一种治疗肿瘤的中药组合物 【技术领域】
本发明涉及一种药物组合物， 特别涉及一种益气养血、 补虚活血， 扶助人体正气， 治疗及辅助治疗肿瘤的中药组合物。背景技术
“当归补血汤” 是一首金元时代李东垣所创造的益气补血方剂， 由黄芪和当归两味 药以 5 ∶ 1 比分组成的， 具有益气生血功效， 多用于治劳倦内伤， 气血虚， 阳浮于外之虚热 证。李军昌等通过给纯种新西兰雄兔灌胃给予当归补血汤， 于不同时间点收集血清， 以 MTT 法测定上述血清对人肝癌细胞系 SMMC7721 增殖的抑制作用的影响。 结果发现 ： 当归补血汤 血清对人肝癌细胞 SMMC7721 增殖有抑制作用， 当归补血汤经肠道进入体内后， 具有一定的 抑制肝癌细胞增殖的作用。 刁凤声等通过当归补血汤对小鼠肝癌淋巴道转移和脾细胞凋亡 的实验发现， 当归补血汤具有抑制小鼠肝癌 Hca-F25/16A3 癌细胞沿淋巴道转移的作用， 并 能减轻淋巴结转移程度。
但现代的研究发现当归补血汤存在如下问题， 一者当归有一些副作用， 如用量过 大， 口服常规用量的当归煎剂， 散剂偶有疲倦， 嗜睡等反应 ； 当归挥发油穴位注射可使病人 出现发热， 头痛， 口干， 恶心等反应 ； 大剂量给药， 可使实验动物血压下降， 剂量再加大则血 压骤降， 呼吸停止 ； 当归辛香走窜， 月经过多， 有出血倾向， 阴虚内热， 腹泻等症状， 临床使 用当归不可过量， 服药后也应注意有无不良反应。二者当归的半数至死量较低， 当归水提 取液给小鼠灌服及腹腔注射的半数致死量， 分别大于 8g/kg 和 6.58g/kg， 其安全性相对较 差。其三有研究公开， 当归有促进肿瘤细胞生长， 促进临床肿瘤病人的复发与转移 ( 参见下 述文献 ： 文献 1， Lau CB， Ho TC， Chan TW， Kim SC.Use of dong quai(Angelicasinensis) to treat peri-or postmenopausal symptoms in women with breast cancer ： is it appropriate ？ Menopause.2005 Nov-Dec ； 12(6) ： 734-40.Epub 2005 Nov 8 ； 文献 2， Chang CJ， Chiu JH， Tseng LM， Chang CH， Chien TM， Wu CW， Lui Y Modulationof HER2 expression by ferulic acid on human breast cancer MCF7 cells.Eur J ClinInvest.2006ug ； 36(8) ： 588-96.. ； 文 献 3 ， Piersen CE Phytoestrogens in botanicaldietary supplements ： implications for cancer.Integr Cancer Ther.2003Jun ； 2(2) ： 120-38)， 这些问题影响了当归补血汤的临床使用， 特别是在肿瘤治疗中的运用， 许多临床医生对此 存有忧虑。在这种背景下如何避免副作用， 提高临床疗效， 我们开展了相关的研究。 发明内容
本发明目的在于提供一种治疗肿瘤的中药组合物。
本发明目的是通过如下技术方案实现 ：
方案 A ：
本发明所述的一种治疗肿瘤中药组合物的原料药主要组成为 ：
黄芪 4-13 重量份 鸡血藤 1-6 重量份。本发明中药组合物的原料药组成优选为 ：
黄芪 5-10 重量份 鸡血藤 1-5 重量份。
本发明中药组合物的原料药组成优选为 ：
黄芪 5-8 重量份 鸡血藤 1-5 重量份。
本发明中药组合物的原料药组成优选为 ：
