蜂毒肽在制备治疗和/或预防糖尿病的药物或保健品中的用途.pdf

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1、(19)中华人民共和国国家知识产权局 (12)发明专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请号 201711086519.6 (22)申请日 2017.11.07 (71)申请人 江苏省中医药研究院 地址 210028 江苏省南京市十字街100号 申请人 南京大学 (72)发明人 曹鹏 薛斌 齐雅玲 叶娟 (74)专利代理机构 南京经纬专利商标代理有限 公司 32200 代理人 汪丽红 (51)Int.Cl. A61K 38/17(2006.01) A61P 3/10(2006.01) (54)发明名称 蜂毒肽在制备治疗和/或预防糖尿病的药物 或保健品中的用途 (57)摘要。

2、 本发明属于生物医药领域， 具体涉及蜂毒肽 (英文名称Melittin)在制备治疗和/或预防糖尿 病的药物或保健品中的用途。 经动物实验证明， 本发明涉及的蜂毒肽具有显著的抗糖尿病效果， 具体表现为， 该蜂毒肽能够有效促进胰岛素分 泌， 从而起到长效降低血糖的作用， 表现为按一 定频率给药一段时间停药后， 仍然能长时间维持 低血糖， 可以长期改善II型糖尿病。 本发明为目 前抗糖尿病药物提供了一种全新的选择和思路， 具有潜在的临床应用前景。 权利要求书1页 说明书4页 附图2页 CN 109276704 A 2019.01.29 CN 109276704 A 1.蜂毒肽在制备治疗和/或预防糖尿。

3、病的药物或保健品中的用途。 2.根据权利要求1所述的用途， 其特征在于， 所述药物或保健品包含蜂毒肽及药学上可 接受的载体。 3.根据权利要求2所述的用途， 其特征在于， 所述蜂毒肽为人工合成。 4.根据权利要求2所述的用途， 其特征在于， 所述药学上可接受的载体包括离子交换材 料、 氧化铝、 硬脂酸铝、 卵磷脂、 自乳化药物传递系统(SEDDS)如d-维生素E聚乙二醇1000琥 珀酸酯、 吐温或其他类似聚合介质等药物制剂用的表面活性剂、 血清蛋白如人血清白蛋白、 缓冲物质如磷酸盐、 氨基乙酸、 山梨酸、 山梨酸钾、 饱和植物脂肪酸部分甘油酯混合、 水、 盐、 电解质如硫酸盐精蛋白、 磷酸氢二。

4、钠、 磷酸氢钾、 氯化钠、 锌盐、 硅胶、 硅酸镁等。 聚乙烯吡咯 酮、 纤维素物质、 聚乙烯醇、 羧甲基纤维素钠、 聚丙烯酸酯、 乙烯-聚氧乙烯-嵌段聚合物和羊 毛脂、 环糊精如 -、 -、 -环糊精或其经化学修饰的衍生物如2-和3-羟丙基- -环糊精等羟 烷基环糊精及其可溶性衍生物。 5.根据权利要求2所述的用途， 其特征在于， 所述药物或保健品进一步包含药用辅料， 包括填充剂(如无水乳糖、 淀粉、 乳糖珠粒和葡萄糖)、 粘合剂(如微晶纤维素)、 崩解剂(如交 联羧甲基淀粉钠、 交联羧甲基纤维素钠、 低取代羟丙基纤维素和交联PVP)、 润滑剂(如硬脂 酸镁)、 吸收促进剂、 香味剂、 甜味。

5、剂、 稀释剂、 赋形剂、 润湿剂、 溶剂、 增溶剂和着色剂。 6.根据权利要求2所述的用途， 其特征在于， 所述药物或保健品的给药制剂包括注射 剂、 霜剂、 软膏剂、 贴剂、 喷雾剂。 7.根据权利要求1所述的用途， 其特征在于， 所述药物或保健品的给药途径包括皮下、 皮内、 动脉内、 静脉内、 肌内、 关节内、 滑液内、 胸骨内、 鞘内、 病灶内、 颅内注射或输注， 口服、 局部、 直肠、 经鼻、 经颊、 阴道、 舌下、 皮内、 粘膜、 气管、 尿道给药， 通过吸入气雾、 植入蓄积及 针刺方式给药。 8.根据权利要求1所述的用途， 其特征在于， 所述蜂毒肽的作用于胰岛血糖素样肽-1受 体。 。

