虾青素抗炎增效组合技术领域
本发明特别涉及组合物，其包含虾青素与番茄红素的增效组合，以及
可任选的鼠尾草酸和/或叶黄素。更具体而言，本发明提供了包含前述化合
物的增效组合的组合物，其中所述的增效组合可以特别用于抑制/防止炎
症。
背景技术
炎性过程(其形成了非特异性免疫系统的重要部分)可表征为一组复
杂的化学和细胞改变，其是在面临微生物试剂和其他潜在有害的环境因素
时进行宿主防御所必需的。但是，在许多情况下，炎症可以被不适当地引
发，和/或可以持续至达到对宿主有害的程度。在这种情况下，必需抑制或
预防炎性过程的一个或多个方面的发展，特别是在非感染性炎性疾病的情
况下。
极大量的不同的化学介质已经显示与炎性过程的发展和控制有关。许
多不同试验室的近期研究涉及一氧化氮(NO)作为多种急性和慢性炎性紊
乱的重要调控剂，包括多种关节炎、胃肠疾病、中枢神经系统的炎性状况
和某种形式的哮喘。因此提出，抑制NO产生可以为治疗和/或管理这些炎
性紊乱提供有用的治疗机制。此外，在天然情况下并非为主要炎性的一些
状况或状态下，抑制NO合成也显示是有用的。因此，例如发现抑制NO
合成可以减少2型糖尿病个体在运动过程中葡萄糖被吸收至肢体组织中。
体内NO的生产是通过一氧化氮合成酶(NOS)家族介导的，包括诱
导型一氧化氮合成酶(I-NOS)，其通过许多不同的免疫学刺激(包括脂多
糖(LPS)、干扰素γ和白介素1(IL-1))所激活。
多种其他的化合物(包括大量的天然产物)也已经显示出能够抑制
NO产生。此类化合物包括诸如叶黄素[RafiM.M.etal.MolNutrFoodRes.
2007Mar；51(3):333-40；Choi,J.S.Nutrition.2006Jun；22(6):668-71]和番茄红
素[Rafi,M.M.etal.JFoodSci.2007Jan；72(l):S069-74]之类的化合物。但是，
已经证明许多天然产物NO抑制剂的功效和效力不是特别高。因此，需要
天然来源的改善的抑制NO产生的组合物。
另一种特别重要的炎性介质为肿瘤坏死因子α(TNF-α)，其为多种类
型的细胞所产生的细胞因子，包括巨噬细胞、嗜中性粒细胞和淋巴细胞。
TNF-α在炎性过程的早期占据了重要的位置，并且负责刺激其他因子的产
生，例如核因子-KB，该因子相应地激活大量的促炎基因。因此，鉴于TNF-α
的重要的促炎作用，其明显为抗炎试剂的、重要的潜在治疗靶物。
本发明的目的是提供可以用于抑制一种或多种重要炎性介质(例如过
氧化物NO或TNF-α)的产生的组合物作为用于治疗或管理病理学状态和
过程(其中涉及所述的介质)的手段。
本发明的另一个目的是提供比现有技术所报告的化合物和组合物能
够更高功效地和/或效力地抑制前述炎性介质产生的组合物。
发明概述
在一个实施方案中，本发明提供了包含番茄的番茄红素(例如但不限
于![]()
)、以及虾青素的组合物。
在另一个实施方案中，本发明进一步提供了包含虾青素、鼠尾草酸和
番茄的番茄红素的组合物。
在另一个实施方案中，本发明进一步提供了包含虾青素、叶黄素和番
茄的番茄红素的组合物。
在另一个实施方案中，本发明进一步提供了包含虾青素、鼠尾草酸、
叶黄素和番茄的番茄红素的组合物。
在另一个实施方案中，本发明进一步提供了进一步包含叶黄素,八氢
番茄红素,六氢番茄红素,β-胡罗卜素,维生素E,植物固醇或它们的任意
组合的组合物。在另一个实施方案中，本发明进一步提供了虾青素与番茄
的番茄红素的摩尔浓度比为6:1至1:2。在另一个实施方案中，本发明进一
步提供了虾青素与鼠尾草酸的摩尔浓度比为1:1至1:10。在另一个实施方
案中，本发明进一步提供了虾青素比番茄的番茄红素比鼠尾草酸的摩尔浓
度比为1:2:1至1:5:10。在另一个实施方案中，本发明进一步提供了具有增
效抗炎作用的组合物。
在另一个实施方案中，本发明进一步提供了治疗受到炎症折磨的受试
对象的方法，该方法包括向受试对象给予治疗有效量的组合物的步骤，其
中所述的组合物包含：(1)虾青素,(2)叶黄素和/或鼠尾草酸,以及(3)番
茄的番茄红素，从而治疗受到炎症折磨的受试对象。在另一个实施方案中，
本发明进一步提供了治疗受到炎症折磨的受试对象为抑制NO,PGE2,
TNF-α或它们的组合的产生。
附图简述
图1为柱状图，其示出了本发明的多种组合物(包含活性组分的组合)
对LPS刺激的巨噬细胞产生NO的作用。1A提供了包含虾青素(AST)的
组合物；1B提供了包含AST和鼠尾草酸(CA)的组合物；1C提供了包含
番茄的番茄红素提取物和AST的组合物；而1D提供了包含叶黄素和AST
的组合物。检测这些组合物对LPS诱导的巨噬细胞产生NO的作用。Y轴
提供了抑制LPS刺激的巨噬细胞产生NO的量度。
图2为柱状图，其示出了本发明的多种组合物(包含活性组分的组合)
对LPS刺激的巨噬细胞产生NO的作用：2A为AST,番茄的番茄红素提取
物和鼠尾草酸(CA)；AST,2B为番茄的番茄红素提取物叶黄素；以及2C
为AST,番茄的番茄红素提取物,叶黄素和鼠尾草酸在LPS诱导的巨噬细
胞中产生NO。
图3为柱状图，其示出了本发明的多种组合物(包含活性组分的组合)
对LPS刺激的巨噬细胞产生TNF-α的作用：3A为虾青素(AST)；3B为
AST和鼠尾草酸(CA)；3C为番茄的番茄红素提取物和AST；以及3D为
叶黄素和AST在LPS诱导的巨噬细胞中产生TNF-α。
图4为柱状图，其示出了本发明的多种组合物(包含活性组分的组合)
对LPS刺激的巨噬细胞产生TNF-α的作用：4A为AST,番茄的番茄红提
取物和鼠尾草酸(CA)；4B为AST,番茄的番茄红素提取物和叶黄素；以
及4C为AST,番茄的番茄红素提取物,叶黄素和鼠尾草酸，在LPS诱导的
巨噬细胞中产生TNF-α。
图5为柱状图，其示出了增效番茄红素与番茄提取物番茄红素的抗炎
作用(LPS诱导的巨噬细胞产生NO)。
图6为柱状图，其代表了非刺激性腹膜细胞产生的过氧化物。由腹膜