黄芪 5 重量份 鸡血藤 1 重量份。
本发明中药组合物的原料药组成优选为 ：
黄芪 5 重量份 鸡血藤 2 重量份。
本发明中药组合物的原料药组成最优选为 ：
黄芪 5 重量份 鸡血藤 3 重量份。
黄芪 (Astragalus Memeranceus) 为豆科植物蒙古黄芪或膜荚黄芪的根。 鸡血藤为 豆科 (Leguminosae) 密花豆属 (Spatholobus) 植物密花豆 (Spatholobus suberectusDunn) 的干燥藤茎。
本发明还提供了上述中药组合物制剂的制备方法， 该方法为 ： 黄芪、 鸡血藤按上述 比例经常规工艺方法提取后加入药学可接受的辅料制成药剂学可接受的任意常规剂型， 包 括胶囊剂、 片剂、 颗粒剂、 凝胶剂、 缓释剂、 口服液或滴丸剂 ； 所述常规工艺方法包括水提取 或醇提取或先水提取再醇提取或先醇提取后再水提取， 经上述常规提取后还可以过大孔树 脂柱进一步富集有效成分 ；
上述常规工艺水提取方法可以为 ： 每次 10-30 倍量， 提取 1-4 次， 每次 1-3 小时 ；
上述常规工艺醇提取方法可以为 ： 30-80％乙醇、 4-15 倍量、 分别提取 1-3 小时 ； 所述过大孔树脂柱方法为 ： 提取液滤过， 滤液通过大孔树脂， 先用 4-6 倍量水或 20％以下浓度的乙醇洗脱， 洗脱液弃取， 再用加 50-80％乙醇 1-10 倍洗脱， 收集洗脱液， 减 压回收乙醇至无醇味， 得纯化提取液。
本发明具体提供一种冲剂的制备方法 ： 该方法为黄芪， 鸡血藤药材， 按上述比例组 合， 经粉碎后， 用 8-10 倍原料干重的纯净水加热回流提取 2 次， 每次 1h， 合并提取液， 过滤， 减压浓缩， 得浸膏， 将用上述浸膏置喷雾干燥， 其收率为 10.2-11.0％。并用干法制粒， 得冲 剂。
本发明目的还可以通过如下技术方案实现 ：
方案 B ：
本发明所述的一种治疗肿瘤中药组合物的原料药主要组成为 ：
黄芪提取物 4-13 重量份 鸡血藤提取物 1-6 重量份。
本发明中药组合物的原料药组成优选为 ：
黄芪提取物 5-10 重量份 鸡血藤提取物 1-5 重量份。
本发明中药组合物的原料药组成优选为 ：
黄芪提取物 5-8 重量份 鸡血藤提取物 1-5 重量份。
本发明中药组合物的原料药组成优选为 ：
黄芪提取物 5 重量份 鸡血藤提取物 1 重量份。
本发明中药组合物的原料药组成优选为 ：
黄芪提取物 5 重量份 鸡血藤提取物 2 重量份。
本发明中药组合物的原料药组成最优选为 ：
黄芪提取物 5 重量份 鸡血藤提取物 3 重量份。
黄芪提取物提取物可以是但不限于醇提过柱精制物、 水提过柱精制物、 醇提物或 水提物中的任意一种或几种的组合 ； 鸡血藤提取物提取物可以是但不限于醇提过柱精制 物、 水提过柱精制物、 醇提物或水提物中的任意一种或几种的组合 ；
黄芪提取物、 鸡血藤提取物可通过市售购买， 按照上述组方比例并按常规的制剂 工艺制成药剂学可接受的任意常规剂型， 包括滴丸、 胶囊剂、 片剂、 颗粒剂、 凝胶剂、 缓释剂、 口服液 ；
所述黄芪、 鸡血藤醇提物、 水提物、 醇提过柱精制物或水提过柱精制物可以但不限 于如下方法制备 ：
水提物提取方法可以为 ： 每次 10-30 倍量， 提取 1-4 次， 每次 1-3 小时 ；
醇提物提取方法可以为 ： 30-80％乙醇、 4-15 倍量、 分别提取 1-3 小时 ；
所述过过大孔树脂柱方法为 ： 提取液滤过， 滤液通过大孔树脂， 先用 4-6 倍量水或 20％以下浓度的乙醇洗脱， 洗脱液弃取， 再用加 50-80％乙醇 1-10 倍洗脱， 收集洗脱液， 减 压回收乙醇至无醇味， 得纯化提取液。 本发明黄芪与鸡血藤配伍， 能加强其益气补血活血， 增强免疫等方面的作用。 其作 用优于 “当归补血汤” ， 且能用于多种肿瘤治疗各期， 具有治疗与辅助治疗肿瘤的作用。
