技术领域
本发明属药物制剂技术领域。具体涉及二丁酰环磷腺苷钙原料及 制剂的制备方法。
背景技术
二丁酰环磷腺苷钙是一种新型的核苷酸类的衍生物，它作为G 蛋白耦联型受体药物，在肌体内起着重要的作用，G蛋白是一类存在 于细胞膜内侧的调节蛋白，是由三个不同的亚单位α、β、γ组成的 三聚体，它具有调节GTP酶活性，激活磷酸脂酶C(PLC)，调节Ca2+、 K+等离子通道，对鸟苷酸环化酶也有激活作用，介导多种效应，近 来还发现G蛋白还介导激活磷脂酶A2(PLA2)而产生花生四烯酸 (AA)，因此，作为G蛋白耦联型受体的二丁酰环磷腺苷钙在体内自 然也起着重要的作用，在临床上用于治疗冠心病。蛋白功能失调可以 表现为功能增强或下降，可以导致某些心血管疾病如：心绞痛、心肌 梗塞、心肌炎、心源性休克、免疫遗传性疾病如：红斑狼疮、银屑病、 传染性疾病和肿瘤如：肝炎、急性白血病等。而二丁酰环磷腺苷钙可 以治疗因G蛋白功能失调引起的各种疾病。
发明内容
本发明所要解决的技术问题在于克服上述不足之处，设计一种二 丁酰环磷腺苷钙的新剂型。
本发明提供了一种二丁酰环磷腺苷钙的注射剂，所述的注射剂包 括粉针剂或水针剂，其中粉针剂由二丁酰环磷腺苷钙水溶液直接冻干 或二丁酰环磷腺苷钙于其他药用辅料溶解混合后冻干获得；水针剂由 二丁酰环磷腺苷钙和其他药用辅料组成的pH5-7.5的制剂。
本发明优选的二丁酰环磷腺苷钙粉针剂的配方组成为：二丁酰环 磷腺苷钙5mg-300mg、甘露醇5mg-20mg、右旋糖苷1mg-20mg、 注射用水适量构成100％的组成；
优选的水针剂配方组成为：二丁酰环磷腺苷钙5-300mg pH5 -7.5、适量的等渗溶液、抗氧剂等。
本发明所述的等渗溶液为0.1-0.9％氯化钠；所述抗氧剂为亚硫 酸钠、亚硫酸氢钠、焦亚硫酸钠、硫代硫酸钠、L-或D-抗坏血酸或 谷胱甘肽。
本发明的二丁酰环磷腺苷钙制剂的临床研究情况如下：
二丁酰环磷腺苷钙对冠心病疗效的初步观察(附93例分析)
上海第二医学院附属第三人民医院冠心病小组
目前在临床上治疗冠心病的药物虽多，但其疗效均不够理想，因 此，进一步探索新的有效药物，很有必要。我们用二丁酰环磷腺苷钙 治疗93例冠心病患者，根据初步临床观察，取得一定成效。观察总 结如下：
病例选择
93例中，男51例，女42例；年龄为39-83岁，平均为48岁， 93例心绞痛患者中21例伴有心肌梗塞(其中13例为急性，8例为陈 旧性)；25例伴有高血压。
观察方法
所用二丁酰环磷腺苷钙(N6-2′-O-Dibatyryl Adenosine 3′5′Monophosphate简称为DBC)为淡黄色结晶粉末，每支为5～100 毫克，(上海第一生化药业有限公司制)。
用法：以每支5-100毫克溶于生理盐水2毫升中，作肌肉注射， 每日二次，或以5-100毫克加于生理盐水10-20毫升中作静脉推注， 每日二次；或以5-100毫克溶于5％葡萄糖溶液500毫升中，作静 脉滴注，每日一次。在治疗过程中同时口服氨茶硷(作为磷酸二酯酶 抑制剂)0.1克，每日三次。治疗时间以15天为一个疗程，最长者达 六个疗程。
治疗前后观察项目，包括症状、血压、血脂(主要为胆固醇、甘 油三酯等)及心电图等变化。个别患者在给药后半小时及2小时分别 作心电图，以观察用药后的短期疗效。
结果
症状的改变：93例有心绞痛胸闷症状的病例中，治疗后属显效 者19例(20.4％)改善有64例(68.8％)，无效者10例(10.8％)， 有效率为89.2％。
