本申请是1999年5月28日提交的，发明名称为“二肽基肽酶 IV的新效应物”的中国专利申请99806723.7的分案申请。
技术领域
本发明涉及由一个氨基酸及一个噻唑烷或吡咯烷基团构成的二 肽化合物及与二肽化合物类似的化合物，及其盐，下文中称为二肽化 合物，也涉及该化合物在治疗哺乳动物葡萄糖耐受不良，糖尿，高 脂血症，代谢性酸中毒，糖尿病，糖尿病性神经病和肾病及糖尿病 后遗症中的应用。
因此，本发明也涉及在作为如下的酶的活性降低效应物(底物， 伪底物，抑制剂，结合蛋白，抗体等等)的二肽化合物的辅助下降低 哺乳动物血糖浓度的简便方法，所述的酶具有与二肽基肽酶IV相似 或相同的酶活性。
背景技术
DP IV或DP IV类似物(例如胞液性DP II有与DP IV几乎相同 的底物特异性)在血循环中具有活性，在血液循环中当脯氨酸或丙氨 酸是N末端氨基酸相邻残基时，DP IV或DP IV类似物能够高特异 性地从生物学活性肽N末端分解出二肽。
葡萄糖依赖型促胰岛多肽：肠抑胃肽1-2(GIP1-42)及类胰高血糖 素肽酰胺-1 7-36(GLP-17-36)，即通过胰腺刺激葡萄糖诱导型胰岛素分 泌的激素(也叫做肠降血糖素)，是DP IV的底物，因为后者在体外 及体内能从这些肽的N末端序列上分别分解出酪氨酸-丙氨酸及组 氨酸-丙氨酸二肽。
降低在体内分解这些底物的DP IV及类DP IV酶活性能够在实 验室及哺乳动物病理条件下有效地抑制不希望的酶活性。例如，II型 糖尿病(包括成人型糖尿病)是建立在胰岛素分泌减少或特别是来自蛋 白水解的异常肠降血糖素浓度所致的受体功能紊乱的基础上。
依照现有技术，使用胰岛素(例如从牛胰岛分离或基因工程技术 得到的物质)来治疗高糖血症及其相应的原因和后遗症(包括糖尿 病)。所有已知的方法包括比较先进的手段都需要大量的物质，高额 的费用并对患者的生活质量有明显的损害。传统方法(从十九世纪三 十年代开始使用的每日静脉注射胰岛素)治疗该疾病的急性症状，但 持续使用导致严重的血管变化(动脉硬化)及神经损伤。
最近有建议皮下埋置植入物(胰岛素以计量的方式被释放，不需 要日常的注射)及植入(移植)完好的朗罕氏细胞到功能损伤的胰腺或 其它器官及组织。这种移植要求有高水平技术。而且，它们涉及对 受体生物体的手术介入，这可造成危险，甚至，在细胞移植时需要 抑制或干扰免疫系统。
作为DP IV及类DP IV酶活性抑制剂的丙氨酰吡咯烷及异亮氨 酰噻唑烷的使用已从PCT/DE 97/00820知道，盐酸异亮氨酰吡咯烷 及异亮氨酰噻唑烷的使用已从DD 296 075中知道。异亮氨酰噻唑 烷，其在后一现有技术中被使用，是天然的，也就是说L-苏型-异亮 氨酰噻唑烷，在该两篇说明书的优先权日和申请日时，仅该型，即 异亮氨酰噻唑烷天然的形式。
已明确知道这些化合物特别是L-苏型-异亮氨酰噻唑烷是DP IV 及类DP IV酶活性的良好效应物，但这些化合物的使用对一些患者 及疾病会造成问题。
例如糖尿病时，依赖于症状及严重程度，需要使用与现有已知 化合物不同的效应物：如已知为了以优化方式进行疾病的治疗，糖 尿病患者的病情必须逐个稳定。在一些时候，例如通过DP IV效应 物降低活性应该是足够的。也会出现高水平抑制剂活性及长期同样 药物的使用所造成的副作用，特别在长期治疗中。而且，为了增加 体内效应物的吸收率需改善某些转运特性。
发明内容
