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一种双水相萃取蒲黄总黄酮的方法.pdf

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文档编号：8434407

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1、(10)申请公布号 CN 102233067 A (43)申请公布日 2011.11.09 CN 102233067 A *CN102233067A* (21)申请号 201110117574.3 (22)申请日 2011.05.06 A61K 36/88(2006.01) A61P 9/10(2006.01) A61P 3/06(2006.01) A61K 133/00(2006.01) (71)申请人南京泽朗医药科技有限公司地址 210046 江苏省南京市栖霞区尧化街道甘家边 108 号 05 幢 6 楼 (72)发明人刘东锋郭琴杨成东 (54) 发明名称一种双水相萃取蒲黄总。

2、黄酮的方法 (57) 摘要本发明属于医药技术领域，涉及一种双水相萃取蒲黄总黄酮的方法。本发明的技术特征在于：先将蒲黄药材提取、除杂后得到蒲黄粗提液，浓缩后加入乙醇和磷酸盐双水相系统，混匀，分为上、下两相；上相加乙酸乙酯、水和无机盐，室温下混匀，进行反萃取。取出含有蒲黄总黄酮的乙酸乙酯相，对其减压浓缩，真空干燥得到蒲黄总黄酮。本发明的有益效果是：采用双水相从蒲黄中提取蒲黄总黄酮，方法简单易行，可放大工程进行连续性操作，处理量大、成本低、不存在有机溶剂残留。 (51)Int.Cl. (19)中华人民共和国国家知识产权局 (12)发明专。

3、利申请权利要求书 1 页说明书 2 页 CN 102233068 A1/1 页 2 1. 一种双水相萃取蒲黄总黄酮的方法，其特征在于包括以下步骤： A. 提取：将蒲黄药材加入甲醇溶液提取，过滤除杂后得到蒲黄粗提液； B. 双水相萃取：取上述蒲黄粗提液浓缩后加入乙醇和磷酸盐双水相系统，混匀，分为上、下两相； C. 反萃取：将上述上相加乙酸乙酯、水和无机盐，系统室温下混匀，进行反萃取，静置后分为上、下两相； D. 干燥：取上述乙酸乙酯相，减压浓缩、真空干燥，得到蒲黄总黄酮。 2. 如权利要求 1 所述的一种双水相萃取蒲黄总黄酮的方法，其特。

4、征在于：步骤 B 中加入的乙醇质量比为 7-25。 3. 如权利要求 1 所述的一种双水相萃取蒲黄总黄酮的方法，其特征在于：步骤 B 中磷酸盐选用磷酸钾、磷酸二氢钾或磷酸氢二钾中的一种或几种组合，加入的磷酸盐质量比为 10-22。 4. 如权利要求 1 所述的一种双水相萃取蒲黄总黄酮的方法，其特征在于：步骤 B 双水相萃取中，分相温度为 10-25，分相时间为 2-5 小时。 5. 如权利要求 1 所述的一种双水相萃取蒲黄总黄酮的方法，其特征在于：步骤 C 中无机盐选用硫酸铵、硫酸镁、氯化钠。 6. 如权利要求 1 所述的一种双水相萃取蒲黄总黄酮的方法。

5、，其特征在于：步骤 C 反萃取中分相时间为 1-3 小时。权利要求书 CN 102233067 A CN 102233068 A1/2 页 3 一种双水相萃取蒲黄总黄酮的方法技术领域： 0001 本发明属于制药技术领域，涉及一种双水相萃取蒲黄总黄酮的方法。背景技术： 0002 蒲黄为香蒲科植物水烛香蒲 (Typha angustifolia L.)、东方香蒲 (Typha orientalis Presl.) 或同属植物的干燥花粉，具有止血、化瘀、通淋的功能，用于吐血、崩漏、外伤出血，经闭痛经，血淋涩痛。蒲黄中黄酮类成分具有明显增加冠脉流量、。