本发明的另一目的是提供了上述二丁酰环磷腺苷钙的制备方法， 该方法包括下列步骤：
原料：
(1)制备季铵盐：
环磷腺苷C-AMP加入三乙胺使之溶解，然后加入无水吡啶在 30-70℃减压抽去吡啶，干燥得C-AMP三乙胺盐；
(2)酰化
取C-AMP三乙铵盐，加入无水吡啶和丁酐，避光反应4-10天， 待完全酰化反应后，取出反应液，加入蒸馏水，水解2-3小时，然 后减压浓缩，得DBC AMP；
(3)成盐
加入无水氯化钙与DBC AMP充分混匀后，浓缩至干，用无水乙 醚洗涤，干燥，得二丁酰环磷腺苷钙DBC；
原料DBC-Ca工艺操作
1.CAMP-三乙胺盐的制备
正确称取含量80％以上的CAMP 12.5g(0.036M)置入1000ml 的磨口圆底烧瓶中，在冰浴内边加入0.4M三乙胺溶液100ml，使 CAMP全部溶解成PH为9-9.5的淡黄色透明液，此步操作均在10 ℃以下进行。上述溶液先室温减压抽去过剩的三乙胺直至无嗅味为 止，然后量55℃水浴继续浓缩至呈黄色油状物，加入无水吡啶50ml， 振摇脱水，继续在55℃减压抽去吡啶，部分油状物变白色海绵状物 质。再用无水吡啶50ml重复脱水一次，再用真空于55℃减压抽干， 全部物质变海绵状物。最后移入真空干燥器在五氧化二磷上干燥过 夜。
2.二丁酰环磷酸腺苷钙的制备
将已干燥的CAMP-三乙胺盐，从干燥器中取出，立即加入无水 吡啶375ml，再加入重蒸馏的丁酐180ml，摇动数分钟，置35-40℃ 的恒温箱重密闭避光反应6-7天，第一天反应必须经常摇动，使海 绵状物质全部溶解约需一天。反应液随着时间延长，颜色从淡黄色至 红褐色。
5天后，测定酰化反应是否完全：取反应液0.5ml，加入蒸馏水 0.5ml，置冰箱中4小时，然后再取水解液5微升进行层析。假使DBC 在层析纸上呈现单点(Rf0.84)，则说明酰化反应已完全。然后从恒 温箱内取出反应液，如有沉淀物，则用布氏漏斗滤除，并移至冰盐浴 中，冷却至10℃以下，慢慢加入蒸馏水175ml，滴加时保持温度在 10℃以下。水解结束后，将水解液置冰箱2-3小时使反应完全。
将DBC水解液约700ml，倾入1000ml的蒸馏烧瓶中，然后在40 ℃的水浴中水泵减压浓缩，蒸馏瓶的颈部用石棉绳包扎，收集器用冰 浴冷却，先蒸出300ml后，升高水浴温度至50℃，继续用水泵减压 至无溶液蒸出时，停止浓缩。弃去收集器中的溶液后，改用油泵继续 浓缩至80ml左右，呈红褐色的粘稠液。
将粘稠液移入500ml的分液漏斗中，加等体积乙醚，混合均匀后， 再用20℃以下蒸馏水450ml分七次抽提。每次振荡2-3分钟，静置 分层，收集水液层，弃去乙醚层。水液层如前一样在40℃水泵真空 浓缩，直至浓缩液呈黄色糖浆状。然后加乙醚70ml共剧烈振荡数分 钟，弃去乙醚层。这样重复用乙醚抽提一次。室温抽去剩余乙醚后， 用乙醇10ml溶解糖浆物，加入A.R无水氯化钙3.99g(溶解于蒸馏 水4.8ml和乙醇9.6ml)，充分混匀后，室温减压浓缩至干。用无水乙 醇20ml溶解，至冰浴中慢慢滴加乙醚200ml析出大量淡黄色沉淀。 置冰箱中数小时。沉淀物以布氏漏斗抽滤，在无水乙醚中磨细，过滤， 再用无水乙醚洗涤二次。五氧化二磷真空干燥器中过夜。得淡黄色 DBC·Ca·2.3H2O约20g含量60以上。在水溶液中吸收高峰为274mμ。
