恩诺沙星明胶微球及其制备方法.pdf

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1、(10)授权公告号 CN 101099739 B (45)授权公告日 2011.03.30 CN 101099739 B *CN101099739B* (21)申请号 200610089557.2 (22)申请日 2006.07.03 A61K 31/496(2006.01) A61K 9/16(2006.01) A61P 31/04(2006.01) (73)专利权人 肖希龙 地址 100094 北京市海淀区圆明园西路 2 号 专利权人 周友中 李锐 (72)发明人 肖希龙 周友中 李锐 (74)专利代理机构 北京纪凯知识产权代理有限 公司 11245 代理人 鲁兵 李锐 . 恩诺沙星肺靶向。

2、微球的研究 . 中国优 秀博硕士学位论文全文数据库 ( 硕士 ) 农业科技 辑 第 05 期 .2005,( 第 05 期 ),16-19,23,27. (54) 发明名称 恩诺沙星明胶微球及其制备方法 (57) 摘要 本发明涉及恩诺沙星明胶微球及其制备方 法。 本发明以A型明胶作为载体， 以恩诺沙星为载 药， 采用乳化冷凝法制备了静脉注射后靶向肺部 的明胶微球。 该微球载药量为550wt， 圆整度 好， 在水溶液中分散性好， 平均粒径约 12m， 粒 径分布在 7 30m 范围内的微球占总数的 90 以上， 具有肺靶向性， 可有效降低原有药物的毒副 作用。 本发明制备工艺操作简单， 制备的微。

3、球符合 要求， 微球制剂经静脉注射后能被动靶向于肺。 (51)Int.Cl. (56)对比文件 审查员 温涛 (19)中华人民共和国国家知识产权局 (12)发明专利 权利要求书 1 页 说明书 7 页 附图 1 页 CN 101099739 B1/1 页 2 1. 一种恩诺沙星肺靶向明胶微球， 其特征在于 ： 被包裹的药物为恩诺沙星， 药物的载 体为可生物降解的明胶， 恩诺沙星和明胶按重量投料比为 3 4 或 1 1， 且得到的肺靶向 微球粒径分布在 7 30m 范围内的占总数的半数以上， 所述恩诺沙星肺靶向明胶微球载 药量为 27.91 40wt。 2. 根据权利要求 1 所述的恩诺沙星肺靶。

4、向明胶微球， 其特征在于 ： 所述药物载体为等 电点为 7 9 的 A 型酸性明胶。 3. 一种恩诺沙星肺靶向明胶微球的制备方法， 包括以下步骤 ： 步骤一 ： 取明胶加入双蒸水或磷酸盐缓冲溶液， 在温水浴中完全溶胀， 再加入恩诺沙星 混匀溶解得到水相， 恩诺沙星和明胶按重量投料比为 3 4 或 1 1 ； 步骤二 ： 将司盘 80 或司盘 60 和液体石蜡置于容器中混匀得到油相 ； 步骤三 ： 在相同温度水浴中， 将水相滴加至油相， 同时电磁搅拌均匀， 至乳白色， 然后冰 浴迅速冷却至 5以下并继续乳化得到乳化体系 ； 步骤四 ： 向乳化体系中加入戊二醛， 继续搅拌交联固化， 再以异丙醇脱水。

5、搅拌， 抽滤 ； 步骤五 ： 用异丙醇洗涤洗尽戊二醛， 用石油醚洗去液体石蜡， 真空干燥， 制得微黄色微 球粉末。 4. 如权利要求 3 所述的恩诺沙星肺靶向明胶微球的制备方法， 其特征在于， 所述 步骤一和步骤三的水浴温度为 40 65， 所述步骤三和步骤四的搅拌速度为 500 1000rmin-1。 5. 如权利要求 4 所述的恩诺沙星肺靶向明胶微球的制备方法， 其特征在于， 步骤一中 所述水相中明胶的重量体积浓度为 5 15， 恩诺沙星的重量体积浓度为 2.5 15。 6. 如权利要求 5 所述的恩诺沙星肺靶向明胶微球的制备方法， 其特征在于， 所述油相 与水相的体积比为 7.5 12.。

