恩诺沙星长效注射液及其制备方法.pdf

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1、(10)授权公告号 CN 102415991 B (45)授权公告日 2013.05.01 CN 102415991 B *CN102415991B* (21)申请号 201110376934.1 (22)申请日 2011.11.24 A61K 9/08(2006.01) A61K 31/496(2006.01) A61K 47/38(2006.01) A61K 47/32(2006.01) A61K 47/34(2006.01) A61P 31/04(2006.01) (73)专利权人 陈鹏举 地址 450002 河南省郑州市文化北路 50 号 院 9 号楼 (72)发明人 陈鹏举 吴华 王。

2、汝都 柴建亭 赵庆枫 李向超 袁水霞 胡梅 陈黎明 张国辉 (74)专利代理机构 郑州联科专利事务所 ( 普通 合伙 ) 41104 代理人 时立新 黄伟 CN 101766569 A,2010.07.07, CN 1706386 A,2005.12.14, CN 101347432 A,2009.01.21, CN 1444925 A,2003.10.01, CN 101380291 A,2009.03.11, (54) 发明名称 恩诺沙星长效注射液及其制备方法 (57) 摘要 本发明属于兽用药领域， 特别涉及一种兽用 高含量弱酸性恩诺沙星长效注射液及其制备方 法。每 100ml 注射液组成。

3、如下 ： 恩诺沙星 10 20g， 助溶剂 3-5ml， 络合剂 0.01-0.5g， 高分子 缓释材料 3-10g， 防 腐 剂 0.05-1ml， 有机 溶 剂 10-30ml， 抗氧剂 0.1-0.2g， 余量为注射用水 ； 所 述注射液的 pH 值为 4-7。本发明为兽医临床提供 了一种高含量、 偏酸性的恩诺沙星长效注射液及 其制备方法， 注射液恩诺沙星含量高、 刺激性小、 稳定性良好， 具有长效作用 ； 制备工艺简单， 便于 大规模生产。 (51)Int.Cl. (56)对比文件 审查员 王克伟 权利要求书 1 页 说明书 6 页 附图 2 页 (19)中华人民共和国国家知识产权局 。

4、(12)发明专利 权利要求书1页 说明书6页 附图2页 (10)授权公告号 CN 102415991 B CN 102415991 B *CN102415991B* 1/1 页 2 1. 恩诺沙星长效注射液， 其特征在于， 每 100ml 注射液由下列原料制成 ： 恩诺沙星 10 20g， 助溶剂 3-5ml， 络合剂 0.01-0.5g， 高分子缓释材料 3-10g， 防腐剂 0.05-1ml， 有机 溶剂 10-30ml， 抗氧剂 0.1-0.2g， 调整注射液 pH 值为 4-7 的 pH 调节剂， 余量为注射用水 ； 所 述的助溶剂为下列之一或两种以上的混合物 ： 乳酸、 甲磺酸、 烟。

5、酸、 丁二酸、 半乳糖醛酸、 葡 萄糖酸或谷氨酸 ； 所述高分子缓释材料为下列之一或两种以上的混合物 ： 乙基纤维素、 羧 甲基纤维素钠、 聚乙烯吡咯烷酮、 聚乙二醇、 伯洛沙姆、 聚乙烯醇或甲基纤维素 ； 所述有机溶 剂为丙二醇、 丙三醇、 N,N- 二甲基甲酰胺、 N- 甲基吡咯烷酮或 吡咯烷酮。 2. 如权利要求 1 所述的恩诺沙星长效注射液， 其特征在于， 所述络合剂为 EDTA、 EDTA-2Na、 枸橼酸或磷酸。 3. 如权利要求 1 所述的恩诺沙星长效注射液， 其特征在于， 所述防腐剂为苯甲醇、 苯乙 醇、 甲酚、 尼泊金甲酯、 尼泊金丙酯、 苯酚或三氯叔丁醇。 4. 如权利要求。

