书签分享收藏举报版权申诉 / 6

立即下载加入VIP,免费下载

当前位置：首页 > > 一种壳聚糖多孔止血海绵的制备方法.pdf

一种壳聚糖多孔止血海绵的制备方法.pdf

上传人：一****

文档编号：8468437

上传时间：2020-07-07

格式：PDF

页数：6

大小：261.92KB

《一种壳聚糖多孔止血海绵的制备方法.pdf》由会员分享，可在线阅读，更多相关《一种壳聚糖多孔止血海绵的制备方法.pdf（6页完整版）》请在专利查询网上搜索。

1、(19)中华人民共和国国家知识产权局 (12)发明专利 (10)授权公告号 (45)授权公告日 (21)申请号 201510990788.X (22)申请日 2015.12.25 (65)同一申请的已公布的文献号申请公布号 CN 105536029 A (43)申请公布日 2016.05.04 (73)专利权人蓝广芊地址 400716 重庆市北碚区天生路216号西南大学纺织服装学院 (72)发明人蓝广芊卢必涛代方银陈景浩余堃刘佳伟 (74)专利代理机构北京轻创知识产权代理有限公司 11212 代理人乐珠秀 (51)Int.Cl. A61L 15/28(2006.01)。

2、 A61L 15/42(2006.01) (56)对比文件 CN 1775302 A,2006.05.24, CN 102416194 A,2012.04.18, CN 1485097 A,2004.03.31, CN 104874013 A,2015.09.02, 审查员郭翔 (54)发明名称一种壳聚糖多孔止血海绵的制备方法 (57)摘要本发明公开了一种壳聚糖多孔止血海绵的制备方法，包括以下步骤：步骤一，溶液的配制；步骤二，壳聚糖多孔止血海绵的制备，取壳聚糖溶液、明胶溶液和甘油溶液按照3 3 1的体积比在25水浴条件中充分搅拌混合，得到混合乳白色凝胶液，而后取。

3、氯化钙溶液加入，在25水浴条件中充分搅拌30min，再取单宁酸溶液加入，在 25水浴条件中继续搅拌20min，得到混合丹红色凝胶液，在得到的混合丹红色凝胶液中氯化钙溶液和单宁酸溶液分别占比0.5和0.01；取混合丹红色凝胶液，倒入模具中，预冻12h以上呈冰块状，再真空冷冻干燥48h后得到壳聚糖多孔止血海绵。有益效果是：制备简单，成品壳聚糖含量高、可自然降解、止血速度快、抗菌效果好等。权利要求书1页说明书4页 CN 105536029 B 2018.07.13 CN 105536029 B 1.一种壳聚糖多孔止血海绵的制备方法，其特征在于，包括。

4、以下步骤：步骤一，溶液的配制： 1)配制壳聚糖溶液，称取抗坏血酸加入到蒸馏水中，在4050水浴条件下充分搅拌溶解，制得0.05mol/L0.3mol/L的抗坏血酸溶液；量取醋酸加入到容量瓶中定容，制得体积百分浓度为0.10.5的醋酸溶液；称取壳聚糖加入到所述抗坏血酸溶液中，充分混合后，加入所述醋酸溶液，在4050水浴条件下搅拌均匀，得到质量百分浓度为5 8的壳聚糖溶液，保存使用，其中加入的所述醋酸溶液占总溶液的0.20.5； 2)配制明胶溶液，称取明胶加入到蒸馏水中，在4085水浴条件中充分溶解，制得质量百分浓度为0.54的明胶溶液， 3050下保存使。

5、用； 3)配制甘油溶液，称取甘油加入到蒸馏水中，搅拌均匀，制得质量百分浓度为40 50的甘油溶液，下保存使用； 4)配制氯化钙溶液，称取氯化钙加入到蒸馏水中，制得质量百分浓度为1030的氯化钙溶液，下保存使用； 5)配制交联剂，称取单宁酸加入到蒸馏水中，制得质量百分浓度为0.55的单宁酸溶液，保存使用；步骤二，壳聚糖多孔止血海绵的制备：取所述壳聚糖溶液、明胶溶液和甘油溶液按照3 3 1的体积比在2550水浴条件中充分搅拌混合，得到混合乳白色凝胶液，而后取所述氯化钙溶液加入，在2550水浴条件中充分搅拌30rnin120min，再取所述单宁酸溶液加入，。