内注射硫胶质(thioglicollate)，细胞被激活(6B)或始发(6A)，并且反
应了炎症位点中细胞的情况。如所示，与安慰剂相比，营养混合物治疗显
著(p<0.01)减少(39％)了过氧化物的释放(与6.22+1.53nmolesO2/106细胞
/min相比，为3.82+1.52)。
图7为柱状图，其示出了与安慰剂相比，由饮用营养素的小鼠收获的
腹膜细胞所产生的NO减少(7A)(与3.72+0.88μΜ相比，为2.35+0.36)(显
著意义p<0.05)。类似地，与安慰剂相比，由饮用本发明的营养素的小鼠
收获的腹膜细胞所产物的PGE2(7B)和TNF-α(7C)减少(与2.72+0.33ng/ml
相比，为1.75+0.26)(显著意义p<0.05)。
发明详述
在一个实施方案中，本发明提供了包含虾青素和番茄的番茄红素的组
合物。在一个实施方案中，本发明提供了包含虾青素、鼠尾草酸和番茄的
番茄红素的组合物。在一个实施方案中，本发明提供了包含虾青素、叶黄
素和番茄的番茄红素的组合物。在一个实施方案中，本发明提供了包含虾
青素、叶黄素、鼠尾草酸和番茄的番茄红素的组合物。
在另一个实施方案中，番茄的番茄红素为由番茄植物提取的番茄红
素。在另一个实施方案中，番茄的番茄红素为由番茄红素富集的番茄提取
物。在另一个实施方案中，番茄的番茄红素为富集番茄红素的番茄提取物，
其均为天然的。在另一个实施方案中，番茄的番茄红素为番茄的番茄红素
复合物。在另一个实施方案中，番茄的番茄红素复合物包含植物营养素的
复合物，其包含八氢番茄红素,六氢番茄红素,β-胡罗卜素,维生素E和植
物固醇。在另一个实施方案中，番茄的番茄红素为![]()
(LycoRed
Ltd.,Be'erSheva,Israel)。在另一个实施方案中，本发明的组合物包含
![]()
和虾青素。
适用于制备该提取物和类似提取物的工艺在美国专利No.5,837,311中
有所描述，该文献的说明书以引用方式全文并入本文。但是公认的是许多
其他类型的制备过程可以用于由多种植物来源获得所述的组合物。
在另一个实施方案中，虾青素主要为二棕榈酸的酯。在另一个实施方
案中，虾青素由微藻类提取和/或纯化。在另一个实施方案中，虾青素由酵
母菌提取和/或纯化。在另一个实施方案中，虾青素由鲑鱼提取和/或纯化。
在另一个实施方案中，虾青素由鳟鱼提取和/或纯化。在另一个实施方案中，
虾青素由磷虾提取和/或纯化。在另一个实施方案中，虾青素由草虾提取和
纯化。在另一个实施方案中，虾青素由龙虾提取和/或纯化。在另一个实施
方案中，虾青素由甲壳纲动物提取和/或纯化。在另一个实施方案中，虾青
素由羽毛类鸟(feathersbird)提出和/或纯化。在另一个实施方案中，虾青
素为合成的虾青素。在另一个实施方案中，合成的虾青素通过合成途径生
产，其中所述的合成途径例如但不限于在Krause,Wolfgang；Henrich,Klaus；
Paust,Joachim；etalPreaparationofAstaxanthin.DE19509955.9Mar.18,
1995中所述的合成途径。
在另一个实施方案中，虾青素是在细菌中通过改造的生产系统生产
的。在另一个实施方案中，虾青素的生物合成通过玉米黄质或角黄素由β-
胡萝卜素进行的。在另一个实施方案中，虾青素为3R,3'R立体异构体，
3R,3'S(内消旋)立体异构体，3S,3'S立体异构体或它们的任意组合。在另一
个实施方案中，虾青素包含3种立体异构体的混合物(比例为大约1:2:1)。
在另一个实施方案中，虾青素(其为天然形成的化合物，并且为有效
的抗氧化剂)可以用于减缓和延迟、和/或预防炎性或炎性诱导的创伤疾病
或损伤的本发明的组合物中。在另一个实施方案中，本文所述的组合物具
有作为抗炎性抗氧化剂的增效能力。
在另一个实施方案中，本文所述的组合物进一步包含八氢番茄红素。
在另一个实施方案中，本文所述的组合物进一步包含六氢番茄红素。在另
一个实施方案中，本文所述的组合物进一步包含β-胡罗卜素。在另一个实
施方案中，本文所述的组合物进一步包含维生素E。在另一个实施方案中，
本文所述的组合物包含植物固醇。在另一个实施方案中，本文所述的组合
物进一步包含任意2种或多种的组合：八氢番茄红素,六氢番茄红素,β-胡
罗卜素,维生素E和植物固醇。在另一个实施方案中，八氢番茄红素,六
氢番茄红素,β-胡罗卜素,维生素E和植物固醇是天然来源的。在另一个实
施方案中，八氢番茄红素,六氢番茄红素,β-胡罗卜素,维生素E和植物固
醇是由番茄衍生的。在另一个实施方案中，八氢番茄红素,六氢番茄红素,
β-胡罗卜素,维生素E,植物固醇或它们的任意组合是合成生产的。在另一
个实施方案中，植物固醇可以为植物固醇的组合。
在另一个实施方案中，虾青素与番茄的番茄红素的摩尔浓度比为20:1
至1:5。在另一个实施方案中，虾青素与番茄的番茄红素的摩尔浓度比为
15:1至1:2。在另一个实施方案中，虾青素与番茄的番茄红素的摩尔浓度
比为10:1至1:5。在另一个实施方案中，虾青素与番茄的番茄红素的摩尔
浓度比为6:1至1:5。在另一个实施方案中，虾青素与番茄的番茄红素的
摩尔浓度比为6:1至1:2。
在另一个实施方案中，所述的组合物包含2.5至15mg番茄的番茄红
素。在另一个实施方案中，所述的组合物包含5mg番茄的番茄红素。在另
一个实施方案中，所述的组合物包含5至10mg番茄的番茄红素。在另一
个实施方案中，所述的组合物包含0.5至100mg虾青素。在另一个实施方
案中，所述的组合物包含10至100mg虾青素。在另一个实施方案中，所
述的组合物包含10至50mg虾青素。在另一个实施方案中，所述的组合物
包含20至50mg虾青素。在另一个实施方案中，所述的组合物包含10mg
至10g鼠尾草酸。在另一个实施方案中，所述的组合物包含10mg至1g鼠
尾草酸。在另一个实施方案中，所述的组合物包含10mg至500mg鼠尾草
酸。在另一个实施方案中，所述的组合物包含50mg至500mg鼠尾草酸。