6、 1 所述的恩诺沙星长效注射液， 其特征在于， 所述的抗氧剂为焦亚硫酸 氢钠或亚硫酸氢钠。 5. 权利要求 1-4 任一所述恩诺沙星长效注射液的制备方法， 其特征在于， 将各原料混 合后过滤、 分装、 高压灭菌得所述恩诺沙星长效注射液。 6. 如权利要求 5 所述恩诺沙星长效注射液的制备方法， 其特征在于， 步骤如下 ： 1） 将助溶剂与部分注射用水混合， 加入恩诺沙星搅拌溶解， 备用 ； 2） 将络合剂、 抗氧剂用注射用水溶解， 然后加入缓释材料， 同时加入有机溶剂混匀 ； 3） 将步骤 2） 的溶液搅拌下加入步骤 1） 的溶液中， 充分混合后加入防腐剂， 然后调 pH 值为 4-7， 过滤。

7、、 分装、 高压灭菌得所述恩诺沙星长效注射液。 权 利 要 求 书 CN 102415991 B 1/6 页 3 恩诺沙星长效注射液及其制备方法 技术领域 0001 本发明属于兽用药领域， 特别涉及一种兽用高含量弱酸性恩诺沙星长效注射液及 其制备方法。 背景技术 0002 恩诺沙星为世界上第一个动物专用喹诺酮类抗生素， 因其作用机理独特， 对多数 病原菌都具杀灭作用， 属杀菌性广谱抗菌药。对常见病原菌如大肠杆菌、 沙门氏菌、 嗜血杆 菌、 巴氏杆菌、 金葡萄菌、 支原体、 衣原体等均具有很好的杀灭作用， 尤其对支原体有特效。 对于耐泰乐菌素、 泰妙菌素的支原体仍有强大的杀灭作用。对大多数病原体。

8、的最小抑菌浓 度 （Minimal inhibitory concentrations, MIC） 值低， 在预防和治疗细菌性疾病和支原体 感染方面起到了重要的作用。 恩诺沙星肌肉注射和口服吸收迅速， 在体内分布广泛， 特别是 在肺组织和泌尿生殖道浓度高。因此， 在兽医临床中主要用来治疗由细菌和支原体引起的 呼吸系统疾病和泌尿生殖疾病等。 恩诺沙星对革兰氏阳性菌与革兰氏阴菌还具有明显的抗 菌药后效应， 且呈浓度依赖性， 即药物浓度越高， 抗菌药后效应越长。 同时， 恩诺沙星在动物 体内其代谢产物为环丙沙星， 其抗菌活性要强于恩诺沙星， 这也是恩诺沙星具有更强的体 内抗菌活性的原因。 0003 。

9、目前兽药临床中常见的恩诺沙星剂型有片剂、 可溶性粉、 溶液剂、 注射剂等。但由 于恩诺沙星本身具有强烈的刺激性苦味， 适口性差， 不便于口服给药。 恩诺沙星还有一种特 殊的不良气味， 而人的嗅觉难以发觉。但猪的嗅觉是人的上百倍， 特别是小猪的更为敏感。 而市面上常见的粉剂及所谓的包衣技术不能有效掩盖其苦味， 导致猪群拒食， 采食量下降。 如猪群生病食欲差， 再加上恩诺沙星的苦味， 采食量也会大量下降， 更难达到预期的治疗效 果。 而一般注射剂(pH 9.5-10.5)、 溶液剂(pH 10-13)由于其pH值偏高， 注射时刺激性大， 给药时引起动物应激大， 尤其是患病幼畜， 应激性大会导致其猝。

10、死， 得不偿失。同时注射液 的 pH 值偏高易导致注射部位的坏死， 影响肉食动物的品质及外观， 且易造成药物残留。目 前也有报道尝试将其制成酸性或中性注射液， 但都存在含量偏低或制备工艺复杂、 不便于 生产的缺陷， 而且所制得的注射液也不具长效作用。除此之外， 恩诺沙星还存在水溶性差， 一般注射液含量低， 半衰期短， 需多次给药的缺陷， 浪费了大量的人力、 物力、 财力， 动物应 激性大， 增加了养殖人员的负担与成本。 发明内容 0004 本发明的目的在于提供一种恩诺沙星长效注射液及其制备方法， 可以克服目前恩 诺沙星注射液由于注射液含量低、 pH 值较高而引起的动物应激反应大、 需多次给药等。

