本申请是申请号为97196558.7、申请日1997年7月15日、发明 名称为“抗猪生殖和呼吸疾病的多核苷酸疫苗制剂”的申请的分案申请。
本发明涉及可特别地接种猪以抗生殖和呼吸疾病的疫苗制剂，还涉 及相应的接种方法。
在过去几十年里，生产猪的方法发生了根本性的变化。在被包围的 空间内集中繁殖已被推广，但其必然后果是呼吸疾病也随之迅速发展。
猪呼吸病理学的症状范围一般被归纳为复杂的猪呼吸疾病名称，并 涉及多种致病因子，其中包括病毒以及细菌和支原体。
参与呼吸疾病的主要因子是大叶性肺炎放线杆菌 (Actino-bacillus pleuropneumoniae)，不育和呼吸综合征病毒 (PRRS)，也被称为神秘病病毒，Aujeszkey病病毒(PRV)和猪流感病毒。
其它病毒导致生殖疾病，所述疾病导致流产，胎儿干瘪和不育。主 要病毒是PRRS，细小病毒和典型猪瘟病毒(HCV)。其次，猪流感病毒PRV 和大叶性肺炎放线杆菌也可导致这种疾病。大叶性肺炎放线杆菌、HCV 和PRV可导致死亡。
另外，微生物之间的相互关系在猪呼吸综合征中非常重要。实际上， 大多数细菌病原体是鼻咽区和幼小动物扁桃体的习惯性宿主。来自大母 猪的这些病原体经常被出生仅几个小时、初乳免疫力尚未起效之前的小 猪吸入。当宿主的呼吸防御机制被诸如大叶性肺炎放线杆菌的前体因子 或病毒损坏时，在上呼吸道中生存的生物体可入侵下呼吸道。对肺的入 侵非常快，尤其是在诸如大叶性肺炎放线杆菌的前体病原体的情况下更 是如此，所述病原体可产生强有力的细胞毒素，该毒素能损害呼吸道上 皮细胞的纤毛和肺泡巨噬细胞。
除了具有呼吸道趋向性的细菌和支原体外，主要的病毒感染，如流 感病毒，呼吸道冠状病毒和Aujeszkey病病毒的感染对呼吸道综合征的 致病性可能也起到了一定的作用。
最后，一些因子既有呼吸效应也有生殖效应。从生殖病理学的角度 看，也会出现相互作用。
因此，似乎需要试着开展针对猪生殖和呼吸疾病的主要致病因子的 有效防治作用。
迄今为止发展起来的方法是用灭活疫苗或活疫苗，及可能为这种疫 苗的混合物。它们的发展提出了效价和稳定性之间相容性的问题。实际 上不论是从所用的不同抗原的角度，还是从制剂本身的角度，尤其是在 联合使用灭活疫苗和活疫苗的情况下，都必需确保不同疫苗效价之间的 相容性。另外还存在的问题是：这种联合疫苗的保存及其安全性，尤其 是存在佐剂时的安全性。这些疫苗一般十分昂贵。
专利申请WO-A-9011092，WO-A-9219183，WO-A-9421797 和WO-A-9520660利用了最近兴起的多核苷酸疫苗技术。已知这些疫 苗使用了质粒，所述质粒能在宿主细胞中表达插入其中的抗原。已提出 所有的施用途径(腹膜内，静脉内，肌内，经皮，皮内，粘膜等等)。也 可以使用不同的接种方式，如将DNA沉积在金粒表面并投射之以穿入 动物皮肤(Tang等，自然(Nature)，356，152-154，1992)，可以 同时转染皮肤，肌肉，脂肪组织和乳房组织的液体喷射注射器(Furth 等，分析生物化学(Analytical Biochemistry)，205，365-368， 1992)。
多核苷酸疫苗也可以使用裸DNA和经配制的DNA，如阳离子脂 质脂质体内的DNA。
M-F Le Potier等人(第二届消灭Aujeszkey病(假狂犬病)病毒国际研讨 会论文集，1995年8月6日至8日，哥本哈根，丹麦)和M.Monteil 等人(Les Journees d’Animation Scientifique du Departement de Pathologie Animale[动物病理学部门组织的科学会议]，INRA-ENV， Ecole Nationale Veterinaire de LYON(里昂国家畜医学校)，13-14， 1994年12月13-14日)借助于可在强启动子，即2型腺病毒主要晚期 启动子的控制下表达gD基因的质粒，试着接种了猪以抗Aujeszkey病 病毒。尽管抗体反应水平良好，但未显示保护作用。不过，用其中插入 了gD基因和相同启动子的重组腺病毒接种猪之后，记录了有关保护作 用的令人满意的结果，证明gD糖蛋白应足以在猪中诱导保护作用。
现有技术中通过多核苷酸接种方法在猪中未获得保护性结果。
因此，本发明打算提供多价的疫苗制剂，所述制剂可以确保接种猪 能抵抗特别是涉及呼吸疾病和/或生殖疾病的多种致病因子。
本发明的另一目的是提供包含有不同效价并满足彼此相容性和效 价稳定性所需的所有标准的疫苗制剂。
本发明的另一目的是提供可以在相同载体中含有不同效价的疫苗 制剂。
本发明的另一目的是提供使用简单且便宜的疫苗制剂。
本发明的另一目的是提供这样一种疫苗制剂和接种猪的方法，所述 疫苗和接种可以得到高效、长期以及安全性良好又不留后患的保护作 用，包括多价保护作用。
因此，本发明的目的是特别地针对猪生殖和/或呼吸疾病的疫苗制 剂，所述制剂含有至少3种效价的多核苷酸疫苗，每种含有一个整合质 粒，其可在宿主细胞中体内表达一种猪病原体效价的基因，这些效价选 自Aujeszkey病病毒(PRV或假狂犬病病毒)，猪流感病毒(SIV)，猪神 秘病病毒(PRRS病毒)，细小病毒病病毒(PPV病毒)，典型猪瘟病毒 (HCV病毒)和引起放线杆菌病的细菌(大叶性肺炎放线杆菌)，对于每种 效价而言，质粒含有一种或多种基因，该基因对于Aujeszkey病病毒选 自gB和gD，对于猪流感病毒选自HA、NP和N，对于PRRS病毒 选自ORF5(E)，ORF3，ORF6(M)，对于细小病毒病病毒选自VP2， 对于典型猪瘟病毒选自E1、E2，对于大叶性肺炎放线杆菌选自apxI、 apxII和apxIII。
本发明中的效价应理解成至少一种可提供抗所研究病原体病毒的 保护作用的抗原，效价可含有得自一株或多株所研究病原体的一个或多 个经修饰的天然基因作为亚效价。
病原性因子的基因应理解成不仅指完整的基因，也指不同的多种核 苷酸序列，包括保持了诱导保护性反应之能力的片段。基因的概念覆盖 了等价于实施例中详细描述的序列的核苷酸序列，也就是说，有所不同 但编码相同蛋白质的序列。此概念也覆盖了被研究的其它株病原体的核 苷酸序列，它可以提供交叉保护作用或特异于株或株群的保护作用。此 概念也覆盖了已被修饰以便于由宿主动物在体内表达，但编码相同蛋白 质的核苷酸序列。
优选本发明的疫苗制剂含有Aujeszkey和猪流感效价，在其中可加 入优选选自PRRS和大叶性肺炎放线杆菌(放线杆菌病)效价的其它效 价，任选在其中进入选自细小病毒病和典型猪瘟效价的其它效价。
当然，效价的所有联合都是可以的，然而，在本发明的范围内， Aujeszkey和猪流感，接下来是PRRS和大叶性肺炎放线杆菌的效价被 认为是优选的。
从更特异地针对猪呼吸疾病的接种角度看，优选效价选自 Aujeszkey、猪流感、PRRS和放线杆菌病。
从特异地针对猪生殖疾病的接种角度看，优选效价选自PRRS、细 小病毒病、典型猪瘟和Aujeszkey病。
至于Aujeszkey效价，可使用gB或gD基因，优选使用这两种基 因，此时所述基因位于不同质粒或一个相同质粒上。
至于猪流感效价，优选使用HA和NP基因，可以使用这两个基因 中的一个，也可以同时使用这两个基因，此时所述基因位于不同质粒或 一个相同质粒上。优选在同一疫苗中联合得自一种以上流感病毒株，尤 其是得自在自然界发现的不同株的HA序列。另一方面，NP提供了交 叉保护作用，因此得自单个病毒株的序列能令人满意。
至于PRSS效价，优选使用E和ORF3或M基因，可以单独或联 合使用这些基因；联合使用时，基因可位于分离的质粒上，或位于联合 有2或3个这种基因的质粒中。得自至少两株，尤其是得自欧洲株和美 洲株的基因利于在同一疫苗中联合。
至于典型猪瘟效价，可使用E1和E2基因中的任一种或E1和E2 基因，后情形下它们可在两个不同质粒或任选在一个相同质粒中联合。
至于放线杆菌病效价，可使用上述3种基因中的一个或位于不同质 粒或混合质粒上的这些基因中2个或3个基因的联合以提供针对不同血 清型大叶性肺炎放线杆菌的保护作用。对于apxI，II和III而言，可 以设想修饰编码序列以得到解毒的抗原，具体方法见实施例。
特别对于经肌内途径接种而言，本发明疫苗制剂一般以0.1-10ml， 特别是1-5ml的剂量体积形式提供。
剂量一般为每种质粒类型10ng-1mg，优选为100ng-50μg，优选 为1μg-250μg。
优选使用简单地置于接种载体，一般为生理盐水(0.9％NaCl)，超 纯水，TE缓冲液等中的裸质粒。当然也可以使用现有技术中已描述的 任何多核苷酸疫苗形式。
每个质粒都含有启动子，在其控制下可确保插入基因在宿主细胞中 的表达。所述启动子一般是强的真核生物启动子，尤其是来源于人或 鼠，或任选来源于其它动物如大鼠、猪和豚鼠的巨细胞病毒早期 CMV-IE启动子。
启动子更一般地讲是来源于病毒或细胞。至于病毒启动子，可提到 SV40病毒早期或晚期启动子或Rous肉瘤病毒LTR启动子。也可以是 基因来源病毒的启动子，例如基因自身的启动子。
至于细胞启动子，可提到细胞骨架基因的启动子，例如结蛋白启动 子(Bolmont等，亚显微镜细胞学和病理学(Journal of Submicroscopic Cytology and Pathology)，1990，22，117-122；和Zhenlin等， 基因(Gene)，1989，78，243-254)或者肌动蛋白启动子。
当相同质粒中存在几个基因时，它们会存在于相同的转录单位或两 个不同的单位中。
优选通过混合表达各种效价之抗原的多核苷酸质粒来达到本发明 不同疫苗效价的联合，但也可以设想使几种效价的抗原由相同质粒表 达。
本发明的目的还在于单价疫苗制剂，所述制剂含有一个或多个编码 得自选自PRV，PRRS，PPV，HCV的病毒之一和大叶性肺炎放线 杆菌的一个或多个基因的质粒，所述基因为上述的那些。除了它们的单 价特征外，这些制剂可具有上述有关基因选择，基因联合，质粒组成， 剂量体积，剂量等方面的特征。
单价疫苗制剂也可用于(i)制备上述的多价疫苗制剂，(ii)各对抗自 己的疾病，(iii)与针对另一种疾病的另一类型(活的或灭活的完整的，重 组的，亚单位)的疫苗联合，或(iv)按下述作为疫苗的加强剂。
实际上本发明另一个目的是使用一种或多种本发明的质粒以制备 用于接种猪的疫苗，该猪首先已用第一种已知类型的常规疫苗接种，所 述第一种疫苗特别选自活的完整疫苗，灭活的完整疫苗，亚单位疫苗和 重组疫苗，所述第一种疫苗(单价或多价)具有(也就是说含有或能表达) 由所述质粒编码的抗原或提供交叉保护作用的抗原。值得注意的是，该 多核苷酸疫苗具有强有力的加强效果，可导致免疫应答的增强并可获得 长期的免疫力。
一般讲，第一接种疫苗可选自可从不同的兽用疫苗生产商处购得的 疫苗。
本发明的另一目的是接种试剂盒，所述试剂盒将上述第一接种疫苗 和用于加强免疫的本发明的疫苗制剂组配在一起。本发明还涉及附带有 说明书的本发明疫苗制剂，所述说明书指明该制剂可作为上述第一次接 种的加强剂来使用。
本发明的另一目的是接种猪以抵抗猪生殖疾病和/或呼吸疾病的方 法，所述方法包括施用有效量的上述疫苗制剂。此接种方法包括施用一 剂或更多剂疫苗制剂，这些剂量可以在短时间内连续施用和/或以较长 的间隔期连续施用。
在这种接种方法中，通过现有技术中建议的用于多核苷酸接种的不 同施用途径并利用已知的施用技术施用本发明的疫苗制剂。特别可借助 于液体注射器经液体喷射优选多个液体喷射经由皮内途径进行接种，尤 其是使用具有几个孔或喷嘴，特别是具有5或6个孔或喷嘴的注射头的 注射器，如法国里昂Endoscoptic公司制造并销售的Pigjet装置。
对于这种装置而言，优选剂量体积降低为0.1-0.9ml，特别是0.2- 0.6ml，更优选为0.4-0.5ml，可以1次或几次，优选为2次施用该剂 量体积。
本发明的另一目的是一种接种方法，所述方法包括按上述进行第一 次接种，并用本发明的疫苗制剂加强接种。在本发明方法的优选实施方 案中，首先给动物施用有效剂量的常规疫苗，尤其是灭活的、活的、减 毒的或重组的、或亚单位的疫苗以提供第一次接种，一段时间后，优选 为2至6周后，施用本发明的多价或单价疫苗。
本发明也涉及一种制备疫苗制剂的方法，即制备不同效价及其混合 物的方法，如从此说明书中看到的方法。
下面参照附图，借助于本发明的实施方案更详细地描述本发明。
附图说明
图1：质粒pVR1012
图2：PRVgB基因的序列(NIA3株)
图3：质粒pAB090的构建
图4：PRVgD基因的序列(NIA3株)
图5：质粒pPB098的构建
图6：猪流感HA基因的序列(H1N1株)
图7：质粒pPB143的构建
图8：猪流感NP基因的序列(H1N1株)
图9：质粒pPB42的构建
图10：猪流感HA基因的序列(H3N2株)
图11：质粒pPB144的构建
图12：猪流感NP基因的序列(H3N2株)
图13：质粒pPB132的构建
图14：质粒pAB025
图15：质粒pAB001
图16：质粒pAB091
图17：质粒pAB092
图18：质粒pAB004
图19：质粒pAB069
图20：质粒pAB061
图21：质粒pPB162
图22：质粒pPB163
图23：质粒pPB174’
图24：质粒pPB189
图25：质粒pPB190
序列表SEQ ID NO：
SEQ ID NO：1：PRVgB基因的序列(NIA3株)
SEQ ID NO：2：寡核苷酸AB166
SEQ ID NO：3：寡核苷酸AB167
SEQ ID NO：4：寡核苷酸AB168
SEQ ID NO：5：寡核苷酸AB169
SEQ ID NO：6：PRVgD基因的序列(NIA3株)
SEQ ID NO：7：寡核苷酸PB101
SEQ ID NO：8：寡核苷酸PB102
SEQ ID NO：9：寡核苷酸PB107
SEQ ID NO：10：寡核苷酸PB108
SEQ ID NO：11：猪流感HA基因的序列(H1N1株)
SEQ ID NO：12：寡核苷酸PB097
SEQ ID NO：13：寡核苷酸PB098
SEQ ID NO：14：猪流感NP基因的序列(H1N1株)
SEQ ID NO：15：寡核苷酸PB095
SEQ ID NO：16：寡核苷酸PB096
SEQ ID NO：17：猪流感HA基因的序列(H3N2株)
SEQ ID NO：18：猪流感NP基因的序列(H3N2株)
SEQ ID NO：19：寡核苷酸AB055
SEQ ID NO：20：寡核苷酸AB056
SEQ ID NO：21：寡核苷酸AB001
SEQ ID NO：22：寡核苷酸AB002
SEQ ID NO：23：寡核苷酸AB170
SEQ ID NO：24：寡核苷酸AB171
SEQ ID NO：25：寡核苷酸AB172
SEQ ID NO：26：寡核苷酸AB173
SEQ ID NO：27：寡核苷酸AB007
SEQ ID NO：28：寡核苷酸AB010
SEQ ID NO：29：寡核苷酸AB126
SEQ ID NO：30：寡核苷酸AB127
SEQ ID NO：31：寡核苷酸AB118
SEQ ID NO：32：寡核苷酸AB119
SEQ ID NO：33：寡核苷酸PB174
SEQ ID NO：34：寡核苷酸PB189
SEQ ID NO：35：寡核苷酸PB190
SEQ ID NO：36：寡核苷酸PB175
SEQ ID NO：37：寡核苷酸PB176
SEQ ID NO：38：寡核苷酸PB191
SEQ ID NO：39：寡核苷酸PB192
SEQ ID NO：40：寡核苷酸PB177
SEQ ID NO：41：寡核苷酸PB278
SEQ ID NO：42：寡核苷酸PB279
SEQ ID NO：43：寡核苷酸PB280
SEQ ID NO：44：寡核苷酸PB307
SEQ ID NO：45：寡核苷酸PB303
SEQ ID NO：46：寡核苷酸PB306
SEQ ID NO：47：寡核苷酸PB304
SEQ ID NO：48：寡核苷酸PB305
实施例
实施例1：病毒的培养
在适当的细胞系统中培养病毒直至得到细胞病变效应。本领域技术 人员熟知每种病毒所用的细胞系统。简单地说，用感染复数为1的被研 究的病毒株接种对所用病毒敏感的细胞，所述细胞在Eagle最低基本培 养基(MEM培养基)或另一种适当的培养基中培养。然后于37℃保温被 感染的细胞直至出现完全的细胞病变效应(平均为36小时)。
实施例2：细菌的培养和细菌DNA的提取
按A.Rycroft等人(普通微生物学杂志(J.Gen.Microbiol.)， 1991，137，561-568)所述培养大叶性肺炎放线杆菌菌株。根据J. Sambrook等人(分子克隆：实验室手册，第2版，冷泉港实验室，冷泉 港，纽约，1989)所述的标准技术制备高分子量的DNA(染色体DNA)。
实施例3：提取病毒基因组DNA