在另一个实施方案中，所述的组合物包含100mg至500mg鼠尾草酸。
在另一个实施方案中，在本发明的组合物中，虾青素与鼠尾草酸的摩
尔浓度比为1:1至1:50。在另一个实施方案中，在本发明的组合物中，虾
青素与鼠尾草酸的摩尔浓度比为1:1至1:20。在另一个实施方案中，在本
发明的组合物中，虾青素与鼠尾草酸的摩尔浓度比为1:1至1:10。在另一
个实施方案中，在本发明的组合物中，虾青素与鼠尾草酸的摩尔浓度比为
1:1至1:5。
在另一个实施方案中，在本发明的组合物中，虾青素与番茄的番茄红
素及鼠尾草酸的摩尔浓度比为1:1:1至1:20:40。在另一个实施方案中，在
本发明的组合物中，虾青素与番茄的番茄红素及鼠尾草酸的摩尔浓度比为
1:1:1至1:10:20。在另一个实施方案中，在本发明的组合物中，虾青素与
番茄的番茄红素及鼠尾草酸的摩尔浓度比为1:1:1至1:10:10。在另一个实
施方案中，在本发明的组合物中，虾青素与番茄的番茄红素及鼠尾草酸的
摩尔浓度比为1:2:1至1:5:10。
在另一个实施方案中，本发明的组合物进一步包含玉米黄质。在另一
个实施方案中，本发明的组合物进一步包含叶黄素。在另一个实施方案中，
叶黄素包含(3R,3'R,6'R)-β,ε-胡罗卜素-3,3'-二醇。在另一个实施方案中，叶
黄素为植物叶黄素。在另一个实施方案中，叶黄素为番茄叶黄素。在另一
个实施方案中，叶黄素为万寿菊叶黄素。在另一个实施方案中，叶黄素以
万寿菊提取物形式提供。在另一个实施方案中，叶黄素为合成叶黄素。在
另一个实施方案中，叶黄素包含皂化脂肪酸。
上文公开的组合物的成分可以为纯化的化合物、合成的化合物或者可
以与其他成分存在于混合物中，例如存在于植物提取物中，例如迷迭香提
取物(在鼠尾草酸的情况下)、万寿菊提取物(在叶黄素的情况下)或番
茄提取物(例如![]()
其可市售得自LycoRed,Be'erSheva,Israel，
在番茄红素和其他类胡萝卜素的情况下)。在一些实施方案中，鼠尾草酸
以迷迭香提取物的形式提供。在一些实施方案中，鼠尾草酸得自迷迭香提
取物。
在一些实施方案中，本文所述的组合物具有增效抗炎作用。在一些实
施方案中，本文所述的组合物为口服组合物。在一些实施方案中，本文所
述的组合物进一步包含药物或营养可接受的赋形剂。
在一些实施方案中，本文所述的组合物抑制了炎性介质和细胞因子的
产生和/或分泌，其中所述的炎性介质和细胞因子在大量的哺乳动物炎性疾
病的发病机理中起重要作用。在另一个实施方案中，本发明的组合物为植
物营养素组合，其即刻、高效且增效地抑制LPS诱导的内部过氧化物的产
生，从而使得ERK和NF-kB的激活被显著降低。
在另一个实施方案中，本发明进一步提供了用于治疗受到炎症或感染
性休克折磨的受试对象的方法，该方法包括向所述的受试对象给予治疗有
效量的本文所述的组合物的步骤。在另一个实施方案中，本发明进一步提
供了用于在炎性位点处抑制由巨噬细胞和单核细胞产生的促炎细胞因子
(例如但不限于TNF-α)的产生的方法，该方法包括向有需要的受试对象
给予治疗有效量的本文所述的组合物的步骤。在另一个实施方案中，本发
明进一步通过了用于在炎性位点处抑制由巨噬细胞和单核细胞产生的促
炎细胞因子(例如但不限于TNF-α)的释放的方法，该方法包括向有需要
的受试对象给予治疗有效量的本文所述的组合物的步骤。
在另一个实施方案中，本发明进一步提供了用于治疗受到炎症折磨的
受试对象的方法，其中所述的炎症为疾病状态的固有部分。在另一个实施
方案中，本发明进一步提供了用于治疗类风湿性关节炎的方法。在另一个
实施方案中，本发明进一步提供了用于治疗Crohn疾病的方法。在另一个
实施方案中，本发明进一步提供了用于治疗溃疡性结肠炎的方法。在另一
个实施方案中，本发明进一步通过了用于治疗感染性休克综合征的方法。
在另一个实施方案中，本发明进一步提供了用于治疗动脉粥样硬化的方
法。在另一个实施方案中，本发明进一步提供了用于治疗幼年型类风湿性
关节炎的方法。在另一个实施方案中，本发明进一步提供了用于治疗银屑
病关节炎的方法。在另一个实施方案中，本发明进一步提供了用于治疗骨
关节炎的方法。在另一个实施方案中，本发明进一步提供了用于治疗难治
性类风湿性关节炎的方法。在另一个实施方案中，本发明进一步提供了用
于治疗慢性非类风湿性关节炎的方法。在另一个实施方案中，本发明进一
步提供了用于治疗骨质疏松症/骨再吸收的方法。在另一个实施方案中，本
发明进一步提供了用于治疗内毒素性休克的方法。在另一个实施方案中，
本发明进一步提供了用于治疗缺血再灌注损伤的方法。在另一个实施方案
中，本发明进一步提供了用于治疗冠心病的方法。在另一个实施方案中，
本发明进一步提供了用于治疗脉管炎的方法。在另一个实施方案中，本发
明进一步提供了用于治疗淀粉样变的方法。在另一个实施方案中，本发明
进一步提供了用于治疗多发性硬化的方法。在另一个实施方案中，本发明
进一步提供了用于治疗脓毒病的方法。在另一个实施方案中，本发明进一
步提供了用于治疗慢性复发性葡萄膜炎的方法。在另一个实施方案中，本
发明进一步提供了用于治疗丙型肝炎病毒感染的方法。在另一个实施方案
中，本发明进一步提供了用于治疗疟疾的方法。在另一个实施方案中，本
发明进一步提供了用于治疗溃疡性结肠炎的方法。在另一个实施方案中，
本发明进一步提供了用于治疗恶疾的方法。在另一个实施方案中，本发明
进一步提供了用于治疗浆细胞瘤的方法。在另一个实施方案中，本发明进
一步提供了用于治疗子宫内膜异位的方法。在另一个实施方案中，本发明
进一步提供了用于治疗Behcet疾病的方法。在另一个实施方案中，本发明
进一步提供了用于治疗Wegenrer肉芽肿病的方法。在另一个实施方案中，
本发明进一步提供了用于治疗自身免疫疾病的方法。在另一个实施方案
中，本发明进一步提供了用于治疗强直性脊柱炎的方法。在另一个实施方
案中，本发明进一步提供了用于治疗常见变异型免疫缺陷病(CVID)的方