本发明的目的是对例如哺乳动物葡萄糖糖耐受不良，糖尿，高 脂血症，代谢性酸中毒，糖尿病，糖尿病性神经病和肾病及糖尿病 后遗症的治疗提供一种新的(特别是降低活性的)效应物，及治疗这些 疾病的简单方法。
本发明的目的通过提供由一种氨基酸及一种噻唑烷或吡咯烷基 团形成的二肽化合物或二肽类似物及其盐来达到。
将这些效应物给予哺乳动物，优选口腔给予时，内源性(或额外 外源性给予)的促胰岛肽GIP1-42及GLP-17-36(或GLP-17-37或它的类似 物)被DP IV或类DP IV酶分解而减少，因此这些肽激素或其类似 物的浓度的降低被减慢或延迟。因此，本发明是建立在血液循环中 起作用的DP IV或类DP IV酶活性的降低对血糖水平会造成影响这 个发现的基础上。已发现：
1.DP IV或类DP IV酶活性的降低能提高葡萄糖刺激的或外 来的肠降血糖素(或其类似物)的相对稳定性，也就是说通过给予DP IV或类DP IV蛋白的效应物，使对血中肠降血糖素分解的控制成 为可能；
2.肠降血糖素(或其类似物)的生物学分解稳定性的提高导 致内源性胰岛素作用的变化；
3.通过降低血液中DP IV或类DP IV酶活性而提高肠降血 糖素的稳定性导致葡萄糖诱导性胰岛素作用的随后变化，因此导致 对由DP IV效应物控制的血糖水平的调节。
对本发明的这一目的特别合适的是二肽化合物，其氨基酸选自 天然氨基酸，例如亮氨酸，缬氨酸，谷氨酰胺，脯氨酸，异亮氨酸， 天冬酰胺及天冬氨酸。
附图说明
图1是毛细管区带电泳(CE)分离异亮氨酰噻唑烷异构体的图， 其显示L-苏型-Ile-Thia*延胡索酸盐、L-别-Ile-Thia*延胡索酸盐、D- 苏型-Ile-Thia*延胡索酸盐、D-别-Ile-Thia*延胡索酸盐的1∶1∶1∶1的 混合物的CE分离结果，方法和测量条件如下：
用来自Beckmann公司的“P/ACE系统MDQ”进行CE研究 物质 CE(min) L-threo-IT*F 160 D-threo-IT*F 158 L-allo-IT*F 154 D-allo-IT*F 150
操作条件
缓冲液：20mM磷酸盐，pH7.0，100mM β-羟基-丙基-环糊精
毛细管：50/60.2cm，25μm内径，用丙烯酰胺包被
电压：10kV
检测：在214nm用光电二极管阵列检测器检测
温度：7℃。
图2是Ile-Thia*延胡索酸盐的CE分离的图，其显示L-苏型 -Ile-Thia*延胡索酸盐与D-别-Ile-Thia*延胡索酸盐的1∶1000的混合 物的CE分离结果。
图3显示在口服给予各种H-Ile-Thia立体异构体(5μg/300g大 鼠)后的血清DP IV活性。酶活性仅受L-别-Ile-Thia和L-苏型-Ile-Thia 影响。
图4显示各种氨酰噻唑烷对大鼠葡萄糖耐受的作用(用2g/300g Wistar大鼠在0时间点进行口服葡萄糖耐受试验，在口服葡萄糖刺激 之前10分钟给予DP IV抑制剂)。
具体实施方式
在本发明中，通过口服给予高亲和性低分子量酶抑制剂相对于 在治疗病理症状时广泛使用的外科技术是比较经济的选择。通过针 对稳定性，转运及清除特性利用化学方法进行的设计，可调节作用 模式及适应不同个体的特性。
