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丙型肝炎病毒抑制剂.pdf

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1、10申请公布号CN103153986A43申请公布日20130612CN103153986ACN103153986A21申请号201080069468622申请日20100804C07D403/14200601C07D405/14200601A61K31/4184200601A61P31/1220060171申请人百时美施贵宝公司地址美国新泽西州72发明人JL罗米恩74专利代理机构北京市柳沈律师事务所11105代理人陈桉54发明名称丙型肝炎病毒抑制剂57摘要本申请涉及用于治疗丙型肝炎病毒HCV感染的化合物、组合物和方法。本申请还披露了含有这种化合物的药物组合物和使用在治疗HCV感染中使用这些化。

2、合物的方法。85PCT申请进入国家阶段日2013040786PCT申请的申请数据PCT/US2010/0443562010080487PCT申请的公布数据WO2012/018325EN2012020951INTCL权利要求书2页说明书177页19中华人民共和国国家知识产权局12发明专利申请权利要求书2页说明书177页10申请公布号CN103153986ACN103153986A1/2页21化合物或其药用盐，所述化合物选自22S,5S2722S,5S12S24,4二氟环己基2甲氧基羰基氨基乙酰基5甲基2吡咯烷基1H苯并咪唑5基乙炔基1H萘并1,2D咪唑2基5甲基1吡咯烷基2氧代1四氢2H吡喃4基。

3、乙基氨基甲酸甲酯；1S12S,5S2522S,5S1甲氧基羰基氨基四氢2H吡喃4基乙酰基5甲基2吡咯烷基1H萘并1,2D咪唑7基乙炔基1H苯并咪唑2基5甲基1吡咯烷基羰基2甲基丙基氨基甲酸甲酯；1S12S,4S2522S,4S12S2甲氧基羰基氨基3甲基丁酰基4甲基2吡咯烷基1H萘并1,2D咪唑7基乙炔基1H苯并咪唑2基4甲基1吡咯烷基羰基2甲基丙基氨基甲酸甲酯；1S22S,4S2722S,4S12S2甲氧基羰基氨基2四氢2H吡喃4基乙酰基4甲基2吡咯烷基1H苯并咪唑5基乙炔基1H萘并1,2D咪唑2基4甲基1吡咯烷基2氧代1四氢2H吡喃4基乙基氨基甲酸甲酯；1S13S,5R3523S,5R22。

4、S2甲氧基羰基氨基3甲基丁酰基5甲基2氮杂二环310己3基1H萘并1,2D咪唑7基乙炔基1H苯并咪唑2基5甲基2氮杂二环310己2基羰基2甲基丙基氨基甲酸甲酯；和1S23S,5R3723S,5R22S2甲氧基羰基氨基2四氢2H吡喃4基乙酰基5甲基2氮杂二环310己3基1H苯并咪唑5基乙炔基1H萘并1,2D咪唑2基5甲基2氮杂二环310己2基2氧代1四氢2H吡喃4基乙基氨基甲酸甲酯。2组合物，其包含权利要求1的化合物或其药用盐和药用载体。3权利要求2的组合物，其还包含一种或两种具有抗HCV活性的另外化合物。4权利要求3的组合物，其中所述另外化合物中的至少一种为干扰素或利巴韦林。5权利要求4的组合。

5、物，其中所述干扰素选自干扰素2B、PEG化的干扰素、同感干扰素、干扰素2A和淋巴细胞样干扰素。6权利要求3的组合物，其中所述另外化合物中的至少一种选自白细胞介素2、白细胞介素6、白细胞介素12、可提高1型辅助T细胞应答发展的化合物、干扰RNA、反义RNA、咪喹莫特、利巴韦林、5单磷酸肌苷脱氢酶抑制剂、金刚烷胺和金刚乙胺。7权利要求3的组合物，其中所述另外化合物中的至少一种对抑制靶标的功能以治疗HCV感染是有效的，所述靶标选自HCV金属蛋白酶、HCV丝氨酸蛋白酶、HCV聚合酶、HCV解螺旋酶、HCVNS4B蛋白质、HCV进入、HCV组装、HCV释出、HCVNS5A蛋白质和IMPDH。8治疗患者中。

6、的HCV感染的方法，其包括向所述患者给药治疗有效量的权利要求1的化合物或其药用盐。9权利要求8的方法，其还包括在给药权利要求1的化合物或其药用盐之前、之后或同时给药一种或两种具有抗HCV活性的另外化合物。10权利要求9的方法，其中所述另外化合物中的至少一种为干扰素或利巴韦林。权利要求书CN103153986A2/2页311权利要求10的方法，其中所述干扰素选自干扰素2B、PEG化的干扰素、同感干扰素、干扰素2A和淋巴细胞样干扰素。12权利要求9的方法，其中所述另外化合物中的至少一种选自白细胞介素2、白细胞介素6、白细胞介素12、可提高1型辅助T细胞应答发展的化合物、干扰RNA、反义RNA、咪喹。

7、莫特、利巴韦林、5单磷酸肌苷脱氢酶抑制剂、金刚烷胺和金刚乙胺。13权利要求9的方法，其中所述另外化合物中的至少一种对抑制靶标的功能以治疗HCV感染是有效的，所述靶标选自HCV金属蛋白酶、HCV丝氨酸蛋白酶、HCV聚合酶、HCV解螺旋酶、HCVNS4B蛋白质、HCV进入、HCV组装、HCV释出、HCVNS5A蛋白质和IMPDH。权利要求书CN103153986A1/177页4丙型肝炎病毒抑制剂技术领域0001本发明一般性地涉及抗病毒化合物，以及更具体地涉及可抑制由丙型肝炎病毒HCV编码的NS5A蛋白质功能的化合物、包含这种化合物的组合物，以及抑制NS5A蛋白质功能的方法。背景技术0002HCV是。

8、主要的人类病原体，其在世界范围内感染约一亿七千万人大致是1型人类免疫缺陷病毒感染数量的5倍。这些HCV感染个体中相当大的部分发展成严重的进行性肝脏疾病，包括肝硬化和肝细胞癌。0003HCV的现行护理标准其采用PEG化的干扰素PEGYLATEDINTERFERON和利巴韦林RIBAVIRIN的组合在实现持续病毒响应上具有非最佳成功率，并且造成许多副作用。因此，明显和迫切地需要开发用于治疗HCV感染的有效疗法。0004HCV是正链RNA病毒。基于对所推断氨基酸序列进行的比较和5非翻译区的广泛相似性，已经把HCV归类为黄病毒科FLAVIVIRIDAEFAMILY中独立的属。黄病毒科的所有成员都具有包。

9、封的病毒体ENVELOPEDVIRION，其含有的正链RNA基因组通过翻译单一的连续的可读框而编码所有已知的病毒专属性蛋白质。0005在整个HCV基因组的核苷酸和所编码的氨基酸序列中发现了相当程度的异质性，这是由于所编码的RNA依赖性RNA聚合酶其缺乏校读能力的高误差率所致。已经表征了至少6种主要的基因型，并且已经描述了多于50种的亚型分布在全世界。HCV遗传异质性的临床意义已证实在单一疗法治疗期间出现突变的倾向，因此需要其它治疗选项供使用。基因型对于发病机制和疗法的可能调节剂作用仍然难以捉摸。0006单链HCVRNA基因组的长度大约是9500个核苷酸，并且具有单一的可读框ORF，其编码由大约。

10、3000个氨基酸组成的单一的大多蛋白。在被感染的细胞中，这种多蛋白在多个位点被细胞蛋白酶和病毒蛋白酶裂解，从而产生结构蛋白和非结构NS蛋白。就HCV来说，成熟的非结构蛋白NS2、NS3、NS4A、NS4B、NS5A和NS5B的产生受到两种病毒蛋白酶的影响。认为第一种病毒蛋白酶是金属蛋白酶，并且在NS2NS3接合处进行裂解；第二种病毒蛋白酶是包含在NS3的N末端区域内的丝氨酸蛋白酶也称为NS3蛋白酶，并且介导NS3下游的所有随后裂解，既在NS3NS4A裂解位点以顺式进行裂解，又在其余的NS4ANS4B、NS4BNS5A、NS5ANS5B位点以反式进行裂解。NS4A蛋白似乎具有多种功能，通过充当N。

11、S3蛋白酶的辅因子，并且帮助NS3和其它病毒复制酶组分的膜定位。NS3NS4A络合物的形成对于适当的蛋白酶活性导致裂解事件的蛋白水解效率提高是必需的。NS3蛋白还显示出三磷酸核苷酶和RNA解螺旋酶活性。NS5B本文也称为HCV聚合酶是依赖于RNA的RNA聚合酶，在用其它HCV蛋白质包括NS5A于复制酶络合物中复制HCV中涉及所述酶。0007选择性抑制HCV病毒复制的可用于治疗HCV感染患者的化合物是期望的。具体而言，期望可有效抑制NS5A蛋白功能的化合物。HCVNS5A蛋白描述在例如下列文献中SLTAN,ETAL,VIROLOGY,2841122001KJPARK,ETAL,JBIOL说明书C。

12、N103153986A2/177页5CHEM,30711307182003TLTELLINGHUISEN,ETAL,NATURE,435,3742005RALOVE,ETAL,JVIROL,83,43952009NAPPEL,ETAL,JBIOLCHEM,281,98332006LHUANG,JBIOLCHEM,280,364172005CRICE,ETAL,WO2006093867。发明内容0008在第一方面，本申请提供式I化合物或其药用盐，00090010其中0011每个M各自独立地为0或1；0012每个N各自独立地为0或1；0013L为键或选自和其中各基团被画成其左端与苯并咪唑连接，其右。

13、端与R1连接；0014R1选自00150016每个R2独立选自烷基和卤素；0017每个R3独立选自氢和COR7；0018R4为烷基；说明书CN103153986A3/177页60019R5和R6独立选自氢、烷基、氰基烷基和卤素，或0020R5和R6与它们所连接的碳原子一起形成六元环或七元环，所述六元环或七元环任选含有一个选自氮和氧的杂原子，以及任选含有另外的双键；和0021每个R7独立选自烷氧基、烷基、芳基烷氧基、芳基烷基、环烷基、环烷基烷基、杂环基、杂环基烷基、NRCRD烯基，和NRCRD烷基。0022在第一方面的第一实施方案中，本申请提供式I化合物或其药用盐，其中L为键。0023在第一方面。

14、的第二实施方案中，R1为00240025在第一方面的第三实施方案中，本申请提供式I化合物或其药用盐，其中L为0026在第一方面的第四实施方案中，本申请提供式I化合物或其药用盐，其中L为0027在第五实施方案中，R1选自0028和0029在第一方面的第六实施方案中，本申请提供式I化合物或其药用盐，其中L为0030在第七实施方案中，L选自和0031在第八实施方案中，R1为0032说明书CN103153986A4/177页70033在第一方面的第九实施方案中，本申请提供式I化合物或其药用盐，其中L为0034在第十实施方案中，R1为00350036在第一方面的第十一实施方案中，本申请提供式I化合物或其。

15、药用盐，其中L选自和其中各基团被画成其左端与苯并咪唑连接，其右端与R1连接。0037在第十二实施方案中，R1为00380039在第二方面，本申请提供式II化合物或其药用盐，00400041其中0042每个M各自独立地为0或1；说明书CN103153986A5/177页80043每个N各自独立地为0或1；0044L为键或选自0045和0046R1选自0047和0048每个R2独立选自烷基和卤素；0049每个R3独立选自氢和COR7；0050R4为烷基；0051R5和R6独立地为氢或卤素，或0052R5和R6与它们所连接的碳原子一起形成六元环或七元环，所述六元环或七元环任选含有一个选自氮和氧的杂原。

16、子，以及任选含有另外的双键；和0053每个R7独立选自烷氧基、烷基、芳基烷基、环烷基、杂环基、杂环基烷基、NRCRD烯基，和NRCRD烷基。0054在第三方面，本发明提供一种包含式I化合物或其可药用盐和可药用载体的组合物。在第三方面的第一实施方案中，此组合物进一步包含一种或两种具有抗HCV活性的另外化合物。在第三方面的第二实施方案中，所述其它化合物中的至少一种为干扰素或利巴韦林。在第三实施方案中，干扰素选自干扰素2B、PEG化的干扰素、同感干扰素、干扰素2A和淋巴细胞样干扰素。0055在第三方面的第四实施方案中，本发明提供一种组合物，其包含式I化合物或其可药用盐、可药用载体和一种或两种具有抗H。

17、CV活性的另外化合物，其中所述其它化合物中的至少一种选自白细胞介素2、白细胞介素6、白细胞介素12、可提高1型辅助T细胞应答发展的化合物、干扰RNA、反义RNA、咪喹莫特、利巴韦林、5单磷酸肌苷脱氢酶抑制剂、金刚烷胺和金刚乙胺。0056在第三方面的第五实施方案中，本发明提供一种组合物，其包含式I化合物或其可药用盐、可药用载体和一种或两种具有抗HCV活性的另外化合物，其中所述其它化合物中的至少一种对抑制靶标的功能以治疗HCV感染是有效的，所述靶标选自HCV金属蛋白酶、HCV丝氨酸蛋白酶、HCV聚合酶、HCV解螺旋酶、HCVNS4B蛋白质、HCV进入、HCV组装、HCV释出、HCVNS5A蛋白质和。

18、IMPDH。0057在第四方面，本发明提供一种治疗患者中的HCV感染的方法，其包括对该患者给药治疗上有效量的式I化合物或其可药用盐。在第四方面的第一实施方案中，此方法进一步包括在式I化合物或其可药用盐的给药之前、之后或同时给药一种或两种具有说明书CN103153986A6/177页9抗HCV活性的另外化合物。在第四方面的第二实施方案中，所述其它化合物中的至少一种为干扰素或利巴韦林。在第四方面的第三实施方案中，干扰素选自干扰素2B、PEG化的干扰素、同感干扰素、干扰素2A和淋巴细胞样干扰素。0058在第四方面的第四实施方案中，本发明提供一种治疗患者中的HCV感染的方法，其包括对该患者给药治疗上有。

19、效量的式I化合物或其可药用盐，和一种或两种具有抗HCV活性的另外化合物在式I化合物或其可药用盐的给药之前、之后或同时给药，其中所述其它化合物中的至少一种选自白细胞介素2、白细胞介素6、白细胞介素12、可提高1型辅助T细胞应答发展的化合物、干扰RNA、反义RNA、咪喹莫特、利巴韦林、5单磷酸肌苷脱氢酶抑制剂、金刚烷胺和金刚乙胺。0059在第四方面的第五实施方案中，本发明提供一种治疗患者中的HCV感染的方法，其包括对该患者给药治疗上有效量的式I化合物或其可药用盐，和一种或两种具有抗HCV活性的另外化合物在式I化合物或其可药用盐的给药之前、之后或同时给药，其中所述其它化合物中的至少一种对抑制靶标的功。

20、能以治疗HCV感染是有效的，所述靶标选自HCV金属蛋白酶、HCV丝氨酸蛋白酶、HCV聚合酶、HCV解螺旋酶、HCVNS4B蛋白质、HCV进入、HCV组装、HCV释出、HCVNS5A蛋白质和IMPDH。0060本发明的其它实施方案可包括本申请所述的实施方案和/或方面中的两种或更多种的合适组合。0061根据以下所提供的描述，本发明的其它实施方案和方面将是明显的。0062本发明的化合物也以互变异构体形式存在；因此本发明也包括所有互变异构形式。0063应将本申请对本发明的描述解释为与化学键的法则和原理一致。0064应该理解的是，本发明所包括的化合物为就用作药物而言具有适当稳定性的化合物。0065预期的。

21、是，在分子中特定位置处的任何取代基或变量例如R2和R4的定义与其在该分子中的其它位置处的定义无关。例如，当N为2时，两个R2基团中的每个可以相同或不同。0066将本说明书中引用的所有专利、专利申请和参考文献完整引入本申请作为参考。在不一致的情况下，以本发明包括定义为准。0067在本说明书中使用的以下术语具有下面指明的意义0068除非上下文明显指明，本申请使用的单数形式“一个A”、“一种AN”和“所述THE”包括复数形式。0069除非另有说明，本发明中的所有芳基、环烷基和杂环基可如在它们的相应定义中所各自描述的那样被取代。例如，芳基烷基中的芳基部分可如在术语“芳基”的定义中所述的那样被取代。00。

22、70本申请使用的术语“烷氧基”是指通过氧原子与母体分子部分相连的烷基。0071本申请使用的术语“烷氧基羰基”是指通过羰基与母体分子部分相连的烷氧基。0072本申请使用的术语“烷基”是指从含有一个至六个碳原子的直链或支链的饱和烃衍生的基团。在本发明的化合物中，当M为1，以及R4为烷基时，烷基可任选与相邻碳原子形成稠合的三或四元环，以提供下文所示结构之一说明书CN103153986A7/177页100073,或0074其中Z为1或2，W为0、1或2，以及R50为烷基。当W为2时，两个R50烷基可为相同或不同。0075本申请使用的术语“芳基”是指苯基或其中一个或两个环是苯基的二环稠合环系。二环稠合环。

23、系由苯基与四元至六元芳族或非芳族碳环稠合而构成。本发明的芳基可通过基团中的任何可取代的碳原子与母体分子部分相连。芳基的代表性实例包括但不限于茚满基、茚基、萘基、苯基和四氢萘基。本发明的芳基任选被一个、两个、三个、四个或五个取代基取代，所述取代基独立选自烷氧基、烷氧基烷基、烷氧基羰基、烷基、烷基羰基、第二芳基、芳基烷氧基、芳基烷基、芳基羰基、氰基、卤素、卤代烷氧基、卤代烷基、杂环基、杂环基烷基、杂环基羰基、羟基、羟基烷基、硝基、NRXRY、NRXRY烷基、氧代和POOR2，其中每个R独立选自氢和烷基；以及其中所述芳基烷基中的烷基部分和所述杂环基烷基中的烷基部分是未取代的，以及其中所述第二芳基、所。

24、述芳基烷基中的芳基部分、所述芳基羰基中的芳基部分、所述杂环基、所述杂环基烷基中的杂环基部分和所述杂环基羰基中的杂环基部分任选进一步被一个、两个或三个独立选自以下的取代基取代烷氧基、烷基、氰基、卤素、卤代烷氧基、卤代烷基和硝基。0076本申请使用的术语“芳基烷氧基”是指通过烷氧基与母体分子部分相连的芳基。0077本申请使用的术语“芳基烷基”是指被一个、两个或三个芳基取代的烷基。所述芳基烷基中的烷基部分任选进一步被一个或两个独立选自以下的额外基团取代烷氧基、烷基羰基氧基、卤素、卤代烷氧基、卤代烷基、杂环基、羟基和NRCRD，其中所述杂环基任选进一步被一个或两个独立选自以下的取代基取代烷氧基、烷基、。

25、未取代的芳基、未取代的芳基烷氧基、未取代的芳基烷氧基羰基、卤素、卤代烷氧基、卤代烷基、羟基、NRXRY和氧代。0078本申请使用的术语“羰基“，是指CO。0079本申请使用的术语“氰基烷基“，是指被一、二或三个氰基取代的烷基。0080本申请使用的术语“环烷基”是指具有三个至七个碳原子和0个杂原子的饱和的单环烃环系。环烷基的代表性实例包括但不限于环丙基、环丁基、环戊基和环己基。本发明的环烷基任选被一个、两个、三个、四个或五个取代基取代，所述取代基独立选自烷氧基、烷基、芳基、氰基、卤素、卤代烷氧基、卤代烷基、杂环基、羟基、羟基烷基、硝基和NRXRY，其中所述芳基和所述杂环基任选进一步被一个、两个或。

26、三个独立选自以下的取代基取代烷氧基、烷基、氰基、卤素、卤代烷氧基、卤代烷基、羟基和硝基。0081本申请使用的术语“环烷基烷基“，是指被一、二或三个环烷基取代的烷基。0082本申请使用的术语“环烷基氧基”是指通过氧原子与母体分子部分相连的环烷基。0083本申请使用的术语“环烷基氧基羰基“是指通过羰基与母分子部分相连的环烷基氧基。0084本申请使用的术语“卤代“和“卤素“是指F、BR、CL或I。说明书CN103153986A108/177页110085本申请使用的术语“杂环基”是指含有一个、两个、三个或四个独立选自氮、氧和硫的杂原子的四元、五元、六元或七元环。所述四元环具有0个双键，所述五元环具有。

27、0个至二个双键，以及所述六元环和所述七元环具有0个至三个双键。术语“杂环基”也包括二环基团，其中杂环基环与另一单环杂环基或四元至六元芳族或非芳族碳环稠合；以及桥接二环基团，诸如7氮杂二环221庚7基、2氮杂二环222辛2基和2氮杂二环222辛3基。本发明的杂环基可通过所述基团中的任何碳原子或氮原子与母体分子部分相连。杂环基的实例包括但不限于苯并噻吩基、呋喃基、咪唑基、二氢吲哚基、吲哚基、异喹啉基、异噻唑基、异噁唑基、吗啉基、噁唑基、哌嗪基、哌啶基、吡唑基、吡啶基、吡咯烷基、吡咯并吡啶基、吡咯基、喹啉基、噻唑基、噻吩基和硫吗啉基。本发明的杂环基任选被一个、两个、三个、四个或五个取代基取代，所述取。

28、代基独立选自烷氧基、烷氧基烷基、烷氧基羰基、烷基、烷基羰基、芳基、芳基烷基、芳基羰基、氰基、卤素、卤代烷氧基、卤代烷基、第二杂环基、杂环基烷基、杂环基羰基、羟基、羟基烷基、硝基、NRXRY、NRXRY烷基和氧代，其中所述芳基烷基中的烷基部分和所述杂环基烷基中的烷基部分是未取代的，以及其中所述芳基、所述芳基烷基中的芳基部分、所述芳基羰基中的芳基部分、所述第二杂环基、所述杂环基烷基中的杂环基部分和所述杂环基羰基中的杂环基部分任选进一步被一个、两个或三个独立选自以下的取代基取代烷氧基、烷基、氰基、卤素、卤代烷氧基、卤代烷基和硝基。0086本申请使用的术语“杂环基烷基”是指被一个、两个或三个杂环基取代。

29、的烷基。所述杂环基烷基中的烷基部分任选进一步被一个或两个独立选自以下的额外基团取代烷氧基、烷基羰基氧基、芳基、卤素、卤代烷氧基、卤代烷基、羟基和NRCRD，其中所述芳基任选进一步被一个或两个独立选自以下的取代基取代烷氧基、烷基、未取代的芳基、未取代的芳基烷氧基、未取代的芳基烷氧基羰基、卤素、卤代烷氧基、卤代烷基、羟基和NRXRY。0087本申请使用的术语“NRCRD”是指通过氮原子与母体分子部分相连的两个基团即RC和RD。RC和RD独立选自氢、烯基氧基羰基、烷氧基烷基羰基、烷氧基羰基、烷基、烷基羰基、烷基磺酰基、芳基、芳基烷氧基羰基、芳基烷基、芳基烷基羰基、芳基羰基、芳基氧基羰基、芳基磺酰基、。

30、环烷基、环烷基氧基羰基、环烷基磺酰基、甲酰基、卤代烷氧基羰基、杂环基、杂环基烷氧基羰基、杂环基烷基、杂环基烷基羰基、杂环基羰基、杂环基氧基羰基、羟基烷基羰基、NRERF烷基、NRERF烷基羰基、NRERF羰基、NRERF磺酰基、CNCNOR和CNCNNRXRY，其中R选自烷基和未取代的苯基，以及其中所述芳基烷基中的烷基部分、所述芳基烷基羰基中的烷基部分、所述杂环基烷基中的烷基部分和所述杂环基烷基羰基中的烷基部分任选进一步被一个NRERF基团取代；以及其中所述芳基、所述芳基烷氧基羰基中的芳基部分、所述芳基烷基中的芳基部分、所述芳基烷基羰基中的芳基部分、所述芳基羰基中的芳基部分、所述芳基氧基羰基中。

31、的芳基部分、所述芳基磺酰基中的芳基部分、所述杂环基、所述杂环基烷氧基羰基中的杂环基部分、所述杂环基烷基中的杂环基部分、所述杂环基烷基羰基中的杂环基部分、所述杂环基羰基中的杂环基部分和所述杂环基氧基羰基中的杂环基部分任选进一步被一个、两个或三个独立选自以下的取代基取代烷氧基、烷基、氰基、卤素、卤代烷氧基、卤代烷基和硝基。0088本申请使用的术语“NRCRD烯基“，是指0089说明书CN103153986A119/177页120090其中RC和RD如本申请所定义，以及各RQ独立为氢或C13烷基。0091本申请使用的术语“NRCRD烷基”是指被一个、两个或三个NRCRD基团取代的烷基。所述NRCRD。

32、烷基中的烷基部分任选进一步被一个或两个选自以下的额外基团取代烷氧基、烷氧基烷基羰基、烷氧基羰基、烷基硫基、芳基烷氧基羰基、羧基、环烷基、杂环基、杂环基羰基、羟基和NRERF羰基；其中所述杂环基任选进一步被一个、两个、三个、四个或五个取代基取代，所述取代基独立选自烷氧基、烷基、氰基、卤素、卤代烷氧基、卤代烷基和硝基。0092本申请使用的术语“NRERF”是指通过氮原子与母体分子部分相连的两个基团即RE和RF。RE和RF独立选自氢、烷基、未取代的芳基、未取代的芳基烷基、未取代的环烷基、未取代的环烷基烷基、未取代的杂环基、未取代的杂环基烷基、NRXRY烷基和NRXRY羰基。0093本申请使用的术语“。

33、NRXRY”是指通过氮原子与母体分子部分相连的两个基团即RX和RY。RX和RY独立选自氢、烷氧基羰基、烷基、烷基羰基、未取代的芳基、未取代的芳基烷氧基羰基、未取代的芳基烷基、未取代的环烷基、未取代的杂环基和NRXRY羰基，其中RX和RY独立选自氢和烷基。0094在本发明的化合物中存在不对称中心。这些中心通过符号“R”或“S”来指定，这取决于手性碳原子上的取代基的构型。应该理解的是，本发明包括所有立体化学异构形式或其混合物，所述立体化学异构形式或其混合物具有抑制NS5A的能力。化合物的单独立体异构体可从含有手性中心的市售原料来合成制备，或如下制备制备对映异构产物的混合物，接着进行分离例如转化为非。

34、对映异构体的混合物，接着进行分离、重结晶或色谱技术，或在手性色谱柱上直接分离对映异构体。具有具体立体化学的起始化合物要么是市售的，要么是可通过本领域已知的技术来制备和拆分的。0095本发明的化合物还可按不同的稳定构象形式存在，这些形式是可分离的。由于围绕不对称单键的受限旋转例如因为位阻或环张力而导致的扭转不对称TORSIONALASYMMETRY可使不同的构象异构体得以分离。本发明包括这些化合物的每种构象异构体及其混合物。0096术语“本发明的化合物”以及等效表达方式意在包括式I化合物以及其药用对映异构体、非对映异构体和盐。类似地，在上下文允许的情况下，当提及中间体时意在包括其盐。0097本发。

35、明意在包括出现在本发明化合物中的原子的所有同位素。同位素包括具有相同原子数但质量数不同的那些原子。例如但不限于此，氢的同位素包括氘和氚。碳的同位素包括13C和14C。经同位素标记的本发明化合物通常可通过本领域技术人员已知的常规技术或通过与本申请所述相似的方法使用经同位素标记的适当试剂代替未经标记的所用相应试剂来制备。上述化合物可具有多种潜在用途，例如在确定生物学活性中作为标准品和试剂。在同位素是稳定的情况下，上述化合物可具有使生物学性质、药理学性质或药物代谢说明书CN103153986A1210/177页13动力学性质得以有利改变的潜力。0098本发明的化合物可按药用盐的形式存在。本申请使用的。

36、术语“药用盐”表示本发明化合物的盐形式或两性离子形式，这些形式是水溶性或水可分散性的或是油溶性或油可分散性的，这些形式在合理的医药判断范围内适用于与患者的组织接触而不引起过度的毒性、刺激性、变态反应或其它问题或并发症，这与合理的益处/风险比例相称，并且这些形式就其预期的用途而言是有效的。所述盐可在化合物的最终分离和纯化期间制备，或可通过使合适的氮原子与合适的酸反应来单独制备。代表性的酸加成盐包括乙酸盐、己二酸盐、海藻酸盐、枸橼酸盐、天冬氨酸盐、苯甲酸盐、苯磺酸盐、硫酸氢盐、丁酸盐、樟脑酸盐、樟脑磺酸盐；二葡糖酸盐、二氢溴酸盐、二盐酸盐、二氢碘酸盐、甘油磷酸盐、半硫酸盐、庚酸盐、己酸盐、甲酸盐、。

37、富马酸盐、盐酸盐、氢溴酸盐、氢碘酸盐、2羟基乙磺酸盐、乳酸盐、马来酸盐、均三甲基苯磺酸盐、甲磺酸盐、萘磺酸盐、烟酸盐、萘2磺酸盐、草酸盐、棕榈酸盐PALMOATE、果胶酸盐PECTINATE、过硫酸盐、3苯基丙酸盐、苦味酸盐、特戊酸盐、丙酸盐、琥珀酸盐、酒石酸盐、三氯乙酸盐、三氟乙酸盐、磷酸盐、谷氨酸盐、碳酸氢盐、对甲苯磺酸盐和十一烷酸盐等。可用于形成药用加成盐的酸的实例包括无机酸如盐酸、氢溴酸、硫酸和磷酸以及有机酸如草酸、马来酸、琥珀酸和枸橼酸。0099碱加成盐可在化合物的最终分离和纯化期间如下制备使羧基与合适的碱如金属阳离子的氢氧化物、碳酸盐或碳酸氢盐反应，或使羧基与氨、有机伯胺、有机仲胺。

38、或有机叔胺反应。药用盐中的阳离子包括锂离子、钠离子、钾离子、钙离子、镁离子和铝离子以及无毒的季胺阳离子如铵根离子、四甲基铵根离子、四乙基铵根离子、甲胺季胺阳离子、二甲胺季胺阳离子、三甲胺季胺阳离子、三乙胺季胺阳离子、二乙胺季胺阳离子、乙胺季胺阳离子、三丁胺季胺阳离子、吡啶季胺阳离子、N,N二甲基苯胺季胺阳离子、N甲基哌啶季胺阳离子、N甲基吗啉季胺阳离子、二环己胺季胺阳离子、普鲁卡因PROCAINE季胺阳离子、二苄胺季胺阳离子、N,N二苄基苯乙胺季胺阳离子和N,N二苄基乙二胺季胺阳离子。可用于形成碱加成盐的其它代表性有机胺包括乙二胺、乙醇胺、二乙醇胺、哌啶和哌嗪。0100当可将治疗有效量的式I化。

39、合物及其药用盐按化学物质原形式RAWCHEMICAL给药而用于治疗时，可按药物组合物的形式提供活性成分。因此，本发明还提供了药物组合物，其包含治疗有效量的式I化合物或其药用盐以及一种或多种药用载体、稀释剂或赋形剂。本申请使用的术语“治疗有效量”是指各种活性组分的总量，所述总量足以显示出有意义的患者益处例如病毒载量的减少。所述术语当用于单独给药的一种活性成分时是指所述成分的单独量。所述术语当用于组合时是指引起治疗效果的各活性成分的组合量而不论是组合给药、连续给药或同时给药。式I化合物及其药用盐如上文所述。载体、稀释剂或赋形剂就与制剂中的其它成分相容而言必须是可接受的，并且就其接受者而言必须是没有。

40、害处的。本发明的另一个方面还提供了制备药物制剂的方法，其包括将式I化合物或其药用盐与一种或多种药用载体、稀释剂或赋形剂混合。本申请使用的术语“药用”是指这样的化合物、材料、组合物和/或剂型，它们在合理的医药判断范围内适用于与患者的组织接触而不引起过度的毒性、刺激性、变态反应或其它问题或并发症，这与合理的益处/风险比例相称，并且就其预期的用途而言是有效的。0101药物制剂可按单位剂量形式提供，其在每单位剂量中含有预定量的活性成分。本发明化合物的以下剂量水平即约001至约250毫克/千克体重“MG/KG”/日优选约说明书CN103153986A1311/177页14005至约100MG/KG体重/。

41、日在对HCV介导的疾病进行预防和治疗的单一疗法中是典型的。通常，本发明的药物组合物可每日给药约1至约5次，或可选择地，可按连续输注的形式给药。上述给药可用作慢性疗法或急性疗法。可与载体物质组合以制备单一剂型的活性成分的量将基于以下因素而变化所治疗的病症、所述病症的严重程度、给药时间、给药途径、所用化合物的排泄速率、治疗的持续时间以及患者的年龄、性别、体重和状态。优选的单位剂量制剂是这样的单位剂量制剂，所述制剂含有本申请上文所述的日剂量或亚日剂量或其适当分数的活性成分。治疗可开始于基本上小于化合物最佳剂量的小剂量。此后，剂量以小的增幅增加，直到实现对病情的最佳效果。一般而言，化合物以如下的浓度水。

42、平给药是最期望的，所述水平通常可提供有效的抗病毒结果而不引起任何有害或有毒的副作用。0102当本发明的组合物包含本发明的化合物和一种或多种额外的治疗药物或预防药物的组合时，所述化合物和所述额外的药物通常都以如下的剂量水平存在，所述剂量水平为单一疗法给药方案中所通常给药的剂量的约10至150，更优选为约10至80。0103可对药物制剂进行调整以通过任何适当的途径来给药，所述途径为例如口服包括口腔或舌下途径、直肠途径、经鼻途径、局部包括口腔、舌下或透皮途径、阴道途径或肠胃外包括皮下注射或输注、皮内注射或输注、肌内注射或输注、关节内注射或输注、滑膜内注射或输注、胸骨内注射或输注、鞘内注射或输注、病灶。

43、内注射或输注、静脉内注射或输注或皮内注射或输注途径。所述制剂可通过药学领域已知的任何方法来制备，所述方法为例如将活性成分与载体或赋形剂混合。口服给药或注射给药是优选的。0104针对口服给药而调整的药物制剂可按以下形式提供离散的单位形式如胶囊剂或片剂；粉末剂或颗粒剂；在含水或不含水液体中的溶液剂或混悬剂；可食用的泡沫剂FOAM或搅打剂WHIP；或水包油型液态乳剂或油包水型乳剂。0105例如，就以片剂或胶囊剂形式进行的口服给药而言，可将活性药物组分与口服的无毒的药用惰性载体如乙醇、甘油、水等混合。粉末剂如下制备将化合物研磨至合适的微细尺寸，然后与经类似研磨的药物载体如可食用的碳水化合物如淀粉或甘露。

44、醇混合。矫味剂、防腐剂、分散剂和着色剂也可存在。0106胶囊剂如下制备如上所述制备粉末混合物，然后填充到成形的明胶壳中。可将助流剂和润滑剂如胶体二氧化硅、滑石、硬脂酸镁、硬脂酸钙或固体聚乙二醇加到粉末混合物中，然后进行填充操作。也可加入崩解剂或增溶剂如琼脂、碳酸钙或碳酸钠以改善胶囊剂被摄入时的药物利用度。0107此外，当期望或需要时，也可将合适的粘合剂、润滑剂、崩解剂和着色剂掺到混合物中。合适的粘合剂包括淀粉、明胶、天然糖如葡萄糖或乳糖、玉米甜味剂、天然胶和合成胶如阿拉伯胶、西黄蓍胶或海藻酸钠、羧甲基纤维素、聚乙二醇等。在这些剂型中使用的润滑剂包括油酸钠、氯化钠等。崩解剂包括但不限于淀粉、甲基。

