枳壳提取物水合橙皮内酯用于制备促肠动力药物的用途及制剂.pdf

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1、(10)授权公告号 CN 101940566 B (45)授权公告日 2012.03.14 CN 101940566 B *CN101940566B* (21)申请号 201010202105.7 (22)申请日 2008.08.01 200810031974.0 2008.08.01 A61K 31/37(2006.01) A61P 1/00(2006.01) A61P 1/06(2006.01) (73)专利权人 中南大学 地址 410083 湖南省长沙市麓山南路 932 号 (72)发明人 黄熙 任平 秦锋 (74)专利代理机构 中南大学专利中心 43200 代理人 龚灿凡 周吕 . 基。

2、础与临床 .胃肠动力学 - 基础与 临床 . 科学出版社 ,1999, 第 293-301、 773-787 页 . Sergio Rosselli1， 等 .Antibacterial and Anticoagulant Activities of Coumarins Isolated from the Flowers of Magydaris tomentosa. Planta Medica .2007, 第 73 卷 ( 第 2 期 ), 第 116-120 页， 化合物 7， 摘要 . 官福兰， 等 . 枳壳及辛弗林对小鼠胃排空 和小肠推进功能的影响 .现代中西医结合杂 志 .2002。

3、,第11卷(第11期),第1001-1003页. Saied, Sumayya 等 .Two new coumarins from Murraya paniculata.Journal of Asian Natural Products Research .2008,第10卷(第 6 期 ), 第 515-519 页， 化合物 5， 摘要 . 陈艳， 等 . 蛇床子的化学成分及药理作用的 研究进展 .沈阳药科大学学报 .2006, 第 23 卷 ( 第 4 期 ), 第 256-260 页， 化合物 5. (54) 发明名称 枳壳提取物水合橙皮内酯用于制备促肠动力 药物的用途及制剂 (57) 。

4、摘要 本发明公开了一种从枳壳中分离提取水合橙 皮内酯的方法和水合橙皮内酯用于制备促肠动力 药物的用途及制剂。 粉碎枳壳， 用乙酸乙酯回流提 取滤液 ； 将滤液减压浓缩后加丙酮溶解， 上于硅 胶柱上， 以石油醚、 石油醚和丙酮丙酮洗脱， 合并 洗脱液， 减压浓缩 ； 加醇溶解， 离心， 取上清液， 冷 冻干燥， 得水合橙皮内酯。 本发明从枳壳中分离提 取出水合橙皮内酯， 并通过实验证实了枳壳提取 物水合橙皮内酯的促肠动力的作用远远超过橙皮 苷和柚皮苷， 从而纠正了人们一直来认为橙皮苷 和柚皮苷是中药枳壳促肠动力药理作用有效成分 的偏见。 (62)分案原申请数据 (51)Int.Cl. (56)对。

5、比文件 审查员 李文昊 (19)中华人民共和国国家知识产权局 (12)发明专利 权利要求书 1 页 说明书 4 页 附图 2 页 CN 101940566 B1/1 页 2 1. 水合橙皮内酯用于制备促肠动力药物的用途。 权 利 要 求 书 CN 101940566 B1/4 页 3 枳壳提取物水合橙皮内酯用于制备促肠动力药物的用途及 制剂 技术领域 0001 本发明涉及中药枳壳提取物， 具体涉及从枳壳中提取的水合橙皮内酯及水合橙皮 内酯的用途。 背景技术 0002 现有研究表明， 水合橙皮内酯， 化学名为 ： 7- 甲氧基 -8-(2 ， 3 - 二羟基 -3 - 甲 基丁基 )- 香豆素，。

6、 英文名 ： merazin hydrate， 分子量为 278， 化学式为 ： 0003 0004 主要存在于独活属重齿毛当归、 芸香科蛇床子、 九里香、 小叶九里香等植物中， 未 见报道存在于枳壳 ( 枳实 ) 中。 0005 中药枳壳， 拉丁名 Fructus Aurantii， 别名只壳、 江枳壳、 商壳、 炒枳壳， 为芸香科 植物酸橙 (Citrus aurantium L.) 及其栽培变种的干燥未成熟果实。已知枳壳具有促进肠 动力的作用， 已被广泛用于治疗消化道疾病 ( 参见 中药药理学 . 侯家玉主编 .2002.8， 第 一版.p118)。 中国药典2005版记载枳壳的药理有效。

7、成分为橙皮苷和柚皮苷， 但有研究(参 见官福兰等 . 陈皮及橙皮苷对离体肠管运动的影响 . 时珍国医国药， 2002， 13(2) 发现， 橙 皮苷和柚皮苷这两种成分的肠动力实验并无明显疗效。 发明内容 0006 本发明的目的在于从中药枳壳中提取得到一种新的有效成分水合橙皮内酯， 并发现枳壳体内促肠动力的效应成分主要与水合橙皮内酯相关， 而非橙皮苷和柚皮苷， 水 合橙皮内酯才是枳壳促肠动力药理作用的有效成分。 0007 本发明的进一步目的在于以枳壳为原料制备出包含枳壳提取物水合橙皮内酯的 药学上可接受的各种药物制剂。 0008 发明人研究发现 ： 枳壳体内促肠动力的效应成分主要与水合橙皮内酯相。