6、降低心脑组织耗氧量、扩张血管、降低血脂及康动脉粥样硬化等作用，其中主要有效成分有香蒲新苷、异鼠李素 -3-O- 新橙皮苷、柚皮素和异鼠李素等。 0003 傅大煦等在文献 “蒲黄总黄酮提取物中香蒲新苷及异鼠李素 -3-O- 新橙皮糖苷的 HPLC 测定” 中，采用 60乙醇提取，提取液浓缩后上大孔树脂，依次以水、 20乙醇、 50 乙醇洗脱，洗脱液真空干燥得到总黄酮提取物。在文献 “大孔树脂吸附和纯化蒲黄总黄酮的工艺研究” 中，以香蒲新苷及异鼠李素 -3-O- 新橙皮糖苷含量为指标，研究了 HZ802 非极性大孔树脂吸附和纯化蒲黄总黄酮的工艺条件，结果表明 HZ80。

7、2 非极性大孔树脂对蒲黄总酮有良好的吸附纯化性能。刘斌等用 70乙醇提取 3 次，溶剂用量依次为 8， 6， 6 倍，提取时间为 60min， 60min， 30min。中国专利申请号 03115508.1，蒲黄提取物及其制备方法和用途，采用含水乙醇 (40-95 ) 加热提取后浓缩，离心或过滤，取上清液或滤液，用大孔吸附树脂吸附，先用水淋洗除去杂质，再用含水低级醇洗脱；洗脱液浓缩至一定体积，用乙醇 (70-95 ) 醇沉，去沉淀后浓缩至干或除去乙醇后喷雾干燥，得蒲黄提取物，并将得到的蒲黄提取物用于防治心肌缺血性心血管疾病。李维维等采用 70乙醇回流提取。

8、，再经大孔树脂柱色谱、聚酰胺柱色谱及 Sephadex LH-20 柱色谱分离得到香蒲新苷、异鼠李素 -3-O- 新橙皮苷、柚皮素和异鼠李素。张淑敏等在 “蒲黄化学成分研究” 中，采用聚酰胺及硅胶柱色谱进行成分分离，鉴定出 9 个黄酮类化合物。这些方法主要采用大孔树脂、硅胶柱或聚酰胺柱层析等传统柱色谱方法，存在提取率低、溶剂用量大、生产周期长、操作繁琐、不宜工业化生产等问题。发明内容： 0004 本发明的目的是克服已有技术中蒲黄提取工艺流程长、提取率低、难以连续操作、难工业化生产的技术问题，提供一种双水相萃取蒲黄总黄酮的方法。 0005 本发明的目。

9、的是这样实现的： 0006 一种双水相萃取蒲黄总黄酮的方法，其特征在于包括以下步骤： 0007 A. 提取：将蒲黄药材加入甲醇溶液提取，过滤除杂后得到蒲黄粗提液； 0008 B. 双水相萃取：取上述蒲黄粗提液浓缩后加入乙醇和磷酸盐双水相系统，混匀，分为上、下两相，将下相降温、结晶、过滤，回收磷酸盐晶体； 0009 C. 反萃取：将上述上相加乙酸乙酯、水和无机盐，系统室温下混匀，进行反萃取，静置后分为上、下两相；说明书 CN 102233067 A CN 102233068 A2/2 页 4 0010 D. 干燥：取上述乙酸乙酯相，减。

10、压浓缩、真空干燥，得到蒲黄总黄酮。 0011 步骤 B 中加入的乙醇质量比为 7-25。 0012 步骤 B 中磷酸盐选用磷酸钾、磷酸二氢钾或磷酸氢二钾中的一种或几种组合，加入的磷酸盐质量比为 10-22。 0013 步骤 B 双水相萃取中，分相温度为 10-25，分相时间为 2-5 小时。 0014 步骤 C 中无机盐选用硫酸铵、硫酸镁、氯化钠。 0015 步骤 C 反萃取中分相时间为 1-3 小时。 0016 本发明的优点为： 0017 本发明的双水相萃取蒲黄总黄酮的方法，是利用双水相萃取方法，选择性地富集分离纯化黄酮成分，分离过程不经过层析柱，与传统的硅胶柱。

11、层析、大孔吸附树脂柱层析方法相比，具有工艺流程短、简单易行、成本低，可放大工程进行连续性操作的优点。具体实施方式： 0018 下面结合具体实施例对本发明作进一步说明。 0019 实施例 1 ： 0020 称取 20g 蒲黄粉末，加入甲醇 200ml 加热回流提取 2h，提取 3 次，过滤，合并提取液，浓缩得到浓缩液 180g ；取浓缩液加入 25g 乙醇、 40gK3PO4和 100g 水，充分混匀，在 15 分相4小时；取出富含乙醇聚合物的上相141ml，加水60ml，乙酸乙酯96ml，硫酸铵3g，充分混匀，室温下静置分相 2 小时，取出乙。