6、5 1。 7. 如权利要求 6 所述的恩诺沙星肺靶向明胶微球的制备方法， 其特征在于， 所述步骤 二乳化剂的加入量为油相体积的 1.5 2。 8. 如权利要求 7 所述的恩诺沙星肺靶向明胶微球的制备方法， 其特征在于， 所述步骤 四中加入戊二醛的量为乳化体系体积的 8.5 10。 9. 如权利要求 8 所述的恩诺沙星肺靶向明胶微球的制备方法， 其特征在于， 将明胶加 入双蒸水或 pH5.0 磷酸盐缓冲溶液， 在 60温水浴完全溶胀， 再加入恩诺沙星混匀溶解作 为水相。 权 利 要 求 书 CN 101099739 B1/7 页 3 恩诺沙星明胶微球及其制备方法 技术领域 0001 本发明属于动。

7、物药品领域， 具体涉及的是一种兽医专用的氟喹诺酮类抗菌药恩诺 沙星的改进制剂及其制备方法。 背景技术 0002 恩诺沙星 (enrofloxacin， ENR) 是兽医专用的第三代氟喹诺酮类抗菌药， 有广谱 杀菌作用， 对革兰氏阴性杆菌和球菌、 阳性菌、 支原体、 衣原体均有杀灭作用， 对静止期和生 长期的细菌均有效， 其杀菌活性依赖于浓度。临床上主要用于各种动物敏感菌引起的各种 感染。 0003 随着耐药性的产生导致药物治疗效果的降低， 且喹诺酮类药物体内分布广泛， 所 以在治疗动物的肺炎、 支气管炎等呼吸道感染时， 要使药物在肺部组织达到有效的浓度， 势 必增加药物的剂量， 这样易造成药物。

8、在其它组织中残留的增高并产生一些毒副作用。因此 如能得到一种具有肺靶向性的新型制剂， 则可以消除现有药物体内分布上的缺陷。 发明内容 0004 本发明的目的在于提供一种恩诺沙星肺靶向微球， 利用微球静注后被肺毛细血管 机械性滤取而表现肺靶向性， 以提高治疗动物的呼吸道疾病的效果， 降低毒副作用。 0005 本发明提出的一种恩诺沙星肺靶向微球， 被包裹的药物为恩诺沙星， 药物的载体 为可生物降解的明胶， 得到的肺靶向微球粒径分布在 7 30m 范围内的占总数的半数以 上。 0006 所述恩诺沙星肺靶向明胶微球载药量为 5 50wt， 优选 20 40wt。 0007 所述药物载体微 A 型明胶 。

9、( 酸性 )， 等电点为 7 9。 0008 本发明另一目的， 在于提供上述微球的制备方法。 0009 本发明提出的恩诺沙星明胶微球的制备方法， 包括以下步骤 ： 0010 步骤一 ： 取明胶加入双蒸水或磷酸盐缓冲溶液， 在温水浴中完全溶胀， 再加入恩诺 沙星混匀溶解得到水相 ； 0011 步骤二 ： 将司盘 80 或司盘 60 和液体石蜡置于容器中混匀得到油相 ； 0012 步骤三 ： 在相同温度水浴中， 将水相滴加至油相， 同时电磁搅拌均匀， 至乳白色， 然 后冰浴迅速冷却至 5以下并继续乳化得到乳化体系 ； 0013 步骤四 ： 向乳化体系中加入戊二醛， 继续搅拌交联固化， 再以异丙醇脱。

10、水搅拌， 抽 滤 ； 0014 步骤五 ： 用异丙醇洗涤洗尽戊二醛， 用石油醚洗去液体石蜡， 真空干燥， 制得微黄 色微球粉末。 0015 其中， 所述步骤一和步骤三的水浴温度为 40 65， 所述步骤三和步骤四的搅拌 速度为 500 1000rmin-1。 0016 其中， 步骤一中所述水相中明胶的重量体积浓度为 5 15， 恩诺沙星的重量体 说 明 书 CN 101099739 B2/7 页 4 积浓度为 2.5 15。 0017 其中， 所述油相与水相的体积比为 7.5 12.5:1。 0018 其中， 所述步骤二乳化剂的加入量为油相体积的 1.5 2。 0019 其中， 所述步骤四中加。