培养后，收获上清液和被裂解的细胞，于4℃，1000g将全部的病 毒悬浮液离心10分钟以除去细胞碎片，然后通过于4℃，400,000g超 速离心1小时以收获病毒颗粒。将沉淀物溶解于最少量的缓冲液(10mM Tris，1mM EDTA；pH8.0)中，于37℃，在十二烷基硫酸钠(SDS) 的存在下(终浓度为0.5％)，用蛋白酶K(终浓度为100μg/ml)将上述浓 缩的病毒悬浮液处理2小时。然后用苯酚/氯仿混合物提取病毒DNA， 再用2倍体积的无水乙醇沉淀之。于-20℃放置过夜后，于4℃，10,000g 将DNA离心15分钟，干燥DNA沉淀物，然后将它溶于最少量的无菌 超纯水中，接着可以用限制性酶消化所述DNA。
实施例4：分离病毒基因组RNA
根据本领域技术人员熟知的技术纯化RNA病毒，然后使用P. Chromczynski和N.Sacchi所述的“硫氰酸胍/苯酚-氯仿”提取技术(分 析生物化学，1987，162，156-159)分离各个病毒的基因组病毒 RNA。
实施例5：分子生物学技术
使用J.Sambrook等人(分子克隆：实验室手册，第2版，冷泉港 实验室，冷泉港，纽约，1989)所述的标准分子生物学技术进行所有的 质粒构建。使用“Geneclean”试剂盒(BIO 101 Inc.La Jolla，CA) 分离用于本发明的所有限制性片段。
实施例6：RT-PCR技术
合成多个特异性的寡核苷酸(在其5’末端含有限制性位点以便于克 隆经扩增的片段)以使其完全覆盖欲被扩增的基因的编码区(见具体的 实施例)。根据标准技术(J.Sambrook等人，分子克隆：实验室手册， 第2版，冷泉港实验室，冷泉港，纽约，1989)进行逆转录(RT)反应和 聚合酶链反应(PCR)。用一对特异性的扩增引物进行一种RT-PCR反 应，所述反应的模板是提取出的病毒基因组RNA。用苯酚/氯仿/异戊 醇(25∶24∶1)提取经扩增的互补DNA，然后用限制性酶消化。
实施例7：质粒pVR1012
质粒pVR1012(图1)得自Vical Inc.，San Diego，CA，USA。其构建 描述于J.Hartikka等人(人类基因疗法(Human Gene Therapy)， 1996，7，1205-1217)。
实施例8：构建质粒pAB090(PRVgB基因)
用ApaI和NaeI消化质粒pPR2.15(M.Riviere等，病毒学杂志 (J.Virol)，1992，66，3424-3434)，以释放出含有编码Aujeszky 病病毒(NIA3株)gB糖蛋白之基因(图2和SEQ ID NO：1)的2665bp的 ApaI-NaeI片段(片段A)。
通过下列2个寡核苷酸的杂交：
AB166(33聚体)(SEQ ID NO：2)
5’GATGCCCGCTGGTGGCGGTCTTTGGCGCGGGCC3’
AB167(33聚体)(SEQ ID NO：3)
5’ACGTCTACGGGCGACCACCGCCAGAAACCGCGC3’
重新构建含有gD基因序列，始于起始的ATG密码子直至ApaI位点的 33bp的片段(片段B)，该片段在5’端产生了PstI位点。
通过下列2个寡核苷酸的杂交：
AB168(45聚体)(SEQ ID NO：4)
5’
GGCACTACCAGCGCCTCGAGAGCGAGGACCCCGACGCCCTG
TAGG3’
AB169(49聚体)(SEQ ID NO：5)
5’
GATCCCTACAGGGCGTCGGGGTCCTCGCTCTCGAGGCGCTG
GTAGTGCC 3’
重新构建含有gD基因序列，始于NaeI位点直至TAG终止密码子的45 bp的片段(片段C)，该片段在3’端产生了BamHI位点。
将片断A，B和C一起连接到预先经PstI和BamHI消化的载体 pVR1012(实施例7)中，得到质粒pAB090(7603bp)(图3)。
实施例9：构建质粒pPB098(PRVgD基因)
用SalI和BglII消化质粒pPR29(M.Riviere等，病毒学杂志， 1992，66，3424-3434)，以释放出含有编码Aujeszky病病毒(NIA3 株)gD糖蛋白之基因的3’部分(图4和SEQ ID NO：6)的711bp的SalI- BglII片段(片段A)。
用Eco47III和SalI消化质粒pPR29以释放出含有编码Aujeszky 病病毒(NIA3株)gD糖蛋白之基因的5’部分的498bp的Eco47III-SalI 片段(片段B)。
通过下列2个寡核苷酸的杂交：
PB101(15聚体)(SEQ ID NO：7)
5’GATGCTGCTCGCAGC3’
PB102(19聚体)(SEQ ID NO：8)
5’GCTGCGAGCAGCATCTGCA3’
重新构建含有gD基因5’序列，始于起始的ATG密码子直至Eco47III 位点的15bp的片段(片段C)，该片段在5’端产生了PstI位点。
纯化之后，将片段A，B和C一起连接到预先经PstI和BglII消 化的载体pVR1012(实施例7)中，得到质粒pPB098(6076bp)(图5)。
实施例10：构建质粒pPB143(猪流感HA基因，H1N1株)
用根据实施例4所述技术制备的猪流感病毒(SIV H1N1“SW”株) 基因组RNA，和下列寡核苷酸：
PB107(32聚体)(SEQ ID NO：9)
5’GTTCTGCAGCACCCGGGAGCAAAAGCAGGGGA3’
PB108(33聚体)(SEQ ID NO：10)
5’ATTGCGGCCGCTAGTAGAAACAAGGGTGTTTTT3’
根据实施例6所述技术进行RT-PCR反应以从SIV H1N1中精确地分 离1803bp PCR片段形式的编码HA蛋白的基因(图6和SEQ ID NO：11)。纯化之后，将此片段与载体PCRII-direct(Invitrogen Reference K2000-01)连接，得到载体pPB137(5755 bp)。用EcoRV和NotI消化 载体pPB137以释放1820bp的含有HA基因的EcoRV-NotI片段。将 此片段与预先经EcoRV和NotI消化的载体pVR1012(实施例7)连接， 得到质粒pPB143(6726bp)(图7)。
实施例11：构建质粒pPB142(猪流感NP基因，H1N1株)
用根据实施例4所述技术制备的猪流感病毒(SIV H1N1“SW”株) 基因组RNA，和下列寡核苷酸：
PB097(36聚体)(SEQ ID NO：12)
5’CCGGTCGACCGGGATAATCACTCACTGAGTGACATC3’
PB098(33聚体)(SEQ ID NO：13)
5’TTGCGGCCGCTGTAGAAACAAGGGTATTTTTCT3’
根据实施例6所述技术进行RT-PCR反应以从SIV H1N1中精确地分 离SalI-NotI片段形式的编码NP蛋白的基因(图8和SEQ ID NO：14)。 纯化之后，将1566bp的RT-PCR产物与载体PCRII-direct(Invitrogen Reference K2000-01)连接，得到载体pPB127(5519bp)。
用SalI和NotI消化载体pPB127以释放1560bp的含有NP基因 的SalI-NotI片段。将此片段与预先经SalI和NotI消化的载体pVR1012 (实施例7)连接，得到质粒pPB142(6451bp)(图9)。
实施例12：构建质粒pPB144(猪流感HA基因，H3N2株)
用根据实施例4所述技术制备的猪流感病毒(SIV H3N2株，Cotes du Nord 1987)基因组RNA，和下列寡核苷酸：
PB095(31聚体)(SEQ ID NO：15)
5’GTTCTGCAGGCAGGGGATAATTCTATCAACC3’
PB096(36聚体)(SEQ ID NO：16)
5’TTGCGGCCGCAAGGGTGTTTTTAATTACTAATATAC3’
根据实施例6所述技术进行RT-PCR反应以从SIV H3N2中精确地分 离PstI-NotI片断形式的编码HA蛋白的基因(图10和SEQ ID NO：17)。纯化之后，将1765bp的RT-PCR产物与载体PCRII- direct(Invitrogen Reference K2000-01)连接，得到载体pPB120(5716 bp)。
用NotI消化载体pPB120以释放1797bp的含有HA基因的NotI -NotI片段。将此片段与预先经NotI消化的载体pVR1012(实施例7)连 接，得到质粒pPB144(6712bp)，该质粒在相对于启动子正确的方向上 含有H3N2 HA基因(图11)。
实施例13：构建质粒pPB132(猪流感NP基因，H3N2株)
用根据实施例4所述技术制备的猪流感病毒(SIV H3N2株，Cotes du Nord 1987)基因组RNA，和下列寡核苷酸：
PB097(36聚体)(SEQ ID NO：12)
5’CCGGTCGACCGGGATAATCACTCACTGAGTGACATC3’
PB098(33聚体)(SEQ ID NO：13)
5’TTGCGGCCGCTGTAGAAACAAGGGTATTTTTCT3’
根据实施例6所述技术进行RT-PCR反应以从SIV H3N2中精确地分 离SalI-NotI片段形式的编码NP蛋白的基因(图12和SEQ ID NO：18)。 纯化之后，将1564bp的RT-PCR产物与载体PCRII-direct(Invitrogen Reference K2000-01)连接，得到载体pPB123(5485bp)。
用SalI和NotI消化载体pPB123以释放1558bp的含有NP基因 的SalI-NotI片段。将此片段与预先经SalI和NotI消化的载体 pVR1012(实施例7)连接，得到质粒pPB132(6449bp)(图13)。
实施例14：构建质粒pAB025(PRRSV ORF5基因，Lelystad株)
用根据实施例4所述技术制备的PRRSV病毒(Lelystad株)基因组 RNA(J.Meulenberg等，病毒学(Virology)，1993，19，62-72)， 和下列寡核苷酸：
AB055(34聚体)(SEQ ID NO：19)
5’ACGCGTCGACAATATGAGATGTTCTCACAAATTG3’
AB056(33聚体)(SEQ ID NO：20)
5’CGCGGATCCCGTCTAGGCCTCCCATTGCTCAGC3’
根据实施例6所述技术进行RT-PCR反应以从PRRS病毒Lelystad株 中精确地分离编码包膜糖蛋白E(gp25)的“ORF5”基因。纯化之后， 用SalI和BamHI消化630bp的RT-PCR产物以分离617bp的SalI- BamHI片段。将此片段与预先经SalI和BamHI消化的载体pVR1012 (实施例7)连接，得到质粒pAB025(5486bp)(图14)。
实施例15：构建质粒pAB001(PRRSV ORF5基因，USA株)
用根据实施例4所述技术制备的PRRSV病毒(ATCC VR2332株) 基因组RNA(M.Murtaugh等，Arch Virol，1995，140，1451- 1460)，和下列寡核苷酸：
AB001(30聚体)(SEQ ID NO：21)
5’AACTGCAGATGTTGGAGAAATGCTTGACCG3’
AB002(30聚体)(SEQ ID NO：22)
5’CGGGATCCCTAAGGACGACCCCATTGTTCC3’
根据实施例6所述技术进行RT-PCR反应以从PRRS病毒ATCC- VR2332株中精确地分离编码包膜糖蛋白E(gp25)的基因。纯化之后， 用PstI和BamHI消化620bp的RT-PCR产物以分离606bp的PstI- BamHI片断。将此片段与预先经PstI和BamHI消化的载体pVR1012 (实施例7)连接，得到质粒pAB001(5463bp)(图15)。
实施例16：构建质粒pAB091(PRRSV ORF3基因，Lelystad株)
用根据实施例4所述技术制备的PRRSV病毒(Lelystad株)基因组 RNA(J.Meulenberg等，病毒学，1993，19，62-72)，和下列寡核苷 酸：
AB170(32聚体)(SEQ ID NO：23)
5’AAACTGCAGCAATGGCTCATCAGTGTGCACGC3’
AB171(30聚体)(SEQ ID NO：24)
5’CGCGGATCCTTATCGTGATGTACTGGGGAG3’
根据实施例6所述技术进行RT-PCR反应以从PRRS病毒Lelystad株 中精确地分离编码包膜糖蛋白“gp45”的“ORF3”基因。纯化之后， 用PstI和BamHI消化818bp的RT-PCR产物以分离802bp的PstI- BamHI片断。将此片段与预先经PstI和BamHI消化的载体pVR1012 (实施例7)连接，得到质粒pAB091(5660bp)(图16)。
实施例17：构建质粒pAB092(PRRSV ORF3基因，USA株)
用根据实施例4所述技术制备的PRRSV病毒(ATCC VR2332株) 基因组RNA(M.Murtaugh等，Arch Virol，1995，140，1451- 1460)，和下列寡核苷酸：
AN172(32聚体)(SEQ ID NO：25)
5’AAACTGCAGCAATGGTTAATAGCTGTACATTC3’
AB173(32聚体)(SEQ ID NO：26)
5’CGCGGATCCCTATCGCCGTACGGCACTGAGGG3’
根据实施例6所述技术进行RT-PCR反应以从PRRS病毒ATCC- VR2332株中精确地分离编码包膜糖蛋白“gp45”的“ORF3”基因。 纯化之后，用PstI和BamHI消化785bp的RT-PCR产物以分离769bp 的PstI-BamHI片段。将此片段与预先经PstI和BamHI消化的载体 pVR1012(实施例7)连接，得到质粒pAB092(5627bp)(图17)。
实施例18：构建质粒pAB004(猪细小病毒VP2基因)
用根据实施例4所述技术制备的猪细小病毒(NADL2株)基因组 RNA(J.Vasudevacharya等，病毒学，1990，178，611-616)，和下 列寡核苷酸：
AB007(33聚体)(SEQ ID NO：27)
5’AAAACTGCAGAATGAGTGAAAATGTGGAACAAC3’
AB010(33聚体)(SEQ ID NO：28)
5’CGCGGATCCCTAGTATAATTTTCTTGGTATAAG3’
根据实施例6所述技术进行RT-PCR反应以扩增含有编码猪细小病毒 VP2蛋白之基因的1757bp的片段。纯化之后，用PstI和BamHI消化 RT-PCR产物，得到1740bp的PstI-BamHI片段。将此片段与预先经 PstI和BamHI消化的载体pVR1012(实施例7)连接，得到质粒pAB004 (6601bp)(图18)。
实施例19：构建质粒pAB069(猪瘟HCV E1基因)
用根据实施例4所述技术制备的猪瘟病毒(HCV)(Alfort株)基因组 RNA(G.Meyers等，病毒学，1989，171，18-27)，和下列寡核苷酸：
AB126(36聚体)(SEQ ID NO：29)
5’ACGCGTCGACATGAAACTAGAAAAAGCCCTGTTGGC3’
AB127(34聚体)(SEQ ID NO：30)
5’CGCGGATCCTCATAGCCGCCCTTGTGCCCCGGTC3’
根据实施例6所述技术进行RT-PCR反应以从HCV病毒中分离1363 bp的RT-PCR片段形式的编码E1蛋白的序列。纯化之后，用SalI和 BamHI消化此片段，得到1349bp的SalI-BamHI片段。将此片段与 预先经SalI和BamHI消化的载体pVR1012(实施例7)连接，得到质 粒pAB069(6218bp)(图19)。
实施例20：构建质粒pAB061(猪瘟HCV E2基因)
用根据实施例4所述技术制备的猪瘟病毒(HCV)(Alfort株)基因组 RNA(G.Meyers等，病毒学，1989，171，18-27)，和下列寡核苷酸：
AB118(36聚体)(SEQ ID NO：31)
5’ACGCGTCGACATGTCAACTACTGCGTTTCTCATTTG3’
AB119(33聚体)(SEQ ID NO：32)
5’CGCGGATCCTCACTGTAGACCAGCAGCGAGCTG3’
根据实施例6所述技术进行RT-PCR反应以从HCV病毒中分离1246bp 的RT-PCR片段形式的编码E2蛋白的序列。纯化之后，用SalI和 BamHI消化此片段，得到1232bp的SalI-BamHI片段。将此片段与 预先经SalI和BamHI消化的载体pVR1012(实施例7)连接，得到质 粒pAB061(6101bp)(图20)。
实施例21：构建质粒pPB162(缺失的大叶性肺炎放线杆菌apxI基因)
克隆大叶性肺炎放线杆菌apxI基因以缺失氨基酸719-846之间富 含甘氨酸的氨基酸区域(涉及钙离子的结合)。