如上所说，例如在糖尿病的长期治疗的情况下，可能必须提供 具有所述活性的效应物，其可符合患者的不同要求及治疗他们的症 状。本发明所说的二肽化合物显示出在(二肽化合物)浓度为10微 摩尔，特别在表1所示的条件下，二肽基肽酶IV或类DP IV酶活 性至少降低10％，特别是至少降低40％。通常也要求降低至少60％ 或70％。优选的效应物还可显示最多降低活性20％或30％。而且， 本发明化合物的特别是通过转运Pep T1的转运特性显著改善。
特别优选的二肽化合物是L-别-异亮氨酰噻唑烷及其盐类。这些 化合物与L-苏型-异亮氨酰噻唑烷相比，经转运肽Pep T1的转运改善 高达5倍，同时对于葡萄糖调节具有大致相同的作用程度。
在表1进一步给出优选化合物。
本发明中二肽化合物的盐类可为，例如，有机盐如乙酸盐，琥 珀酸盐，酒石酸盐或延胡索酸盐，或无机酸盐如磷酸盐或硫酸盐。 最好使用延胡索酸盐，其在对水解作用有高度稳定性及比盐酸盐更 不易溶解的同时，有很好的作用。从盖仑制剂的观点来说，这些特 点也是有益的。
也优选L-苏型-异亮氨酰吡咯烷及其盐类，特别是延胡索酸盐， 及L-别-异亮氨酰吡咯烷及其盐类，特别是延胡索酸盐。
二肽化合物的盐类可以二肽(二肽类似物)组分与盐类组分的摩尔 比为1∶1或2∶1存在。例如，(异亮氨酰噻唑烷)2延胡索酸。
特别优选的盐类是L-苏型-异亮氨酰噻唑烷及L-别-异亮氨酰噻 唑烷的延胡索酸盐类。
本发明涉及二肽基肽酶IV(DP IV)或类DP IV酶活性的效应物 及它们在降低哺乳动物血清中的血糖浓度到高血糖症特征性血糖浓 度以下中的应用。本发明特别涉及本发明所述的DP IV或类DP IV酶 活性效应物在预防或减轻哺乳动物的病理代谢异常中的应用，所述 病理代谢异常为例如，哺乳动物中的葡萄糖耐受不良，糖尿，高脂 血症，代谢性酸中毒，糖尿病，糖尿病性神经病和肾病及糖尿病后 遗症。在进一步优选的实施方案中，本发明涉及降低哺乳动物血清 中的血糖浓度到高血糖症特征性血糖浓度以下的方法，其特征在于 给予哺乳动物治疗有效量的本发明所述的至少一种DP IV或类DP IV 酶活性效应物。
在进一步优选的实施方案中，本发明涉及药物组合物，也就是 说药物，其包括至少一种本发明所述的化合物或其盐类，任选地与 一种或多种药物可接受载体及/或溶剂混合。
药物组合物可以是，例如，肠道外或肠道配方的形式并可含有 合适载体或它们可以是包括适宜口服给药相应载体的口服配方的形 式。
此外，药物组合物可包括一种或多种具有低血糖作用的活性成 分，其可以是已知的活性成分。
本发明中DP IV或类DP IV酶活性的效应物可用来降低哺乳生 物血清中血糖水平到高血糖血症特征性血糖浓度下，或用来生产相应 的药物。
本发明中使用的DP IV或类DP IV酶效应物可作为用来降低哺 乳动物中DP IV或类DP IV蛋白浓度的抑制剂，底物，伪底物，DP IV 表达抑制剂，结合蛋白或这些酶蛋白的抗体或这些不同物质组合的 药物可接受配方或配方混合物。本发明的效应物可以是DP IV抑制 剂如二肽衍生物或二肽模拟物L-别-异亮氨酰噻唑烷及在表1中提到 的效应物及其延胡索酸盐。本发明的效应物能使患者及疾病的治疗 依照各自的情况来调整，特别是可以控制个体中发生的不耐受，过 敏及副作用。
化合物也显示出不同的时间有效性。医生根据患者的不同情况 能采取不同的方法：一方面，他能精确地设置作用的起始速度，另一 方面，可控制作用的持续时间，特别是作用的强度。
本发明的方法代表着降低哺乳动物血清中已升高的血糖浓度的 一种新的方法。其简单，可经济开发及适应于治疗中使用，特别对 建立在高于平均血糖阈值基础上的疾病，适用于哺乳动物，更适用 于人类药物。
