤 ； 0013 (4) 喷雾干燥 0014 将得到的最终滤液通过喷雾干燥塔， 干燥 ； 0015 (5) 包装。 0016 进一步， 所述的步骤 (3) 得到的果糖过滤液通过纳米过滤和反渗透得到果糖。 0017 本发明优点是 ： 本发明采。
12、用定向发酵策略， 可以根据需要控制发酵产物的分子量 范围， 有效降低发酵液的粘度系数， 可以直接从发酵液中庸超滤膜、 纳滤膜分离提取不同分 子量规格的右旋糖酐组份。 具体实施方式 0018 实施例 1 0019 一种右旋糖酐生产方法， 包括如下步骤 ： 0020 (1) 菌种培养 0021 将肠膜状明串珠菌接入种子培养基培养， 所述的种子培养基是 ： 蔗糖 15.0、 蛋 白胨 0.2、 Na2HPO4 0.3、 MnCl2 0.002、 MgSO4 0.010、 CaCO3 0.002其余为饮用 水 ； 于 27-28下培养 24h ； 控制 pH7-7.4 ； 0022 (2) 发酵 00。
13、23 以 8的接种量泵入含有发酵培养基的发酵罐中， 控制 pH7-7.4， 在 30-35下培 养 20-24h， 发酵后得到右旋糖酐发酵液 ； 所述的发酵培养基是 ： 蛋白胨 1， 小分子葡萄糖 10， 无机盐 0.3， 饮用水余量， 0024 (3) 过滤 0025 将发酵液通过过滤器， 得到滤液 ； 滤液通过一级超滤膜， 去除菌丝体， 不溶性杂质， 得到透析液 ； 透析液和纯水通过二级超滤膜， 得到截留液和果糖过滤液 ； 截留液再进入水 解灌与 6mol/L HCL 发生水解反应， 反应结束后， 使用 6mol/L NaOH 中和多余的 HCL ； 将反应 液通过三级超滤膜 ； 将得到的。
14、滤液泵入脱色罐， 同时加入活性炭溶液， 进行脱色 ； 脱色后的 溶液通过过滤器， 滤去活性炭 ； 再通过离子交换柱 ； 通过四级超滤膜 ； 再进行除热， 除菌过 滤 ； 果糖过滤液通过纳米过滤和反渗透得到果糖。 0026 (4) 喷雾干燥 说 明 书 CN 105385721 A 4 3/3 页 5 0027 将得到的最终滤液通过喷雾干燥塔， 干燥 ； 0028 (5) 包装。 0029 以上所述， 仅是本发明的较佳实施例而已， 并非对本发明的技术方案作任何形式 上的限制。凡是依据本发明的技术实质对以上实施例所作的任何简单修改、 等同变化与修 饰， 均仍属于本发明的技术方案的范围内。 说 明 书 CN 105385721 A 5 。