11、入戊二醛的量为乳化体系体积的 8.5 10。 0020 其中， 将明胶加入双蒸水或 pH5.0 磷酸盐缓冲溶液， 在 60温水浴完全溶胀， 再加 入恩诺沙星混匀溶解作为水相。 0021 本发明方法的优点在于 ： 采用乳化冷凝法， 制备工艺操作简单， 得到的肺靶向微球 形态圆整、 较少粘连， 在水溶液中分散性好， 平均粒径约 12m， 粒径分布在 7 30m 范围 内的微球占总数的 90以上， 静脉注射后被动靶向于肺。 附图说明 0022 图 1 为实施例 2 制得的恩诺沙星肺靶向微球 100 倍光镜图 ； 0023 图 2 为实施例 2 制得的恩诺沙星肺靶向微球 10000 倍电镜图 ； 00。

12、24 图 3 为实施例 2 制得的恩诺沙星肺靶向微球粒径分布图。 具体实施方式 0025 本发明目的是研究恩诺沙星的一种新的剂型肺靶向微球， 使微球静注后被肺 毛细血管机械性滤取而表现肺靶向性， 以提高治疗动物的呼吸道疾病的效果， 降低毒副作 用。 0026 本发明提出的恩诺沙星肺靶向微球， 被包裹的药物为恩诺沙星， 药物的载体为可 生物降解的明胶， 其中以等电点为 7 9 的 A 型明胶 ( 酸性 ) 作为载体最好， 得到的肺靶 向微球应形态圆整、 较少粘连， 在水溶液中分散性好， 平均粒径约 12m， 粒径分布在 7 30m 范围内的占总数的半数以上， 静脉注射后即可被动靶向于肺。 002。

13、7 本发明提出的恩诺沙星明胶微球的制备方法， 具体步骤如下 ： 取明胶加入双蒸水 或磷酸盐缓冲溶液， 在温水浴中完全溶胀， 再加入恩诺沙星混匀溶解， 然后滴加入盛有司盘 80( 或司盘 60) 和液体石蜡的烧杯中， 在相同温度水浴中电磁搅拌均匀， 继续搅拌一定时间 至乳白色， 冰浴迅速冷却至 5以下并继续乳化， 再加入戊二醛继续搅拌交联固化， 以异丙 醇脱水搅拌， 抽滤。 再用少许异丙醇洗涤， 洗尽戊二醛， 用石油醚洗去微球表面的液体石蜡， 真空干燥， 制得圆整度好的微黄色微球粉末 ； 0028 该方法中， 将明胶加入双蒸水或 pH5.0 磷酸盐缓冲溶液， 在 60温水浴完全溶胀， 再加入恩诺。

14、沙星混匀溶解作为水相。水相中的明胶的重量体积浓度为 5 15； 恩诺沙星 在水相中的重量体积浓度为 2.5 15 ； 0029 司盘 80 和石蜡组成油相， 油相与水相的体积比为 7.5 12.5:1 ； 其中司盘 80 为 乳化剂， 加入量为油相的 1.5 2 ( 体积浓度 ) ； 0030 水浴温度为 40 65 ； 搅拌速度为 500 1000rmin-1； 0031 加入戊二醛的量为乳化体系(油相和水相混合体系)的8.510(体积浓度)。 0032 下面将通过具体的实施例对本发明作详细的介绍， 试验中所用试剂和器械全部市 购， 微球检测中， 形态观察使用光学显微镜， 粒径及分布测定使用。

15、显微镜测微尺， 微球的药 物含量采用紫外分光光度法检测， 载药量微球中药物总量 / 明胶微球重量 100； 包封 说 明 书 CN 101099739 B3/7 页 5 率微球中药物总量 / 投药量 100。 0033 实施例 1 0034 取明胶 0.4g， 加入双蒸水溶液 4mL( 配成 10重量体积浓度的明胶溶液 )， 在 60 温水浴中完全溶胀， 再加入 0.2g 恩诺沙星混匀溶解 ( 恩诺沙星在水相中的重量体积浓度 为 5 )， 然后滴加入盛有 0.6mL 司盘 80 和 30mL 液体石蜡 ( 司盘 80 在油相中体积浓度为 2.0 ) 的 100mL 烧杯中， 同样在 60温度水。