用根据实施例2和3所述技术制备的大叶性肺炎放线杆菌(血清型 1)的基因组DNA(J.Frey等，感染和免疫(Infect.Immun.)，1991， 59，3026-3032)，和下列寡核苷酸：
PB174(32聚体)(SEQ ID NO：33)
5’TTGTCGACGTAAATAGCTAAGGAGACAACATG3’
PB189(29聚体)(SEQ ID NO：34)
5’TTGAATTCTTCTTCAACAGAATGTAATTC3’
进行PCR反应以扩增SalI-EcoRI片段形式的编码大叶性肺炎放线杆菌 溶血素I蛋白之apxI基因的5’部分。纯化之后，用SalI和EcoRI消化 2193bp的PCR产物以分离2183bp的SalI-EcoRI片段(片段A)。
用大叶性肺炎放线杆菌(血清型1)的基因组DNA(J.Frey等， Infect.Immun.，1991，59，3026-3032)，和下列寡核苷酸：
PB190(32聚体)(SEQ ID NO：35)
5’TTGAATTCTATCGCTACAGTAAGGAGTACGG3’
PB175(31聚体)(SEQ ID NO：36)
5’TTGGATCCGCTATTTATCATCTAAAAATAAC3’
进行PCR反应以扩增EcoRI-BamHI片段形式的编码大叶性肺炎放线 杆菌溶血素I蛋白之apxI基因的3’部分。纯化之后，用EcoRI和BamHI 消化576bp的PCR产物以分离566bp的EcoRI-BamHI片段(片段 B)。将片段A和B与预先经SalI和BamHI消化的载体pVR1012(实 施例7)连接，得到质粒pPB162(7619bp)(图21)。
实施例22：构建质粒pPB163(缺失的大叶性肺炎放线杆菌apxII基因)
克隆大叶性肺炎放线杆菌apxII基因以缺失氨基酸716-813之间富 含甘氨酸的氨基酸区域(涉及钙离子的结合)。
用根据实施例2和3所述技术制备的大叶性肺炎放线杆菌(血清型 9)的基因组DNA(M.Smits等，感染和免疫(Infection and Immunity)，1991，59，4497-4504)，和下列寡核苷酸：
PB176(31聚体)(SEQ ID NO：37)
5’TTGTCGACGATCAATTATATAAAGGAGACTC3’
PB191(30聚体)(SEQ ID NO：38)
5’TTGAATTCCTCTTCAACTGATTTGAGTGAG3’
进行PCR反应以扩增SalI-EcoRI片段形式的编码大叶性肺炎放线杆菌 溶血素II蛋白之apxII基因的5’部分。纯化之后，用SalI和EcoRI消 化2190bp的PCR产物以分离2180bp的SalI-EcoRI片段(片段A)。
用大叶性肺炎放线杆菌(血清型9)的基因组DNA(M.Smits等，感 染和免疫，1991，59，4497-4504)，和下列寡核苷酸：
PB192(29聚体)(SEQ ID NO：39)
5’TTGAATTCGTAAATCTTAAAGACCTCACC3’
PB177(30聚体)(SEQ ID NO：40)
5’TTGGATCCACCATAGGATTGCTATGATTTG3’
进行PCR反应以扩增EcoRI-BamHI片段形式的编码大叶性肺炎放线 杆菌溶血素II蛋白之apxII基因的3’部分。纯化之后，用EcoRI和 BamHI消化473bp的PCR产物以分离463bp的EcoRI-BamHI片段 (片段B)。
将片段A和B与预先经SalI和BamHI消化的载体pVR1012(实 施例7)连接，得到质粒pPB163(7513bp)(图22)。
实施例23：构建质粒pPB174’，pPB189和pPB190(缺失的大叶性肺 炎放线杆菌apxIII基因)
apxIII缺失的第一个实施例(质粒pPB174’)
克隆大叶性肺炎放线杆菌apxIII基因以缺失氨基酸733-860之间 富含甘氨酸的氨基酸区域(涉及钙离子的结合)。
用根据实施例2和3所述技术制备的大叶性肺炎放线杆菌(血清型 8)的基因组DNA(M.Smits，1992，Genbank序列登记号为 X68815)，和下列寡核苷酸：
PB278(30聚体)(SEQ ID NO：41)
5’TTTGTCGACATGAGTACTTGGTCAAGCATG3’
PB279(28聚体)(SEQ ID NO：42)
5’TTTATCGATTCTTCTACTGAATGTAATTC3’
进行PCR反应以扩增SalI-ClaI片段形式的apxIII基因(编码大叶性肺 炎放线杆菌溶血素III蛋白)的5’部分。纯化之后，用SalI和ClaI消化 2216bp的PCR产物以分离2205bp的SalI-ClaI片段(片段A)。
用大叶性肺炎放线杆菌(血清型8)的基因组DNA(M.Smits， 1992，Genbank序列登记号为X68815)，和下列寡核苷酸：
PB280(33聚体)(SEQ ID NO：43)
5’TTTATCGATTTATGTTTATCGTTCCACTTCAGG3’
PB307(32聚体)(SEQ ID NO：44)
5’TTGGATCCTTAAGCTGCTCTAGCTAGGTTACC3’
进行PCR反应以扩增ClaI-BamHI片段形式的apxIII基因(编码大叶性 肺炎放线杆菌溶血素III蛋白)的3’部分。纯化之后，用ClaI和BamHI 消化596bp的PCR产物以分离583bp的ClaI-BamHI片段(片段B)。 将片段A和B与预先经SalI和BamHI消化的载体pVR1012(实施例 7)连接，得到质粒pPB174’(7658bp)(图23)。
apxIII缺失的第二个实施例(质粒pPB189)
克隆大叶性肺炎放线杆菌apxIII基因以缺失氨基酸705-886之间 富含甘氨酸的氨基酸区域(涉及钙离子的结合)。
用根据实施例2和3所述技术制备的大叶性肺炎放线杆菌(血清型 8)的基因组DNA(M.Smits，1992，Genbank序列登记号为 X68815)，和下列寡核苷酸：
PB278(30聚体)(SEQ ID NO：41)
5’TTTGTCGACATGAGTACTTGGTCAAGCATG3’
PB303(32聚体)(SEQ ID NO：45)
5’TTTATCGATTTCTTCACGTTTACCAACAGCAG3’
进行PCR反应以扩增SalI-ClaI片段形式的apxIII基因(编码大叶性肺 炎放线杆菌溶血素III蛋白)的5’部分。纯化之后，用SalI和ClaI消化 2133bp的PCR产物以分离2122bp的SalI-ClaI片段(片段A)。
用大叶性肺炎放线杆菌(血清型8)的基因组DNA(M.Smits， 1992，Genbank序列登记号为X68815)，和下列寡核苷酸：
PB306(31聚体)(SEQ ID NO：46)
5’TTTATCGATTCTGATTTTTCCTTCGATCGTC 3’
PB307(32聚体)(SEQ ID NO：44)
5’TTGGATCCTTAAGCTGCTCTAGCTAGGTTACC 3’
进行PCR反应以扩增ClaI-BamHI片段形式的apxIII基因(编码大叶性 肺炎放线杆菌溶血素III蛋白)的3’部分。纯化之后，用ClaI和BamHI 消化518bp的PCR产物以分离506bp的ClaI-BamHI片段(片段B)。 将片段A和B与预先经SalI和BamHI消化的载体pVR1012(实施例 7)连接，得到质粒pPB189(7496bp)(图24)。
apxIII缺失的第三个实施例(质粒pPB190)
克隆大叶性肺炎放线杆菌apxIII基因以缺失氨基酸718-876之间 富含甘氨酸的氨基酸区域(涉及钙离子的结合)。
用根据实施例2和3所述技术制备的大叶性肺炎放线杆菌(血清型 8)的基因组DNA(M.Smits，1992，Genbank序列登记号为 X68815)，和下列寡核苷酸：
PB278(30聚体)(SEQ ID NO：41)
5’TTTGTCGACATGAGTACTTGGTCAAGCATG3’
PB304(33聚体)(SEQ ID NO：47)
5’TTTATCGATACCTGATTGCGTTAATTCATAATC3’
进行PCR反应以扩增SalI-ClaI片段形式的apxIII基因(编码大叶性肺 炎放线杆菌溶血素III蛋白)的5’部分。纯化之后，用SalI和ClaI消化 2172bp的PCR产物以分离2161bp的SalI-ClaI片段(片段A)。
用大叶性肺炎放线杆菌(血清型8)的基因组DNA(M.Smits， 1992，Genbank序列登记号为X68815)，和下列寡核苷酸：
PB305(31聚体)(SEQ ID NO：48)
5’TTTATCGATAAATCTAGTGATTTAGATAAAC3’
PB307(32聚体)(SEQ ID NO：44)
5’TTGGATCCTTAAGCTGCTCTAGCTAGGTTACC3’
进行PCR反应以扩增ClaI-BamHI片段形式的apxIII基因(编码大叶性 肺炎放线杆菌溶血素III蛋白)的3’部分。纯化之后，用ClaI和BamHI 消化548bp的PCR产物以分离536bp的ClaI-BamHI片段(片段B)。 将片段A和B与预先经SalI和BamHI消化的载体pVR1012(实施例 7)连接，得到质粒pPB190(7565bp)(图25)。
实施例24：制备和纯化质粒
为了制备欲接种动物的质粒，可使用能得到超螺旋形式占优势的纯 化质粒悬浮液的任何技术，这些技术是本领域技术人员所熟知的。这里 可特别提到J.Sambrook等人(分子克隆：实验室手册，第2版，冷泉 港实验室，冷泉港，纽约，1989)所述的碱裂解技术，接着再在溴化乙 锭的存在下，在氯化铯梯度中进行2次连续的超速离心。也可参照专利 申请PCT WO95/21250和PCT WO96/02658，它们描述了工业化规 模生产可用于接种之质粒的方法。为了制备疫苗(见实施例17)，可重新 悬浮纯化的质粒以得到适于储存的高浓度溶液(＞2mg/ml)。为此，将质 粒重新悬浮于超纯水或TE缓冲液(10mM Tris-HCl；1mM EDTA， pH8.0)中。
实施例25：制备联合疫苗
从其浓缩溶液(实施例16)开始混合制备联合疫苗所需的多种质 粒。制备混合物以使各个质粒的终浓度相当于各个质粒的有效剂量。可 被用于调节疫苗终浓度的溶液可以是0.9％的NaCl溶液，也可以是PBS 缓冲液。
也可以将特殊的制剂，如脂质体，阳离子脂质用于制备疫苗。
实施例26：对猪的接种
以每种质粒100，250或500μg的剂量接种猪。
通过肌内途径用针头进行注射。此时，以2ml的体积施用疫苗剂 量。
也可使用在5个点分送0.2ml剂量(每个注射点0.04ml)的液体喷射 注射器装置(不带针头)(如“PIGJET”装置)，经由皮内途径进行注射。 此时，施用的疫苗剂量体积为0.2或0.4ml，这分别相应于注射1次或 2次。当利用PIGJET装置进行2次连续的注射时，应将注射区间隔开 以使2个注射区彼此间隔约1-2cm的距离。
序列表
<110>梅瑞尔公司
<120>抗猪生殖和呼吸疾病的多核苷酸疫苗制剂
<130>454313-2230.1
<140>09/784,984
<141>2001-02-16
<150>FR 96/09338
<151>1996-07-19
<150>PCT/FR97/01313
<151>1997-07-15
<150>US6,207,165
<151>2001-03-27
<160>54
<170>PatentIn version 3.1
<210>1
<211>2742
<212>DNA
<213>假狂犬病病毒
<220>
<221>CDS
<222>(1)..(2742)
<223>
<400>1
atg ccc gct ggt ggc ggt ctt tgg cgc ggg ccc cgg ggg cat cgg ccc 48
Met Pro Ala Gly Gly Gly Leu Trp Arg Gly Pro Arg Gly His Arg Pro
1 5 10 15
ggg cac cac ggc ggt gct ggc ctc gga cgt ctt tgg cct gct cca cac 96
Gly His His Gly Gly Ala Gly Leu Gly Arg Leu Trp Pro Ala Pro His
20 25 30
cac gct gca gct gcg cgg ggc gcc gtc gcg cta gcg ctg ctg ctg ctg 144
His Ala Ala Ala Ala Arg Gly Ala Val Ala Leu Ala Leu Leu Leu Leu
35 40 45
gcg ctc gcc gcg gcc ccg ccg tgc ggc gcg gcg gcc gtg acg cgg gcc 192
Ala Leu Ala Ala Ala Pro Pro Cys Gly Ala Ala Ala Val Thr Arg Ala
50 55 60
gcc tcg gcc tcg ccg acg ccc ggg acg ggc gcc acc ccc aac gac gtc 240
Ala Ser Ala Ser Pro Thr Pro Gly Thr Gly Ala Thr Pro Asn Asp Val
65 70 75 80
tcc gcc gag gcg tcc ctc gag gag atc gag gcg ttc tcc ccc ggc ccc 288
Ser Ala Glu Ala Ser Leu Glu Glu Ile Glu Ala Phe Ser Pro Gly Pro
85 90 95
tcg gag gcc ccc gac ggc gag tac ggc gac ctg gac gcg cgg acg gcc 336
Ser Glu Ala Pro Asp Gly Glu Tyr Gly Asp Leu Asp Ala Arg Thr Ala
100 105 110
gtg cgc gcg gcc gcg acc gag cgg gac cgc ttc tac gtc tgc ccg ccg 384
Val Arg Ala Ala Ala Thr Glu Arg Asp Arg Phe Tyr Val Cys Pro Pro
115 120 125
ccg tcc ggc tcc acg gtg gtg cgg ctg gag ccc gag cag gcc tgc ccc 432
Pro Ser Gly Ser Thr Val Val Arg Leu Glu Pro Glu Gln Ala Cys Pro
130 135 140
gag tac tcg cag ggg cgc aac ttc acg gag ggg atc gcc ctg ctc ttc 480
Glu Tyr Ser Gln Gly Arg Asn Phe Thr Glu Gly Ile Ala Leu Leu Phe
145 150 155 160
aag gag aac atc gcc ccg cac aag ttc ag gcc cac atc tac tac aag 528
Lys Glu Asn IIe Ala Pro His Lys Phe Lys Ala His Ile Tyr Tyr Lys
165 170 175
aac gtc atc gtc acg acc gtg tgg tcc ggg agc acg tac gcg gcc atc 576
Asn Val Ile Val Thr Thr Val Trp Ser Gly Ser Thr Tyr Ala Ala Ile
180 185 190
acg aac cgc ttc aca gac cgc gtg ccc gtc ccc gtg cag gag atc acg 624
Thr Asn Arg Phe Thr Asp Arg Val Pro Val Pro Val Gln Glu Ile Thr
195 200 205
gac gtg atc gac cgc cgc ggc aag tgc gtc tcc aag gcc gag tac gtg 672
Asp Val Ile Asp Arg Arg Gly Lys Cys Val Ser Lys Ala Glu Tyr Val
210 215 220
cgc aac aac cac aag gtg acc gcc ttc gac cgc gac gag aac ccc gtc 720
Arg Asn Asn His Lys Val Thr Ala Phe Asp Arg Asp Glu Asn Pro Val
225 230 235 240
gag gtg gac ctg cgc ccc tcg cgc ctg aac gcg ctc ggc acc cgc gcc 768
