一种嗜热链球菌增菌培养基及其制备方法.pdf

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1、(10)申请公布号 CN 102766590 A (43)申请公布日 2012.11.07 CN 102766590 A *CN102766590A* (21)申请号 201210235638.4 (22)申请日 2012.07.09 C12N 1/20(2006.01) C12R 1/46(2006.01) (71)申请人 陕西科技大学 地址 710021 陕西省西安市未央区大学园 1 号 (72)发明人 陈合 李串娜 舒国伟 王勇 (74)专利代理机构 西安通大专利代理有限责任 公司 61200 代理人 陆万寿 (54) 发明名称 一种嗜热链球菌增菌培养基及其制备方法 (57) 摘要 本发。

2、明公开了一种嗜热链球菌增菌培养基 及其制备方法， 包括葡萄糖 0.8 1.2g， 酵母膏 0.5 1.0g， 大豆蛋白胨 0.5 1.0g， 番茄汁 8 12mL， 低聚木糖 0.2 0.4g， 低聚异麦芽糖 0.2 0.4g， 大 豆 低 聚 糖 0.2 0.4g， 水 88 92mL， KH2PO40.1 0.2g 和吐温 800.01 0.05mL， pH 值 7.07.2。 在常用的基础培养基上添加了番茄汁 和低聚糖 （包括低聚木糖、 大豆低聚糖和低聚异麦 芽糖） ， 以达到增菌的效果 ； 而且这些成分来源方 便， 价格低廉， 制作简单， 且能够起到明显的增菌 效果。 (51)Int.。

3、Cl. 权利要求书 2 页 说明书 6 页 (19)中华人民共和国国家知识产权局 (12)发明专利申请 权利要求书 2 页 说明书 6 页 1/2 页 2 1. 一种嗜热链球菌增菌培养基， 其特征在于， 包括葡萄糖 0.8 1.2g， 酵母膏 0.5 1.0g， 大豆蛋白胨0.51.0g， 番茄汁812mL， 低聚木糖0.20.4g， 低聚异麦芽糖0.2 0.4g， 大豆低聚糖 0.2 0.4g， 水 88 92mL， KH2PO40.1 0.2g 和吐温 800.01 0.05mL， pH 值 7.0 7.2。 2. 如权利要求 1 所述的嗜热链球菌增菌培养基， 其特征在于， 所述的番茄汁是。

4、将番茄 洗净后， 热烫软化、 去皮破碎， 然后加水打浆， 煮沸后冷却， 过滤， 得到番茄汁。 3. 如权利要求 1 所述的嗜热链球菌增菌培养基， 其特征在于， 所述的大豆低聚糖是将 脱脂大豆粉的乙醇提取液用酸沉淀去除蛋白， 得到大豆低聚糖提取液， 再经过脱色、 脱盐处 理后得到大豆低聚糖。 4. 一种嗜热链球菌增菌培养基的制备方法， 其特征在于， 包括以下步骤 ： 1） 番茄汁的制备 ： 取新鲜番茄用清水洗净， 经过热烫软化、 去皮破碎， 加水打浆， 然后煮沸 10 30min， 冷 却后过滤， 得到番茄汁 ； 2） 大豆低聚糖的提取 ： 大豆粉经石油醚脱脂后得到脱脂大豆粉， 然后将脱脂大豆粉。

5、用体积分数 60 80% 乙 醇， 在 90 100索式提取器中提取 150 200min， 分离得到提取液后用饱和醋酸铅溶液 沉淀蛋白 ； 沉淀完全后， 调 pH 值至中性， 加入草酸除去过量的铅离子， 过滤除去沉淀， 滤液用 NaOH 调至中性， 得到大豆低聚糖提取液 ； 在大豆低聚糖提取液中加入活性炭于 45 60脱色 20 40min， 分离得到脱色液后 再上样于离子交换树脂进行脱盐处理， 洗脱后收集得到大豆低聚糖 ； 3） 低聚糖浓溶液的制备 ： 将低聚木糖、 大豆低聚糖和低聚异麦芽糖分别配制成质量分数为 1 5% 的溶液， 过 滤 ； 4） 嗜热链球菌增菌培养基的制备 ： 将葡萄糖。

