技术领域
本发明属于制药领域，涉及一种利多卡因醇质体的制备方法。
背景技术
药物经皮传递系统(Transdermal drug delivery system，TDDS)，是药物通过皮肤被吸 收的一种给药方法，药物应用于皮肤上后，穿过角质层，扩散通过皮肤，由毛细血管吸收 进入体循环。醇质体(Ethosomes)是一种新型的具有囊泡结构的经皮给药载体，含有高浓 度低分子量的醇，如乙醇、丙二醇、异丙醇等。醇质体不仅结构稳定，可促进药物的透皮 吸收，且该类脂质体能传递药物到达皮肤深层，并且能够透过皮肤进入血液循环，甚至可 以实现细胞间的传递，是一个高效的透皮载体。其机制可能是低分子量醇一方面改变了角 质层脂质分子的紧密排列，增强了脂质流动性，使药物易于穿透；另一方面增强了含醇脂 质体膜的柔性和流动性，使含醇脂质体在传递过程中易发生变形，透过紊乱的角质层所致。 作为一种经皮给药载体醇质体，具有其独特的优点，如避免首关效应、减少给药次数、延 长给药间隔、维持恒定有效的血药浓度、防止血药浓度高峰引起的毒副作用，而且使用方 便，上述优点使得醇质体在生物和化学药品的透皮制剂和相关产品的开发方面前景广阔。
利多卡因是酰胺类局部麻醉药，具有起效快、黏膜穿透迅速。扩散性强、作用时间强 等特点，但毒性也较大。在肝内代谢的去乙基代谢产物(单乙基甘氨酰胺二甲苯)，仍具有 局麻性能，毒性加大，再经酰胺酶进一步降解随尿排出，用量的10％则以原形排出。鉴于 利多卡因在临床上引起的不良反应，将其制备成醇质体可具有起效快、皮肤刺激性小，无 致敏且局麻效果好等优点。
李富利等人在《利多卡因脂质体的组分研究及其包封率测定》一文中记录了采用超声 注入法制备的5％利多卡因醇质体的最佳组方为：5％的利多卡因、35％的无水乙醇、5％ 蛋黄卵磷脂、0.2％的胆固醇及54.8％的超纯水。所制备的5％利多卡因醇质体的包封 率为(52.85±0.36)％，包封率偏低。
发明内容
本发明的目的在于提供一种利多卡因醇质体的制备方法。
为了实现上述目的，本发明采用的技术方案是：
一种利多卡因醇质体的制备方法，包括以下步骤：
(1)将重量比为1∶(0.33-1)的卵磷脂和利多卡因加入其7.5-11倍量的体积分数为 30％-50％的乙醇中，搅拌使其初溶，并超声促溶，直至形成均匀的乳白色混悬 液；
(2)将上述混悬液转入圆底烧瓶中，瓶口密闭，置于磁力搅拌器上，设温度为30℃ -40℃，转速为25-35r/min，密闭条件下搅拌均匀，边搅拌边加入卵磷脂和利多 卡因11-16倍量的pH＝7.0的PBS缓冲溶液，之后继续搅拌均匀；
(3)在冰浴条件下超声处理1-3min，最后过滤，即得利多卡因醇质体。
所述的利多卡因醇质体的制备方法，包括以下步骤：
(1)将重量比为1∶1的卵磷脂和利多卡因加入其7.5倍量的体积分数为40％的乙醇 中，搅拌使其初溶，并超声促溶，直至形成均匀的乳白色混悬液；
(2)将上述混悬液转入圆底烧瓶中，瓶口密闭，置于磁力搅拌器上，设温度为40℃， 转速为30r/min，密闭条件下搅拌均匀，边搅拌边加入卵磷脂和利多卡因11倍 量的pH 7.0的PBS缓冲溶液，之后继续搅拌均匀；
(3)在冰浴条件下超声处理3min，最后过滤膜，即得利多卡因醇质体。
步骤(2)中以细流状注入PBS缓冲溶液。
步骤(3)中超声功率为200W，超声5s，停3s。
步骤(3)中滤膜孔径是0.40到0.50μm。