45、纤维素、琼脂、膨润土、黄原胶等。片剂如下配制例如制备粉末混合物，制粒或预压，加入润滑剂和崩解剂，然后压制成片剂。粉末混合物如下制备将经合适研磨的化合物与上述稀释剂或基质以及任选的粘合剂如羧甲基纤维素、海藻酸盐、凝胶或聚乙烯吡咯烷酮、溶解延迟剂SOLUTIONRETARDANT如石蜡、吸收促进剂如季胺盐和/或吸收剂如膨润土、高岭土或磷酸二钙混合。粉末混合物可通过以下方法粒化用粘合剂如糖浆、淀粉糊、阿拉伯胶液、纤维素溶液或聚合物溶液湿润，然后挤压过筛。作为可选择的制粒方法，粉末混合物可通过压片说明书CN103153986A1412/177页15机来处理，结果是不完全成形的预压片破裂成颗粒。可通过加。

46、入硬脂酸、硬脂酸盐、滑石或矿物油来对颗粒进行润滑以防止与片剂成形模粘连。然后将经润滑的混合物压制成片剂。本发明的化合物也可与自由流动的惰性载体组合，并在不经历制粒或预压步骤的情况下直接压制成片剂。可提供透明的或不透明的保护性包衣，所述包衣由以下包衣层构成由虫胶形成的隔离包衣层、由糖或聚合物形成的包衣层和由蜡形成的光亮包衣层。可将染料加到这些包衣中以区分不同的单位剂量。0108口服流体如溶液剂、糖浆剂和酏剂可按剂量单位形式来制备，从而使给定的量含有预定量的化合物。糖浆剂可通过将化合物溶于经合适矫味的水溶液中来制备，而酏剂通过使用无毒的媒介物来制备。也可加入增溶剂和乳化剂如乙氧基化的异硬脂醇和聚氧。

47、乙烯山梨醇醚、防腐剂、矫味添加剂如薄荷油、天然甜味剂、糖精或其它人造甜味剂等。0109当适当时，可对用于口服给药的剂量单位制剂进行微囊化。也可例如通过将颗粒物质用聚合物、蜡等包衣或包埋到聚合物、蜡等中来制备制剂以延长或维持释放。0110式I化合物及其药用盐也可按脂质体递送系统的形式给药，所述脂质体递送系统为例如小单层脂囊SMALLUNILAMELLARVESICLE、大单层脂囊LARGEUNILAMELLARVESICLE和多层脂囊MULTILAMELLARVESICLE。脂质体可由各种磷脂如胆固醇、硬脂胺或磷脂酰胆碱来形成。0111式I化合物及其药用盐也可通过使用单克隆抗体作为与化合物分子偶。

48、联的单独载体来递送。化合物也可与作为靶向药物载体的可溶性聚合物偶联。这些聚合物可包括聚乙烯吡咯烷酮、吡喃共聚物、聚羟基丙基甲基丙烯酸酰胺苯酚POLYHYDROXYPROPYLMETHACRYLAMIDEPHENOL、聚羟基乙基天冬氨酸酰胺苯酚POLYHYDROXYETHYLASPARTAMIDEPHENOL或取代有棕榈酰基的聚氧化乙烯聚赖氨酸POLYETHYLENEOXIDEPOLYLYSINESUBSTITUTEDWITHPALITOYLRESIDUE。此外，化合物可与可用于实现药物的控制释放的一类生物可降解的聚合物偶联，这类聚合物为例如聚乳酸、聚己内酯、聚羟基丁酸、聚原酸酯、聚缩醛、聚二氢。

49、吡喃、聚氰基丙烯酸酯和水凝胶的交联或两亲性嵌段共聚物。0112针对透皮给药而调整的药物制剂可按离散贴剂的形式提供，其意在与接受者的表皮紧密接触且保持延长的时段。例如，如PHARMACEUTICALRESEARCH1986,36,318中所一般描述，活性成分可通过离子电渗法IONTOPHORESIS从贴剂递送。0113可将针对局部给药而调整的药物制剂配制成软膏剂、乳膏剂、混悬剂、洗液、粉末剂、溶液剂、糊剂、凝胶剂、喷雾剂、气雾剂或油剂。0114针对直肠给药而调整的药物制剂可按栓剂或灌肠剂的形式提供。0115针对经鼻给药而调整的药物制剂其中载体为固体包括粒度范围为例如20微米至500微米的一系列粉末，其按照吸入的方式来给药，即从接近鼻的装有粉末的容器中经由鼻道而快速吸入。用于以鼻喷雾剂或滴鼻剂的形式给药的合适制剂其中载体为液体包括活性成分的含水溶液或油溶液。0116针对吸入给药而调整的药物制剂包括微细颗粒的粉尘或气雾，其可通过各种类型的定量加压气雾器、喷雾器或吹入器来产生。0117针对阴道给药而调整的药物制剂可按阴道栓剂、棉塞剂、乳膏剂、凝胶剂、糊剂、泡沫剂或喷雾剂的形式提供。0118针对肠胃外给药而调整的药物制剂包括含水和不含水的无菌注射溶液剂，其可说明书CN103153986A1513/177页16含有抗氧化剂、缓冲剂、抑。

摘要
申请专利号：	CN201080069468.6	申请日：	2010.08.04
公开号：	CN103153986A	公开日：	2013.06.12
当前法律状态：	授权	有效性：	有权
法律详情：	授权\|\|\|实质审查的生效IPC(主分类):C07D 403/14申请日:20100804\|\|\|公开
IPC分类号：	C07D403/14; C07D405/14; A61K31/4184; A61P31/12	主分类号：	C07D403/14
申请人：	百时美施贵宝公司
发明人：	J.L.罗米恩
地址：	美国新泽西州
优先权：
专利代理机构：	北京市柳沈律师事务所 11105	代理人：	陈桉
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内容摘要

本申请涉及用于治疗丙型肝炎病毒(HCV)感染的化合物、组合物和方法。本申请还披露了含有这种化合物的药物组合物和使用在治疗HCV感染中使用这些化合物的方法。

权利要求书

化合物或其药用盐，所述化合物选自：
(2‑((2S,5S)‑2‑(7‑((2‑((2S,5S)‑1‑((2S)‑2‑(4,4‑二氟环己基)‑2‑((甲氧基羰基)氨基)乙酰基)‑5‑甲基‑2‑吡咯烷基)‑1H‑苯并咪唑‑5‑基)乙炔基)‑1H‑萘并[1,2‑d]咪唑‑2‑基)‑5‑甲基‑1‑吡咯烷基)‑2‑氧代‑1‑(四氢‑2H‑吡喃‑4‑基)乙基)氨基甲酸甲酯；
((1S)‑1‑(((2S,5S)‑2‑(5‑((2‑((2S,5S)‑1‑(((甲氧基羰基)氨基)(四氢‑2H‑吡喃‑4‑基)乙酰基)‑5‑甲基‑2‑吡咯烷基)‑1H‑萘并[1,2‑d]咪唑‑7‑基)乙炔基)‑1H‑苯并咪唑‑2‑基)‑5‑甲基‑1‑吡咯烷基)羰基)‑2‑甲基丙基)氨基甲酸甲酯；
((1S)‑1‑(((2S,4S)‑2‑(5‑((2‑((2S,4S)‑1‑((2S)‑2‑((甲氧基羰基)氨基)‑3‑甲基丁酰基)‑4‑甲基‑2‑吡咯烷基)‑1H‑萘并[1,2‑d]咪唑‑7‑基)乙炔基)‑1H‑苯并咪唑‑2‑基)‑4‑甲基‑1‑吡咯烷基)羰基)‑2‑甲基丙基)氨基甲酸甲酯；
((1S)‑2‑((2S,4S)‑2‑(7‑((2‑((2S,4S)‑1‑((2S)‑2‑((甲氧基羰基)氨基)‑2‑(四氢‑2H‑吡喃‑4‑基)乙酰基)‑4‑甲基‑2‑吡咯烷基)‑1H‑苯并咪唑‑5‑基)乙炔基)‑1H‑萘并[1,2‑d]咪唑‑2‑基)‑4‑甲基‑1‑吡咯烷基)‑2‑氧代‑1‑(四氢‑2H‑吡喃‑4‑基)乙基)氨基甲酸甲酯；
((1S)‑1‑(((3S,5R)‑3‑(5‑((2‑((3S,5R)‑2‑((2S)‑2‑((甲氧基羰基)氨基)‑3‑甲基丁酰基)‑5‑甲基‑2‑氮杂二环[3.1.0]己‑3‑基)‑1H‑萘并[1,2‑d]咪唑‑7‑基)乙炔基)‑1H‑苯并咪唑‑2‑基)‑5‑甲基‑2‑氮杂二环[3.1.0]己‑2‑基)羰基)‑2‑甲基丙基)氨基甲酸甲酯；和
((1S)‑2‑((3S,5R)‑3‑(7‑((2‑((3S,5R)‑2‑((2S)‑2‑((甲氧基羰基)氨基)‑2‑(四氢‑2H‑吡喃‑4‑基)乙酰基)‑5‑甲基‑2‑氮杂二环[3.1.0]己‑3‑基)‑1H‑苯并咪唑‑5‑基)乙炔基)‑1H‑萘并[1,2‑d]咪唑‑2‑基)‑5‑甲基‑2‑氮杂二环[3.1.0]己‑2‑基)‑2‑氧代‑1‑(四氢‑2H‑吡喃‑4‑基)乙基)氨基甲酸甲酯。
组合物，其包含权利要求1的化合物或其药用盐和药用载体。
权利要求2的组合物，其还包含一种或两种具有抗‑HCV活性的另外化合物。
权利要求3的组合物，其中所述另外化合物中的至少一种为干扰素或利巴韦林。
权利要求4的组合物，其中所述干扰素选自干扰素α2B、PEG化的干扰素α、同感干扰素、干扰素α2A和淋巴细胞样干扰素τ。
权利要求3的组合物，其中所述另外化合物中的至少一种选自白细胞介素2、白细胞介素6、白细胞介素12、可提高1型辅助T细胞应答发展的化合物、干扰RNA、反义RNA、咪喹莫特、利巴韦林、5’‑单磷酸肌苷脱氢酶抑制剂、金刚烷胺和金刚乙胺。
权利要求3的组合物，其中所述另外化合物中的至少一种对抑制靶标的功能以治疗HCV感染是有效的，所述靶标选自HCV金属蛋白酶、HCV丝氨酸蛋白酶、HCV聚合酶、HCV解螺旋酶、HCV NS4B蛋白质、HCV进入、HCV组装、HCV释出、HCV NS5A蛋白质和IMPDH。
治疗患者中的HCV感染的方法，其包括向所述患者给药治疗有效量的权利要求1的化合物或其药用盐。
权利要求8的方法，其还包括在给药权利要求1的化合物或其药用盐之前、之后或同时给药一种或两种具有抗‑HCV活性的另外化合物。
权利要求9的方法，其中所述另外化合物中的至少一种为干扰素或利巴韦林。
权利要求10的方法，其中所述干扰素选自干扰素α2B、PEG化的干扰素α、同感干扰素、干扰素α2A和淋巴细胞样干扰素τ。
权利要求9的方法，其中所述另外化合物中的至少一种选自白细胞介素2、白细胞介素6、白细胞介素12、可提高1型辅助T细胞应答发展的化合物、干扰RNA、反义RNA、咪喹莫特、利巴韦林、5’‑单磷酸肌苷脱氢酶抑制剂、金刚烷胺和金刚乙胺。
权利要求9的方法，其中所述另外化合物中的至少一种对抑制靶标的功能以治疗HCV感染是有效的，所述靶标选自HCV金属蛋白酶、HCV丝氨酸蛋白酶、HCV聚合酶、HCV解螺旋酶、HCV NS4B蛋白质、HCV进入、HCV组装、HCV释出、HCV NS5A蛋白质和IMPDH。

说明书

丙型肝炎病毒抑制剂
技术领域
本发明一般性地涉及抗病毒化合物，以及更具体地涉及可抑制由丙型肝炎病毒(HCV)编码的NS5A蛋白质功能的化合物、包含这种化合物的组合物，以及抑制NS5A蛋白质功能的方法。
背景技术
HCV是主要的人类病原体，其在世界范围内感染约一亿七千万人—大致是1型人类免疫缺陷病毒感染数量的5倍。这些HCV感染个体中相当大的部分发展成严重的进行性肝脏疾病，包括肝硬化和肝细胞癌。
HCV的现行护理标准(其采用PEG化的干扰素(pegylated‑interferon)和利巴韦林(ribavirin)的组合)在实现持续病毒响应上具有非最佳成功率，并且造成许多副作用。因此，明显和迫切地需要开发用于治疗HCV感染的有效疗法。
HCV是正链RNA病毒。基于对所推断氨基酸序列进行的比较和5’‑非翻译区的广泛相似性，已经把HCV归类为黄病毒科(Flaviviridae family)中独立的属。黄病毒科的所有成员都具有包封的病毒体(enveloped virion)，其含有的正链RNA基因组通过翻译单一的连续的可读框而编码所有已知的病毒专属性蛋白质。
在整个HCV基因组的核苷酸和所编码的氨基酸序列中发现了相当程度的异质性，这是由于所编码的RNA依赖性RNA聚合酶(其缺乏校读能力)的高误差率所致。已经表征了至少6种主要的基因型，并且已经描述了多于50种的亚型(分布在全世界)。HCV遗传异质性的临床意义已证实在单一疗法治疗期间出现突变的倾向，因此需要其它治疗选项供使用。基因型对于发病机制和疗法的可能调节剂作用仍然难以捉摸。
单链HCV RNA基因组的长度大约是9500个核苷酸，并且具有单一的可读框(ORF)，其编码由大约3000个氨基酸组成的单一的大多蛋白。在被感染的细胞中，这种多蛋白在多个位点被细胞蛋白酶和病毒蛋白酶裂解，从而产生结构蛋白和非结构(NS)蛋白。就HCV来说，成熟的非结构蛋白(NS2、NS3、NS4A、NS4B、NS5A和NS5B)的产生受到两种病毒蛋白酶的影响。认为第一种病毒蛋白酶是金属蛋白酶，并且在NS2‑NS3接合处进行裂解；第二种病毒蛋白酶是包含在NS3的N‑末端区域内的丝氨酸蛋白酶(也称为NS3蛋白酶)，并且介导NS3下游的所有随后裂解，既在NS3‑NS4A裂解位点以顺式进行裂解，又在其余的NS4A‑NS4B、NS4B‑NS5A、NS5A‑NS5B位点以反式进行裂解。NS4A蛋白似乎具有多种功能，通过充当NS3蛋白酶的辅因子，并且帮助NS3和其它病毒复制酶组分的膜定位。NS3‑NS4A络合物的形成对于适当的蛋白酶活性(导致裂解事件的蛋白水解效率提高)是必需的。NS3蛋白还显示出三磷酸核苷酶和RNA解螺旋酶活性。NS5B(本文也称为HCV聚合酶)是依赖于RNA的RNA聚合酶，在用其它HCV蛋白质(包括NS5A)于复制酶络合物中复制HCV中涉及所述酶。
选择性抑制HCV病毒复制的可用于治疗HCV感染患者的化合物是期望的。具体而言，期望可有效抑制NS5A蛋白功能的化合物。HCV NS5A蛋白描述在例如下列文献中：S.L.Tan,et al.,Virology,284:1‑12(2001);K.‑J.Park,et al.,J.Biol.Chem.,30711‑30718(2003);T.L.Tellinghuisen,et al.,Nature,435,374(2005);R.A.Love,et al.,J.Virol,83,4395(2009);N.Appel,et al.,J.Biol.Chem.,281,9833(2006);L.Huang,J.Biol.Chem.,280,36417(2005);C.Rice,et al.,WO2006093867。
发明内容
在第一方面，本申请提供式(I)化合物或其药用盐，

其中
每个m各自独立地为0或1；
每个n各自独立地为0或1；
L为键或选自和其中各基团被画成其左端与苯并咪唑连接，其右端与R¹连接；
R¹选自

每个R²独立选自烷基和卤素；
每个R³独立选自氢和‑C(O)R⁷；
R⁴为烷基；
R⁵和R⁶独立选自氢、烷基、氰基烷基和卤素，或
R⁵和R⁶与它们所连接的碳原子一起形成六元环或七元环，所述六元环或七元环任选含有一个选自氮和氧的杂原子，以及任选含有另外的双键；和
每个R⁷独立选自烷氧基、烷基、芳基烷氧基、芳基烷基、环烷基、(环烷基)烷基、杂环基、杂环基烷基、(NR^cR^d)烯基，和(NR^cR^d)烷基。
在第一方面的第一实施方案中，本申请提供式(I)化合物或其药用盐，其中L为键。
在第一方面的第二实施方案中，R¹为

在第一方面的第三实施方案中，本申请提供式(I)化合物或其药用盐，其中L为
在第一方面的第四实施方案中，本申请提供式(I)化合物或其药用盐，其中L为
在第五实施方案中，R¹选自
和
在第一方面的第六实施方案中，本申请提供式(I)化合物或其药用盐，其中L为
在第七实施方案中，L选自和
在第八实施方案中，R¹为

在第一方面的第九实施方案中，本申请提供式(I)化合物或其药用盐，其中L为
在第十实施方案中，R¹为

在第一方面的第十一实施方案中，本申请提供式(I)化合物或其药用盐，其中L选自和其中各基团被画成其左端与苯并咪唑连接，其右端与R¹连接。
在第十二实施方案中，R¹为

在第二方面，本申请提供式(II)化合物或其药用盐，

其中
每个m各自独立地为0或1；
每个n各自独立地为0或1；
L为键或选自
和
R¹选自
和
每个R²独立选自烷基和卤素；
每个R³独立选自氢和‑C(O)R⁷；
R⁴为烷基；
R⁵和R⁶独立地为氢或卤素，或
R⁵和R⁶与它们所连接的碳原子一起形成六元环或七元环，所述六元环或七元环任选含有一个选自氮和氧的杂原子，以及任选含有另外的双键；和
每个R⁷独立选自烷氧基、烷基、芳基烷基、环烷基、杂环基、杂环基烷基、(NR^cR^d)烯基，和(NR^cR^d)烷基。
在第三方面，本发明提供一种包含式(I)化合物或其可药用盐和可药用载体的组合物。在第三方面的第一实施方案中，此组合物进一步包含一种或两种具有抗‑HCV活性的另外化合物。在第三方面的第二实施方案中，所述其它化合物中的至少一种为干扰素或利巴韦林。在第三实施方案中，干扰素选自干扰素α2B、PEG化的干扰素α、同感干扰素、干扰素α2A和淋巴细胞样干扰素τ。
在第三方面的第四实施方案中，本发明提供一种组合物，其包含式(I)化合物或其可药用盐、可药用载体和一种或两种具有抗‑HCV活性的另外化合物，其中所述其它化合物中的至少一种选自白细胞介素2、白细胞介素6、白细胞介素12、可提高1型辅助T细胞应答发展的化合物、干扰RNA、反义RNA、咪喹莫特、利巴韦林、5’‑单磷酸肌苷脱氢酶抑制剂、金刚烷胺和金刚乙胺。
在第三方面的第五实施方案中，本发明提供一种组合物，其包含式(I)化合物或其可药用盐、可药用载体和一种或两种具有抗‑HCV活性的另外化合物，其中所述其它化合物中的至少一种对抑制靶标的功能以治疗HCV感染是有效的，所述靶标选自HCV金属蛋白酶、HCV丝氨酸蛋白酶、HCV聚合酶、HCV解螺旋酶、HCV NS4B蛋白质、HCV进入、HCV组装、HCV释出、HCV NS5A蛋白质和IMPDH。
在第四方面，本发明提供一种治疗患者中的HCV感染的方法，其包括对该患者给药治疗上有效量的式(I)化合物或其可药用盐。在第四方面的第一实施方案中，此方法进一步包括在式(I)化合物或其可药用盐的给药之前、之后或同时给药一种或两种具有抗‑HCV活性的另外化合物。在第四方面的第二实施方案中，所述其它化合物中的至少一种为干扰素或利巴韦林。在第四方面的第三实施方案中，干扰素选自干扰素α2B、PEG化的干扰素α、同感干扰素、干扰素α2A和淋巴细胞样干扰素τ。
在第四方面的第四实施方案中，本发明提供一种治疗患者中的HCV感染的方法，其包括对该患者给药治疗上有效量的式(I)化合物或其可药用盐，和一种或两种具有抗‑HCV活性的另外化合物(在式(I)化合物或其可药用盐的给药之前、之后或同时给药)，其中所述其它化合物中的至少一种选自白细胞介素2、白细胞介素6、白细胞介素12、可提高1型辅助T细胞应答发展的化合物、干扰RNA、反义RNA、咪喹莫特、利巴韦林、5’‑单磷酸肌苷脱氢酶抑制剂、金刚烷胺和金刚乙胺。
在第四方面的第五实施方案中，本发明提供一种治疗患者中的HCV感染的方法，其包括对该患者给药治疗上有效量的式(I)化合物或其可药用盐，和一种或两种具有抗‑HCV活性的另外化合物(在式(I)化合物或其可药用盐的给药之前、之后或同时给药)，其中所述其它化合物中的至少一种对抑制靶标的功能以治疗HCV感染是有效的，所述靶标选自HCV金属蛋白酶、HCV丝氨酸蛋白酶、HCV聚合酶、HCV解螺旋酶、HCV NS4B蛋白质、HCV进入、HCV组装、HCV释出、HCV NS5A蛋白质和IMPDH。
本发明的其它实施方案可包括本申请所述的实施方案和/或方面中的两种或更多种的合适组合。
根据以下所提供的描述，本发明的其它实施方案和方面将是明显的。
本发明的化合物也以互变异构体形式存在；因此本发明也包括所有互变异构形式。
应将本申请对本发明的描述解释为与化学键的法则和原理一致。
应该理解的是，本发明所包括的化合物为就用作药物而言具有适当稳定性的化合物。
预期的是，在分子中特定位置处的任何取代基或变量(例如R²和R⁴)的定义与其在该分子中的其它位置处的定义无关。例如，当n为2时，两个R²基团中的每个可以相同或不同。
将本说明书中引用的所有专利、专利申请和参考文献完整引入本申请作为参考。在不一致的情况下，以本发明(包括定义)为准。
在本说明书中使用的以下术语具有下面指明的意义：
除非上下文明显指明，本申请使用的单数形式“一个(a)”、“一种(an)”和“所述(the)”包括复数形式。
除非另有说明，本发明中的所有芳基、环烷基和杂环基可如在它们的相应定义中所各自描述的那样被取代。例如，芳基烷基中的芳基部分可如在术语“芳基”的定义中所述的那样被取代。
本申请使用的术语“烷氧基”是指通过氧原子与母体分子部分相连的烷基。
本申请使用的术语“烷氧基羰基”是指通过羰基与母体分子部分相连的烷氧基。
本申请使用的术语“烷基”是指从含有一个至六个碳原子的直链或支链的饱和烃衍生的基团。在本发明的化合物中，当m为1，以及R⁴为烷基时，烷基可任选与相邻碳原子形成稠合的三‑或四‑元环，以提供下文所示结构之一：
,或
其中z为1或2，w为0、1或2，以及R⁵⁰为烷基。当w为2时，两个R⁵⁰烷基可为相同或不同。
本申请使用的术语“芳基”是指苯基或其中一个或两个环是苯基的二环稠合环系。二环稠合环系由苯基与四元至六元芳族或非芳族碳环稠合而构成。本发明的芳基可通过基团中的任何可取代的碳原子与母体分子部分相连。芳基的代表性实例包括但不限于茚满基、茚基、萘基、苯基和四氢萘基。本发明的芳基任选被一个、两个、三个、四个或五个取代基取代，所述取代基独立选自烷氧基、烷氧基烷基、烷氧基羰基、烷基、烷基羰基、第二芳基、芳基烷氧基、芳基烷基、芳基羰基、氰基、卤素、卤代烷氧基、卤代烷基、杂环基、杂环基烷基、杂环基羰基、羟基、羟基烷基、硝基、‑NR^xR^y、(NR^xR^y)烷基、氧代和‑P(O)OR₂，其中每个R独立选自氢和烷基；以及其中所述芳基烷基中的烷基部分和所述杂环基烷基中的烷基部分是未取代的，以及其中所述第二芳基、所述芳基烷基中的芳基部分、所述芳基羰基中的芳基部分、所述杂环基、所述杂环基烷基中的杂环基部分和所述杂环基羰基中的杂环基部分任选进一步被一个、两个或三个独立选自以下的取代基取代：烷氧基、烷基、氰基、卤素、卤代烷氧基、卤代烷基和硝基。
本申请使用的术语“芳基烷氧基”是指通过烷氧基与母体分子部分相连的芳基。
本申请使用的术语“芳基烷基”是指被一个、两个或三个芳基取代的烷基。所述芳基烷基中的烷基部分任选进一步被一个或两个独立选自以下的额外基团取代：烷氧基、烷基羰基氧基、卤素、卤代烷氧基、卤代烷基、杂环基、羟基和‑NR^cR^d，其中所述杂环基任选进一步被一个或两个独立选自以下的取代基取代：烷氧基、烷基、未取代的芳基、未取代的芳基烷氧基、未取代的芳基烷氧基羰基、卤素、卤代烷氧基、卤代烷基、羟基、‑NR^xR^y和氧代。
本申请使用的术语"羰基"，是指‑C(O)‑。
本申请使用的术语"氰基烷基"，是指被一、二或三个氰基取代的烷基。
本申请使用的术语“环烷基”是指具有三个至七个碳原子和0个杂原子的饱和的单环烃环系。环烷基的代表性实例包括但不限于环丙基、环丁基、环戊基和环己基。本发明的环烷基任选被一个、两个、三个、四个或五个取代基取代，所述取代基独立选自烷氧基、烷基、芳基、氰基、卤素、卤代烷氧基、卤代烷基、杂环基、羟基、羟基烷基、硝基和‑NR^xR^y，其中所述芳基和所述杂环基任选进一步被一个、两个或三个独立选自以下的取代基取代：烷氧基、烷基、氰基、卤素、卤代烷氧基、卤代烷基、羟基和硝基。
本申请使用的术语"(环烷基)烷基"，是指被一、二或三个环烷基取代的烷基。
本申请使用的术语“环烷基氧基”是指通过氧原子与母体分子部分相连的环烷基。
本申请使用的术语"环烷基氧基羰基"是指通过羰基与母分子部分相连的环烷基氧基。
本申请使用的术语"卤代"和"卤素"是指F、Br、Cl或I。
本申请使用的术语“杂环基”是指含有一个、两个、三个或四个独立选自氮、氧和硫的杂原子的四元、五元、六元或七元环。所述四元环具有0个双键，所述五元环具有0个至二个双键，以及所述六元环和所述七元环具有0个至三个双键。术语“杂环基”也包括二环基团，其中杂环基环与另一单环杂环基或四元至六元芳族或非芳族碳环稠合；以及桥接二环基团，诸如7‑氮杂二环[2.2.1]庚‑7‑基、2‑氮杂二环[2.2.2]辛‑2‑基和2‑氮杂二环[2.2.2]辛‑3‑基。本发明的杂环基可通过所述基团中的任何碳原子或氮原子与母体分子部分相连。杂环基的实例包括但不限于苯并噻吩基、呋喃基、咪唑基、二氢吲哚基、吲哚基、异喹啉基、异噻唑基、异噁唑基、吗啉基、噁唑基、哌嗪基、哌啶基、吡唑基、吡啶基、吡咯烷基、吡咯并吡啶基、吡咯基、喹啉基、噻唑基、噻吩基和硫吗啉基。本发明的杂环基任选被一个、两个、三个、四个或五个取代基取代，所述取代基独立选自烷氧基、烷氧基烷基、烷氧基羰基、烷基、烷基羰基、芳基、芳基烷基、芳基羰基、氰基、卤素、卤代烷氧基、卤代烷基、第二杂环基、杂环基烷基、杂环基羰基、羟基、羟基烷基、硝基、‑NR^xR^y、(NR^xR^y)烷基和氧代，其中所述芳基烷基中的烷基部分和所述杂环基烷基中的烷基部分是未取代的，以及其中所述芳基、所述芳基烷基中的芳基部分、所述芳基羰基中的芳基部分、所述第二杂环基、所述杂环基烷基中的杂环基部分和所述杂环基羰基中的杂环基部分任选进一步被一个、两个或三个独立选自以下的取代基取代：烷氧基、烷基、氰基、卤素、卤代烷氧基、卤代烷基和硝基。
本申请使用的术语“杂环基烷基”是指被一个、两个或三个杂环基取代的烷基。所述杂环基烷基中的烷基部分任选进一步被一个或两个独立选自以下的额外基团取代：烷氧基、烷基羰基氧基、芳基、卤素、卤代烷氧基、卤代烷基、羟基和‑NR^cR^d，其中所述芳基任选进一步被一个或两个独立选自以下的取代基取代：烷氧基、烷基、未取代的芳基、未取代的芳基烷氧基、未取代的芳基烷氧基羰基、卤素、卤代烷氧基、卤代烷基、羟基和‑NR^xR^y。
本申请使用的术语“‑NR^cR^d”是指通过氮原子与母体分子部分相连的两个基团即R^c和R^d。R^c和R^d独立选自氢、烯基氧基羰基、烷氧基烷基羰基、烷氧基羰基、烷基、烷基羰基、烷基磺酰基、芳基、芳基烷氧基羰基、芳基烷基、芳基烷基羰基、芳基羰基、芳基氧基羰基、芳基磺酰基、环烷基、环烷基氧基羰基、环烷基磺酰基、甲酰基、卤代烷氧基羰基、杂环基、杂环基烷氧基羰基、杂环基烷基、杂环基烷基羰基、杂环基羰基、杂环基氧基羰基、羟基烷基羰基、(NR^eR^f)烷基、(NR^eR^f)烷基羰基、(NR^eR^f)羰基、(NR^eR^f)磺酰基、‑C(NCN)OR’和‑C(NCN)NR^xR^y，其中R’选自烷基和未取代的苯基，以及其中所述芳基烷基中的烷基部分、所述芳基烷基羰基中的烷基部分、所述杂环基烷基中的烷基部分和所述杂环基烷基羰基中的烷基部分任选进一步被一个‑NR^eR^f基团取代；以及其中所述芳基、所述芳基烷氧基羰基中的芳基部分、所述芳基烷基中的芳基部分、所述芳基烷基羰基中的芳基部分、所述芳基羰基中的芳基部分、所述芳基氧基羰基中的芳基部分、所述芳基磺酰基中的芳基部分、所述杂环基、所述杂环基烷氧基羰基中的杂环基部分、所述杂环基烷基中的杂环基部分、所述杂环基烷基羰基中的杂环基部分、所述杂环基羰基中的杂环基部分和所述杂环基氧基羰基中的杂环基部分任选进一步被一个、两个或三个独立选自以下的取代基取代：烷氧基、烷基、氰基、卤素、卤代烷氧基、卤代烷基和硝基。
本申请使用的术语"(NR^cR^d)烯基"，是指