6、， 酵母膏， 大豆蛋白胨， KH2PO4， 吐温 80 混合溶于水中， 用 NaOH 溶液调 pH 至 7.0 7.2， 然后经 118， 15min 灭菌， 最后再加入过滤的番茄汁和低聚糖溶液 ； 上述各组份的配比为 ： 葡萄糖 0.8 1.2g， 酵母膏 0.5 1.0g， 大豆蛋白胨 0.5 1.0g， 番茄汁812mL， 低聚木糖0.20.4g， 低聚异麦芽糖0.20.4g， 大豆低聚糖0.2 0.4g， 水 88 92mL， KH2PO40.1 0.2g 和吐温 800.01 0.05mL。 5. 如权利要求 4 所述的嗜热链球菌增菌培养基的制备方法， 其特征在于， 所述的番茄 汁的。

7、过滤为先经过双层纱布过滤， 再经 121、 20min 高温灭菌的 0.2 微米的膜过滤。 6. 如权利要求 4 所述的嗜热链球菌增菌培养基的制备方法， 其特征在于， 所述的大豆 低聚糖的提取为 ： 大豆粉经石油醚脱脂、 除去石油醚后， 得到脱脂大豆粉 ； 然后用体积分数 60 80% 乙醇， 按脱脂大豆粉 ： 乙醇 =1g 8 10mL 的料液比， 在 90 100索式提取器中提取 150 200min， 重复提取两次， 合并提取液后用 pH 为 4 5 的饱和醋酸铅溶液沉淀蛋白 ； 沉淀完全后， 调 pH 值至中性， 加入草酸除去过量的铅离子， 过滤除去沉淀 ； 滤液用 权 利 要 求 书。

8、 CN 102766590 A 2 2/2 页 3 0.5mol/LNaOH 调至中性， 得到大豆低聚糖提取液 ； 在大豆低聚糖提取液中加入固形物质量 1.5 2% 的活性炭于 45脱色 30min， 脱色液 再以 35m3/(m3h) 的速度流过 50 60的 732 型阳离子交换树脂和 717 型阴离子交换树 脂进行脱盐处理， 将脱盐后的提取液浓缩后干燥得到大豆低聚糖。 7. 如权利要求 4 所述的嗜热链球菌增菌培养基的制备方法， 其特征在于， 所述的低聚 木糖分子式为(C5H10O5)n， n为27， 分子量为3001051 ； 低聚异麦芽糖分子式为(C5H10O5) n， n 为 2 。

9、10 分子量为 300 2000。 权 利 要 求 书 CN 102766590 A 3 1/6 页 4 一种嗜热链球菌增菌培养基及其制备方法 技术领域 0001 本发明属于益生菌培养技术领域， 涉及一种嗜热链球菌增菌培养基及其制备方 法。 背景技术 0002 近几年我国乳品工业发展速度较快 , 酸奶及发酵乳饮料的发展居乳制品产业之 首。平均年增长速度达 15% 以上 , 而且在今后很长一段时间内仍会保持这一增长速度。同 时随着社会的发展和人们生活水平的提高， 对酸奶发酵剂的品质有了更高的要求。 0003 传统发酵剂一般需要对菌种进行扩大培养， 周期长、 接种量大、 操作繁琐、 菌种容 易污染。

10、、 退化或变异， 质量不易控制， 而且发酵剂活菌数低等 (107-108cfu/mL)。而直投式乳 酸菌发酵剂不需对菌种活化、 扩大繁殖过程而直接应用于生产。 其主要优点是活菌含量高、 接种量小、 生产成本较低、 保藏期长、 携带方便， 可直接用于发酵制品的生产， 减少扩大培养 的复杂操作工序， 从而简化产品的生产工艺。有利于保持产品质量的稳定， 防止菌种的退 化、 变异和污染。因此， 直投式乳酸菌发酵剂满足了生产的迫切需要， 成为乳酸菌发酵剂研 究的主要方向， 具有非常好的经济价值和不可估量的应用前景。 0004 靳亚平等对培养嗜热链球菌的 7 种基础培养基进行筛选， 确定为乳酸菌培养基。 。