Glu Val Asp Leu Arg Pro Ser Arg Leu Asn Ala Leu Gly Thr Arg Ala
245 250 255
tgg cac acc acc aac gac acc tac acc aag atc ggc gcc gcg ggc ttc 816
Trp His Thr Thr Asn Asp Thr Tyr Thr Lys Ile Gly Ala Ala Gly Phe
260 265 270
tac cag acg ggc acc tcc gtc aac tgc atc gtc gag gag gtg gag gcg 864
Tyr Gln Thr Gly Thr Ser Val Asn Cys Ile Val Glu Glu Val Glu Ala
275 280 285
cgc tcc gtg tac ccc tac gac tcc ttc gcc ctg tcc acg ggg gac att 912
Arg Ser Val Tyr Pro Tyr Asp Ser Phe Ala Leu Ser Thr Gly Asp Ile
290 295 300
gtg tac atg tcc ccc ttc tac ggc ctg cgc gag ggg gcc cac ggg gag 960
Val Tyr Met Ser Pro Phe Tyr Gly Leu Arg Glu Gly Ala His Gly Glu
305 310 315 320
cag atc ggc tac gcg ccc ggg cgc ttc cag cag gtg gag cac tac tac 1008
Gln Ile Gly Tyr Ala Pro Gly Arg Phe Gln Gln Val Glu His Tyr Tyr
325 330 335
ccc atc gac ctg gac tcg cgc ctc cgc gcc tcc gag agc gtg acg cgc 1056
Pro Ile Asp Leu Asp Ser Arg Leu Arg Ala Ser Glu Ser Val Thr Arg
340 345 350
aac ttt cta cgc acg ccg cac ttc acg gtg gcc tgg gac tgg gcc ccc 1104
Asn Phe Leu Arg Thr Pro His Phe Thr Val Ala Trp Asp Trp Ala Pro
355 360 365
aag acg cgg cgc gtg tgc agc ctg gcc aag tgg cgc gag gcc gag gag 1152
Lys Thr Arg Arg Val Cys Ser Leu Ala Lys Trp Arg Glu Ala Glu Glu
370 375 380
atg acc cgc gac gag acg cgc gac ggc tcc ttc cgc ttc acg tcg cgg 1200
Met Thr Arg Asp Glu Thr Arg Asp Gly Ser Phe Arg Phe Thr Ser Arg
385 390 395 400
gcc ctg ggc gcc tcc ttc gtc agc gac gtc acg cag ctg gac ctg cag 1248
Ala Leu Gly Ala Ser Phe Val Ser Asp Val Thr Gln Leu Asp Leu Gln
405 410 415
cgc gtg cac ctg ggc gac tgc gtc ctc cgc gag gcc tcg gag gcc atc 1296
Arg Val His Leu Gly Asp Cys Val Leu Arg Glu Ala Ser Glu Ala Ile
420 425 430
gac gcc atc tac cgg cgg cgc tac aac agc acg cac gtg ctg gcc ggc 1344
Asp Ala Ile Tyr Arg Arg Arg Tyr Asn Ser Thr His Val Leu Ala Gly
435 440 445
gac agg ccc gag gtg tac ctc gcc cgc ggg ggc ttc gtg gtg gcc ttc 1392
Asp Arg Pro Glu Val Tyr Leu Ala Arg Gly Gly Phe Val Val Ala Phe
450 455 460
cgc ccg ctg atc tcg aac gag ctg gcg cag ctg tac gcg cgc gag ctc 1440
Arg Pro Leu Ile Ser Asn Glu Leu Ala Gln Leu Tyr Ala Arg Glu Leu
465 470 475 480
gag cgc ctc ggc ctc gcc ggc gtc gtg ggc ccc gcg gcc ccc gcg gcc 1488
Glu Arg Leu Gly Leu Ala Gly Val Val Gly Pro Ala Ala Pro Ala Ala
485 490 495
gcc cgt cgg gcc cgg cgc tcc ccc ggc ccg gcg ggg acg ccc gag ccg 1536
Ala Arg Arg Ala Arg Arg Ser Pro Gly Pro Ala Gly Thr Pro Glu Pro
500 505 510
ccg gcc gtc aac ggc acg ggg cac ctg cgc atc acc acg ggc tcg gcg 1584
Pro Ala Val Asn Gly Thr Gly His Leu Arg Ile Thr Thr Gly Ser Ala
515 520 525
gag ttt gcg cgc ctg cag ttc acc tac gac cac atc cag gcg cac gtg 1632
Glu Phe Ala Arg Leu Gln Phe Thr Tyr Asp His Ile Gln Ala His Val
530 535 540
aac gac atg ctg ggc cgc atc gcg gcc gcc tgg tgc gag ctg cag aac 1680
Asn Asp Met Leu Gly Arg Ile Ala Ala Ala Trp Cys Glu Leu Gln Asn
545 550 555 560
aag gac cgc acc ctg tgg agc gag atg tcg cgc ctg aac ccc agc gcc 1728
Lys Asp Arg Thr Leu Trp Ser Glu Met Ser Arg Leu Asn Pro Ser Ala
565 570 575
gtg gcc acg gcc gcg ctc ggc cag cgc gtc tgc gcg cgc atg ctc ggc 1776
Val Ala Thr Ala Ala Leu Gly Gln Arg Val Cys Ala Arg Met Leu Gly
580 585 590
gac gtg atg gcc atc tcg cgg tgc gtg gag gtg cgc ggc ggc gtg tac 1824
Asp Val Met Ala Ile Ser Arg Cys Val Glu Val Arg Gly Gly Val Tyr
595 600 605
gtg cag aac tcc atg cgc gtg ccc ggc gag cgc ggc acg tgc tac agc 1872
Val Gln Asn Ser Met Arg Val Pro Gly Glu Arg Gly Thr Cys Tyr Ser
610 615 620
cgc ccg ctg gtc acc ttc gag cac aac ggc acg ggc gtg atc gag ggc 1920
Arg Pro Leu Val Thr Phe Glu His Asn Gly Thr Gly Val Ile Glu Gly
625 630 635 640
cag ctc ggc gac gac aac gag ctc ctc atc tcg cgc gac ctc atc gag 1968
Gln Leu Gly Asp Asp Asn Glu Leu Leu Ile Ser Arg Asp Leu Ile Glu
645 650 655
ccc tgc acc ggc aac cac cgg cgc tac ttt aag ctg ggg agc ggg tac 2016
Pro Cys Thr Gly Asn His Arg Arg Tyr Phe Lys Leu Gly Ser Gly Tyr
660 665 670
gtg tac tac gag gac tac aac tac gtg cgc atg gtg gag gtg ccc gag 2064
Val Tyr Tyr Glu Asp Tyr Asn Tyr Val Arg Met Val Glu Val Pro Glu
675 680 685
acg atc agc acg cgg gtt acc ctg aac ctg acg ctg ctg gag gac cgc 2112
Thr Ile Ser Thr Arg Val Thr Leu Asn Leu Thr Leu Leu Glu Asp Arg
690 695 700
gag ttc ctg ccc ctc gag gtg tac acg cgc gag gag ctc gcc gac acg 2160
Glu Phe Leu Pro Leu Glu Val Tyr Thr Arg Glu Glu Leu Ala Asp Thr
705 710 715 720
ggc ctc ctg gac tac agc gag atc cag cgc cgc aac cag ctg cac gcg 2208
Gly Leu Leu Asp Tyr Ser Glu Ile Gln Arg Arg Asn Gln Leu His Ala
725 730 735
ctc aag ttc tac gac atc gac cgc gtg gtc aag gtg gac cac aac gtg 2256
Leu Lys Phe Tyr Asp Ile Asp Arg Val Val Lys Val Asp His Asn Val
740 745 750
gtg ctg ctg cgc ggc atc gcc aac ttc ttc cag ggc ctc ggc gac gtg 2304
Val Leu Leu Arg Gly Ile Ala Asn Phe Phe Gln Gly Leu Gly Asp Val
755 760 765
ggc gcc gcc gtc ggc aag gtg gtc ctg ggt gcc acg ggg gcc gtg atc 2352
Gly Ala Ala Val Gly Lys Val Val Leu Gly Ala Thr Gly Ala Val Ile
770 775 780
tcg gcc gtc ggc ggc atg gtg tcc ttc ctg tcc aac ccc ttc ggg gcg 2400
Ser Ala Val Gly Gly Met Val Ser Phe Leu Ser Asn Pro Phe Gly Ala
785 790 795 800
ctc gcc atc ggg ctg ctg gtg ctg gcc ggc ctg gtc gcg gcc ttc ctg 2448
Leu Ala Ile Gly Leu Leu Val Leu Ala Gly Leu Val Ala Ala Phe Leu
805 810 815
gcc tac cgg cac atc tcg cgc ctg cgc cgc aac ccc atg aag gcc ctg 2496
Ala Tyr Arg His Ile Ser Arg Leu Arg Arg Asn Pro Met Lys Ala Leu
820 825 830
tac ccc gtc acg acg aag acg ctc aag gag gac ggc gtc gac gaa ggc 2544
Tyr Pro Val Thr Thr Lys Thr Leu Lys Glu Asp Gly Val Asp Glu Gly
835 840 845
gac gtg gac gag gcc aag ctg gac cag gcc cgg gac atg atc cgg tac 2592
Asp Val Asp Glu Ala Lys Leu Asp Gln Ala Arg Asp Met Ile Arg Tyr
850 855 860
atg tcc atc gtg tcg gcc ctc gag cag cag gag cac aag gcg cgc aag 2640
Met Ser Ile Val Ser Ala Leu Glu Gln Gln Glu His Lys Ala Arg Lys
865 870 875 880
aag aac agc ggg ccc gcg ctg ctg gcc agc cgc gtc ggg gcg atg gcc 2688
Lys Asn Ser Gly Pro Ala Leu Leu Ala Ser Arg Val Gly Ala Met Ala
885 890 895
acg cgc cgc cgg cac tac cag cgc ctc gag agc gag gac ccc gac gcc 2736
Thr Arg Arg Arg His Tyr Gln Arg Leu Glu Ser Glu Asp Pro Asp Ala
900 905 910
ctg tag 2742
Leu
<210>2
<211>33
<212>DNA
<213>Aujesky病病毒(NIA3株)
<400>2
gatgcccgct ggtggcggtc tttggcgcgg gcc 33
<210>3
<211>33
<212>DNA
<213>Aujesky病病毒(NIA3株)
<400>3
acgtctacgg gcgaccaccg ccagaaaccg cgc 33
<210>4
<211>45
<212>DNA
<213>Aujesky病病毒(NIA3株)
<400>4
ggcactacca gcgcctcgag agcgaggacc ccgacgccct gtagg 45
<210>5
<211>49
<212>DNA
<213>Aujesky病病毒(NIA3株)
<400>5
gatccctaca gggcgtcggg gtcctcgctc tcgaggcgct ggtagtgcc 49
<210>6
<211>1213
<212>DNA
<213>Aujesky病病毒(NIA3株)
<220>
<221>CDS
<222>(1)..(1212)
<223>
<400>6
atg ctg ctc gca gcg cta ttg gcg gcg ctg gtc gcc cgg acg acg ctc 48
Met Leu Leu Ala Ala Leu Leu Ala Ala Leu Val Ala Arg Thr Thr Leu
1 5 10 15
ggt gcg gac gtg gac gcc gtg ccc gcg ccg acc ttc ccc ccg ccc gcg 96
Gly Ala Asp Val Asp Ala Val Pro Ala Pro Thr Phe Pro Pro Pro Ala
20 25 30
tac ccg tac acc gag tcg tgg cag ctg acg ctg acg acg gtc ccc tcg 144
Tyr Pro Tyr Thr Glu Ser Trp Gln Leu Thr Leu Thr Thr Val Pro Ser
35 40 45
ccc ttc gtc ggc ccc gcg gac gtc tac cac acg cgc ccg ctg gag gac 192
Pro Phe Val Gly Pro Ala Asp Val Tyr His Thr Arg Pro Leu Glu Asp
50 55 60
ccg tgc ggg gtg gtg gcg ctg atc tcc gac ccg cag gtg gac cgg ctg 240