6、在2550水浴条件中继续搅拌20min50min，得到混合丹红色凝胶液，在得到的所述混合丹红色凝胶液中所述氯化钙溶液和单宁酸溶液分别占比0.54和0.010.1；取所述混合丹红色凝胶液，倒入模具中，预冻12h以上呈冰块状，再真空冷冻干燥48h72h后得到壳聚糖多孔止血海绵。 2.根据权利要求1所述的一种壳聚糖多孔止血海绵的制备方法，其特征在于，步骤一所述容量瓶为100ml的容量瓶。 3.根据权利要求1或2所述的一种壳聚糖多孔止血海绵的制备方法，其特征在于，步骤一所述壳聚糖溶液、甘油溶液、氯化钙溶液和单宁酸溶液的保存使用温度环境均为30 40。 4.根据权利要。

7、求1或2所述的一种壳聚糖多孔止血海绵的制备方法，其特征在于，步骤一所述明胶溶液的保存使用温度环境为3050。 5.根据权利要求1或2所述的一种壳聚糖多孔止血海绵的制备方法，其特征在于，步骤二所述混合丹红色凝胶液的预冻温度环境为-20-80。权利要求书 1/1 页 2 CN 105536029 B 2 一种壳聚糖多孔止血海绵的制备方法技术领域 0001 本发明属于医用止血材料制备领域，具体是一种壳聚糖多孔止血海绵的制备方法。背景技术 0002 多年来，关于止血材料的研究越来越多，大都是天然产物可以体内降解的止血材料，比如纤维蛋白胶、粉末状胶原蛋白、明胶海。

8、绵，但是这些材料都存在一定的缺点，纤维蛋白胶来源于人或哺乳动物的血浆中，只限于局部应用，可能传染人或动物的血源性疾病；胶原蛋白作为一种异物，可能导致伤口发热和过敏；明胶海绵机械性能差，容易破裂。还有一些国外进口的止血材料，如速即纱，虽然止血效果好，但是价格昂贵，限制了其应用范围。因此，一种具有良好止血效果、较强抗菌性、较好的促伤口愈合能力以及可以在体内降解的止血材料十分重要。 0003 目前，以壳聚糖为主要成分作为止血材料具有广泛的研究和应用前景，其具有止血、抑菌、抗癌、降脂、增强免疫力等多种生理功能和良好的组织相容性和较高的生物活性，。

9、且无毒，无刺激，可以自然降解。许多研究者选择壳聚糖制备多孔止血材料，一般利用较低浓度的醋酸溶液溶解壳聚糖，通过冷冻干燥的方法获得。但壳聚糖的溶解度相对较低，只有 34。较低壳聚糖浓度的止血材料一方面影响止血材料的止血效果，另一方面影响止血材料的机械性能。除此之外，醋酸对人体有较大的刺激性，其作为溶解剂增加了材料使用的不安全性。为了提高材料的机械性能和生物安全性能，就需要选择合适的天然生物材料进行共混和选择无毒无害的交联剂进行交联，同时需要降低或者消除醋酸的在材料的含量。 0004 作为有效的多孔止血材料，选择合适的材料还是不够的，还需要将材料制备成。

10、具有特定孔结构，具有较强的吸水功能。一般制孔的方法有粒子溶出法、相分离法、冷冻干燥法、气体发泡法、烧结微球法等，但是如何选择合适的制孔方法，制备具有均匀孔径大小，高孔隙率的孔结构，且具有很好的亲水性和一定强度的材料，仍然是一个技术难题。发明内容 0005 本发明所要解决的技术问题是提供一种制备简单，成品壳聚糖含量高、可自然降解、止血速度快、抗菌效果好、无毒、无刺激、机械性能和生物安全性能好、孔径大小均匀、高孔隙率的壳聚糖多孔止血海绵的制备方法。 0006 本发明解决上述技术问题的技术方案如下：一种壳聚糖多孔止血海绵的制备方法，包括以下步。