11、然后优化培养条件 ： 起始 pH 值为 6.8， 发酵温度为 42。得出最佳乳酸菌培养基 ： 葡萄糖 10g, 酵母膏 7.5g, 蛋白胨 7.5g,KH2PO42g, 番茄汁 100mL, 吐温 -800.5mL, 蒸馏水 900mL， 2% 乳清。田洪涛等研究了在 MRS 基础培养基中添加不同营养物质对嗜热链球菌生长的影响， 最后增殖培养基的最佳配比为 ： 在 MRS 培养基中添加 0.3% 玉米浆、 7.5% 番茄汁、 5.0% 啤酒 液、 1.0% 乳糖 ； 试验菌株在增殖培养基中经 37培养 24h。吕嘉枥等研究了嗜热链球菌在 脱脂乳培养基中 , 添加生长因子后的增菌效果。实验结果表。

12、明 ,6% 黄豆芽汁 ,6.7% 胡萝卜 汁 ,2% 香菇汁 ,2.5% 醪糟 ,20% 信阳毛尖茶汁 ,5% 啤酒 ,5% 麦芽汁均可作为嗜热链球菌的 单因子最佳促生长剂。李用芳等试验了嗜热链球菌在几种不同的基础培养基的生长情况， 结果表明 ： 嗜热链球菌的最佳生长培养基为番茄汁培养基和牛乳琼脂培养基， 番茄汁琼 脂培养基配方为 ： 葡萄糖 10g, 酵母膏 10g， 番茄汁 400ml, 盐液 A5ml， 盐液 B5ml， 蒸馏水 600ml， 琼脂 20g， pH6.0. 牛乳琼脂培养基 ： 脱脂奶粉 100g， 蒸馏水 1000ml， 0.100MPa 灭菌 10min。琼脂 25-3。

13、0g, 水 50ml， 酵母膏 2.5g， 蒸馏水 300ml， 0.100MPa 灭菌 20min。和 分开灭菌后混匀倒平板。李莹等研究了蔬菜汁培养基的组成 ( 蔬菜汁、 碳源、 氮源 ) 对嗜热 链球菌生长的影响， 优化了蔬菜汁培养基的组成。 结果表明 ： 用于嗜热链球菌生长的最优的 蔬菜汁组分为番茄汁 10%、 豆浆 2%、 乳糖 2%。专利 CN1844353A 公布了一种廉价的嗜热链球 菌菊芋汁增菌培养基， 它是以菊芋汁作为主要培养基成分。 0005 益生元 （Prebiotics）是指那些 “人体不消化或难消化的成份 ( 如低聚糖 ： 由 2-10 个单糖组成的糖类， 由于其聚合度。

14、低， 所以称作低聚糖 )， 这些成份可选择性的刺激 结肠生理活性益生菌的活性， 从而产生对宿主的健康效应” 。具有益生元功能的物质主 要是一些非消化性低聚糖， 如低聚异麦芽糖、 低聚果糖、 低聚半乳糖， 低聚木糖， 大豆低聚 说 明 书 CN 102766590 A 4 2/6 页 5 糖， 水苏糖， 棉籽糖， 菊糖， 甘露低聚糖， 低聚壳聚糖等。低聚木糖又称木寡糖， 是由 2-7 个木糖分子以 -1,4 糖苷键结合而成的功能性聚合糖。促进益生菌增殖的同时产生多 种有机酸。降低肠道 pH 值， 抑制有害菌生长， 使益生菌在肠道大量增殖。低聚异麦芽糖 （Isomaltose）是由两个葡萄糖分子以。

15、 -1,6 糖苷键连接起来的双糖聚合而成， 能有效 的促进人体内有益细菌 - 双歧杆菌的生长繁殖， 而且其耐热、 耐酸性极佳。大豆低聚糖 (SoybeanOligosaccharide) 是大豆中可溶性糖的总称， 主要成分是水苏糖、 棉子糖和蔗糖 等。 大豆低聚糖能促进人体肠道内固有的有益细菌一双歧杆菌的增殖、 改善人体免疫力、 延 缓衰老等， 是近年来受到重视的功能性低聚糖， 它可广泛用于保健食品和化妆品中。 发明内容 0006 本发明解决的问题在于提供一种嗜热链球菌增菌培养基及其制备方法， 该培养基 是一种适合嗜热链球菌大量生长的增殖培养基， 可应用于高效浓缩型直投式发酵剂的工业 化大规模。