8、关， 而非 现有技术所认为的与橙皮苷和柚皮苷相关。 0009 从枳壳中分离提取水合橙皮内酯的方法为 ： 粉碎枳壳， 用乙酸乙酯回流提取滤 液， 将滤液减压浓缩后加丙酮溶解， 上于硅胶柱上， 先以石油醚洗脱， 再用石油醚丙酮 201、 石油醚丙酮101， 以及丙酮洗脱各一次， 合并洗脱液， 减压浓缩， 加醇溶解， 离 心， 取上清液， 冷冻干燥。 0010 本发明纠正了人们一直来认为橙皮苷和柚皮苷是中药枳壳促肠动力药理作用有 说 明 书 CN 101940566 B2/4 页 4 效成分的偏见， 通过细致地研究发现枳壳促肠动力的效应成分原来主要与水合橙皮内酯相 关， 而不是橙皮苷和柚皮苷。 发明。

9、人从枳壳中分离提取出水合橙皮内酯， 并通过实验证实了 枳壳提取物水合橙皮内酯能显著抑制离体小肠平滑肌的自发活动、 拮抗 Ach、 BaCl2或 5-HT 等引起的肠道收缩痉挛， 其作用远远超过橙皮苷和柚皮苷。 在这一研究的基础上， 发明人得 到一种包含枳壳提取物水合橙皮内酯的药物， 该药物将是一种很好的促肠动力药物。 附图说明 0011 图 1 ： 空白血清的 HPLC 色谱图 ； 0012 图 2 ： 含药血清的 HPLC 色谱图 ； 0013 图 3 ： 加味逍遥散汤剂的 HPLC 色谱图 ； 0014 图 4 ： 含药血清中水合橙皮内酯光谱图 ； 0015 图 5 ： 枳壳中水合橙皮内酯。

10、光谱图。 具体实施方式 0016 实施例 1 ： 水合橙皮内酯作为枳壳活性成分的发现 0017 空白血清 ： 健康人血清， n 6 ； 0018 含药血清 ： 健康人口服加味逍遥散 30min 后血清， n 6。 0019 加味逍遥散 ： 栀枝 (1g)、 丹皮 (1g)、 柴胡 (1.7g) ； 茯苓 (1.7g)、 白术 (1g)、 当归 (1.7g) ； 厚朴 (2g)、 枳壳 (2g)、 白芍 (1.7g)、 生姜 (4g) ； 葛根 (2.7g)、 大枣 (1g)、 薄荷 (1g)、 甘草 (1g) 十四味中药水没、 浸泡半小时后上火， 沸腾后文火煎煮 40 分钟 2 次。 0020。

11、 样品处理 ： 取空白血清 1ml， 100 水浴 10 分钟， 用匀浆机打碎， 8500 转 /min 离心 20 分种， 取上清液用氮气流吹， 定容至 150l， 待测 ； 含药血清处理方法相同。 0021 用高效液相色谱法对空白血清、 含药血清及加味逍遥散制剂进行分析， 色谱图分 别见图 1 图 3。发明人发现 ： 在加味逍遥散制剂中存在一个保留时间为 26.020 的峰， 且 在加味逍遥散的含药血清中与存在一个保留时间为 25.803 的峰， 而这个未知峰在空白血 清中却没有， 说明是由服药引起的。 通过色谱图和保留时间分析说明， 这两个峰可能为同一 物质 ( 未知成分 X)， 且来源。

12、于加味逍遥散。含药血清中未知成分 X 光谱图见附图 4。 0022 随后， 将加味逍遥散十四味生药随机分为四组， 按整个方制剂中的量称取 ： 第一 组 ： 栀枝 (1g)、 丹皮 (1g)、 柴胡 (1.7g) ； 第二组 ： 茯苓 (1.7g)、 白术 (1g)、 当归 (1.7g) ； 第 三组 ： 厚朴 (2g)、 枳壳 (2g)、 白芍 (1.7g)、 生姜 (4g) ； 第四组 ： 葛根 (2.7g)、 大枣 (1g)、 薄荷 (1g)、 甘草 (1g)。对以上四组生药进行高效液相色谱分析。进样 6 次， 由保留时间与光谱图 得知， 未知成分 X 来源于生药枳壳。枳壳中未知成分 X 。

13、的光谱图见附图 5。 0023 实施例 2 ： 从生药枳壳分离提取水合橙皮内酯 0024 用硅胶柱层析法从枳壳中分离纯化未知成分 X， 具体过程如下 ： 称取粉碎的枳壳 2g， 20ml乙酸乙酯回流提取1.5h， 提取三次， 减压浓缩后加2ml丙酮溶解， 上于硅胶柱上， 先 以石油醚 100ml 洗脱， 再用石油醚丙酮 20 1、 10 1， 丙酮洗脱各 100ml， 合并洗脱液为 洗脱液 1， 减压浓缩， 加 2ml 甲醇溶解 15000r/min 转速离心 15min。取上清液进样。经分析 型HPLC检测其纯度， 按峰面积归一化法计算得纯度98。 经制备型HPLC 5次制备， 在体 积超载。