12、酸乙酯相进行减压浓缩、真空干燥得到蒲黄总黄酮。 0021 实施例 2 ： 0022 称取 20g 蒲黄粉末，加入甲醇 300ml 加热回流提取 3h，提取 2 次，过滤，合并提取液，浓缩得到浓缩液 195g ；取浓缩液加入 35g 乙醇、 48gK3PO4和 66g 水，充分混匀，在 25分相 5 小时；取出富含乙醇聚合物的上相 164ml，加水 66ml，乙酸乙酯 105ml，硫酸铵 3g，充分混匀，室温下静置分相 3 小时，取出乙酸乙酯相进行减压浓缩、真空干燥得到蒲黄总黄酮。 0023 实施例 3 ： 0024 称取 30g 蒲黄粉末，加入甲醇。

13、240ml 加热回流提取 3h，提取 3 次，过滤，合并提取液，浓缩得到浓缩液275g ；取浓缩液加入40g乙醇、 53gKH2PO4和80g水，充分混匀，在25分相 4 小时；取出富含乙醇聚合物的上相 205ml，加水 82ml，乙酸乙酯 124ml，硫酸镁 3g，充分混匀，室温下静置分相 2 小时，取出乙酸乙酯相进行减压浓缩、真空干燥得到蒲黄总黄酮。 0025 实施例 4 ： 0026 称取 30g 蒲黄粉末，加入甲醇 360ml 加热回流提取 2h，提取 2 次，过滤，合并提取液，浓缩得到浓缩液293g ；取浓缩液加入45g乙醇、 55。

14、gK2HPO4和98g水，充分混匀，在20分相 2 小时；取出富含乙醇聚合物的上相 230ml，加水 92ml，乙酸乙酯 139ml，硫酸铵 3g，充分混匀，室温下静置分相 1 小时，取出乙酸乙酯相进行减压浓缩、真空干燥得到蒲黄总黄酮。 0027 实施例 5 ： 0028 称取 50g 蒲黄粉末，加入甲醇 400ml 加热回流提取 3h，提取 2 次，过滤，合并提取液，浓缩得到浓缩液 356g ；取浓缩液加入 55g 乙醇、 67gKH2PO4和 110g 水，充分混匀，在 10 分相5小时；取出富含乙醇聚合物的上相332ml，加水127ml，乙酸乙酯189ml，氯化钠3g，充分混匀，室温下静置分相 3 小时，取出乙酸乙酯相进行减压浓缩、真空干燥得到蒲黄总黄酮。说明书 CN 102233067 A 。

摘要
申请专利号：	CN201110117574.3	申请日：	20110506
公开号：	CN102233067A	公开日：	20111109
当前法律状态：		有效性：	失效
法律详情：
IPC分类号：	A61K36/88,A61P9/10,A61P3/06,A61K133/00	主分类号：	A61K36/88,A61P9/10,A61P3/06,A61K133/00
申请人：	南京泽朗医药科技有限公司
发明人：	刘东锋,郭琴,杨成东
地址：	210046 江苏省南京市栖霞区尧化街道甘家边108号05幢6楼
优先权：	CN201110117574A
专利代理机构：		代理人：
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内容摘要

本发明属于医药技术领域，涉及一种双水相萃取蒲黄总黄酮的方法。本发明的技术特征在于：先将蒲黄药材提取、除杂后得到蒲黄粗提液，浓缩后加入乙醇和磷酸盐双水相系统，混匀，分为上、下两相；上相加乙酸乙酯、水和无机盐，室温下混匀，进行反萃取。取出含有蒲黄总黄酮的乙酸乙酯相，对其减压浓缩，真空干燥得到蒲黄总黄酮。本发明的有益效果是：采用双水相从蒲黄中提取蒲黄总黄酮，方法简单易行，可放大工程进行连续性操作，处理量大、成本低、不存在有机溶剂残留。