16、生产。 0007 本发明是通过以下技术方案来实现 ： 0008 一种嗜热链球菌增菌培养基， 包括葡萄糖 0.8 1.2g， 酵母膏 0.5 1.0g， 大豆蛋 白胨 0.5 1.0g， 番茄汁 8 12mL， 低聚木糖 0.2 0.4g， 低聚异麦芽糖 0.2 0.4g， 大豆 低聚糖 0.2 0.4g， 水 88 92mL， KH2PO40.1 0.2g 和吐温 800.01 0.05mL， pH 值 7.0 7.2。 0009 所述的番茄汁是将番茄洗净后， 热烫软化、 去皮破碎， 然后加水打浆， 煮沸后冷却， 过滤， 得到番茄汁。 0010 所述的大豆低聚糖是将脱脂大豆粉的乙醇提取液用酸沉。

17、淀去除蛋白， 得到大豆低 聚糖提取液， 再经过脱色、 脱盐处理后得到大豆低聚糖。 0011 一种嗜热链球菌增菌培养基的制备方法， 包括以下步骤 ： 0012 1） 番茄汁的制备 ： 0013 取新鲜番茄用清水洗净， 经过热烫软化、 去皮破碎， 加水打浆， 然后煮沸 10 30min， 冷却后过滤， 得到番茄汁 ； 0014 2） 大豆低聚糖的提取 ： 0015 大豆粉经石油醚脱脂后得到脱脂大豆粉， 然后将脱脂大豆粉用体积分数 60 80% 乙醇， 在 90 100索式提取器中提取 150 200min， 分离得到提取液后用饱和醋酸铅溶 液沉淀蛋白 ； 0016 沉淀完全后， 调 pH 值至中性。

18、， 加入草酸除去过量的铅离子， 过滤除去沉淀， 滤液用 NaOH 调至中性， 得到大豆低聚糖提取液 ； 0017 在大豆低聚糖提取液中加入活性炭于 45 60脱色 20 40min， 分离得到脱色 液后再上样于离子交换树脂进行脱盐处理， 洗脱后收集得到大豆低聚糖 ； 0018 3） 低聚糖浓溶液的制备 ： 0019 将低聚木糖、 大豆低聚糖和低聚异麦芽糖分别配制成质量分数为 1 5% 的溶液， 过滤 ； 0020 4） 嗜热链球菌增菌培养基的制备 ： 0021 将葡萄糖， 酵母膏， 大豆蛋白胨， KH2PO4， 吐温 80 混合溶于水中， 用 NaOH 溶液调 pH 说 明 书 CN 1027。

19、66590 A 5 3/6 页 6 至 7.0 7.2， 然后经 118， 15min 灭菌， 最后再加入过滤的番茄汁和低聚糖溶液 ； 0022 上述各组份的配比为 ： 葡萄糖 0.8 1.2g， 酵母膏 0.5 1.0g， 大豆蛋白胨 0.5 1.0g， 番茄汁812mL， 低聚木糖0.20.4g， 低聚异麦芽糖0.20.4g， 大豆低聚糖0.2 0.4g， 水 88 92mL， KH2PO40.1 0.2g 和吐温 800.01 0.05mL。 0023 所述的番茄汁的过滤为先经过双层纱布过滤， 再经 121、 20min 高温灭菌的 0.2 微米的膜过滤。 0024 所述的大豆低聚糖的提。

