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1、(10)授权公告号 CN 101904830 B (45)授权公告日 2013.03.13 CN 101904830 B *CN101904830B* (21)申请号 200910052565.3 (22)申请日 2009.06.05 A61K 31/11(2006.01) A61P 1/16(2006.01) (73)专利权人 张明发 地址 201204 上海市浦东新区绿林路 320 弄 117 号 601 室 (72)发明人 张明发 沈雅琴 (74)专利代理机构 上海三和万国知识产权代理 事务所 31230 代理人 章鸣玉 US 4767783 A,1988.08.30,说明书第1栏第 4。
2、6-50 行， 第 3 栏第 19-21 行 . US 4767783 A,1988.08.30,说明书第1栏第 46-50 行， 第 3 栏第 19-21 行 . (54) 发明名称 柠檬醛在制备胆道系统疾病治疗药物上的应 用 (57) 摘要 本发明提供柠檬醛在制备胆道系统疾病治疗 药物上的应用。 (51)Int.Cl. (56)对比文件 审查员 刘鹏 权利要求书 1 页 说明书 7 页 (19)中华人民共和国国家知识产权局 (12)发明专利 权利要求书 1 页 说明书 7 页 1/1 页 2 1. 柠檬醛在制备溶石利胆口服药物上的应用。 2. 如权利要求 1 所述的应用， 其中所述溶石利胆。
3、包括治疗胆囊炎、 胆管炎和胆结石中 的一种或一种以上。 3. 如权利要求 2 所述的应用， 其中所述胆结石选自胆囊结石、 胆管结石和肝部结石中 的一种或一种以上。 权 利 要 求 书 CN 101904830 B 2 1/7 页 3 柠檬醛在制备胆道系统疾病治疗药物上的应用 发明领域 0001 本发明属于肝胆系统药物领域， 具体涉及柠檬醛在制备治疗胆道系统疾病药物上 的应用。 0002 发明背景 0003 胆道系统疾病， 在我国是一种严重危害人们健康的多发病和常见病， 其发生率在 普外科名列前茅。仅就胆结石患者而论， 约占普外科住院病人总数的 10.5， 80 岁以上老 人发病率可达 23， 。
4、目前发病率还有上升趋势。日本在 1979-1980 年的尸检统计发现有 16-17患有胆石症。我国胆石症的自然发病率在 10左右， 其中半数以上为无症状胆石 症， 但无症状胆石症中最令人忧虑的问题是发生急性胆囊炎、 急性胆管炎及合并胆囊癌等。 胆石症与胆囊炎、 胆管炎互为因果关系， 胆石症可导致胆囊炎、 胆管炎， 而胆囊炎、 胆管炎可 诱生胆石症， 有报道急性胆囊炎约 70 -96存在胆囊结石。 0004 胆石症的治疗分为手术治疗和非手术治疗 2 种。手术取石对于胆囊结石往往可以 取尽， 但对于胆管结石、 肝部结石则不然， 术后残余结石约占 10-25， 且并发症发生率约为 15， 手术死亡率。
5、为 0.3-3。对于手术后的残余结石， 国内外很多医生曾采用向胆道内直 接注入溶石试剂试图溶解结石， 但溶剂的刺激性常常损伤胆管、 胆囊粘膜， 引起腹痛、 腹泻 和胆管炎等反应而没有得到推广。由于手术并没有消除病人胆石形成的原因， 术后胆石复 发率很高， 占胆道再手术率的 50 -95， 其中一些病人胆囊摘除后胆石又在胆管， 甚至肝 部再生。 0005 排石疗法是一种通过药物、 针刺或机械的手段引起胆囊收缩、 胆道口括约肌松弛、 增强胆石运动， 促进胆石从肝胆排入肠道的非手术治疗。 可是由于胆道解剖学上的特殊性， 排石疗法的疗效相差十分悬殊， 低者仅为百分之几， 高者可达 100， 而胆石症病。