其中R^c和R^d如本申请所定义，以及各R^q独立为氢或C_1‑3烷基。
本申请使用的术语“(NR^cR^d)烷基”是指被一个、两个或三个‑NR^cR^d基团取代的烷基。所述(NR^cR^d)烷基中的烷基部分任选进一步被一个或两个选自以下的额外基团取代：烷氧基、烷氧基烷基羰基、烷氧基羰基、烷基硫基、芳基烷氧基羰基、羧基、环烷基、杂环基、杂环基羰基、羟基和(NR^eR^f)羰基；其中所述杂环基任选进一步被一个、两个、三个、四个或五个取代基取代，所述取代基独立选自烷氧基、烷基、氰基、卤素、卤代烷氧基、卤代烷基和硝基。
本申请使用的术语“‑NR^eR^f”是指通过氮原子与母体分子部分相连的两个基团即R^e和R^f。R^e和R^f独立选自氢、烷基、未取代的芳基、未取代的芳基烷基、未取代的环烷基、未取代的(环烷基)烷基、未取代的杂环基、未取代的杂环基烷基、(NR^xR^y)烷基和(NR^xR^y)羰基。
本申请使用的术语“‑NR^xR^y”是指通过氮原子与母体分子部分相连的两个基团即R^x和R^y。R^x和R^y独立选自氢、烷氧基羰基、烷基、烷基羰基、未取代的芳基、未取代的芳基烷氧基羰基、未取代的芳基烷基、未取代的环烷基、未取代的杂环基和(NR^x’R^y’)羰基，其中R^x’和R^y’独立选自氢和烷基。
在本发明的化合物中存在不对称中心。这些中心通过符号“R”或“S”来指定，这取决于手性碳原子上的取代基的构型。应该理解的是，本发明包括所有立体化学异构形式或其混合物，所述立体化学异构形式或其混合物具有抑制NS5A的能力。化合物的单独立体异构体可从含有手性中心的市售原料来合成制备，或如下制备：制备对映异构产物的混合物，接着进行分离(例如转化为非对映异构体的混合物，接着进行分离、重结晶或色谱技术，或在手性色谱柱上直接分离对映异构体)。具有具体立体化学的起始化合物要么是市售的，要么是可通过本领域已知的技术来制备和拆分的。
本发明的化合物还可按不同的稳定构象形式存在，这些形式是可分离的。由于围绕不对称单键的受限旋转(例如因为位阻或环张力)而导致的扭转不对称(torsional asymmetry)可使不同的构象异构体得以分离。本发明包括这些化合物的每种构象异构体及其混合物。
术语“本发明的化合物”以及等效表达方式意在包括式(I)化合物以及其药用对映异构体、非对映异构体和盐。类似地，在上下文允许的情况下，当提及中间体时意在包括其盐。
本发明意在包括出现在本发明化合物中的原子的所有同位素。同位素包括具有相同原子数但质量数不同的那些原子。例如但不限于此，氢的同位素包括氘和氚。碳的同位素包括¹³C和¹⁴C。经同位素标记的本发明化合物通常可通过本领域技术人员已知的常规技术或通过与本申请所述相似的方法使用经同位素标记的适当试剂代替未经标记的所用相应试剂来制备。上述化合物可具有多种潜在用途，例如在确定生物学活性中作为标准品和试剂。在同位素是稳定的情况下，上述化合物可具有使生物学性质、药理学性质或药物代谢动力学性质得以有利改变的潜力。
本发明的化合物可按药用盐的形式存在。本申请使用的术语“药用盐”表示本发明化合物的盐形式或两性离子形式，这些形式是水溶性或水可分散性的或是油溶性或油可分散性的，这些形式在合理的医药判断范围内适用于与患者的组织接触而不引起过度的毒性、刺激性、变态反应或其它问题或并发症，这与合理的益处/风险比例相称，并且这些形式就其预期的用途而言是有效的。所述盐可在化合物的最终分离和纯化期间制备，或可通过使合适的氮原子与合适的酸反应来单独制备。代表性的酸加成盐包括乙酸盐、己二酸盐、海藻酸盐、枸橼酸盐、天冬氨酸盐、苯甲酸盐、苯磺酸盐、硫酸氢盐、丁酸盐、樟脑酸盐、樟脑磺酸盐；二葡糖酸盐、二氢溴酸盐、二盐酸盐、二氢碘酸盐、甘油磷酸盐、半硫酸盐、庚酸盐、己酸盐、甲酸盐、富马酸盐、盐酸盐、氢溴酸盐、氢碘酸盐、2‑羟基乙磺酸盐、乳酸盐、马来酸盐、均三甲基苯磺酸盐、甲磺酸盐、萘磺酸盐、烟酸盐、萘‑2‑磺酸盐、草酸盐、棕榈酸盐(palmoate)、果胶酸盐(pectinate)、过硫酸盐、3‑苯基丙酸盐、苦味酸盐、特戊酸盐、丙酸盐、琥珀酸盐、酒石酸盐、三氯乙酸盐、三氟乙酸盐、磷酸盐、谷氨酸盐、碳酸氢盐、对甲苯磺酸盐和十一烷酸盐等。可用于形成药用加成盐的酸的实例包括无机酸(如盐酸、氢溴酸、硫酸和磷酸)以及有机酸(如草酸、马来酸、琥珀酸和枸橼酸)。
碱加成盐可在化合物的最终分离和纯化期间如下制备：使羧基与合适的碱如金属阳离子的氢氧化物、碳酸盐或碳酸氢盐反应，或使羧基与氨、有机伯胺、有机仲胺或有机叔胺反应。药用盐中的阳离子包括锂离子、钠离子、钾离子、钙离子、镁离子和铝离子以及无毒的季胺阳离子如铵根离子、四甲基铵根离子、四乙基铵根离子、甲胺季胺阳离子、二甲胺季胺阳离子、三甲胺季胺阳离子、三乙胺季胺阳离子、二乙胺季胺阳离子、乙胺季胺阳离子、三丁胺季胺阳离子、吡啶季胺阳离子、N,N‑二甲基苯胺季胺阳离子、N‑甲基哌啶季胺阳离子、N‑甲基吗啉季胺阳离子、二环己胺季胺阳离子、普鲁卡因(procaine)季胺阳离子、二苄胺季胺阳离子、N,N‑二苄基苯乙胺季胺阳离子和N,N’‑二苄基乙二胺季胺阳离子。可用于形成碱加成盐的其它代表性有机胺包括乙二胺、乙醇胺、二乙醇胺、哌啶和哌嗪。
当可将治疗有效量的式(I)化合物及其药用盐按化学物质原形式(raw chemical)给药而用于治疗时，可按药物组合物的形式提供活性成分。因此，本发明还提供了药物组合物，其包含治疗有效量的式(I)化合物或其药用盐以及一种或多种药用载体、稀释剂或赋形剂。本申请使用的术语“治疗有效量”是指各种活性组分的总量，所述总量足以显示出有意义的患者益处(例如病毒载量的减少)。所述术语当用于单独给药的一种活性成分时是指所述成分的单独量。所述术语当用于组合时是指引起治疗效果的各活性成分的组合量而不论是组合给药、连续给药或同时给药。式(I)化合物及其药用盐如上文所述。载体、稀释剂或赋形剂就与制剂中的其它成分相容而言必须是可接受的，并且就其接受者而言必须是没有害处的。本发明的另一个方面还提供了制备药物制剂的方法，其包括将式(I)化合物或其药用盐与一种或多种药用载体、稀释剂或赋形剂混合。本申请使用的术语“药用”是指这样的化合物、材料、组合物和/或剂型，它们在合理的医药判断范围内适用于与患者的组织接触而不引起过度的毒性、刺激性、变态反应或其它问题或并发症，这与合理的益处/风险比例相称，并且就其预期的用途而言是有效的。
药物制剂可按单位剂量形式提供，其在每单位剂量中含有预定量的活性成分。本发明化合物的以下剂量水平即约0.01至约250毫克/千克体重(“mg/kg”)/日优选约0.05至约100mg/kg体重/日在对HCV介导的疾病进行预防和治疗的单一疗法中是典型的。通常，本发明的药物组合物可每日给药约1至约5次，或可选择地，可按连续输注的形式给药。上述给药可用作慢性疗法或急性疗法。可与载体物质组合以制备单一剂型的活性成分的量将基于以下因素而变化：所治疗的病症、所述病症的严重程度、给药时间、给药途径、所用化合物的排泄速率、治疗的持续时间以及患者的年龄、性别、体重和状态。优选的单位剂量制剂是这样的单位剂量制剂，所述制剂含有本申请上文所述的日剂量或亚日剂量或其适当分数的活性成分。治疗可开始于基本上小于化合物最佳剂量的小剂量。此后，剂量以小的增幅增加，直到实现对病情的最佳效果。一般而言，化合物以如下的浓度水平给药是最期望的，所述水平通常可提供有效的抗病毒结果而不引起任何有害或有毒的副作用。
当本发明的组合物包含本发明的化合物和一种或多种额外的治疗药物或预防药物的组合时，所述化合物和所述额外的药物通常都以如下的剂量水平存在，所述剂量水平为单一疗法给药方案中所通常给药的剂量的约10至150%，更优选为约10至80%。
可对药物制剂进行调整以通过任何适当的途径来给药，所述途径为例如口服(包括口腔或舌下)途径、直肠途径、经鼻途径、局部(包括口腔、舌下或透皮)途径、阴道途径或肠胃外(包括皮下注射或输注、皮内注射或输注、肌内注射或输注、关节内注射或输注、滑膜内注射或输注、胸骨内注射或输注、鞘内注射或输注、病灶内注射或输注、静脉内注射或输注或皮内注射或输注)途径。所述制剂可通过药学领域已知的任何方法来制备，所述方法为例如将活性成分与载体或赋形剂混合。口服给药或注射给药是优选的。
针对口服给药而调整的药物制剂可按以下形式提供：离散的单位形式(如胶囊剂或片剂)；粉末剂或颗粒剂；在含水或不含水液体中的溶液剂或混悬剂；可食用的泡沫剂(foam)或搅打剂(whip)；或水包油型液态乳剂或油包水型乳剂。
例如，就以片剂或胶囊剂形式进行的口服给药而言，可将活性药物组分与口服的无毒的药用惰性载体如乙醇、甘油、水等混合。粉末剂如下制备：将化合物研磨至合适的微细尺寸，然后与经类似研磨的药物载体如可食用的碳水化合物(如淀粉或甘露醇)混合。矫味剂、防腐剂、分散剂和着色剂也可存在。
胶囊剂如下制备：如上所述制备粉末混合物，然后填充到成形的明胶壳中。可将助流剂和润滑剂如胶体二氧化硅、滑石、硬脂酸镁、硬脂酸钙或固体聚乙二醇加到粉末混合物中，然后进行填充操作。也可加入崩解剂或增溶剂如琼脂、碳酸钙或碳酸钠以改善胶囊剂被摄入时的药物利用度。
此外，当期望或需要时，也可将合适的粘合剂、润滑剂、崩解剂和着色剂掺到混合物中。合适的粘合剂包括淀粉、明胶、天然糖(如葡萄糖或β‑乳糖)、玉米甜味剂、天然胶和合成胶(如阿拉伯胶、西黄蓍胶或海藻酸钠)、羧甲基纤维素、聚乙二醇等。在这些剂型中使用的润滑剂包括油酸钠、氯化钠等。崩解剂包括但不限于淀粉、甲基纤维素、琼脂、膨润土、黄原胶等。片剂如下配制：例如制备粉末混合物，制粒或预压，加入润滑剂和崩解剂，然后压制成片剂。粉末混合物如下制备：将经合适研磨的化合物与上述稀释剂或基质以及任选的粘合剂(如羧甲基纤维素、海藻酸盐、凝胶或聚乙烯吡咯烷酮)、溶解延迟剂(solution retardant)(如石蜡)、吸收促进剂(如季胺盐)和/或吸收剂(如膨润土、高岭土或磷酸二钙)混合。粉末混合物可通过以下方法粒化：用粘合剂如糖浆、淀粉糊、阿拉伯胶液、纤维素溶液或聚合物溶液湿润，然后挤压过筛。作为可选择的制粒方法，粉末混合物可通过压片机来处理，结果是不完全成形的预压片破裂成颗粒。可通过加入硬脂酸、硬脂酸盐、滑石或矿物油来对颗粒进行润滑以防止与片剂成形模粘连。然后将经润滑的混合物压制成片剂。本发明的化合物也可与自由流动的惰性载体组合，并在不经历制粒或预压步骤的情况下直接压制成片剂。可提供透明的或不透明的保护性包衣，所述包衣由以下包衣层构成：由虫胶形成的隔离包衣层、由糖或聚合物形成的包衣层和由蜡形成的光亮包衣层。可将染料加到这些包衣中以区分不同的单位剂量。
口服流体如溶液剂、糖浆剂和酏剂可按剂量单位形式来制备，从而使给定的量含有预定量的化合物。糖浆剂可通过将化合物溶于经合适矫味的水溶液中来制备，而酏剂通过使用无毒的媒介物来制备。也可加入增溶剂和乳化剂(如乙氧基化的异硬脂醇和聚氧乙烯山梨醇醚)、防腐剂、矫味添加剂(如薄荷油、天然甜味剂、糖精或其它人造甜味剂)等。
当适当时，可对用于口服给药的剂量单位制剂进行微囊化。也可例如通过将颗粒物质用聚合物、蜡等包衣或包埋到聚合物、蜡等中来制备制剂以延长或维持释放。
式(I)化合物及其药用盐也可按脂质体递送系统的形式给药，所述脂质体递送系统为例如小单层脂囊(small unilamellar vesicle)、大单层脂囊(large unilamellar vesicle)和多层脂囊(multilamellar vesicle)。脂质体可由各种磷脂如胆固醇、硬脂胺或磷脂酰胆碱来形成。
式(I)化合物及其药用盐也可通过使用单克隆抗体作为与化合物分子偶联的单独载体来递送。化合物也可与作为靶向药物载体的可溶性聚合物偶联。这些聚合物可包括聚乙烯吡咯烷酮、吡喃共聚物、聚羟基丙基甲基丙烯酸酰胺苯酚(polyhydroxypropylmethacrylamidephenol)、聚羟基乙基天冬氨酸酰胺苯酚(polyhydroxyethylaspartamidephenol)或取代有棕榈酰基的聚氧化乙烯聚赖氨酸(polyethyleneoxidepolylysine substituted with palitoyl residue)。此外，化合物可与可用于实现药物的控制释放的一类生物可降解的聚合物偶联，这类聚合物为例如聚乳酸、聚ξ‑己内酯、聚羟基丁酸、聚原酸酯、聚缩醛、聚二氢吡喃、聚氰基丙烯酸酯和水凝胶的交联或两亲性嵌段共聚物。
针对透皮给药而调整的药物制剂可按离散贴剂的形式提供，其意在与接受者的表皮紧密接触且保持延长的时段。例如，如Pharmaceutical Research1986,3(6),318中所一般描述，活性成分可通过离子电渗法(iontophoresis)从贴剂递送。
可将针对局部给药而调整的药物制剂配制成软膏剂、乳膏剂、混悬剂、洗液、粉末剂、溶液剂、糊剂、凝胶剂、喷雾剂、气雾剂或油剂。
针对直肠给药而调整的药物制剂可按栓剂或灌肠剂的形式提供。
针对经鼻给药而调整的药物制剂(其中载体为固体)包括粒度范围为例如20微米至500微米的一系列粉末，其按照吸入的方式来给药，即从接近鼻的装有粉末的容器中经由鼻道而快速吸入。用于以鼻喷雾剂或滴鼻剂的形式给药的合适制剂(其中载体为液体)包括活性成分的含水溶液或油溶液。
针对吸入给药而调整的药物制剂包括微细颗粒的粉尘或气雾，其可通过各种类型的定量加压气雾器、喷雾器或吹入器来产生。
针对阴道给药而调整的药物制剂可按阴道栓剂、棉塞剂、乳膏剂、凝胶剂、糊剂、泡沫剂或喷雾剂的形式提供。
针对肠胃外给药而调整的药物制剂包括：含水和不含水的无菌注射溶液剂，其可含有抗氧化剂、缓冲剂、抑菌剂和使制剂与预期接受者的血液等渗的溶质；和含水和不含水的无菌混悬剂，其可包含助悬剂和增稠剂。所述制剂可于单位剂量容器或多剂量容器如密封的安瓿和小瓶中提供，并可在冷冻干燥的(冻干的)状态下贮存，仅需要在临用前加入无菌液态载体例如注射用水。现用现配的注射溶液剂和混悬剂可从无菌粉末、颗粒或片剂来制备。
应该理解的是，除了上文具体提及的成分之外，考虑到所涉及制剂的类型，所述制剂还可包括本领域中的其它常规物质，例如适于口服给药的制剂可包括矫味剂。
术语“患者”既包括人类也包括其它哺乳动物。
术语“治疗”是指：(i)在可能易患疾病、障碍和/或病症但尚未诊断患有所述疾病、障碍和/或病症的患者中预防所述疾病、障碍和/或病症；(ii)抑制所述疾病、障碍和/或病症，即阻止其发展；以及(iii)减轻所述疾病、障碍和/或病症，即引起所述疾病、障碍和/或病症的消退。
本发明的化合物也可与环孢菌素例如环孢菌素A一起给药。已在临床试验中显示出环孢菌素A具有抗HCV活性(Hepatology2003,38,1282、Biochem.Biophys.Res.Commun.2004,313,42和J.Gastroenterol.2003,38,567)。
下表1列出了可与本发明化合物一起给药的化合物的一些说明性实例。本发明的化合物可在组合疗法中与其它具有抗HCV活性的化合物同时给药或分开给药，或通过将各化合物组合成组合物来给药。
表1

本发明的化合物也可用作实验室试剂。所述化合物在提供以下研究工具中是有帮助的，这些研究工具用于设计病毒复制测定、验证动物测定系统和进行结构生物学研究以进一步提高对HCV疾病机理的认识。此外，本发明的化合物可例如通过竞争性抑制作用而用于建立或确定其它抗病毒化合物的结合位点。
本发明的化合物也可用于处理或预防物质的病毒污染，因此降低了与这些物质(例如血液、组织、手术器械和手术外衣、实验室仪器和实验室外衣以及血液采集装置和物质或输血装置和物质)发生接触的实验室人员或医务人员或患者感染病毒的风险。
当具有式(I)的化合物通过合成性过程或通过代谢性过程(包括发生在人类或动物体内(在体内)的那些代谢性过程或发生在体外的过程)来制备时，本发明旨在包括具有式(I)的化合物。
在本申请中使用的缩写(特别是包含在下面的说明性方案和实施例中)为本领域技术人员所熟知。所使用的一些缩写如下：RT表示室温或保留时间(上下文将指出)；Rt表示保留时间；min表示分钟；TFA表示三氟乙酸；DMSO表示二甲亚砜；Ph表示苯基；THF表示四氢呋喃；Et₂O表示乙醚；Boc或BOC表示叔‑丁氧羰基；MeOH表示甲醇；Et表示乙基；DMF表示二甲基甲酰胺；h或hr表示小时；TBDPS表示叔‑丁基二苯基甲硅烷基；DMAP表示N,N‑二甲氨基吡啶；TBAF表示氟化四丁基铵；Et₃N或TEA表示三乙胺；HATU表示O‑(7‑氮杂苯并三唑‑1‑基)‑N,N,N',N'‑四甲基脲鎓六氟磷酸盐；Ac表示乙酸基或乙酰基；SEM表示2‑三甲基甲硅烷基乙氧基甲氧基；EDC或EDCI表示1‑乙基‑3‑(3‑二甲氨基丙基)碳化二亚胺；EEDQ表示N‑乙氧羰基‑2‑乙氧基‑1,2‑二氢喹啉；MeOH表示甲醇；i‑Bu表示异丁基；Bn表示苄基；以及Me表示甲基。
结合以下合成方案(所述合成方案说明可制备本发明化合物的方法)可更好地理解本发明的化合物和方法。原料可得自商业来源或通过本领域普通技术人员已知的已充分确定的文献方法来制备。对于本领域普通技术人员显而易见的是，可通过替换如下所示的合成中的适当反应物和物质来合成以上所定义的化合物。对于本领域技术人员又显而易见的是，视变量的性质而定，选择性保护和脱保护步骤以及所述步骤本身的次序可按不同次序进行以成功地完成以下合成。除非下文另作说明，所述变量如上所定义。
方案1：取代的苯基甘氨酸衍生物
取代的苯基甘氨酸衍生物可通过如下所示的若干种方法来制备。可在酸性介质中用适当醛和还原剂(诸如氰基硼氢化钠)将苯基甘氨酸叔丁酯还原烷基化(路径A)。可用强酸(诸如HCl或三氟乙酸)达成叔丁酯的水解。可选择地，可用烷基卤化物(诸如碘乙烷)和碱(诸如碳酸氢钠或碳酸钾)将苯基甘氨酸烷基化(路径B)。路径C说明如路径A中将苯基甘氨酸还原烷基化，继而用可供选择的醛(诸如甲醛)在还原剂和酸存在下进行第二还原烷基化。路径D说明通过相应扁桃酸类似物合成取代的苯基甘氨酸。可用对甲苯磺酰氯达成仲醇至适当离去基的转化。用适当胺取代甲苯磺酸酯基继而还原性除去苯甲酯可提供取代的苯基甘氨酸衍生物。在路径E中，通过用对映异构纯的手性助剂(诸如(但不限于)(+)‑1‑苯基乙醇、(‑)‑1‑苯基乙醇、埃文氏噁唑烷酮(Evan's oxazolidinone)或对映异构纯的泛内酯)酯化来拆分外消旋取代的苯基甘氨酸衍生物。通过色谱(硅胶、HPLC、结晶等)来达成非对映异构体的分离，继而除去手性助剂，从而提供对映异构纯的苯基甘氨酸衍生物。路径H说明与路径E交叉的合成顺序，其中在添加胺之前安置上述手性助剂。可选择地，可用溴鎓离子源(诸如溴、N‑溴代琥珀酰亚胺或CBr₄)溴化芳基乙酸的酯。可用各种单取代胺或二取代胺在叔胺碱(诸如三乙胺或许尼希氏碱(Hunig's base))存在下取代所得苯甲基溴。通过在低温用氢氧化锂处理或在高温用6N HCl处理来使甲酯水解，从而提供取代的苯基甘氨酸衍生物。路径G中展示另一方法。可用各种芳基卤化物在钯(0)源(诸如二(三丁基膦)钯)和碱(诸如磷酸钾)存在下使甘氨酸类似物衍生。随后可通过用碱或酸处理来将所得酯水解。应该理解的是，在本领域中存在制备苯基甘氨酸衍生物的其它公知方法，可对其进行修改以提供本说明书中的期望的化合物。还应该理解的是，可通过制备性HPLC将最终苯基甘氨酸衍生物纯化至大于98%ee的对映异构纯度。

方案2：酰化的氨基酸衍生物
在本发明的另一个实施方案中，可如下所示制备酰化的苯基甘氨酸衍生物。羧酸被保护为易于除去的酯的苯基甘氨酸衍生物可用酰氯在碱(诸如三乙胺)存在下酰化以提供相应酰胺(路径A)。路径B说明用适当氯甲酸酯酰化起始苯基甘氨酸衍生物，而路径C展示与适当异氰酸酯或氨基甲酰氯的反应。路径A‑C中所示的三种中间体中的每一种可通过本领域技术人员已知的
方法(即用强酸(诸如HCl或三氟乙酸)处理叔丁酯)来脱保护。

方案3
氨基取代的苯基乙酸可通过用过量胺处理氯甲基苯基乙酸来制备。

共同cap的合成
化合物分析条件：纯度评估和低分辨率质量分析在与Waters Micromass ZQ MS系统偶联的Shimadzu LC系统上进行。应注意的是，保留时间可因机器不同而轻微改变。除非另作说明，否则其它LC条件可适用于本部分。
条件‑MS‑W1
柱         =XTERRA3.0X50毫米S7
开始%B     =0
最后%B     =100
梯度时间   =2分钟
停止时间   =3分钟
流速       =5毫升/分钟
波长       =220纳米
溶剂A      =0.1%TFA/10%甲醇/90%H₂O
溶剂B      =0.1%TFA/90%甲醇/10%H₂O
条件‑MS‑W2
柱         =XTERRA3.0X50毫米S7
开始%B     =0
最后%B     =100
梯度时间   =3分钟
停止时间   =4分钟
流速       =4毫升/分钟
波长       =220纳米
溶剂A      =0.1%TFA/10%甲醇/90%H₂O
溶剂B      =0.1%TFA/90%甲醇/10%H₂O
条件‑MS‑W5
柱         =XTERRA3.0X50毫米S7
开始%B     =0
最后%B     =30
梯度时间   =2分钟
停止时间   =3分钟
流速       =5毫升/分钟
波长       =220纳米
溶剂A      =0.1%TFA/10%甲醇/90%H₂O
溶剂B      =0.1%TFA/90%甲醇/10%H₂O
条件‑D1
柱         =XTERRA C183.0X50毫米S7
开始%B     =0
最后%B     =100
梯度时间   =3分钟
停止时间   =4分钟
流速       =4毫升/分钟
波长       =220纳米
溶剂A      =0.1%TFA/10%甲醇/90%H₂O
溶剂B      =0.1%TFA/90%甲醇/10%H₂O
条件‑D2
柱         =Phenomenex‑Luna4.6X50毫米S10
开始%B     =0
最后%B     =100
梯度时间   =3分钟
停止时间   =4分钟
流速       =4毫升/分钟
波长       =220纳米
溶剂A      =0.1%TFA/10%甲醇/90%H₂O
溶剂B      =0.1%TFA/90%甲醇/10%H₂O
条件‑MD1
柱         =XTERRA4.6X50毫米S5
开始%B     =0
最后%B     =100
梯度时间   =3分钟
停止时间   =4分钟
流速       =4毫升/分钟
波长       =220纳米
溶剂A      =0.1%TFA/10%甲醇/90%H₂O
溶剂B      =0.1%TFA/90%甲醇/10%H₂O
条件‑M3
柱         =XTERRA C183.0X50毫米S7
开始%B     =0
最后%B     =40
梯度时间   =2分钟
停止时间   =3分钟
流速       =5毫升/分钟
波长       =220纳米
溶剂A      =0.1%TFA/10%甲醇/90%H₂O
溶剂B      =0.1%TFA/90%甲醇/10%H₂O
条件OL1
柱         =Phenomenex‑Luna3.0X50毫米S10
开始%B     =0
最后%B     =100
梯度时间   =4分钟
停止时间   =5分钟
流速       =4毫升/分钟
波长       =220纳米
溶剂A      =0.1%TFA/10%甲醇/90%H₂O
溶剂B      =0.1%TFA/90%甲醇/10%H₂O
条件OL2
柱         =Phenomenex‑Luna50X2毫米3u
开始%B     =0
最后%B     =100
梯度时间   =4分钟
停止时间   =5分钟
流速       =0.8毫升/分钟
烘箱温度   =40℃
波长       =220纳米
溶剂A      =0.1%TFA/10%乙腈/90%H₂O
溶剂B      =0.1%TFA/90%乙腈/10%H₂O
条件I
柱         =Phenomenex‑Luna3.0X50毫米S10
开始%B     =0
最后%B     =100
梯度时间   =2分钟
停止时间   =3分钟
流速       =4毫升/分钟
波长       =220纳米
溶剂A      =0.1%TFA/10%甲醇/90%H₂O
溶剂B      =0.1%TFA/90%甲醇/10%H₂O
条件II
柱         =Phenomenex‑Luna4.6X50毫米S10
开始%B     =0
最后%B     =100
梯度时间   =2分钟
停止时间   =3分钟
流速       =5毫升/分钟
波长       =220纳米
溶剂A      =0.1%TFA/10%甲醇/90%H₂O
溶剂B      =0.1%TFA/90%甲醇/10%H₂O
条件III
柱         =XTERRA C183.0X50毫米S7
开始%B     =0
最后%B     =100
梯度时间   =3分钟
停止时间   =4分钟
流速       =4毫升/分钟
波长       =220纳米
溶剂A      =0.1%TFA/10%甲醇/90%H₂O
溶剂B      =0.1%TFA/90%甲醇/10%H₂O
Cap‑1

将10%Pd/C(2.0g)在甲醇(10mL)中的悬浮液添加至(R)‑2‑苯基甘氨酸(10g，66.2mmol)、甲醛(33mL浓度为37重量%的水溶液)、1N HCl(30mL)和甲醇(30mL)的混合物中，且暴露于H₂(60psi)中3小时。通过硅藻土过滤反应混合物，并将滤液真空浓缩。将所得粗物质从异丙醇重结晶，得到白色针状的Cap‑1的HCl盐(4.0g)。旋光度：‑117.1°[c=9.95mg/mL(在H₂O中)；λ=589nm]。¹H NMR(DMSO‑d₆,δ=2.5ppm,500MHz):δ7.43‑7.34(m,5H),4.14(s,1H),2.43(s,6H)；LC(条件I):R_t=0.25；LC/MS:[M+H]⁺C₁₀H₁₄NO₂的分析计算值为180.10；实验值为180.17；HRMS:[M+H]⁺C₁₀H₁₄NO₂的分析计算值为180.1025；实验值为180.1017。
Cap‑2

将NaBH₃CN(6.22g，94mmol)历时数分钟逐份添加至(R)‑2‑苯基甘氨酸(6.02g，39.8mmol)和甲醇(100mL)的经冷却(冰/水)混合物中并搅拌5分钟。经10分钟滴加乙醛(10mL)，在相同冷却温度继续搅拌45分钟且在环境温度继续搅拌约6.5小时。将反应混合物用冰水浴冷却下来，用水(3mL)处理，然后历时约45分钟滴加浓HCl，直到混合物的pH为约1.5‑2.0，由此淬灭。移开冷却浴并继续搅拌，同时添加浓HCl以维持混合物的pH值为约1.5‑2.0。将反应混合物搅拌过夜，过滤以除去白色悬浮物，并将滤液真空浓缩。将粗物质从乙醇重结晶，得到两批亮白色固体状的Cap‑2的HCl盐(第1批：4.16g；第2批：2.19g)。¹H NMR(DMSO‑d₆,δ=2.5ppm,400MHz):10.44(1.00，宽单峰，1H),7.66(m,2H),7.51(m,3H),5.30(s,1H),3.15(宽多重峰，2H),2.98(宽多重峰，2H),1.20(表观宽单峰，6H)。第1批：[α]²⁵‑102.21°(c=0.357,H₂O)；第2批：[α]²⁵‑99.7°(c=0.357,H₂O)。LC(条件I):R_t=0.43min；LC/MS:[M+H]⁺C₁₂H₁₈NO₂的分析计算值为208.13；实验值为208.26。
Cap‑3

将乙醛(5.0mL，89.1mmol)和10%Pd/C(720mg)在甲醇/H₂O(4mL/1mL)中的悬浮液依次添加至(R)‑2‑苯基甘氨酸(3.096g，20.48mmol)、1N HCl(30mL)和甲醇(40mL)的经冷却(约15℃)混合物中。移开冷却浴并将反应混合物在H₂气囊条件下搅拌17小时。添加额外的乙醛(10mL，178.2mmol)，且在H₂气氛下继续搅拌24小时[注意：在整个反应中视需要补充H₂的供应]。通过硅藻土过滤反应混合物，并将滤液真空浓缩。将所得粗物质从异丙醇重结晶，得到亮白色固体状的(R)‑2‑(乙基氨基)‑2‑苯基乙酸的HCl盐(2.846g)。¹H NMR(DMSO‑d₆,δ=2.5ppm,400MHz):δ14.15(宽单峰，1H),9.55(宽单峰，2H),7.55‑7.48(m,5H),2.88(宽多重峰，1H),2.73(宽多重峰，1H),1.20(表观三重峰，J=7.2,3H)。LC(条件I):R_t=0.39min;均一性指数(homogeneity index)>95%；LC/MS:[M+H]⁺C₁₀H₁₄NO₂的分析计算值为180.10；实验值为180.18。
将10%Pd/C(536mg)在甲醇/H₂O(3mL/1mL)中的悬浮液添加至(R)‑2‑(乙基氨基)‑2‑苯基乙酸/HCl(1.492g，6.918mmol)、甲醛(20mL浓度为37重量%的水溶液)、1N HCl(20mL)和甲醇(23mL)的混合物中。将反应混合物在H₂气囊条件下搅拌约72小时，其中视需要补充H₂的供应。通过硅藻土过滤反应混合物，并将滤液真空浓缩。将所得粗物质从异丙醇(50mL)重结晶，得到白色固体状的Cap‑3的HCl盐(985mg)。¹H NMR(DMSO‑d₆,δ=2.5ppm,400MHz):δ10.48(宽单峰，1H),7.59‑7.51(m,5H),5.26(s,1H),3.08(表观宽单峰，2H),2.65(宽单峰，3H),1.24(宽多重峰，3H)。LC(条件I):R_t=0.39min;均一性指数>95%；LC/MS:[M+H]⁺C₁₁H₁₆NO₂的分析计算值为194.12；实验值为194.18；HRMS:[M+H]⁺C₁₁H₁₆NO₂的分析计算值为194.1180；实验值为194.1181。
Cap‑4

将ClCO₂Me(3.2mL，41.4mmol)经6min滴加至(R)‑2‑氨基‑2‑苯基乙酸叔丁酯/HCl(9.877g，40.52mmol)和二异丙基乙胺(14.2mL，81.52mmol)的经冷却(冰/水)THF(410mL)半溶液(semi‑solution)中，且在类似温度搅拌5.5小时。真空除去挥发性组分，且使残余物在水(100mL)和乙酸乙酯(200mL)之间分配。将有机层用1N HCl(25mL)和饱和NaHCO₃溶液(30mL)洗涤，干燥(MgSO₄)，过滤，并真空浓缩。将所得无色油状物用己烷研磨，过滤并用己烷(100mL)洗涤，得到白色固体状的(R)‑2‑(甲氧基羰基氨基)‑2‑苯基乙酸叔丁酯(7.7g)。¹H NMR(DMSO‑d₆,δ=2.5ppm,400MHz):7.98(d,J=8.0,1H),7.37‑7.29(m,5H),5.09(d,J=8,1H),3.56(s,3H),1.33(s,9H)。LC(条件I):R_t=1.53min；均一性指数为约90%；LC/MS:[M+Na]⁺C₁₄H₁₉NNaO₄的分析计算值为288.12；实验值为288.15。
将TFA(16mL)经7分钟滴加至上述产物的经冷却(冰/水)CH₂Cl₂(160mL)溶液中，移开冷却浴并将反应混合物搅拌20小时。由于脱保护仍不完全，所以添加额外的TFA(1.0mL)，再继续搅拌2小时。真空除去挥发性组分并将所得油状残余物用乙醚(15mL)和己烷(12mL)处理，得到沉淀物。将沉淀物过滤，然后用乙醚/己烷(约1:3比率；30mL)洗涤并真空干燥，得到蓬松白色固体状的Cap‑4(5.57g)。旋光度:‑176.9°[c=3.7mg/mL(在H₂O中)；λ=589nm]。¹H NMR(DMSO‑d₆,δ=2.5ppm,400MHz):δ12.84(宽单峰，1H),7.96(d,J=8.3,1H),7.41‑7.29(m,5H),5.14(d,J=8.3,1H),3.55(s,3H)。LC(条件I):R_t=1.01min;均一性指数>95%；LC/MS:[M+H]⁺C₁₀H₁₂NO₄的分析计算值为210.08；实验值为210.17；HRMS:[M+H]⁺C₁₀H₁₂NO₄的分析计算值为210.0766；实验值为210.0756。
Cap‑5

将(R)‑2‑苯基甘氨酸(1.0g，6.62mmol)、1,4‑二溴丁烷(1.57g，7.27mmol)和Na₂CO₃(2.10g，19.8mmol)在乙醇(40mL)中的混合物在100℃加热21小时。将反应混合物冷却至环境温度并过滤，并真空浓缩滤液。将残余物溶解在乙醇中并用1N HCl酸化至pH值为3‑4，并真空除去挥发性组分。所得粗物质经反相HPLC(水/甲醇/TFA)纯化，得到半粘性白色泡沫状的Cap‑5的TFA盐(1.0g)。¹H NMR(DMSO‑d₆,δ=2.5,500MHz)δ10.68(宽单峰，1H),7.51(m,5H),5.23(s,1H),3.34(表观宽单峰，2H),3.05(表观宽单峰，2H),1.95(表观宽单峰，4H)；R_t=0.30分钟(条件I);均一性指数>98%；LC/MS:[M+H]⁺C₁₂H₁₆NO₂的分析计算值为206.12；实验值为206.25。
Cap‑6

通过使用Cap‑5的制备方法从(R)‑2‑苯基甘氨酸和1‑溴‑2‑(2‑溴乙氧基)乙烷合成Cap‑6的TFA盐。¹H NMR(DMSO‑d₆,δ=2.5,500MHz)δ12.20(宽单峰，1H),7.50(m,5H),4.92(s,1H),3.78(表观宽单峰，4H),3.08(表观宽单峰，2H),2.81(表观宽单峰，2H)；R_t=0.32分钟(条件I)；>98%；LC/MS:[M+H]⁺C₁₂H₁₆NO₃的分析计算值为222.11；实验值为222.20；HRMS:[M+H]⁺C₁₂H₁₆NO₃的分析计算值为：222.1130；实验值为222.1121。
Cap‑7