20、取为 ： 0025 大豆粉经石油醚脱脂、 除去石油醚后， 得到脱脂大豆粉 ； 0026 然后用体积分数 60 80% 乙醇， 按脱脂大豆粉 ： 乙醇 =1g 8 10mL 的料液比， 在 90索式提取器中提取 150 200min， 重复提取两次， 合并提取液后用 pH 为 4 5 的饱 和醋酸铅溶液沉淀蛋白 ； 0027 沉淀完全后， 调 pH 值至中性， 加入草酸除去过量的铅离子， 过滤除去沉淀 ； 滤液用 0.5mol/LNaOH 调至中性， 得到大豆低聚糖提取液 ； 0028 在大豆低聚糖提取液中加入固形物质量 1.5 2% 的活性炭于 45脱色 30min， 脱 色液再以 35m3/。

21、(m3h) 的速度流过 50 60的 732 型阳离子交换树脂或 717 型阴离子交 换树脂进行脱盐处理， 将脱盐后的提取液浓缩后干燥得到大豆低聚糖。 0029 所述的低聚木糖分子式为 (C5H10O5)n， n 为 2-7, 分子量为 300-1051。低聚异麦芽 糖分子式为 (C5H10O5)n， n 为 2-10 分子量为 300-2000。 0030 与现有技术相比， 本发明具有以下有益的技术效果 ： 0031 本发明提供的嗜热链球菌增菌培养基， 在常用的基础培养基上添加了番茄汁和低 聚糖 （包括低聚木糖、 大豆低聚糖和低聚异麦芽糖） ， 以达到增菌的效果 ； 而且这些成分来源 方便，。

22、 价格低廉， 制作简单， 且能够起到明显的增菌效果 ： 0032 嗜热链球菌经活化后， 以 5% 的接种量接入该增菌培养基中， 42培养 11h， 活菌数 高达 (5.9-7.6)108cfu/mL 以上， 与相同处理的实验室常用的、 价格昂贵的 M17培养基的活 菌数 （3.2-3.7） 108cfu/mL 相比， 活菌数得到了提高， 增菌效果显著。 0033 本发明提供的一种嗜热链球菌增菌培养基， 由于其来源方便、 价格低廉、 增菌效果 明显， 是一种适合嗜热链球菌大量生长的增殖培养基， 可应用于高效浓缩型直投式发酵剂 的工业化大规模生产。 具体实施方式 0034 下面结合具体的实施例对本。

23、发明做进一步的详细说明， 所述是对本发明的解释而 不是限定。 0035 实施例 1 0036 嗜热链球菌增菌培养基组成 ： 葡萄糖 0.8g， 酵母膏 0.5g， 大豆蛋白胨 0.5g， 番茄 汁 8mL， 低聚木糖 (C5H10O5)n0.2g， 低聚异麦芽糖 (C5H10O5)n0.2g， 大豆低聚糖 0.2g， 水 92mL， KH2PO40.2g， 吐温 800.05mL， pH 值 7.0。 0037 嗜热链球菌增菌培养基的制备 ： 0038 1） 番茄汁的制备 ： 0039 取新鲜番茄 500g 用清水洗净， 经过热烫软化、 去皮破碎， 加 500mL 水打浆， 然后煮 说 明 书。

24、 CN 102766590 A 6 4/6 页 7 沸 20min， 冷却后， 用双层纱布过滤， 再经 121， 20min 高温灭菌的 0.2 微米的膜过滤。 0040 2） 大豆低聚糖的提取 ： 0041 市售大豆粉， 经石油醚脱脂、 除去溶剂后， 得到脱脂大豆粉， 然后用 80% 乙醇， 按 1 10 的料液比， 在 90提取 165min， 重复提取两次 , 用饱和醋酸铅溶液沉淀蛋白 (pH 为 4-5)， 沉淀完全后， 调 pH 值至中性， 加入草酸除去过量的铅离子， 过滤除去沉淀。滤液用 0.5mol/LNaOH调至中性， 得到大豆低聚糖的提取液。 在提取液中加入1.5%的活性炭(。