本发明具有以下优点：(1)制备方法工艺简便，稳定性良好，易于产业化，具有较大 推广价值；采用处方简单，省去了胆固醇这一组分，卵磷脂的成膜性更好更稳定。(2)制 得的利多卡因醇质体包封率高，优化工艺包封率平均为79.60％，最高可达80.93％。(3) 皮肤刺激性试验证明利多卡因醇质体与皮肤亲和性好，受药部位无红斑、水肿等异常现象； 豚鼠外观体征、行为活动、进食、排泄均正常，体重增长正常；未出现咳嗽、抽搐等过敏 反应；从给药至观察期结束，全部豚鼠情况良好，无一死亡。(4)利多卡因醇质体具有强 效促渗作用，可以显著提高利多卡因的药物渗透量，有望被开发为新型的高效透皮外用局 麻药。
具体实施方式
下面结合具体实施例，进一步阐述本发明。
实施例1：本实施例利多卡因醇质体的制备方法包括如下步骤：
(1)将0.3g卵磷脂和0.1g利多卡因加入4.5ml体积分数为30％的乙醇中，搅拌使 其初溶，并超声促溶，直至形成均匀的乳白色混悬液；
(2)将上述混悬液转入圆底烧瓶中，瓶口密闭，置于磁力搅拌器上，设温度为30℃， 转速为25r/min，密闭条件下搅拌均匀，边搅拌边以细流状注入6.5ml pH 7.0的 PBS缓冲溶液，之后继续搅拌均匀；
(3)在冰浴条件下超声处理1min(超声功率为200W，超声5s，停3s)，最后过滤， 滤膜孔径为0.40μm，即得利多卡因醇质体。
测定包封率：将醇质体10mL置于10mL离心管中，再取1mL醇质体，用2mL甲醇 破坏醇质体，分别以8000r/min低温超速离心30min，分离上清液和沉淀物，用高效液相测 定上清液的浓度c1，c2。并按下述公式计算包封率：EE＝(1-c1/3c2)×100％。
本实施例制得的利多卡因醇质体的包封率是43.51％。
实施例2：本实施例利多卡因醇质体的制备方法包括如下步骤：
(1)将0.3g卵磷脂和0.1g利多卡因加入4.5ml体积分数为40％的乙醇中，搅拌使 其初溶，并超声促溶，直至形成均匀的乳白色混悬液；
(2)将上述混悬液转入圆底烧瓶中，瓶口密闭，置于磁力搅拌器上，设温度为35℃， 转速为30r/min，密闭条件下搅拌均匀，边搅拌边以细流状注入6.5ml pH 7.0的PBS 缓冲溶液，之后继续搅拌均匀；
(3)在冰浴条件下超声处理2min(超声功率为200W，超声5s，停3s)，最后过滤， 滤膜孔径为0.45μm，即得利多卡因醇质体。
测定包封率：方法同实施例1
本实施例制得的利多卡因醇质体的包封率是58.44％。
实施例3：本实施例利多卡因醇质体的制备方法包括如下步骤：
(1)将0.3g卵磷脂和0.1g利多卡因加入4.5ml体积分数为50％的乙醇中，搅拌使 其初溶，并超声促溶，直至形成均匀的乳白色混悬液；
(2)将上述混悬液转入圆底烧瓶中，瓶口密闭，置于磁力搅拌器上，设温度为40℃， 转速为35r/min，密闭条件下搅拌均匀，边搅拌边以细流状注入6.5ml pH 7.0的PBS 缓冲溶液，之后继续搅拌均匀；
(3)在冰浴条件下超声处理3min(超声功率为200W，超声5s，停3s)，最后过滤， 滤膜孔径为0.50μm，即得利多卡因醇质体。
测定包封率：方法同实施例1
本实施例制得的利多卡因醇质体的包封率是53.77％。
实施例4：本实施例利多卡因醇质体的制备方法包括如下步骤：
(1)将0.3g卵磷脂和0.15g利多卡因加入4.5ml体积分数为30％的乙醇中，搅拌使 其初溶，并超声促溶，直至形成均匀的乳白色混悬液；
(2)将上述混悬液转入圆底烧瓶中，瓶口密闭，置于磁力搅拌器上，设温度为35℃， 转速为25r/min，密闭条件下搅拌均匀，边搅拌边以细流状注入6.5ml pH 7.0的PBS 缓冲溶液，之后继续搅拌均匀；