将对甲苯磺酰氯(8.65g，45.4mmol)的CH₂Cl₂(200mL)溶液滴加至(S)‑2‑羟基‑2‑苯基乙酸苯甲酯(10.0g，41.3mmol)、三乙胺(5.75mL，41.3mmol)和4‑二甲基氨基吡啶(0.504g，4.13mmol)的经冷却(‑5℃)CH₂Cl₂(200mL)溶液中，同时将温度维持在‑5℃与0℃之间。将反应混合物在0℃搅拌9小时，随后在冰箱(‑25℃)中贮存14小时。将其解冻至环境温度并用水(200mL)、1N HCl(100mL)和盐水(100mL)洗涤，干燥(MgSO₄)，过滤并真空浓缩，得到粘性油状的2‑苯基‑2‑(甲苯磺酰基氧基)乙酸苯甲酯(16.5g)，其在静置之后固化。未检验产物的手性完整性，产物不经进一步纯化就用于下一步骤。¹H NMR(DMSO‑d₆,δ=2.5,500MHz)δ7.78(d,J=8.6,2H),7.43‑7.29(m,10H),7.20(m,2H),6.12(s,1H),5.16(d,J=12.5,1H),5.10(d,J=12.5,1H),2.39(s,3H)。R_t=3.00(条件III);均一性指数>90%；LC/MS:[M+H]⁺C₂₂H₂₀NaO₅S的分析计算值为419.09；实验值为419.04。
将2‑苯基‑2‑(甲苯磺酰基氧基)乙酸苯甲酯(6.0g，15.1mmol)、1‑甲基哌嗪(3.36mL，30.3mmol)和N,N‑二异丙基乙胺(13.2mL，75.8mmol)的THF(75mL)溶液在65℃加热7小时。将反应混合物冷却至环境温度并真空除去挥发性组分。使残余物在乙酸乙酯与水之间分配，并将有机层用水和盐水洗涤，干燥(MgSO₄)，过滤并真空浓缩。所得粗物质经快速色谱(硅胶，乙酸乙酯)纯化，得到橙棕色粘性油状的2‑(4‑甲基哌嗪‑1‑基)‑2‑苯基乙酸苯甲酯(4.56g)。手性HPLC分析(Chiralcel OD‑H)表明样品为比率为38.2:58.7的对映异构体的混合物。如下实现对映异构体的分离：将产物溶解在120mL乙醇/庚烷(1:1)中且注射(每次注射5mL)在手性HPLC柱(Chiracel OJ,5cm ID×50cm L,20μm)上，用85:15庚烷/乙醇以75mL/min洗脱且在220nm监测。回收粘性油状的对映异构体‑1(1.474g)和对映异构体‑2(2.2149g)。¹H NMR(CDCl₃,δ=7.26,500MHz)7.44‑7.40(m,2H),7.33‑7.24(m,6H),7.21‑7.16(m,2H),5.13(d,J=12.5,1H),5.08(d,J=12.5,1H),4.02(s,1H),2.65‑2.38(表观宽单峰，8H),2.25(s,3H)。R_t=2.10(条件III);均一性指数>98%；LC/MS:[M+H]⁺C₂₀H₂₅N₂O₂的分析计算值为325.19；实验值为325.20。
将2‑(4‑甲基哌嗪‑1‑基)‑2‑苯基乙酸苯甲酯的任一对映异构体(1.0g，3.1mmol)的甲醇(10mL)溶液添加至10%Pd/C(120mg)在甲醇(5.0mL)中的悬浮液中。将反应混合物在小心监测下暴露于氢气气囊<50分钟。完成反应之后，立即通过硅藻土过滤催化剂并真空浓缩滤液，得到被苯基乙酸污染的浅棕色泡沫状的Cap‑7(867.6mg；质量高于理论收率)。该产物不经进一步纯化就用于下一步骤。¹H NMR(DMSO‑d₆,δ=2.5,500MHz)δ7.44‑7.37(m,2H),7.37‑7.24(m,3H),3.92(s,1H),2.63‑2.48(表观宽单峰，2H),2.48‑2.32(m,6H),2.19(s,3H)；R_t=0.31(条件II);均一性指数>90%；LC/MS:[M+H]⁺C₁₃H₁₉N₂O₂的分析计算值为235.14；实验值为235.15；HRMS:[M+H]⁺C₁₃H₁₉N₂O₂的分析计算值为235.1447；实验值为235.1440。
如下所述，根据Cap‑7的合成，通过使用适当胺进行SN₂取代步骤(即对于Cap‑8而言为4‑羟基哌啶且对于Cap‑9而言为(S)‑3‑氟吡咯烷)且使用改变的条件进行各自立体异构中间体的分离来进行Cap‑8和Cap‑9的合成。
Cap‑8

通过使用以下条件来进行中间体2‑(4‑羟基哌啶‑1‑基)‑2‑苯基乙酸苯甲酯的对映异构分离：将化合物(500mg)溶解在乙醇/庚烷(5mL/45mL)中。将所得溶液注射(每次注射5mL)在手性HPLC柱(Chiracel OJ,2cm ID×25cm L,10μm)上，用80:20庚烷/乙醇以10mL/min洗脱，在220nm监测，得到浅黄色粘性油状的186.3mg对映异构体‑1和209.1mg对映异构体‑2。根据Cap‑7的制备将所述苯甲酯氢解，得到Cap‑8：¹H NMR(DMSO‑d₆,δ=2.5,500MHz)7.40(d,J=7,2H),7.28‑7.20(m,3H),3.78(s1H),3.46(m,1H),2.93(m,1H),2.62(m,1H),2.20(m,2H),1.70(m,2H),1.42(m,2H)。R_t=0.28(条件II);均一性指数>98%；LC/MS:[M+H]⁺C₁₃H₁₈NO₃的分析计算值为236.13；实验值为236.07；HRMS:[M+H]⁺C₁₃H₁₈NO₃的分析计算值为236.1287；实验值为236.1283。
Cap‑9

通过使用以下条件来进行中间体2‑((S)‑3‑氟吡咯烷‑1‑基)‑2‑苯基乙酸苯甲酯的非对映异构分离：将所述酯(220mg)在手性HPLC柱(Chiracel OJ‑H,0.46cm ID×25cm L,5μm)上用含有0.1%TFA的95%CO₂/5%甲醇以10巴压力、70mL/min流速和在35℃的温度洗脱来分离。将各立体异构体的HPLC洗脱液浓缩，并将残余物溶解在CH₂Cl₂(20mL)中并用水性介质(10mL水+1mL饱和NaHCO₃溶液)洗涤。将有机相干燥(MgSO₄)，过滤并真空浓缩，得到92.5mg级份‑1和59.6mg级份‑2。根据Cap‑7的制备将所述苯甲酯氢解以制备Cap9a和9b。Cap‑9a(非对映异构体‑1；样品为在反相HPLC上使用H₂O/甲醇/TFA溶剂纯化而得到的TFA盐)：¹H NMR(DMSO‑d₆,δ=2.5,400MHz)7.55‑7.48(m,5H),5.38(双多重峰，J=53.7,1H),5.09(宽单峰，1H),3.84‑2.82(宽多重峰，4H),2.31‑2.09(m,2H)。R_t=0.42(条件I);均一性指数>95%；LC/MS:[M+H]⁺C₁₂H₁₅FNO₂的分析计算值为224.11；实验值为224.14;Cap‑9b(非对映异构体‑2):¹H NMR(DMSO‑d₆,δ=2.5,400MHz)7.43‑7.21(m,5H),5.19(双多重峰，J=55.9,1H),3.97(s,1H),2.95‑2.43(m,4H),2.19‑1.78(m,2H)。R_t=0.44(条件I)；LC/MS:[M+H]⁺C₁₂H₁₅FNO₂的分析计算值为224.11；实验值为224.14。
Cap‑10

向D‑脯氨酸(2.0g，17mmol)和甲醛(2.0mL浓度为37重量%的水溶液)在甲醇(15mL)中的溶液中添加10%Pd/C(500mg)在甲醇(5mL)中的悬浮液。将混合物在氢气气囊条件下搅拌23小时。通过硅藻土过滤反应混合物并真空浓缩，得到灰白色固体状的Cap‑10(2.15g)。¹H NMR(DMSO‑d₆,δ=2.5,500MHz)3.42(m,1H),3.37(dd,J=9.4,6.1,1H),2.85‑2.78(m,1H),2.66(s,3H),2.21‑2.13(m,1H),1.93‑1.84(m,2H),1.75‑1.66(m,1H)。R_t=0.28(条件II);均一性指数>98%；LC/MS:[M+H]⁺C₆H₁₂NO₂的分析计算值为130.09；实验值为129.96。
Cap‑11

将(2S,4R)‑4‑氟吡咯烷‑2‑甲酸(0.50g，3.8mmol)、甲醛(0.5mL浓度为37重量%的水溶液)、12N HCl(0.25mL)和10%Pd/C(50mg)在甲醇(20mL)中的混合物在氢气气囊条件下搅拌19小时。通过硅藻土过滤反应混合物，并真空浓缩滤液。将残余物从异丙醇重结晶，得到白色固体状的Cap‑11的HCl盐(337.7mg)。¹H NMR(DMSO‑d₆,δ=2.5,500MHz)5.39(d m,J=53.7,1H),4.30(m,1H),3.90(ddd,J=31.5,13.5,4.5,1H),3.33(dd,J=25.6,13.4,1H),2.85(s,3H),2.60‑2.51(m,1H),2.39‑2.26(m,1H)。R_t=0.28(条件II);均一性指数>98%；LC/MS:[M+H]⁺C₆H₁₁FNO₂的分析计算值为148.08；实验值为148.06。
Cap‑12(与Cap52相同)

将L‑丙氨酸(2.0g，22.5mmol)溶解在10%碳酸钠水溶液(50mL)中，并将氯甲酸甲酯(4.0mL)的THF(50mL)溶液添加至其中。将反应混合物在环境条件下搅拌4.5小时并真空浓缩。将所得白色固体溶解在水中并用1N HCl酸化至pH值为约2‑3。用乙酸乙酯(3×100mL)萃取所得溶液，将合并的有机相干燥(Na₂SO₄)，过滤，并真空浓缩，得到无色油状物(2.58g)。500mg该物质经反相HPLC(H₂O/甲醇/TFA)纯化，得到150mg无色油状的Cap‑12。¹H NMR(DMSO‑d₆,δ=2.5,500MHz)7.44(d,J=7.3,0.8H),7.10(宽单峰，0.2H),3.97(m,1H),3.53(s,3H),1.25(d,J=7.3,3H)。
Cap‑13

将L‑丙氨酸(2.5g，28mmol)、甲醛(8.4g，37重量%)、1N HCl(30mL)和10%Pd/C(500mg)在甲醇(30mL)中的混合物在氢气气氛(50psi)下搅拌5小时。通过硅藻土过滤反应混合物并真空浓缩滤液，得到油状的Cap‑13的HCl盐，其在真空下静置之后固化(4.4g；该质量高于理论收率)。该产物不经进一步纯化就使用。¹H NMR(DMSO‑d₆,δ=2.5,500MHz)δ12.1(宽单峰，1H),4.06(q,J=7.4,1H),2.76(s,6H),1.46(d,J=7.3,3H)。
Cap‑14

步骤1：在0℃，在甲醇中搅拌(R)‑(‑)‑D‑苯基甘氨酸叔丁酯(3.00g，12.3mmol)、NaBH₃CN(0.773g，12.3mmol)、KOH(0.690g，12.3mmol)和乙酸(0.352mL，6.15mmol)的混合物。向该混合物中经5分钟滴加戊二醛(2.23mL，12.3mmol)。搅拌反应混合物，同时使其温热至环境温度，然后在相同温度继续搅拌16小时。随后除去溶剂并将残余物用10%NaOH水溶液和乙酸乙酯分配。将有机相分离，干燥(MgSO₄)，过滤并浓缩至干，得到透明油状物。经反相制备性HPLC(Primesphere C‑18，30×100mm；CH₃CN‑H₂O‑0.1%TFA)纯化该物质，得到透明油状的中间体酯(2.70g，56%)。¹H NMR(400MHz,CDCl₃)δ7.53‑7.44(m,3H),7.40‑7.37(m,2H),3.87(d,J=10.9Hz,1H),3.59(d,J=10.9Hz,1H),2.99(t,J=11.2Hz,1H),2.59(t,J=11.4Hz,1H),2.07‑2.02(m,2H),1.82(d,J=1.82Hz,3H),1.40(s,9H)。LC/MS:C₁₇H₂₅NO₂的分析计算值为275；实验值为276(M+H)⁺。
步骤2：向中间体酯(1.12g，2.88mmol)在二氯甲烷(10mL)中的搅拌着的溶液中添加TFA(3mL)。将反应混合物在环境温度搅拌4小时，随后将其浓缩至干，得到浅黄色油状物。该油状物使用反相制备性HPLC(Primesphere C‑18，30×100mm；CH₃CN‑H₂O‑0.1%TFA)来纯化。合并适当的级份并真空浓缩至干。随后将残余物溶解在最小量的甲醇中且加载于MCX LP萃取柱(2×6g)上。用甲醇(40mL)冲洗柱，随后使用2M氨/甲醇(50mL)洗脱期望的化合物。合并含有产物的级份且浓缩，然后将残余物吸收在水中。将该溶液冻干，得到浅黄色固体状的标题化合物(0.492g，78%)。¹H NMR(DMSO‑d₆)δ7.50(s,5H),5.13(s,1H),3.09(宽单峰，2H),2.92‑2.89(m,2H),1.74(m,4H),1.48(宽单峰，2H)。LC/MS:C₁₃H₁₇NO₂的分析计算值为219；实验值为220(M+H)⁺。
Cap‑15

步骤1：2‑溴‑2‑苯基乙酸(S)‑1‑苯基乙基酯：向α‑溴苯基乙酸(10.75g，0.050mol)、(S)‑(‑)‑1‑苯基乙醇(7.94g，0.065mol)和DMAP(0.61g，5.0mmol)在无水二氯甲烷(100mL)中的混合物中一次性添加固体EDCI(12.46g，0.065mol)。将所得溶液在室温在氩气下搅拌18小时，随后将其用乙酸乙酯稀释，洗涤(H₂O×2，盐水)，干燥(Na₂SO₄)，过滤并浓缩，得到浅黄色油状物。对该油状物进行快速色谱(SiO₂/己烷‑乙酸乙酯，4:1)，得到白色固体状的标题化合物(11.64g，73%)。¹H NMR(400MHz,CDCl₃)δ7.53‑7.17(m,10H),5.95(q,J=6.6Hz,0.5H),5.94(q,J=6.6Hz,0.5H),5.41(s,0.5H),5.39(s,0.5H),1.58(d,J=6.6Hz,1.5H),1.51(d,J=6.6Hz,1.5H)。
步骤2：(R)‑2‑(4‑羟基‑4‑甲基哌啶‑1‑基)‑2‑苯基乙酸(S)‑1‑苯基乙基酯：向2‑溴‑2‑苯基乙酸(S)‑1‑苯基乙基酯(0.464g，1.45mmol)在THF(8mL)中的溶液中添加三乙胺(0.61mL，4.35mmol)，继而添加碘化四丁基铵(0.215g，0.58mmol)。将反应混合物在室温搅拌5分钟，随后添加4‑甲基‑4‑羟基哌啶(0.251g，2.18mmol)在THF(2mL)中的溶液。将混合物在室温搅拌1小时，随后将其在55‑60℃(油浴温度)加热4小时。随后将冷却的反应混合物用乙酸乙酯(30mL)稀释，洗涤(H₂O×2，盐水)，干燥(MgSO₄)，过滤并浓缩。残余物经硅胶色谱(0‑60%乙酸乙酯/己烷)纯化，首先得到白色固体状的标题化合物的(S,R)‑异构体(0.306g，60%)，随后得到相应(S,S)‑异构体(0.120g，23%)，也为白色固体。(S,R)‑异构体：¹H NMR(CD₃OD)δ7.51‑7.45(m,2H),7.41‑7.25(m,8H),5.85(q,J=6.6Hz,1H),4.05(s,1H),2.56‑2.45(m,2H),2.41‑2.29(m,2H),1.71‑1.49(m,4H),1.38(d,J=6.6Hz,3H),1.18(s,3H)。LCMS：C₂₂H₂₇NO₃的分析计算值为353；实验值为354(M+H)⁺。(S,S)‑异构体：¹H NMR(CD₃OD)δ7.41‑7.30(m,5H),7.20‑7.14(m,3H),7.06‑7.00(m,2H),5.85(q,J=6.6Hz,1H),4.06(s,1H),2.70‑2.60(m,1H),2.51(dt,J=6.6,3.3Hz,1H),2.44‑2.31(m,2H),1.75‑1.65(m,1H),1.65‑1.54(m,3H),1.50(d,J=6.8Hz,3H),1.20(s,3H)。LCMS：C₂₂H₂₇NO₃的分析计算值为353；实验值为354(M+H)⁺。
步骤3：(R)‑2‑(4‑羟基‑4‑甲基哌啶‑1‑基)‑2‑苯基乙酸：向(R)‑2‑(4‑羟基‑4‑甲基哌啶‑1‑基)‑2‑苯基乙酸(S)‑1‑苯基乙基酯(0.185g，0.52mmol)在二氯甲烷(3mL)中的溶液中添加三氟乙酸(1mL)并将混合物在室温搅拌2小时。随后真空除去挥发物并将残余物经反相制备性HPLC(Primesphere C‑18，20×100mm；CH₃CN‑H₂O‑0.1%TFA)纯化，得到浅蓝色固体状的标题化合物(TFA盐形式)(0.128g，98%)。LCMS：C₁₄H₁₉NO₃的分析计算值为249；实验值为250(M+H)⁺。
Cap‑16

步骤1：2‑(2‑氟苯基)乙酸(S)‑1‑苯基乙基酯：将2‑氟苯基乙酸(5.45g，35.4mmol)、(S)‑1‑苯基乙醇(5.62g，46.0mmol)、EDCI(8.82g，46.0mmol)和DMAP(0.561g，4.60mmol)在CH₂Cl₂(100mL)中的混合物在室温搅拌12小时。随后浓缩溶剂并用H₂O‑乙酸乙酯分配残余物。分离各相并用乙酸乙酯(2×)反萃取水层。将合并的有机相洗涤(H₂O，盐水)，干燥(Na₂SO₄)，过滤并真空浓缩。经硅胶色谱(Biotage/0‑20%乙酸乙酯/己烷)纯化残余物，得到无色油状的标题化合物(8.38g，92%)。¹H NMR(400MHz,CD₃OD)δ7.32‑7.23(m,7H),7.10‑7.04(m,2),5.85(q,J=6.5Hz,1H),3.71(s,2H),1.48(d,J=6.5Hz,3H)。
步骤2：(R)‑2‑(2‑氟苯基)‑2‑(哌啶‑1‑基)乙酸(S)‑1‑苯基乙基酯：在0℃向2‑(2‑氟苯基)乙酸(S)‑1‑苯基乙基酯(5.00g，19.4mmol)在THF(1200mL)中的溶液中添加DBU(6.19g，40.7mmol)并将溶液温热至室温，同时搅拌30分钟。随后将溶液冷却至‑78℃且添加CBr₄(13.5g，40.7mmol)在THF(100mL)中的溶液，然后将混合物温热至‑10℃且在该温度搅拌2小时。用饱和NH₄Cl水溶液淬灭反应混合物，然后分离各层。用乙酸乙酯(2×)反萃取水层，然后将合并的有机相洗涤(H₂O，盐水)，干燥(Na₂SO₄)，过滤并真空浓缩。向残余物中添加哌啶(5.73mL，58.1mmol)并将溶液在室温搅拌24小时。随后真空浓缩挥发物，且经硅胶色谱(Biotage/0‑30%乙醚/己烷)纯化残余物，得到黄色油状的非对映异构体的纯混合物(通过¹H NMR测得比率为2:1)(2.07g，31%)以及未反应的原料(2.53g，51%)。进一步对非对映异构混合物进行色谱纯化(Biotage/0‑10%乙醚‑甲苯)，得到无色油状的标题化合物(0.737g，11%)。¹H NMR(400MHz,CD₃OD)δ7.52(ddd,J=9.4,7.6,1.8Hz,1H),7.33‑7.40(m,1),7.23‑7.23(m,4H),7.02‑7.23(m,4H),5.86(q,J=6.6Hz,1H),4.45(s,1H),2.39‑2.45(m,4H),1.52‑1.58(m,4H),1.40‑1.42(m,1H),1.38(d,J=6.6Hz,3H)。LCMS：C₂₁H₂₄FNO₂的分析计算值为341；实验值为342(M+H)⁺。
步骤3：(R)‑2‑(2‑氟苯基)‑2‑(哌啶‑1‑基)乙酸：将(R)‑2‑(2‑氟苯基)‑2‑(哌啶‑1‑基)乙酸(S)‑1‑苯基乙基酯(0.737g，2.16mmol)和20%Pd(OH)₂/C(0.070g)在乙醇(30mL)中的混合物在室温和大气压力(H₂气囊)条件下氢化2小时。随后将溶液用氩气吹洗，通过硅藻土过滤并真空浓缩。这得到无色固体状的标题化合物(0.503g，98%)。¹H NMR(400MHz,CD₃OD)δ7.65(ddd,J=9.1,7.6,1.5Hz,1H),7.47‑7.53(m,1H),7.21‑7.30(m,2H),3.07‑3.13(m,4H),1.84(宽单峰，4H),1.62(宽单峰，2H)。LCMS：C₁₃H₁₆FNO₂的分析计算值为237；实验值为238(M+H)⁺。
Cap‑17

步骤1：(R)‑2‑(4‑羟基‑4‑苯基哌啶‑1‑基)‑2‑苯基乙酸(S)‑1‑苯基乙基酯：向2‑溴‑2‑苯基乙酸(S)‑1‑苯基乙基酯(1.50g，4.70mmol)在THF(25mL)中的溶液中添加三乙胺(1.31mL，9.42mmol)，继而添加碘化四丁基铵(0.347g，0.94mmol)。将反应混合物在室温搅拌5分钟，随后添加4‑苯基‑4‑羟基哌啶(1.00g，5.64mmol)在THF(5mL)中的溶液。将混合物搅拌16小时，随后将其用乙酸乙酯(100mL)稀释，洗涤(H₂O×2，盐水)，干燥(MgSO₄)，过滤并浓缩。在硅胶柱(0‑60%乙酸乙酯/己烷)上纯化残余物，得到非对映异构体的约2:1混合物(通过¹H NMR判断)。使用超临界流体色谱(SFC)(Chiralcel OJ‑H，30×250mm；20%乙醇/CO₂，35℃)进行这些异构体的分离，首先得到黄色油状的标题化合物的(R)‑异构体(0.534g，27%)，随后得到相应(S)‑异构体(0.271g，14%)，也为黄色油状。(S,R)‑异构体：¹H NMR(400MHz,CD₃OD)δ7.55‑7.47(m,4H),7.44‑7.25(m,10H),7.25‑7.17(m,1H),5.88(q,J=6.6Hz,1H),4.12(s,1H),2.82‑2.72(m,1H),2.64(dt,J=11.1,2.5Hz,1H),2.58‑2.52(m,1H),2.40(dt,J=11.1,2.5Hz,1H),2.20(dt,J=12.1,4.6Hz,1H),2.10(dt,J=12.1,4.6Hz,1H),1.72‑1.57(m,2H),1.53(d,J=6.5Hz,3H)。LCMS：C₂₇H₂₉NO₃的分析计算值为415；实验值为416(M+H)⁺；(S,S)‑异构体：H¹NMR(400MHz,CD₃OD)δ7.55‑7.48(m,2H),7.45‑7.39(m,2H),7.38‑7.30(m,5H),7.25‑7.13(m,4H),7.08‑7.00(m,2H),5.88(q,J=6.6Hz,1H),4.12(s,1H),2.95‑2.85(m,1H),2.68(dt,J=11.1,2.5Hz,1H),2.57‑2.52(m,1H),2.42(dt,J=11.1,2.5Hz,1H),2.25(dt,J=12.1,4.6Hz,1H),2.12(dt,J=12.1,4.6Hz,1H),1.73(dd,J=13.6,3.0Hz,1H),1.64(dd,J=13.6,3.0Hz,1H),1.40(d,J=6.6Hz,3H)。LCMS：C₂₇H₂₉NO₃的分析计算值为415；实验值为416(M+H)⁺。
以类似方式制备以下酯：

用于测定保留时间的手性SFC条件如下：
条件I
柱：Chiralpak AD‑H柱，4.62×50mm，5μm
溶剂：含有0.1%DEA的90%CO₂/10%甲醇
温度：35℃
压力：150巴
流速：2.0mL/min
UV：在220nm监测
注射液：1.0毫克/3毫升甲醇
条件II
柱：Chiralcel OD‑H柱，4.62×50mm，5μm
溶剂：含有0.1%DEA的90%CO₂/10%甲醇
温度：35℃
压力：150巴
流速：2.0mL/min。
UV：在220nm监测
注射液：1.0毫克/毫升甲醇
Cap17，步骤2：(R)‑2‑(4‑羟基‑4‑苯基哌啶‑1‑基)‑2‑苯基乙酸：向(R)‑2‑(4‑羟基‑4‑苯基哌啶‑1‑基)‑2‑苯基乙酸(S)‑1‑苯基乙基酯(0.350g，0.84mmol)在二氯甲烷(5mL)中的溶液中添加三氟乙酸(1mL)并将混合物在室温搅拌2小时。随后真空除去挥发物且经反相制备性HPLC(Primesphere C‑18，20×100mm；CH₃CN‑H₂O‑0.1%TFA)纯化残余物，得到白色固体状的标题化合物(TFA盐形式)(0.230g，88%)。LCMS：C₁₉H₂₁NO₃的分析计算值为311.15；实验值为312(M+H)⁺。
以类似方式制备光学纯形式的以下羧酸：

用于测定保留时间的LCMS条件如下：
条件I
柱：Phenomenex‑Luna4.6×50mm S10
起始%B=0
最终%B=100
梯度时间=4min
流速=4mL/min
波长=220
溶剂A=10%甲醇‑90%H₂O‑0.1%TFA
溶剂B=90%甲醇‑10%H₂O‑0.1%TFA
条件II
柱：Waters‑Sunfire4.6×50mm S5
起始%B=0
最终%B=100
梯度时间=2min
流速=4mL/min
波长=220
溶剂A=10%甲醇‑90%H₂O‑0.1%TFA
溶剂B=90%甲醇‑10%H₂O‑0.1%TFA
条件III
柱：Phenomenex10μ3.0×50mm
起始%B=0
最终%B=100
梯度时间=2min
流速=4mL/min
波长=220
溶剂A=10%甲醇‑90%H₂O‑0.1%TFA
溶剂B=90%甲醇‑10%H₂O‑0.1%TFA
Cap‑18

步骤1：(R,S)‑2‑(4‑吡啶基)‑2‑溴乙酸乙酯：在0℃，在氩气下向4‑吡啶基乙酸乙酯(1.00g，6.05mmol)在无水THF(150mL)中的溶液中添加DBU(0.99mL，6.66mmol)。将反应混合物经30分钟温热至室温，随后将其冷却至‑78℃。向该混合物中添加CBr₄(2.21g，6.66mmol)且在‑78℃继续搅拌2小时。随后将反应混合物用饱和NH₄Cl水溶液淬灭且分离各相。将有机相洗涤(盐水)，干燥(Na₂SO₄)，过滤并真空浓缩。所得黄色油状物立即经快速色谱(SiO₂/己烷‑乙酸乙酯，1:1)纯化，得到略不稳定的黄色油状标题化合物(1.40g，95%)。¹H NMR(400MHz,CDCl₃)δ8.62(dd,J=4.6,1.8Hz,2H),7.45(dd,J=4.6,1.8Hz,2H),5.24(s,1H),4.21‑4.29(m,2H),1.28(t,J=7.1Hz,3H)。LCMS：C₉H₁₀BrNO₂的分析计算值为242,244；实验值为243,245(M+H)⁺。
步骤2：(R,S)‑2‑(4‑吡啶基)‑2‑(N,N‑二甲基氨基)乙酸乙酯：在室温向(R,S)‑2‑(4‑吡啶基)‑2‑溴乙酸乙酯(1.40g，8.48mmol)在DMF(10mL)中的溶液中添加二甲胺(浓度为2M的THF溶液，8.5mL，17.0mmol)。在完成反应(通过薄层色谱判断)之后，真空除去挥发物并将残余物经快速色谱(Biotage，40+M SiO₂柱；50%‑100%乙酸乙酯‑己烷)纯化，得到浅黄色油状的标题化合物(0.539g，31%)。¹H NMR(400MHz,CDCl₃)δ8.58(d,J=6.0Hz,2H),7.36(d,J=6.0Hz,2H),4.17(m,2H),3.92(s,1H),2.27(s,6H),1.22(t,J=7.0Hz)。LCMS：C₁₁H₁₆N₂O₂的分析计算值为：208；实验值为209(M+H)⁺。
步骤3：(R,S)‑2‑(4‑吡啶基)‑2‑(N,N‑二甲基氨基)乙酸：在室温向(R,S)‑2‑(4‑吡啶基)‑2‑(N,N‑二甲基氨基)乙酸乙酯(0.200g，0.960mmol)在THF‑甲醇‑H₂O(1:1:1，6mL)的混合物中的溶液中添加粉状LiOH(0.120g，4.99mmol)。将溶液搅拌3小时，随后使用1N HCl将其酸化至pH值为6。用乙酸乙酯洗涤水相，随后将其冻干，得到黄色固体状的标题化合物的二盐酸盐(含有LiCl)。将产物按原样用于后续步骤中。¹H NMR(400MHz,DMSO‑d₆)δ8.49(d,J=5.7Hz,2H),7.34(d,J=5.7Hz,2H),3.56(s,1H),2.21(s,6H)。
以类似方式使用上述方法制备以下实施例：

Cap‑37

步骤1：(R,S)‑2‑(喹啉‑3‑基)‑2‑(N,N‑二甲基氨基)‑乙酸乙酯：将N,N‑二甲基氨基乙酸乙酯(0.462g，3.54mmol)、K₃PO₄(1.90g，8.95mmol)、Pd(t‑Bu₃P)₂(二(三叔丁基膦)钯)(0.090g，0.176mmol)和甲苯(10mL)的混合物用氩气鼓泡气流脱气15分钟。随后将反应混合物在100℃加热12小时，之后将其冷却至室温且倒入H₂O中。用乙酸乙酯(2×)萃取混合物，将合并的有机相洗涤(H₂O，盐水)，干燥(Na₂SO₄)，过滤并真空浓缩。残余物首先经反相制备性HPLC(Primesphere C‑18，30×100mm；CH₃CN‑H₂O‑5mM NH₄OAc)纯化，随后经快速色谱(SiO₂/己烷‑乙酸乙酯，1:1)纯化，得到橙色油状的标题化合物(0.128g，17%)。¹H NMR(400MHz,CDCl₃)δ8.90(d,J=2.0Hz,1H),8.32(d,J=2.0Hz,1H),8.03‑8.01(m,2H),7.77(ddd,J=8.3,6.8,1.5Hz,1H),7.62(ddd,J=8.3,6.8,1.5Hz,1H),4.35(s,1H),4.13(m,2H),2.22(s,6H),1.15(t,J=7.0Hz,3H)。LCMS：C₁₅H₁₈N₂O₂的分析计算值为258；实验值为259(M+H)⁺。
步骤2：(R,S)‑2‑(喹啉‑3‑基)‑2‑(N,N‑二甲基氨基)乙酸：将(R,S)‑2‑(喹啉‑3‑基)‑2‑(N,N‑二甲基氨基)乙酸乙酯(0.122g，0.472mmol)和6M HCl(3mL)的混合物在100℃加热12小时。真空除去溶剂，得到浅黄色泡沫状的标题化合物的二盐酸盐(0.169g，>100%)。该未经纯化的物质不经进一步纯化就用于后续步骤中。LCMS：C₁₃H₁₄N₂O₂的分析计算值为230；实验值为231(M+H)⁺。
Cap‑38

步骤1：(R)‑2‑(二甲基氨基)‑2‑(2‑氟苯基)乙酸(S)‑1‑苯基乙基酯和(S)‑2‑(二甲基氨基)‑2‑(2‑氟苯基)乙酸(S)‑1‑苯基乙基酯：向(R,S)‑2‑(二甲基氨基)‑2‑(2‑氟苯基)乙酸(2.60g，13.19mmol)、DMAP(0.209g，1.71mmol)和(S)‑1‑苯基乙醇(2.09g，17.15mmol)在CH₂Cl₂(40mL)中的混合物中添加EDCI(3.29g，17.15mmol)，并将混合物在室温搅拌12小时。随后真空除去溶剂并用乙酸乙酯‑H₂O分配残余物。分离各层，用乙酸乙酯(2×)反萃取水层并将合并的有机相洗涤(H₂O，盐水)，干燥(Na₂SO₄)，过滤并真空浓缩。残余物经硅胶色谱(Biotage/0‑50%乙醚‑己烷)纯化。然后所得纯非对映异构混合物经反相制备性HPLC(Primesphere C‑18，30×100mm；CH₃CN‑H₂O‑0.1%TFA)分离，首先得到(R)‑2‑(二甲基氨基)‑2‑(2‑氟苯基)乙酸(S)‑1‑苯乙酯(0.501g，13%)，随后得到(S)‑2‑(二甲基氨基)‑2‑(2‑氟苯基)乙酸(S)‑1‑苯乙酯(0.727g，18%)，两者均为其TFA盐形式。(S,R)‑异构体：¹H NMR(400MHz,CD₃OD)δ7.65‑7.70(m,1H),7.55‑7.60(ddd,J=9.4,8.1,1.5Hz,1H),7.36‑7.41(m,2H),7.28‑7.34(m,5H),6.04(q,J=6.5Hz,1H),5.60(s,1H),2.84(s,6H),1.43(d,J=6.5Hz,3H)。LCMS：C₁₈H₂₀FNO₂的分析计算值为301；实验值为302(M+H)⁺；(S,S)‑异构体：¹H NMR(400MHz,CD₃OD)δ7.58‑7.63(m,1H),7.18‑7.31(m,6H),7.00(dd,J=8.5,1.5Hz,2H),6.02(q,J=6.5Hz,1H),5.60(s,1H),2.88(s,6H),1.54(d,J=6.5Hz,3H)。LCMS：C₁₈H₂₀FNO₂的分析计算值为301；实验值为302(M+H)⁺。
步骤2：(R)‑2‑(二甲基氨基)‑2‑(2‑氟苯基)乙酸：使(R)‑2‑(二甲基氨基)‑2‑(2‑氟苯基)乙酸(S)‑1‑苯基乙基酯的TFA盐(1.25g，3.01mmol)和20%Pd(OH)₂/C(0.125g)在乙醇(30mL)中的混合物在室温和大气压力(H₂气囊)条件下氢化4小时。随后将溶液用氩气吹洗，通过硅藻土过滤并真空浓缩。这得到无色固体状的标题化合物(0.503g，98%)。¹H NMR(400MHz,CD₃OD)δ7.53‑7.63(m,2H),7.33‑7.38(m,2H),5.36(s,1H),2.86(s,6H)。LCMS：C₁₀H₁₂FNO₂的分析计算值为197；实验值为198(M+H)⁺。
可用类似方式由(S)‑2‑(二甲基氨基)‑2‑(2‑氟苯基)乙酸(S)‑1‑苯基乙基酯的TFA盐获得S‑异构体。
Cap‑39

将(R)‑(2‑氯苯基)甘氨酸(0.300g，1.62mmol)、甲醛(35%水溶液，0.80mL，3.23mmol)和20%Pd(OH)₂/C(0.050g)的混合物在室温和大气压力(H₂气囊)条件下氢化4小时。随后将溶液用氩气吹洗，通过硅藻土过滤并真空浓缩。残余物经反相制备性HPLC(Primesphere C‑18，30×100mm；CH₃CN‑H₂O‑0.1%TFA)纯化，得到无色油状的标题化合物(R)‑2‑(二甲基氨基)‑2‑(2‑氯苯基)乙酸的TFA盐(0.290g，55%)。¹H NMR(400MHz,CD₃OD)δ7.59‑7.65(m,2H),7.45‑7.53(m,2H),5.40(s,1H),2.87(s,6H)。LCMS：C₁₀H₁₂ClNO₂的分析计算值为213；实验值为214(M+H)⁺。
Cap‑40

向(R)‑(2‑氯苯基)甘氨酸(1.00g，5.38mmol)和NaOH(0.862g，21.6mmol)在H₂O(5.5mL)中的冰冷溶液中滴加氯甲酸甲酯(1.00mL，13.5mmol)。将混合物在0℃搅拌1小时，随后通过添加浓HCl(2.5mL)将其酸化。用乙酸乙酯(2×)萃取混合物，将合并的有机相洗涤(H₂O，盐水)，干燥(Na₂SO₄)，过滤并真空浓缩，得到黄橙色泡沫状的标题化合物(R)‑2‑(甲氧基羰基氨基)‑2‑(2‑氯苯基)乙酸(1.31g，96%)。¹H NMR(400MHz,CD₃OD)δ7.39‑7.43(m,2H),7.29‑7.31(m,2H),5.69(s,1H),3.65(s,3H)。LCMS：C₁₀H₁₀ClNO₄的分析计算值为243；实验值为244(M+H)⁺。
Cap‑41

