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1、(19)中华人民共和国国家知识产权局 (12)发明专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请号 201510821090.5 (22)申请日 2015.11.22 (71)申请人 南京金埔园林股份有限公司 地址 211103 江苏省南京市江宁区东山街 道润麒路70号 (72)发明人 刘雁丽薛峰王宜森张志南 (51)Int.Cl. C12N 1/14(2006.01) A01N 63/04(2006.01) A01P 21/00(2006.01) C12R 1/645(2006.01) (54)发明名称 一种利用外生菌根真菌优化苗木培育的方 法 (57)摘要 本发明公开了一种。
2、利用外生菌根真菌优化 苗木培育的方法。 其主要过程包括如下步骤： 制 作外生菌根真菌菌剂， 培育树木幼苗， 外生菌根 真菌接种， 接种后树苗的营养管理。 在实际使用 中可针对不同的树种进行预实验， 选择最佳的外 生菌根真菌菌种。 本发明采用6种外生菌根真菌 作为材料接种于树苗根系， 使树苗的生长量及移 栽存活率得到显著提高。 权利要求书1页 说明书5页 CN 105861315 A 2016.08.17 CN 105861315 A 1.一种利用外生菌根真菌优化苗木培育的方法， 其特征在于， 包括如下步骤： (1)制作外生菌根真菌菌剂： 将混合基质A与液体培养基按重量比12混合均匀， 制备三 。
3、角瓶基质， 将外生菌根真菌菌丝体分别用接种棒分割为1cm2的小块， 每三角瓶接种10-20cm2 菌丝体， 放置于25黑暗通风环境下培养1个月， 即得外生菌根真菌菌剂； 所述混合基质A为： 泥煤苔和蛭石按重量比31均匀混合； 所述液体培养基为CaCl20.05g/L， MgSO40.15g/L， NaCl0.025g/L， 1的FeCl3 1.2ml， KH2PO40.5g/L， VitaminB110mg/L， (NH4)2HPO40.25g/L， 葡萄糖15g/L， 柠檬酸 0.2g/L， 蒸馏水1L， pH5.7； 2)将松树种子清洗消毒后， 播种于装有混合基质B的塑料盆钵， 培养30天。
4、， 制备松树苗； 混合基质B组分为： 珍珠岩+草炭+苗圃土按223体积比混合； 3)将步骤1)制备的外生菌根真菌菌剂和灭菌混合基质C按15重量比混合均匀， 分装于 塑料盆钵内， 挑选长势良好根系发达步骤2)制备的松树苗， 移栽于盆钵内； 所述混合基质C组分为： 珍珠岩+草炭+苗圃土按332体积比混合； 4)接种培养。 2.根据权利要求1所述的方法 ， 其特征在于 ， 所述外生菌根菌为彩色豆马勃 (Pisolithustinctorius)、 土生空团菌(Cenocuccumgeophinum)、 红蜡蘑(Laccaria laccata)、 红根须腹菌(Rhizopogonrubescens)。
5、、 粘盖牛肝菌(Suillusbovinus)、 大红菇 (Russulasanguinaria)。 3.根据权利要求1所述的方法， 其特征在于， 所述外生菌根菌的菌丝体分别用接种棒分 割为1cm2的小块， 等比例分别接种， 每三角瓶接种10-20cm2混合菌丝体， 放置于25黑暗通 风环境下培养1个月， 即得外生菌根真菌菌剂； 所述外生菌根菌分别为彩色豆马勃( Pisolithustinctorius )， 土生空团菌 (Cenocuccumgeophinum)， 红蜡蘑(Laccarialaccata)， 红根须腹菌(Rhizopogon rubescens)， 粘盖牛肝菌(Suillus。
