技术领域
本发明涉及一种无毒性、生物相容性良好的稳定血红蛋白类制品中血红蛋 白分子的方法，具体涉及一种稳定血红蛋白氧载体样品的方法。
背景技术
血红蛋白类制品易于发生自身氧化，自身氧化的结果有二：一是血红蛋白 中铁卟啉环内的铁离子由二价氧化为三价，形成高铁血红蛋白，使血红蛋白失 去载氧性能。二是自身氧化所产生的自由基反应可直接损伤血红蛋白分子，造 成血红蛋白分子的降解。因此，血红蛋白类氧载体的体外保存期很短。
抗氧化剂的应用有可能解决这类问题，但目前尚未有关报道。
坏血酸或坏血酸盐是食品中常用的抗氧化剂，通常可用于低温或常温中食 品的保存。目前抗氧化剂的使用、研究主要是关注其可抑制氧化反应，即抑制 氧化物生成的特性，尚未发现有关温度对抗氧化剂的抗氧化效应影响的报道。
发明内容
本发明的目的在于提供一种稳定血红蛋白氧载体样品的方法，其解决了背 景技术中血红蛋白类氧载体的体外保存期很短的技术问题。
本发明的技术解决方案是：
一种稳定血红蛋白氧载体样品的方法，其特殊之处在于：该方法的实现步 骤如下
1)取抗氧化剂的晶体或溶液，加至血红蛋白类制品溶液中；
2)使血红蛋白类制品溶液中血红蛋白的终浓度至少为0.5％；
3)使血红蛋白类制品溶液中抗氧化剂的终浓度至少为10μg/ml；
4)所述的抗氧化剂为坏血酸或坏血酸盐，或所述的抗氧化剂为谷胱甘肽， 或所述的抗氧化剂为坏血酸或坏血酸盐与谷胱甘肽的混合物；
5)所述血红蛋白类制品溶液中的血红蛋白是以去氧状态存在，且去氧血红 蛋白含量占80％以上。
上述血红蛋白类制品溶液中血红蛋白的终浓度以0.5％～18％为宜。
上述坏血酸或坏血酸盐或和谷胱甘肽溶液的配制，是将坏血酸或坏血酸盐 或和谷胱甘肽加至水溶液或缓冲液系统中，以机械搅拌溶解为宜。
上述血红蛋白可以是动物或用基因工程表达的未修饰的血红蛋白、或化学 修饰的血红蛋白等；所述的血红蛋白可以是聚乙二醇修饰的血红蛋白或血红蛋 白聚合体等。
上述抗氧化剂为坏血酸或坏血酸盐时，该坏血酸或坏血酸盐在血红蛋白溶 液中的终浓度以至少为10μg/ml为宜。
上述坏血酸或坏血酸盐在血红蛋白溶液中的终浓度以10-120μg/ml为
上述抗氧化剂为谷胱甘肽时，该谷胱甘肽在血红蛋白溶液中的终浓度以至 少为50μg/ml为宜。
上述谷胱甘肽在血红蛋白溶液中的终浓度以50-750μg/ml为佳。
上述抗氧化剂为坏血酸或坏血酸盐和谷胱甘肽时，所述的坏血酸或坏血酸 盐在血红蛋白溶液中的终浓度以至少为30μg/ml为宜；所述的谷胱甘肽在血红 蛋白溶液中的终浓度以至少为100μg/ml为宜。
上述抗氧化剂为坏血酸或坏血酸盐和谷胱甘肽时，坏血酸或坏血酸盐在红 蛋白溶液中的终浓度以30-100μg/ml为佳；所述的谷胱甘肽在血红蛋白溶液中 的终浓度以100-950μg/ml为佳。
本发明具有以下优点：
1本发明利用抗氧化机制，稳定溶液中的血红蛋白，使血红蛋白类制品可在 低温或室温条件下长期保存。保存期至少可达三年以上。
2坏血酸或坏血酸盐、谷胱甘肽均是常用的抗氧化剂，是动物或人体内、或 者可在动物或人体内使用的天然抗氧化物质，具有良好的水溶性，对机体无毒 性作用。因此，本发明是一种无毒性、生物相容性良好的稳定血红蛋白类制品 中血红蛋白分子的方法。
3本发明的坏血酸或坏血酸盐和谷胱甘肽可使已氧化的物质还原，即：使氧 化反应逆转。
4可根据血红蛋白类制品溶液的保存、使用温度，选取最佳效果的抗氧化剂， 从而可有效抑制血红蛋白类制品的自身氧化，稳定其蛋白质结构。
具体实施方式