向2‑(2‑(氯甲基)苯基)乙酸(2.00g，10.8mmol)在THF(20mL)中的悬浮液中添加吗啉(1.89g，21.7mmol)，并将溶液在室温搅拌3小时。随后将反应混合物用乙酸乙酯稀释并用H₂O(2×)萃取。将水相冻干，残余物经硅胶色谱(Biotage/0‑10%甲醇‑CH₂Cl₂)纯化，得到无色固体状的标题化合物2‑(2‑(吗啉代甲基)苯基)乙酸(2.22g，87%)。¹H NMR(400MHz,CD₃OD)δ7.37‑7.44(m,3H),7.29‑7.33(m,1H),4.24(s,2H),3.83(宽单峰，4H),3.68(s,2H),3.14(宽单峰，4H)。LCMS：C₁₃H₁₇NO₃的分析计算值为235；实验值为236(M+H)⁺。
使用对Cap‑41所述的方法类似地制备以下实施例：

Cap‑45a

将HMDS(1.85mL，8.77mmol)添加至(R)‑2‑氨基‑2‑苯基乙酸对甲苯磺酸盐(2.83g，8.77mmol)在CH₂Cl₂(10mL)中的悬浮液中并将混合物在室温搅拌30分钟。一次性添加异氰酸甲酯(0.5g，8.77mmol)，并继续搅拌30分钟。通过添加H₂O(5mL)淬灭反应混合物并将所得沉淀物过滤，用H₂O和正己烷洗涤，并真空干燥。回收白色固体状的(R)‑2‑(3‑甲基脲基)‑2‑苯基乙酸(1.5g；82%)，其不经进一步纯化就使用。¹H NMR(500MHz,DMSO‑d₆)δppm2.54(d,J=4.88Hz,3H)5.17(d,J=7.93Hz,1H)5.95(q,J=4.48Hz,1H)6.66(d,J=7.93Hz,1H)7.26‑7.38(m,5H)12.67(s,1H)。LCMS：C₁₀H₁₂N₂O₃的分析计算值为208.08；实验值为209.121(M+H)⁺；HPLC Phenomenex C‑183.0×46mm，历经2分钟从0至100%B，保持时间为1分钟，A=90%水，10%甲醇，0.1%TFA，B=10%水，90%甲醇，0.1%TFA，R_t=1.38min，均一性指数为90%。
Cap‑46

根据对Cap‑45a所述的方法制备期望的产物。¹H NMR(500MHz,DMSO‑d₆)δppm0.96(t,J=7.17Hz,3H)2.94‑3.05(m,2H)5.17(d,J=7.93Hz,1H)6.05(t,J=5.19Hz,1H)6.60(d,J=7.63Hz,1H)7.26‑7.38(m,5H)12.68(s,1H)。LCMS：C₁₁H₁₄N₂O₃的分析计算值为222.10；实验值为223.15(M+H)⁺。HPLC XTERRA C‑183.0×506mm，历经2分钟从0至100%B，保持时间为1分钟，A=90%水，10%甲醇，0.2%H₃PO₄，B=10%水，90%甲醇，0.2%H₃PO₄，R_t=0.87min，均一性指数为90%。
Cap‑47

步骤1：(R)‑2‑(3,3‑二甲基脲基)‑2‑苯基乙酸叔丁酯：向(R)‑2‑氨基‑2‑苯基乙酸叔丁酯(1.0g，4.10mmol)和许尼希氏碱(1.79mL，10.25mmol)在DMF(40mL)中的搅拌着的溶液中经10分钟滴加二甲基氨基甲酰氯(0.38mL，4.18mmol)。在室温搅拌3小时之后，减压浓缩反应混合物并将所得残余物溶解在乙酸乙酯中。将有机层用H₂O、1N HCl水溶液和盐水洗涤，干燥(MgSO₄)，过滤并减压浓缩。得到白色固体状的(R)‑2‑(3,3‑二甲基脲基)‑2‑苯基乙酸叔丁酯(0.86g；75%)，其不经进一步纯化就使用。¹H NMR(500MHz,DMSO‑d₆)δppm1.33(s,9H)2.82(s,6H)5.17(d,J=7.63Hz,1H)6.55(d,J=7.32Hz,1H)7.24‑7.41(m,5H)。LCMS：C₁₅H₂₂N₂O₃的分析计算值为278.16；实验值为279.23(M+H)⁺；HPLC Phenomenex LUNA C‑184.6×50mm，历经4分钟从0至100%B，保持时间为1分钟，A=90%水，10%甲醇，0.1%TFA，B=10%水，90%甲醇，0.1%TFA，R_t=2.26min，均一性指数为97%。
步骤2：(R)‑2‑(3,3‑二甲基脲基)‑2‑苯基乙酸：向(R)‑2‑(3,3‑二甲基脲基)‑2‑苯基乙酸叔丁酯(0.86g，3.10mmol)在CH₂Cl₂(250mL)中的搅拌着的溶液中滴加TFA(15mL)并将所得溶液在室温搅拌3小时。随后用EtOAC:己烷(5:20)的混合物使期望的化合物从溶液沉淀出来，滤出并减压干燥。分离出白色固体状的(R)‑2‑(3,3‑二甲基脲基)‑2‑苯基乙酸(0.59g，86%)，其不经进一步纯化就使用。¹H NMR(500MHz,DMSO‑d₆)δppm2.82(s,6H)5.22(d,J=7.32Hz,1H)6.58(d,J=7.32Hz,1H)7.28(t,J=7.17Hz,1H)7.33(t,J=7.32Hz,2H)7.38‑7.43(m,2H)12.65(s,1H)。LCMS：C₁₁H₁₄N₂O₃的分析计算值为222.24；实验值为223.21(M+H)⁺。HPLC XTERRA C‑183.0×50mm，历经2分钟从0至100%B，保持时间为1分钟，A=90%水，10%甲醇，0.2%H₃PO₄，B=10%水，90%甲醇，0.2%H₃PO₄，R_t=0.75min，均一性指数为93%。
Cap‑48

步骤1：(R)‑2‑(3‑环戊基脲基)‑2‑苯基乙酸叔丁酯：向(R)‑2‑氨基‑2‑苯基乙酸盐酸盐(1.0g，4.10mmol)和许尼希氏碱(1.0mL，6.15mmol)在DMF(15mL)中的搅拌着的溶液中经10分钟滴加异氰酸环戊酯(0.46mL，4.10mmol)。在室温搅拌3小时之后，减压浓缩反应混合物并将所得残余物吸收在乙酸乙酯中。将有机层用H₂O和盐水洗涤，干燥(MgSO₄)，过滤并减压浓缩。得到不透明油状的(R)‑2‑(3‑环戊基脲基)‑2‑苯基乙酸叔丁酯(1.32g；100%)，其不经进一步纯化就使用。¹H NMR(500MHz,CD₃Cl‑D)δppm1.50‑1.57(m,2H)1.58‑1.66(m,2H)1.87‑1.97(m,2H)3.89‑3.98(m,1H)5.37(s,1H)7.26‑7.38(m,5H)。LCMS：C₁₈H₂₆N₂O₃的分析计算值为318.19；实验值为319.21(M+H)⁺；HPLC XTERRA C‑183.0×50mm，历经4分钟从0至100%B，保持时间为1分钟，A=90%水，10%甲醇，0.1%TFA，B=10%水，90%甲醇，0.1%TFA，R_t=2.82min，均一性指数为96%。
步骤2：(R)‑2‑(3‑环戊基脲基)‑2‑苯基乙酸：向(R)‑2‑(3‑环戊基脲基)‑2‑苯基乙酸叔丁酯(1.31g，4.10mmol)在CH₂Cl₂(25mL)中的搅拌着的溶液中滴加TFA(4mL)和三乙基甲硅烷(1.64mL；10.3mmol)，并将所得溶液在室温搅拌6小时。减压除去挥发性组分并使粗产物在乙酸乙酯/戊烷中重结晶，得到白色固体状的(R)‑2‑(3‑环戊基脲基)‑2‑苯基乙酸(0.69g，64%)。¹H NMR(500MHz,DMSO‑d₆)δppm1.17‑1.35(m,2H)1.42‑1.52(m,2H)1.53‑1.64(m,2H)1.67‑1.80(m,2H)3.75‑3.89(m,1H)5.17(d,J=7.93Hz,1H)6.12(d,J=7.32Hz,1H)6.48(d,J=7.93Hz,1H)7.24‑7.40(m,5H)12.73(s,1H)。LCMS：C₁₄H₁₈N₂O₃的分析计算值为262.31；实验值为263.15(M+H)⁺。HPLC XTERRA C‑183.0×50mm，历经2分钟从0至100%B，保持时间为1分钟，A=90%水，10%甲醇，0.2%H₃PO₄，B=10%水，90%甲醇，0.2%H₃PO₄，R_t=1.24min，均一性指数为100%。
Cap‑49

向2‑(苯甲基氨基)乙酸(2.0g，12.1mmol)在甲酸(91mL)中的搅拌着的溶液中添加甲醛(6.94mL，93.2mmol)。在70℃搅拌5小时之后，将反应混合物减压浓缩至20mL，沉淀出白色固体。过滤之后，将母液收集并进一步减压浓缩，得到粗产物。经反相制备性HPLC(Xterra30×100mm，在220nm检测，流速为35mL/min，历经8min从0至35%B；A=90%水，10%甲醇，0.1%TFA，B=10%水，90%甲醇，0.1%TFA)纯化，得到无色蜡状的TFA盐形式的标题化合物2‑(苯甲基(甲基)‑氨基)乙酸(723mg，33%)。¹H NMR(300MHz,DMSO‑d₆)δppm2.75(s,3H)4.04(s,2H)4.34(s,2H)7.29‑7.68(m,5H)。LCMS：C₁₀H₁₃NO₂的分析计算值为179.09；实验值为180.20(M+H)⁺。
Cap‑50

向3‑甲基‑2‑(甲基氨基)丁酸(0.50g，3.81mmol)在水(30mL)中的搅拌着的溶液中添加K₂CO₃(2.63g，19.1mmol)和苯甲基氯(1.32g，11.4mmol)。将反应混合物在环境温度搅拌18小时。用乙酸乙酯(30mL×2)萃取反应混合物并将水层减压浓缩，得到粗产物，其经反相制备性HPLC(Xterra30×100mm，在220nm检测，流速为40mL/min，历经6min从20至80%B；A=90%水，10%甲醇，0.1%TFA，B=10%水，90%甲醇，0.1%TFA)纯化，得到无色蜡状的2‑(苯甲基(甲基)氨基)‑3‑甲基丁酸的TFA盐(126mg，19%)。¹H NMR(500MHz,DMSO‑d₆)δppm0.98(d,3H)1.07(d,3H)2.33‑2.48(m,1H)2.54‑2.78(m,3H)3.69(s,1H)4.24(s,2H)7.29‑7.65(m,5H)。LCMS：C₁₃H₁₉NO₂的分析计算值为221.14；实验值为222.28(M+H)⁺。
Cap‑51

将Na₂CO₃(1.83g，17.2mmol)添加至L‑缬氨酸(3.9g，33.29mmol)的NaOH(33mL浓度为1M的水溶液，33mmol)溶液中并用冰水浴冷却所得溶液。经15分钟滴加氯甲酸甲酯(2.8mL，36.1mmol)，移开冷却浴并将反应混合物在环境温度搅拌3.25hr。用乙醚(50mL，3×)洗涤反应混合物，并将水相用冰水浴冷却并用浓HCl酸化至1‑2的pH值范围，并用CH₂Cl₂(50mL，3×)萃取。将有机相干燥(MgSO₄)并真空蒸发，得到白色固体状的Cap‑51(6g)。占优势的旋转异构体的¹H NMR(DMSO‑d₆,δ=2.5ppm,500MHz):12.54(s,1H),7.33(d,J=8.6,1H),3.84(dd,J=8.4,6.0,1H),3.54(s,3H),2.03(m,1H),0.87(m,6H)。HRMS:[M+H]⁺C₇H₁₄NO₄的分析计算值为176.0923；实验值为176.0922。
Cap51(替代途径)

将DIEA(137.5毫升，0.766摩尔)添加至(S)‑2‑氨基‑3‑甲基丁酸叔‑丁酯盐酸盐(75.0克，0.357摩尔)在THF(900毫升)中的悬浮液内，并使混合物冷却至0℃(冰/水浴)。逐滴添加氯甲酸甲酯(29.0毫升，0.375摩尔)，历经45分钟，除去冷却浴，并将非均相混合物在环境温度搅拌3小时。在减压下除去溶剂，并使残留物在EtOAc和水(各1升)之间分配。将有机层用H₂O(1升)和盐水(1升)洗涤，干燥(MgSO₄)，过滤，并在减压下浓缩。将粗物质通过硅胶(1公斤)充填柱，用己烷(4升)和15:85EtOAc/己烷(4升)洗脱，得到(S)‑2‑(甲氧基羰基氨基)‑3‑甲基丁酸叔‑丁酯，为透明油状物(82.0克，99%产率)。¹H‑NMR(500MHz,DMSO‑d₆,δ=2.5ppm)7.34(d,J=8.6,1H),3.77(dd,J=8.6,6.1,1H),3.53(s,3H),1.94‑2.05(m,1H),1.39(s,9H),0.83‑0.92(m,6H).¹³C‑NMR(126MHz,DMSO‑d₆,δ=39.2ppm)170.92,156.84,80.38,60.00,51.34,29.76,27.62,18.92,17.95.LC/MS：[M+Na]⁺254.17。
将三氟乙酸(343毫升，4.62摩尔)和Et₃SiH(142毫升，0.887摩尔)相继添加至(S)‑2‑(甲氧基羰基氨基)‑3‑甲基丁酸叔‑丁酯(82.0克，0.355摩尔)在CH₂Cl₂(675毫升)中的溶液内，并将混合物在环境温度搅拌4小时。在减压下除去挥发性成份，并将所得油状物用石油醚(600毫升)研磨，得到白色固体，将其过滤，并用己烷(500毫升)和石油醚(500毫升)洗涤。从EtOAc/石油醚重结晶，得到Cap‑51，为白色片状结晶(54.8克，88%产率)。熔点=108.5‑109.5℃。¹H NMR(500MHz,DMSO‑d₆,δ=2.5ppm)12.52(s,1H),7.31(d,J=8.6,1H),3.83(dd,J=8.6,6.1,1H),3.53(s,3H),1.94‑2.07(m,1H),0.86(dd,J=8.9,7.0,6H).¹³C NMR(126MHz,DMSO‑d₆,δ=39.2ppm)173.30,156.94,59.48,51.37,29.52,19.15,17.98.LC/MS：[M+H]⁺=176.11.C₇H₁₃NO₄的分析计算值：C,47.99；H,7.48；N,7.99.实验值：C,48.17；H,7.55；N,7.99.旋光度：[α]D=‑4.16(12.02毫克/毫升；MeOH).光学纯度：>99.5%ee。注：光学纯度评估在Cap‑51的甲酯衍生物上实施，该衍生物在标准TMSCHN₂(苯/MeOH)酯化规程下制成。HPLC分析条件：柱，ChiralPak AD‑H(4.6x250毫米，5微米)；溶剂，95%庚烷/5%IPA(恒定组成)；流速，1毫升/分钟；温度，35℃；在205纳米的UV监测。
[注：Cap51也可购自Flamm]。
Cap‑52(与Cap‑12相同)

根据对合成Cap‑51所述的操作从L‑丙氨酸合成Cap‑52。出于表征的目的，一部分粗物质经反相HPLC(H₂O/甲醇/TFA)纯化，得到无色粘性油状的Cap‑52。¹H NMR(DMSO‑d₆,δ=2.5ppm,500MHz):12.49(宽单峰，1H),7.43(d,J=7.3,0.88H),7.09(表观宽单峰，0.12H),3.97(m,1H),3.53(s,3H),1.25(d,J=7.3,3H)。
根据对合成Cap‑51所述的操作(如果有所改变则注明)从适当原料制备Cap‑53至Cap‑64。

Cap‑65

将氯甲酸甲酯(0.65mL，8.39mmol)经5min滴加至Na₂CO₃(0.449g，4.23mmol)、NaOH(8.2mL浓度为1M的水溶液，8.2mmol)和(S)‑2‑氨基‑3‑羟基‑3‑甲基丁酸(1.04g，7.81mmol)的经冷却(冰水)混合物中。将反应混合物搅拌45min，随后移开冷却浴，再继续搅拌3.75hr。用CH₂Cl₂洗涤反应混合物，将水相用冰水浴冷却并用浓HCl酸化至1‑2的pH值范围。真空除去挥发性组分，将残余物吸收在MeOH/CH₂Cl₂的2:1混合物(15mL)中并过滤，然后将滤液旋转蒸发(rotervape)，得到白色半粘性泡沫状的Cap‑65(1.236g)。¹H NMR(DMSO‑d₆,δ=2.5ppm,400MHz):δ6.94(d,J=8.5,0.9H),6.53(宽单峰，0.1H),3.89(d,J=8.8,1H),2.94(s,3H),1.15(s,3H),1.13(s,3H)。
通过使用对合成Cap‑65所述的操作从适当市售原料制备Cap‑66和Cap‑67。
Cap‑66

¹H NMR(DMSO‑d₆,δ=2.5ppm,400MHz):δ12.58(宽单峰，1H),7.07(d,J=8.3,0.13H),6.81(d,J=8.8,0.67H),4.10‑4.02(m,1.15H),3.91(dd,J=9.1,3.5,0.85H),3.56(s,3H),1.09(d,J=6.2,3H)。[注意：仅注明NH的优势信号]。
Cap‑67

¹H NMR(DMSO‑d₆,δ=2.5ppm,400MHz):12.51(宽单峰，1H),7.25(d,J=8.4,0.75H),7.12(宽二重峰，J=0.4,0.05H),6.86(宽单峰，0.08H),3.95‑3.85(m,2H),3.54(s,3H),1.08(d,J=6.3,3H)。[注意：仅注明NH的优势信号]。
Cap‑68

将氯甲酸甲酯(0.38ml，4.9mmol)滴加至1N NaOH(水溶液)(9.0ml，9.0mmol)、1M NaHCO₃(水溶液)(9.0ml，9.0mol)、L‑天冬氨酸β‑苯甲酯(1.0g，4.5mmol)和二噁烷(9ml)的混合物中。将反应混合物在环境条件下搅拌3hr，随后用乙酸乙酯(50ml，3×)洗涤。将水层用12N HCl酸化至pH值为约1‑2，并用乙酸乙酯(3×50ml)萃取。将合并的有机层用盐水洗涤，干燥(Na₂SO₄)，过滤并真空浓缩，得到浅黄色油状的Cap‑68(1.37g；质量高于理论收率，该产物不经进一步纯化就使用)。¹H NMR(DMSO‑d₆,δ=2.5ppm,500MHz):δ12.88(宽单峰，1H),7.55(d,J=8.5,1H),7.40‑7.32(m,5H),5.13(d,J=12.8,1H),5.10(d,J=12.9,1H),4.42‑4.38(m,1H),3.55(s,3H),2.87(dd,J=16.2,5.5,1H),2.71(dd,J=16.2,8.3,1H)。LC(条件2):R_t=1.90min；LC/MS:[M+H]⁺C₁₃H₁₆NO₆的分析计算值为282.10；实验值为282.12。
Cap‑69a和Cap‑69b

将NaCNBH₃(2.416g，36.5mmol)分批添加至丙氨酸(1.338g，15.0mmol)的冷却的(约15℃)水(17mL)/MeOH(10mL)溶液中。数分钟之后，经4min滴加乙醛(4.0mL，71.3mmol)，移开冷却浴，并将反应混合物在环境条件下搅拌6hr。再添加乙醛(4.0mL)并将反应混合物搅拌2hr。将浓HCl缓慢添加至反应混合物中直到pH值达到约1.5，并将所得混合物在40℃加热1hr。真空除去大部分挥发性组分，残余物经50WX8‑100离子交换树脂(用水洗涤柱，然后用稀NH₄OH(其通过将18ml NH₄OH和282ml水混合来制备)洗脱所述化合物)纯化，得到灰白色软吸湿性固体状的Cap‑69(2.0g)。¹H NMR(DMSO‑d₆,δ=2.5ppm,400MHz):δ3.44(q,J=7.1,1H),2.99‑2.90(m,2H),2.89‑2.80(m,2H),1.23(d,J=7.1,3H),1.13(t,J=7.3,6H)。
根据对合成Cap‑69所述的操作通过使用适当原料来制备Cap‑70至Cap‑74x。

Cap‑75

Cap‑75，步骤a

将NaBH₃CN(1.6g，25.5mmol)添加至H‑D‑丝氨酸‑OBzl HCl(2.0g，8.6mmol)的经冷却(冰/水浴)的水(25ml)/甲醇(15ml)溶液中。经5min滴加乙醛(1.5mL，12.5mmol)，移开冷却浴，并将反应混合物在环境条件下搅拌2hr。将反应混合物用12N HCl小心地淬灭并真空浓缩。将残余物溶解在水中并用反相HPLC(MeOH/H₂O/TFA)纯化，得到无色粘性油状的(R)‑2‑(二乙氨基)‑3‑羟基丙酸苯甲酯的TFA盐(1.9g)。¹H NMR(DMSO‑d₆,δ=2.5ppm,500MHz):δ9.73(宽单峰，1H),7.52‑7.36(m,5H),5.32(d,J=12.2,1H),5.27(d,J=12.5,1H),4.54‑4.32(m,1H),4.05‑3.97(m,2H),3.43‑3.21(m,4H),1.23(t,J=7.2,6H)。LC/MS(条件2):R_t=1.38min；LC/MS:[M+H]⁺C₁₄H₂₂NO₃的分析计算值为252.16；实验值为252.19。
Cap‑75
将NaH(0.0727g，1.82mmol，60%)添加至以上所制备的(R)‑2‑(二乙氨基)‑3‑羟基丙酸苯甲酯的TFA盐(0.3019g，0.8264mmol)的经冷却(冰‑水)THF(3.0mL)溶液中，并将混合物搅拌15min。添加碘甲烷(56μL，0.90mmol)并继续搅拌18hr，同时使冷却浴解冻至环境条件。将反应混合物用水淬灭并加载于经MeOH预处理的MCX(6g)柱上，并用甲醇洗涤，继而用2N NH₃/甲醇洗脱化合物。真空除去挥发性组分，得到被(R)‑2‑(二乙氨基)‑3‑羟基丙酸污染的黄色半固体状的Cap‑75(100mg)。该产物不经进一步纯化就按原样加以使用。
Cap‑76

将NaCNBH₃(1.60g，24.2mmol)分批添加至(S)‑4‑氨基‑2‑(叔丁氧基羰基氨基)丁酸(2.17g，9.94mmol)的冷却的(约15℃)水/MeOH(各12mL)溶液中。数分钟之后，经2min滴加乙醛(2.7mL，48.1mmol)，移开冷却浴，并将反应混合物在环境条件下搅拌3.5hr。再添加乙醛(2.7mL，48.1mmol)并将反应混合物搅拌20.5hr。真空除去大部分MeOH组分，并用浓HCl处理剩余混合物直到其pH值达到约1.0，随后在40℃加热2hr。真空除去挥发性组分，将残余物用4M HCl/二噁烷(20mL)处理并在环境条件下搅拌7.5hr。真空除去挥发性组分，残余物经50WX8‑100离子交换树脂(用水洗涤柱，然后用稀NH₄OH(其由18ml NH₄OH和282ml水制备)洗脱所述化合物)纯化，得到灰白色固体状的中间体(S)‑2‑氨基‑4‑(二乙氨基)丁酸(1.73g)。
将氯甲酸甲酯(0.36mL，4.65mmol)经11min滴加至Na₂CO₃(0.243g，2.29mmol)、NaOH(4.6mL浓度为1M的水溶液，4.6mmol)和上述产物(802.4mg)的经冷却(冰水)混合物中。将反应混合物搅拌55min，随后移开冷却浴，再继续搅拌5.25hr。将反应混合物用等体积水稀释并用CH₂Cl₂(30mL，2×)洗涤，并将水相用冰水浴冷却并用浓HCl酸化至pH为2。随后真空除去挥发性组分并用MCX树脂(6.0g；用水洗涤柱，并用2.0M NH₃/MeOH洗脱样品)将粗物质游离碱化(free‑based)，得到灰白色固体状的不纯的Cap‑76(704mg)。¹H NMR(MeOH‑d₄,δ=3.29ppm,400MHz):δ3.99(dd,J=7.5,4.7,1H),3.62(s,3H),3.25‑3.06(m,6H),2.18‑2.09(m,1H),2.04‑1.96(m,1H),1.28(t,J=7.3,6H)。LC/MS:[M+H]⁺C₁₀H₂₁N₂O₄的分析计算值为233.15；实验值为233.24。
Cap‑77a和Cap‑77b

Cap‑77的合成根据对Cap‑7所述的操作如下进行：使用7‑氮杂二环[2.2.1]庚烷进行SN₂取代步骤，并使用以下条件来进行中间体2‑(7‑氮杂二环[2.2.1]庚烷‑7‑基)‑2‑苯基乙酸苯甲酯的对映异构分离：将所述中间体(303.7mg)溶解在乙醇中，并将所得溶液注射在手性HPLC柱(Chiracel AD‑H柱，30×250mm，5μm)上，在35℃用90%CO₂‑10%EtOH以70mL/min洗脱，得到124.5mg对映异构体‑1和133.8mg对映异构体‑2。根据Cap‑7的制备将所述苯甲酯氢解，得到Cap‑77：¹H NMR(DMSO‑d₆,δ=2.5ppm,400MHz):δ7.55(m,2H),7.38‑7.30(m,3H),4.16(s,1H),3.54(表观宽单峰，2H),2.08‑1.88(m,4H),1.57‑1.46(m,4H)。LC(条件1):R_t=0.67min；LC/MS:[M+H]⁺C₁₄H₁₈NO₂的分析计算值为232.13；实验值为232.18。HRMS:[M+H]⁺C₁₄H₁₈NO₂的分析计算值为232.1338；实验值为232.1340。
Cap‑78

将NaCNBH₃(0.5828g，9.27mmol)添加至(R)‑2‑(乙基氨基)‑2‑苯基乙酸的HCl盐(Cap‑3的合成中的中间体；0.9923mg，4.60mmol)和(1‑乙氧基环丙氧基)三甲基甲硅烷(1.640g，9.40mmol)在MeOH(10mL)中的混合物中，并用油浴将该半非均相混合物在50℃加热20hr。再添加(1‑乙氧基环丙氧基)三甲基甲硅烷(150mg，0.86mmol)和NaCNBH₃(52mg，0.827mmol)并将反应混合物再加热3.5hr。随后将其冷却至环境温度并用浓HCl酸化至pH为约2，过滤混合物并将滤液旋转蒸发。将所得粗物质吸收在i‑PrOH(6mL)中并加热以实现溶解，将未溶解部分滤除并真空浓缩滤液。将约1/3的所得粗物质用反相HPLC(H₂O/MeOH/TFA)纯化，得到无色粘性油状的Cap‑78的TFA盐(353mg)。¹H NMR(DMSO‑d₆,δ=2.5ppm,400MHz;D₂O交换之后):δ7.56‑7.49(m,5H),5.35(S,1H),3.35(m,1H),3.06(表观宽单峰，1H),2.66(m,1H),1.26(t,J=7.3,3H),0.92(m,1H),0.83‑0.44(m,3H)。LC(条件1):R_t=0.64min；LC/MS:[M+H]⁺C₁₃H₁₈NO₂的分析计算值为220.13；实验值为220.21。HRMS:[M+H]⁺C₁₃H₁₈NO₂的分析计算值为220.1338；实验值为220.1343。
Cap‑79

使臭氧鼓泡通过Cap‑55(369mg，2.13mmol)的经冷却(‑78℃)的CH₂Cl₂(5.0mL)溶液，历时约50min，直到反应混合物变为蓝色。添加Me₂S(10滴吸量管液滴)，并将反应混合物搅拌35min。将‑78℃冷却浴替换为‑10℃冷却浴，再继续搅拌30min，随后真空除去挥发性组分，得到无色粘性油状物。
将NaBH₃CN(149mg，2.25mmol)添加至上述粗物质和吗啉(500μL，5.72mmol)的MeOH(5.0mL)溶液中，并将混合物在环境条件下搅拌4hr。将其冷却至冰水温度，并用浓HCl处理以使其pH值达到约2.0，随后搅拌2.5hr。真空除去挥发性组分，并将残余物用MCX树脂(MeOH洗涤；2.0N NH₃/MeOH洗脱)与反相HPLC(H₂O/MeOH/TFA)的组合纯化，得到含有未知量的吗啉的Cap‑79。
为消耗吗啉污染物，将上述物质溶解在CH₂Cl₂(1.5mL)中并先后用Et₃N(0.27mL，1.94mmol)和乙酸酐(0.10mL，1.06mmol)处理，并在环境条件下搅拌18hr。添加THF(1.0mL)和H₂O(0.5mL)并继续搅拌1.5hr。真空除去挥发性组分，并使所得残余物通过MCX树脂(MeOH洗涤；2.0N NH₃/MeOH洗脱)，得到棕色粘性油状的不纯的Cap‑79，其不经进一步纯化就用于下一步骤。
Cap‑80a和Cap‑80b