11、骤： 0007 步骤一，溶液的配制： 0008 1)配制壳聚糖溶液，称取抗坏血酸加入到蒸馏水中，在4050水浴条件下充分搅拌溶解，制得0.05mol/L0.3mol/L的抗坏血酸溶液；量取醋酸加入到容量瓶中定容，制得体积百分浓度为0.10.5的醋酸溶液；称取壳聚糖加入到所述抗坏血酸溶液中，说明书 1/4 页 3 CN 105536029 B 3 充分混合后，加入所述醋酸溶液，在4050水浴条件下搅拌均匀，得到质量百分浓度为 58的壳聚糖溶液，保存使用，其中加入的所述醋酸溶液占总溶液的0.20.5； 0009 2)配制明胶溶液，称取明胶加入到蒸馏水中,在4085。

12、水浴条件中充分溶解，制得质量百分浓度为0.54的明胶溶液，保存使用； 0010 3)配制甘油溶液，称取甘油加入到蒸馏水中，搅拌均匀，制得质量百分浓度为40 50的甘油溶液，保存使用； 0011 4)配制氯化钙溶液，称取氯化钙加入到蒸馏水中，制得质量百分浓度为10 30的氯化钙溶液，保存使用； 0012 5)配制交联剂，称取单宁酸加入到蒸馏水中，制得质量百分浓度为0.55的单宁酸溶液，保存使用； 0013 步骤二，壳聚糖多孔止血海绵的制备： 0014 取所述壳聚糖溶液、明胶溶液和甘油溶液按照3 3 1的体积比在2550水浴条件中充分搅拌混合，得到混合乳白色凝胶液。

13、，而后取所述氯化钙溶液加入，在2550 水浴条件中充分搅拌30min120min，再取所述单宁酸溶液加入，在2550水浴条件中继续搅拌20min50min，得到混合丹红色凝胶液，在得到的所述混合丹红色凝胶液中所述氯化钙溶液和单宁酸溶液分别占比0.54和0.010.1；取所述混合丹红色凝胶液，倒入模具中，预冻12h以上呈冰块状，再真空冷冻干燥48h72h后得到壳聚糖多孔止血海绵。 0015 本发明的有益效果是：制备简单，成品壳聚糖含量高、可自然降解、止血速度快、抗菌效果好、无毒、无刺激、机械性能和安全性能好、孔径大小均匀(孔径为100 m200 m。

14、)、高孔隙率。 0016 优选地，步骤一所述容量瓶为100ml的容量瓶，便于少量所述醋酸溶液定容。 0017 优选地，步骤一所述壳聚糖溶液、甘油溶液、氯化钙溶液和单宁酸溶液的保存使用温度环境均为3040，确保所述壳聚糖溶液、甘油溶液、氯化钙溶液、单宁酸溶液的分子结构稳定性，利于壳聚糖多孔止血海绵的制备。 0018 优选地，步骤一所述明胶溶液的保存使用温度环境为3050，确保所述明胶溶液的分子结构稳定性，利于壳聚糖多孔止血海绵的制备。 0019 优选地，步骤二所述混合丹红色凝胶液的预冻温度环境为-20-80，确保所述混合丹红色凝胶液被冻结呈冰块状，利于。

15、得到壳聚糖多孔止血海绵。具体实施方式 0020 以下对本发明的原理和特征进行描述，所举实例只用于解释本发明，并非用于限定本发明的范围。 0021 实施例1，一种壳聚糖多孔止血海绵的制备方法，包括以下步骤： 0022 步骤一，溶液的配制： 0023 1)配制壳聚糖溶液，称取抗坏血酸加入到蒸馏水中，在4050水浴条件下充分搅拌溶解，制得0.05mol/L0.3mol/L的抗坏血酸溶液；量取醋酸加入到100ml容量瓶中定容，制得体积百分浓度为0.10.5的醋酸溶液；称取壳聚糖加入到抗坏血酸溶液中，充分混合后，加入醋酸溶液，在4050水浴条件下搅拌均匀，得到质量百。