6、9.根据权利要求8所述的用途， 其特征在于， 所述糖尿病为II型糖尿病。 权 利 要 求 书 1/1 页 2 CN 109276704 A 2 蜂毒肽在制备治疗和/或预防糖尿病的药物或保健品中的 用途 技术领域 0001 本发明属于生物医药领域， 具体涉及蜂毒肽(英文名称为Melittin)在制备治疗 和/或预防糖尿病的药物或保健品中的用途。 背景技术 0002 糖尿病是由多种病因引起的糖、 脂肪和蛋白质代谢紊乱的一种疾病， 临床主要表 现为高血糖， 典型病症为多食、 多饮、 多尿、 消瘦等。 其死亡率在发达国家仅次于心血管疾 病、 恶性肿瘤， 是目前医学界三大疑难疾病之一。 0003 从全球。

7、范围看， 糖尿病患者增长十分迅速， 世界卫生组织预测至2025年全球糖尿 病人数将突破3亿， 发病率也将由目前的2.8上升为4.4。 其中发展中国家糖尿病患者人 数将增长170， 远远高于发达国家的42。 这预示着截至2025年， 发展中国家糖尿病患者 所占的比例将超过全球糖尿病患者总数的75。 新增病例主要集中在中国、 印支次大陆及 非洲等发展中国家。 据不完全统计， 目前中国糖尿病患病人数居世界第二位， 近4.3人口 患有糖尿病。 我国糖尿病患病人群中， II型糖尿病占90以上， I型糖尿病约5， 城市妊娠 糖尿病接近5， 其他类型仅0.7。 中国糖尿病预防指南指出， 发达地区糖尿病患病率。

8、高于 不发达地区， 城市高于农村。 糖尿病严重威胁着人类的健康， 并存在扩大化和年轻化的倾 向， 如何防治糖尿病成为医药界重点关注的课题之一。 0004 目前， 糖尿病的治疗药物分为7类， 包括胰岛素及其类似物、 磺酰脲类、 双胍类、 葡 萄糖苷酶抑制剂、 噻唑烷二酮衍生物、 促胰岛素分泌剂、 中成药等。 在临床上， 根据糖尿病的 发展进程， 有严格的用药方案， 一般通常为两种药物以上协同进行治疗， 以减少毒副作用及 并发症的发生。 然而， 这些药物的组合在治疗糖尿病的应用中， 仍然存在一些不能应对的情 况。 0005 蜂毒肽占蜜蜂毒素干重的50左右， 是含有26个氨基酸的双极碱性多肽， 分子。

9、量 为2848Da， 可以由蜜蜂毒素提纯， 也可以通过人工合成。 二级结构中无二硫键， 而且侧链中 的氨基酸无交联。 实验证明， 蜂毒肽具有抗炎、 抗菌、 抗肿瘤、 镇痛和抑制血小板凝集等作 用， 对肝纤维化、 胆管炎和胆道纤维化、 类风湿性关节炎、 动脉粥样硬化、 胃癌、 乳腺癌等有 一定的疗效。 但是， 迄今为止， 未有关于蜂毒肽治疗糖尿病的报道。 发明人通过研究发现蜂 毒肽具有降低血糖、 升高胰岛素的作用， 特别是具有长效降低血糖的作用。 由此可见， 蜂毒 肽对糖尿病具有治疗和/或预防的作用， 可被用于制备治疗和/或预防糖尿病的药物或保健 品， 这为治疗和/或预防糖尿病提供了一种全新的选。

10、择和思路， 拓宽了治疗糖尿病药物的选 择领域。 发明内容 0006 本发明的目的在于提供蜂毒肽在生物医药领域的新用途， 具体涉及其在制备治疗 和/或预防糖尿病的药物或保健品中的用途。 说 明 书 1/4 页 3 CN 109276704 A 3 0007 其中， 所述药物或保健品可包含蜂毒肽及药学上可接受的载体； 0008 其中， 所述蜂毒肽可为人工合成。 0009 其中， 所述药学上可接受的载体可包括离子交换材料、 氧化铝、 硬脂酸铝、 卵磷脂、 自乳化药物传递系统(SEDDS)如d-维生素E聚乙二醇1000琥珀酸酯、 吐温或其他类似聚合介 质等药物制剂用的表面活性剂、 血清蛋白如人血清白蛋。

11、白、 缓冲物质如磷酸盐、 氨基乙酸、 山梨酸、 山梨酸钾、 饱和植物脂肪酸部分甘油酯混合、 水、 盐、 电解质如硫酸盐精蛋白、 磷酸 氢二钠、 磷酸氢钾、 氯化钠、 锌盐、 硅胶、 硅酸镁等。 聚乙烯吡咯酮、 纤维素物质、 聚乙烯醇、 羧 甲基纤维素钠、 聚丙烯酸酯、 乙烯-聚氧乙烯-嵌段聚合物和羊毛脂、 环糊精如 -、 -、 -环 糊精或其经化学修饰的衍生物如2-和3-羟丙基- -环糊精等羟烷基环糊精及其可溶性衍生 物。 0010 其中， 所述药物或保健品可进一步包含药用辅料， 包括填充剂(如无水乳糖、 淀粉、 乳糖珠粒和葡萄糖)、 粘合剂(如微晶纤维素)、 崩解剂(如交联羧甲基淀粉钠、 交。