下面实验例和实施例用于进一步说明但不限于本发明。
实验例 1 本发明促造血及调节免疫作用研究
下述实验中 ： 组合药物组 (FF) 为实施例 1 的方法制备的药品。
当归补血汤 (DG) 为 ： 黄芪∶当归＝ 5 ∶ 1， 制备方法同实施例 1。
1、 药物对骨髓细胞增殖的影响
1)、 颈椎脱臼法处死 ICR 小鼠， 75％酒精浸泡 3 分钟后， 将小鼠置于无菌吸水纸上， 腹面朝上 ； 在小鼠股骨下端皮肤剪开一个小口， 撕开皮肤， 充分暴露股骨及胫骨 ； 用镊子夹 住胫骨， 用眼科剪沿股骨尽量分离肌肉 ； 在膝关节处剪开股骨与胫骨， 用镊子提起股骨， 在 股骨大转子关节处剪下股骨， 如需要可再分离下胫骨， 放入无菌 RPMI1640 培养皿中， 迅速 转入无菌操作台。
2)、 进一步清除股骨及胫骨上肌肉组织 ； 逐次用过量双抗 PBS， 正常双抗 PBS， 无双 抗 PBS， 无血清 RPMI1640 清洗。
3)、 鼠齿镊夹住股骨 ( 或胫骨 ) 剪去骨骺， 用 20 号针头刺穿骨末端 ； 用装有培养基 的 5ml 注射器， 向骨髓腔内快速推入培养基， 冲洗出骨髓细胞， 一般用 2-3ml 培养基冲洗两 次， 可冲出绝大部分细胞 ； 可用注射器反复推拉骨髓细胞悬液几次， 即得单细胞悬液。取细 胞悬液 100g 离心 5 分钟， 将细胞悬液定容到 5ml， 缓缓加到有 5ml 淋巴细胞分离液的离心管 上层， 2000rpm 离心 20min， 采集交界面的骨髓有核细胞， 无血清 RPMI1640 培养液洗涤 3 次， 加入 10％的 FBS， 计数细胞密度， 按 100000/ 孔接种 96 孔板。
4)、 设 置 空 白 对 照 组， 组 合 药 组 (FF)(15.625ug/ml， 31.25ug/ml， 62.5ug/ml， 125ug/ml， 250mg/ml， 500mg/ml) 与阳性对照组刀豆素 A(ConA 5ug/ml)， 置标准体系培养箱 中培养 24h， 48h， 用 MTT 法测定细胞增殖情况 ； 组合药组 (FF) 为实施例 1 的方法制备的药 品。
6)、 与当归补血汤 (DG) 比较其对骨髓细胞增殖的影响， 当归补血汤的药材按原著 比例 ( 黄芪∶当归＝ 5 ∶ 1)， 制备方法同实施例 1。
表 1 药物组 (FF) 对骨髓细胞增殖的影响 ( 用药单位 ug/ml)
*P ＜ 0.01vs 空白给药组比较， 有显著性的差异
表 2 药物组 (FF) 与当归补血汤 (DG) 比较对骨髓细胞增殖的影响 ( 用药单位 ug/ ml， 培养 48 小时 )
注与当归补血汤比较， ＊ P ＜ 0.05， ＊＊ P ＜ 0.01。组合物组的效果与对照组有 显着性的差异。即组合物有较好地促骨髓细胞增殖的作用。
2、 药物对脾淋巴细胞增殖的影响
1)、 ICR 小鼠颈椎脱臼处死， 75％乙醇浸泡 3 分钟， 取出小鼠置于无菌纸上， 左腹侧 朝上 ； 在小鼠左腹侧中部剪开小口， 撕开皮肤， 暴露腹壁， 可见红色长条状脾脏 ；
2)、 在脾脏下侧提起腹膜， 剪开后上翻， 暴露脾脏， 用镊子提起脾脏， 眼科剪分离脾 脏下面的结缔组织取出脾脏。 放入盛有 5ml RPMI 1640 液的培养皿中 ； 转入无菌操作台， 逐 次用过量双抗 PBS， 正常双抗 PBS， 无双抗 PBS， 无血清 RPMI1640 清洗。
3)、 将脾脏放置于不锈钢网上， 用注射器针芯轻轻研压脾脏， 制成单细胞悬液 ( ＜ 5min)， RPMI1640 培养液洗涤离心 3 次 (1000rpm， 5min)， 定容至 5ml.