6、bovinus)， 大红菇(Russulasanguinaria)。 4.根据权利要求1-3所述的方法， 其特征在于， 步骤4)具体操作为： 接种20天后， 每盆钵 保留10棵长势最佳的幼苗， 每隔10天喷施一次营养液， 每盆钵用量为100ml， 30天后每盆钵 用量为200ml， 接种90天后， 容器苗用于培育盆景或移栽于苗圃种植， 移栽过程中应尽量保 持树苗根系完整， 根系附带少量的基质以保持菌根的适应力。 5.权利要求1-4所述方法用于优化苗木培育的用途。 权利要求书 1/1 页 2 CN 105861315 A 2 一种利用外生菌根真菌优化苗木培育的方法 技术领域 0001 本发明属于。
7、栽培领域， 具体是一种使用与苗木共生的微生物优化苗木培育的方 法， 尤其涉及一种利用外生菌根真菌优化苗木培育的方法。 背景技术 0002 园林绿化过程中新栽植的苗木存在诸多问题， 如： 苗木生长迟缓， 移栽成活率低， 易受病害。 为保证其成活及生长， 苗木移栽过程中常使用化学调节的方法， 但易造成土壤、 基质污染， 对绿叶观赏性苗木的后期观赏性， 以及药用树木的品质安全有较大的影响。 外生 菌根菌是一类与树木互利共生的土壤真菌， 在树苗根系形成菌根共生体后， 可促进树苗的 水分及营养吸收， 提高树苗对不良环境的抗性。 0003 菌根菌剂是一种生物活性剂， 其作用原理与其他化学肥料或化学生长素完。
8、全不 同， 它是以土壤真菌通过与植物根系的共生作用， 从而对植物起到综合的生理生态效应。 它 不仅可以大幅度提高苗木质量、 造林成活率、 幼苗生长量， 还可能会从根本上解决在恶劣生 长环境条件下的造林技术难题。 另外， 菌根菌剂的应用还会大大减少速效化肥和农药在农 业、 林业中的使用， 从而减少硝态氮及其它有害物质对水资源、 土壤资源以及大气资源的污 染， 避免土壤板结、 盐碱化， 增强土壤系统的生物活力， 提高土壤肥力。 0004 在菌剂研究方面， 与北美及欧洲一些国家相比， 我国起步较晚， 基于菌根菌剂优 点， 今后的造林中可采用新型的菌根菌剂对幼苗实施菌根化接种， 尤其在土壤贫瘠的地方 。
9、造林和引种， 充分发挥菌根的促生抗逆作用， 将对我国林木生态效益的发挥起到很大的推 动作用， 对于推动我国经济发展和改善生态环境具有十分重要的战略意义。 发明内容 0005 本发明的目的在于克服现有技术的不足， 解决移栽苗木生长过程中的上述问题， 提供了一种利用树木共生外生菌根真菌优化苗木生长的方法。 0006 为实现上述目的， 本发明采用的技术方案如下： 0007 一种利用外生菌根真菌优化苗木培育的方法， 包括如下步骤： 0008 1)制作外生菌根真菌菌剂： 将混合基质A与液体培养基按重量比12混合均匀， 分 装到每个三角瓶(600g/个)， 瓶口用透气海绵塞紧， 置于灭菌锅中121灭菌20。
10、分钟， 制备三 角瓶基质， 0009 所述混合基质A为： 泥煤苔(peatmoss)和蛭石按重量比31均匀混合； 0010 所述液体培养基为CaCl20.05g/L， MgSO40.15g/L， NaCl0.025g/L， FeCl3(1质 量体积比)1.2ml， KH2PO40.5g/L， VitaminB110mg/L， (NH4)2HPO40.25g/L， 葡萄糖15g/L， 柠檬酸0.2g/L， 蒸馏水1L， pH5.7。 0011 在无菌环境下， 将固体培养基b上保存培养的外生菌根真菌菌丝体分别用接种棒 分割为1cm2的小块， 等比例分别接种， 每三角瓶接种10-20cm2混合菌丝体。
11、， 放置于25黑暗 通风环境下培养1个月， 即得外生菌根真菌菌剂。 说明书 1/5 页 3 CN 105861315 A 3 0012 所述外生菌分别为彩色豆马勃( Pisolithustinctorius )， 土生空团菌 (Cenocuccumgeophinum)， 红蜡蘑(Laccarialaccata)， 红根须腹菌(Rhizopogon rubescens)， 粘盖牛肝菌(Suillusbovinus)， 大红菇(Russulasanguinaria)。 0013 所述固体培养基b配方为： CaCl20.05g/L， MgSO40.15g/L， NaCl0.025g/L， FeCl3。