11、问题。 0005 本发明采用的技术方案如下 ： 0006 恩诺沙星长效注射液， 每 100ml 注射液由下列原料制成 ： 恩诺沙星 10 20g， 助溶 剂 3-5ml， 络合剂 0.01-0.5g， 高分子缓释材料 3-10g， 防腐剂 0.05-1ml， 有机溶剂 10-30ml， 抗氧剂 0.1-0.2g， 调整注射液 pH 值为 4-7 的 pH 调节剂， 余量为注射用水。 说 明 书 CN 102415991 B 2/6 页 4 0007 所述的助溶剂选择有机酸即可， 优选为下列之一或两种以上的混合物 ： 乳酸、 甲磺 酸、 烟酸、 丁二酸、 半乳糖醛酸、 葡萄糖酸或谷氨酸。 000。

12、8 所述络合剂为 EDTA、 EDTA-2Na、 枸橼酸或磷酸。 0009 所述高分子缓释材料为下列之一或两种以上的混合物 ： 乙基纤维素、 羧甲基纤维 素钠、 聚乙烯吡咯烷酮、 聚乙二醇、 伯洛沙姆、 聚乙烯醇或甲基纤维素。 0010 所述防腐剂为苯甲醇、 苯乙醇、 甲酚、 尼泊金甲酯、 尼泊金丙酯、 苯酚或三氯叔丁 醇。 0011 所述有机溶剂为丙二醇、 丙三醇、 聚乙二醇、 N,N- 二甲基甲酰胺、 N- 甲基吡咯烷酮 或 吡咯烷酮。 0012 所述的抗氧剂为焦亚硫酸氢钠或亚硫酸氢钠。 0013 本发明对于恩诺沙星注射液的pH值进行了研究， 控制在4-7之间最好， 刺激性小 ； 若 pH。

13、 大于 9， 则容易造成组织坏死 ； pH 低于 3， 则容易引起疼痛。 0014 所述恩诺沙星长效注射液的制备方法， 将各原料混合后过滤、 分装、 高压灭菌即 可。 0015 本发明还进一步提供了优选的所述恩诺沙星长效注射液的制备方法， 步骤如下 ： 0016 1） 将助溶剂与部分注射用水混合， 加入恩诺沙星搅拌溶解， 备用 ； 0017 2） 将络合剂、 抗氧剂用注射用水溶解， 然后加入缓释材料， 同时加入有机溶剂混 匀 ； 0018 3） 将步骤 2） 的溶液搅拌下加入步骤 1） 的溶液中， 充分混合后加入防腐剂， 然后调 pH 值为 4-7， 过滤、 分装、 高压灭菌得所述恩诺沙星长效。

14、注射液。 0019 所述的灭菌可采用 100的流通蒸汽灭菌 20-30min。 0020 本发明提供了一种高含量弱酸性恩诺沙星长效注射液及其制备方法。 首先解决了 恩诺沙星注射液有效含量低的问题， 采用适宜的助溶剂及适当的比例， 增加了恩诺沙星的 溶解性， 所制得的恩诺沙星注射液含量高 （10-20%） ， 提高了药物的生物利用度、 也减少了给 药体积 ； 将恩诺沙星注射液制成偏酸性， 解决了常规注射液 pH 碱性偏高、 刺激性大、 易造成 注射部位肌肉坏死的问题 ； 采用有机高分子材料为载体， 将药物吸附在其骨架内， 避免了注 射液析出结晶， 增加了制剂的稳定性， 延长了药物从注射部位的释放。