4)、 将细胞悬液缓缓加到有 5ml 淋巴细胞分离液的离心管上层， 2000rpmg 离心 20min， 采集交界面的有核细胞， 无血清 RPMI1640 培养液洗涤 3 次， 加入 10％的 FBS， 计数细 胞密度， 按 100000/ 孔接种 96 孔板。
5)、 设置空白对照组， 加药组 (15.625ug/ml， 31.25ug/ml， 62.5ug/ml， 125ug/ml， 250mg/ml， 500mg/ml) 与阳性对照组 (ConA 5ug/ml)， 置标准体系培养箱中培养 24h， 48h， 用 MTT 法测定细胞增殖情况。
表 3 药物组对脾淋巴细胞增殖的影响 (ug/ml)
P ＜ 0.01vs 模型组 表 4 该方与当归补血汤组对脾淋巴细胞增殖的影响 (ug/ml， 培养 48 小时 )
注： 与当归补血汤比较， ＊ P ＜ 0.05， ＊＊ P ＜ 0.01。与对照组比较组合物组的效 果有显着性的差异。即组合物对脾淋巴细胞增殖的效果明显优于当归补血汤组。实验例 2 黄芪鸡血藤水提物抗肿瘤的作用
组合物的水提取物对 MCF-7、 HT-29 细胞株增殖的抑制作用 ： 采用 MTT 检测组合物 水提取物对 MCF-7 增殖的抑制作用， 发现组合物从 50-500ug/ml 对癌细胞有明显的抑制作 用。48 小时 IC50 该组合物为 113.03ug/ml ； 而当归补血汤的作用不明显。HT-29 增殖的抑 制作用， 发现组合物从 50-500ug/ml 对癌细胞有明显的抑制作用。IC50 该组合物与当归补 血汤分别为 51.28ug/ml， 230.45ug/ml。 而在相应浓度对人正常乳腺上皮细胞的增殖抑制无 明显作用， 可见， 其对肿瘤细胞的增殖抑制活性较强， 对正常细胞增殖无明显抑制作用。
在体测定组合物对移植肿瘤的影响 ： 用移植肿瘤的方法建立乳腺癌动物模 型， 将肿瘤切成 5 毫米大小， 植入裸鼠体内， 分为不给药组 ( 阴性对照 )， 多西紫杉醇组 (Docetaxel 阳性对照 5mg/kg/w 腹腔注射 )， 多西紫杉醇加当归补血汤 (1.2mg/g 每天灌胃 给药 ) 组， 及该组合物组 (1mg/g， 每天灌胃给药 )， 对照裸鼠给双蒸水， 给药 21 天。结果显 示， 乳腺癌荷瘤裸鼠服用药物水提物的肿瘤比对照组组减少了 61.74％。 当归补血汤与对照 组相比其抑制率不明显 (28.3％ )。
实验也用单纯鸡血藤提取物从 50-500ug/ml 对肿瘤细胞 MCF-7， HT29 也有抑制作 用， 但 48 小时 IC50 分别为 131.11 ； 73.28ug/ml， 说明其作用不如黄芪与鸡血藤的组合物作 用强， 结果参见表 5 中的 JXT 组。
表 5 组合物在细胞水平抗肿瘤作用分析
注： 黄芪鸡血藤组合物组较当归补血汤组在半数有效率及肿瘤抑制率方面均有显 着性的差异， 即黄芪鸡血藤组合物组明显优于当归补血汤组 ； 黄芪鸡血藤组合物组也较独 的鸡血藤药物组疗效好， 但两者间无显着性的差异。
表 6 组合物对化疗药物抗白细胞减少的作用 (N ＝ 8)
注 * 与对照组相比 P ＜ 0.05