16、浴中电磁搅拌均匀， 搅拌速度为 1000r min-1， 搅拌 15min 至乳白色后， 冰浴迅速冷却至 5以下继续搅拌乳化 15min， 以细流状加入 3mL 戊二醛继续搅拌交联固化 30min， 以异丙醇 30mL 脱水搅拌 10min， 抽滤。再用少许异丙醇洗 涤， 洗尽戊二醛， 用石油醚洗去微球表面的液体石蜡， 真空干燥过夜， 得到微黄色微球粉末。 0035 对该恩诺沙星微球 ( 以下简称 GMS) 粉末进行测试， 其圆整度好， 在水溶液中分散 性好， 平均粒径为 12.06m， 粒径分布在 7 30m 范围内的微球占总数的 92.0。微球 载药量为 20.67wt、 包封率为 43.。

17、62。 0036 实施例 2 0037 取明胶 0.4g， 加入 0.9molL-1pH5.0 磷酸盐缓冲溶液 4mL( 配制 10wt浓度的明 胶溶液 )， 在 60温水浴完全溶胀， 再加入 0.4g 恩诺沙星混匀溶解， 然后滴加入盛有 0.6mL 司盘 80 和 30mL 液体石蜡 ( 司盘 80 体积浓度 2.0 ) 的 100mL 烧杯中， 在相同温度水浴中 电磁搅拌均匀， 搅拌速度为 700rmin-1， 搅拌 15min 至乳白色， 冰浴迅速冷却至 5以下继 续乳化 15min， 以细流状加入 3mL 戊二醛继续搅拌交联固化 30min， 以异丙醇 30mL 脱水搅拌 10min，。

18、 抽滤。再用少许异丙醇洗涤， 洗尽戊二醛， 用石油醚洗去微球表面的液体石蜡， 真空 干燥过夜， 制得微黄色微球粉末。经测试， 该 GMS 粉末圆整度好 ( 参见图 1， 2)， 在水溶液中 分散性好， 平均粒径为11.71m， 粒径分布在730m范围内的微球占总数的92.8(参 见图 3)。微球载药量为 38.20、 包封率为 42.96。 0038 实施例 3 0039 取明胶0.4g， 加入0.9mol L-1pH5.0磷酸盐缓冲溶液4mL(10浓度的明胶溶液)， 在 60温水浴完全溶胀， 再加入 0.3g 恩诺沙星混匀溶解， 后续操作步骤同实施例 2， 制得 圆整度好的微黄色微球粉末， 。

19、在水溶液中分散性好， 平均粒径为 11.86m， 粒径分布在 7 30m 范围内的微球占总数的 90.3。微球载药量为 27.91wt、 包封率为 43.82。 0040 实施例 4 0041 取明胶0.4g， 加入0.9mol L-1pH5.0磷酸盐缓冲溶液4mL(10浓度的明胶溶液)， 在 60温水浴完全溶胀， 再加入 0.2g 恩诺沙星混匀溶解， 后续操作步骤同实施例 2， 制得 圆整度好的微黄色微球粉末， 在水溶液中分散性好， 平均粒径为 11.94m， 粒径分布在 7 30m 范围内的微球占总数的 91.7。微球载药量为 20.28wt、 包封率为 45.27。 0042 实施例 5。

20、 0043 取明胶 0.6g， 加入双蒸水溶液 4mL( 配成 15重量体积浓度的明胶溶液 )， 在 65 温水浴中完全溶胀， 再加入0.6g恩诺沙星混匀溶解(恩诺沙星在水相中的重量体积浓度为 15 )， 然后滴加入盛有 0.75mL 司盘 80 和 50mL 液体石蜡 ( 司盘 80 在油相中体积浓度为 1.5 ) 的 100mL 烧杯中， 同样在 65温度水浴中电磁搅拌均匀， 搅拌速度为 800rmin-1， 搅拌 15min 至乳白色后， 冰浴迅速冷却至 5以下继续搅拌乳化 15min， 以细流状加入 5mL 戊二醛继续搅拌交联固化 30min， 以异丙醇 50mL 脱水搅拌 10min。