12、 (1)1.2ml， KH2PO40.5g/L， VitaminB110mg/L， (NH4)2HPO40.25g/L， 葡萄糖15g/L， 琼脂 15g/L， 蒸馏水1L， pH5.5。 0014 2)将树木种子清洗消毒后， 自来水浸泡24小时， 播种于装有灭过菌的混合基质B的 塑料盆钵(50cm30cm20cm)内， 盆钵置于通风温室内， 每两天喷水一次， 保持基质表面湿 润， 种子萌发30天后的幼苗用于接种。 0015 混合基质B组分为： 珍珠岩+草炭+苗圃土按223体积比混合。 0016 3)将外生菌根真菌菌剂和灭菌混合基质C按15重量比混合均匀， 分装于塑料盆钵 (50cm30cm2。
13、0cm)内， 挑选长势良好根系发达的松树苗， 清洗幼苗根系， 移栽于盆钵内， 每盆钵移栽约50棵幼苗， 约3-4天浇水一次； 0017 所述混合基质C组分为： 珍珠岩+草炭+苗圃土按332体积混合。 0018 4)接种20天后， 间苗至每盆钵保留10棵长势最佳的幼苗， 每隔10天喷施一次营养 液， 每盆钵用量为100ml， 30天后每盆钵用量为200ml。 接种90天后， 容器苗可用于培育盆景 或移栽于苗圃种植， 移栽过程中应尽量保持树苗根系完整， 根系附带少量的基质以保持菌 根的适应力。 0019 本发明相比现有技术具有如下优点： 苗木经侵染后根系数目增加， 生长良好， 移栽 后成活率提高；。
14、 获得的树苗生长健壮， 株型紧凑， 观赏价值高； 同时减少了对土壤和基质的 污染， 生态环保； 方法便于操作， 降低小苗培育及后期管理过程中的成本， 提高生产效率， 可 用于培育园林绿化珍贵树种及珍稀药用苗木。 具体实施方式 0020 实施例1： 0021 实施案例以马尾松为材料， 采用上述六种外生菌根真菌等比例混合制作菌剂， 接 种于马尾松幼苗根系， 于接种后90天测定幼苗生长状况， 并用体视显微镜观察幼苗根系菌 根率。 树苗接种90天后移栽于30cm25cm盆钵， 移栽一年后观察幼苗的生长情况。 0022 1.材料准备 0023 幼苗培养： 采集当年马尾松种子， 于4保存两个月以上。 称取。
15、10克种子， 用3的 次氯酸钠溶液浸泡消毒15分钟， 洗净后用清水浸泡24小时， 然后播种于塑料盆钵内， 隔天浇 水一次保持土表湿润。 0024 将混合基质A与液体培养基按重量比12混合均匀， 分装到每个三角瓶(600g/个)， 瓶口用透气海绵塞紧， 置于灭菌锅中121灭菌20分钟， 制备三角瓶基质， 0025 所述混合基质A为： 泥煤苔(peatmoss)和蛭石按重量比31均匀混合； 0026 所述液体培养基为CaCl20.05g/L， MgSO40.15g/L， NaCl0.025g/L， FeCl31.2ml， KH2PO40.5g/L， VitaminB110mg/L， (NH4)2H。
16、PO40.25g/L， 葡萄糖15g/L， 柠檬酸0.2g/L， 蒸 馏水1L， pH5.7。 0027 FeCl3为1的溶液， 1g/100Ml。 说明书 2/5 页 4 CN 105861315 A 4 0028 在无菌环境下， 将固体培养基b上保存培养的外生菌根真菌菌丝体分别用接种棒 分割为1cm2的小块， 等比例分别接种， 每三角瓶接种10-20cm2混合菌丝体， 放置于25黑暗 通风环境下培养1个月， 即得外生菌根真菌菌剂。 0029 所述外生菌分别为彩色豆马勃( Pisolithustinctorius )， 土生空团菌 (Cenocuccumgeophinum)， 红蜡蘑(Lac。