16、分浓度为5 说明书 2/4 页 4 CN 105536029 B 4 8的壳聚糖溶液，保存使用，其中加入的醋酸溶液占总溶液的0.20.5； 0024 2)配制明胶溶液，称取明胶加入到蒸馏水中,在4085水浴条件中充分溶解，制得0.54的明胶溶液， 3050下保存使用； 0025 3)配制甘油溶液，称取甘油加入到蒸馏水中，搅拌均匀，制得4050的甘油溶液， 3040下保存使用； 0026 4)配制氯化钙溶液，称取氯化钙加入到蒸馏水中，制得1030的氯化钙溶液， 3040下保存使用； 0027 5)配制交联剂，称取单宁酸加入到蒸馏水中，制得0.55的单宁酸溶液， 30 。

17、40下保存使用； 0028 步骤二，壳聚糖多孔止血海绵的制备： 0029 取所述壳聚糖溶液、明胶溶液和甘油溶液按照3 3 1的体积比在25水浴条件中充分搅拌混合，得到混合乳白色凝胶液，而后取所述氯化钙溶液加入，在25水浴条件中充分搅拌60min，再取所述单宁酸溶液加入，在25水浴条件中继续搅拌50min，得到混合丹红色凝胶液，在得到的所述混合丹红色凝胶液中所述氯化钙溶液和单宁酸溶液分别占比 0.5和0.01；取所述混合丹红色凝胶液，倒入模具中，在-20温度条件下预冻12h呈冰块状，再真空冷冻干燥48h后得到壳聚糖多孔止血海绵。 0030 实施例2，一种壳聚糖。

18、多孔止血海绵的制备方法，包括以下步骤： 0031 步骤一与实施例1一致； 0032 步骤二，壳聚糖多孔止血海绵的制备： 0033 取所述壳聚糖溶液、明胶溶液和甘油溶液按照3 3 1的体积比在40水浴条件中充分搅拌混合，得到混合乳白色凝胶液，而后取所述氯化钙溶液加入，在40水浴条件中充分搅拌50min，再取所述单宁酸溶液加入，在40水浴条件中继续搅拌40min，得到混合丹红色凝胶液，在得到的所述混合丹红色凝胶液中所述氯化钙溶液和单宁酸溶液分别占比2 和0.05；取所述混合丹红色凝胶液，倒入模具中，在-50温度条件下预冻12h呈冰块状，再真空冷冻干燥60h后得到壳。

19、聚糖多孔止血海绵。 0034 实施例3，，一种壳聚糖多孔止血海绵的制备方法，包括以下步骤： 0035 步骤一与实施例1一致； 0036 步骤二，壳聚糖多孔止血海绵的制备： 0037 取所述壳聚糖溶液、明胶溶液和甘油溶液按照3 3 1的体积比在50水浴条件中充分搅拌混合，得到混合乳白色凝胶液，而后取所述氯化钙溶液加入，在50水浴条件中充分搅拌30min，再取所述单宁酸溶液加入，在50水浴条件中继续搅拌20min，得到混合丹红色凝胶液，在得到的所述混合丹红色凝胶液中所述氯化钙溶液和单宁酸溶液分别占比 0.4和0.1；取所述混合丹红色凝胶液，倒入模具中，在-80温。

20、度条件下预冻12h呈冰块状，再真空冷冻干燥72h后得到壳聚糖多孔止血海绵。 0038 实验案例1： 0039 以实施例1制得的多孔壳聚糖止血海绵进行耳动脉止血实验：将多孔壳聚糖止血海绵剪成30305mm规格备用，取新西兰实验大白兔，麻醉，固定在手术台上，剃去兔耳动脉上的毛，取左或右耳，在距耳尖7cm处割断耳动脉，擦去浮血，用多孔壳聚糖止血海绵轻轻压住，然后取200g重物压在止血海绵上，开始计时，对照选用市场销售的明胶海绵，与市场说明书 3/4 页 5 CN 105536029 B 5 销售的明胶海绵相比，止血时间缩短接近一倍。 0040 实验案例2：。