(3)在冰浴条件下超声处理3min(超声功率为200W，超声5s，停3s)，最后过滤， 滤膜孔径为0.45μm，即得利多卡因醇质体。
测定包封率：方法同实施例1
本实施例制得的利多卡因醇质体的包封率是70.39％。
实施例5：本实施例利多卡因醇质体的制备方法包括如下步骤：
(1)将0.3g卵磷脂和0.15g利多卡因加入4.5ml体积分数为40％的乙醇中，搅拌使 其初溶，并超声促溶，直至形成均匀的乳白色混悬液；
(2)将上述混悬液转入圆底烧瓶中，瓶口密闭，置于磁力搅拌器上，设温度为40℃， 转速为30r/min，密闭条件下搅拌均匀，边搅拌边以细流状注入6.5ml pH 7.0的PBS 缓冲溶液，之后继续搅拌均匀；
(3)在冰浴条件下超声处理1min(超声功率为200W，超声5s，停3s)，最后过滤， 滤膜孔径为0.45μm，即得利多卡因醇质体。
测定包封率：方法同实施例1
本实施例制得的利多卡因醇质体的包封率是72.23％。
实施例6：本实施例利多卡因醇质体的制备方法包括如下步骤：
(1)将0.3g卵磷脂和0.15g利多卡因加入4.5ml体积分数为50％的乙醇中，搅拌使 其初溶，并超声促溶，直至形成均匀的乳白色混悬液；
(2)将上述混悬液转入圆底烧瓶中，瓶口密闭，置于磁力搅拌器上，设温度为30℃， 转速为35r/min，密闭条件下搅拌均匀，边搅拌边以细流状注入6.5ml pH 7.0的PBS 缓冲溶液，之后继续搅拌均匀；
(3)在冰浴条件下超声处理2min(超声功率为200W，超声5s，停3s)，最后过滤， 滤膜孔径为0.45μm，即得利多卡因醇质体。
测定包封率：方法同实施例1
本实施例制得的利多卡因醇质体的包封率是64.42％。
实施例7：本实施例利多卡因醇质体的制备方法包括如下步骤：
(1)将0.3g卵磷脂和0.3g利多卡因加入4.5ml体积分数为30％的乙醇中，搅拌使 其初溶，并超声促溶，直至形成均匀的乳白色混悬液；
(2)将上述混悬液转入圆底烧瓶中，瓶口密闭，置于磁力搅拌器上，设温度为40℃， 转速为25r/min，密闭条件下搅拌均匀，边搅拌边以细流状注入6.5ml pH 7.0的PBS 缓冲溶液，之后继续搅拌均匀；
(3)在冰浴条件下超声处理2min(超声功率为200W，超声5s，停3s)，最后过滤， 滤膜孔径为0.45μm，即得利多卡因醇质体。
测定包封率：方法同实施例1
本实施例制得的利多卡因醇质体的包封率是76.44％。
实施例8：本实施例利多卡因醇质体的制备方法包括如下步骤：
(1)将0.3g卵磷脂和0.3g利多卡因加入4.5ml体积分数为40％的乙醇中，搅拌使 其初溶，并超声促溶，直至形成均匀的乳白色混悬液；
(2)将上述混悬液转入圆底烧瓶中，瓶口密闭，置于磁力搅拌器上，设温度为30℃， 转速为30r/min，密闭条件下搅拌均匀，边搅拌边以细流状注入6.5ml pH 7.0的PBS 缓冲溶液，之后继续搅拌均匀；
(3)在冰浴条件下超声处理3min(超声功率为200W，超声5s，停3s)，最后过滤， 滤膜孔径为0.45μm，即得利多卡因醇质体。
测定包封率：方法同实施例1
本实施例制得的利多卡因醇质体的包封率是78.90％。
实施例9：本实施例利多卡因醇质体的制备方法包括如下步骤：
(1)将0.3g卵磷脂和0.3g利多卡因加入4.5ml体积分数为50％的乙醇中，搅拌使 其初溶，并超声促溶，直至形成均匀的乳白色混悬液；