Pro Cys Gly Val Val Ala Leu Ile Ser Asp Pro Gln Val Asp Arg Leu
65 70 75 80
ctg aac gag gcg gtg gcc cac cgg cgg ccc acg tac cgc gcc cac gtg 288
Leu Asn Glu Ala Val Ala His Arg Arg Pro Thr Tyr Arg Ala His Val
85 90 95
gcc tgg tac cgc atc gcg gac ggg tgc gca cac ctg ctg tac ttt atc 336
Ala Trp Tyr Arg Ile Ala Asp Gly Cys Ala His Leu Leu Tyr Phe Ile
100 105 110
gag tac gcc gac tgc gac ccc agg cag gca gat ctt tgg gcg ctg ccg 384
Glu Tyr Ala Asp Cys Asp Pro Arg Gln Ala Asp Leu Trp Ala Leu Pro
115 120 125
gcg ccg cac cac gcc gat gtg gtg gac ccc gtc cgc gga cta cat gtt 432
Ala Pro His His Ala Asp Val Val Asp Pro Val Arg Gly Leu His Val
130 135 140
ccc cac gga gga cga gct ggg gct gct cat ggt ggc ccc cgg gcg gtt 480
Pro His Gly Gly Arg Ala Gly Ala Ala His Gly Gly Pro Arg Ala Val
145 150 155 160
caa cga ggg cca gta ccg gcg cct ggt gtc cgt cga cgg cgt gaa cat 528
Gln Arg Gly Pro Val Pro Ala Pro Gly Val Arg Arg Arg Arg Glu His
165 170 175
cct cac cga ctt cat ggt ggc gct ccc cga ggg gca aga gtg ccc gtt 576
Pro His Arg Leu His Gly Gly Ala Pro Arg Gly Ala Arg Val Pro Val
180 185 190
cgc ccg cgt gga cca gca ccg cac gta caa gtt cgg cgc gtg ctg gag 624
Arg Pro Arg Gly Pro Ala Pro His Val Gln Val Arg Arg Val Leu Glu
195 200 205
cga cga cag ctt caa gcg ggg cgt gga cgt gat gcg att cct gac gcc 672
Arg Arg Gln Leu Gln Ala Gly Arg Gly Arg Asp Ala Ile Pro Asp Ala
210 215 220
gtt cta cca gca gcc ccc gca ccg gga ggt ggt gaa cta ctg gta ccg 720
Val Leu Pro Ala Ala Pro Ala Pro Gly Gly Gly Glu Leu Leu Val Pro
225 230 235 240
caa gaa cgg ccg gac gct ccc gcg ggc cca cgc cgc cgc cac gcc gta 768
Gln Glu Arg Pro Asp Ala Pro Ala Gly Pro Arg Arg Arg His Ala Val
245 250 255
cgc cat cga ccc cgc gcg gcc ctc ggc ggg ctc gcc gag gcc ccg gcc 816
Arg His Arg Pro Arg Ala Ala Leu Gly Gly Leu Ala Glu Ala Pro Ala
260 265 270
ccg gcc ccg gcc ccg gcc ccg gcc gaa gcc cga gcc cgc ccc ggc gac 864
Pro Ala Pro Ala Pro Ala Pro Ala Glu Ala Arg Ala Arg Pro Gly Asp
275 280 285
gcc cgc gcc ccc cga ccg cct gcc cga gcc ggc gac gcg gga cca cgc 912
Ala Arg Ala Pro Arg Pro Pro Ala Arg Ala Gly Asp Ala Gly Pro Arg
290 295 300
cgc cgg ggg ccg ccc cac gcc gcg acc ccc gag gcc cga gac gcc gca 960
Arg Arg Gly Pro Pro His Ala Ala Thr Pro Glu Ala Arg Asp Ala Ala
305 310 315 320
ccg ccc ctt cgc ccc gcc ggc cgt cgt gcc cag cgg gtg gcc gca gcc 1008
Pro Pro Leu Arg Pro Ala Gly Arg Arg Ala Gln Arg Val Ala Ala Ala
325 330 335
cgc gga gcc gtt cca gcc gcg gac ccc cgc cgc gcc ggg cgt ctc gcg 1056
Arg Gly Ala Val Pro Ala Ala Asp Pro Arg Arg Ala Gly Arg Leu Ala
340 345 350
cca ccg ctc ggt gat cgt cgg cac ggg cac cgc gat ggg cgc gct cct 1104
Pro Pro Leu Gly Asp Arg Arg His Gly His Arg Asp Gly Arg Ala Pro
355 360 365
ggt ggg cgt gtg cgt cta cat ctt ctt ccg cct gag ggg ggc gaa ggg 1152
Gly Gly Arg Val Arg Leu His Leu Leu Pro Pro Glu Gly Gly Glu Gly
370 375 380
gta tcg cct cct ggg cgg tcc cgc gga cgc cga cga gct aaa agc gca 1200
Val Ser Pro Pro Gly Arg Ser Arg Gly Arg Arg Arg Ala Lys Ser Ala
385 390 395 400
gcc cgg tcc gta g 1213
Ala Arg Ser Val
<210>9
<211>15
<212>DNA
<213>Aujesky病病毒(NIA3株)
<400>7
gatgctgctc gcagc 15
<210>8
<211>19
<212>DNA
<213>假狂犬病病毒
<400>8
gctgcgagca gcatctgca 19
<210>9
<211>32
<212>DNA
<213>猪流感病毒(SIV，H1N1″SW″株
<400>9
gttctgcagc acccgggagc aaaagcaggg ga 32
<210>10
<211>33
<212>DNA
<213>猪流感病毒(SIV，H1N1″SW″株
<400>10
attgcggccg ctagtagaaa caagggtgtt ttt 33
<210>11
<211>1701
<212>DNA
<213>猪流感病毒(SIV，H1N1″SW″株
<220>
<221>CDS
<222>(1)..(1698)
<223>
<400>11
atg gaa gca aaa cta ttc gta tta ttc tgt aca ttc act gcg ctg aaa 48
Met Glu Ala Lys Leu Phe Val Leu Phe Cys Thr Phe Thr Ala Leu Lys
1 5 10 15
gct gac acc atc tgt gta gga tac cat gct aac aat tcc aca gat act 96
Ala Asp Thr Ile Cys Val Gly Tyr His Ala Asn Asn Ser Thr Asp Thr
20 25 30
gtc gac aca ata ctg gag aag aat gtg act gtg act cat tca gtt aat 144
Val Asp Thr Ile Leu Glu Lys Asn Val Thr Val Thr His Ser Val Asn
35 40 45
tta cta gaa aac agt cat aat gga aaa ctc tgc agc ctg aat gga gta 192
Leu Leu Glu Asn Ser His Asn Gly Lys Leu Cys Ser Leu Asn Gly Val
50 55 60
gcc ccc ttg caa cta ggg aag tgc aac gta gca ggg tgg atc ctt ggc 240
Ala Pro Leu Gln Leu Gly Lys Cys Asn Val Ala Gly Trp Ile Leu Gly
65 70 75 80
aac cca gaa tgt gac ctg ttg ctc aca gcg aat tca tgg tct tac ata 288
Asn Pro Glu Cys Asp Leu Leu Leu Thr Ala Asn Ser Trp Ser Tyr Ile
85 90 95
ata gag act tca aat tca gaa aat gga aca tgc tac ccc gga gaa ttc 336
Ile Glu Thr Ser Asn Ser Glu Asn Gly Thr Cys Tyr Pro Gly Glu Phe
100 105 110
att gat tat gag gaa tta agg gag cag ctg agt tca gtg tct tca ttt 384
Ile Asp Tyr Glu Glu Leu Arg Glu Gln Leu Ser Ser Val Ser Ser Phe
115 120 125
gaa agg ttt gaa att ttc cca aaa gca aac tca tgg cca aat cat gag 432
Glu Arg Phe Glu Ile Phe Pro Lys Ala Asn Ser Trp Pro Asn His Glu
130 135 140
aca acc aaa ggt att aca gct gca tgc tct tac tct gga acc ccc agt 480
Thr Thr Lys Gly Ile Thr Ala Ala Cys Ser Tyr Ser Gly Thr Pro Ser
145 150 155 160
ttt tat cgg aat ttg cta tgg ata gta gag agg gaa aat tcc tat cct 528
Phe Tyr Arg Asn Leu Leu Trp Ile Val Glu Arg Glu Asn Ser Tyr Pro
165 170 175
aaa ctc agc aaa tca tac aca aac aac aaa ggg aaa gaa gtg ctt ata 576
Lys Leu Ser Lys Ser Tyr Thr Asn Asn Lys Gly Lys Glu Val Leu Ile
180 185 190
atc tgg gga gtg cac cac cct cca act acc aat gac caa caa agc ctc 624
Ile Trp Gly Val His His Pro Pro Thr Thr Asn Asp Gln Gln Ser Leu
195 200 205
tat cag aat gct gat gca tat gtt tca gtt ggg tca tca aaa tac aac 672
Tyr Gln Asn Ala Asp Ala Tyr Val Ser Val Gly Ser Ser Lys Tyr Asn
210 215 220
cga agg ttc aca cca gaa ata gca gct aga cct aaa gtc aaa gga caa 720
Arg Arg Phe Thr Pro Glu Ile Ala Ala Arg Pro Lys Val Lys Gly Gln
225 230 235 240
gca ggc aga atg aat tat tat tgg aca ttg tta gat caa gga gac acc 768
Ala Gly Arg Met Asn Tyr Tyr Trp Thr Leu Leu Asp Gln Gly Asp Thr
245 250 255
ata acg ttt gaa gcc act ggg aac tta ata gca cca tgg tac gcc ttc 816
Ile Thr Phe Glu Ala Thr Gly Asn Leu Ile Ala Pro Trp Tyr Ala Phe
260 265 270
gca ttg aat aag ggc tct ggt tct gga att ata acg tcg gat act ccg 864
Ala Leu Asn Lys Gly Ser Gly Ser Gly Ile Ile Thr Ser Asp Thr Pro
275 280 285
gtt cac aat tgt gat aca aag tgc caa acc cct cat ggg gcc ttg aac 912
Val His Asn Cys Asp Thr Lys Cys Gln Thr Pro His Gly Ala Leu Asn
290 295 300
agt agt ctt cct ttt cag aac gta cat ccc atc act att gga gaa tgc 960
Ser Ser Leu Pro Phe Gln Asn Val His Pro Ile Thr Ile Gly Glu Cys
305 310 315 320
ccc aaa tat gtt aaa agc acc aaa ctg aga atg gca aca gga cta agg 1008
Pro Lys Tyr Val Lys Ser Thr Lys Leu Arg Met Ala Thr Gly Leu Arg
325 330 335
aac gtc ccc tct att caa tcc aga gga ctt ttc gga gca att gct gga 1056
Asn Val Pro Ser Ile Gln Ser Arg Gly Leu Phe Gly Ala Ile Ala Gly
340 345 350
ttc att gaa gga gga tgg aca gga atg ata gat ggg tgg tat ggg tat 1104
Phe Ile Glu Gly Gly Trp Thr Gly Met Ile Asp Gly Trp Tyr Gly Tyr
355 360 365
cac cat cag aat gag cag gga tct ggt tac gca gct gat cag aaa agc 1152
His His Gln Asn Glu Gln Gly Ser Gly Tyr Ala Ala Asp Gln Lys Ser
370 375 380
aca caa att gca att gac ggg atc agc aac aaa gtg aac tca gta att 1200
Thr Gln Ile Ala Ile Asp Gly Ile Ser Asn Lys Val Asn Ser Val Ile
385 390 395 400
gag aaa atg aac act caa ttc act gca gtg ggc aag gaa ttc aat gat 1248
Glu Lys Met Asn Thr Gln Phe Thr Ala Val Gly Lys Glu Phe Asn Asp
405 410 415