6、人自然排 石率也达 1-50。且在行排石疗法过程中， 约 80病人可出现排石反应， 个别可引起出血 坏死性胰腺炎或急性胆囊炎、 胆管炎。 排石疗法与手术疗法一样并不解决胆石形成问题， 排 石后仍可能复发。 0006 口服溶石利胆药疗法是一种非创伤性的无痛苦的疗法， 病人乐于接受。口服药物 后由于促进大量胆汁分泌， 一方面可以冲洗胆道， 有利于胆管、 胆囊炎症缓解， 另一方面分 泌的大量胆汁改善了病人原来的致石胆汁的过饱和状态， 有利于胆石向溶解方向发展。目 前常用的溶石利胆药主要是熊去氧胆酸和鹅去氧胆酸， 此 2 药仅对胆固醇结石有效， 服药 1 年以上的胆石完全溶解率为 20 -40， 疗效。
7、并不令人满意。 0007 在 对 中 草 药 进 行 利 胆 作 用 普 筛 的 试 验 中， 我 们 发 现 荜 澄 茄 山 鸡 椒 Litseacubeba(Lour.)Pers. 的成熟果实 具有利胆、 降低胆汁中胆固醇、 胆红素、 粘蛋白含 量和抑制胆石形成的作用， 而且其醚提取物的上述作用在所有提取物中最为突出， 提示荜 澄茄的脂溶性部分应具有较好的作用。 业已发现， 荜澄茄挥发油具有很多生理功能， 而柠檬 醛是荜澄茄挥发油中的主要成分。二者都是传统的香料， 也是合成其它香料的重要化工原 料。它们作为增香剂被广泛应用于食品和化妆品等日用化工之中。有实验表明， 柠檬醛也 是荜澄茄广谱抗。
8、菌、 镇咳、 祛痰、 平喘、 抗心律失常、 抗心肌缺血、 降压及抗血小板聚集的主 说 明 书 CN 101904830 B 3 2/7 页 4 要活性成分。为此， 我们进一步研究了作为荜澄茄挥发油主要成分的柠檬醛在胆道系统疾 病治疗上可能具有的作用。 0008 柠檬醛化学结构简单， 易于合成， 其作为香料和化工原料已被广泛应用， 尽管其具 有一定的药理作用， 但是尚未开发成药物， 尤其是作为治疗胆道系统疾病的药物， 更未见报 道。 0009 本发明的目的是提供柠檬醛在制备胆道系统疾病治疗药物上的应用。 发明内容 0010 本发明人在多种动物模型及人胆石体外溶解试验中研究了柠檬醛的溶石利胆作 用。
9、， 以充分的药理实验证明柠檬醛可用于治疗胆道系统疾病， 且作用较熊去氧胆酸强大。 0011 我们首先发现柠檬醛具有利胆活性。柠檬醛在 0.05ml/kg 剂量时的促进胆汁分泌 作用明显强于熊去氧胆酸 50mg/g 组。反复给予柠檬醛仍有显著和持久的促进大鼠胆汁分 泌作用。在利胆的同时还降低胆汁总胆红素、 总胆固醇、 粘液的含量 ( 见下表 1-3)， 因此柠 檬醛促进分泌的胆汁有防止胆石形成和溶解胆石作用。 致小鼠胆石形成实验证实了上述推 测 ： 口服柠檬醛 0.05 和 0.15ml/kg， 都显著抑制致石饲料致小鼠胆石形成 ( 见下表 4)。本 研究还发现柠檬醛有溶解人胆石作用 ( 见下表。
10、 5)。以上这些作用都较熊去氧胆酸强大。 0012 我们还发现， 口服柠檬醛显著抑制二甲苯性小鼠耳肿及抑制乙酸提高小鼠腹腔毛 细血管通透性和扭体反应次数， 表明它们具有相当的镇痛抗炎作用 ( 见下表 6-8)。 0013 本研究首先发现柠檬醛不明显降低胆汁中胆汁酸含量， 而明显降低胆汁中粘液、 胆固醇和胆红素含量， 具有强而持久的抑制胆石形成及溶解胆石作用， 因此柠檬醛可制备 成治疗胆囊炎、 胆管炎和胆石症新药应用于临床， 而它们的镇痛抗炎和广谱抗菌作用也有 助于消除胆道炎症和症状。 0014 因此， 本发明提供柠檬醛在制备胆道系统疾病治疗药物上的应用。 0015 柠檬醛是一种挥发性液体， 可。
11、以制成各种口服剂型， 例如胶丸剂、 滴丸剂、 滴剂、 胶 囊剂、 片剂 ( 其中包括口含片 ) 或液体制剂等供用于胆道系统疾病的治疗。柠檬醛的口服 剂量一般为 20-160mg/ 次， 每日 3 次。由于柠檬醛具有广谱抗菌作用和芳香性， 因此如制成 口含片还可兼有抑制口臭和消毒口腔作用。 0016 本发明的一个优选实施方案中， 接受治疗的胆道系统疾病是选自胆囊炎、 胆管炎 和胆结石中的一种或一种以上。 0017 本发明的一个更优选实施方案中， 接受治疗的胆道系统疾病是胆结石， 包括选自 胆囊结石、 胆管结石和肝部结石中的一种或一种以上。 具体实施方式 0018 以下用实施例对本发明作进一步阐述。