15、， 达到了长效的目的， 同时减少给药次数， 节省劳动力 ； 制得的注射液可用水稀释， 无浑混、 结晶产生， 便于群体给 药。 0021 本发明相对于现有技术， 有以下优点 ： 0022 本发明为兽医临床提供了一种高含量、 偏酸性的恩诺沙星长效注射液及其制备方 法， 注射液恩诺沙星含量高、 刺激性小、 稳定性良好， 具有长效作用 ； 制备工艺简单， 便于大 规模生产。 附图说明 0023 图 1 为恩诺沙星长效注射液对家兔肌肉刺激性实验中注射生理盐水后的股四头 肌组织 400 倍镜检图 ； 0024 图 2 为恩诺沙星长效注射液对家兔肌肉刺激性实验中注射受试药 7d 后的股四头 肌组织 400 。

16、倍镜检图。 说 明 书 CN 102415991 B 3/6 页 5 具体实施方式 0025 以下以具体实施例来说明本发明的技术方案， 但本发明的保护范围不限于 此 ： 0026 实施例 1 0027 恩诺沙星长效注射液， 每 100ml 原料组成如下 ： 恩诺沙星 20g、 乳酸 5ml、 焦亚硫酸 氢钠 0.1g、 丙二醇 10ml、 EDTA-2Na0.02g、 羟甲基纤维素 5g、 苯甲醇 1ml， pH 调节剂适量， 余 量注射用水。 0028 制备方法如下 ： 先将乳酸加到 30mL 水中混合均匀， 再加入恩诺沙星搅拌溶解备 用。用 20mL 注射用水将焦亚硫酸氢钠与 EDTA-2。

17、Na 溶解， 然后加入丙二醇， 最后加入羟甲基 纤维素使其溶解。将含有羟甲基纤维素的溶液缓慢加入到溶有恩诺沙星的溶液中， 搅拌使 其混匀， 加入苯甲醇， 用氢氧化钠溶液调 pH 至 4.5 左右， 最后加注射用水定容至 100mL。将 配制的溶液经微孔滤膜过滤后封装， 经高压灭菌后， 获得成品。 0029 实施例 2 0030 恩诺沙星长效注射液， 每 100ml 原料组成如下 ： 恩诺沙星 10g， 甲磺酸 3ml， 亚硫酸 氢钠 0.2g， 聚乙二醇 15ml、 EDTA-2Na0.01g、 甲基纤维素 3g、 苯酚 0.5ml， pH 调节剂适量， 余 量为注射用水。 0031 制备方法。

18、如下 ： 先将甲磺酸加到 40mL 水中混合均匀后， 加入恩诺沙星搅拌溶解备 用。用 20mL 注射用水将亚硫酸氢钠与 EDTA-2Na 溶解， 然后加入聚乙二醇， 最后加入甲基纤 维素使其溶解。最后将含有甲基纤维素的溶液缓慢加入到溶有恩诺沙星的溶液中， 搅拌使 其混匀后加入防腐剂苯酚。用乳酸调 pH 至 4.5 左右。最后加注射用水定容至 100mL。将配 制的溶液经微孔滤膜过滤后封装。经高压灭菌后， 即得成品。 0032 实施例 3 0033 恩诺沙星长效注射液， 每 100ml 原料组成如下 ： 恩诺沙星 20g、 乳酸 3ml、 焦亚硫酸 氢钠 0.1g、 N- 甲基吡咯烷酮 15ml。

19、、 枸橼酸 0.2g、 聚乙烯吡咯烷酮 5g、 苯乙醇 0.5ml， pH 调节 剂适量， 余量为注射用水。 0034 制备方法如下 ： 先将乳酸加到 30mL 水中混合均匀后， 加入恩诺沙星搅拌溶解备 用。用 20mL 注射用水将焦亚硫酸氢钠与枸橼酸溶解， 然后加入 N- 甲基吡咯烷酮， 最后加入 聚乙烯吡咯酮使其溶解。 最后将含有聚乙烯吡咯酮的溶液缓慢加入到溶有恩诺沙星的溶液 中， 搅拌使其混匀， 加入苯乙醇。用乳酸调 pH 至 5.0 左右。最后加注射用水定容至 100mL。 将配制的溶液经微孔滤膜过滤后封装。经高压灭菌后， 即得成品。 0035 实施例 4 0036 恩诺沙星长效注射液。

