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1、(10)授权公告号 CN 101353350 B (45)授权公告日 2010.09.29 CN 101353350 B *CN101353350B* (21)申请号 200810120962.5 (22)申请日 2008.09.09 C07D 487/22(2006.01) C07F 15/02(2006.01) (73)专利权人 浙江大学 地址 310027 浙江省杭州市西湖区浙大路 38 号 (72)发明人 龚兴国 郦剑勇 陈福鼎 曾冬云 韩斌 (74)专利代理机构 杭州求是专利事务所有限公 司 33200 代理人 韩介梅 (54) 发明名称 一种纯化血红素的方法 (57) 摘要 本发明。
2、涉及一种血红素的纯化方法。该方法 步骤为 ： 用质量浓度为 0.01 -5的碱溶液溶 解血红素粗品， 去渣取上清液， 上清液中加入可溶 性钙盐或氢氧化钙使血红素结晶沉淀完全， 离心 取沉淀， 先用酸溶液和 EDTA 溶液洗涤， 再用水洗 涤至中性， 干燥， 得纯化的血红素。本发明工艺简 单， 操作方便， 回收率高达 95以上， 成本低廉， 革除有机溶剂， 获得的精品血红素纯度可达 98 以上。环境友好， 便于大规模工业化生产。 (51)Int.Cl. 审查员 李莎莎 (19)中华人民共和国国家知识产权局 (12)发明专利 权利要求书 1 页 说明书 2 页 CN 101353350 B1/1 。
3、页 2 1. 一种纯化血红素的方法， 其步骤如下 ： 用质量浓度为 0.01 -5的碱溶液溶解血红素粗品， 去渣取上清液， 上清液中加入可 溶性钙盐或氢氧化钙使血红素结晶沉淀完全， 离心取沉淀， 先用酸溶液和 EDTA 溶液洗涤， 再用水洗涤至中性， 干燥， 得纯化的血红素 ； 所说的可溶性钙盐为氯化钙、 硝酸钙或两者的 混合物。 2. 根据权利要求 1 所述的纯化血红素的方法， 其特征在于所说的碱溶液为氨水溶液、 氢氧化钠溶液或氢氧化钾溶液。 3. 根据权利要求 1 所述的纯化血红素的方法， 其特征在于所说的酸溶液为 pH 小于 5.5 的盐酸、 硫酸、 硝酸、 磷酸或醋酸溶液。 权 利 要。
4、 求 书 CN 101353350 B1/2 页 3 一种纯化血红素的方法 技术领域 0001 本发明涉及一种血红素的纯化方法， 属于生物化学领域。 背景技术 0002 血红素又称为铁卟啉， 由一个原卟啉 IX 和一个铁组成平面结构的复合物， 铁原子 有六个配位电子， 其中四个与原卟啉中的四个吡咯环的 N 原子配位结合， 形成一个大的平 面结构， 另两个分别位于卟啉平面的两侧。 在血红蛋白、 肌红蛋白中铁的两个配位键一个与 蛋白质的组氨酸的吡咯环中的 N 配位结合， 另一个配位键则用于氧结合。市售的血红素一 般以氯化高铁血红素的形式出售， 它是由氯原子取代组氨酸的吡咯氮所得。本发明所述的 血红。
5、素就是指氯化高铁血红素。 血红素不溶于水， 也不溶于乙醇等一般的有机溶剂， 但是血 红素含有两个羧基， 因此血红素可以在碱溶液中离子化， 而溶于碱溶液中。 0003 血红素是人体内氧代谢的很多重要的蛋白质的辅基， 如用于氧携带和保存的血红 蛋白、 肌红蛋白， 呼吸链中的细胞色素， 还有过氧化氢酶、 细胞色素 P450 氧还酶等， 血红素 的缺失 ( 一般由于缺铁造成 ) 会导致人的病症， 最常见的就是贫血。 0004 血红素由于其人体吸收利用率高， 对肠胃无刺激性， 是一种优良的补铁剂， 临床上 用于治疗缺铁性贫血等疾病。血红素还是重要的医药原料， 特别是一系列卟啉类抗肿瘤药 物的前体。血红素。
6、还被用于涂料化工和食品着色剂中。因此血红素应用广泛， 市场需求巨 大。 0005 由于医药等行业对血红素的纯度要求较高， 一般粗品不能满足其要求， 因此血红 素的纯化即精制就必不可少。传统的血红素纯化方法是用吡啶、 氯仿、 醋酸、 浓盐酸和氯化 钠体系先生成吡啶血色原的重结晶方法， 该方法效果较好， 曾被广泛使用。 但是该方法用到 吡啶、 氯仿等试剂毒性较大， 随着人们对生命和环境的日益重视， 该方法使用受到限制。 0006 专利 ZL87107834 氯化血红素的分离和纯化 提供了一种用碱或者有机溶剂溶解， 然后用表面活性剂作为催化剂重结晶的方法， 该方法体系复杂， 需要使用特殊的设备， 给。