25、相对 固形物 ) 于 45脱色 30min， 脱色液再以 35m3/(m3h) 的速度流过 50-60的 732 型阳离 子交换树脂和 717 型阴离子交换树脂进行脱盐处理， 最后得到产品大豆低聚糖。 0042 3） 低聚糖浓溶液的制备 ： 0043 将低聚木糖、 大豆低聚糖和低聚异麦芽糖分别配制成 1% 的浓溶液， 然后经 121， 20min 高温灭菌的 0.2 微米的膜过滤。 0044 4） 嗜热链球菌增菌培养基的制备 ： 0045 将葡萄糖， 酵母膏， 大豆蛋白胨， KH2PO4， 吐温 80 混合溶于水中， 用 1moL/L NaOH 溶 液调 pH 至 7.0， 然后经 118， 。

26、15min 灭菌， 最后再加入经膜过滤的番茄汁和低聚糖溶液。 0046 将嗜热链球菌经过液体 M17培养基活化后， 以 5% 的接种量接入本实施例所得的 增菌培养基中， 42培养 11h， 活菌数可达 5.9108cfu/mL， 较之对照 M17培养基的活菌数 3.25108cfu/mL 相比得到了提高。 0047 实施例 2 0048 嗜热链球菌增菌培养基组成 ： 葡萄糖 1.0g， 酵母膏 0.8g， 大豆蛋白胨 0.8g， 番茄 汁 10mL， 低聚木糖 (C5H10O5)n0.2g， 低聚异麦芽糖 (C5H10O5)n0.2g， 大豆低聚糖 0.2g， 水 90mL， KH2PO40.。

27、2g， 吐温 800.05mL， pH 值 7.1。 0049 嗜热链球菌增菌培养基的制备 ： 0050 1） 番茄汁的制备 ： 0051 取新鲜番茄用清水洗净， 经过热烫软化、 去皮破碎， 加水打浆， 然后煮沸 24min， 冷 却后过滤， 得到番茄汁 ； 0052 2） 大豆低聚糖的提取 ： 0053 大豆粉经石油醚脱脂后得到脱脂大豆粉， 然后将脱脂大豆粉用体积分数 70% 乙 醇， 在 95索式提取器中提取 180min， 分离得到提取液后用饱和醋酸铅溶液沉淀蛋白 ； 0054 沉淀完全后， 调 pH 值至中性， 加入草酸除去过量的铅离子， 过滤除去沉淀， 滤液用 NaOH 调至中性， 。

28、得到大豆低聚糖提取液 ； 0055 在大豆低聚糖提取液中加入活性炭于 50脱色 40min， 分离得到脱色液后再上样 于 60的 732 型阳离子交换树脂和 717 型阴离子交换树脂进行脱盐处理， 洗脱后收集得到 大豆低聚糖 ； 0056 3） 低聚糖浓溶液的制备 ： 0057 将低聚木糖、 大豆低聚糖和低聚异麦芽糖分别配制成质量分数为 2% 的溶液， 过 滤 ； 0058 4） 嗜热链球菌增菌培养基的制备 ： 0059 将葡萄糖， 酵母膏， 大豆蛋白胨， KH2PO4， 吐温 80 混合溶于水中， 用 NaOH 溶液调 pH 至 7.1， 然后经 118， 15min 灭菌， 最后再加入过滤。

29、的番茄汁和低聚糖溶液 ； 说 明 书 CN 102766590 A 7 5/6 页 8 0060 将嗜热链球菌经过液体 M17培养基活化后， 以 5% 的接种量接入本实施例所得的 增菌培养基中， 42培养 11h， 活菌数可达 6.6108cfu/mL， 相比对照 M17培养基的活菌数 3.44108cfu/mL 相比得到了提高。 0061 实施例 3 0062 嗜热链球菌增菌培养基组成 ： 葡萄糖 1.0g， 酵母膏 0.8g， 大豆蛋白胨 1.0g， 番茄 汁 10mL， 低聚木糖 0.4g， 低聚异麦芽糖 0.4g， 大豆低聚糖 0.4g， 水 90mL， KH2PO40.2g， 吐温 。