cta gaa aaa agg att gag aat ttg aat aag aaa gtc gat gat ggg ttt 1296
Leu Glu Lys Arg Ile Glu Asn Leu Asn Lys Lys Val Asp Asp Gly Phe
420 425 430
ttg gat gtt tgg aca tat aat gct gag ttg ctc gtt ttg ctc gag aac 1344
Leu Asp Val Trp Thr Tyr Asn Ala Glu Leu Leu Val Leu Leu Glu Asn
435 440 445
gaa agg act cta gat ttc cat gac ttt aac gta aga aat tta tat gaa 1392
Glu Arg Thr Leu Asp Phe His Asp Phe Asn Val Arg Asn Leu Tyr Glu
450 455 460
aag gtc aag tca caa ttg aga aac aat gcc aaa gaa atc ggg aat ggt 1440
Lys Val Lys Ser Gln Leu Arg Asn Asn Ala Lys Glu Ile Gly Asn Gly
465 470 475 480
tgt ttt gag ttc tat cac aaa tgt gat gac gaa tgc atg aag agc gta 1488
Cys Phe Glu Phe Tyr His Lys Cys Asp Asp Glu Cys Met Lys Ser Val
485 490 495
aag aat ggc aca tat aac tac ccc aaa tat tca gaa gaa tcc aaa ttg 1536
Lys Asn Gly Thr Tyr Asn Tyr Pro Lys Tyr Ser Glu Glu Ser Lys Leu
500 505 510
aat aga gag gaa ata gac ggt gtg aaa cta gaa tca atg gga gtt tac 1584
Asn Arg Glu Glu Ile Asp Gly Val Lys Leu Glu Ser Met Gly Val Tyr
515 520 525
cag att ttg gcg atc tac tcc aca gtc gcc agt tcc ctg gtc ttg tta 1632
Gln Ile Leu Ala Ile Tyr Ser Thr Val Ala Ser Ser Leu Val Leu Leu
530 535 540
gtc tcc ctg ggg gca atc agc ttc tgg atg tgt tct aat ggg tca ttg 1680
Val Ser Leu Gly Ala Ile Ser Phe Trp Met Cys Ser Asn Gly Ser Leu
545 550 555 560
caa tgc aga ata tgc att taa 1701
Gln Cys Arg Ile Cys Ile
565
<210>12
<211>36
<212>DNA
<213>猪流感病毒(SIV，H1N1″SW″株
<400>12
ccggtcgacc gggataatca ctcactgagt gacatc 36
<210>13
<211>33
<212>DNA
<213>猪流感病毒(SIV，H1N1″SW″株
<400>13
ttgcggccgc tgtagaaaca agggtatttt tct 33
<210>14
<211>1497
<212>DNA
<213>猪流感病毒
<220>
<221>CDS
<222>(1)..(1494)
<223>
<400>14
atg gcg tct caa ggc acc aaa cga tct tat gag cag atg gaa acc ggt 48
Met Ala Ser Gln Gly Thr Lys Arg Ser Tyr Glu Gln Met Glu Thr Gly
1 5 10 15
gga gaa cgc cag aat gct act gaa atc aga gca tct gtt ggg gga atg 96
Gly Glu Arg Gln Asn Ala Thr Glu Ile Arg Ala Ser Val Gly Gly Met
20 25 30
gtt ggt gga att gga aga ttc tac ata cag atg tgc act gaa ctc aaa 144
Val Gly Gly Ile Gly Arg Phe Tyr Ile Gln Met Cys Thr Glu Leu Lys
35 40 45
ctc agt gac tat gaa ggg agg ctg atc cag aac agc ata aca ata gag 192
Leu Ser Asp Tyr Glu Gly Arg Leu Ile Gln Asn Ser Ile Thr Ile Glu
50 55 60
aga atg gtt ctc tct gca ttt gat gag agg agg aac aaa tac ctg gaa 240
Arg Met Val Leu Ser Ala Phe Asp Glu Arg Arg Asn Lys Tyr Leu Glu
65 70 75 80
gaa cat ccc agt gcg ggg aag gac cca aag aaa act gga ggt cca atc 288
Glu His Pro Ser Ala Gly Lys Asp Pro Lys Lys Thr Gly Gly Pro Ile
85 90 95
tac aga aag aga gac gga aaa tgg atg aga gag ctg att cta tat gac 336
Tyr Arg Lys Arg Asp Gly Lys Trp Met Arg Glu Leu Ile Leu Tyr Asp
100 105 110
aaa gag gag atc agg agg att tgg cgt caa gca aac aat ggt gaa gat 384
Lys Glu Glu Ile Arg Arg Ile Trp Arg Gln Ala Asn Asn Gly Glu Asp
115 120 125
gct act gct ggt ctc act cat ctg atg att tgg cat tcc aac ctg aat 432
Ala Thr Ala Gly Leu Thr His Leu Met Ile Trp His Ser Asn Leu Asn
130 135 140
gat gcc aca tat cag aga aca aga gct ctc gtg cgt act ggg atg gac 480
Asp Ala Thr Tyr Gln Arg Thr Arg Ala Leu Val Arg Thr Gly Met Asp
145 150 155 160
ccc aga atg tgc tct ctg atg caa gga tca act ctc ccg agg aga tct 528
Pro Arg Met Cys Ser Leu Met Gln Gly Ser Thr Leu Pro Arg Arg Ser
165 170 175
gga gct gct ggt gcg gca gta aag gga gtt ggg acg atg gta atg gaa 576
Gly Ala Ala Gly Ala Ala Val Lys Gly Val Gly Thr Met Val Met Glu
180 185 190
ctg att cgg atg ata aaa gcg ggg atc aat gat cgg aac ttc tgg aga 624
Leu Ile Arg Met Ile Lys Ala Gly Ile Asn Asp Arg Asn Phe Trp Arg
195 200 205
ggc gaa aat gga cga aga aca aga att gca tat gag aga atg tgc aac 672
Gly Glu Asn Gly Arg Arg Thr Arg Ile Ala Tyr Glu Arg Met Cys Asn
2l0 215 220
atc ctc aaa ggg aaa ttt cag aca gca gcg caa caa gca atg atg gac 720
Ile Leu Lys Gly Lys Phe Gln Thr Ala Ala Gln Gln Ala Met Met Asp
225 230 235 240
cag gtg cga gaa atg aca aat cct ggg aat gct gag act gaa gac ctt 768
Gln Val Arg Glu Met Thr Asn Pro Gly Asn Ala Glu Thr Glu Asp Leu
245 250 255
atc ttt ctg gca cga tct gca ctc att ctg aga gga tca gtg gct cat 816
Ile Phe Leu Ala Arg Ser Ala Leu Ile Leu Arg Gly Ser Val Ala His
260 265 270
aaa tcc tgc ctg cct gct tgt gta tat gga ctt gtt gtg gca agt gga 864
Lys Ser Cys Leu Pro Ala Cys Val Tyr Gly Leu Val Val Ala Ser Gly
275 280 285
tat gac ttt gaa aga gaa ggg tac tct cta gtc gga ata gat cct ttc 912
Tyr Asp Phe Glu Arg Glu Gly Tyr Ser Leu Val Gly Ile Asp Pro Phe
290 295 300
cgt ctg ctc caa aac agc cag gtg ttc agc ctc att aga cca aat gag 960
Arg Leu Leu Gln Asn Ser Gln Val Phe Ser Leu Ile Arg Pro Asn Glu
305 310 315 320
aat cca gca cat aag agt cag ctg gta tgg atg gca tgc cat tct gca 1008
Asn Pro Ala His Lys Ser Gln Leu Val Trp Met Ala Cys His Ser Ala
325 330 335
gca ttt gaa gat ctg aga gtg tca agt ttc atc aga ggg aca aga gtg 1056
Ala Phe Glu Asp Leu Arg Val Ser Ser Phe Ile Arg Gly Thr Arg Val
340 345 350
gtc cca aga gga caa ctg tcc acc aga gga gtt caa att gct tca aat 1104
Val Pro Arg Gly Gln Leu Ser Thr Arg Gly Val Gln Ile Ala Ser Asn
355 360 365
gaa aac atg gaa aca atg gag tcc agt act ctt gaa ctg aga agc aaa 1152
Glu Asn Met Glu Thr Met Glu Ser Ser Thr Leu Glu Leu Arg Ser Lys
370 375 380
tac tgg gct ata aga acc agg agc gga gga aac acc aac caa cag aga 1200
Tyr Trp Ala Ile Arg Thr Arg Ser Gly Gly Asn Thr Asn Gln Gln Arg
385 390 395 400
gca tct gca ggg caa atc agt gta caa ctt act ttc tcg gta cag aga 1248
Ala Ser Ala Gly Gln Ile Ser Val Gln Leu Thr Phe Ser Val Gln Arg
405 410 415
aat ctt cct ttc gag aga gcg acc atc atg gca gca ttt aca ggg aac 1296
Asn Leu Pro Phe Glu Arg Ala Thr Ile Met Ala Ala Phe Thr Gly Asn
420 425 430
act gaa ggc aga aca tct gac atg agg act gaa att ata aga atg atg 1344
Thr Glu Gly Arg Thr Ser Asp Met Arg Thr Glu Ile Ile Arg Met Met
435 440 445
gaa agt gcc aga cca gaa gat gtg tcc ttc cag ggg cgg gga gtc ttc 1392
Glu Ser Ala Arg Pro Glu Asp Val Ser Phe Gln Gly Arg Gly Val Phe
450 455 460
gag ctc tcg gac gaa aag gca acg aac ccg atc gtg cct tcc ttt gac 1440
Glu Leu Ser Asp Glu Lys Ala Thr Asn Pro Ile Val Pro Ser Phe Asp
465 470 475 480
atg agt aat gag gga tct tat ttc ttc gga gac aat gca gag gag tat 1488
Met Ser Asn Glu Gly Ser Tyr Phe Phe Gly Asp Asn Ala Glu Glu Tyr
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gac aat taa 1497
Asp Asn
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<223>
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Met Lys Thr Val Ile Ala Leu Ser Tyr Ile Phe Cys Leu Val Leu Gly
1 5 10 15
caa gac ctt cca gaa aat ggc agc agc aca gca aag cct ggt ctg gga 96
Gln Asp Leu Pro Glu Asn Gly Ser Ser Thr Ala Lys Pro Gly Leu Gly
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cat cat gcg gtg cca aac gga acg tta gtg aaa aca atc acg aat gat 144
His His Ala Val Pro Asn Gly Thr Leu Val Lys Thr Ile Thr Asn Asp
35 40 45
cag atc gaa gtg act aat gct act gag ctg gtc cag agt ttc tca atg 192
Gln Ile Glu Val Thr Asn Ala Thr Glu Leu Val Gln Ser Phe Ser Met
50 55 60
ggt aaa ata tgc aac aat cct cat cga gtt ctt gat gga gca aac tgt 240
Gly Lys Ile Cys Asn Asn Pro His Arg Val Leu Asp Gly Ala Asn Cys
65 70 75 80
aca ctg ata gat gct cta ttg ggg gac cct cat tgt gat ggc ttt caa 288
Thr Leu Ile Asp Ala Leu Leu Gly Asp Pro His Cys Asp Gly Phe Gln
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aat gag aaa tgg gac ctt ttc gtt gaa cgc agc aaa tgc ttc agc aac 336