21、， 抽滤。再用少许异丙醇洗 说 明 书 CN 101099739 B4/7 页 6 涤， 洗尽戊二醛， 用石油醚洗去微球表面的液体石蜡， 真空干燥过夜， 得到微黄色微球粉末。 0044 对该 GMS 微黄色微球粉末进行测试， 其圆整度好， 在水溶液中分散性好， 平均粒 径为 12.40m， 粒径分布在 7 30m 范围内的微球占总数的 89.21。微球载药量为 35.31wt、 包封率为 33.84。 0045 实施例 6 0046 取明胶 0.2g， 加入 0.9mol L-1pH5.0 磷酸盐缓冲溶液 4mL( 配成 5重量体积浓度 的明胶溶液 )， 在 40温水浴中完全溶胀， 再加入 0。

22、.1g 恩诺沙星混匀溶解 ( 恩诺沙星在水 相中的重量体积浓度为 2.5 )， 然后滴加入盛有 0.8mL 司盘 60 和 40mL 液体石蜡 ( 司盘 60 在油相中体积浓度为 2.0 ) 的 100mL 烧杯中， 同样在 40温度水浴中电磁搅拌均匀， 搅拌 速度为500r min-1， 搅拌15min至乳白色后， 冰浴迅速冷却至5以下继续搅拌乳化15min， 以细流状加入 4mL 戊二醛继续搅拌交联固化 30min， 以异丙醇 40mL 脱水搅拌 10min， 抽滤。 再用少许异丙醇洗涤， 洗尽戊二醛， 用石油醚洗去微球表面的液体石蜡， 真空干燥过夜， 得 到微黄色微球粉末。 0047 对。

23、该 GMS 微黄色微球粉末进行测试， 其圆整度好， 在水溶液中分散性好， 平均粒 径为 15.64m， 粒径分布在 7 30m 范围内的微球占总数的 83.4。微球载药量为 21.37wt、 包封率为 46.09。 0048 恩诺沙星明胶微球在犬体内药物动力学试验 0049 一、 试验材料 ： 0050 1. 主要试剂和药品 0051 恩诺沙星标准品 ( 中国兽医药品监察所， 批号 H0402006) ； 环丙沙星标准品 ( 中国 兽医药品监察所， 批号 H040402) ； 乙腈、 甲醇为色谱纯 ； 磷酸、 三乙胺、 二氯甲烷为分析纯 ； 恩诺沙星注射液 ( 拜有利 10mL ： 0.5g，。

24、 简称 ENR 注射液， 拜耳四川公司， 批号 KP033No) ； 本 发明恩诺沙星微球 ( 临用前用注射用生理盐水混匀配制成混悬液， 简称 ENR-GMS) ； 氯化钾 注射液 ( 山西泰盛制药有限公司 ) ； 846 合剂 II( 军事医学科学院军事兽医研究所， 批号 20040906)。 0052 2. 溶液的配制 0053 组织提取液 ： 取 0.1mol L-1磷酸溶液 100mL， 加入乙腈 300mL， 混匀后放置， 待溶液 澄清后过滤即得， 于 4保存。 0054 流动相 ： 取 85磷酸 3.4mL 用重蒸水稀释至 1000mL， 搅拌中滴加三乙胺调到 pH2.4， 配成磷。

25、酸/三乙胺(pH2.4)缓冲液， 然后和乙腈按照81 ： 19(v ： v)的比例混合配制成 流动相， 脱气处理， 用 0.22m 滤膜过滤。 0055 3. 主要仪器设备 0056 高效液相色谱仪 ( 含 LC-10ATvp 泵， DGU-12A 脱气设备， RF-10AxL 荧光检测仪， Class-VP5.03 工作站， 日本 Shimadzu) ； TDL-40B 离心机 ( 上海安亭科学仪器厂 ) ； 旋转蒸 发仪 ( 德国 Heidolph) ； GM-0.33II 隔膜真空泵 ( 天津腾达过滤器件厂 ) ； WH-1 涡动混合器 ( 上海沪西分析仪器厂 ) ； CX-100 超声。