20、， 每100ml原料组成如下 ： 恩诺沙星15g、 烟酸5 ml、 焦亚硫酸 氢钠 0.1g、 - 吡咯烷酮 10ml、 磷酸 0.1ml、 聚乙烯醇 5mg、 甲酚 0.25ml， pH 调节剂适量， 余 量为注射用水。 0037 制备方法如下 ： 先将烟酸加到 30mL 水中混合均匀后， 加入恩诺沙星搅拌溶解备 用。用 20mL 注射用水将焦亚硫酸氢钠溶解， 然后加入磷酸与 - 吡咯烷酮， 最后加入聚乙 烯醇使其溶解。 将含有聚乙烯醇的溶液缓慢加入到溶有恩诺沙星的溶液中， 搅拌使其混匀， 加入甲酚。用氢氧化钠溶液调 pH 至 6.1 左右， 最后加注射用水定容至 100mL。将配制的溶 说。

21、 明 书 CN 102415991 B 4/6 页 6 液经微孔滤膜过滤后封装， 经高压灭菌后， 即得成品。 0038 实施例 5 0039 恩诺沙星长效注射液， 每100ml原料组成如下 ： 恩诺沙星20g、 烟酸3 ml、 焦亚硫酸 氢钠 0.1g、 丙三醇 10ml、 EDTA-2Na0.02g、 聚乙二醇 5ml、 三氯叔丁醇 0.5ml， pH 调节剂适量， 余量为注射用水。 0040 制备方法如下 ： 先将烟酸加到 30mL 水中混合均匀后， 加入恩诺沙星搅拌溶解备 用。用 20mL 注射用水将焦亚硫酸氢钠与 EDTA-2Na 溶解， 然后加入丙三醇， 最后加入聚乙二 醇使其溶解。。

22、 将含有聚乙二醇的溶液缓慢加入到溶有恩诺沙星的溶液中， 搅拌使其混匀， 加 入三氯叔丁醇。用氢氧化钠溶液调 pH 至 6.1 左右， 最后加注射用水定容至 100mL。将配制 的溶液经微孔滤膜过滤后封装。经高压灭菌后， 即得成品。 0041 实施例 6 0042 恩诺沙星长效注射液， 每100ml原料组成如下 ： 恩诺沙星10g、 丁二酸5 ml、 焦亚硫 酸氢钠 0.1g、 N,N- 二甲基甲酰胺 10ml、 EDTA-2Na0.02g、 聚乙烯吡咯烷酮 10ml、 尼泊金甲酯 0.16g、 尼泊金丙酯 0.04g， pH 调节剂适量， 余量为注射用水。 0043 制备方法如下 ： 先将丁二。

23、酸加到 20mL 水中混合均匀后， 加入恩诺沙星搅拌溶解备 用。用 20mL 注射用水将焦亚硫酸氢钠与 EDTA-2Na 溶解， 然后加入 N,N- 二甲基甲酰胺， 最 后加入聚乙烯吡咯酮使其溶解。 最后将含有聚乙烯吡咯酮的溶液缓慢加入到溶有恩诺沙星 的溶解中， 搅拌使其混匀， 加入尼泊金甲酯和尼泊金丙酯搅拌使其溶解。 用氢氧化钠溶液调 pH 至 5.0 左右， 最后加注射用水定容至 100mL。将配制的溶液经微孔滤膜过滤后封装。经 高压灭菌后， 即得成品。 0044 上述实施例为本发明优选的实施方式， 但本发明的实施方式并不受上述实施例的 限制， 其他的任何未背离本发明所作的改变均应为等效的。

24、置换方式， 都包含在本发明的保 护范围之内。 0045 恩诺沙星长效注射液的加速稳定性实验 ： 0046 取实施例1、 3、 4样品, 根据农业部兽药稳定性技术规范， 在温度为402， 相对 湿度为 755% 的条件下进行温湿联合加速试验。采用 NaCl 饱和溶液为加湿剂， 置于干燥 器底部， 将三个批次的供试样置于干燥器的上层， 一并放入隔水式电热恒温培养箱中， 控制 温度在 402， 定期观察 6 个月， 每个月定期取样一次， 考察样品外观色泽、 澄明度、 pH、 降 解产物等指标， 并测定其含量。结果如下所示 ： 0047 说 明 书 CN 102415991 B 5/6 页 7 004。