Asn Glu Lys Trp Asp Leu Phe Val Glu Arg Ser Lys Cys Phe Ser Asn
100 105 110
tgt tac cct tat gat gtg cca gat tat gcc tcc ctt agg tca cta att 384
Cys Tyr Pro Tyr Asp Val Pro Asp Tyr Ala Ser Leu Arg Ser Leu Ile
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gcc tct tcg ggc act ttg gag ttt atc aat gaa ggt ttc aat tgg act 432
Ala Ser Ser Gly Thr Leu Glu Phe Ile Asn Glu Gly Phe Asn Trp Thr
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ggg gtc act cag aac gga gga agc aat gct tgc aag agg ggg cct gat 480
Gly Val Thr Gln Asn Gly Gly Ser Asn Ala Cys Lys Arg Gly Pro Asp
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agc ggt ttc ttc agt agg ctg aac tgg ttg tac aaa tca gga aac aca 528
Ser Gly Phe Phe Ser Arg Leu Asn Trp Leu Tyr Lys Ser Gly Asn Thr
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tac ccg atg ctg aac gtg act atg cca aac agt gat aat ttt gac aaa 576
Tyr Pro Met Leu Asn Val Thr Met Pro Asn Ser Asp Asn Phe Asp Lys
180 185 190
tta tac att tgg ggg gtt cac cat ccg agc aca gac agg gaa caa acc 624
Leu Tyr Ile Trp Gly Val His His Pro Ser Thr Asp Arg Glu Gln Thr
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aac cta tat gtt caa gta tca ggg aaa gca acg gtt ttc acc aag aga 672
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Gly Leu Ser Ser Arg Ile Ser Ile His Trp Thr Ile Val Lys Pro Gly
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Asp Ile Leu Ile Ile Asn Ser Asn Gly Asn Leu Ile Ala Pro Arg Gly
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tac ttc aaa atg cac aat ggg aga agc tca ata atg agg tca gat gca 864
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cca aat gac aaa ccc ttt caa aac gta aac aag atc aca tat ggg gca 960
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aaa ata gat ctc tgg tct tac aat gcg gaa ctt ctt gtc gct ctg gag 1344
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<223>
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Met Ala Ser Gln Gly Thr Lys Arg Ser Tyr Glu Gln Met Glu Thr Gly
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gtt ggt gga att gga aga ttc tac ata cag atg tgc act aaa ctc aaa 144
Val Gly Gly Ile Gly Arg Phe Tyr Ile Gln Met Cys Thr Lys Leu Lys
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ctc agt gac tat gaa ggg agg ctg atc cag aac agc ata aca ata gag 192
Leu Ser Asp Tyr Glu Gly Arg Leu Ile Gln Asn Ser Ile Thr Ile Glu
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Asn Pro Ala His Lys Ser Gln Leu Val Trp Met Ala Cys His Ser Ala
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<213>PRRSV病毒(Lelystad株)
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<213>大叶性肺炎放线杆菌(血清型1)
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<213>大叶性肺炎放线杆菌(血清型1)
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<213>大叶性肺炎放线杆菌(血清型1)
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<213>大叶性肺炎放线杆菌(血清型9)
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<212>DNA
<213>大叶性肺炎放线杆菌(血清型9)
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ttgaattcct cttcaactga tttgagtgag 30
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<212>DNA
<213>大叶性肺炎放线杆菌(血清型9)
<400>39
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<212>DNA
<213>大叶性肺炎放线杆菌(血清型9)
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<211>30
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<212>DNA
<213>大叶性肺炎放线杆菌(血清型8)
<400>42
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<212>DNA
<213>大叶性肺炎放线杆菌(血清型8)
<400>43
tttatcgatt tatgtttatc gttccacttc agg 33
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<211>32
<212>DNA
<213>大叶性肺炎放线杆菌(血清型8)
<400>44
ttggatcctt aagctgctct agctaggtta cc 32
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<212>DNA
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<212>DNA
<213>大叶性肺炎放线杆菌(血清型8)
<400>46
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<212>PRT
<213>假狂犬病病毒
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Glu Val Asp Leu Arg Pro Ser Arg Leu Asn Ala Leu Gly Thr Arg Ala
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565 570 575
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580 585 590
Asp Val Met Ala Ile Ser Arg Cys Val Glu Val Arg Gly Gly Val Tyr
595 600 605
Val Gln Asn Ser Met Arg Val Pro Gly Glu Arg Gly Thr Cys Tyr Ser
610 615 620
Arg Pro Leu Val Thr Phe Glu His Asn Gly Thr Gly Val Ile Glu Gly
625 630 635 640
Gln Leu Gly Asp Asp Asn Glu Leu Leu Ile Ser Arg Asp Leu Ile Glu
645 650 655
Pro Cys Thr Gly Asn His Arg Arg Tyr Phe Lys Leu Gly Ser Gly Tyr
660 665 670
Val Tyr Tyr Glu Asp Tyr Asn Tyr Val Arg Met Val Glu Val Pro Glu
675 680 685
Thr Ile Ser Thr Arg Val Thr Leu Asn Leu Thr Leu Leu Glu Asp Arg
690 695 700
Glu Phe Leu Pro Leu Glu Val Tyr Thr Arg Glu Glu Leu Ala Asp Thr
705 710 715 720
Gly Leu Leu Asp Tyr Ser Glu Ile Gln Arg Arg Asn Gln Leu His Ala
725 730 735
Leu Lys Phe Tyr Asp Ile Asp Arg Val Val Lys Val Asp His Asn Val
740 745 750
Val Leu Leu Arg Gly Ile Ala Asn Phe Phe Gln Gly Leu Gly Asp Val
755 760 765
Gly Ala Ala Val Gly Lys Val Val Leu Gly Ala Thr Gly Ala Val Ile
770 775 780
Ser Ala Val Gly Gly Met Val Ser Phe Leu Ser Asn Pro Phe Gly Ala
785 790 795 800
Leu Ala Ile Gly Leu Leu Val Leu Ala Gly Leu Val Ala Ala Phe Leu
805 810 815
Ala Tyr Arg His Ile Ser Arg Leu Arg Arg Asn Pro Met Lys Ala Leu
820 825 830
Tyr Pro Val Thr Thr Lys Thr Leu Lys Glu Asp Gly Val Asp Glu Gly
835 840 845
Asp Val Asp Glu Ala Lys Leu Asp Gln Ala Arg Asp Met Ile Arg Tyr
850 855 860
Met Ser Ile Val Ser Ala Leu Glu Gln Gln Glu His Lys Ala Arg Lys
865 870 875 880
Lys Asn Ser Gly Pro Ala Leu Leu Ala Ser Arg Val Gly Ala Met Ala
885 890 895
Thr Arg Arg Arg His Tyr Gln Arg Leu Glu Ser Glu Asp Pro Asp Ala
900 905 910
Leu
<210>50
<211>404
<212>PRT
<213>Aujesky病病毒(NIA3株)
<400>50
Met Leu Leu Ala Ala Leu Leu Ala Ala Leu Val Ala Arg Thr Thr Leu
1 5 10 15
Gly Ala Asp Val Asp Ala Val Pro Ala Pro Thr Phe Pro Pro Pro Ala
20 25 30
Tyr Pro Tyr Thr Glu Ser Trp Gln Leu Thr Leu Thr Thr Val Pro Ser
35 40 45
Pro Phe Val Gly Pro Ala Asp Val Tyr His Thr Arg Pro Leu Glu Asp
50 55 60
Pro Cys Gly Val Val Ala Leu Ile Ser Asp Pro Gln Val Asp Arg Leu
65 70 75 80
Leu Asn Glu Ala Val Ala His Arg Arg Pro Thr Tyr Arg Ala His Val
85 90 95
Ala Trp Tyr Arg Ile Ala Asp Gly Cys Ala His Leu Leu Tyr Phe Ile
100 105 110
Glu Tyr Ala Asp Cys Asp Pro Arg Gln Ala Asp Leu Trp Ala Leu Pro
115 120 125
Ala Pro His His Ala Asp Val Val Asp Pro Val Arg Gly Leu His Val
130 135 140
Pro His Gly Gly Arg Ala Gly Ala Ala His Gly Gly Pro Arg Ala Val
145 150 155 160
Gln Arg Gly Pro Val Pro Ala Pro Gly Val Arg Arg Arg Arg Glu His
165 170 175
Pro His Arg Leu His Gly Gly Ala Pro Arg Gly Ala Arg Val Pro Val
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Arg Pro Arg Gly Pro Ala Pro His Val Gln Val Arg Arg Val Leu Glu
195 200 205
Arg Arg Gln Leu Gln Ala Gly Arg Gly Arg Asp Ala Ile Pro Asp Ala
210 215 220
Val Leu Pro Ala Ala Pro Ala Pro Gly Gly Gly Glu Leu Leu Val Pro
225 230 235 240
Gln Glu Arg Pro Asp Ala Pro Ala Gly Pro Arg Arg Arg His Ala Val
245 250 255
Arg His Arg Pro Arg Ala Ala Leu Gly Gly Leu Ala Glu Ala Pro Ala
260 265 270
Pro Ala Pro Ala Pro Ala Pro Ala Glu Ala Arg Ala Arg Pro Gly Asp
275 280 285
Ala Arg Ala Pro Arg Pro Pro Ala Arg Ala Gly Asp Ala Gly Pro Arg
290 295 300
Arg Arg Gly Pro Pro His Ala Ala Thr Pro Glu Ala Arg Asp Ala Ala