权利要求书

1.一种双水相萃取蒲黄总黄酮的方法，其特征在于包括以下步骤：A.提取：将蒲黄药材加入甲醇溶液提取，过滤除杂后得到蒲黄粗提液；B.双水相萃取：取上述蒲黄粗提液浓缩后加入乙醇和磷酸盐双水相系统，混匀，分为上、下两相；C.反萃取：将上述上相加乙酸乙酯、水和无机盐，系统室温下混匀，进行反萃取，静置后分为上、下两相；D.干燥：取上述乙酸乙酯相，减压浓缩、真空干燥，得到蒲黄总黄酮。 2.如权利要求1所述的一种双水相萃取蒲黄总黄酮的方法，其特征在于：步骤B中加入的乙醇质量比为7-25％。 3.如权利要求1所述的一种双水相萃取蒲黄总黄酮的方法，其特征在于：步骤B中磷酸盐选用磷酸钾、磷酸二氢钾或磷酸氢二钾中的一种或几种组合，加入的磷酸盐质量比为10-22％。 4.如权利要求1所述的一种双水相萃取蒲黄总黄酮的方法，其特征在于：步骤B双水相萃取中，分相温度为10-25℃，分相时间为2-5小时。 5.如权利要求1所述的一种双水相萃取蒲黄总黄酮的方法，其特征在于：步骤C中无机盐选用硫酸铵、硫酸镁、氯化钠。 6.如权利要求1所述的一种双水相萃取蒲黄总黄酮的方法，其特征在于：步骤C反萃取中分相时间为1-3小时。

说明书

技术领域：

本发明属于制药技术领域，涉及一种双水相萃取蒲黄总黄酮的方法。

背景技术：

蒲黄为香蒲科植物水烛香蒲(Typha angustifolia L.)、东方香蒲(Typha orientalis Presl.) 或同属植物的干燥花粉，具有止血、化瘀、通淋的功能，用于吐血、崩漏、外伤出血，经闭痛经，血淋涩痛。蒲黄中黄酮类成分具有明显增加冠脉流量、降低心脑组织耗氧量、扩张血管、降低血脂及康动脉粥样硬化等作用，其中主要有效成分有香蒲新苷、异鼠李素-3-O-新橙皮苷、柚皮素和异鼠李素等。

傅大煦等在文献“蒲黄总黄酮提取物中香蒲新苷及异鼠李素-3-O-新橙皮糖苷的HPLC测定”中，采用60％乙醇提取，提取液浓缩后上大孔树脂，依次以水、20％乙醇、50％乙醇洗脱，洗脱液真空干燥得到总黄酮提取物。在文献“大孔树脂吸附和纯化蒲黄总黄酮的工艺研究”中，以香蒲新苷及异鼠李素-3-O-新橙皮糖苷含量为指标，研究了HZ802非极性大孔树脂吸附和纯化蒲黄总黄酮的工艺条件，结果表明HZ802非极性大孔树脂对蒲黄总酮有良好的吸附纯化性能。刘斌等用70％乙醇提取3次，溶剂用量依次为8，6，6倍，提取时间为60min， 60min，30min。中国专利申请号03115508.1，蒲黄提取物及其制备方法和用途，采用含水乙醇(40-95％)加热提取后浓缩，离心或过滤，取上清液或滤液，用大孔吸附树脂吸附，先用水淋洗除去杂质，再用含水低级醇洗脱；洗脱液浓缩至一定体积，用乙醇(70-95％)醇沉，去沉淀后浓缩至干或除去乙醇后喷雾干燥，得蒲黄提取物，并将得到的蒲黄提取物用于防治心肌缺血性心血管疾病。李维维等采用70％乙醇回流提取，再经大孔树脂柱色谱、聚酰胺柱色谱及Sephadex LH-20柱色谱分离得到香蒲新苷、异鼠李素-3-O-新橙皮苷、柚皮素和异鼠李素。张淑敏等在“蒲黄化学成分研究”中，采用聚酰胺及硅胶柱色谱进行成分分离，鉴定出 9个黄酮类化合物。这些方法主要采用大孔树脂、硅胶柱或聚酰胺柱层析等传统柱色谱方法，存在提取率低、溶剂用量大、生产周期长、操作繁琐、不宜工业化生产等问题。