本发明的二丁酰环磷腺苷钙的药物能用于心血管系统疾病治疗， 并能用于免疫性疾病如红斑狼疮、牛皮癣等，还能用于治疗肿瘤、抑 制肿瘤细胞、提高NK活性、并具有镇痛作用。
注射用DBC-Ca的配制
将化验合格的DBC-Ca原料依据下列公式，用双蒸馏水、加适量 药用辅料如甘露醇或右旋糖苷等配成溶液，无菌过滤，分装2ml、5ml 安瓿或2ml、10ml西林瓶，冰冻干燥，封口即得：
“23”为每针DBC-钙的ml重量(含量折至100％)
“0.5”为每针分装时的ml数
DBC-Ca注射液的配制
将化验合格的DBC-Ca原料用双蒸馏水溶解后加适量的等渗溶 液、抗氧剂，过滤，灌装，封口，高压灭菌，检漏即得。
二丁酰环磷腺苷钙
本品为二丁酰环磷腺苷钙盐含结晶水的细粉，按干燥品计算含 C18H23O8N5PCa·2·3H2O不得低于60.0％。
性状：本品为淡黄色粉末，有特殊臭，具有吸湿性，在水或乙醇 中溶解，在乙醚中不溶解。
鉴别：
(1)本品的水溶液显钙盐的各种特殊反应。
(2)取本品以稀硝酸溶解后，加钼酸铵试液。加热析出黄色沉 淀(PO4≡)。
(3)取本品约20mg，加蒸馏水1-2ml溶解，加1N NaOH试液 使显碱性后，加铬酸试液(取三氧化铬0.84g，加蒸馏水7ml溶解后， 再缓缓加入浓硫酸4ml，混匀即得)，用玻璃棒摩擦壁管即产生很细 得沉淀(腺嘌呤)。
(4)取本品约10mg，加6N HCl 5ml，微湿溶解后，加入间苯 三酚约10mg，混匀，放入沸水浴中，加热约1分钟，显玫瑰红色(戊 糖)。
(5)取样品10mg，加0.4M Ba(OH)2 1ml，100℃水解30分钟， 离心去除沉淀，取上清液10微升，进行层析Rf值从原来0.86变到 0.17，说明DBC还原成AMP。
检查：
PH：取本品0.1g溶解于新沸放冷的蒸馏水10ml，PH值应为3.0 -5.0。
水分：本品于室温P2O5真空干燥至恒量，失重不超5.0％。
热原：取本品1mg/ml(折算到100％含量的溶液)，按家兔每公 斤注射1ml。
含量测定：
精密称取本品10mg，溶解在1ml蒸馏水中，用血球计算管准确 吸取10微升，相当于DBC·Ca·2·3H2O 100微克，点在新华一号 滤纸上，进行上行层析，纸长30cm，溶剂系统为95％乙醇∶0.5M醋 酸铵＝5∶2，约15小时后，取出阴干。然后置紫外灯光下划出紫色斑 点的地位，将与对照品(标准品DBC的Rf值为0.84-0.86)相对的 DBC的斑点剪下，放入试管，并加入0.01N HCl 5ml，摇匀，室温放 置1小时，用分光光度计274mμ处测定其光密度值，计算含量。
作用与用途：
本品是CAMP的衍生物，是调节细胞功能的第二信使物质，有 舒张平滑肌，扩张血管的作用，用于冠心病的心绞痛，心肌梗塞及心 原性休克，并能改善风湿性心脏病的心悸、气急和胸闷等症状。能缓 解白血病，是一种新型G蛋白耦联型受体药物，可治疗因G蛋白功 能失调导致得心血管疾病、遗传性疾病、传染性疾病和肿瘤等，对治 疗牛皮癣也有一定疗效。
用法与用量：
肌肉或静脉注射，每次5-300mg。对治疗牛皮癣的剂量，遵医 嘱适当增加。
贮藏：避光凉处置藏。
制剂：注射用二丁酰环磷腺苷钙规格分别为每针5mg、10mg、 20mg、50mg、100mg、150mg、300mg。
注射用二丁酰环磷腺苷钙检验规格
本品为二丁酰环磷腺苷钙盐的灭菌粉末，含 C18H23O8N5PCa·2·3H2O应为标示量的85-115％。