12、。这些实施例仅仅用于举例说明本发明， 而 不对本发明的范围构成任何限制。 本发明的应用应包括总体上遵循本发明的原理所作的所 有变更、 应用或调整。 0019 实验材料 0020 柠檬醛 ( 含量 95 ) 系上海新华香料厂惠赠。柠檬醛用吐温 -80 配制成乳剂供实 验用。熊去氧胆酸片系常州制药厂产品。阿司匹林肠溶片系无锡华瑞制药有限公司产品。 说 明 书 CN 101904830 B 4 3/7 页 5 总胆红素、 无机钙、 总胆固醇、 胆汁酸、 粘液、 丙氨酸转氨酶测定试剂盒均系市售品。SD 大鼠 和 ICR 小鼠由陕西省中医药研究院动物房提供。 0021 实验例 1 ： 促进大鼠胆汁分泌及。
13、对胆汁成分的影响 0022 1. 一次给药的影响 0023 雄性大鼠37只， 体重21915g， 分成5组。 乌拉坦麻醉后行胆管插管手术， 术后平 衡0.5h， 然后收集0.5h的药前胆汁流量， 并分别十二指肠给予柠檬醛、 熊去氧胆酸或0.5 吐温 -80 后收集每 0.5h 的流量， 连续 4h。每 0.5h 的流量与药前流量比较 ( 药后流量 / 药 前流量 )， 得出流出率。再与对照组的相应时相作 t 检验比较， 结果见表 1。 0024 表 1 一次十二指肠给予柠檬醛对麻醉大鼠胆汁分泌的影响 (MS) 0025 0026 *p 0.05，*p 0.01( 与 0.5吐温 -80 组比较。
14、 ) ：p 0.05，p 0.01( 与 熊去氧胆酸组比较 )。 0027 2. 反复给药的影响 0028 雌性大鼠 36 只， 体重 27920g， 分成 4 组， 每组 9 只， 每天分别灌胃给药两种剂量 柠檬醛、 熊去氧胆酸或 0.5吐温 -80， 连续 7 天。第 8 天乌拉坦麻醉后行胆管插管手术， 术 后平衡 0.5 小时， 然后收集 0.5 小时的药前胆汁流量， 并十二指肠给予相应药物， 测定药后 每 0.5 小时的胆汁流量， 共 4 小时， 结果见表 2。将药后 4 小时的胆汁量收集在一起， 进行胆 汁中的总胆红素、 无机钙、 总胆固醇、 胆汁酸、 粘液含量测定， 结果见表 2。。
15、 0029 表 2 连续 7 天灌服柠檬醛对大鼠胆汁分泌的影响 (MS) 0030 说 明 书 CN 101904830 B 5 4/7 页 6 0031 n 9， *p 0.05，*p 0.01( 与吐温 -80 组比较 ) ；p 0.0l( 与熊去氧胆酸 组比较 )。 0032 表 3 连续给予柠檬醛对大鼠胆汁成分的影响 (MS) 0033 0034 n 9， *p 0.05，*p 0.01。 0035 表1和表2显示3个剂量组柠檬醛都有促进大鼠胆汁分泌作用， 0.05ml/kg柠檬醛 的利胆作用明显强于 50mg/kg 的熊去氧胆酸， 反复给药利胆作用不发生衰减。 0036 表3显示熊去。
16、氧胆酸不降低胆汁中的无机钙、 总胆红素、 总胆固醇、 粘液(粘蛋白) 含量， 却明显降低胆汁中胆汁酸含量 ； 柠檬醛不明显降低胆汁中胆汁酸含量， 而明显降低胆 汁中粘液、 胆固醇和胆红素含量。 由于胆汁中胆汁酸含量降低不利于胆石溶解， 反而有利于 胆石形成， 因此， 柠檬醛应有利于抑制胆石形成， 而熊去氧胆酸则相反。 0037 实验例 2 ： 抑制小鼠胆石形成 0038 小鼠104只， 雌雄各半， 体重18.81.6g， 分成5组。 除空白对照组喂正常饲料， 其 余 4 组小鼠均喂致石饲料。每只动物每日按 6g 饲料喂养。致石饲料配方为 ： 正常饲料中加 入 1胆固醇和 0.5胆酸。用药组分别。