法。在另一个实施方案中，本发明进一步提供了用于治疗慢性移植物抗宿
主病的方法。在另一个实施方案中，本发明进一步提供了用于治疗创伤和
移植物排斥反应的方法。在另一个实施方案中，本发明进一步提供了用于
治疗成人型呼吸窘迫综合征的方法。在另一个实施方案中，本发明进一步
提供了用于治疗肺纤维化的方法。在另一个实施方案中，本发明进一步提
供了用于治疗复发性卵巢癌的方法。在另一个实施方案中，本发明进一步
提供了用于治疗淋巴细胞增生症的方法。在另一个实施方案中，本发明进
一步提供了用于治疗难治性多发性骨髓瘤的方法。在另一个实施方案中，
本发明进一步提供了用于治疗骨髓增生性疾病的方法。在另一个实施方案
中，本发明进一步提供了用于治疗糖尿病的方法。在另一个实施方案中，
本发明进一步提供了用于治疗幼年型糖尿病。在另一个实施方案中，本发
明进一步提供了用于治疗脑膜炎的方法。在另一个实施方案中，本发明进
一步提供了用于治疗皮肤迟发型超敏反应的方法在另一个实施方案中，本
发明进一步提供了用于治疗Alzheimer疾病的方法。在另一个实施方案中，
本发明进一步提供了用于治疗系统性红斑狼疮的方法。在另一个实施方案
中，本发明进一步提供了用于治疗与炎性过程固有相关或者取决于炎性过
程的任何其他临床状况。
在另一个实施方案中，本发明提供的是治疗受到炎症折磨的受试对象
为抑制抗炎细胞因子、糖皮质激素、抗炎神经肽或脂质炎症介质的产生。
在另一个实施方案中，本发明提供的是治疗受到炎症折磨的受试对象为抑
制在炎性位点处NO、PGE、TNF-α或它们的任意组合的产生。在另一个实
施方案中，本发明提供的是治疗受到炎症折磨的受试对象为抑制巨噬细胞
产生NO、PGE、TNF-α或它们的任意组合。在另一个实施方案中，本发明
提供的是治疗受到炎症折磨的受试对象为抑制嗜中性粒细胞募集至炎症
位点。在另一个实施方案中，本发明提供的是治疗受到炎症折磨的受试对
象为抑制炎症位点处嗜中性粒细胞的激活。在另一个实施方案中，PGE为
PGE2(前列腺素E2)。
此外，本发明还提供了治疗病理学状况的方法，其中过氧化物离子、
NO、TNF-α和/或PGE2在需要此类治疗的哺乳动物受试对象中作为所述状
况的调控剂或介质，其中所述的方法包括向所述的受试对象给予根据上文
公开的任意一个实施方案的治疗组合物。
在另一个方面中，本发明涉及诸如本文所述的组合物在制备用于治疗
多种状况的药剂中的用途，其中所述的状况对NO、TNF-α和/或PGE2生
产的抑制产生应答。
在上文所述的方法的一些实施方案中，所述的受试对象为人类受试对
象。在上文所述的方法的一些实施方案中，所述的受试对象为哺乳动物。
在上文所述的方法的一些实施方案中，所述的受试对象为宠物。在上文所
述的方法的一些实施方案中，所述的受试对象为家畜。在上文所述的方法
的一些实施方案中，所述的受试对象为试验室动物。
尽管在上文公开的方法中，治疗组合物可以通过任何方便的手段给
予，但是在一个实施方案中，所述的组合物以药物、营养食品、营养素或
口服剂型给予。但是，在另一个优选的实施方案中，所述的治疗组合物被
引入食品或饮料中。
在一个实施方案中，本发明的组合物可以提供给个人本身(individual
perse)。在一个实施方案中，本发明的组合物可以作为其他药物组合物或
营养食品组合物(其中其与药物可接受的载体混合)的一部分提供给个体。
在一个实施方案中，“药物组合物”或“营养食品组合物”是指使用
其他的化学成分(例如生理学合适的载体和赋形剂)制备本文所述的组合
物。药物组合物或营养食品组合物的目的是促进将所述的组合物给予有机
体。
在一个实施方案中，“组合制备物”特别定义了“份数套件”，其意义
在于上文所定义的组合伙伴可以独立地形成剂量，或者使用具有不同量的
组合伙伴的不同的固定组合，即，同步地、同时地、分开地或相继地。在
一些实施方案中，份数套件的份数则可以是同时给予的，或者是按时间顺
序错开的，即，对于份数套件的任何份数，可以是不同的时间点，并且具
有相等的或不同的时间间隔。在一些实施方案中，可以在组合制备物中给
予占总量一定比例的组合伙伴。在一个实施方案中，可以改变组合制备物，
例如从而应对待治疗的患者子群体的需要或者单一患者的需要，这些患者
由于特定的疾病、疾病的严重性、年龄、性别或体重而具有不同的需要，
这可以由本领域的技术人员容易地制得。
在一个实施方案中，短语“生理学可接受的载体”和“药物可接受的
载体”可交换使用，是指以下载体或稀释剂，其不会对哺乳动物产生明显
的刺激，并且不会消除给予组合物的生物活性和性质。佐剂包含在这些短
语的范围内。
在一个实施方案中，“赋形剂”是指加入至药物组合物中从而进一步
有利于给予活性组分的惰性物质。在一个实施方案中，赋形剂包括碳酸钙,
磷酸钙,多种糖和多种淀粉,纤维素衍生物,凝胶,植物油和聚乙二醇。
用于配制和给予药品的技术可以在"Remington'sPharmaceutical
Sciences,"MackPublishingCo.,Easton,PA(最新版)中找到，该文献以引
用方式全文并入本文。
在一个实施方案中，合适的给予途径包括例如口服、经粘膜、经鼻、
肠或胃肠外传递，包括经肌肉、皮下和髓内注射，以及鞘内、直接心室内、
静脉内、腹膜内、鼻内或眼内注射。
在一个实施方案中，所述的制备物以局部方式而非系统方式给予，例
如将制备物直接注射至患者肌体的特定区域中。在一个实施方案中，患者
肌体的区域表征为炎症或包含炎性介质。
本发明考虑了剂量范围的多个实施方案。在一个实施方案中，本发明
的组合物的剂量范围为0.5-2000mg/天。在另一个实施方案中，剂量范围
为5-500mg/天。在另一个实施方案中，剂量范围为500-2000mg/天。在另
一个实施方案中，剂量范围为0.1-10mg/天。在另一个实施方案中，剂量
范围为50-500mg/天。在另一个实施方案中，剂量范围为5-4000mg/天。
在另一个实施方案中，剂量范围为0.5-50mg/天。在另一个实施方案中，