性状：本品的性状与二丁酰环磷腺苷钙相同。
鉴别：照二丁酰环磷腺苷钙项下的鉴别法试验，显相同的反应。
检查：
澄清度：取本品2支，注意开启，避免玻璃屑落入容器内，分别 加蒸馏水2ml，缓缓旋动，溶解后，不得有易见的异物。
PH值：取本品1支溶解于新沸放冷的蒸馏水2ml中，PH值应为 3.0-5.0。
干燥失重：取本品，置P2O5真空干燥器中，干燥至恒量，减失 重量，不得过7.0％。
无菌试验：照无菌检查法检查。
热原：取本品1支溶解于氯化钠注射液20ml中，按家兔每公斤 注射1ml。
含量测定：按照二丁酰环磷腺苷钙项下含量测定法测定，应符合 标示量的规定。
作用与用途：
本品是3’，5’环化腺苷酸的衍生物，是调节细胞功能的第二信使物 质，有舒张平滑肌，扩张血管的作用，用于冠心病的心绞痛，心肌梗 塞，及心原性休克，并能改善风湿性心脏病的心悸、气急和胸闷等症 状。能缓解白血病，是一种新型G蛋白耦联型受体药物，可治疗因G 蛋白功能失调导致得心血管疾病、遗传性疾病、传染性疾病和肿瘤等， 对治疗牛皮癣也有一定疗效。
用法与用量：本品5-300mg用氯化钠注射液溶解后，作肌肉注 射或静脉推注；或将本品溶解于葡萄糖注射液作静脉滴注。
二丁酰环磷腺苷钙注射液检验规格
本品为二丁酰环磷腺苷钙灭菌注射液，含 C18H23O8N5PCa·2·3H2O，应为标示量得85-115％。
性状：本品为无色或几乎无色的澄明液体。
鉴别：照二丁酰环磷腺苷钙项下的鉴别法试验，显相同反应。
检查：
PH值：应为3.0-5.0
无菌试验：照无菌检验法检查
热原：按家兔每公斤注射1ml
含量测定：照二丁酰环磷腺苷钙项下含量测定法测定，应符合标 示量的固定。
其它：应符合中国药典2000版注射剂项下有关的各项规定
作用与用途：
本品是3’，5’环化腺苷酸的衍生物，是调节细胞功能的第二信使物 质，有舒张平滑肌，扩张血管的作用，用于冠心病的心绞痛，心肌梗 塞，及心原性休克，并能改善风湿性心脏病的心悸、气急和胸闷等症 状。能缓解白血病，是一种新型G蛋白耦联型受体药物，可治疗因G 蛋白功能失调导致的心血管疾病、遗传性疾病、传染性疾病和肿瘤等， 对治疗牛皮癣也有一定疗效。
用法与用量：本品5-300mg，作肌肉注射或静脉推注；或将本 品加入葡萄糖注射液或生理盐水注射液中静脉滴注。
具体实施方式
实施例1水针剂
取二丁酰环磷腺苷钙1000mg(干品)，用注射用水80ml溶解后 加0.9％浓度氯化钠溶液、亚硫酸氢钠5mg，加注射用水至100ml，pH 调节至5.0-7.5，过滤、灌装、封口、高压灭菌、检漏、灯检，得成 品50瓶。
实施例2
取二丁酰环磷腺苷钙5g(干品)，用注射用水2L溶解后加0.9％ 浓度氯化钠溶液及硫代硫酸钠12.5mg，然后加注射用水至2.5L，pH 调节至5.0-7.0，过滤、灌装、压塞、高压灭菌、检漏、灯检，得成 品50瓶。
实施例3粉针剂
取化验合格的DBC-Ca原料2.5g，加甘露醇100mg、右旋糖苷 450mg，加蒸馏水80ml溶解，调节pH至5.0-7.5，稀释至100ml， 过滤，分装至5ml西林瓶，冷冻干燥、压塞、检漏得成品50瓶。
实施例4
取化验合格的DBC-Ca原料1g，加甘露醇50g、右旋糖苷450mg， 加蒸馏水20ml溶解，调节pH至5.0-7.5，稀释至25ml，过滤，分 装至2ml安瓿瓶，冷冻干燥、封口、检漏得成品50支。