26、波清洗器 ( 北京医疗设备二厂 )。 0057 4. 试验动物 0058 北京犬， 体重 4.0 8.0kg， 共 26 只， 饲养在清洁动物房中， 自由饮水， 饲喂不含抗 菌药物的全价日粮， 每天定时给料一次。给药前饲养 1 周， 以适应环境。 说 明 书 CN 101099739 B5/7 页 7 0059 二、 试验方法 ： 0060 1. 给药 0061 将犬随机分成两组， 每组各 13 只， 每个采样时间点一只犬。给药前禁食 12h， 一组 分别以 5mg kg-1b.w. 剂量 ( 以 ENR 计 ) 于臂头静脉注射恩诺沙星 ( 简称 ENR) 注射液。另 一组分别以 5mgkg-。

27、1( 以 ENR 计 ) 静注恩诺沙星注射液微球 ( 简称 ENR-GMS) 混悬液。 0062 2. 样品采集 0063 给药前 (0min) 和给药后按以下时间点心脏采血 ： 5min、 10min、 20min、 30min、 1h、 2h、 4h、 8h、 12h、 24h、 48h、 72h， 采血前先注射 846 合剂 II 使犬麻醉， 采血后立即静脉注射氯 化钾注射液实施安乐死， 快速解剖取犬的肺、 肝、 肾、 脾、 肌肉组织， 待采集的新鲜血凝血后 3000rmin-1离心 10min， 吸取上层血清与组织一并于 -20冷冻保存。 0064 3. 血清、 组织样品处理 0065。

28、 取 1mL 血清加入 4mL 乙腈， 涡动 2min， 3500rpm 离心 20min， 取上清液于 25mL 鸡心 瓶中， 70旋转蒸发仪蒸至近干， 再用氮气吹干， 用流动相溶解并定容至 1mL， 用 0.2m 滤 膜过滤， 取 20L 进样 HPLC 测定。 0066 分别取 1g 匀浆组织 ( 肺、 肝、 肾、 脾、 肌肉 ) 于 15mL 离心管中， 加入 1mL 的提取液， 涡动 1min， 再加入 5mL 二氯甲烷涡动 1min， 超声 15min， 3500rpm 离心 10min， 取下层有机溶 液层于 50mL 鸡心瓶中 ； 然后向管内再加入 3mL 二氯甲烷涡动 1mi。

29、n， 离心， 取下层并入鸡心 瓶 ； 再加入 3mL 二氯甲烷提取一次 ； 合并 3 次提取的有机溶液， 40旋转蒸发蒸至近干， 再 用氮气吹干， 用流动相溶解并定容至 1mL， 用 0.2m 滤膜过滤， 取 20L 进样 HPLC 测定。 0067 4. 标准曲线的绘制 0068 准确称取 ENR 标准品 0.0250g， 先用 0.03molL-1氢氧化钠溶液溶解， 再用流动相 稀释定容， 配成浓度为 1gmL-1标准工作液。取标准工作液， 用流动相配成浓度分别为 10、 30、 50、 100、 300、 500、 1000ngmL-1的系列工作液。用同样方法配制浓度分别为 10、 30。

30、、 50、 100、 300、 500ng mL-1的环丙沙星标准品 ( 以下简称 CIP) 系列工作液。分别取 ENR、 CIP 的系列工作液 20L 进 HPLC 测定， ENR 保留时间为 15.16min、 CIP 为 11.13min， 得到线形回 归方程 ENR ： A 5407C+252196， (r 0.9993) ； CIP ： A 2934.8C+96955， (r 0.9949)。 检测限均为 10ngmL-1。 0069 5. 回收率和精密度试验 0070 分别取空白血清 1mL 和各空白匀浆组织 1g 添加 ENR 和 CIP 标准溶液， 制备成药物 浓度均为30、 。

31、50、 100、 300ng mL-1的添加样品， 按3的方法分别进行前处理后， 进HPLC测定， ENR、 CIP 在血清、 肺、 肌肉、 肝、 脾和肾组织中四种浓度的样品添加回收率均大于 70， 变异 系数较小， 说明本方法可用于样品测定 ； 高、 中、 低 3 个浓度 (500、 100、 30ngmL-1) 的肺组 织样品ENR日内变异系数分别为4.4、 7.4、 7.8， 日间变异系数分别为3.5、 6.1、 6.4， CIP 日内变异系数分别为 5.5、 5.3、 6.1， 日间变异系数分别为 5.0、 3.9、 5.9， 结果表明本方 法可用于药物动力学试验。 0071 6. 色。