14、状态下工作， 进样体积 10ml， 得未知成分 19.63mg， 得率 0.0098。 说 明 书 CN 101940566 B3/4 页 5 0025 对制备物冷冻干燥后进行成分鉴定， 结合图谱 DMSO-C13-2006-8-2HX-0815 的 全炭谱， 氢谱、 质谱、 红外以及文献报道物性数据， 判断所测样品 Rf(EtoAc)0.3， 分子量为 278， 分子式为 C15H18O5， 结合文献资料， 确定样品为水合橙皮内酯。 0026 实施例 3 ： 水合橙皮内酯药效学实验 0027 180 220g SD 大鼠 ( 雌雄兼备 ) 随机分为 6 组， 每组 15 只， 分别为 A( 。

15、蒸馏水 ) 组、 B( 水合橙皮内酯 ) 组、 C( 橙皮苷 ) 组、 D( 柚皮苷 ) 组、 E( 水合橙皮内酯 + 阿托品 ) 组、 F( 橙皮苷 + 阿托品 ) 组、 G( 柚皮苷 + 阿托品 ) 组。 0028 各组灌服药液 0.3mL/d， 连续灌服 3d， 1 次 /d。A 组灌服 199蒸馏水 ； B 和 E 组灌 服水合橙皮内酯 (20mg/ml)、 C 和 F 组灌服橙皮苷 (20mg/ml)、 D 和 G 组灌服柚皮苷 (20mg/ ml)。第 4d 禁食 12h 后灌服上述药物各 0.3mL， 同时 E 组、 F 组和 G 组腹腔注射 0.0003g/kg 盐酸吗啡。 2。

16、0min后灌服葡聚糖蓝2000水溶液0.4mL， 15min后脱臼处死大鼠， 剖腹， 分离自 贲门至直肠末端， 以幽门处取胃， 将胃内容物充分溶解于装有 1.5mL 四氯化碳、 0.5mL 无水 乙醇和 2mL 蒸馏水的试管内， 3500r/min 离心 15min， 取上清液， 以分光光度计于九 620nm 处 测吸光度， 以蒸馏水组的吸光度均值为 100， 其余各组吸光度与之相比所得百分数为相对 胃内色素残留率， 作为胃排空功能的指标。同时分别测量自幽门至色素最前端及至回盲部 的距离， 二者之比为平均小肠推进比。取出十二指肠， 制备大鼠离体十二指肠肌标本， 置于 盛有 20ml 台氏液的麦。

17、氏浴槽内， 通空气， 380.5恒温， 张力负荷 1g， 稳定后加入致痉剂 乙酰胆碱 (1ug/ml-0.1ml)、 氯化钡 (20 -0.1ml)、 5-HT(10mg/ml-0.1ml)， 待其平稳后加入 上述各药液。测定其给药前后振幅， 计算其拮抗率。 0029 对比观察水合陈皮内脂、 陈皮苷及柚皮苷对大鼠小肠收缩强度的作用， 水合陈皮 内脂能显著抑制离体小肠平滑肌的自发活动、 拮抗 Ach、 BaCl2或 5-HT 引起的肠道收缩痉 挛， 而后两者的作用不明显。 0030 橙皮内脂、 橙皮苷和柚皮苷拮抗 Ach、 BaCl2、 5-HT 的作用比较 0031 0032 注 ： * 与橙。

18、皮苷和柚皮苷比较 P 0.001 0033 橙皮内脂、 橙皮苷和柚皮苷对平均小肠推进比和相对胃内色素残留率的作用比较 0034 说 明 书 CN 101940566 B4/4 页 6 0035 注 ： N 15， 与蒸馏水组比较， p 0.001 0036 实施例 4 ： 水合橙皮内酯药物组合物制备 0037 取实施例 2 中的水合橙皮内酯提取物， 按本领域已知的常规方法制备各种药学上 可接受的各种形式的药用组合物。 0038 水合橙皮内酯片 ： 水合橙皮内酯提取物冻干粉中加入淀粉， 过 80 目筛， 充分混匀 后加粘合剂， 制成颗粒， 于 600干燥， 整粒， 加入滑料， 压片， 片重为 0.05 或 0.01g， 每片含 水合橙皮内酯 20mg。 0039 水合橙皮内酯胶囊 ： 水合橙皮内酯提取物冻干粉中加入淀粉， 过 80 目筛， 充分混 匀后加粘合剂， 制成颗粒， 于 600干燥， 整粒， 装胶囊即得， 每粒重 0.4g。 说 明 书 CN 101940566 B1/2 页 7 图 1图 2 图 3 图 4 说 明 书 附 图 CN 101940566 B2/2 页 8 图 5 说 明 书 附 图 。