本发明是将坏血酸或坏血酸盐或和谷胱甘肽按一定比例加入血红蛋白 类制品中，使其在4～8℃或室温条件下产生特殊的抗氧化性能，抑制血红 蛋白的自身氧化及由此产生的自由基反应，达到维护血红蛋白长期稳定的 结果。
实现本发明的主要步骤：
1.取抗氧化剂的晶体或较高浓度的溶液。
抗氧化剂可单独使用坏血酸或坏血酸盐、单独使用谷胱甘肽或同时使用坏 血酸或坏血酸盐和谷胱甘肽晶体，或单独使用坏血酸或坏血酸盐、单独使用谷 胱甘肽或同时使用坏血酸或坏血酸盐和谷胱甘肽溶液。
坏血酸或坏血酸盐和谷胱甘肽均应在化学纯以上纯度级别。坏血酸或坏血 酸盐和谷胱甘肽溶液的配制，可将坏血酸或坏血酸盐或和谷胱甘肽溶解于水溶 液或任何缓冲液系统，且以机械搅拌溶解为宜。
2.加至血红蛋白类制品溶液中，使溶液中坏血酸或坏血酸盐或和谷胱甘肽 与血红蛋白达到一定终浓度。
血红蛋白可来自各种动物或用基因工程表达的产物，可以是未修饰血红蛋 白、各种化学修饰血红蛋白包括聚乙二醇修饰的血红蛋白，和各种血红蛋白聚 合体。
溶液中血红蛋白的终浓度可在0.5％以上，一般在0.5％～18％或更高。
本发明实验结果表明：坏血酸或坏血酸盐、谷胱甘肽抗氧化作用的程度和 性质会随温度的不同而变化。
坏血酸或坏血酸盐对血红蛋白类制品自身氧化作用的影响呈两重性：
1)在摄氏4～8℃时，坏血酸或坏血酸盐可在短期内，如几天内，较好地抑 制溶液中高铁血红蛋白的形成，甚至可使氧化的血红蛋白还原。但是，随着时 间的延长，溶液中的高铁血红蛋白会逐渐增多，即坏血酸或坏血酸盐的抗氧化 作用会逐渐减弱。
2)在温度高于摄氏10℃时，坏血酸或坏血酸盐会促进高铁血红蛋白的形成， 即坏血酸或坏血酸盐促进氧化的作用。
本发明实验结果还表明：
1)在摄氏4～8℃时，谷胱甘肽作为抗氧化剂的效果较弱。
2)在摄氏10～25℃时，谷胱甘肽作为抗氧化剂的效果最佳。
储存时，溶液中血红蛋白必须主要是以去氧状态存在，去氧血红蛋白含量 应占80％以上。并且最终制剂应在避光条件下保存。
本发明实施例1：
在摄氏4～10℃时，单独使用坏血酸或坏血酸盐作抗氧化剂，加至血红蛋白 溶液中；使坏血酸或坏血酸盐在血红蛋白溶液中的终浓度在10μg/ml以上，以 10～120μg/ml为宜，还可至120μg/ml以上。
本发明实施例2：
在摄氏10～25℃时，单独使用谷胱甘肽作抗氧化剂，加至血红蛋白溶液中； 使谷胱甘肽在血红蛋白溶液中的终浓度在50μg/ml以上，以50～750μg/ml为宜， 还可至750μg/ml以上。
本发明实施例3：
在摄氏4℃～25℃时，同时使用坏血酸或坏血酸盐和谷胱甘肽作抗氧化剂， 加至血红蛋白溶液中；使坏血酸或坏血酸盐在红蛋白溶液中的终浓度在30μg/ml 以上，以30-100μg/ml为宜，还可至100μg/ml；使谷胱甘肽在血红蛋白溶液中 的终浓度在100μg/ml以上，以100-950μg/ml为宜，还可至950μg/ml。
本发明的用途：
1.用于氧化物的还原：加入抗氧化剂，使溶液中已生成的氧化物还原，增 加还原态减少氧化态。例如：加入抗氧化剂后使血红蛋白溶液中已形成的高铁 血红蛋白含量减少。
2.用于防止目标物的氧化：加入抗氧化剂，以抑制目标物分子的氧化。尽 量保持目标物以还原态存在。例如：加入上述抗氧化剂后使血红蛋白溶液中还 原血红蛋白分子不容易自身氧化、不容易形成高铁血红蛋白。
3.用于防止目标物的降解：加入抗氧化剂，抑制目标物分子的化学降解。 例如：加入上述抗氧化剂后使血红蛋白溶液中抑制血红蛋白的降解。