21、 0041 以实施例1制得的多孔壳聚糖止血海绵肝脏止血实验：将多孔壳聚糖止血海绵剪成30305mm规格备用，取新西实验兰大白兔，麻醉，固定在手术台上，剃去兔腹部的毛，在腹部中上肝脏部分，割大约4厘米长的伤口，取出肝脏，在肝脏上割1cm深， 1cm长的伤口，擦去肝脏表面浮血，用多孔壳聚糖止血海绵压住伤口，取100g重物压在止血海面上，开始计时，对照选用市场销售的明胶海绵，与市场销售的明胶海绵相比，止血时间缩短接近一倍。 0042 以上所述仅为本发明的较佳实施例，并不用以限制本发明，凡在本发明的精神和原则之内，所作的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。说明书 4/4 页 6 CN 105536029 B 6 。

摘要
申请专利号：	CN201510990788.X	申请日：	20151225
公开号：	CN105536029B	公开日：	20180713
当前法律状态：		有效性：	有效
法律详情：
IPC分类号：	A61L15/28,A61L15/42	主分类号：	A61L15/28,A61L15/42
申请人：	蓝广芊
发明人：	蓝广芊,卢必涛,代方银,陈景浩,余堃,刘佳伟
地址：	400716 重庆市北碚区天生路216号西南大学纺织服装学院
优先权：	CN201510990788A
专利代理机构：	北京轻创知识产权代理有限公司	代理人：	乐珠秀
PDF完整版下载：	PDF下载

内容摘要

本发明公开了一种壳聚糖多孔止血海绵的制备方法，包括以下步骤：步骤一，溶液的配制；步骤二，壳聚糖多孔止血海绵的制备，取壳聚糖溶液、明胶溶液和甘油溶液按照3∶3∶1的体积比在25℃水浴条件中充分搅拌混合，得到混合乳白色凝胶液，而后取氯化钙溶液加入，在25℃水浴条件中充分搅拌30min，再取单宁酸溶液加入，在25℃水浴条件中继续搅拌20min，得到混合丹红色凝胶液，在得到的混合丹红色凝胶液中氯化钙溶液和单宁酸溶液分别占比0.5％和0.01％；取混合丹红色凝胶液，倒入模具中，预冻12h以上呈冰块状，再真空冷冻干燥48h后得到壳聚糖多孔止血海绵。有益效果是：制备简单，成品壳聚糖含量高、可自然降解、止血速度快、抗菌效果好等。

权利要求书

1.一种壳聚糖多孔止血海绵的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：步骤一，溶液的配制：1)配制壳聚糖溶液，称取抗坏血酸加入到蒸馏水中，在40℃～50℃水浴条件下充分搅拌溶解，制得0.05mol/L～0.3mol/L的抗坏血酸溶液；量取醋酸加入到容量瓶中定容，制得体积百分浓度为0.1％～0.5％的醋酸溶液；称取壳聚糖加入到所述抗坏血酸溶液中，充分混合后，加入所述醋酸溶液，在40℃～50℃水浴条件下搅拌均匀，得到质量百分浓度为5％～8％的壳聚糖溶液，保存使用，其中加入的所述醋酸溶液占总溶液的0.2％～0.5％；2)配制明胶溶液，称取明胶加入到蒸馏水中，在40℃～85℃水浴条件中充分溶解，制得质量百分浓度为0.5％～4％的明胶溶液，30℃～50℃下保存使用；3)配制甘油溶液，称取甘油加入到蒸馏水中，搅拌均匀，制得质量百分浓度为40％～50％的甘油溶液，下保存使用；4)配制氯化钙溶液，称取氯化钙加入到蒸馏水中，制得质量百分浓度为10％～30％的氯化钙溶液，下保存使用；5)配制交联剂，称取单宁酸加入到蒸馏水中，制得质量百分浓度为0.5％～5％的单宁酸溶液，保存使用；步骤二，壳聚糖多孔止血海绵的制备：取所述壳聚糖溶液、明胶溶液和甘油溶液按照3∶3∶1的体积比在25℃～50℃水浴条件中充分搅拌混合，得到混合乳白色凝胶液，而后取所述氯化钙溶液加入，在25℃～50℃水浴条件中充分搅拌30rnin～120min，再取所述单宁酸溶液加入，在25℃～50℃水浴条件中继续搅拌20min～50min，得到混合丹红色凝胶液，在得到的所述混合丹红色凝胶液中所述氯化钙溶液和单宁酸溶液分别占比0.5％～4％和0.01％～0.1％；取所述混合丹红色凝胶液，倒入模具中，预冻12h以上呈冰块状，再真空冷冻干燥48h～72h后得到壳聚糖多孔止血海绵。 2.根据权利要求1所述的一种壳聚糖多孔止血海绵的制备方法，其特征在于，步骤一所述容量瓶为100ml的容量瓶。 3.根据权利要求1或2所述的一种壳聚糖多孔止血海绵的制备方法，其特征在于，步骤一所述壳聚糖溶液、甘油溶液、氯化钙溶液和单宁酸溶液的保存使用温度环境均为30℃～40℃。 4.根据权利要求1或2所述的一种壳聚糖多孔止血海绵的制备方法，其特征在于，步骤一所述明胶溶液的保存使用温度环境为30℃～50℃。 5.根据权利要求1或2所述的一种壳聚糖多孔止血海绵的制备方法，其特征在于，步骤二所述混合丹红色凝胶液的预冻温度环境为-20℃～-80℃。