17、carialaccata)， 红根须腹菌(Rhizopogon rubescens)， 粘盖牛肝菌(Suillusbovinus)， 大红菇(Russulasanguinaria)。 0030 所述固体培养基b配方为： CaCl20.05g/L， MgSO40.15g/L， NaCl0.025g/L， FeCl3 (1)1.2ml， KH2PO40.5g/L， VitaminB110mg/L， (NH4)2HPO40.25g/L， 葡萄糖15g/L， 琼脂 15g/L， 蒸馏水1L， pH5.5。 0031 将树木种子清洗消毒后， 自来水浸泡24小时， 播种于装有灭过菌的混合基质B的塑 料盆钵。
18、(50cm30cm20cm)内， 盆钵置于通风温室内， 每两天喷水一次， 保持基质表面湿 润， 种子萌发30天后的幼苗用于接种。 0032 混合基质B组分为： 珍珠岩+草炭+苗圃土按223体积比混合。 0033 2.苗木接种 0034 将外生菌根真菌菌剂和灭菌混合基质C按质量比15混合均匀， 分装于塑料盆钵 内， 挑选长势良好的松树苗， 清洗幼苗根系， 移栽于盆钵内， 约3-4天浇水一次， 每组接种处 理及不接种的对照处理设3组重复， 每组重复10株苗。 0035 所述混合基质C组分为： 珍珠岩+草炭+苗圃土按332体积混合。 0036 3.苗木管理及移栽 0037 接种20天后， 间苗至每盆。
19、钵保留10棵长势最佳且均一的幼苗， 每隔10天喷施营养 液， 每盆钵用量为100ml， 30天后每盆钵用量为200ml。 接种90天后， 测定树苗的生物量及株 高、 胸径， 并用体视显微镜观察树苗根系菌根率。 接种90天后将苗木移栽入20cm25cm盆钵 内， 移栽1年后观察树苗生长情况， 统计树苗存活率， 生物量及株高。 0038 马尾松树苗接种混合外生菌根真菌90天后， 体式显微镜观察发现， 所有接种后的 幼苗根系均成功与外生菌根真菌形成良好的菌根结构， 形成大量的外延菌丝， 有效提高了 树苗的根系吸收面积。 0039 对照组分别设置空白对照组： 不施用外生菌； 0040 对照1-6组， 。
20、与实施例1组的区别仅在于， 菌剂由混合菌剂等比例混合改为单一菌 剂， 单一菌分别为1#彩色豆马勃(Pisolithustinctorius)， 2#土生空团菌(Cenocuccum geophinum)， 3#红蜡蘑(Laccarialaccata)， 4#红根须腹菌(Rhizopogonrubescens)， 5#粘 盖牛肝菌(Suillusbovinus)， 6#大红菇(Russulasanguinaria) 0041 通过测定树苗生长的基本数据， 发现外生菌根菌接种处理的幼苗地上部及地下部 生物量、 株高、 胸径显著高于不接种的对照处理， 其中混合真菌接种处理效果显著高于其他 真菌接种处。
21、理。 0042 表1实施案例马尾松树苗接种90天后生长情况及根系菌根侵染率(P0.05) 说明书 3/5 页 5 CN 105861315 A 5 0043 0044 马尾松幼苗盆钵移栽1年后， 外生菌根菌接种的树苗地上部发达， 株高、 针叶数量、 针叶长度显著高于不接种的对照苗， 菌根真菌接种的树苗存活率、 生物量、 株高、 胸径均显 著高于不接种的对照苗， 其中本发明组真菌接种的树苗存活率为100， 且地上部生物量达 到对照苗的7倍以上， 地下部生物量达到对照苗的3.6倍， 均显著高于其他真菌接种的树苗。 0045 表2实施案例马尾松树苗移栽12个月后生长情况统计 0046 0047 该案。
22、例验证了该方法在树木容器苗育苗中具有可实施性， 具有显著提高树苗生长 及移栽存活率的作用， 针对不同的树苗可选用相应的外生菌根菌种来实施， 大量生产前可 说明书 4/5 页 6 CN 105861315 A 6 做预实验来选择最合适该树种的外生菌根菌菌种。 0048 虽然， 上文中已经用一般性说明及具体实施方案对本发明作了详尽的描述， 但在 本发明基础上， 可以对之作一些修改或改进， 或在实施案例之外的树种实施本方法， 这对本 领域技术人员而言是显而易见的。 0049 因此， 在不偏离本发明精神的基础上所做的这些修改， 改进或范围的扩大， 均属于 本发明要求保护的范围。 说明书 5/5 页 7 CN 105861315 A 7 。