32、谱条件 0072 色谱柱 ： Kromasil C18 柱 (10m， 2504.6mm) ； 流动相 ： 0.05mol L-1磷酸 / 三乙 胺缓冲液 (pH2.4)+ 乙腈 (81+19v ： v) ； 流速 ： 0.6mLmin-1； 进样量 ： 20L ； 荧光检测波长 ： 激发波长 278nm， 发射波长 446nm。 说 明 书 CN 101099739 B6/7 页 8 0073 7. 数据处理 0074 ENR 在体内代谢为亦具较强活性的 CIP， 将 CIP 浓度合并为 ENR 的浓度， 所得各组 织药 - 时数据采用 3P97 程序计算出药物动力学参数。 0075 8. 。

33、肺靶向性的确定方法 0076 根据药物在血清与各组织中药 - 时曲线下面积 (AUC) 和峰浓度 (Cp)， 按以下公式 计算靶向参数， 然后确定其肺靶向性 ： 0077 re (AUCi)ms/(AUCi)e 0078 te (AUC)靶器官/(AUC)非靶器官 0079 Ce (Cp)ms/(Cp)e 0080 re为相对摄取率， AUCi为第 i 个组织或血清的 AUC， ms 为 ENR-GMS， e 为 ENR 注射 液 ； te为靶向效率 ； Ce为峰浓度 (Cp) 之比。 0081 三、 试验结果 ： 0082 1. 血清和各组织的药 - 时数据 0083 ENR注射液和ENR-。

34、GMS混悬液给药后血清和各组织中的测定结果分别见表1、 表2。 0084 表 1 静注 ENR 注射液后各组织 ENR、 CIP 浓度 ( 单位 ： gg-1) 0085 0086 -， Not detectable， the same below 0087 表 2 静注 ENR-GMS 后各组织 ENR、 CIP 浓度 ( 单位 ： gg-1) 0088 说 明 书 CN 101099739 B7/7 页 9 0089 2. 肺靶向的确定 0090 根据表 1、 表 2 中数据， 将肺中药 - 时曲线， 用 3P97 程序分别用一、 二、 三室模型拟 合， 经 F 检验， 拟合优度结合 AI。

35、C 与 r2进行模型判断， ENR-GMS 在肺内动力学行为可用三室 开放模型描述， ENR 可用二室开放模型描述， 其动力学方程分别为 ： 0091 ENR-GMS ： C 53.0287e-18.3384t+5.3926e-1.0410t+1.4489e-0.07432t 0092 ENR ： C 3.0998e-0.4503t+0.5384e-0.09868t 0093 并得到 ENR、 ENR-GMS 在犬肺内的药物动力学主要参数见表 3， 结果显示 ENR 制成 微球后， 在肺内药物达峰时间有所提前 ； 分布半衰期 (T1/2) 从 1.54h 缩短至 0.67h， 消除半 衰期 (。

36、T1/2) 从 7.02h 延长到 9.33h， 延长了 1.33 倍 ； 肺内药量 (Q) 清除率从 0.4052 下降 到 0.1814mg/kg/h/(gg-1)， 降低了 55.2 ； 说明 ENR 制成微球后， 在肺中蓄积时间显著 延长， 清除减慢， ENR-GMS 在靶向组织肺亦具有长效作用。 0094 表 3 犬静注 ENR-GMS 和 ENR 的肺靶向参数 0095 0096 从结果可以看出肺脏的 re值最大为 3.29， ENR-GMS 混悬液静脉注射后在肺中分布 最多， 将 ENR 制成微球后， 肺脏相对于血清和其它脏器组织的 te均大于 1， 且与普通注射液 相比， 肺脏相对于血清和其它脏器组织的 te增强了 1.39 6.06 倍， 靶器官肺脏的 Ce， 微球 制剂是普通注射液的 3.13 倍， ENR-GMS 靶向肺的效果较好。 说 明 书 CN 101099739 B1/1 页 10 图 1 图 2 图 3 说 明 书 附 图 。