空白模型组 (Negative) 比较， 当归补血汤组与多西紫杉醇比较有显着性的差异， 说明当归补血汤并不能有效地逆转化疗药物所致的白细胞降低 ； 而组合物组与空白模型组 (Negative) 比较无显着性的差异， 结果提示该组合物能抗化疗期间白细胞的减少， 促进造 血， 及升白细胞的作用 ； 单味鸡血藤虽能改善化疗白细胞减少的副作用但疗效不如组合物。
该组合物具有明确的补气养血， 增强机体的免疫功能， 具有治疗与辅助治疗肿瘤 的作用， 且疗效优于当归补血汤及单用鸡血藤。
实验例 3 黄芪与鸡血藤组方优化研究
根据组合物提取物的作用特点， 以组合物对脾细胞的促进作用为指标， 用单因素 对该组合物的组方比例进行筛选。实验如下 ：
参实施例 1 的方法取， 对不同比例的组合物进行水提取， 比例用黄芪 ： 鸡血藤分别 为5∶1； 5∶2； 5 ∶ 3， 经粉碎后， 用 8-10 倍原料干重的纯净水加热回流提取 2 次， 每次 1h， 合并提取液， 过滤， 减压浓缩， 得浸膏。将上述浸膏进行冷冻干燥， 得药粉。
将用上述药粉进行脾细胞刺激实验， 方法参照实验例 1， 考察黄芪， 鸡血藤不同比 例组合药物对对促进细胞增殖的作用。结果显示 5 ∶ 3 的比例组合物作用较强。
表 7 不同比例组合物对脾淋巴细胞增殖的影响 (ug/ml， 48hours)
注： 对组合物药味之间不同比例的研究表明当黄芪与鸡血藤比值为 5 ∶ 3 时具有 较好的促脾淋巴细胞增殖的作用。
下述实施例均能实现上述实验例的效果。
具体实施方式
实施例 1 ：
黄芪， 鸡血藤药材， 按 5 ∶ 3 的比例组合， 经粉碎后， 用 8-10 倍原料干重的纯净水加热回流提取 2 次， 每次 1h， 合并提取液， 过滤， 减压浓缩， 得浸膏。将用上述浸膏置喷雾干 燥， 其收率为 10.2-11.0％ ； 并用干法制粒， 得冲剂。
实施例 2 ：
黄芪 500g、 鸡血藤 200g ；
黄芪， 鸡血藤药材混合， 经粉碎后， 用 8-10 倍原料干重的纯净水加热回流提取 2 次， 每次 1h， 合并提取液， 过滤， 减压浓缩， 得浸膏， 将用上述浸膏置喷雾干燥， 其收率为 10.2-11.0％， 并用干法制粒， 得冲剂。
实施例 3 ：
黄芪 500g、 鸡血藤 300g ；
黄芪， 鸡血藤药材混合， 经粉碎后， 用 8-10 倍原料干重的纯净水加热回流提取 2 次， 每次 1h， 合并提取液， 过滤， 减压浓缩， 得浸膏， 将用上述浸膏置喷雾干燥， 其收率为 10.2-11.0％， 并用干法制粒， 得冲剂。
实施例 4 ：
黄芪 500g、 鸡血藤 300g ；
黄芪， 鸡血藤药材混合， 经粉碎后， 30％乙醇、 4 倍量提取 1 小时， 经常规工艺制成 胶囊剂。
实施例 5 ： 黄芪水提取物 50g、 鸡血藤水提取物 20g ； 经常规工艺制成胶囊剂。 实施例 6 ： 黄芪醇提取物 50g、 鸡血藤醇提取物 30g ； 经常规工艺制成缓释制剂。 实施例 7 ： 黄芪水提取物 50g、 鸡血藤醇提取物 30g。 经常规工艺制成滴丸剂。 实施例 8 ： 黄芪醇提取物 50g、 鸡血藤水提过柱精致物 30g ； 经常规工艺制成缓释制剂。 实施例 9 ： 黄芪醇提过柱精致物 50g、 鸡血藤醇提取物 30g。 经常规工艺制成滴丸剂。 实施例 10 ： 黄芪水提过柱精致物 50g、 鸡血藤水提过柱精致物 20g ； 经常规工艺制成胶囊剂。9