效应物可以通过药学制剂的形式被给药，该药学制剂包括与现 有技术已知的传统载体相结合的活性成分。例如，它们可非肠道给 药(如，静脉注射，以生理盐水的形式)或肠道给药(如，口服，与传 统的载体如葡萄糖相结合)。
为了使血糖值正常化，依照它们的内源稳定性及生物利用率， 效应物需要每天一次或多次给药。例如，人用剂量可在每天0.01毫 克到30.0毫克的范围内，优选范围在每千克体重0.01毫克到10毫 克的效应物。
已发现哺乳动物的血中二肽基肽酶IV或类DP IV酶效应物给药 的直接结果是，由于其活性的暂时降低，内源的(或额外给予的外源 的)促胰岛肽肠抑胃肽GIP1-42及胰高血糖素样肽酰胺-1 7-26 (GLP-17-36)(或GLP-17-37或它的类似物)被DP IV或类DP IV酶 分解而降低，因此这些肽激素或其类似物的浓度的降低被减慢或延 迟。通过DP IV效应物的作用，(内源性或外源性)肠降血糖素或其 类似物的稳定性增加，其结果是由于对胰腺内朗罕氏细胞的肠降血 糖素受体的促胰岛刺激来说前者的量增加，改变了身体本身胰岛素 的有效性，其能刺激被治疗机体碳水化合物的代谢。
结果，被治疗机体血清中的血糖水平降低到高血糖血症特征性 血糖浓度以下，因此可预防或减轻代谢异常，如葡萄糖耐受不良， 糖尿，高糖血症及严重的代谢酸中毒及糖尿病，它们是长期血液中 血糖升高的临床症状。
在现有技术所知的口服有效抗糖尿病药中，如此有效的低分子 量物质至今为止是未知的(除了双胍二甲双胍：分子量为130)。氨酰基噻 唑烷的分子量在146(甘氨酰噻唑烷)，203(异亮氨酰噻唑烷)到275(色 氨酰噻唑烷)的范围内变化。相比之下，磺酰脲(优降糖：494)，糖 类(阿卡波糖：630)及噻唑烷二酮(pioglitazon：586)的分子量在500到 700Da内变化。体内氨酰噻唑烷被氨基肽酶水解及酸水解形成内源 性物质，例如氨基酸及半胱胺，因此本发明化合物作为口服抗糖尿 病药的使用丰富了药品。
在小鼠及大鼠中，经口给予本发明中使用的化合物可比平均水 平更好地治疗实验诱导的高糖血症(表2及3)。在对小鼠及大鼠所作 的三周毒理学实验中，给予有效剂量的500到1000倍不能明显出现 病理变化。
表1显示了本发明化合物对DP IV的有益作用。
表1：在30℃，pH7.6及离子强度为0.125的条件下，不同效应物对 于二肽基肽酶IV催化0.4毫摩尔底物H-Gly-Pro-pNA水解反应的作 用
效应物 效应物对DP IV的亲和 性Ki[nM] 在10微摩尔效应物存在时 DP IV的残余活性％ 二甲双胍 ＞＞1,000,000 100 优降糖 ＞＞1,000,000 100 阿卡波糖 ＞＞1,000,000 100 H-天冬酰胺-吡咯烷 12,000 83.1 H-天冬酰胺-噻唑烷 3,500 47.2 H-天冬氨酸-吡咯烷 14,000 81.6 H-天冬氨酸-噻唑烷 2,900 45.6 H-天冬氨酸(NHOH)-吡咯烷 13,000 88.2 H-天冬氨酸(NHOH)-噻唑烷 8,800 54.5 H-谷氨酸-吡咯烷 2,200 38.5 H-谷氨酸-酰噻唑烷 610 25.0 H-谷氨酸(NHOH)-吡咯烷 2,800 44.9 H-谷氨酸(NHOH)-噻唑烷 1,700 36.5 H-组氨酸-吡咯烷 3,500 49.7 H-组氨酸-噻唑烷 1,800 35.2 H-脯氨酸-吡咯烷 4,100 50.2 H-脯氨酸-噻唑烷 1,200 27.2 H-异亮氨酸-吡咯烷 3,100 43.8 H-异亮氨酸-噻唑烷 210 12.3 H-L-别-异亮氨酸-噻唑烷 190 10.0 H-缬氨酸-吡咯烷 480 23.3 H-缬氨酸-噻唑烷 270 13.6