说明书

技术领域

本发明属于医用止血材料制备领域，具体是一种壳聚糖多孔止血海绵的制备方法。

背景技术

多年来，关于止血材料的研究越来越多，大都是天然产物可以体内降解的止血材料，比如纤维蛋白胶、粉末状胶原蛋白、明胶海绵，但是这些材料都存在一定的缺点，纤维蛋白胶来源于人或哺乳动物的血浆中，只限于局部应用，可能传染人或动物的血源性疾病；胶原蛋白作为一种异物，可能导致伤口发热和过敏；明胶海绵机械性能差，容易破裂。还有一些国外进口的止血材料，如速即纱，虽然止血效果好，但是价格昂贵，限制了其应用范围。因此，一种具有良好止血效果、较强抗菌性、较好的促伤口愈合能力以及可以在体内降解的止血材料十分重要。

目前，以壳聚糖为主要成分作为止血材料具有广泛的研究和应用前景，其具有止血、抑菌、抗癌、降脂、增强免疫力等多种生理功能和良好的组织相容性和较高的生物活性，且无毒，无刺激，可以自然降解。许多研究者选择壳聚糖制备多孔止血材料，一般利用较低浓度的醋酸溶液溶解壳聚糖，通过冷冻干燥的方法获得。但壳聚糖的溶解度相对较低，只有3％～4％。较低壳聚糖浓度的止血材料一方面影响止血材料的止血效果，另一方面影响止血材料的机械性能。除此之外，醋酸对人体有较大的刺激性，其作为溶解剂增加了材料使用的不安全性。为了提高材料的机械性能和生物安全性能，就需要选择合适的天然生物材料进行共混和选择无毒无害的交联剂进行交联，同时需要降低或者消除醋酸的在材料的含量。

作为有效的多孔止血材料，选择合适的材料还是不够的，还需要将材料制备成具有特定孔结构，具有较强的吸水功能。一般制孔的方法有粒子溶出法、相分离法、冷冻干燥法、气体发泡法、烧结微球法等，但是如何选择合适的制孔方法，制备具有均匀孔径大小，高孔隙率的孔结构，且具有很好的亲水性和一定强度的材料，仍然是一个技术难题。

发明内容

本发明所要解决的技术问题是提供一种制备简单，成品壳聚糖含量高、可自然降解、止血速度快、抗菌效果好、无毒、无刺激、机械性能和生物安全性能好、孔径大小均匀、高孔隙率的壳聚糖多孔止血海绵的制备方法。

本发明解决上述技术问题的技术方案如下：一种壳聚糖多孔止血海绵的制备方法，包括以下步骤：

步骤一，溶液的配制：

1)配制壳聚糖溶液，称取抗坏血酸加入到蒸馏水中，在40℃～50℃水浴条件下充分搅拌溶解，制得0.05mol/L～0.3mol/L的抗坏血酸溶液；量取醋酸加入到容量瓶中定容，制得体积百分浓度为0.1％～0.5％的醋酸溶液；称取壳聚糖加入到所述抗坏血酸溶液中，充分混合后，加入所述醋酸溶液，在40℃～50℃水浴条件下搅拌均匀，得到质量百分浓度为5％～8％的壳聚糖溶液，保存使用，其中加入的所述醋酸溶液占总溶液的0.2％～0.5％；