将SOCl₂(6.60mL，90.5mmol)经15min滴加至(S)‑3‑氨基‑4‑(苯甲基氧基)‑4‑氧代丁酸(10.04g，44.98mmol)和MeOH(300mL)的经冷却(冰‑水)混合物中，移开冷却浴并将反应混合物在环境条件下搅拌29hr。真空除去大部分挥发性组分，并将残余物在EtOAc(150mL)与饱和NaHCO₃溶液之间小心分配。用EtOAc(150mL，2×)萃取水相，并将合并的有机相干燥(MgSO₄)，过滤，并真空浓缩，得到无色油状的(S)‑2‑氨基琥珀酸1‑苯甲酯·4‑甲酯(9.706g)。¹H NMR(DMSO‑d₆,δ=2.5ppm,400MHz):δ7.40‑7.32(m,5H),5.11(s,2H),3.72(表观三重峰，J=6.6,1H),3.55(s,3H),2.68(dd,J=15.9,6.3,1H),2.58(dd,J=15.9,6.8,1H),1.96(s,2H)。LC(条件1):R_t=0.90min；LC/MS:[M+H]⁺C₁₂H₁₆NO₄的分析计算值为238.11；实验值为238.22。
将Pb(NO₃)₂(6.06g，18.3mmol)经1min添加至(S)‑2‑氨基琥珀酸1‑苯甲酯·4‑甲酯(4.50g，19.0mmol)、9‑溴‑9‑苯基‑9H‑芴(6.44g，20.0mmol)和Et₃N(3.0mL，21.5mmol)的CH₂Cl₂(80mL)溶液中，并将所述非均相混合物在环境条件下搅拌48hr。过滤混合物，将滤液用MgSO₄处理并再次过滤，并将最终滤液浓缩。对所得粗物质进行Biotage纯化(350g硅胶，CH₂Cl₂洗脱)，得到高度粘性无色油状的(S)‑2‑(9‑苯基‑9H‑芴‑9‑基氨基)琥珀酸1‑苯甲酯·4‑甲酯(7.93g)。¹H NMR(DMSO‑d₆,δ=2.5ppm,400MHz):δ7.82(m,2H),7.39‑7.13(m,16H),4.71(d,J=12.4,1H),4.51(d,J=12.6,1H),3.78(d,J=9.1,NH),3.50(s,3H),2.99(m,1H),2.50‑2.41(m,2H，部分与溶剂重叠)。LC(条件1):R_t=2.16min；LC/MS:[M+H]⁺C₃₁H₂₈NO₄的分析计算值为478.20；实验值为478.19。
将LiHMDS(六甲基二甲硅烷基氨基锂)(9.2mL浓度为1.0M的THF溶液，9.2mmol)经10min滴加至(S)‑2‑(9‑苯基‑9H‑芴‑9‑基氨基)琥珀酸1‑苯甲酯·4‑甲酯(3.907g，8.18mmol)的经冷却(‑78℃)THF(50mL)溶液中并搅拌约1hr。将MeI(0.57mL，9.2mmol)经8min滴加至混合物中，并继续搅拌16.5hr，同时使冷却浴解冻至室温。用饱和NH₄Cl溶液(5mL)淬灭之后，真空除去大部分有机组分并使残余物在CH₂Cl₂(100mL)与水(40mL)之间分配。将有机层干燥(MgSO₄)，过滤并真空浓缩，并将所得粗物质用Biotage(350g硅胶；25%EtOAc/己烷)纯化，得到3.65g3‑甲基‑2‑(9‑苯基‑9H‑芴‑9‑基氨基)琥珀酸1‑苯甲酯·4‑甲酯的2S/3S和2S/3R非对映异构混合物(比率为约1.0:0.65(¹H NMR))。此时并未测定优势异构体的立体化学，且该混合物不经分离就用于下一步骤。部分¹H NMR数据(DMSO‑d₆,δ=2.5ppm,400MHz)：主要非对映异构体，δ4.39(d,J=12.3,CH₂的1H),3.33(s,3H，与H₂O信号重叠),3.50(d,J=10.9,NH),1.13(d,J=7.1,3H)；次要非对映异构体，δ4.27(d,J=12.3,CH₂的1H),3.76(d,J=10.9,NH),3.64(s,3H),0.77(d,J=7.0,3H)。LC(条件1):R_t=2.19min；LC/MS:[M+H]⁺C₃₂H₃₀NO₄的分析计算值为492.22；实验值为492.15。
将二异丁基氢化铝(20.57ml，浓度为1.0M，于己烷中，20.57mmol)经10min滴加至以上所制备的(2S)‑3‑甲基‑2‑(9‑苯基‑9H‑芴‑9‑基氨基)琥珀酸1‑苯甲酯·4‑甲酯(3.37g，6.86mmol)的经冷却(‑78℃)THF(120mL)溶液中，并在‑78℃搅拌20hr。将反应混合物从冷却浴移开并迅速在搅拌下倒入约1M H₃PO₄/H₂O(250mL)中，并用乙醚(100mL，2×)萃取混合物。将合并的有机相用盐水洗涤，干燥(MgSO₄)，过滤并真空浓缩。制备粗物质的过筛硅胶样品(silica gel mesh)并进行色谱纯化(25%EtOAc/己烷；重力洗脱)，得到1.1g被苯甲醇污染的无色粘性油状的(2S,3S)‑4‑羟基‑3‑甲基‑2‑(9‑苯基‑9H‑芴‑9‑基氨基)丁酸苯甲酯和含有(2S,3R)立体异构体作为杂质的(2S,3R)‑4‑羟基‑3‑甲基‑2‑(9‑苯基‑9H‑芴‑9‑基氨基)丁酸苯甲酯。后一样品再接受相同柱色谱纯化条件，得到750mg白色泡沫状的经纯化物质。[注意：在上述条件下(2S,3S)异构体在(2S,3R)异构体之前洗脱出来]。(2S,3S)异构体：¹H NMR(DMSO‑d₆,δ=2.5ppm,400MHz):7.81(m,2H),7.39‑7.08(m,16H),4.67(d,J=12.3,1H),4.43(d,J=12.4,1H),4.21(表观三重峰，J=5.2,OH),3.22(d,J=10.1,NH),3.17(m,1H),3.08(m,1H),约2.5(m,1H，与溶剂信号重叠),1.58(m,1H),0.88(d,J=6.8,3H)。LC(条件1):R_t=2.00min；LC/MS:[M+H]⁺C₃₁H₃₀NO₃的分析计算值为464.45；实验值为464.22。(2S,3R)异构体：¹H NMR(DMSO‑d₆,δ=2.5ppm,400MHz):7.81(d,J=7.5,2H),7.39‑7.10(m,16H),4.63(d,J=12.1,1H),4.50(表观三重峰，J=4.9,1H),4.32(d,J=12.1,1H),3.59‑3.53(m,2H),3.23(m,1H),2.44(dd,J=9.0,8.3,1H),1.70(m,1H),0.57(d,J=6.8,3H)。LC(条件1):R_t=1.92min；LC/MS:[M+H]⁺C₃₁H₃₀NO₃的分析计算值为464.45；实验值为464.52。
基于针对内酯衍生物进行的NOE研究来进行DIBAL(二异丁基氢化铝)还原产物的相对立体化学指定，所述内酯衍生物通过使用以下方案从各异构体制备：将LiHMDS(50μL浓度为1.0M的THF溶液，0.05mmol)添加至(2S,3S)‑4‑羟基‑3‑甲基‑2‑(9‑苯基‑9H‑芴‑9‑基氨基)丁酸苯甲酯(62.7mg，0.135mmol)的经冷却(冰‑水)THF(2.0mL)溶液中，并将反应混合物在类似温度搅拌约2hr。真空除去挥发性组分，并使残余物在CH₂Cl₂(30mL)、水(20mL)和饱和NH₄Cl水溶液(1mL)之间分配。将有机层干燥(MgSO₄)，过滤并真空浓缩，对所得粗物质进行Biotage纯化(40g硅胶；10‑15%EtOAc/己烷)，得到无色固体膜状的(3S,4S)‑4‑甲基‑3‑(9‑苯基‑9H‑芴‑9‑基氨基)二氢呋喃‑2(3H)‑酮(28.1mg)。以类似的方式将(2S,3R)‑4‑羟基‑3‑甲基‑2‑(9‑苯基‑9H‑芴‑9‑基氨基)丁酸苯甲酯加工成(3S,4R)‑4‑甲基‑3‑(9‑苯基‑9H‑芴‑9‑基氨基)二氢呋喃‑2(3H)‑酮。(3S,4S)‑内酯异构体：¹H NMR(DMSO‑d₆,δ=2.5ppm,400MHz),7.83(d,J=7.5,2H),7.46‑7.17(m,11H),4.14(表观三重峰，J=8.3,1H),3.60(d,J=5.8,NH),3.45(表观三重峰，J=9.2,1H),约2.47(m,1H，部分与溶剂信号重叠),2.16(m,1H),0.27(d,J=6.6,3H)。LC(条件1):R_t=1.98min；LC/MS:[M+Na]⁺C₂₄H₂₁NNaO₂的分析计算值为378.15；实验值为378.42。(3S,4R)‑内酯异构体：¹H NMR(DMSO‑d₆,δ=2.5ppm,400MHz),7.89(d,J=7.6,1H),7.85(d,J=7.3,1H),7.46‑7.20(m,11H),3.95(dd,J=9.1,4.8,1H),3.76(d,J=8.8,1H),2.96(d,J=3.0,NH),2.92(dd,J=6.8,3,NCH),1.55(m,1H),0.97(d,J=7.0,3H)。LC(条件1):R_t=2.03min；LC/MS:[M+Na]⁺C₂₄H₂₁NNaO₂的分析计算值为378.15；实验值为378.49。
先后将TBDMS‑Cl(叔丁基二甲基甲硅烷基氯)(48mg，0.312mmol)和咪唑(28.8mg，0.423mmol)添加至(2S,3S)‑4‑羟基‑3‑甲基‑2‑(9‑苯基‑9H‑芴‑9‑基氨基)丁酸苯甲酯(119.5mg，0.258mmol)的CH₂Cl₂(3ml)溶液中，并将混合物在环境条件下搅拌14.25hr。随后将反应混合物用CH₂Cl₂(30mL)稀释并用水(15mL)洗涤，将有机层干燥(MgSO₄)，过滤并真空浓缩。将所得粗物质用Biotage(40g硅胶；5%EtOAc/己烷)纯化，得到被TBDMS碱化杂质(TBDMS based impurities)污染的无色粘性油状的(2S,3S)‑4‑(叔丁基二甲基甲硅烷基氧基)‑3‑甲基‑2‑(9‑苯基‑9H‑芴‑9‑基氨基)丁酸苯甲酯(124.4mg)。以类似的方式将(2S,3R)‑4‑羟基‑3‑甲基‑2‑(9‑苯基‑9H‑芴‑9‑基氨基)丁酸苯甲酯加工成(2S,3R)‑4‑(叔丁基二甲基甲硅烷基氧基)‑3‑甲基‑2‑(9‑苯基‑9H‑芴‑9‑基氨基)丁酸苯甲酯。(2S,3S)‑甲硅烷基醚异构体：¹H NMR(DMSO‑d₆,δ=2.5ppm,400MHz),7.82(d,J=4.1,1H),7.80(d,J=4.0,1H),7.38‑7.07(m,16H),4.70(d,J=12.4,1H),4.42(d,J=12.3,1H),3.28‑3.19(m,3H),2.56(dd,J=10.1,5.5,1H),1.61(m,1H),0.90(d,J=6.8,3H),0.70(s,9H),‑0.13(s,3H),‑0.16(s,3H)。LC(条件1,其中运行时间延长至4min):R_t=3.26min；LC/MS:[M+H]⁺C₃₇H₄₄NO₃Si的分析计算值为578.31；实验值为578.40。(2S,3R)‑甲硅烷基醚异构体：¹H NMR(DMSO‑d₆,δ=2.5ppm,400MHz),7.82(d,J=3.0,1H),7.80(d,J=3.1,1H),7.39‑7.10(m,16H),4.66(d,J=12.4,1H),4.39(d,J=12.4,1H),3.61(dd,J=9.9,5.6,1H),3.45(d,J=9.5,1H),3.41(dd,J=10,6.2,1H),2.55(dd,J=9.5,7.3,1H),1.74(m,1H),0.77(s,9H),0.61(d,J=7.1,3H),‑0.06(s,3H),‑0.08(s,3H)。
将氢气气囊与(2S,3S)‑4‑(叔丁基二甲基甲硅烷基氧基)‑3‑甲基‑2‑(9‑苯基‑9H‑芴‑9‑基氨基)丁酸苯甲酯(836mg，1.447mmol)和10%Pd/C(213mg)在EtOAc(16mL)中的混合物连接，并将混合物在室温搅拌约21hr，其中视需要向气囊再填充H₂。将反应混合物用CH₂Cl₂稀释并通过硅藻土垫过滤，用EtOAc(200mL)、EtOAc/MeOH(1:1混合物，200mL)和MeOH(750mL)洗涤硅藻土垫。浓缩合并的有机相，从所得粗物质制备过筛硅胶样品且进行快速色谱纯化(EtOAc/i‑PrOH/H₂O的8:2:1混合物)，得到白色蓬松固体状的(2S,3S)‑2‑氨基‑4‑(叔丁基二甲基甲硅烷基氧基)‑3‑甲基丁酸(325mg)。以类似的方式将(2S,3R)‑4‑(叔丁基二甲基甲硅烷基氧基)‑3‑甲基‑2‑(9‑苯基‑9H‑芴‑9‑基氨基)丁酸苄酯加工成(2S,3R)‑2‑氨基‑4‑(叔丁基二甲基甲硅烷基氧基)‑3‑甲基丁酸。(2S,3S)‑氨基酸异构体：¹H NMR(甲醇‑d₄,δ=3.29ppm,400MHz),3.76(dd,J=10.5,5.2,1H),3.73(d,J=3.0,1H),3.67(dd,J=10.5,7.0,1H),2.37(m,1H),0.97(d,J=7.0,3H),0.92(s,9H),0.10(s,6H)。LC/MS:[M+H]⁺C₁₁H₂₆NO₃Si的分析计算值为248.17；实验值为248.44。(2S,3R)‑氨基酸异构体：¹H NMR(甲醇‑d₄,δ=3.29ppm,400MHz),3.76‑3.75(m,2H),3.60(d,J=4.1,1H),2.16(m,1H),1.06(d,J=7.3,3H),0.91(s,9H),0.09(s,6H)。[M+H]⁺C₁₁H₂₆NO₃Si的分析计算值为248.17；实验值为248.44。
将水(1mL)和NaOH(0.18mL浓度为1.0M的水溶液，0.18mmol)添加至(2S,3S)‑2‑氨基‑4‑(叔丁基二甲基甲硅烷基氧基)‑3‑甲基丁酸(41.9mg，0.169mmol)和Na₂CO₃(11.9mg，0.112mmol)的混合物中，且用超声波处理约1min以实现反应物的溶解。随后用冰水浴冷却混合物，经30s添加氯甲酸甲酯(0.02mL，0.259mmol)，且在类似温度持续剧烈搅拌40min，随后在环境温度剧烈搅拌2.7hr。将反应混合物用水(5mL)稀释，用冰水浴冷却并用1.0N HCl水溶液(约0.23mL)逐滴处理。将混合物进一步用水(10mL)稀释并用CH₂Cl₂(15mL，2×)萃取。将合并的有机相干燥(MgSO₄)，过滤，并真空浓缩，得到灰白色固体状的Cap‑80a。以类似的方式将(2S,3R)‑2‑氨基‑4‑(叔丁基二甲基甲硅烷基氧基)‑3‑甲基丁酸加工成Cap‑80b。Cap‑80a：¹H NMR(DMSO‑d₆,δ=2.5ppm,400MHz),12.57(宽单峰，1H),7.64(d,J=8.3,0.3H),7.19(d,J=8.8,0.7H),4.44(dd,J=8.1,4.6,0.3H),4.23(dd,J=8.7,4.4,0.7H),3.56/3.53(两个单峰，3H),3.48‑3.40(m,2H),2.22‑2.10(m,1H),0.85(s,9H),约0.84(d,0.9H，与叔丁基信号重叠),0.79(d,J=7,2.1H),0.02/0.01/0.00(三个重叠单峰，6H)。LC/MS:[M+Na]⁺C₁₃H₂₇NNaO₅Si的分析计算值为328.16；实验值为328.46。Cap‑80b：¹H NMR(CDCl₃,δ=7.24ppm,400MHz),6.00(宽二重峰，J=6.8,1H),4.36(dd,J=7.1,3.1,1H),3.87(dd,J=10.5,3.0,1H),3.67(s,3H),3.58(dd,J=10.6,4.8,1H),2.35(m,1H),1.03(d,J=7.1,3H),0.90(s,9H),0.08(s,6H)。LC/MS:[M+Na]⁺C₁₃H₂₇NNaO₅Si的分析计算值为328.16；实验值为328.53。粗产物不经进一步纯化就使用。
Cap‑81

按照Falb et al.Synthetic Communications1993,23,2839所描述的方案来制备。
Cap‑82至Cap‑85
根据对Cap‑51或Cap‑13所述的操作从适当原料合成Cap‑82至Cap‑85。所述样品展现出类似于其对映异构体(即分别为Cap‑4、Cap‑13、Cap‑51和Cap‑52)的光谱分布。

Cap‑86

在0℃向O‑甲基‑L‑苏氨酸(3.0g，22.55mmol)和NaOH(0.902g，22.55mmol)在H₂O(15mL)中的混合物中滴加ClCO₂Me(1.74mL，22.55mmol)。将混合物搅拌12h并使用1N HCl酸化至pH值为1。用EtOAc(2×250mL)和10%MeOH/CH₂Cl₂(250mL)萃取水相并将合并的有机相真空浓缩，得到无色油状物(4.18g，97%)，其纯度足以用于后续步骤。¹H NMR(400MHz,CDCl₃)δ4.19(s,1H),3.92‑3.97(m,1H),3.66(s,3H),1.17(d,J=7.7Hz,3H)。LCMS：C₇H₁₃NO₅的分析计算值为191；实验值为190(M‑H)^‑。
Cap‑87

在0℃向L‑高丝氨酸(2.0g，9.79mmol)和Na₂CO₃(2.08g，19.59mmol)在H₂O(15mL)中的混合物中滴加ClCO₂Me(0.76mL，9.79mmol)。将混合物搅拌48h并使用1N HCl酸化至pH值为1。用EtOAc(2×250mL)萃取水相并将合并的有机相真空浓缩，得到无色固体(0.719g，28%)，其纯度足以用于后续步骤。¹H NMR(400MHz,CDCl₃)δ4.23(dd,J=4.5,9.1Hz,1H),3.66(s,3H),3.43‑3.49(m,2H),2.08‑2.14(m,1H),1.82‑1.89(m,1H)。LCMS：C₇H₁₃NO₅的分析计算值为191；实验值为192(M+H)⁺。
Cap‑88

将L‑缬氨酸(1.0g，8.54mmol)、3‑溴吡啶(1.8mL，18.7mmol)、K₂CO₃(2.45g，17.7mmol)和CuI(169mg，0.887mmol)在DMSO(10mL)中的混合物在100℃加热12h。将反应混合物冷却至室温，倒入H₂O(约150mL)中并用EtOAc(×2)洗涤。用少量H₂O萃取有机层并用6N HCl将合并的水相酸化至pH值为约2。将体积减少至约三分之一并添加20g阳离子交换树脂(Strata)。将浆液静置20min并加载在阳离子交换树脂(Strata)(约25g)垫上。先后用H₂O(200mL)、MeOH(200mL)和NH₃(浓度为3M的MeOH溶液，2×200mL)洗涤树脂垫。将适当级份真空浓缩并将残余物(约1.1g)溶解在H₂O中，冷冻并冻干。得到泡沫状的标题化合物(1.02g，62%)。¹H NMR(400MHz,DMSO‑d₆)δ8.00(s,br,1H),7.68‑7.71(m,1H),7.01(s,br,1H),6.88(d,J=7.5Hz,1H),5.75(s,br,1H),3.54(s,1H),2.04‑2.06(m,1H),0.95(d,J=6.0Hz,3H),0.91(d,J=6.6Hz,3H)。LCMS：C₁₀H₁₄N₂O₂的分析计算值为194；实验值为195(M+H)⁺。
Cap‑89

将L‑缬氨酸(1.0g，8.54mmol)、5‑溴嘧啶(4.03g，17.0mmol)、K₂CO₃(2.40g，17.4mmol)和CuI(179mg，0.94mmol)在DMSO(10mL)中的混合物在100℃加热12h。将反应混合物冷却至室温，倒入H₂O(约150mL)中并用EtOAc(×2)洗涤。用少量H₂O萃取有机层并用6N HCl将合并的水相酸化至pH值为约2。将体积减少至约三分之一并添加20g阳离子交换树脂(Strata)。将浆液静置20min并加载在阳离子交换树脂(Strata)(约25g)垫上。先后用H₂O(200mL)、MeOH(200mL)和NH₃(浓度为3M的MeOH溶液，2×200mL)洗涤树脂垫。将适当级份真空浓缩并将残余物(约1.1g)溶解在H₂O中，冷冻并冻干。得到泡沫状的标题化合物(1.02g，62%)。¹H NMR(400MHz,CD₃OD)显示该混合物含有缬氨酸且纯度不能估算。所述物质在随后的反应中按原样使用。LCMS：C₉H₁₃N₃O₂的分析计算值为195；实验值为196(M+H)⁺。
Cap‑90

根据对制备Cap‑1所述的方法制备Cap‑90。粗物质在后续步骤中按原样使用。LCMS：C₁₁H₁₅NO₂的分析计算值为193；实验值为192(M‑H)^‑。
除非另作说明，否则根据用于制备Cap51的方法制备以下Cap：

Cap‑117至Cap‑123
为制备Cap‑117至Cap‑123，从商业来源获得Boc氨基酸并通过用25%TFA/CH₂Cl₂处理来脱保护。在通过LCMS判断完全反应之后，真空除去溶剂，且根据对Cap‑51所述的操作将氨基酸的相应TFA盐用氯甲酸甲酯氨基甲酰化。

Cap‑124

根据对Cap‑51所述的操作将L‑苏氨酸叔丁酯的盐酸盐氨基甲酰化。用1N HCl将粗反应混合物酸化至pH值为约1，并用EtOAc(2×50mL)萃取混合物。将合并的有机相真空浓缩，得到无色油状物，其在静置时固化。真空浓缩水层并将所得的产物与无机盐的混合物用EtOAc‑CH₂Cl₂‑MeOH(1:1:0.1)研磨，随后真空浓缩有机相，得到无色油状物，其经LCMS证明为期望的产物。将两批产物组合，得到0.52g固体。¹H NMR(400MHz,CD₃OD)δ4.60(m,1H),4.04(d,J=5.0Hz,1H),1.49(d,J=6.3Hz,3H)。LCMS：C₅H₇NO₄的分析计算值为145；实验值为146(M+H)⁺。
Cap‑125

向Pd(OH)₂(20%，100mg)、甲醛水溶液(37重量%，4ml)、乙酸(0.5mL)在甲醇(15mL)中的悬浮液中添加(S)‑4‑氨基‑2‑(叔丁氧基羰基氨基)丁酸(1g，4.48mmol)。将反应混合物用氢气吹洗几次且在氢气气囊条件下在室温搅拌过夜。将反应混合物通过硅藻土垫过滤，并真空除去挥发性组分。得到的粗物质按原样用于下一步。LC/MS:C₁₁H₂₂N₂O₄的分析计算值为246；实验值为247(M+H)⁺。
Cap‑126

该操作为用于制备Cap‑51的操作的变型。在0℃向3‑甲基‑L‑组氨酸(0.80g，4.70mmol)在THF(10mL)和H₂O(10mL)中的悬浮液中添加NaHCO₃(0.88g，10.5mmol)。用ClCO₂Me(0.40mL，5.20mmol)处理所得混合物并将混合物在0℃搅拌。搅拌约2h之后，LCMS显示无原料剩余。将反应混合物用6N HCl酸化至pH值为2。
真空除去溶剂并将残余物悬浮在20mL20%MeOH/CH₂Cl₂中。将混合物过滤并浓缩，得到浅黄色泡沫(1.21g)。LCMS和¹H NMR显示该物质为甲酯与期望的产物的9:1混合物。将该物质吸收在THF(10mL)和H₂O(10mL)中，冷却至0℃且添加LiOH(249.1mg，10.4mmol)。搅拌约1h之后，LCMS显示无酯剩余。因此，将混合物用6N HCl酸化并真空除去溶剂。LCMS和¹H NMR证实不存在酯。得到被无机盐污染的HCl盐形式的标题化合物(1.91g,>100%)。该化合物不经进一步纯化就按原样用于后续步骤中。¹H NMR(400MHz,CD₃OD)δ8.84,(s,1H),7.35(s,1H),4.52(dd,J=5.0,9.1Hz,1H),3.89(s,3H),3.62(s,3H),3.35(dd,J=4.5,15.6Hz,1H,由于溶剂而部分模糊),3.12(dd,J=9.0,15.6Hz,1H)。LCMS：C₉H₁₃N₃O₄的分析计算值为227.09；实验值为228.09(M+H)⁺。
Cap‑127

根据以上用于Cap‑126的方法，由(S)‑2‑氨基‑3‑(1‑甲基‑1H‑咪唑‑4‑基)丙酸(1.11g,6.56mmol)、NaHCO₃(1.21g,14.4mmol)和ClCO₂Me(0.56mL,7.28mmol)开始制备Cap‑127。得到被无机盐污染的HCl盐形式的标题化合物(1.79g,>100%)。LCMS和¹H NMR显示存在约5%甲酯。粗混合物不经进一步纯化就按原样加以使用。¹H NMR(400MHz,CD₃OD)δ8.90(s,1H),7.35(s,1H),4.48(dd,J=5.0,8.6Hz,1H),3.89(s,3H),3.62(s,3H),3.35(m,1H),3.08(m,1H)；LCMS：C₉H₁₃N₃O₄的分析计算值为227.09；实验值为228(M+H)⁺。
Cap‑128的制备

步骤1：(S)‑2‑(叔丁氧基羰基氨基)戊‑4‑炔酸苯甲酯(cj‑27b)的制备。

在0℃向cj‑27a(1.01g,4.74mmol)、DMAP(58mg,0.475mmol)和iPr₂NEt(1.7mL,9.8mmol)在CH₂Cl₂(100mL)中的溶液中添加Cbz‑Cl(0.68mL,4.83mmol)。将溶液在0℃搅拌4h，洗涤(1N KHSO₄，盐水)，干燥(Na₂SO₄)，过滤并真空浓缩。残余物经快速柱色谱(TLC6:1己烷:EtOAc)纯化，得到无色油状的标题化合物(1.30g,91%)。¹H NMR(400MHz,CDCl₃)δ7.35(s,5H),5.35(d,br,J=8.1Hz,1H),5.23(d,J=12.2Hz,1H),5.17(d,J=12.2Hz,1H),4.48‑4.53(m,1H),2.68‑2.81(m,2H),2.00(t,J=2.5Hz,1H),1.44(s,9H)。LCMS：C₁₇H₂₁NO₄的分析计算值为303；实验值为304(M+H)⁺。
步骤2：(S)‑3‑(1‑苯甲基‑1H‑1,2,3‑三唑‑4‑基)‑2‑(叔丁氧基羰基氨基)丙酸苯甲酯(cj‑28)的制备。

在室温向(S)‑2‑(叔丁氧基羰基氨基)戊‑4‑炔酸苯甲酯(0.50,1.65mmol)、抗坏血酸钠(0.036g,0.18mmol)、CuSO₄‑5H₂O(0.022g,0.09mmol)和NaN₃(0.13g,2.1mmol)在DMF‑H₂O(5mL,4:1)中的混合物中添加BnBr(0.24mL,2.02mmol)，并将混合物温热至65℃。在5h之后，LCMS表明低转化率。添加其它部分的NaN₃(100mg)并继续加热12h。将反应混合物倒入EtOAc和H₂O中且摇动。分离各层，将水层用EtOAc萃取3次并将合并的有机相洗涤(H₂O×3，盐水)，干燥(Na₂SO₄)，过滤并浓缩。残余物经快速色谱(Biotage,40+M0‑5%MeOH/CH₂Cl₂；TLC：3%MeOH/CH₂Cl₂)纯化，得到浅黄色油状物(748.3mg，104%)，其在静置时固化。NMR与期望的产物一致但表明存在DMF。该物质不经进一步纯化就按原样加以使用。¹H NMR(400MHz,DMSO‑d₆)δ7.84(s,1H),7.27‑7.32(m,10H),5.54(s,2H),5.07(s,2H),4.25(m,1H),3.16(dd,J=1.0,5.3Hz,1H),3.06(dd,J=5.3,14.7Hz),2.96(dd,J=9.1,14.7Hz,1H),1.31(s,9H)。
LCMS：C₂₄H₂₈N₄O₄的分析计算值为436；实验值为437(M+H)⁺。
步骤3：(S)‑3‑(1‑苯甲基‑1H‑1,2,3‑三唑‑4‑基)‑2‑(甲氧基羰基氨基)丙酸苯甲酯(cj‑29)的制备。

向(S)‑3‑(1‑苯甲基‑1H‑1,2,3‑三唑‑4‑基)‑2‑(叔丁氧基羰基氨基)丙酸苯甲酯(0.52g,1.15mmol)在CH₂Cl₂中的溶液中添加TFA(4mL)。将混合物在室温搅拌2h。真空浓缩混合物，得到无色油状物，其在静置时固化。将该物质溶解在THF‑H₂O中且冷却至0℃。先后添加固体NaHCO₃(0.25g,3.00mmol)和ClCO₂Me(0.25mL,3.25mmol)。在搅拌1.5h之后，将混合物用6N HCl酸化至pH值为约2，随后倒入H₂O‑EtOAc中。分离各层并将水相用EtOAc萃取两次。将合并的有机层洗涤(H₂O，盐水)，干燥(Na₂SO₄)，过滤并真空浓缩，得到无色油状物(505.8mg,111%，NMR表明存在不明杂质)，其在真空静置时固化。该物质不经进一步纯化就按原样加以使用。¹H NMR(400MHz,DMSO‑d₆)δ7.87(s,1H),7.70(d,J=8.1Hz,1H),7.27‑7.32(m,10H),5.54(s,2H),5.10(d,J=12.7Hz,1H),5.06(d,J=12.7Hz,1H),4.32‑4.37(m,1H),3.49(s,3H),3.09(dd,J=5.6,14.7Hz,1H),2.98(dd,J=9.6,14.7Hz,1H)。LCMS：C₂₁H₂₂N₄O₄的分析计算值为394；实验值为395(M+H)⁺。
步骤4：(S)‑2‑(甲氧基羰基氨基)‑3‑(1H‑1,2,3‑三唑‑4‑基)丙酸(Cap‑128)的制备。

在大气压，在Pd‑C(82mg)存在下，在MeOH(5mL)中将(S)‑3‑(1‑苯甲基‑1H‑1,2,3‑三唑‑4‑基)‑2‑(甲氧基羰基氨基)丙酸苯甲酯(502mg,1.11mmol)氢化12h。将混合物通过硅藻土过滤，并真空浓缩。得到被约10%甲酯污染的无色胶状的(S)‑2‑(甲氧基羰基氨基)‑3‑(1H‑1,2,3‑三唑‑4‑基)丙酸(266mg,111%)。该物质不经进一步纯化就按原样加以使用。¹H NMR(400MHz,DMSO‑d₆)δ12.78(s,br,1H),7.59(s,1H),7.50(d,J=8.0Hz,1H),4.19‑4.24(m,1H),3.49(s,3H),3.12(dd,J=4.8Hz,14.9Hz,1H),2.96(dd,J=9.9,15.0Hz,1H)。LCMS：C₇H₁₀N₄O₄的分析计算值为：214；实验值为215(M+H)⁺。
Cap‑129的制备

步骤1：(S)‑2‑(苯甲基氧基羰基氨基)‑3‑(1H‑吡唑‑1‑基)丙酸(cj‑31)的制备。

将(S)‑2‑氧代氧杂环丁烷‑3‑基氨基甲酸苯甲酯(0.67g，3.03mmol)和吡唑(0.22g，3.29mmol)在CH₃CN(12mL)中的悬浮液在50℃加热24h。将混合物冷却至室温过夜并过滤固体，得到(S)‑2‑(苯甲基氧基羰基氨基)‑3‑(1H‑吡唑‑1‑基)丙酸(330.1mg)。将滤液真空浓缩，随后用少量CH₃CN(约4mL)研磨，得到第二批产物(43.5mg)。总收率为370.4mg(44%)。熔点为165.5‑168℃。文献报导的熔点为168.5‑169.5[Vederas等人，J.Am.Chem.Soc.1985,107,7105]。¹H NMR(400MHz,CD₃OD)δ7.51(d,J=2.0,1H),7.48(s,J=1.5Hz,1H),7.24‑7.34(m,5H),6.23(m,1H),5.05(d,12.7H,1H),5.03(d,J=12.7Hz,1H),4.59‑4.66(m,2H),4.42‑4.49(m,1H)。LCMS：C₁₄H₁₅N₃O₄的分析计算值为289；实验值为290(M+H)⁺。
步骤2：(S)‑2‑(甲氧基羰基氨基)‑3‑(1H‑吡唑‑1‑基)丙酸(Cap‑129)的制备。

在大气压，在Pd‑C(45mg)存在下，在MeOH(5mL)中将(S)‑2‑(苯甲基氧基羰基氨基)‑3‑(1H‑吡唑‑1‑基)丙酸(0.20g，0.70mmol)氢化2h。产物似乎不溶于MeOH，因此将反应混合物用5mL H₂O和数滴6N HCl稀释。将均相溶液通过硅藻土过滤，并真空除去MeOH。将剩余溶液冷冻且冻干，得到黄色泡沫(188.9mg)。将该物质悬浮在THF‑H₂O(1:1，10mL)中，随后冷却至0℃。向冷却混合物中小心添加NaHCO₃(146.0mg，1.74mmol)(逸出CO₂)。气体逸出停止(约15min)之后，滴加ClCO₂Me(0.06mL，0.78mmol)。将混合物搅拌2h并用6N HCl酸化至pH值为约2，然后倒入EtOAc中。分离各层并用EtOAC(×5)萃取水相。将合并的有机层洗涤(盐水)，干燥(Na₂SO₄)，过滤并浓缩，得到无色固体状的标题化合物(117.8mg，79%)。¹H NMR(400MHz,DMSO‑d₆)δ13.04(s,1H),7.63(d,J=2.6Hz,1H),7.48(d,J=8.1Hz,1H),7.44(d,J=1.5Hz,1H),6.19(表观三重峰，J=2.0Hz,1H),4.47(dd,J=3.0,12.9Hz,1H),4.29‑4.41(m,2H),3.48(s,3H)。LCMS：C₈H₁₁N₃O₄的分析计算值为213；实验值为214(M+H)⁺。
Cap‑130

Cap‑130通过对市售(R)‑苯基甘氨酸进行酰化来制备，所述酰化与Calmes,M.;Daunis,J.;Jacquier,R.;Verducci,J.Tetrahedron,1987,43(10),2285中给出的操作类似。
Cap‑131

步骤a：将二甲基氨基甲酰氯(0.92mL，10mmol)缓慢添加至(S)‑2‑氨基‑3‑甲基丁酸苯甲酯盐酸盐(2.44g；10mmol)和许尼希氏碱(3.67mL，21mmol)在THF(50mL)中的溶液中。将所得白色悬浮液在室温搅拌过夜(16小时)并减压浓缩。使残余物在乙酸乙酯与水之间分配。将有机层用盐水洗涤，干燥(MgSO₄)，过滤并减压浓缩。所得黄色油状物经快速色谱用乙酸乙酯:己烷(1:1)洗脱来纯化。将所收集级份真空浓缩，得到2.35g(85%)透明油状物。¹H NMR(300MHz,DMSO‑d₆)δppm0.84(d,J=6.95Hz,3H),0.89(d,J=6.59Hz,3H),1.98‑2.15(m,1H),2.80(s,6H),5.01‑5.09(m,J=12.44Hz,1H),5.13(d,J=12.44Hz,1H),6.22(d,J=8.05Hz,1H),7.26‑7.42(m,5H)。LC(条件1):R_t=1.76min；MS:[M+H]⁺C₁₆H₂₂N₂O₃的分析计算值为279.17；实验值为279.03。
步骤b：向以上所制备的中间体(2.35g；8.45mmol)的MeOH(50mL)溶液中添加Pd/C(10%；200mg)，然后将所得黑色悬浮液用N2(3×)冲洗并置于1大气压H₂下。将混合物在室温搅拌过夜且通过微纤维过滤器(microfiber filter)过滤，除去催化剂。随后将所得透明溶液减压浓缩，得到1.43g(89%)白色泡沫状的Cap‑131，其不经进一步纯化就使用。¹H NMR(500MHz,DMSO‑d₆)δppm0.87(d,J=4.27Hz,3H),0.88(d,J=3.97Hz,3H),1.93‑2.11(m,1H),2.80(s,6H),3.90(dd,J=8.39,6.87Hz,1H),5.93(d,J=8.54Hz,1H),12.36(s,1H)。LC(条件1):R_t=0.33min；MS:[M+H]⁺C₈H₁₇N₂O₃的分析计算值为189.12；实验值为189.04。
Cap‑132

根据对Cap‑131所述的方法从(S)‑2‑氨基丙酸苯甲酯盐酸盐制备Cap‑132。¹H NMR(500MHz,DMSO‑d₆)δppm1.27(d,J=7.32Hz,3H),2.80(s,6H),4.06(qt,1H),6.36(d,J=7.32Hz,1H),12.27(s,1H)。LC(条件1):R_t=0.15min；MS:[M+H]⁺C₆H₁₃N₂O₃的分析计算值为：161.09；实验值为161.00。
Cap‑133

根据对Cap‑47所述的方法从(S)‑2‑氨基‑3‑甲基丁酸叔丁酯盐酸盐和氯甲酸2‑氟乙基酯制备Cap‑133。¹H NMR(500MHz,DMSO‑d₆)δppm0.87(t,J=6.71Hz,6H),1.97‑2.10(m,1H),3.83(dd,J=8.39,5.95Hz,1H),4.14‑4.18(m,1H),4.20‑4.25(m,1H),4.50‑4.54(m,1H),4.59‑4.65(m,1H),7.51(d,J=8.54Hz,1H),12.54(s,1H)。
Cap‑134

根据对Cap‑51所述的方法从(S)‑二乙基丙氨酸和氯甲酸甲酯制备Cap‑134。¹H NMR(500MHz,DMSO‑d₆)δppm0.72‑0.89(m,6H),1.15‑1.38(m,4H),1.54‑1.66(m,1H),3.46‑3.63(m,3H),4.09(dd,J=8.85,5.19Hz,1H),7.24(d,J=8.85Hz,1H),12.55(s,1H)。LC(条件2):R_t=0.66min；LC/MS:[M+H]⁺C₉H₁₈NO₄的分析计算值为204.12；实验值为204.02。
Cap‑135

使D‑2‑氨基‑(4‑氟苯基)乙酸(338mg，2.00mmol)、1N HCl/乙醚(2.0mL，2.0mmol)和福尔马林(37%，1mL)在甲醇(5mL)中的溶液在25℃经10%钯/碳(60mg)进行气囊氢化，历时16h。随后将混合物通过Celite过滤，得到白色泡沫状的Cap‑135的HCl盐(316mg，80%)。¹H NMR(300MHz,MeOH‑d₄)δ7.59(dd,J=8.80,5.10Hz,2H),7.29(t,J=8.6Hz,2H),5.17(s,1H),3.05(极宽单峰(v br s),3H),2.63(极宽单峰，3H)；R_t=0.19min(条件‑MS‑W5);均一性指数为95%；LRMS:[M+H]⁺C₁₀H₁₃FNO₂的分析计算值为198.09；实验值为198.10。
Cap‑136

在氮气下向1‑苯甲基‑1H‑咪唑(1.58g,10.0mmol)在无水乙醚(50mL)中的冷却(‑50℃)悬浮液中滴加正丁基锂(浓度为2.5M，于己烷中,4.0mL,10.0mmol)。在‑50℃搅拌20min之后，将无水二氧化碳(通过燥石膏(Drierite))鼓泡到反应混合物中，历时10min，随后将其温热至25℃。将二氧化碳添加至所述反应混合物中形成大量沉淀物，过滤沉淀物，得到吸湿性的白色固体，将其吸收在水(7mL)中，酸化至pH值=3，冷却且通过刮擦诱导结晶。过滤该沉淀物得到白色固体，将其悬浮在甲醇中，用1N HCl/乙醚(4mL)处理并真空浓缩。将残余物从水(5mL)冻干，得到白色固体状的Cap‑136的HCl盐(817mg,40%)。¹H NMR(300MHz,DMSO‑d₆)δ7.94(d,J=1.5Hz,1H),7.71(d,J=1.5Hz,1H),7.50‑7.31(m,5H),5.77(s,2H)；R_t=0.51min(条件‑MS‑W5);均一性指数为95%；LRMS:[M+H]⁺C₁₁H₁₂N₂O₂的分析计算值为203.08；实验值为203.11。
Cap‑137