已知氨酰吡咯烷及氨酰噻唑烷可被小肠粘膜细胞，血清和肝细 胞上的脯氨酸氨基肽酶及氨酰基脯氨酸二肽酶所分解，且噻唑烷环 在酸存在时(如胃酸)趋于打开，形成相应的半胱胺衍生物(见US 458 407)。因此，当口服给药时，惊奇地发现活性成分具有剂量依赖型 有效性。可在下表中看到在对健康的Wistar大鼠经口给予L-别-异亮 氨酸-噻唑烷后，L-别-异亮氨酸-噻唑烷对血清DP IV活性的剂量依 赖作用。
表2：经口给予及依赖于L-别-异亮氨酸-噻唑烷的剂量后在30℃， pH7.6及0.125的离子强度的条件下，血清中的DP IV对于0.4毫摩 尔的底物H-甘氨酸-脯氨酸-pNA的残余活性，在给予抑制剂30分钟 后检测 每只试验动物的剂量 DP IV的残余活性％ 0毫克 100 2.5毫克 52 5.0毫克 40 10毫克 28 20毫克 29
在糖尿病动物模型中，经口给予本发明的活性成分L-别-异亮氨 酸-噻唑烷并同步口服糖刺激物后，可达到惊奇也是希望看到的结果， 就是其具有降糖作用(表3)。
为了加强各种抗糖尿病药的降血糖作用，通常是混合使用不同 的口服有效抗糖尿病药。虽然本发明中效应物的抗糖尿病作用是不 依赖其它已知口服抗糖尿病药，为了达到理想的正常血糖效果，本 发明的活性成分类似地可以合适制剂的形式可适用于组合治疗。
因此，本发明中所使用的化合物可制成传统配方，例如，片剂， 胶囊，糖丸，药丸，栓剂，小粒，气雾剂，糖浆，液体，固体及乳 剂及悬浮液和溶液，使用惰性，非毒性，药物可接受的载体及添加 剂或溶剂。在这样的配方中，每一例子中药物学有效化合物优选以 总混合物的约0.1到80％(重量)、优选1-50％(重量)的浓度存在， 也就是说足够产生指定范围的剂量的量。
表3：对同步进行糖耐受试验不同的动物模型大鼠经口给予20微 摩尔的L-别-异亮氨酸-噻唑烷后，在60分钟期间循环血糖的降低程度 动物模型 对照组的糖浓度，以％表 示 用L-别-异亮氨酸-噻唑烷 治疗后的糖浓度，以％表 示 Wistar大鼠，健康 100 82 Wistar大鼠(糖尿病2b-模 型，肥胖) 100 73
胃肠道粘膜对本发明中所使用化合物的良好吸收使得能够使用 大量盖仑制剂：
这些物质作为药物能以糖丸，胶囊，可咬型胶囊，片剂，滴剂， 糖浆及栓剂和鼻腔喷雾的形式被使用。
通过使用溶剂及/或载体，任选地使用乳化剂及/或分散剂来扩散 活性成分生产配方，任选地，例如水作为稀释剂时有机溶剂可作为 助溶剂。
下列的辅助成分可提及：水，非毒性有机溶剂，如石蜡(矿物油 部分)，植物油(如油菜籽油，花生油，芝麻油)，醇类(如乙醇，甘油)， 乙二醇类(如丙二醇，聚乙二醇)；固体载体，例如粉碎的天然矿物质(高 度分散的硅酸，硅酸盐)，糖类(如未加工糖，乳糖，葡萄糖)；乳化剂， 如非离子及阴离子乳化剂(如聚氧乙烯脂肪酸酯，聚氧乙烯脂肪醇醚， 烷基磺酸盐及芳基磺酸盐)，分散剂(如，木质素，亚硫酸废液，甲基 纤维素，淀粉及聚乙烯吡咯酮)及助流剂(如硬脂酸镁，滑石，硬脂酸 及十二烷基硫酸钠)及任选地调味剂。