2)配制明胶溶液，称取明胶加入到蒸馏水中,在40℃～85℃水浴条件中充分溶解，制得质量百分浓度为0.5％～4％的明胶溶液，保存使用；

3)配制甘油溶液，称取甘油加入到蒸馏水中，搅拌均匀，制得质量百分浓度为40％～50％的甘油溶液，保存使用；

4)配制氯化钙溶液，称取氯化钙加入到蒸馏水中，制得质量百分浓度为10％～30％的氯化钙溶液，保存使用；

5)配制交联剂，称取单宁酸加入到蒸馏水中，制得质量百分浓度为0.5％～5％的单宁酸溶液，保存使用；

步骤二，壳聚糖多孔止血海绵的制备：

取所述壳聚糖溶液、明胶溶液和甘油溶液按照3∶3∶1的体积比在25℃～50℃水浴条件中充分搅拌混合，得到混合乳白色凝胶液，而后取所述氯化钙溶液加入，在25℃～50℃水浴条件中充分搅拌30min～120min，再取所述单宁酸溶液加入，在25℃～50℃水浴条件中继续搅拌20min～50min，得到混合丹红色凝胶液，在得到的所述混合丹红色凝胶液中所述氯化钙溶液和单宁酸溶液分别占比0.5％～4％和0.01％～0.1％；取所述混合丹红色凝胶液，倒入模具中，预冻12h以上呈冰块状，再真空冷冻干燥48h～72h后得到壳聚糖多孔止血海绵。

本发明的有益效果是：制备简单，成品壳聚糖含量高、可自然降解、止血速度快、抗菌效果好、无毒、无刺激、机械性能和安全性能好、孔径大小均匀(孔径为100μm～200μm)、高孔隙率。

优选地，步骤一所述容量瓶为100ml的容量瓶，便于少量所述醋酸溶液定容。

优选地，步骤一所述壳聚糖溶液、甘油溶液、氯化钙溶液和单宁酸溶液的保存使用温度环境均为30℃～40℃，确保所述壳聚糖溶液、甘油溶液、氯化钙溶液、单宁酸溶液的分子结构稳定性，利于壳聚糖多孔止血海绵的制备。

优选地，步骤一所述明胶溶液的保存使用温度环境为30℃～50℃，确保所述明胶溶液的分子结构稳定性，利于壳聚糖多孔止血海绵的制备。

优选地，步骤二所述混合丹红色凝胶液的预冻温度环境为-20℃～-80℃，确保所述混合丹红色凝胶液被冻结呈冰块状，利于得到壳聚糖多孔止血海绵。

具体实施方式

以下对本发明的原理和特征进行描述，所举实例只用于解释本发明，并非用于限定本发明的范围。

实施例1，一种壳聚糖多孔止血海绵的制备方法，包括以下步骤：

步骤一，溶液的配制：

1)配制壳聚糖溶液，称取抗坏血酸加入到蒸馏水中，在40℃～50℃水浴条件下充分搅拌溶解，制得0.05mol/L～0.3mol/L的抗坏血酸溶液；量取醋酸加入到100ml容量瓶中定容，制得体积百分浓度为0.1％～0.5％的醋酸溶液；称取壳聚糖加入到抗坏血酸溶液中，充分混合后，加入醋酸溶液，在40℃～50℃水浴条件下搅拌均匀，得到质量百分浓度为5％～8％的壳聚糖溶液，保存使用，其中加入的醋酸溶液占总溶液的0.2％～0.5％；