Cap‑137，步骤a

将1‑氯‑3‑氰基异喹啉(188mg,1.00mmol；根据WO2003/099274中的操作制备)(188mg,1.00mmol)、氟化铯(303.8mg,2.00mmol)、二氯化二(三叔丁基膦)钯(10mg,0.02mmol)和2‑(三丁基甲锡烷基)呋喃(378μL,1.20mmol)在无水二噁烷(10mL)中的悬浮液在氮气下在80℃加热16h，随后将其冷却至25℃并在剧烈搅拌下用饱和氟化钾水溶液处理1h。使该混合物在乙酸乙酯与水之间分配，将有机相分离，用盐水洗涤，经Na₂SO₄干燥，过滤并浓缩。用硅胶(用0%至30%乙酸乙酯/己烷洗脱)纯化残余物，得到白色固体状的Cap‑137，步骤a(230mg,105%)，其直接用于后续步骤。R_t=1.95min(条件‑MS‑W2);均一性指数为90%；LRMS:[M+H]⁺C₁₄H₈N₂O的分析计算值为221.07；实验值为221.12。
Cap‑137
向Cap137，步骤a(110mg,0.50mmol)和高碘酸钠(438mg,2.05mmol)在四氯化碳(1mL)、乙腈(1mL)和水(1.5mL)中的悬浮液中添加水合三氯化钌(2mg，0.011mmol)。将混合物在25℃搅拌2h，随后在二氯甲烷与水之间分配。将水层分离，再用二氯甲烷萃取两次，将合并的二氯甲烷萃取物经Na₂SO₄干燥，过滤并浓缩。用己烷研磨残余物，得到浅灰白色固体状的Cap‑137(55mg,55%)。R_t=1.10min(条件‑MS‑W2);均一性指数为90%；LCMS：[M+H]⁺C₁₁H₈N₂O₂的分析计算值为200.08；实验值为200.08。
Cap138至158
合成策略：方法A：

Cap‑138

Cap‑138，步骤a

向5‑羟基异喹啉(根据WO2003/099274中的操作制备)(2.0g,13.8mmol)和三苯基膦(4.3g,16.5mmol)在无水四氢呋喃(20mL)中的搅拌着的悬浮液中逐份添加无水甲醇(0.8mL)和偶氮二甲酸二乙酯(3.0mL，16.5mmol)。将混合物在室温搅拌20h，随后将其用乙酸乙酯稀释并用盐水洗涤，经Na₂SO₄干燥，过滤并浓缩。使残余物预吸收在硅胶上且进行色谱纯化(用40%乙酸乙酯/己烷洗脱)，得到浅黄色固体状的Cap‑138，步骤a(1.00g,45%)。¹H NMR(CDCl₃,500MHz)δ9.19(s,1H),8.51(d,J=6.0Hz,1H),7.99(d,J=6.0Hz,1H),7.52‑7.50(m,2H),7.00‑6.99(m,1H),4.01(s,3H)；R_t=0.66min(条件D2);均一性指数为95%；LCMS：[M+H]⁺C₁₀H₁₀NO的分析计算值为160.08；实验值为160.1。
Cap‑138，步骤b

在室温向Cap138，步骤a(2.34g,14.7mmol)在无水二氯甲烷(50mL)中的搅拌着的溶液中一次性添加间氯过苯甲酸(77%,3.42g,19.8mmol)。搅拌20h之后，添加粉状碳酸钾(2.0g)并将混合物在室温搅拌1h，随后将其过滤并真空浓缩，得到浅黄色固体状的Cap‑138，步骤b(2.15g,83.3%)，其足够纯，可直接用于下一步骤。¹H NMR(CDCl₃,400MHz)δ8.73(d,J=1.5Hz,1H),8.11(dd,J=7.3,1.7Hz,1H),8.04(d,J=7.1Hz,1H),7.52(t,J=8.1Hz,1H),7.28(d,J=8.3Hz,1H),6.91(d,J=7.8Hz,1H),4.00(s,3H)；R_t=0.92min,(条件‑D1);均一性指数为90%；LCMS：[M+H]⁺C₁₀H₁₀NO₂的分析计算值为176.07；实验值为176.0。
Cap‑138，步骤c

在室温在氮气下向Cap138，步骤b(0.70g，4.00mmol)和三乙胺(1.1mL，8.00mmol)在无水乙腈(20mL)中的搅拌着的溶液中添加氰化三甲基甲硅烷(1.60mL，12.00mmol)。将混合物在75℃加热20h，随后将其冷却至室温，用乙酸乙酯稀释并用饱和碳酸氢钠溶液和盐水洗涤，随后经Na₂SO₄干燥且浓缩溶剂。对残余物进行硅胶快速色谱纯化(用5%乙酸乙酯/己烷至25%乙酸乙酯/己烷梯度洗脱)，得到白色结晶固体状的Cap‑138，步骤c(498.7mg，68%)以及从滤液中回收的223mg(30%)额外的Cap‑138，步骤c。¹H NMR(CDCl₃,500MHz)δ8.63(d,J=5.5Hz,1H),8.26(d,J=5.5Hz,1H),7.88(d,J=8.5Hz,1H),7.69(t,J=8.0Hz,1H),7.08(d,J=7.5Hz,1H),4.04(s,3H)；R_t=1.75min,(条件‑D1);均一性指数为90%；LCMS：[M+H]⁺C₁₁H₉N₂O的分析计算值为185.07；实验值为185.10。
Cap‑138
用5N氢氧化钠溶液(10mL)处理Cap‑138，步骤c(0.45g,2.44mmol)并将所得悬浮液在85℃加热4h，然后冷却至25℃，用二氯甲烷稀释并用1N盐酸酸化。将有机相分离，用盐水洗涤，经Na₂SO₄干燥，浓缩至1/4体积并过滤，得到黄色固体状的Cap‑138(0.44g,88.9%)。¹H NMR(DMSO‑d₆,400MHz)δ13.6(宽单峰，1H),8.56(d,J=6.0Hz,1H),8.16(d,J=6.0Hz,1H),8.06(d,J=8.8Hz,1H),7.71‑7.67(m,1H),7.30(d,J=8.0Hz,1H),4.02(s,3H)；R_t=0.70min(条件‑D1);均一性指数为95%；LCMS：[M+H]⁺C₁₁H₁₀NO₃的分析计算值为204.07；实验值为204.05。
合成策略：方法B(来源于Tetrahedron Letters,2001,42,6707)。

Cap‑139

Cap‑139，步骤a

向含有1‑氯‑6‑甲氧基异喹啉(1.2g,6.2mmol；根据WO2003/099274中的操作制备)、氰化钾(0.40g，6.2mmol)、1,5‑二(二苯基膦基)戊烷(0.27g,0.62mmol)和乙酸钯(II)(70mg,0.31mmol)在无水甲苯(6mL)中的经氩气脱气的悬浮液的厚壁螺旋盖小瓶中添加N,N,N',N'‑四甲基乙二胺(0.29mL,2.48mmol)。将小瓶密封，在150℃加热22h，随后冷却至25℃。将反应混合物用乙酸乙酯稀释，用水和盐水洗涤，经Na₂SO₄干燥，过滤并浓缩。残余物在硅胶上纯化(用5%乙酸乙酯/己烷至25%乙酸乙酯/己烷梯度洗脱)，得到白色固体状的Cap‑139，步骤a(669.7mg，59%)。¹H NMR(CDCl₃,500MHz)δ8.54(d,J=6.0Hz,1H),8.22(d,J=9.0Hz,1H),7.76(d,J=5.5Hz,1H),7.41‑7.39(m,1H),7.13(d,J=2.0Hz,1H),3.98(s,3H)；Rt=1.66min(条件‑D1);均一性指数为90%；LCMS：[M+H]⁺C₁₁H₉N₂O的分析计算值为185.07；实验值为185.2。
Cap‑139
根据对Cap138所述的操作，用5N NaOH通过对Cap‑139，步骤a进行碱水解来制备Cap‑139。¹H NMR(400MHz,DMSO‑d₆)δ13.63(极宽单峰，1H),8.60(d,J=9.3Hz,1H),8.45(d,J=5.6Hz,1H),7.95(d,J=5.9Hz,1H),7.49(d,J=2.2Hz,1H),7.44(dd,J=9.3,2.5Hz,1H),3.95(s,3H)；R_t=0.64min(条件‑D1);均一性指数为90%；LCMS：[M+H]⁺C₁₁H₁₀NO₃的分析计算值为204.07；实验值为204.05。
Cap‑140

Cap‑140，步骤a

在25℃在氮气下向1,3‑二氯‑5‑乙氧基异喹啉(482mg,2.00mmol；根据WO2005/051410中的操作制备)、乙酸钯(II)(9mg,0.04mmol)、碳酸钠(223mg,2.10mmol)和1,5‑二(二苯基膦基)戊烷(35mg,0.08mmol)在无水二甲基乙酰胺(2mL)中的剧烈搅拌着的混合物中添加N,N,N',N'‑四甲基乙二胺(60mL,0.40mmol)。10min之后，将混合物加热至150℃，随后使用注射泵以1mL份经18h添加丙酮氰醇的储备溶液(由457μL丙酮氰醇在4.34mL DMA中制备)。随后使混合物在乙酸乙酯与水之间分配，并将有机层分离，用盐水洗涤，经Na₂SO₄干燥，过滤并浓缩。残余物在硅胶上纯化(用10%乙酸乙酯/己烷至40%乙酸乙酯/己烷梯度洗脱)，得到黄色固体状的Cap‑140，步骤a(160mg,34%)。R_t=2.46min(条件‑MS‑W2);均一性指数为90%；LCMS：[M+H]⁺C₁₂H₉ClN₂O的分析计算值为233.05；实验值为233.08。
Cap‑140
如以下用于制备Cap141的操作中所述，用12N HCl通过对Cap‑140，步骤a进行酸水解来制备Cap‑140。R_t=2.24min(条件‑MS‑W2);均一性指数为90%；LCMS：[M+H]⁺C₁₂H₁₁ClNO₃的分析计算值为252.04；实验值为252.02。
Cap‑141

Cap‑141，步骤a

如用于制备Cap‑140，步骤a的操作(见上)中所述，从1‑溴‑3‑氟异喹啉(使用J.Med.Chem.1970,13,613中所述的操作从3‑氨基‑1‑溴异喹啉制备)制备Cap‑141，步骤a。¹H NMR(500MHz,CDCl₃)δ8.35(d,J=8.5Hz,1H),7.93(d,J=8.5Hz,1H),7.83(t,J=7.63Hz,1H),7.77‑7.73(m,1H),7.55(s,1H)；R_t=1.60min(条件‑D1);均一性指数为90%；LCMS：[M+H]⁺C₁₀H₆FN₂的分析计算值为173.05；实验值为172.99。
Cap‑141
将Cap‑141，步骤a(83mg,0.48mmol)用12N HCl(3mL)处理并将所得浆液在80℃加热16h，随后将其冷却至室温并用水(3mL)稀释。将混合物搅拌10min，随后过滤，得到灰白色固体状的Cap‑141(44.1mg,48%)。将滤液用二氯甲烷稀释并用盐水洗涤，经Na₂SO₄干燥，且浓缩，得到额外Cap‑141，其足够纯，可直接用于下一步骤(29.30mg,32%)。¹H NMR(DMSO‑d₆,500MHz)δ14.0(宽单峰，1H),8.59‑8.57(m,1H),8.10(d,J=8.5Hz,1H),7.88‑7.85(m,2H),7.74‑7.71(m,1H)；R_t=1.33min(条件‑D1);均一性指数为90%；LCMS：[M+H]⁺C₁₀H₇FNO₂的分析计算值为192.05；实验值为191.97。
Cap‑142

Cap‑142，步骤a

如用于制备Cap‑138，步骤b和c的两步操作中所述，从N‑氧化4‑溴异喹啉制备Cap‑142，步骤a。R_t=1.45min(条件‑MS‑W1);均一性指数为90%；LCMS：[M+H]⁺C₁₀H₆BrN₂的分析计算值为232.97；实验值为233.00。
Cap‑142，步骤b

向Cap‑142，步骤a(116mg，0.50mmol)、磷酸三钾(170mg,0.80mmol)、乙酸钯(II)(3.4mg,0.015mmol)和2‑(二环己基膦基)联苯(11mg,0.03mmol)在无水甲苯(1mL)中的经氩气脱气的悬浮液中添加吗啉(61μL，0.70mmol)。将混合物在100℃加热16h，冷却至25℃，通过硅藻土过滤并浓缩。残余物在硅胶上纯化(用10%至70%乙酸乙酯/己烷梯度洗脱)，得到黄色固体状的Cap‑142，步骤b(38mg,32%)，其可直接用于下一步骤。R_t=1.26min(条件‑MS‑W1);均一性指数为90%；LCMS：[M+H]⁺C₁₄H₁₄N₃O的分析计算值为240.11；实验值为240.13。
Cap‑142
如用于Cap138的操作中所述，用5N氢氧化钠从Cap‑142，步骤b制备Cap‑142。R_t=0.72min(条件‑MS‑W1);均一性指数为90%；LCMS：[M+H]⁺C₁₄H₁₅N₂O₃的分析计算值为259.11；实验值为259.08。
Cap‑143

Cap‑143，步骤a

向3‑氨基‑1‑溴异喹啉(444mg，2.00mmol)在无水二甲基甲酰胺(10mL)中的搅拌着的溶液中一次性添加氢化钠(60%，未经洗涤，96mg，2.4mmol)。将混合物在25℃搅拌5min，随后添加2‑溴乙醚(90%，250μL，2.00mmol)。再将混合物在25℃搅拌5h且在75℃搅拌72h，随后将其冷却至25℃，用饱和氯化铵溶液淬灭并用乙酸乙酯稀释。将有机层分离，用水和盐水洗涤，经Na₂SO₄干燥，过滤并浓缩。残余物在硅胶上纯化(用0%至70%乙酸乙酯/己烷梯度洗脱)，得到黄色固体状的Cap‑143，步骤a(180mg，31%)。R_t=1.75min(条件‑MS‑W1);均一性指数为90%；LCMS：[M+H]⁺C₁₃H₁₄BrN₂O的分析计算值为293.03；实验值为293.04。
Cap‑143
向Cap‑143，步骤a(154mg，0.527mmol)在无水四氢呋喃(5mL)中的冷(‑60℃)溶液中添加正丁基锂在己烷(2.5M，0.25mL，0.633mmol)中的溶液。10min之后，将无水二氧化碳鼓泡到反应混合物中，历时10min，随后用1N HCl淬灭并温热至25℃。随后用二氯甲烷(3×30mL)萃取混合物并将合并的有机萃取物真空浓缩。残余物经反相HPLC(MeOH/水/TFA)纯化，得到Cap‑143(16mg，12%)。R_t=1.10min(条件‑MS‑W1);均一性指数为90%；LCMS：[M+H]⁺C₁₄H₁₅N₂O₃的分析计算值为259.11；实验值为259.08。
Cap‑144

Cap‑144，步骤a

将1,3‑二氯异喹啉(2.75g，13.89mmol)以小份添加至发烟硝酸(10mL)和浓硫酸(10mL)的冷(0℃)溶液中。将混合物在0℃搅拌0.5h，随后将其逐渐温热至25℃，将其在25℃搅拌16h。随后将混合物倒入含有碎冰和水的烧杯中并将所得悬浮液在0℃搅拌1h，随后将其过滤，得到黄色固体状的Cap‑144，步骤a(2.73g，81%)，其可直接使用。R_t=2.01min(条件‑D1);均一性指数为95%；LCMS：[M+H]⁺C₉H₅Cl₂N₂O₂的分析计算值为242.97；实验值为242.92。
Cap‑144，步骤b

将Cap‑144，步骤a(0.30g，1.23mmol)吸收在甲醇(60mL)中并用氧化铂(30mg)处理，并使悬浮液在7psi H₂条件下进行帕尔氢化(Parr hydrogenation)，历时1.5h。随后添加福尔马林(5mL)和额外氧化铂(30mg)，并使悬浮液在45psi H₂条件下再进行帕尔氢化，历时13h，随后将其通过硅藻土抽滤并浓缩至1/4体积。抽滤所得沉淀物，得到黄色固体状的标题化合物，对其进行硅胶快速色谱纯化(用5%乙酸乙酯/己烷至25%乙酸乙酯/己烷梯度洗脱)，得到浅黄色固体状的Cap‑144，步骤b(231mg，78%)。R_t=2.36min(条件‑D1);均一性指数为95%；¹H NMR(400MHz,CDCl₃)δ8.02(s,1H),7.95(d,J=8.6Hz,1H),7.57‑7.53(m,1H),7.30(d,J=7.3Hz,1H),2.88(s,6H)；LCMS：[M+H]⁺C₁₁H₁₁Cl₂N₂的分析计算值为241.03；实验值为241.02。HRMS:[M+H]⁺C₁₁H₁₁Cl₂N₂的分析计算值为241.0299；实验值为241.0296。
Cap‑144，步骤c

根据对制备Cap‑139，步骤a所述的操作从Cap‑144，步骤b制备Cap‑144，步骤c。R_t=2.19min(条件‑D1);均一性指数为95%；LCMS：[M+H]⁺C₁₂H₁₁ClN₃的分析计算值为232.06；实验值为232.03。HRMS:[M+H]⁺C₁₂H₁₁ClN₃的分析计算值为232.0642；实验值为232.0631。
Cap‑144
根据对Cap‑141所述的操作制备Cap‑144。R_t=2.36min(条件‑D1)；90%；LCMS：[M+H]⁺C₁₂H₁₂ClN₂O₂的分析计算值为238.01；实验值为238.09。
Cap‑145至Cap‑162
除非另有说明，否则根据对制备Cap‑138(方法A)或Cap‑139(方法B)所述的操作从适当1‑氯异喹啉制备Cap‑145至Cap‑162，此如下文所概述。

Cap‑163

向2‑丁酮酸(1.0g，9.8mmol)在乙醚(25ml)中的溶液中滴加溴化苯基镁(22ml，浓度为1M的THF溶液)。将反应混合物在约25℃在氮气下搅拌17.5h。用1N HCl酸化反应混合物并用乙酸乙酯(3×100ml)萃取产物。将合并的有机层先后用水和盐水洗涤，并经MgSO₄干燥。真空浓缩之后，得到白色固体。将该固体从己烷/乙酸乙酯重结晶，得到白色针状的Cap‑163(883.5mg)。¹H NMR(DMSO‑d₆,δ=2.5ppm,500MHz):12.71(宽单峰，1H),7.54‑7.52(m,2H),7.34‑7.31(m,2H),7.26‑7.23(m,1H),5.52‑5.39(宽单峰，1H),2.11(m,1H),1.88(m,1H),0.79(表观三重峰，J=7.4Hz,3H)。
Cap‑164

在帕尔瓶中将2‑氨基‑2‑苯基丁酸(1.5g，8.4mmol)、甲醛(14mL，37%的水溶液)、1N HCl(10mL)和10%Pd/C(0.5mg)在MeOH(40mL)中的混合物暴露于50psi的H₂，历时42h。将反应混合物经Celite过滤并真空浓缩，将残余物吸收在MeOH(36mL)中，并用反相HPLC(MeOH/H₂O/TFA)纯化产物，得到白色固体状的Cap‑164的TFA盐(1.7g)。¹H NMR(DMSO‑d₆,δ=2.5ppm,500MHz)7.54‑7.47(m,5H),2.63(m,1H),2.55(s,6H),2.31(m,1H),0.95(表观三重峰，J=7.3Hz,3H)。
Cap‑165

向2‑氨基‑2‑茚满甲酸(258.6mg，1.46mmol)和甲酸(0.6ml，15.9mmol)在1,2‑二氯乙烷(7ml)中的混合物中添加甲醛(0.6ml，37%的水溶液)。将混合物在约25℃搅拌15min，随后在70℃加热8h。真空除去挥发性组分，将残余物溶解在DMF(14mL)中并经反相HPLC(MeOH/H₂O/TFA)纯化，得到粘性油状的Cap‑165的TFA盐(120.2mg)。¹H NMR(DMSO‑d₆,δ=2.5ppm,500MHz):7.29‑7.21(m,4H),3.61(d,J=17.4Hz,2H),3.50(d,J=17.4Hz,2H),2.75(s,6H)。LC/MS:[M+H]⁺C₁₂H₁₆NO₂的分析计算值为206.12；实验值为206.07。
Cap‑166a和Cap‑166b

根据对合成Cap‑7a和Cap‑7b所述的方法，从(1S,4S)‑(+)‑2‑甲基‑2,5‑二氮杂二环[2.2.1]庚烷(2HBr)制备Cap‑166a和Cap‑166b，例外之处为使用半制备性Chrialcel OJ柱，20×250mm，10μm用85:15庚烷/乙醇混合物以10mL/min的洗脱速率洗脱25min来分离苯甲酯中间体。Cap‑166b：¹H NMR(DMSO‑d₆,δ=2.5ppm,500MHz):7.45(d,J=7.3Hz,2H),7.27‑7.19(m,3H),4.09(s,1H),3.34(表观宽单峰，1H),3.16(表观宽单峰，1H),2.83(d,J=10.1Hz,1H),2.71(m,2H),2.46(m,1H),2.27(s,3H),1.77(d,J=9.8Hz,1H),1.63(d,J=9.8Hz,1H)。LC/MS:[M+H]⁺C₁₄H₁₉N₂O₂的分析计算值为247.14；实验值为247.11。
Cap‑167

将外消旋Boc‑1,3‑二氢‑2H‑异吲哚甲酸(1.0g，3.8mmol)在20%TFA/CH₂Cl₂中的溶液在约25℃搅拌4h。真空除去所有挥发性组分。在帕尔瓶中将所得粗物质、甲醛(15mL，37%的水溶液)、1N HCl(10mL)和10%Pd/C(10mg)在MeOH中的混合物暴露于H₂(40PSI)，历时23h。反应混合物经Celite过滤并真空浓缩，得到黄色泡沫状的Cap‑167(873.5mg)。¹H NMR(DMSO‑d₆,δ=2.5ppm,500MHz)7.59‑7.38(m,4H),5.59(s,1H),4.84(d,J=14Hz,1H),4.50(d,J=14.1Hz,1H),3.07(s,3H)。LC/MS:[M+H]⁺C₁₀H₁₂NO₂的分析计算值为178.09；实验值为178.65。
Cap‑168

根据对制备Cap‑167所述的操作从外消旋Boc‑氨基茚满‑1‑甲酸制备外消旋Cap‑168。将粗物质按原样使用。
Cap‑169

将2‑氨基‑2‑苯基丙酸盐酸盐(5.0g，2.5mmol)、甲醛(15ml，37%的水溶液)、1N HCl(15ml)和10%Pd/C(1.32g)在MeOH(60mL)中的混合物置于帕尔瓶中并在氢气(55PSI)下摇动4日。反应混合物经Celite过滤并真空浓缩。将残余物吸收在MeOH中并经反相制备性‑HPLC(MeOH/水/TFA)纯化，得到粘性半固体状的Cap‑169的TFA盐(2.1g)。¹H NMR(CDCl₃,δ=7.26ppm,500MHz):7.58‑7.52(m,2H),7.39‑7.33(m,3H),2.86(宽单峰，3H),2.47(宽单峰，3H),1.93(s,3H)。LC/MS:[M+H]⁺C₁₁H₁₆NO₂的分析计算值为194.12；实验值为194.12。
Cap‑170

向在水(15ml)中的(S)‑2‑氨基‑2‑(四氢‑2H‑吡喃‑4‑基)乙酸(505mg；3.18mmol；得自Astatech)中添加碳酸钠(673mg；6.35mmol)，并将所得混合物冷却至0℃，随后经5分钟滴加氯甲酸甲酯(0.26ml；3.33mmol)。将反应混合物搅拌18小时，同时使冷却浴解冻至环境温度。随后使反应混合物在1N HCl与乙酸乙酯之间分配。除去有机层，再用2份乙酸乙酯进一步萃取水层。将合并的有机层用盐水洗涤，经硫酸镁干燥，过滤并真空浓缩，得到Cap‑170，其为无色残余物。¹H NMR(500MHz,DMSO‑d₆)δppm12.65(1H，宽单峰),7.44(1H,d,J=8.24Hz),3.77‑3.95(3H,m),3.54(3H,s),3.11‑3.26(2H,m),1.82‑1.95(1H,m),1.41‑1.55(2H,m),1.21‑1.39(2H,m)；LC/MS:[M+H]⁺C₉H₁₆NO₅的分析计算值为218.1；实验值为218.1。
Cap‑171

将2‑(苯甲基氧基羰基氨基)‑2‑(氧杂环丁烷‑3‑亚基)乙酸甲酯(200mg，0.721mmol；Il Farmaco(2001),56,609‑613)在乙酸乙酯(7ml)和CH₂Cl₂(4.00ml)中的溶液通过鼓泡氮气10min来脱气。随后添加二碳酸二甲酯(0.116ml，1.082mmol)和Pd/C(20mg，0.019mmol)，向反应混合物装备氢气气囊且在环境温度搅拌过夜，此时TLC(95:5CH₂Cl₂/MeOH：用由1g Ce(NH₄)₂SO₄、6g钼酸铵、6ml硫酸和100ml水制得的着色剂来目测)表明完全转化。将反应混合物通过celite过滤并浓缩。残余物经(在25Samplet上加载二氯甲烷；在25S柱上用二氯甲烷洗脱3CV，随后用0%至5%MeOH/二氯甲烷洗脱250ml，随后保持在5%MeOH/二氯甲烷洗脱250ml；9ml级份)纯化。收集含有期望的物质的级份并浓缩，得到120mg(81%)无色油状的2‑(甲氧基羰基氨基)‑2‑(氧杂环丁烷‑3‑基)乙酸甲酯。¹H NMR(500MHz,氯仿‑D)δppm3.29‑3.40(m,J=6.71Hz,1H)3.70(s,3H)3.74(s,3H)4.55(t,J=6.41Hz,1H)4.58‑4.68(m,2H)4.67‑4.78(m,2H)5.31(宽单峰，1H)。LC/MS:[M+H]⁺C₈H₁₄NO₅的分析计算值为204.2；实验值为204.0。
向在THF(2mL)和水(0.5mL)中的2‑(甲氧基羰基氨基)‑2‑(氧杂环丁烷‑3‑基)乙酸甲酯(50mg，0.246mmol)中添加一水合氢氧化锂(10.33mg，0.246mmol)。将所得溶液在环境温度搅拌过夜。TLC(1:1EA/己烷；哈尼森着色剂(Hanessian stain)[1g Ce(NH₄)₂SO₄、6g钼酸铵、6ml硫酸和100ml水])表明约10%原料剩余。再添加3mg LiOH，并搅拌过夜，此时TLC显示无原料剩余。真空浓缩且置于高真空过夜，得到55mg无色固体状的2‑(甲氧基羰基氨基)‑2‑(氧杂环丁烷‑3‑基)乙酸锂。¹H NMR(500MHz,MeOD)δppm3.39‑3.47(m,1H)3.67(s,3H)4.28(d,J=7.93Hz,1H)4.64(t,J=6.26Hz,1H)4.68(t,J=7.02Hz,1H)4.73(d,J=7.63Hz,2H)。
Cap‑172

Cap‑172步骤a

下列重氮化步骤修改自Barton,A.；Breukelman,S.P；Kaye,P.T.；Meakins,G.D.；Morgan,D.J.J.C.S.Perkin Trans I1982,159‑164：将NaNO₂(166毫克，2.4毫摩尔)在水(0.6毫升)中的溶液慢慢添加至2‑氨基‑5‑乙基‑1,3‑噻唑‑4‑羧酸甲酯(186毫克，1.0毫摩尔)、CuSO₄·5H₂O(330毫克，1.32毫摩尔)、NaCl(260毫克，4.45毫摩尔)和H₂SO₄(5.5毫升)在水(7.5毫升)中的搅拌着的冷(0℃)溶液内。将混合物在0℃搅拌45分钟，然后使其温热至室温，将其在室温再搅拌1小时，然后添加CuCl(118毫克)。将此混合物在室温再搅拌16小时，接着，将其用盐水稀释，并用醚萃取两次。将有机层合并，用MgSO₄干燥并浓缩，得到2‑氯‑5‑乙基噻唑‑4‑羧酸甲酯(即Cap‑172步骤a)(175毫克，85%)，为橙色油状物(80%纯)，将其直接用于后续反应。R_t=1.99分钟(条件‑MD1)；LC/MS：[M+H]⁺C₇H₉ClNO₂S的分析计算值：206.01；实验值：206.05。
Cap‑172
于2‑氯‑5‑乙基噻唑‑4‑羧酸甲酯(175毫克)在THF/H₂O/MeOH(20毫升/3毫升/12毫升)中的溶液内，添加LiOH(305毫克，12.76毫摩尔)。将混合物在室温搅拌过夜，然后将其浓缩，并用1N HCl/醚(25毫升)中和。将残留物用乙酸乙酯萃取两次，然后将有机层合并，用MgSO₄干燥并蒸发，得到Cap‑172(60毫克，74%)，为红色固体，不经进一步纯化就使用。¹H NMR(300MHz,DMSO‑d₆)δppm13.03‑13.42(1H,m),3.16(2H,q,J=7.4Hz),1.23(3H,t,J=7.5Hz).R_t=1.78分钟(条件‑MD1)；LC/MS：[M+H]⁺C₆H₇ClNO₂S的分析计算值：191.99；实验值：191.99。
Cap‑173

Cap‑173步骤a

下列重氮化步骤修改自Barton,A.；Breukelman,S.P.；Kaye,P.T.；Meakins,G.D.；Morgan,D.J.J.C.S.Perkin Trans I1982,159‑164：将NaNO₂(150毫克，2.17毫摩尔)在水(1.0毫升)中的溶液逐滴添加至2‑氨基‑5‑乙基‑1,3‑噻唑‑4‑羧酸甲酯(186毫克，1.0毫摩尔)在50%H₃PO₂(3.2毫升)中的搅拌着的冷(0℃)溶液内。将混合物在0℃搅拌1小时，然后使其温热至室温，将其在室温再搅拌2小时。再次冷却至0℃后，将混合物用NaOH(85毫克)在水(10毫升)中的溶液慢慢地处理。接着，将混合物用饱和NaHCO₃溶液稀释，并用醚萃取两次。将有机层合并，用MgSO₄干燥并浓缩，得到5‑乙基噻唑‑4‑羧酸甲酯(即Cap‑173步骤a)(134毫克，78%)，为橙色油状物(85%纯)，将其直接用于后续反应。R_t=1.58分钟(条件‑MD1)；LC/MS：[M+H]⁺C7H10NO₂S的分析计算值：172.05；实验值：172.05。
Cap‑173
于5‑乙基噻唑‑4‑羧酸甲酯(134毫克)在THF/H₂O/MeOH(18毫升/2.7毫升/11毫升)中的溶液内，添加LiOH(281毫克，11.74毫摩尔)。将混合物在室温搅拌过夜，然后将其浓缩，并用1N HCl/醚(25毫升)中和。将残留物用乙酸乙酯萃取两次，然后将有机层合并，用MgSO₄干燥并蒸发，得到Cap‑173(90毫克，73%)，为橙色固体，不经进一步纯化就使用。¹H NMR(300MHz,DMSO‑d₆)δppm12.74‑13.04(1H,m),3.20(2H,q,J=7.3Hz),1.25(3H,t,J=7.5Hz).R_t=1.27分钟(条件‑MD1)；LC/MS：[M+H]⁺C₆H₈NO₂S的分析计算值：158.03；实验值：158.04。
Cap‑174

Cap‑174步骤a

将三氟甲烷磺酐(5.0克，18.0毫摩尔)逐滴添加至3‑羟基皮考啉酸甲酯(2.5克，16.3毫摩尔)和TEA(2.5毫升，18.0毫摩尔)在CH₂Cl₂(80毫升)中的冷(0℃)溶液内。将混合物在0℃搅拌1小时，然后使其温热至室温，将其在室温再搅拌1小时。接着，用饱和NaHCO₃溶液(40毫升)淬灭混合物，将有机层分离，用盐水洗涤，用MgSO₄干燥并浓缩，得到3‑(三氟甲基磺酰氧基)皮考啉酸甲酯(即Cap‑174步骤a)(3.38克，73%)，为深棕色油状物(>95%纯)，不经进一步纯化就直接使用。¹H NMR(300MHz,CDCl₃)δppm8.72‑8.79(1H,m),7.71(1H,d,J=1.5Hz),7.58‑7.65(1H,m),4.04(3H,s).R_t=1.93分钟(条件‑MD1)；LC/MS：[M+H]⁺C₈H₇F₃NO₅S的分析计算值：286.00；实验值：286.08。
Cap‑174
于3‑(三氟甲基磺酰氧基)皮考啉酸甲酯(570毫克，2.0毫摩尔)在DMF(20毫升)中的溶液中，添加LiCl(254毫克，6.0毫摩尔)、三丁基(乙烯基)锡烷(761毫克，2.4毫摩尔)和双(三苯膦)二氯化钯(42毫克，0.06毫摩尔)。将混合物在100℃加热过夜，然后在室温将饱和KF溶液(20毫升)添加至反应混合物中。将此混合物搅拌4小时，接着，将其通过Celite过滤，并用乙酸乙酯洗涤Celite垫。然后将滤液的水相分离，并真空浓缩。将残留物用4N HCl/二氧六环(5毫升)处理，然后将所得混合物用甲醇萃取，过滤，并蒸发，得到Cap‑174(260毫克)，为绿色固体，其被无机盐轻微污染，但不经进一步纯化就使用。¹H NMR(300MHz,DMSO‑d₆)δppm8.21(1H,d,J=3.7Hz),7.81‑7.90(1H,m),7.09(1H,dd,J=7.7,4.8Hz),6.98(1H,dd,J=17.9,11.3Hz),5.74(1H,dd,J=17.9,1.5Hz),5.20(1H,d,J=11.0Hz).R_t=0.39分钟(条件‑MD1)；LC/MS：[M+H]⁺C₈H₈NO₂的分析计算值：150.06；实验值：150.07。
Cap‑175

Cap‑175步骤a

于3‑(三氟甲基磺酰氧基)皮考啉酸甲酯(即Cap173步骤a)(570毫克，2.0毫摩尔)(Cap‑174制备中的中间体)在DMF(20毫升)中的溶液内，添加LiCl(254毫克，6.0毫摩尔)、三丁基(乙烯基)锡烷(761毫克，2.4毫摩尔)和双(三苯膦)二氯化钯(42毫克，0.06毫摩尔)。将混合物于100℃加热4小时，然后真空除去溶剂。将残留物吸收在乙腈(50毫升)和己烷(50毫升)中，并将所得混合物用己烷洗涤两次。然后将乙腈层分离，通过Celite过滤，并蒸发。在Horizon仪器上通过快速色谱法纯化残留物(用25%乙酸乙酯/己烷至65%乙酸乙酯/己烷梯度洗脱)，得到3‑乙烯基皮考啉酸甲酯(即Cap‑175步骤a)(130毫克，40%)，为黄色油状物。¹H NMR(300MHz,CDCl₃)δppm8.60(1H,dd,J=4.6,1.7Hz),7.94(1H,d,J=7.7Hz),7.33‑7.51(2H,m),5.72(1H,d,J=17.2Hz),5.47(1H,d,J=11.0Hz),3.99(3H,s).R_t=1.29分钟(条件‑MD1)；LC/MS：[M+H]⁺C₉H₁₀NO₂的分析计算值：164.07；实验值：164.06。
Cap‑175步骤b