传统的给药方式是有效的，优选肠道或肠道外给药，特别是经 口给药。在肠道给药时，除了包括上述的载体，片剂也可包括其它 添加剂，如柠檬酸钠，碳酸钙及磷酸钙，也可加入各种辅助成分， 如淀粉，特别是土豆淀粉，明胶等。为制成片剂可使用助流剂，如 硬脂酸镁，十二烷基硫酸钠，滑石。在为口服使用的水性悬浮液及/ 或酏剂的情况下，为了各种口味除了上述所提及的添加剂，可在有 效成分中加入矫味剂或色素。
对于肠道外给药，可使用活性成分的溶液，其使用了合适的液态 载体物质。在静脉给药时，已证明给药剂量大约在0.01到2.0克/千 克体重/天的范围内，特别是在0.01到1.0克/千克体重/天的范围内效 果较好，在肠道给药时，给药剂量大约在0.01到2.0克/千克体重/天 的范围内，特别是在0.01到1.0克/千克体重/天的范围内效果较好。
不过在一些时候，根据试验动物或患者的体重或给药途径，并 且以动物的种类及其对药物的个体或给药间隔的不同反应为基础， 必须以不同于指示量给药。一些时候例如使用少于上面所提及的最 小剂量就够了，而另一些时候需使用超过上述所提及剂量的上限。 当使用较大剂量时，最好一天分成几份使用。对于人类也是上述的 剂量范围，同时上面的建议也适用。
药物配方的实施例
1.每粒胶囊中含有100毫克的L-别-异亮氨酰噻唑烷：
对于约10,000粒胶囊，需准备下列成分的溶液：
L-别-异亮氨酰噻唑烷盐酸盐 1.0千克
甘油 0.5千克
聚乙二醇 3.0千克
水 0.5千克
5.0千克
溶液以已知方式放入软明胶胶囊中，胶囊适于咀嚼或吞咽。
2.含有100毫克L-别-异亮氨酰噻唑烷的片剂/糖衣片剂或糖 丸：
下面是关于制备100,000个片剂所需的量：
L-别-异亮氨酰噻唑烷盐酸盐，细碎 10.0千克
葡萄糖 4.35千克
乳糖 4.35千克
淀粉 4.50千克
纤维素，细碎 4.50千克
上述成分混合后与下面溶液相混，该溶液由以下来制备
聚乙烯吡咯烷酮 2.0千克
多乙氧基醚 0.1千克
及水 大约5.0千克
并用已知的方法将潮湿块磨碎成粒状，随后加入0.2千克的硬脂 酸镁，干燥。最后得到30.0千克的片剂混合物，将其制成圆顶样每 片300毫克的片剂。该片剂能用已知的方法包衣或糖衣化。
下面是优选化合物的技术数据。
关于Ile-Thia*延胡索酸盐(异构体)及其它盐类的实验 物质 Ki Mp(℃) CE(min) MS [α]H2O L-苏型- IT*F 8*10-8 150DSC 160 203 -10.7 (405nm) D-苏型- IT*F 无抑制 147 158 203 没测 L-别-IT*F 2*10-7 145-6 154 203 -4.58 (380nm) D-别-IT*F 无抑制 144-6 150 203 4.5(380nm)
IT*F＝异亮氨酰噻唑烷延胡索酸盐
核磁共振及高效液相色谱数据证实了实验物质的性质。
测定物质Ki的测量条件
酶：在25毫摩尔Tris pH7.6，30％硫酸铵，0.5毫摩尔EDTA， 0.5毫摩尔DTE中的DP IV猪肾，0.75毫克/毫升，18单位/毫升 (GPpNA)
储存溶液：用测量缓冲液稀释成1∶250
缓冲液：40毫摩尔HEPES pH7.6，I＝0.125(KCl)
底物：GPpNA*HCl
储存溶液：2.1毫摩尔
测量装置：Perkin-Elmer生物分析读数仪，HTS 7000Plus，T＝30℃ λ＝450纳米