2)配制明胶溶液，称取明胶加入到蒸馏水中,在40℃～85℃水浴条件中充分溶解，制得0.5％～4％的明胶溶液，30℃～50℃下保存使用；

3)配制甘油溶液，称取甘油加入到蒸馏水中，搅拌均匀，制得40％～50％的甘油溶液，30％～40℃下保存使用；

4)配制氯化钙溶液，称取氯化钙加入到蒸馏水中，制得10％～30％的氯化钙溶液，30％～40℃下保存使用；

5)配制交联剂，称取单宁酸加入到蒸馏水中，制得0.5％～5％的单宁酸溶液，30％～40℃下保存使用；

步骤二，壳聚糖多孔止血海绵的制备：

取所述壳聚糖溶液、明胶溶液和甘油溶液按照3∶3∶1的体积比在25℃水浴条件中充分搅拌混合，得到混合乳白色凝胶液，而后取所述氯化钙溶液加入，在25℃水浴条件中充分搅拌60min，再取所述单宁酸溶液加入，在25℃水浴条件中继续搅拌50min，得到混合丹红色凝胶液，在得到的所述混合丹红色凝胶液中所述氯化钙溶液和单宁酸溶液分别占比0.5％和0.01％；取所述混合丹红色凝胶液，倒入模具中，在-20℃温度条件下预冻12h呈冰块状，再真空冷冻干燥48h后得到壳聚糖多孔止血海绵。

实施例2，一种壳聚糖多孔止血海绵的制备方法，包括以下步骤：

步骤一与实施例1一致；

步骤二，壳聚糖多孔止血海绵的制备：

取所述壳聚糖溶液、明胶溶液和甘油溶液按照3∶3∶1的体积比在40℃水浴条件中充分搅拌混合，得到混合乳白色凝胶液，而后取所述氯化钙溶液加入，在40℃水浴条件中充分搅拌50min，再取所述单宁酸溶液加入，在40℃水浴条件中继续搅拌40min，得到混合丹红色凝胶液，在得到的所述混合丹红色凝胶液中所述氯化钙溶液和单宁酸溶液分别占比2％和0.05％；取所述混合丹红色凝胶液，倒入模具中，在-50℃温度条件下预冻12h呈冰块状，再真空冷冻干燥60h后得到壳聚糖多孔止血海绵。

实施例3，，一种壳聚糖多孔止血海绵的制备方法，包括以下步骤：

步骤一与实施例1一致；

步骤二，壳聚糖多孔止血海绵的制备：

取所述壳聚糖溶液、明胶溶液和甘油溶液按照3∶3∶1的体积比在50℃水浴条件中充分搅拌混合，得到混合乳白色凝胶液，而后取所述氯化钙溶液加入，在50℃水浴条件中充分搅拌30min，再取所述单宁酸溶液加入，在50℃水浴条件中继续搅拌20min，得到混合丹红色凝胶液，在得到的所述混合丹红色凝胶液中所述氯化钙溶液和单宁酸溶液分别占比0.4％和0.1％；取所述混合丹红色凝胶液，倒入模具中，在-80℃温度条件下预冻12h呈冰块状，再真空冷冻干燥72h后得到壳聚糖多孔止血海绵。

实验案例1：

以实施例1制得的多孔壳聚糖止血海绵进行耳动脉止血实验：将多孔壳聚糖止血海绵剪成30×30×5mm规格备用，取新西兰实验大白兔，麻醉，固定在手术台上，剃去兔耳动脉上的毛，取左或右耳，在距耳尖7cm处割断耳动脉，擦去浮血，用多孔壳聚糖止血海绵轻轻压住，然后取200g重物压在止血海绵上，开始计时，对照选用市场销售的明胶海绵，与市场销售的明胶海绵相比，止血时间缩短接近一倍。

实验案例2：

以实施例1制得的多孔壳聚糖止血海绵肝脏止血实验：将多孔壳聚糖止血海绵剪成30×30×5mm规格备用，取新西实验兰大白兔，麻醉，固定在手术台上，剃去兔腹部的毛，在腹部中上肝脏部分，割大约4厘米长的伤口，取出肝脏，在肝脏上割1cm深，1cm长的伤口，擦去肝脏表面浮血，用多孔壳聚糖止血海绵压住伤口，取100g重物压在止血海面上，开始计时，对照选用市场销售的明胶海绵，与市场销售的明胶海绵相比，止血时间缩短接近一倍。

以上所述仅为本发明的较佳实施例，并不用以限制本发明，凡在本发明的精神和原则之内，所作的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。