12、联羧甲基纤 维素钠、 低取代羟丙基纤维素和交联PVP)、 润滑剂(如硬脂酸镁)、 吸收促进剂、 香味剂、 甜味 剂、 稀释剂、 赋形剂、 润湿剂、 溶剂、 增溶剂和着色剂等。 0011 其中， 所述药物或保健品的给药制剂可包括注射剂、 霜剂、 软膏剂、 贴剂、 喷雾剂 等。 0012 其中， 所述药物或保健品的给药途径可包括皮下、 皮内、 动脉内、 静脉内、 肌内、 关 节内、 滑液内、 胸骨内、 鞘内、 病灶内、 颅内注射或输注， 口服、 局部、 直肠、 经鼻、 经颊、 阴道、 舌下、 皮内、 粘膜、 气管、 尿道给药， 通过吸入气雾、 植入蓄积及针刺方式给药。 0013 其中， 所述蜂毒肽。

13、可以与其它药物联合给药。 0014 其中， 所述蜂毒肽可作用于胰岛血糖素样肽-1受体(GLP-1R)。 0015 其中， 所述糖尿病可为II型糖尿病。 0016 本发明的实施例构建了II型糖尿病小鼠模型， 并对其施用人工合成的蜂毒肽以探 究蜂毒肽对糖尿病的影响。 经实验验证， 本发明具有以下有益效果： (1)本发明涉及的蜂毒肽能够长效降低血糖和升高体内胰岛素， 具有防治糖尿病的活 性， 可用于进一步制备治疗和/或预防糖尿病的药物或保健品。 (2)为目前抗糖尿病药物提供了一种全新的选择和思路， 拓宽了抗糖尿病药物的选择 领域。 附图说明 0017 图1为II型糖尿病小鼠经不同浓度的蜂毒素腹腔注射。

14、后的血糖水平变化图； 0018 图2为对II型糖尿病小鼠蜂毒素持续腹腔注射蜂毒素一个月并停药两周后的血糖 水平变化图； 0019 图3为对II型糖尿病小鼠蜂毒素持续腹腔注射蜂毒素一个月并停药两周后血清中 胰岛素水平变化图。 0020 图4为不同浓度蜂毒肽作用MIN6细胞(小鼠 细胞系)后， GLP-1R下游ERK蛋白及其 磷酸化产物pERK的western blot结果图。 0021 图5为140nM蜂毒肽作用MIN6细胞(小鼠 细胞系)后， GLP-1R下游AKT蛋白及其磷酸 化产物p-AKT的western blot结果图。 说 明 书 2/4 页 4 CN 109276704 A 4 0。

15、022 其中，“*” 代表3mg/kg蜂毒肽组与糖尿病空白对照组比较的显著性差异， 且p 0.05；“*” 代表3mg/kg蜂毒肽组与糖尿病空白对照组比较的显著性差异， 且p0.01；“*” 代表3mg/kg蜂毒肽组与糖尿病空白对照组比较的显著性差异， 且p0.001；“#” 1mg/kg蜂毒 肽组与糖尿病空白对照组比较的显著性差异， 且p0.05。 具体实施方式 0023 下面结合实施例对本发明作进一步说明。 所举实施例是为了更好地对本发明的内 容进行说明， 但并不是本发明的内容仅限于所举实施例。 所以熟悉本领域的技术人员根据 上述发明内容对实施方案进行非本质的改进和调整， 仍属于本发明的保。

16、护范围。 0024 为了使本领域的技术人员更好的理解本发明的技术方案， 下面结合具体实施例对 本发明作进一步的详细说明。 0025 实施例1.蜂毒肽对II型糖尿病小鼠的血糖水平及血清中胰岛素水平的影响 0026 1.实验材料 0027 1.1蜂毒肽的准备 0028 采用化学合成纯度达98以上的蜂毒肽粉末。 将蜂毒肽粉末溶于双蒸水， 配制贮 藏浓度为1mg/ml的蜂毒肽溶液， 分装后冷冻保存备用。 使用时用双蒸水稀释成相应浓度。 0029 1.2实验动物 0030 4周龄II型糖尿病小鼠(C57Bksdb/db)及4周龄野生型健康小鼠。 0031 2.实验步骤 0032 将4周龄II型糖尿病小鼠。