测量混合物：100微升 缓冲液
100微升 底物(三种不同浓度 0.8毫摩尔-0.2毫摩尔)
50微升水/抑制剂(七种不同浓度，2.1微摩尔-32.8纳 摩尔)
10微升 酶
缓冲液，水/抑制剂及酶预热到30℃，反应在加入如上一样预热 的底物后开始。
检测进行四次。
测量时间为10分钟。
熔点测定
使用来自Leica Aktiengesellschaft的Kofler加热平台显微镜或 DSC仪器(Heumann-Pharma)来测定熔点，数值未校正。
旋光性
用来自Perkin-Elmer公司的“Polarimeter 341”或更先进的设备 记录在不同波长条件下的旋转值。
质谱测量条件
在购自PE Sciex公司的“API165”或“API 365”设备上利用电 喷离子化(ESI)来记录质谱。
这个试验中浓度大约为c＝10微克/毫升，物质被MeOH/H2O50∶50，0.1％HCO2H吸收，使用电喷泵(20微升/分钟)灌输。在阳性状 态[M+H]+，ESI电压U＝5600V的条件下测量。
盐类有以下数据： IT*盐类 Ki M(gmol-1) Mp(℃) 琥珀酸盐 5.1e-8 522.73 116 酒石酸盐 8.3e-8 352.41 122 延胡索酸盐 8.3e-8 520.71 156 盐酸盐 7.2e-8 238.77 169 磷酸盐 1.3e-7 300.32 105
检测Ile-Thia的溶解度
Ile-Thia*延胡索酸盐
称量为10.55毫克
相应于0.02毫摩尔(520.72克/摩尔)
加入100微升H2O蒸馏
100微升不溶，目视：对表面不湿润
从200微升开始溶解
一直到400微升才完全溶解
2.63％
因此说这种盐很少潮湿并不易分解
Ile-Thia*琥珀酸盐
称量为16.6毫克
相应于0.031毫摩尔(522.73克/摩尔)
加入16微升H2O蒸馏
16微升不溶，目视：“吸收“水分
从66微升到1.5毫升可观察到物质不完全溶解
Ile-Thia*酒石酸盐
称量为17.3毫克
相应于0.049毫摩尔(352.41克/摩尔)
加入100微升H2O蒸馏
100微升完全溶解
17.3％
Ile-Thia*磷酸盐
称量为15.5毫克
相应于0.051毫摩尔(300.32克/摩尔)
加入100微升H2O蒸馏
可观察到100微升微溶
不断每次加入100微升水
到400微升时完全溶解
3.87％
Ile-Thia*盐酸盐
称量为16.1毫克
相应于0.067毫摩尔(238.77克/摩尔)
加入100微升H2O蒸馏
100微升完全溶解
16.1％
Ile-Thia*盐类的概括分析
Boc保护氨基酸Boc-Ile-OH放入乙酸乙酯中并将混合物冷却到 大约零下5℃。逐滴加入N-甲基吗啉，在恒温下逐滴加入氯化新戊 酸(试验室规模)或新己酰氯(中试规模)。为了活化，需将反应物搅拌 几分钟。随后依次逐滴加入N-甲基吗啉(试验室规模)及噻唑烷盐酸 盐(试验室规模)，加入噻唑烷(中试规模)。实验室中的加工是用传统 方法使用盐溶液，中试时混合物用氢氧化钠及醋酸溶液来纯化。
使用盐酸/二恶烷(试验室规模)或硫酸(中试规模)来除去Boc保 护基团。
在实验室中从乙醇/乙醚中结晶出盐酸盐。
在中试中，通过加入氢氧化钠/氨来制备游离胺。延胡索酸溶解 到热乙醇中，逐滴加入游离胺，出现(Ile-Thia)2延胡索酸盐的沉淀。
电泳分析异构体及对映体。