25、8 恩诺沙星长效注射液对家兔肌肉刺激性实验 ： 0049 选用大耳白家兔 6 只， 采用同体左右侧自身对比法。分别在每只兔经无菌操作方 法处理的正方形中心各肌肉注射给予受试药物 （本发明实施例1恩诺沙星长效注射液） 和生 理盐水， 剂量以 10mg/kg 体重 （恩诺沙星溶液加入的量以恩诺沙星的实际含量计为 10mg/kg 体重， 而生理盐水的加入量则以与相应恩诺沙星溶液等体积加入） 注射， 前后注射部位用碘 酊消毒。家兔股四头肌注射恩诺沙星长效注射液 48 h 后， 肉眼观察 6 只家兔注射部位均未 见红肿、 出血、 坏死、 结痴等刺激性反应。处死其中 3 只家兔解剖均未见出血等现象， 注射。

26、部 位做病理切片可观察到个别注射部位有结缔组织增生、 单核细胞浸润等轻微炎症反应。于 注射后 7 天观察剩余 3 只家兔， 注射部位仍未见红肿、 出血、 坏死、 结痴等刺激性反应， 处死 后解剖注射部位做病理切片， 可见炎症反应基本消失。表明恩诺沙星长效注射液与组织相 容性较好、 刺激性小。 0050 恩诺沙星长效注射液在健康猪体内的药动学试验 ： 0051 16 头健康猪随机分为两组， 分别肌肉注射本发明实施例 1 恩诺沙星长效注射 液和普通恩诺沙星注射液， 给药剂量均为 10mg/kg 体重 （都是以恩诺沙星的实际给药量 计） 。并于给药后 0.1h、 0.3h、 0.5h、 0.75h、。

27、 1h、 1.5 h、 2h、 4h、 6h、 9h、 12h、 16h、 24h、 36h、 48h、 60h、 72h 采集前腔静脉血于加有抗凝剂的离心管中， 4000r/min 离心 10min 分离血浆， 置 于 -20保存， 待测定。将待处理样品解冻处理后进行高效液相测定， 将测得的数据用药 说 明 书 CN 102415991 B 6/6 页 8 动学软件 Winnonlin 处理后得肌注长效恩诺沙星长效注射液的主要药动学参数为 ： 峰浓度 （Cmax） 2.55g/mL， 吸收半衰期 (t1/2Ka)2.11h， 消除半衰期 (t1/2)12.15h， 药时曲线下面积 (AUC)。

28、30.16g.h/mL， 而普通恩诺沙星注射液的主要药动学参数 ： 峰浓度 （Cmax） 3.62g/ mL， 吸收半衰期 (t1/2Ka)1.14h， 消除半衰期 (t1/2) 3.56h， 药时曲线下面积 (AUC)13.28g. h/mL。t 检验表明两种制剂 tmax和 Ka 差异极显著 (P 0.01) ； Cmax和 t1/2Ka差异显著 (P 0.05) ; AUC和t1/2无显著性差异(P 0.05)。 结果表明恩诺沙星长效注射液与普通恩 诺沙星注射液相比， 药物吸收延迟， 峰浓度降低， 半衰期显著延长， 有效血药深度维持时间 延长， 具有长效的作用。 0052 普通恩诺沙星溶液的制备方法如下 ： 恩诺沙星 5g,EDTA-2Na:0.001g, 无水亚硫酸 钠 ： 0.002g, 丙二醇mL。先用 10ML 水将 EDTA-2Na 与无水亚硫酸钠溶解后加放丙二醇， 再 加入% 氢氧化钠溶液， 加入恩诺沙星溶解后， 用盐酸调节 pH 值至 10.0 左右。最后用水定 容至 50mL。 说 明 书 CN 102415991 B 1/2 页 9 图 1 说 明 书 附 图 CN 102415991 B 2/2 页 10 图 2 说 明 书 附 图 CN 102415991 B 。