剂量范围为5-80mg/天。在另一个实施方案中，剂量范围为100-1000mg/
天。在另一个实施方案中，剂量范围为1000-2000mg/天。在另一个实施方
案中，剂量范围为200-600mg/天。在另一个实施方案中，剂量范围为
400-1500mg/天。在另一个实施方案中，剂量范围为800-1500mg/天。在
另一个实施方案中，剂量范围为500-2500mg/天。在另一个实施方案中，
剂量范围为600-1200mg/天。在另一个实施方案中，剂量范围为1200-2400
mg/天。在另一个实施方案中，剂量范围为40-60mg/天。在另一个实施方
案中，剂量范围为2400-4000mg/天。在另一个实施方案中，剂量范围为
450-1500mg/天。在另一个实施方案中，剂量范围为1500-2500mg/天。在
另一个实施方案中，剂量范围为5-10mg/天。在另一个实施方案中，剂量
范围为550-1500mg/天。在另一个实施方案中，“剂量”是指本发明的活性
组分或活性组分的组合的量。在另一个实施方案中，“剂量”不包含赋形
剂、水性溶液、缓冲剂、媒介物或任何其他惰性物质。
在一个实施方案中，剂量为200mg/天。在另一个实施方案中，剂量
为300mg/天。在另一个实施方案中，剂量为400mg/天。在另一个实施方
案中，剂量为500mg/天。在另一个实施方案中，剂量为600mg/天。在另
一个实施方案中，剂量为700mg/天。在另一个实施方案中，剂量为800mg/
天。在另一个实施方案中，剂量为900mg/天。在另一个实施方案中，剂
量为1000mg/天。
在一个实施方案中，口服给予包括单位剂型，包括片剂、胶囊、锭剂、
咀嚼片、悬浮剂、饮品、糖浆、果肉饮料(nectars)、饮料、乳剂等。此类
单位剂型包括安全且有效量的组合物。适用于制备经口给予的单位剂型的
药物可接受的载体是本领域公知的。在一些实施方案中，片剂通常包括传
统的药物相容性佐剂作为：惰性稀释剂，例如碳酸钙、碳酸钠、甘露醇、
乳糖和纤维素；粘结剂，例如淀粉、凝胶和蔗糖；崩解剂，例如淀粉、褐
藻酸和交联羧甲基纤维素(croscarmelose)；润滑剂，例如硬脂酸镁、硬脂
酸和滑石。在一个实施方案中，诸如二氧化硅之类的助流剂可以用于改善
粉末混合物的流动特征。在一个实施方案中，就外观考虑，可以加入诸如
FD&C染料之类的着色剂。诸如阿斯巴甜、糖精、薄荷醇、薄荷和水果香
料之类的甜味剂和风味剂为用于咀嚼片的有用的佐剂。胶囊通常包含上文
所公开的一种或多种固体稀释剂。在一些实施方案中，载体成分的选择取
决于第二考虑的事情，例如味道、成本和货架稳定性，其对于本发明的目
的而言不是重要的，并且可以通过本领域的技术人员容易地制得。
在一个实施方案中，口服剂型包含预定的释放规律。在一个实施方案
中，本发明的口服剂型包括控释片剂、胶囊、锭剂或咀嚼片。在一个实施
方案中，本发明的口服剂型包括缓释片剂、胶囊、锭剂或咀嚼片。在一个
实施方案中，本发明的口服剂型包括速释片剂、胶囊、锭剂或咀嚼片。在
一个实施方案中，口服剂型是根据本领域的任一技术人员已知的、所需的
活性组分释放规律配制的。在另一个实施方案中，所述的组合物为包含一
定剂量的饮品或饮料，其组成了本文所述的比例或量的活性组分的组合。
在一些实施方案中，经口组合物包含液体溶液、乳剂、悬剂等。在一
些实施方案中，适用于制备所述的组合物的药物可接受的载体是本领域公
知的。在一些实施方案中，液体口服组合物包含大约0.012％至大约0.933％
的活性组分，或者在另一个实施方案中，为大约0.033％至大约0.7％。
在一些实施方案中，用于本发明的方法中的药物组合物包括溶液或乳
剂，在一些实施方案中，其为包含安全且有效量的本发明的组合物、以及
可任选的其他化合物的溶液或乳剂。在一些实施方案中，所述的组合物包
含大约0.01％至大约10.0％w/v或w/w的本文所述的活性组分的组合。
此外，在另一个实施方案中，所述的组合物局部给予肌体表面，并因
此配制成适用于局部给予的形式。合适的局部配制物包括胶体、软膏、乳
霜、洗剂、滴剂等。对于局部给予而言，本发明的组合物可以与其他一种
或多种合适的治疗试剂结合，并在生理学可接受的稀释剂中制备成溶液、
悬剂或乳剂(具有或不具有药物载体)并以这些形式使用。
在一个实施方案中，本发明的药物组合物是通过本领域公知的工艺制
备的，例如通过传统的混合、溶解、粒化、制成糖衣丸、碾成细粉、乳化、
囊封、包埋或冻干工艺。
在一个实施方案中，根据本发明使用的组合物是使用包含赋形剂和助
剂的一种或多种生理学可接受的载体以传统方式配制的，其有利于将活性
组分加工成制药学中可以使用的制备物。在一个实施方案中，配制取决于
所选的给予途径。
此外，在一些实施方案中，所述的组合物还包含：防腐剂，例如杀藻
胺和硫汞撒等；螯合剂，例如依地酸钠等；缓冲剂，例如磷酸盐、柠檬酸
盐和醋酸盐；渗透剂，例如氯化钠、氯化钾、甘油、甘露醇等；抗氧化剂，
例如抗坏血酸、乙酰半胱氨酸、焦亚硫酸钠等；芳香剂；粘度调节剂，例
如聚合物，包括纤维素及其衍生物；以及聚乙烯醇以及根据需要调节水性
组合物的pH的酸和碱。此外，在一些实施方案中，所述的组合物还包含
局部麻醉剂或其他活性物。所述的组合物可以用作喷雾剂、合剂(mist)、
滴剂等。
在一些实施方案中，组合物包含活性制备物水溶性形式的水性溶液。
此外，在一些实施方案中，活性组分的悬剂可以制备成油基或水基的悬剂。
在一些实施方案中，合适的亲脂性溶液或媒介物包括：脂肪油，例如芝麻
油；或合成脂肪酸酯，例如油酸乙酯、甘油三酸酯或脂质体。在一些实施
方案中，水性悬剂包含可以增加悬剂的粘度的物质，例如羧甲基纤维素钠、
山梨醇或右旋糖苷。在另一个实施方案中，悬剂还包含合适的稳定剂或者
可以增加活性组分的溶解度从而能够制备高浓度溶液的试剂。
在一些实施方案中，适用于本发明的内容的组合物包括多种组合物，
其中包含有效实现预期目的的量的活性组分。在一些实施方案中，治疗有
效量是指可以有效地预防、缓解或减轻待治疗受试对象的疾病或延长其生