发明内容：

本发明的目的是克服已有技术中蒲黄提取工艺流程长、提取率低、难以连续操作、难工业化生产的技术问题，提供一种双水相萃取蒲黄总黄酮的方法。

本发明的目的是这样实现的：

一种双水相萃取蒲黄总黄酮的方法，其特征在于包括以下步骤：

A.提取：将蒲黄药材加入甲醇溶液提取，过滤除杂后得到蒲黄粗提液；

B.双水相萃取：取上述蒲黄粗提液浓缩后加入乙醇和磷酸盐双水相系统，混匀，分为上、下两相，将下相降温、结晶、过滤，回收磷酸盐晶体；

C.反萃取：将上述上相加乙酸乙酯、水和无机盐，系统室温下混匀，进行反萃取，静置后分为上、下两相；

D.干燥：取上述乙酸乙酯相，减压浓缩、真空干燥，得到蒲黄总黄酮。

步骤B中加入的乙醇质量比为7-25％。

步骤B中磷酸盐选用磷酸钾、磷酸二氢钾或磷酸氢二钾中的一种或几种组合，加入的磷酸盐质量比为10-22％。

步骤B双水相萃取中，分相温度为10-25℃，分相时间为2-5小时。

步骤C中无机盐选用硫酸铵、硫酸镁、氯化钠。

步骤C反萃取中分相时间为1-3小时。

本发明的优点为：

本发明的双水相萃取蒲黄总黄酮的方法，是利用双水相萃取方法，选择性地富集分离纯化黄酮成分，分离过程不经过层析柱，与传统的硅胶柱层析、大孔吸附树脂柱层析方法相比，具有工艺流程短、简单易行、成本低，可放大工程进行连续性操作的优点。

具体实施方式：

下面结合具体实施例对本发明作进一步说明。

实施例1：

称取20g蒲黄粉末，加入甲醇200ml加热回流提取2h，提取3次，过滤，合并提取液，浓缩得到浓缩液180g；取浓缩液加入25g乙醇、40gK3PO4和100g水，充分混匀，在15℃分相4小时；取出富含乙醇聚合物的上相141ml，加水60ml，乙酸乙酯96ml，硫酸铵3g，充分混匀，室温下静置分相2小时，取出乙酸乙酯相进行减压浓缩、真空干燥得到蒲黄总黄酮。

实施例2：

称取20g蒲黄粉末，加入甲醇300ml加热回流提取3h，提取2次，过滤，合并提取液，浓缩得到浓缩液195g；取浓缩液加入35g乙醇、48gK3PO4和66g水，充分混匀，在25℃分相5小时；取出富含乙醇聚合物的上相164ml，加水66ml，乙酸乙酯105ml，硫酸铵3g，充分混匀，室温下静置分相3小时，取出乙酸乙酯相进行减压浓缩、真空干燥得到蒲黄总黄酮。

实施例3：

称取30g蒲黄粉末，加入甲醇240ml加热回流提取3h，提取3次，过滤，合并提取液，浓缩得到浓缩液275g；取浓缩液加入40g乙醇、53gKH2PO4和80g水，充分混匀，在25℃分相4小时；取出富含乙醇聚合物的上相205ml，加水82ml，乙酸乙酯124ml，硫酸镁3g，充分混匀，室温下静置分相2小时，取出乙酸乙酯相进行减压浓缩、真空干燥得到蒲黄总黄酮。

实施例4：

称取30g蒲黄粉末，加入甲醇360ml加热回流提取2h，提取2次，过滤，合并提取液，浓缩得到浓缩液293g；取浓缩液加入45g乙醇、55gK2HPO4和98g水，充分混匀，在20℃分相2小时；取出富含乙醇聚合物的上相230ml，加水92ml，乙酸乙酯139ml，硫酸铵3g，充分混匀，室温下静置分相1小时，取出乙酸乙酯相进行减压浓缩、真空干燥得到蒲黄总黄酮。

实施例5：

称取50g蒲黄粉末，加入甲醇400ml加热回流提取3h，提取2次，过滤，合并提取液，浓缩得到浓缩液356g；取浓缩液加入55g乙醇、67gKH2PO4和110g水，充分混匀，在10℃ 分相5小时；取出富含乙醇聚合物的上相332ml，加水127ml，乙酸乙酯189ml，氯化钠3g，充分混匀，室温下静置分相3小时，取出乙酸乙酯相进行减压浓缩、真空干燥得到蒲黄总黄酮。