17、灌服柠檬醛或熊去氧胆酸， 而造模对照组灌服溶剂 0.5吐温-80。 实验4周， 在麻醉状态下取血及摘取胆囊， 测定血清总胆固醇含量和血清丙 氨酸转氨酶水平， 并观察胆囊中有否胆石形成。从表 4 的 4 周实验结果可以看出熊去氧胆 酸和柠檬醛都有抑制致石饲料致小鼠胆石形成的作用， 但对致石饲料升高血清丙氨酸转氨 酶的作用都无对抗作用， 只有柠檬醛 0.05ml/kg 组能明显降低升高的血清总胆固醇含量。 0039 表 4 灌服柠檬醛对致石饲料致小鼠胆石形成及血清胆固醇和转氨酶的影响 说 明 书 CN 101904830 B 6 5/7 页 7 (MS) 0040 0041 *p 0.05，*p 。
18、0.01。 0042 实验例 3 ： 溶解试管内人胆石 0043 受试药物均用吐温-80助溶， 配成的混悬液中吐温-80的含量为0.5。 全部药液 用 0.4的 NaOH 调节 pH 到 8.5。将外科手术取得的人混合型胆石洗净后放在 60烘箱中 恒重， 然后按形状、 色泽及重量排列后随机分组。一粒胆石放入一个带塞试管内， 加入 1ml 受试药物， 每天振摇 3-4 次， 每天换药液 1 次， 2 周后取出胆石， 洗净， 再放入 60烘箱内， 干 燥恒重后称重， 二次称出的胆石重量之差即为溶去的胆石重量。数据进行组间 t 测验 ( 表 5)。结果表明， 柠檬醛 0.5ml组和熊去氧胆酸 0.5。
19、g组都能溶解人混合型胆石。 0044 表 5 柠檬醛对试管内人混合型胆石重量的影响 (MS) 0045 0046 *p 0.05，*p 0.01。 0047 实验例 4 ： 镇痛 0048 雄性小鼠 50 只， 体重 19.31.4g， 分为 5 组， 灌服柠檬醛等药物后 45min， 腹腔注 射 0.7乙酸 10ml/kg， 5min 后计数 10min 内小鼠扭体反应次数， 并进行组间 t 测验。结果 表明， 3 个剂量组的柠檬醛均明显减少乙酸性扭体反应次数， 显示出镇痛效应 ( 表 6)。 0049 表 6 灌服柠檬醛对乙酸致小鼠扭体反应的影响 (MS) 说 明 书 CN 1019048。
20、30 B 7 6/7 页 8 0050 0051 n 10， *p 0.01。 0052 实验例 5 ： 抗炎试验 0053 1. 抑制二甲苯性小鼠耳肿 0054 小鼠 50 只， 雌雄各半， 体重 21.41.2g， 分成 5 组 ( 柠檬醛三个剂量组、 阿司匹林 阳性对照组和吐温 -80 阴性对照组 )。灌服药物或赋形剂后 30min， 用浸透二甲苯的直径 0.8cm滤纸紧贴小鼠右耳15秒， 50分钟后处死小鼠， 沿耳根剪下左右两耳并称重， 两耳重量 之差即为肿胀重量， 数据进行组间 t 测验。结果显示， 3 个剂量组的柠檬醛都能抑制二甲苯 性小鼠耳肿 ( 表 7)。 0055 表 7 灌。
21、服柠檬醛对二甲苯性小鼠耳肿的影响 (MS) 0056 0057 n 10， *p 0.01。 0058 实验例 6 ： 抑制乙酸提高小鼠腹腔毛细血管通透性的作用 0059 雌性小鼠60只， 体重22.41.3g， 分成5组(柠檬醛三个剂量组、 阿司匹林阳性对 照组和吐温 -80 阴性对照组 )。灌服药物或赋形剂后 0.5 小时， 给小鼠静脉注射 0.5依文 氏蓝5ml/kg， 5分钟后腹腔注射0.7乙酸10ml/kg， 0.5小时后处死， 用10ml生理盐水冲洗 腹腔， 收集洗液。将洗液离心后在 590nm 波长处比色， 用 t 测验比较组间洗液中的依文氏蓝 含量。结果显示， 柠檬醛能抑制乙酸提高小鼠腹腔毛细血管通透性 ( 表 8)。 0060 表 8 灌服柠檬醛对乙酸提高小鼠腹腔毛细血管通透性的影响 (MS) 说 明 书 CN 101904830 B 8 7/7 页 9 0061 0062 n 12， *p 0.05，*p 0.01。 说 明 书 CN 101904830 B 9 。