305 310 315 320
Pro Pro Leu Arg Pro Ala Gly Arg Arg Ala Gln Arg Val Ala Ala Ala
325 330 335
Arg Gly Ala Val Pro Ala Ala Asp Pro Arg Arg Ala Gly Arg Leu Ala
340 345 350
Pro Pro Leu Gly Asp Arg Arg His Gly His Arg Asp Gly Arg Ala Pro
355 360 365
Gly Gly Arg Val Arg Leu His Leu Leu Pro Pro Glu Gly Gly Glu Gly
370 375 380
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<211>566
<212>PRT
<213>猪流感病毒(SIV，H1N1″SW″株
<400>51
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1 5 10 15
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50 55 60
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65 70 75 80
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130 135 140
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165 170 175
Lys Leu Ser Lys Ser Tyr Thr Asn Asn Lys Gly Lys Glu Val Leu Ile
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195 200 205
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210 215 220
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225 230 235 240
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245 250 255
Ile Thr Phe Glu Ala Thr Gly Asn Leu Ile Ala Pro Trp Tyr Ala Phe
260 265 270
Ala Leu Asn Lys Gly Ser Gly Ser Gly Ile Ile Thr Ser Asp Thr Pro
275 280 285
Val His Asn Cys Asp Thr Lys Cys Gln Thr Pro His Gly Ala Leu Asn
290 295 300
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305 310 315 320
Pro Lys Tyr Val Lys Ser Thr Lys Leu Arg Met Ala Thr Gly Leu Arg
325 330 335
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340 345 350
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370 375 380
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565
<210>52
<211>498
<212>PRT
<213>猪流感病毒
<400>52
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1 5 10 15
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Leu Ser Asp Tyr Glu Gly Arg Leu Ile Gln Asn Ser Ile Thr Ile Glu
50 55 60
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65 70 75 80
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100 105 110
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115 120 125
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130 135 140
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195 200 205
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210 215 220
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225 230 235 240
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245 250 255
Ile Phe Leu Ala Arg Ser Ala Leu Ile Leu Arg Gly Ser Val Ala His
260 265 270
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275 280 285
Tyr Asp Phe Glu Arg Glu Gly Tyr Ser Leu Val Gly Ile Asp Pro Phe
290 295 300
Arg Leu Leu Gln Asn Ser Gln Val Phe Ser Leu Ile Arg Pro Asn Glu
305 310 315 320
Asn Pro Ala His Lys Ser Gln Leu Val Trp Met Ala Cys His Ser Ala
325 330 335
Ala Phe Glu Asp Leu Arg Val Ser Ser Phe Ile Arg Gly Thr Arg Val
340 345 350
Val Pro Arg Gly Gln Leu Ser Thr Arg Gly Val Gln Ile Ala Ser Asn
355 360 365
Glu Asn Met Glu Thr Met Glu Ser Ser Thr Leu Glu Leu Arg Ser Lys
370 375 380
Tyr Trp Ala Ile Arg Thr Arg Ser Gly Gly Asn Thr Asn Gln Gln Arg
385 390 395 400
Ala Ser Ala Gly Gln Ile Ser Val Gln Leu Thr Phe Ser Val Gln Arg
405 410 415
Asn Leu Pro Phe Glu Arg Ala Thr Ile Met Ala Ala Phe Thr Gly Asn
420 425 430
Thr Glu Gly Arg Thr Ser Asp Met Arg Thr Glu Ile Ile Arg Met Met
435 440 445
Glu Ser Ala Arg Pro Glu Asp Val Ser Phe Gln Gly Arg Gly Val Phe
450 455 460
Glu Leu Ser Asp Glu Lys Ala Thr Asn Pro Ile Val Pro Ser Phe Asp
465 470 475 480
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485 490 495
Asp Asn
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<211>566
<212>PRT
<213>猪流感病毒
<400>53
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50 55 60
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Thr Leu Ile Asp Ala Leu Leu Gly Asp Pro His Cys Asp Gly Phe Gln
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100 105 110
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195 200 205
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Gly Leu Ser Ser Arg Ile Ser Ile His Trp Thr Ile Val Lys Pro Gly
245 250 255
Asp Ile Leu Ile Ile Asn Ser Asn Gly Asn Leu Ile Ala Pro Arg Gly
260 265 270
Tyr Phe Lys Met His Asn Gly Arg Ser Ser Ile Met Arg Ser Asp Ala
275 280 285
Pro Ile Gly Thr Cys Ser Ser Glu Cys Ile Thr Pro Asn Gly Ser Ile
290 295 300
Pro Asn Asp Lys Pro Phe Gln Asn Val Asn Lys Ile Thr Tyr Gly Ala
305 310 315 320
Cys Pro Lys Tyr Val Lys Gln Asn Thr Leu Lys Leu Ala Thr Gly Met
325 330 335
Arg Asn Ile Pro Glu Lys Gln Thr Arg Gly Ile Phe Gly Ala Ile Ala
340 345 350
Gly Phe Ile Glu Asn Gly Trp Glu Gly Met Val Asp Gly Trp Tyr Gly
355 360 365
Phe Arg His Gln Asn Ser Glu Gly Thr Gly Gln Ala Ala Asp Leu Lys
370 375 380
Ser Thr Gln Ala Ala Ile Asp Gln Ile Asn Gly Lys Leu Asn Arg Leu
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Ile Glu Lys Thr Asn Gly Lys Phe His Gln Ile Glu Lys Glu Phe Ser
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Asp Trp Ile Leu Trp Ile Ser Ser Ala Ile Ser Cys Phe Leu Leu Cys
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Val Val Leu Leu Gly Phe Ile Met Trp Ala Cys Gln Lys Gly Asn Ile
545 550 555 560
Arg Cys Asn Ile Cys Ile
565
<210>54
<211>498
<212>PRT
<213>猪流感病毒
<400>54
Met Ala Ser Gln Gly Thr Lys Arg Ser Tyr Glu Gln Met Glu Thr Gly
1 5 10 15
Gly Glu Arg Arg Asn Ala Thr Glu Ile Arg Ala Ser Val Gly Gly Met
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Val Gly Gly Ile Gly Arg Phe Tyr Ile Gln Met Cys Thr Lys Leu Lys
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Leu Ser Asp Tyr Glu Gly Arg Leu Ile Gln Asn Ser Ile Thr Ile Glu
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Arg Met Val Leu Ser Ala Phe Asp Glu Arg Arg Asn Lys Tyr Leu Glu
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Glu His Pro Ser Ala Gly Lys Asp Pro Lys Lys Thr Gly Gly Pro Ile
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Tyr Arg Lys Arg Asp Gly Lys Trp Met Arg Glu Leu Ile Met Tyr Asp
100 105 110
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130 135 140
Asp Ala Thr Tyr Gln Arg Thr Arg Ala Leu Val Arg Thr Gly Met Asp
145 150 155 160
Pro Arg Met Cys Ser Leu Met Gln Gly Ser Thr Leu Pro Arg Arg Ser
165 170 175
Gly Ala Ala Gly Ala Ala Val Lys Gly Val Gly Thr Met Val Met Glu
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Leu Ile Arg Met Ile Lys Arg Gly Ile Asn Asp Arg Asn Phe Trp Arg
195 200 205
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225 230 235 240
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245 250 255
Ile Phe Leu Ala Arg Ser Ala Leu Ile Leu Arg Gly Ser Val Ala His
260 265 270
Lys Ser Cys Leu Pro Ala Cys Val Tyr Gly Leu Val Val Ala Ser Gly
275 280 285
Tyr Asp Phe Glu Arg Glu Gly Tyr Ser Leu Val Gly Ile Asp Pro Phe
290 295 300
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305 310 315 320
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325 330 335
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420 425 430
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435 440 445
Glu Ser Ala Arg Pro Glu Asp Val Ser Phe Gln Gly Arg Gly Val Phe
450 455 460
Glu Leu Ser Asp Glu Lys Ala Thr Asn Pro Ile Val Pro Ser Phe Asp
465 470 475 480
Val Ser Asn Glu Gly Ser Tyr Phe Phe Gly Asp Asn Ala Glu Glu Tyr
485 490 495
Asn Asn