30、800.05mL， pH 值 7.0。 0063 嗜热链球菌增菌培养基的制备 ： 0064 1） 番茄汁的制备 ： 0065 取新鲜番茄用清水洗净， 经过热烫软化、 去皮破碎， 加水打浆， 然后煮沸 28min， 冷 却后过滤， 得到番茄汁 ； 0066 2） 大豆低聚糖的提取 ： 0067 大豆粉经石油醚脱脂后得到脱脂大豆粉， 然后将脱脂大豆粉用体积分数 75% 乙 醇， 在 98索式提取器中提取 170min， 分离得到提取液后用饱和醋酸铅溶液沉淀蛋白 ； 0068 沉淀完全后， 调 pH 值至中性， 加入草酸除去过量的铅离子， 过滤除去沉淀， 滤液用 NaOH 调至中性， 得到大豆低聚糖。

31、提取液 ； 0069 在大豆低聚糖提取液中加入活性炭于 55脱色 35min， 分离得到脱色液后再上样 于 732 型阳离子交换树脂和 717 型阴离子交换树脂进行脱盐处理， 洗脱后收集得到大豆低 聚糖 ； 0070 3） 低聚糖浓溶液的制备 ： 0071 将低聚木糖、 大豆低聚糖和低聚异麦芽糖分别配制成质量分数为 3% 的溶液， 过 滤 ； 0072 4） 嗜热链球菌增菌培养基的制备 ： 0073 将葡萄糖， 酵母膏， 大豆蛋白胨， KH2PO4， 吐温 80 混合溶于水中， 用 NaOH 溶液调 pH 至 7.0， 然后经 118， 15min 灭菌， 最后再加入过滤的番茄汁和低聚糖溶液 。

32、； 0074 将嗜热链球菌经过液体 M17培养基活化后， 以 5% 的接种量接入本实施例所得的 增菌培养基中， 42培养 11h， 活菌数可达 7.1108cfu/mL， 相比对照 M17培养基的活菌数 3.58108cfu/mL 相比得到了提高。 0075 实施例 4 0076 嗜热链球菌增菌培养基组成 ： 葡萄糖 1.2g， 酵母膏 1.0g， 大豆蛋白胨 1.0g， 番茄 汁 12mL， 低聚木糖 0.4g， 低聚异麦芽糖 0.4g， 大豆低聚糖 0.4g， 水 88mL， KH2PO40.2g， 吐温 800.05mL， pH 值 7.0。 0077 嗜热链球菌增菌培养基的制备 ： 0。

33、078 1） 番茄汁的制备 ： 0079 取新鲜番茄用清水洗净， 经过热烫软化、 去皮破碎， 加水打浆， 然后煮沸 30min， 冷 却后过滤， 得到番茄汁 ； 0080 2） 大豆低聚糖的提取 ： 0081 大豆粉经石油醚脱脂后得到脱脂大豆粉， 然后将脱脂大豆粉用体积分数 65% 乙 醇， 在 100索式提取器中提取 160min， 分离得到提取液后用饱和醋酸铅溶液沉淀蛋白 ； 说 明 书 CN 102766590 A 8 6/6 页 9 0082 沉淀完全后， 调 pH 值至中性， 加入草酸除去过量的铅离子， 过滤除去沉淀， 滤液用 NaOH 调至中性， 得到大豆低聚糖提取液 ； 0083。

34、 在大豆低聚糖提取液中加入活性炭于 60脱色 25min， 分离得到脱色液后再上样 于 732 型阳离子交换树脂和 717 型阴离子交换树脂进行脱盐处理， 收集得到大豆低聚糖 ； 0084 3） 低聚糖浓溶液的制备 ： 0085 将低聚木糖、 大豆低聚糖和低聚异麦芽糖分别配制成质量分数为 5% 的溶液， 过 滤 ； 0086 4） 嗜热链球菌增菌培养基的制备 ： 0087 将葡萄糖， 酵母膏， 大豆蛋白胨， KH2PO4， 吐温 80 混合溶于水中， 用 NaOH 溶液调 pH 至 7.2， 然后经 118， 15min 灭菌， 最后再加入过滤的番茄汁和低聚糖溶液 ； 0088 将嗜热链球菌经过液体 M17培养基活化后， 以 5% 的接种量接入本实施例所得的 增菌培养基中， 42培养 11h， 活菌数可达 7.6108cfu/mL， 比对照 M17培养基的活菌数 3.7108cfu/mL 相比得到了提高。 说 明 书 CN 102766590 A 9 。