存的活性组分的量。
在一个实施方案中，治疗有效量的测定恰好在本领域那些技术人员的
能力范围内。
可以用作营养食品或药物可接受的载体或其成分的物质的一些实例
为：糖，例如乳糖、葡萄糖和蔗糖；淀粉，例如玉米淀粉和马铃薯淀粉；
纤维素及其衍生物，例如羧甲基纤维素钠、乙基纤维素和甲基纤维素；黄
芪胶粉末；麦芽；凝胶；滑石；固体润滑剂，例如硬脂酸和硬脂酸镁；硫
酸钙；植物油，例如花生油、棉花籽油、芝麻油、橄榄油、玉米油和可可
属的油；多元醇，例如丙二醇、甘油、山梨醇、甘露醇和聚乙二醇；褐藻
酸；乳化剂，例如TweenTM品牌的乳化剂；润湿剂，例如十二烷基硫酸钠；
着色剂；风味剂；制片剂；稳定剂；抗氧化剂；防腐剂；无热源的水；等
渗盐水；和磷酸盐缓冲溶液。与所述的化合物联合使用的营养食品或药物
可接受的载体的选择基本通过所述化合物的给予方式来测定。在一个实施
方案中，如果题述化合物待注射给予，则所述的营养食品或药物可接受的
载体是具有血液相容性悬浮剂的无菌生理盐水，其pH调节至大约7.4。
此外，所述的组合物进一步包含：粘结剂(例如阿拉伯树胶,玉米淀粉,
凝胶,卡波姆,乙基纤维素,瓜尔豆胶,羟丙基纤维素,羟丙基甲基纤维素,
聚乙烯吡啶酮),崩解剂(例如玉米淀粉,马铃薯淀粉,褐藻酸,二氧化硅,
交联羧甲基纤维素钠,聚乙烯吡啶酮,瓜尔豆胶,羟基乙酸淀粉钠),各种
pH和离子强度的缓冲剂(例如Tris-HCL,醋酸盐,磷酸盐),添加剂(例如防
止吸附于表面上的清蛋白或凝胶),洗涤剂(例如Tween20,Tween80,
PluronicF68,胆酸盐),蛋白酶抑制剂,表面活性剂(例如十二烷基硫酸钠),
渗透增强剂,增溶剂(例如甘油,聚乙烯甘油),抗氧化剂(例如抗坏血酸,
焦亚硫酸钠,丁基化羟基茴香醚),稳定剂(例如羟丙基纤维素,羟丙基甲基
纤维素),增粘剂(例如卡波姆,胶状二氧化硅,乙基纤维素,瓜尔豆胶),甜
味剂(例如阿斯巴甜,柠檬酸),防腐剂(例如硫汞撒,苯甲醇,对羟苯甲酸
酯),润滑剂(例如硬脂酸,硬脂酸镁,聚乙二醇,十二烷基硫酸钠),助流剂
(例如胶状二氧化硅),增塑剂(例如邻苯二甲酸二乙酯,柠檬酸三乙酯),乳
化剂(例如卡波姆,羟丙基纤维素,十二烷基硫酸钠),聚合物涂料(例如泊
洛沙姆或巴洛米诺马),涂料和薄膜形成剂(例如乙基纤维素,丙烯酸酯,聚
甲基丙烯酸酯)和/或佐剂。
用于糖浆、酏剂、乳剂和悬浮剂的载体的典型成分包括乙醇、甘油、
丙二醇、聚乙二醇、液体蔗糖、山梨醇和水、对于悬浮剂而言，典型的悬
浮剂包括甲基纤维素、羧甲基纤维素钠、纤维素(例如AvicelTM,RC-591)、
黄芪胶和海藻酸钠；典型的润湿剂包括卵磷脂和聚环氧乙烷山梨聚糖(例如
聚山梨醇酯80)。典型的防腐剂包括对羟基苯甲酸甲酯和苯甲酸钠。在另
一个实施方案中，经口液体组合物还包含一种或多种成分，例如上文公开
的甜味剂、风味剂和着色剂。
此外，所述的组合物还包括将本发明的组合物的活性材料引入至聚合
化合物(例如聚乳酸、聚乙醇酸、水凝胶等)的颗粒制备物中或颗粒制备
物上；或者引入至脂质体、微乳剂、胶束、单层薄片或多层薄片囊泡、红
细胞影或原生质球上。此类组合物将影响物理状态、溶解度、稳定性、体
内释放速率和体内清除率。此外，本发明还考虑了使用聚合物(例如泊洛
沙姆或巴洛米诺马)包衣的颗粒组合物。
在一些实施方案中，最初通过体外检验来估计制备物的有效量或剂
量。在一个实施方案中，可以在动物模型中配制一定的剂量，并且此类信
息可以用于更精确地测定人类中有用的剂量。
在一个实施方案中，本文所述的组合物的毒性和治疗效力可以通过体
外标准的营养食品或药物过程在细胞培养物或实验动物中测定。在一个实
施方案中，由这些体外过程、细胞培养物检验和动物研究获得的数据可以
用于配制用于人类的剂量范围。在一个实施方案中，所述的剂量根据所用
的剂型和使用的给予途径而改变。在一个实施方案中，医生个人可以根据
患者的状态来选择确切的配制物、给予途径和剂量[例如参见Fingl,etal.,
(1975)"ThePharmacologicalBasisofTherapeutics",Ch.1p.l]。
在一个实施方案中，根据待治疗的状况的严重性和应答，在持续几天
至几周的治疗过程中，或者直至产生治愈或者取得疾病状态的减少，剂量
可以是单次给予或多次给予。
在一个实施方案中，待给予的组合物的量当然取决于待治疗的受试对
象、痛苦的严重性、给予的方式、处方医生的判断等。
在一个实施方案中，还可以制备包含本发明的制备物(其在相容性的
药物或营养食品载体中配制)的组合物，置于合适的容器中，并标记用于
治疗所示的状况。
在一个实施方案中，本发明的组合物存在于包装或分配器装置中，例
如FDA批准的试剂盒，其包含包含所述的组合物的一个或多个单位的剂
型。在一个实施方案中，例如所述的包装包含金属或塑料箔，例如透明包
装。在一个实施方案中，所述的包装或分配器装置附带有用于给予的说明
书。在一个实施方案中，所述的包装或分配器容纳有管理制造商、营养食
品或药物的使用或出售的政府机构规定形式的、与容器有关的通知，该通
知反映出所述的组合物或者人类或兽医给予形式已经被批准。在一个实施
方案中，该通知为美国食品药品管理局对处方药品批准的标签或者为批准
的产品插件。
通过检验以下实施例，本发明的其他目的。优点和新特征对于本领域
的任一普通技术人员而言是显而易见的，其无意于进行限定。此外，上文
描述的以及在所附的权利要求书部分所要求的本发明的多个实施方案和
方面的每一个都能在以下实施例中找到试验支持。
实施例
通常，本文使用的系统命名法和本发明采用的试验室过程包括化学、
分子、生物化学和细胞生物学技术。此类技术在文献中由全面的说明。例
如参见"MolecularCloning:AlaboratoryManual"Sambrooketal.,(1989)；
"CurrentProtocolsinMolecularBiology"VolumesI-IIIAusubel,R.M.,ed.