(2)将上述混悬液转入圆底烧瓶中，瓶口密闭，置于磁力搅拌器上，设温度为35℃， 转速为35r/min，密闭条件下搅拌均匀，边搅拌边以细流状注入6.5ml pH 7.0的PBS 缓冲溶液，之后继续搅拌均匀；
(3)在冰浴条件下超声处理1min(超声功率为200W，超声5s，停3s)，最后过滤， 滤膜孔径为0.45μm，即得利多卡因醇质体。
测定包封率：方法同实施例1
本实施例制得的利多卡因醇质体的包封率是68.49％。
结果分析：以包封率为指标，考察卵磷脂与利多卡因重量比、乙醇体积分数、注入PBS 的温度和步骤(3)超声时间四个因素对利多卡因醇质体包封率的影响。分析知利多卡因 醇质体的最佳制备工艺为：卵磷脂∶利多卡因为1∶1，乙醇含量为40％，注入时的温度为40℃， 超声时间为3min，即实施例8结果所示。
为了探索本发明利多卡因醇质体制备方法的稳定性，按照最佳实施条件即实施例8重 复进行三次平行试验，测定包封率，结果如表1所示。
表1平行实验数据表
由实验结果可得，此工艺条件稳定性良好，适用于制备利多卡因醇质体。
凝胶的制备
配方：卡波姆940：0.1g，PEG-400：0.4mL，氮酮：0.4mL，丙二醇：2.3mL
按配方量精密称取PEG-400，氮酮，丙二醇，搅拌均匀后，再将其加入到溶胀过夜的 卡波姆940中，充分搅拌，加入实施例8制得的利多卡因醇质体，充分混合后，用1mol/L 的NaOH溶液调pH，直至显示为中性，继续加pH7.0的PBS缓冲溶液至10g，用玻璃棒 搅拌，至成均匀的凝胶。在4℃下避光保存，以备下面实验使用。
1.皮肤刺激性实验
白豚鼠12只，体重(150±50)g，清洁级(II级)。背部两侧剃毛，硫化钠快速脱毛， 温水冲水干净，待皮肤干燥后，涂抹甘油。24h后，开始给药。去毛区皮肤无损伤者留作 完整皮肤实验组(6只)；去毛区皮肤用针头作多处“井”字形划破，且只限于划破皮肤， 不伤及皮下组织，以皮肤上有出血点为度，此种皮肤有损伤的动物留作损伤皮肤实验组(6 只)。
每天定时给药3次，每只豚鼠背部一侧涂抹含药霜剂，另一侧对称位置涂抹空白基质。 给药面积40×40mm。连续给药三天后，清洗给药处皮肤，观察皮肤情况，拍照。
三天急性皮肤刺激实验显示，各组豚鼠外观体征、行为活动、进食、排泄均正常。无 异常瘙痒行为，所有动物体重增长正常，受药部位皮肤无红斑、无水肿、无色素沉着、无 出血点、无皮肤粗糙、无皮肤菲薄，未见豚鼠出现咳嗽、抽搐等过敏反应。从给药至观察 期结束，全部动物情况良好，无一死亡。
2.造皮实验的研究
①脱毛
将约为200g的大白鼠按体重麻醉(2.5-3mL/kg的3％戊巴比妥钠)，剪毛后用市售的 绿茶脱毛膏(人用的，比硫化钠损伤刺激小)进行脱毛，用温水冲净后剥皮修皮，漂洗后 备用。
②蒙皮
将称量瓶(d＝50mm)盛满含0.5U/mL肝素(抗凝血，利于保持皮肤活性)及0.01％ 庆大霉素(防腐)的生理盐水。然后将皮蒙在瓶口，用皮筋扎好，保证无气泡。
③涂药：
将0.2g的药均匀涂在皮肤上，然后再蒙上一层保鲜膜(防止水分散失)用皮筋扎好。 将其置于37℃恒温水浴中恒速搅拌，然后分别于0.5h、1h、2h、4h、6h取样，每次取样 后更换新鲜溶液。
测定结果见表2和3。
表2利多卡因裸药凝胶透皮数据表
表3利多卡因醇质体凝胶透皮数据表
结论：本发明制备的利多卡因醇质体具有强效促渗作用，可以显著提高利多卡因的药 物渗透量，有望被开发为新型的高效透皮外用局麻药。