17、随机分成三组实验组和一组糖尿病空白对照组， 向三组 实验组的小鼠腹腔内注射同体积的浓度分别为3mg/kg、 1mg/kg及0.3mg/kg的蜂毒肽， 向糖 尿病空白对照组的小鼠腹腔内注射同上体积的双蒸水。 同时设置一组正常(健康空白)对照 组(该组小鼠为4周龄野生型健康小鼠)， 向该组小鼠腹腔内注射同上体积的双蒸水。 将上述 注射蜂毒肽及双蒸水的时间是记为第0天， 之后每隔4天给药一次， 共给药7次， 持续28天， 分 别于给药后的第1天和第4天检测所有小鼠的血糖水平。 第4天血糖水平有回升后， 再次如第 0天给药的方式对各组小鼠分别注射蜂毒肽和双蒸水， 图示中箭头即为给药点， 同时每隔四 天。

18、对所有小鼠进行一次血糖水平检测。 最终停止给药两周后再次测量各组小鼠的血糖水平 和血清中胰岛素水平。 0033 3.实验结果 0034 如图1所示， 经腹腔注射浓度为1mg/kg及3mg/kg蜂毒肽的两实验组小鼠的血糖水 平均在第1天有显著下降， 由给药前的平均20mmol/L高血糖水平下降至平均10mmol/L水平， 与正常(健康空白)对照组小鼠的血糖水平基本一致。 第4天时发现1mg/kg及3mg/kg两个实 验组的小鼠的血糖水平分别略有回升至15mmol/L， 而随着时间推移糖尿病空白对照组小鼠 的血糖水平逐步攀升至25-30mmol/L， 此时经3mg/kg蜂毒肽给药的实验组小鼠的血糖。

19、水平 维持在15mmol/L， 且与糖尿病空白对照组小鼠的血糖水平有显著性差异； 经1mg/kg蜂毒肽 给药的实验组小鼠的血糖水平攀升至20mmol/L， 其与3mg/kg实验组也有显著性差异。 0035 如图2所示， 蜂毒肽持续给药一个月后停药20天， II型糖尿病实验组小鼠的血糖水 平仍保持在较低水平。 特别地， 经3mg/kg蜂毒肽给药的实验组小鼠的血糖水平优于阳性对 照药艾塞那肽。 说 明 书 3/4 页 5 CN 109276704 A 5 0036 如图3所示， 蜂毒肽持续给药一个月后停药两周， 1mg/kg及3mg/kg实验组小鼠的胰 岛素水平都显著高于糖尿病空白对照组小鼠及健康。

20、空白对照组小鼠。 0037 上述实验结果说明蜂毒肽能够(1)显著降低II型糖尿病小鼠的血糖水平， 且呈浓 度依赖性； (2)长效地使II型糖尿病小鼠的血糖维持在较低水平； 以及(3)显著提高II型糖 尿病小鼠的血清中的胰岛素水平。 0038 实施例2.蜂毒肽对MIN6细胞GLP-1R的影响 0039 1.实验材料 0040 1.1蜂毒肽的准备 0041 采用化学合成纯度达98以上的蜂毒肽粉末。 将蜂毒肽粉末溶于双蒸水， 配制贮 藏浓度为7mM的蜂毒肽溶液， 分装后冷冻保存备用。 使用时用双蒸水稀释成相应浓度。 0042 1.2实验细胞 0043 MIN6细胞(小鼠 细胞系) 0044 2.实验。

21、步骤 0045 以5106个/孔的密度将MIN6细胞接种至6孔板， 用不同浓度的蜂毒肽分别处理， 检测蜂毒肽对GLP-1R下游AKT蛋白及ERK蛋白的影响， 步骤如下： 1)用等体积20nM、 70nM、 140nM的蜂毒肽和10nM阳性对照药Exendin-4分别作用MIN6细 胞,37培养5分钟和40分钟， western blot检测下游ERK磷酸化水平； 2)用等体积140nM蜂毒肽和10nM阳性对照药Exendin-4分别作用MIN6细胞40分钟， western blot检测下游AKT磷酸化水平。 0046 3.实验结果 0047 如图4所示， 蜂毒肽增加了了GLP-1R下游ERK。

22、的磷酸化水平。 0048 如图5所示， 蜂毒肽增加了了GLP-1R下游ERK的磷酸化水平。 0049 上述实验说明， 蜂毒肽通过作用于GLP-1R受体发挥其降血糖的作用。 0050 以上实施例仅用以说明本发明的技术方案而非限制， 尽管参照较佳实施例对本发 明进行了详细说明， 本领域的普通技术人员应当理解， 可以对本发明的技术方案进行修改 或者等同替换， 而脱离本发明技术方案的宗旨和范围， 其均应涵盖在本发明的权利要求范 围当中。 说 明 书 4/4 页 6 CN 109276704 A 6 图1 图2 图3 说 明 书 附 图 1/2 页 7 CN 109276704 A 7 图4 图5 说 明 书 附 图 2/2 页 8 CN 109276704 A 8 。