(1994)；"CellBiology:ALaboratoryHandbook",VolumesI-IIICellis,J.E.,ed.
(1994)；JohnMcMurry和TadhgBegley的TheOrganicChemistryof
BiologicalPathways(RobertsandCompany,2005)；RichardSilverman的
OrganicChemistryofEnzyme-CatalyzedReactions(AcademicPress,2002)；
Leroy"Skip"GWade的OrganicChemistry(6thEdition)；T.W.Graham
Solomons和CraigFryhle的OrganicChemistry。
材料和方法
细胞
腹膜内注射1.5mL硫代硫酸盐肉汤(4％)，4天后收获，由6-8周龄的
雄性ICR小鼠(Harlanjsrael)的腹膜腔分离巨噬细胞并收集培养物腹膜巨噬
细胞。使用磷酸盐缓冲盐水(PBS)3次洗涤腹膜巨噬细胞，并且在适当的时
候，实施红细胞的低渗裂解，从而得到高度富集(90-95％)的巨噬细胞群。
使用FITC缀合的大鼠抗小鼠F4/80(MCA497F；Serotec,Oxford,UK)，通过
流式细胞仪技术，通过FACS分析(Becton-Dickinson,MountainView,CA,
USA)来识别巨噬细胞。对于各样品而言，分析10000光散射门控的活细胞。
在37℃下，在5％CO2气氛中，使腹膜巨噬细胞(1X106细胞/孔)在96孔板
的包含10％胎牛血清、2mML-谷氨酰胺、100U/ml青霉素、100mg/ml链
霉素(Beit-Haemek,Israel)的RPMI1640培养基中培养。使用得自鼠伤寒沙
门氏菌血清型的1mg/mlLPS在本文所述的不同组合缺乏或存在下刺激细
胞(参见实施例部分中的附图)。将植物营养素溶解于二甲基亚砜(DMSO；
最终浓度为5mM)中。对混合物进行涡流处理并在37摄氏度下在水浴中温
育10min(在摇动条件下)，并在超声波浴中超声处理15秒(3次)。通过
将适量的化合物加入至温暖的培养基中来由原液制备化合物的工作浓度。
通过将0.5ml异丙醇和包含0.025％BHT的1.5ml己烷/二氯甲烷(l/5v/v)加
入至1ml培养基中来计算溶液的最终浓度。对溶液进行涡流处理，并通过
在3000rpm下离心10min来分离液相。实施分光光度测量法来测量番茄红
素、虾青素、叶黄素和β-胡萝卜素的浓度。向对照中加入适量的DMSO
(0.1-0.2％)，并关联对照来计算各试管中的百分抑制率。
TNF-α生产的检验
通过ELISA试剂盒(Biolegend,SanDiego,CA,USA)来定量细胞培养上
清液中TNF-α的浓度。
实施例1：本发明组合物对巨噬细胞的抗炎作用
通过LPS刺激的巨噬细胞产生NO和TNF-α的抑制来检测抗炎作用。
下图示出了虾青素以剂量依赖的方式抑制了NO(图1)和TNF-α(图3)
的产生。
本试验证明0.5-2μΜ虾青素与1μΜ番茄的番茄红素提取物LycoMato
(LM)的组合(但是不具有1μΜ叶黄素或1μΜ鼠尾草酸(图1和3))的组合
的增效抑制(与相加效应相比，p<0.001)。水平线上方的字母S测定了增效
作用。
将1μΜ鼠尾草酸加入至0.1-1μΜ虾青素和1μΜLycoMato(LM)的组
合中产生了比缺乏鼠尾草酸下取得的作用更高的增效抑制(与相加效应相
比，p<0.001)(图2和4)。
虾青素与LycoMato和叶黄素的组合的抑制作用低于具有LycoMato和
鼠尾草酸的虾青素的作用(图2和4)。
最后，4种植物营养素的作用与具有LycoMato和鼠尾草酸的虾青素的
作用无显著性差异(图2和4)。
实施例2：番茄的番茄红素在其抗炎活性中比合成番茄红素更有效(通过
NO的产生而测量的)
发现，番茄的番茄红素提取物在减少巨噬细胞产生的NO中比合成番
茄红素有效得多(图5)。记录对促炎介质分泌的增效抑制，其中所述的促
炎介质是由与具有叶黄素,虾青素,b-胡罗卜素和鼠尾草酸的![]()
的组合预温育的、LPS刺激的巨噬细胞产生的。发现，这种新组合对于目
前的医学迹象而言出人意料地有效。
此外，记录对NO产生的增效抑制，其中所述的NO是由与
![]()
(LM)和虾青素的组合预温育的、LPS刺激的巨噬细胞产生的
(图1)。
如图2所示，记录对NO产生的增效抑制，其中所述的NO是由与(1)
![]()
(LM),鼠尾草酸和虾青素的组合，或者(2)![]()
(LM),
叶黄素和虾青素的组合预温育的、LPS刺激的巨噬细胞产生的。
如图3所示，记录对TNF-α产生的增效抑制，其中所述的TNF-α是由
与![]()
(LM)和虾青素的组合预温育的、LPS刺激的巨噬细胞产生
的。
如图3所示，记录对TNF-α产生的增效抑制，其中所述的TNF-α是由
与(1)![]()
(LM),鼠尾草酸和虾青素的组合,(2)![]()
(LM),
叶黄素和虾青素的组合，或者(3)![]()
(LM),鼠尾草酸,叶黄素和
虾青素的组合预温育的、LPS刺激的巨噬细胞产生的。
实施例3：在无矩形腹膜炎的小鼠模型中测定番茄的番茄红素提取物+虾青
素+鼠尾草酸的混合物的体内抗炎作用
方法
无菌腹膜炎的小鼠模型-向6至8周龄的平均体重为30gr的雄性ICR
小鼠(HarlanLaboratories,Israel)随意喂食内齿动物食物(#19520Kofolk,
PethachTikva,Israel)，并自由逆渗透过滤水。将动物安置在具有无菌的静
置微隔离笼中，笼中处于12:12光暗循环、18-26℃和30-70％相对湿度下。
在诱导腹膜炎之前的7天中，小鼠接受补充有![]()
虾青素,鼠尾
草酸(1:0.5:1，使用的![]()
的定量为10mg/kg)的饮用水。在微
乳剂中制备上述补充剂，所述的微乳剂包含：0.3％棕榈酸抗坏血酸酯、