7、操 作带来不便， 特别是该方法最后为了进一步提高纯度， 用浓硫酸洗涤氯化血红素氧化混杂 的氨基酸， 会生成对人体有害的物质， 是该方法致命的缺陷。 0007 专利 ZL200310100894.3血红素的纯化方法 提供了一种简单、 方便的血红素纯 化方法， 该方法利用血红素在不同的 pH 值溶解性不同的性质， 使用碱溶， 酸沉淀的方法重 结晶血红素， 取得了良好的效果。但是该方法在调酸结晶过程中溶液 pH 值已经回到中性， 本质上只是去掉了碱不溶的杂质和水溶性的杂质， 而不能去除溶于碱不溶于水的杂质， 因 此通用性不强。 发明内容 0008 本发明的目的是提供了一种能有效去除血红素中碱溶性杂质。
8、的快速、 简便、 清洁 的纯化血红素的方法， 以适应现代工业生产的要求。 0009 本发明的纯化血红素的方法， 其步骤如下 ： 说 明 书 CN 101353350 B2/2 页 4 0010 用质量浓度为 0.01 -5的碱溶液溶解血红素粗品， 去渣取上清液， 上清液中加 入可溶性钙盐或氢氧化钙使血红素结晶沉淀完全， 离心取沉淀， 先用酸溶液和 EDTA 溶液洗 涤， 再用水洗涤至中性， 干燥， 得纯化的血红素。 0011 本发明中， 所说的碱溶液可以是氨水溶液、 氢氧化钠溶液或氢氧化钾溶液。 0012 本发明中， 所说的可溶性钙盐可以是氯化钙、 硝酸钙或两者的混合物 ； 判断沉淀完 全的标。
9、准是上清液为无色或淡黄色。 0013 本发明中， 所说的酸溶液为 pH 小于 5.5 的盐酸、 硫酸、 硝酸、 磷酸或醋酸溶液。考 虑到一般商品化的产品要求为氯化血红素， 则优选盐酸溶液。 0014 上述的 EDTA 溶液是用于螯合血红素沉淀中多余的钙离子， 可以采用乙二胺四乙 酸溶液或乙二胺四乙酸的钠盐溶液。 0015 本发明工艺简单， 操作方便， 回收率高达 95以上， 成本低廉， 革除有机溶剂， 获得 的精品血红素纯度可达 98以上。环境友好， 便于大规模工业化生产。 0016 具体实施方案 0017 实施例 1 ： 0018 取 70纯度的血红素粗品 1kg， 加质量浓度为 5的氢氧化。
10、钠溶液 20L 使其溶解， 管式离心机离心去渣， 上清液加入无水氯化钙固体 100g， 血红素迅速沉淀， 离心取沉淀。该 沉淀物依次用 pH3.0 的盐酸溶液和质量浓度为 0.01的乙二胺二乙酸溶液洗涤， 然后用水 洗涤至中性， 干燥得精品血红素 700g。原子吸收光谱测铁含量达到 8.4， 血红素纯度为 98， 回收率达 98。 0019 实施例 2 ： 0020 取 80纯度的血红素粗品 500g， 加质量浓度为 0.1的氨水 100L 使其溶解， 压 滤， 滤液加入二水合氯化钙 30g， 离心收集血红素沉淀， 沉淀先用质量浓度 0.1的乙二胺 二乙酸二钠溶液洗涤， 然后用 pH2.0 的。
11、硝酸溶液洗涤， 再用水洗涤至中性， 烘干得精品血红 素 384g， 血红素纯度 99， 回收率为 95。 0021 实施例 3 ： 0022 取80纯度的血红素粗品500g， 加质量浓度为0.01的氢氧化钾溶液20L使其溶 解， 压滤， 滤液加入氢氧化钙 30g， 离心收集血红素沉淀， 该沉淀物依次用 pH2.0 的盐酸溶液 和质量浓度为 0.01的乙二胺二乙酸四钠溶液洗涤， 然后用水洗涤至中性， 烘干得精品血 红素 400g， 纯度 98， 回收率 98。 0023 实施例 4 ： 0024 取75纯度的血红素粗品500g， 加质量浓度为2的氢氧化钾溶液10L使其溶解， 压滤， 滤液加入氯化钙 15g， 硝酸钙 10g， 离心收集血红素沉淀， 沉淀依次用 pH5.0 的醋酸溶 液、 质量浓度 5的乙二胺四乙酸二钠溶液洗涤， 最后用水洗涤至中性， 烘干得精品血红素 373g， 纯度 98.5， 回收率 98。 说 明 书 。