0.3％α维生素E、9.34％中链甘油三酸酯、13％聚山梨醇酯80。不具有任何
营养素的微乳剂作为安慰剂。动物饮用4ml/水/天，因此![]()
叶黄
素,鼠尾草酸的植物营养素摄入分别为10:4.9:6.6mg/Kg/day。通过腹膜内
注射无菌硫代硫酸盐溶液(4％w/v，处于PBS中)来诱导无菌腹膜炎。在该
模型中，在最初的24h中将嗜中性粒细胞募集至腹膜腔(炎症位点处)中，
然后被单核细胞-嗜中性粒细胞取代。在24h后收集腹膜细胞，从而分离嗜
中性粒细胞，或者在4天后，使用8mlRPMI培养基2次洗涤腹膜腔来收
集巨噬细胞。使用PBS3次洗涤腹膜细胞，并且在适当的时候，实施红细
胞的低渗裂解，从而在诱导腹膜炎后的24h收获高度同源的(90％)嗜中性
粒细胞群，以及在4天后收集得到高度同源(90％)的巨噬细胞群。使用FITC
缀合的大鼠抗小鼠嗜中性粒细胞(MCA771F)、FITC缀合的大鼠抗小鼠
F4/80(MCA497F)和FITC缀合的大鼠抗小鼠CD3(MCA500F)(Serotec,
Oxford,England)在FACS(BectonDickinson,MountainView,CA)上通过流
式细胞仪技术，分别针对嗜中性粒细胞、单核细胞-巨噬细胞和淋巴细胞的
特征来识别腹膜细胞。
体重
在供应营养素或安慰剂的第一天和结束时取得各小鼠的体重。在所研
究的各组之间体重增加无差异。
嗜中性粒细胞产生的过氧化物
通过微量滴定板技术，嗜中性粒细胞产生的过氧化物阴离子(O2-)测量
作为亚铁细胞色素c产生的可由过氧化物歧化酶抑制的减少。嗜中性粒细
胞(5x105细胞/孔)悬浮于包含亚铁细胞色素c的100ulHBSS中(150mM)。
使用PMA(50ng/ml)诱导刺激。亚铁细胞色素c减少后，在Thermomax
MicroplateReader(MolecularDevices,MelnoPark,Calif.,USA)上在30min
内2min间隔下，550nm下的吸光率改变。测定过氧化物生成的最大速率，
并使用消光系数E550＝21mM-1cm-1，将该速率表示为纳摩尔O2-/106细胞
/10min。
巨噬细胞培养
将腹膜巨噬细胞培养于96孔板的(2x105细胞/孔)、包含10％FCS,2
mML-谷氨酰胺,100U/ml青霉素,100μg/ml链霉素(Beit-Haemek,Israel)的
RPMI1640培养基中。加入LPS，并将巨噬细胞在37℃下5％CO2气氛中
培养16-24h。
NO产生的检验
使用Griess试剂和亚硝酸钠作为标准品，通过检验亚硝酸盐的水平来
测定细胞培养物的上清液中NO的水平。
PGE2产生的检验
收集细胞培养物的上清液并立即储存在-70℃下。通过使用右旋糖苷包
衣的碳放射免疫检验方案来收集细胞培养物上清液。简言之，在500ul抗
PGE2抗血清(SigmaIsrael,Rehovot,Israel)存在下，将100ul样品或PGE2标
准品(SigmaIsrael,Rehovot,Israel)温育30min。接着，在4℃下在24h内加
入[3H]PGE2(AmershamBiosciences,NJ,USA)。24h后，将200ul冰冷的右
旋糖苷包衣的碳悬剂加入至各管中，并在冰上温育10min。在4℃下在
3500RPM下将所述的管离心15min。计数包含[3H]PGE2-抗PGE2复合物的
500ul上清液(PackardSpectrometry1900CA)，并计算PGE2的量。
TNF产生的检验
通过ELISA试剂盒(BiolegendInc.,SanDiego,CA)定量细胞培养物上
清液中TNF-α的浓度，其中所述的上清液被收集并立即储存在-70℃下。
统计分析
数据以平均值+SEM的方式表示。使用Student's配对双尾t检验来测
定用于各组之间进行比较的统计学意义。
结果
在腹膜诱导的24h时分离的小鼠腹膜嗜中性粒细胞中测量过氧化物的
产生(n＝10只小鼠/组)。图6示出由非刺激的腹膜细胞产生的过氧化物。这
些细胞由于腹膜注射硫代硫酸盐而始发，并反映了炎症位点处细胞的情
况。如所示，与安慰剂相比，通过营养混合物治疗，过氧化物的释放显著
(p<0.01)减少(39％)(与6.22+1.53nmolesO2/106细胞/min相比，为
3.82+1.52)。
此外，细胞的刺激(在感染的情况下)使得过氧化物有效释放(比未
刺激时高7.5倍)，并且与安慰剂小鼠细胞释放的过氧化物无显著性差异(分
别为28.96和34.84nmolesO2/106细胞/min)。由补充剂(混合物)治疗的
小鼠得到的细胞在刺激后产生过氧化物的速率足以反抗感染。
这些结果证明LycoMato,虾青素和鼠尾草酸混合物的组合具有显著
的抗炎作用，其中所述的组合通过使嗜中性粒细胞达到炎症位点而显著减
少自发游离自由基的释放。因此，喂食营养素可以防止嗜中性粒细胞在感
染位点的混乱的作用，但是在受到感染攻击时不会减弱它们释放过氧化物
的潜在作用。
此外，在感染位点处嗜中性粒细胞释放的促炎剂上来研究营养素治疗
的促炎作用。小鼠接受补充剂或安慰剂，7天后，在4天中诱导腹膜炎(n＝10
只小鼠/组)。针对NO的产生、PGE2的产生和TNF-α的产生来分析使用
0.5ug/mlLPS培养24h的分离腹膜细胞的上清液。
如图7所示，与安慰剂(3.72+0.88μΜ)相比，由饮用营养素的小鼠
收获的腹膜细胞中，所产生的NO减少(显著性意义p<0.05)(2.72+0.33
ng/ml)。类似地，与安慰剂(3.72+0.88μΜ)相比，由饮用营养素的小鼠
收获的腹膜细胞中，所产生的PGE2减少(显著性意义p<0.05)(1.75+0.26)。
同样，与安慰剂(99.55+24.03pg/ml)相比，由饮用营养素的小鼠收获的
腹膜细胞中，所产生的TNF-α减少(显著性意义p<0.05)(78.91+13.8)。