将钯/碳(10%，25毫克)添加至3‑乙烯基皮考啉酸甲酯(120毫克，0.74毫摩尔)在乙醇(10毫升)中的溶液内。将此悬浮液于室温和氢气氛下搅拌1小时，然后，使其通过Celite过滤，并用甲醇洗涤Celite垫。将滤液浓缩至干，得到3‑乙基皮考啉酸甲酯(即Cap‑175步骤b)，将其直接用于后续反应。R_t=1.15分钟(条件‑MD1)；LC/MS：[M+H]⁺C₉H₁₂NO₂的分析计算值：166.09；实验值：166.09。
Cap‑175
于3‑乙基皮考啉酸甲酯在THF/H₂O/MeOH(5毫升/0.75毫升/3毫升)中的溶液内，添加LiOH(35毫克，1.47毫摩尔)。将混合物在室温搅拌2天，然后添加另外的LiOH(80毫克)。在室温再搅拌24小时后，过滤混合物，并真空除去溶剂。接着，将残留物用4N HCl/二氧六环(5毫升)处理，并将所得悬浮液浓缩至干，得到Cap‑175，为黄色固体，不经进一步纯化就使用。¹H NMR(300MHz,DMSO‑d₆)δppm8.47(1H,dd,J=4.8,1.5Hz),7.82‑7.89(1H,m),7.53(1H,dd,J=7.7,4.8Hz),2.82(2H,q,J=7.3Hz),1.17(3H,t,J=7.5Hz).R_t=0.36分钟(条件‑MD1)；LC/MS：[M+H]⁺C₈H₁₀NO₂的分析计算值：152.07；实验值：152.10。
Cap‑176

Cap‑176步骤a

将1,4‑二氧杂螺[4.5]癸‑8‑酮(15克，96毫摩尔)在EtOAc(150毫升)中的溶液添加至2‑(苄氧羰基氨基)‑2‑(二甲氧基磷酰基)乙酸甲酯(methyl2‑(benzyloxycarbonylamino)‑2‑(dimethoxyphosphoryl)acetate)(21.21克，64.0毫摩尔)在1,1,3,3‑四甲基胍(10.45毫升，83毫摩尔)和EtOAc(150毫升)中的溶液内。将所得溶液在环境温度搅拌72小时，然后，将其用EtOAc(25毫升)稀释。将有机层用1N HCl(75毫升)、H₂O(100毫升)和盐水(100毫升)洗涤，干燥(MgSO₄)，过滤并浓缩。残留物经Biotage(5%至25%EtOAc/己烷；300克柱)纯化。然后，使含有产物的合并级份在真空下浓缩，并使残留物从己烷/EtOAc重结晶，得到白色结晶，其对应于2‑(苄氧羰基氨基)‑2‑(1,4‑二氧杂螺[4.5]癸‑8‑亚基)乙酸甲酯(6.2克)。¹H NMR(400MHz,CDCl₃‑d)δppm7.30‑7.44(5H,m),6.02(1H,宽单峰),5.15(2H,s),3.97(4H,s),3.76(3H,宽单峰),2.84‑2.92(2H,m),2.47(2H,t,J=6.40Hz),1.74‑1.83(4H,m).LC(条件OL1)：R_t=2.89分钟.LC/MS：[M+Na]⁺C₁₉H₂₃NNaO₆的分析计算值：745.21；实验值：745.47
Cap176步骤b

酯Cap176步骤b根据Burk,M.J.；Gross,M.F.和Martinez J.P.(J.Am.Chem.Soc.,1995,117,9375‑9376和其中的参考文献)的方法，从烯烃Cap176步骤a制备：在N₂被覆下，于500毫升高压瓶中，装填脱气MeOH(200毫升)中的烯烃Cap176步骤a(3.5克，9.68毫摩尔)。接着，于溶液中，装填(‑)‑1,2‑二((2S,5S)‑2,5‑二甲基磷杂环戊烷基)乙烷(环辛二烯)铑(I)四氟硼酸酯(0.108克，0.194毫摩尔)，然后将所得混合物用N₂冲洗(3x)，并装填H₂(3x)。将溶液于70psi的H₂下在环境温度剧烈振荡72小时。在减压下除去溶剂，并使剩余残留物吸收在EtOAc中。然后，将稍带棕色的溶液通过硅胶充填柱过滤，并用EtOAc洗脱。在真空下浓缩溶剂，得到对应于酯Cap176步骤b的透明油状物(3.4克)。¹H NMR(500MHz,CDCl₃‑d)δppm7.28‑7.43(5H,m),5.32(1H,d,J=9.16Hz),5.06‑5.16(2H,m),4.37(1H,dd,J=9.00,5.04Hz),3.92(4H,t,J=3.05Hz),3.75(3H,s),1.64‑1.92(4H,m),1.37‑1.60(5H,m).LC(条件OL1)：R_t=1.95分钟.LC/MS：[M+H]⁺C₁₉H₂₆NO₆的分析计算值：364.18；实验值：364.27。
Cap176步骤c

使酯Cap176步骤b(4.78克，13.15毫摩尔)溶于THF(15毫升)中，接着相继添加水(10毫升)、冰乙酸(26.4毫升，460毫摩尔)和二氯乙酸(5.44毫升，65.8毫摩尔)。将所得混合物在环境温度搅拌72小时，然后通过缓慢添加固体Na₂CO₃淬灭反应，并剧烈搅拌，直到气体的释放不再可见为止。将粗产物萃取至10%乙酸乙酯‑二氯甲烷中，然后将有机层合并，干燥(MgSO₄)，过滤并浓缩。所得残留物经Biotage(0至30%EtOAc/己烷；25克柱)纯化，得到酮Cap176步骤c(3.86克)，为透明油状物。¹H NMR(400MHz,CDCl₃‑d)δppm7.28‑7.41(5H,m),5.55(1H,d,J=8.28Hz),5.09(2H,s),4.46(1H,dd,J=8.16,5.14Hz),3.74(3H,s),2.18‑2.46(5H,m),1.96‑2.06(1H,m),1.90(1H,ddd,J=12.99,5.96,2.89Hz),1.44‑1.68(2H,m,J=12.36,12.36,12.36,12.36,4.77Hz).LC(条件OL1)：R_t=1.66分钟.LC/MS：[M+Na]⁺C₁₇H₂₁NNaO₅的分析计算值：342.13；实验值：342.10。
Cap176步骤d

将(3.13毫升，16.97毫摩尔)添加至酮Cap176步骤c(2.71克，8.49毫摩尔)在CH₂Cl₂(50毫升)中的溶液内，接着添加催化量的EtOH(0.149毫升，2.55毫摩尔)。将所得稍带黄色的溶液在室温搅拌过夜。通过添加饱和NaHCO₃水溶液(25毫升)淬灭反应，并用EtOAc(3X75毫升)萃取混合物。将合并的有机层干燥(MgSO₄)，过滤，并干燥，得到稍带黄色的油状物。残留物经Biotage色谱法(2%至15%EtOAc/己烷；90克柱)纯化，并回收对应于二氟化氨基酸二氟化物Cap176步骤d的白色固体(1.5克)。¹H NMR(400MHz,CDCl₃‑d)δppm7.29‑7.46(5H,m),5.34(1H,d,J=8.28Hz),5.12(2H,s),4.41(1H,dd,J=8.66,4.89Hz),3.77(3H,s),2.06‑2.20(2H,m),1.83‑1.98(1H,m),1.60‑1.81(4H,m),1.38‑1.55(2H,m).¹⁹F NMR(376MHz,CDCl₃‑d)δppm‑92.15(1F,d,J=237.55Hz),‑102.44(1F,d,J=235.82Hz).LC(条件OL1)：R_t=1.66分钟.LC/MS：[2M+Na]⁺C₃₄H₄₂F₄N₂NaO₈的分析计算值：705.28；实验值：705.18。
Cap176步骤e

使二氟化物Cap176步骤d(4克，11.72毫摩尔)溶于MeOH(120毫升)中，并装填Pd/C(1.247克，1.172毫摩尔)。将此悬浮液用N₂冲洗(3x)，并将反应混合物置于1大气压的H₂(气球)下。将混合物在环境温度搅拌48小时。然后，将此悬浮液通过Celite填充柱过滤，并在真空下浓缩，得到油状物，其对应于氨基酸Cap176步骤e(2.04克)，以及不经进一步纯化就使用。¹H NMR(400MHz,DMSO‑d₆)δppm3.62(3H,s),3.20(1H,d,J=5.77Hz),1.91‑2.09(2H,m),1.50‑1.88(7H,m),1.20‑1.45(2H,m).¹⁹F NMR(376MHz,DMSO‑d₆)δppm‑89.39(1F,d,J=232.35Hz),‑100.07(1F,d,J=232.35Hz).¹³C NMR(101MHz,DMSO‑d₆)δppm175.51(1C,s),124.10(1C,t,J=241.21,238.90Hz),57.74(1C,s),51.39(1C,s),39.23(1C,宽单峰),32.02‑33.83(2C,m),25.36(1C,d,J=10.02Hz),23.74(1C,d,J=9.25Hz).LC(条件OL2)：R_t=0.95分钟.LC/MS：[2M+H]⁺C₁₈H₃₁F₄N₂O₂的分析计算值：415.22；实验值：415.40。
Cap176步骤f

将氯甲酸甲酯(1.495毫升，19.30毫摩尔)添加至氨基酸Cap176步骤e(2克，9.65毫摩尔)和DIEA(6.74毫升，38.6毫摩尔)在CH₂Cl₂(100毫升)中的溶液内。将所得溶液在室温搅拌3小时，并在减压下除去挥发性物质。残留物经Biotage(0%至20%EtOAc/己烷；90克柱)纯化。回收透明油状物，其在真空下静置时固化，对应于氨基甲酸酯Cap‑176步骤f(2.22克)。¹H NMR(500MHz,CDCl₃‑d)δppm5.27(1H,d,J=8.55Hz),4.39(1H,dd,J=8.85,4.88Hz),3.77(3H,s),3.70(3H,s),2.07‑2.20(2H,m),1.84‑1.96(1H,m),1.64‑1.82(4H,m),1.39‑1.51(2H,m).¹⁹F NMR(471MHz,CDCl₃‑d)δppm‑92.55(1F,d,J=237.13Hz),‑102.93(1F,d,J=237.12Hz).¹³C NMR(126MHz,CDCl₃‑d)δppm171.97(1C,s),156.69(1C,s),119.77‑125.59(1C,m),57.24(1C,宽单峰),52.48(1C,宽单峰),52.43(1C,s),39.15(1C,s),32.50‑33.48(2C,m),25.30(1C,d,J=9.60Hz),24.03(1C,d,J=9.60Hz).LC(条件OL1)：R_t=1.49分钟.LC/MS：[M+Na]⁺C₁₁H₁₇F₂NNaO₄的分析计算值：288.10；实验值：288.03。
Cap‑176
将LiOH(0.379克，15.83毫摩尔)在水(25毫升)中的溶液添加至氨基甲酸酯Cap‑176步骤f(2.1克，7.92毫摩尔)在THF(75毫升)中的溶液内，并将所得混合物在环境温度搅拌4小时。在真空下除去THF，然后将剩余水相用1N HCl溶液(2毫升)酸化，并用EtOAc(2X50毫升)萃取。将合并的有机层干燥(MgSO₄)，过滤并浓缩，得到对应于Cap‑176的白色泡沫状物(1.92克)。¹H NMR(400MHz,DMSO‑d₆)δppm12.73(1H,s),7.50(1H,d,J=8.78Hz),3.97(1H,dd,J=8.53,6.02Hz),3.54(3H,s),1.92‑2.08(2H,m),1.57‑1.90(5H,m),1.34‑1.48(1H,m),1.27(1H,qd,J=12.72,3.26Hz).¹⁹F NMR(376MHz,DMSO‑d₆)δppm‑89.62(1F,d,J=232.35Hz),‑99.93(1F,d,J=232.35Hz).LC(条件OL2)：R_t=0.76分钟.LC/MS：[M‑H]⁺C₁₀H₁₄F₂NO₄的分析计算值：250.09；实验值：250.10。
实施例
现结合某些实施方案来描述本发明，所述实施方案不是旨在限制本发明的范围。相反地，本发明涵盖可包括在权利要求书的范围内的所有可选择形式、变化形式和等价形式。由此，以下实施例(包括具体的实施方案)将阐述本发明的一种实践，应该理解的是，所述实施例出于阐述某些实施方案的目的，并且呈现这些实施例以提供以下内容：被认为是在本发明操作和概念方面的最有用和容易理解的描述。
除非另作说明，否则溶液百分比表示重量对体积的关系，溶液比率表示体积对体积的关系。核磁共振(NMR)光谱用Bruker300、400或500MHz光谱仪记录；化学位移(δ)用百万分率(parts per million,ppm)报导。
用与Waters Micromass ZQ MS系统偶接的Shimadzu LC系统进行纯度测定和低分辨率质量分析。应注意，保留时间在机器之间可能略微变化。除非另外指出，用于测定保留时间(R_t)的LC条件为：
条件‑J1
柱         =Phenomenex‑Luna3.0X50mm S10
开始%B     =0
最后%B     =100
梯度时间   =2min
停止时间   =3min
流速       =4mL/min
波长       =220nm
溶剂A      =0.1%TFA/10%甲醇/90%水
溶剂B      =0.1%TFA/90%甲醇/10%水
条件‑J2
柱         =Phenomenex‑Luna3.0X50mm S10
开始%B     =0
最后%B     =100
梯度时间   =4min
停止时间   =5min
流速        =4mL/min
波长       =220nm
溶剂A      =0.1%TFA/10%甲醇/90%水
溶剂B      =0.1%TFA/90%甲醇/10%水
条件‑J3
柱         =XTERRA C18S7(3.0x50mm)
开始%B     =0
最后%B     =100
梯度时间   =2min
停止时间   =3min
流速       =5mL/min
波长       =220nm
溶剂A      =0.1%TFA/10%甲醇/90%水
溶剂B      =0.1%TFA/90%甲醇/10%水
条件J4
柱         =Phenomenex‑Luna C1830X2
开始%B     =0
最后%B     =100
梯度时间   =2min
停止时间   =3min
流速       =1mL/min
波长       =220nm
溶剂A      =10mM乙酸铵/5%ACN/95%水
溶剂B      =10mM乙酸铵/95%ACN/5%水
条件J5
柱         =Phenomenex‑Luna C1830X2
开始%B     =0
最后%B     =100
梯度时间   =4min
停止时间   =5min
流速       =0.8mL/min
波长       =220nm
溶剂A      =10mM乙酸铵/5%ACN/95%水
溶剂B      =10mM乙酸铵/95%ACN/5%水
条件‑D1
柱         =Phenomenex‑Luna3.0X50mm S10
开始%B     =0
最后%B     =100
梯度时间   =3min
停止时间   =4min
流速       =4mL/min
波长       =220nm
溶剂A      =0.1%TFA/10%甲醇/90%水
溶剂B      =0.1%TFA/90%甲醇/10%水
条件‑D2
柱         =Phenomenex‑Luna4.6X50mm S10
开始%B     =0
最后%B     =100
梯度时间   =3min
停止时间   =4min
流速       =4mL/min
波长       =220nm
溶剂A      =0.1%TFA/10%甲醇/90%水
溶剂B      =0.1%TFA/90%甲醇/10%水
条件‑JB‑1
柱         =Waters Sunfire5u C184.6x30mm
开始%B     =0
最后%B     =100
梯度时间   =3min
停止时间   =4min
流速       =4mL/min
波长       =220nm
溶剂A      =0.1%TFA/10%乙腈/90%水
溶剂B      =0.1%TFA/90%乙腈/10%水
合成途径1:

参考文献：J.Med.Chem.(2005)48，7351.
实施例J.1‑J.5

在氮气下和在24℃，将叔‑丁醇钾在四氢呋喃中的1M溶液(80毫升)逐滴添加至无水DMSO(20毫升)中的溴化(3‑羧基丙基)三苯基鏻(17克，40摩尔)内，并将溶液搅拌30分钟，然后添加3‑溴苯甲醛(4.7毫升，40毫摩尔)。在数分钟后，观察到沉淀物，并添加另外20毫升DMSO以帮助溶剂化，并将反应混合物搅拌18小时。将溶液倾倒在水(120毫升)上，并用氯仿洗涤。将水层用浓HCl酸化，并用氯仿(3x250毫升)萃取。将有机相浓缩，并施加至65i Biotage硅胶柱，用15‑65%B(A=己烷；B=乙酸乙酯)梯度洗脱，历经2升，得到J.1,(E)‑5‑(3‑溴苯基)戊‑4‑烯酸，8.2克(82%)。¹H NMR(300MHz,CDCl₃)δ7.45(t,J=1.5Hz,1H),7.30(dt,J=7.7,1.5Hz,1H),7.2‑7.16(m,1H),7.12(t,J=7.7Hz,1H),6.40‑6.32(m,1H),6.23‑6.14(m,1H),2.52(s,4H).LC(条件‑J1)：RT=2.0分钟；LRMS：[M‑H]^‑C₁₁H₁₁BrO₂的分析计算值：252.97；实验值：252.98。

使J.1,(E)‑5‑(3‑溴苯基)戊‑4‑烯酸(4克，15.8毫摩尔)溶于无水乙醇(200毫升)中，并用氮气吹洗，然后添加5%硫化铂/碳(2.5克)。将溶液在大气压力用氢气吹洗，并搅拌5小时。通过过滤用硅藻土除去催化剂，并立即通过旋转蒸发除去溶剂(以使酯化降至最低)，得到J.2,5‑(3‑溴苯基)戊酸4克(99%)，其不经进一步纯化就用于后续步骤。¹H NMR(500MHz,CDCl₃)δ7.31‑7.30(m,2H),7.13(t,J=7.6Hz,1H),7.09‑7.07(d,J=7.6Hz,1H),2.60(t,J=7.0Hz,2H),2.37(t,J=7.0Hz,2H),1.68‑1.65(m,4H).LC(条件‑J1)：RT=2.1分钟；LRMS：[M‑H]^‑C₁₁H₁₃BrO₂的分析计算值：255.00；实验值：254.99。

将J.2,5‑(3‑溴苯基)戊酸(4克，15.6毫摩尔)吸收在多磷酸(15克)中，并在150毫升压力容器(加盖以防止产物由于升华作用而损失)中加热至140℃，在此温度保持8小时。使反应混合物于150毫升水和二氯甲烷(600毫升)之间分配。[必须注意以避免二氯甲烷的沸腾]。将有机相用水、盐水洗涤，并浓缩。将粗产物施加至40(S)Biotage硅胶柱中，并用5‑60%(乙酸乙酯/己烷)梯度洗脱，得到J.32‑溴‑6,7,8,9‑四氢‑5H‑苯并[7]轮烯‑5‑酮1.7克(40%)。¹H NMR(300MHz,CDCl₃)δ7.56(d,J=8.1Hz,1H),7.41(dd,J=8.4Hz,1.8Hz,1H),7.35(d,J=1.8Hz,1H),2.86(t,J=5.9Hz,2H),2.69(t,J=5.8Hz,2H),1.90‑1.73(m,4H).LC(条件‑J1)：RT=2.1分钟；LRMS：[M+H]⁺C₁₁H₁₁BrO的分析计算值：239.00；实验值：239.14。

使J.3,2‑溴‑6,7,8,9‑四氢‑5H‑苯并[7]轮烯‑5‑酮(1.5克，5.9毫摩尔)溶于2:1醚/四氢呋喃(120毫升)中，并添加1N HCl/醚(9毫升)。使溶液冷却至0℃，然后添加亚硝酸异戊酯(1.2毫升，9毫摩尔)，并将反应混合物在24℃搅拌18小时，浓缩，和施加至25(M)Biotage硅胶柱中。用15‑100%B(A=己烷；B=乙酸乙酯)梯度洗脱，历经1升，得到J.3a(E)‑2‑溴‑6‑(羟亚氨基)‑6,7,8,9‑四氢‑5H‑苯并[7]轮烯‑5‑酮1克(64%)。LC(条件‑J1)；RT=1.9分钟；LC/MS：[M+H]⁺C₁₁H₁₀NBrO₂的分析计算值：268；实验值：268。

将浓氢氧化铵(12毫升，28%)添加至J.3a(E)‑2‑溴‑6‑(羟亚氨基)‑6,7,8,9‑四氢‑5H‑苯并[7]轮烯‑5‑酮(1克，3.7毫摩尔)和N‑Boc‑L‑脯氨醛(850毫克，4.3毫摩尔)在甲醇(35毫升)中的溶液内，并将反应混合物于24℃搅拌18小时。浓缩反应混合物以除去甲醇，用二氯甲烷萃取水溶液，并用水洗涤有机相。将二氯甲烷中的粗产物施加至40(S)Biotage硅胶柱中，并进行梯度洗脱；节段1.15%‑30%B，历经300毫升；节段2.30%‑100%B，历经700毫升(A=1:1己烷/二氯甲烷；B=乙酸乙酯)，得到J.4700毫克(44%)。¹H NMR(300MHz,DMSO‑d₆)δ11.3(宽单峰,1H),7.91(d,J=8.4Hz,1H),7.35(dd,J=8.4,1.5Hz,1H),7.31(d,J=1.8Hz,1H),5.0/4.87(m,1H),3.51‑3.46(m,1H),3.42‑3.36(m,1H),2.90‑2.70(m,4H),2.27‑1.80(m,6H),1.38/1.11(s,9H).LC(条件‑J1)：RT=1.9分钟；LRMS：[M+H]⁺C₂₁H₂₆BrN₃O₃的分析计算值：488.12；实验值：488.14.HRMS：[M+H]⁺C₂₁H₂₆BrN₃O₃的分析计算值：488.1236；实验值：488.1242。

将亚磷酸三乙酯(0.78毫升，4.7毫摩尔)添加至J.4(700毫克，1.57毫摩尔)在二甲基甲酰胺(2毫升)中的溶液内，并将溶液于氮气氛下在80℃加热18小时。将反应混合物吸收在乙酸乙酯(100毫升)中，并用水和盐水洗涤。在浓缩后，将粗产物施加至40(S)Biotage硅胶柱中，并进行梯度洗脱；节段1.5%‑15%B，历经300毫升；节段2.15%‑100%B，历经600毫升(A=二氯甲烷；B=乙酸乙酯)，得到J.5675毫克(100%)。¹H NMR(300MHz,DMSO‑d₆)δ11.7(宽单峰,1H),7.92(d,J=8.4Hz,1H),7.82(d,J=8.4Hz,1H),7.29(s,1H),4.78/4.69(宽单峰,1H),3.57‑3.48(m,1H),3.38‑3.32(m,1H),2.85‑2.78(m,4H),2.28‑1.77(m,6H),1.39/1.14(s,9H).LC(条件‑J1)：RT=1.9分钟；LRMS：[M+H]⁺C₂₁H₂₆BrN₃O₂的分析计算值：432.13；实验值：432.14。
合成途径2

实施例M.1‑M.4

于(S)‑5‑(羟甲基)吡咯烷‑2‑酮(10克，87毫摩尔)在二氯甲烷(50毫升)中的溶液内，添加叔‑丁基氯二苯基硅烷(25.6克，93毫摩尔)、Et₃N(12.1毫升，87毫摩尔)和DMAP(1.06克，8.7毫摩尔)。将混合物在室温搅拌，直到起始吡咯烷酮完全消耗为止，接着，将其用二氯甲烷(50毫升)稀释，并用水(50毫升)洗涤。将有机层干燥(Na₂SO₄)，过滤，并真空浓缩，然后对粗物质实施快速色谱法(硅胶；30至100%乙酸乙酯/己烷)，得到甲硅烷基醚，为无色油状物(22.7克，74%产率)。¹H‑NMR(400MHz,DMSO‑d₆,δ=2.5ppm)7.69(宽单峰,1H),7.64‑7.61(m,4H),7.50‑7.42(m,6H),3.67‑3.62(m,1H),3.58‑3.51(m,2H),2.24‑2.04(m,3H),1.87‑1.81(m,1H),1.00(s,9H).LC/MS[M+H]⁺=354.58。
将二碳酸二‑叔‑丁酯(38.5克，177毫摩尔)作为固体分批添加至甲硅烷基醚(31.2克，88.3毫摩尔)、Et₃N(8.93克，88毫摩尔)和DMAP(1.08克，8.83毫摩尔)的二氯甲烷(200毫升)溶液中，历经10分钟，并在24℃搅拌18小时。真空除去大部分挥发性物质，并将粗物质吸收在20%乙酸乙酯/己烷中，并施加至含有1.3升硅胶的2升漏斗(funnel)中，接着用3升20%乙酸乙酯/己烷和2升50%乙酸乙酯洗脱。在旋转蒸发器中浓缩所要的级份时，固体的白色浆液形成，将其过滤，用己烷洗涤，并真空干燥，得到氨基甲酸酯M.1，为白色固体(32.65克，82%产率)。¹H NMR(400MHz,DMSO‑d₆,δ=2.5ppm)7.61‑7.59(m,2H),7.56‑7.54(m,2H),7.50‑7.38(m,6H),4.18(m,1H),3.90(dd,J=10.4,3.6,1H),3.68(dd,J=10.4,2.1,1H),2.68‑2.58(m,1H),2.40‑2.33(m,1H),2.22‑2.12(m,1H),2.01‑1.96(m,1H),1.35(s,9H),0.97(s,9H).LC/MS[M‑Boc+H]⁺=354.58.计算值454.24。

于装有温度计和氮气入口的三颈烧瓶中，装填氨基甲酸酯M.1(10.05克，22.16毫摩尔)和甲苯(36毫升)，并降低至‑55℃冷却浴中。当混合物的内部温度达到‑50℃时，逐滴添加三乙基硼氢化锂(23毫升1.0M/四氢呋喃，23.00毫摩尔)，历经30分钟，并将混合物搅拌35分钟，同时保持内部温度在‑50℃和‑45℃之间。逐滴添加许尼希氏碱(16.5毫升，94毫摩尔)，历经10分钟。然后将DMAP(34毫克，0.278毫摩尔)一次性加入，接着添加三氟乙酸酐(3.6毫升，25.5毫摩尔)，历经15分钟，同时保持内部温度在‑50℃和‑45℃之间。10分钟后，除去冷却浴，并将反应混合物搅拌14小时，同时，使其升温至环境温度。将其用甲苯(15毫升)稀释，用冰水浴冷却，并用水(55毫升)慢慢地处理，历经5分钟。分离各相，将有机层用水(50毫升，2x)洗涤，并真空浓缩。将粗物质通过快速色谱法纯化(硅胶；5%乙酸乙酯/己烷)，得到二氢吡咯M.2，为无色粘性油状物(7.947克，82%产率)。Rt=2.41分钟，在下列HPLC条件下：100%A:0%B至0%A:100%B的溶剂梯度(A=0.1%TFA/1:9甲醇/水；B=0.1%TFA/9:1甲醇/水)，历经2分钟，并保持1分钟；在220纳米检测；Phenomenex‑Luna3.0X50毫米S10柱。¹H‑NMR(400MHz,DMSO‑d₆,δ=2.5ppm)7.62‑7.58(m,4H),7.49‑7.40(m,6H),6.47(宽单峰,1H),5.07/5.01(重叠的br d,1H),4.18(宽单峰,1H),3.89(宽单峰,0.49H),3.69(宽单峰,1.51H),2.90‑2.58(br m,2H),1.40/1.26(重叠的宽单峰,9H),0.98(s,9H).LC/MS：[M+Na]⁺=460.19。

将二乙锌(19毫升，～1.1M，在甲苯中，20.9毫摩尔)逐滴添加至二氢吡咯M.2(3.94克，9.0毫摩尔)的冷却(‑30℃)的甲苯(27毫升)溶液中，历经15分钟。逐滴添加氯代碘甲烷(经铜稳定化；3.0毫升，41.2毫摩尔)，历经10分钟，并搅拌，同时使浴温在‑25℃保持1小时，以及在‑25℃和‑21℃之间保持18.5小时。使反应混合物对空气开放，并通过缓慢添加50%饱和NaHCO₃溶液(40毫升)淬灭反应，然后从冷却浴移除，并在环境温度搅拌20分钟。将其通过滤纸过滤，并用50毫升甲苯洗涤白色滤饼。将滤液的有机相分离，并用水(40毫升，2x)洗涤，干燥(MgSO₄)，过滤，并真空浓缩。将粗物质使用Biotage系统纯化(350克硅胶；将试样用7%乙酸乙酯/己烷装填；用7‑20%乙酸乙酯/己烷洗脱)，得到甲烷基吡咯烷(methanopyrrolidines)的混合物(主要为M.3)，为无色粘性油状物(3.69克，90.7%)。[注：确切的顺式/反式‑异构体比例在此阶段并未确定]。Rt=2.39分钟，在下列HPLC条件下：100%A:0%B至0%A:100%B的溶剂梯度(A=0.1%TFA/1:9甲醇/水；B=0.1%TFA/9:1甲醇/水)，历经2分钟，并保持1分钟；在220纳米检测；Phenomenex‑Luna3.0X50毫米S10柱。¹H‑NMR(400MHz,DMSO‑d₆,δ=2.5ppm)7.62‑7.60(m,4H),7.49‑7.40(m,6H),3.77/3.67(重叠的宽单峰,3H),3.11‑3.07(m,1H),2.23(表观宽单峰,1H),2.05‑2.00(m,1H),1.56‑1.50(m,1H),1.33(极宽单峰,9H),1.00(s,9H),0.80(m,1H),0.30(m,1H).LC/MS：[M+Na]⁺=474.14。

将TBAF(7.27毫升，1.0M，在四氢呋喃中，7.27毫摩尔)逐滴添加至甲硅烷基醚M.3(3.13克，6.93毫摩尔)的四氢呋喃(30毫升)溶液中，历经5分钟，并将混合物在环境温度搅拌4.75小时。在添加饱和氯化铵溶液(5毫升)后，真空除去大部分挥发性物质，并使残留物于二氯甲烷(70毫升)和50%饱和氯化铵溶液(30毫升)之间分配。用二氯甲烷(30毫升)萃取水相，将合并的有机相干燥(MgSO₄)，过滤，真空浓缩，然后曝露于高真空过夜。将粗物质使用Biotage(硅胶；40‑50%乙酸乙酯/己烷)纯化，得到混杂有微量较低Rf斑点的醇的混合物，为无色油状物(1.39克，～94%产率)。[注：确切的顺式/反式异构体比例在此阶段未确定]。¹H‑NMR(400MHz,二甲亚砜‑d₆,δ=2.5ppm)4.70(t,J=5.7,1H),3.62‑3.56(m,1H),3.49‑3.44(m,1H),3.33‑3.27(m,1H),3.08‑3.04(m,1H),2.07(br m,1H),1.93‑1.87(m,1H),1.51‑1.44(m,1H),1.40(s,9H),0.76‑0.71(m,1H),0.26(m,1H).LC/MS[M+Na]⁺=236.20。
将高碘酸钠(6.46克，30.2毫摩尔)在水(31毫升)中的半溶液添加至醇(2.15克，10.08毫摩尔)在乙腈(20毫升)和四氯化碳(20毫升)中的溶液内。立即添加三氯化钌(0.044克，0.212毫摩尔)，并将非均相反应混合物剧烈搅拌75分钟。将反应混合物用水(60毫升)稀释，并用二氯甲烷(50毫升，3x)萃取。将合并的有机相用1毫升甲醇处理，使其静置约5分钟，然后通过硅藻土过滤。用二氯甲烷(50毫升)洗涤垫片，并真空浓缩滤液，得到淡炭色固体。将粗物质在加热下溶于乙酸乙酯(～10毫升)中，并使其在环境温度静置，同时种晶。在进入冷却阶段约15分钟后，观察到快速晶体形成。约1小时后，添加己烷(～6毫升)，并使混合物冷冻过夜(无另外的物质沉淀析出)。将混合物过滤，并用冰/水冷却的己烷/乙酸乙酯(2:1比例；20毫升)洗涤，并在高真空下干燥，得到第一批酸M.4(灰白色结晶，1.222克)。使母液真空浓缩，并将残留物在加热下溶于～3毫升乙酸乙酯中，使其在环境温度静置1小时，接着添加3毫升己烷，并在冰箱中储存～15小时。以类似方式回收第二批酸M.4(灰色结晶，0.133克)，合并的产率为59%。Rt=1.48分钟，于下列HPLC条件下：100%A:0%B至0%A:100%B的溶剂梯度(A=0.1%TFA/1:9甲醇/水；B=0.1%TFA/9:1甲醇/水)，历经3分钟；在220纳米检测；Phenomenex‑Luna3.0X50毫米S10柱。第一批产物的熔点(分解)=147.5‑149.5℃。¹H‑NMR(400MHz,DMSO‑d₆,δ=2.5ppm)12.46(s,1H),3.88(表观宽单峰,1H),3.27(表观宽单峰,1H；和水信号重叠),2.28(br m,1H),2.07(表观宽单峰,1H),1.56(表观s,1H),1.40/1.34(两个重叠的s,9H),0.71(m,1H),0.45(m,1H).¹³C‑NMR(100.6MHz,DMSO‑d₆,δ=39.21ppm)172.96,172.60,154.45,153.68,78.74,59.88,59.58,36.91,31.97,31.17,27.77,27.52,14.86,14.53,13.69.LC/MS[M+Na]⁺=250.22.C₁₁H₁₇NO₄的分析计算值：C,58.13；H,7.54；N,6.16.实验值(对于第一批产物)：C,58.24；H,7.84；N,6.07.旋光度(10毫克/毫升，在CHCl₃中)：[α]D=‑216和‑212，分别对于第一批和第二批产物。
实施例M.4a

酸M.4a的合成在专利申请US2009/0068140中报告。
合成途径2.1

实施例M.4c
(2S,4S)‑1‑(叔‑丁氧羰基)‑4‑甲基吡咯烷‑2‑羧酸
将(S)‑1‑(叔‑丁氧羰基)‑4‑亚甲基吡咯烷‑2‑羧酸实施例M.4b(4g，17.60mmol)在2‑丙醇(10mL)中的溶液添加至10%钯/碳(936mg)在2‑丙醇(240mL)中的经氮气吹洗的悬浮液，并向烧瓶添加氢气(1个大气压)。在搅拌18小时后，通过用celite过滤除去催化剂，并浓缩滤液。LC分析显示样品含有～14%的反式异构体，并从富含顺式异构体实施例M.4c的甲苯重结晶，达到96%纯度(16:1)。1H NMR(500MHz，MeOD.)δppm4.21–4.17(m，1H)，3.76‑3.67(m，1H)，2.96–2.92(m，1H)，2.49‑2.46(m，1H)，2.30–2.29(m，1H)，1.59‑1.51(m，1H)，1.47/1.43(m，9H)，1.10‑1.06(m，3H).
合成途径2.2

实施例M.4g

从(S)‑5‑氧代吡咯烷‑1,2‑二羧酸·1‑叔丁酯·2‑甲酯，根据Tetrahedon Letters，2003，3203‑3205中所述的操作制备单‑甲基化产物M.4d的非对映体混合物。将混合物用于后续步骤。

在‑50°C，在干冰/丙酮浴中，历时10min向非对映体M.4d(4.75g，18.46mmol)的溶液滴加三乙基氢化硼锂(19.20mL，19.20mmol)。添加许尼希氏碱(13.58mL，78mmol)，搅拌10min，添加固体DMAP(0.122g，0.997mmol)，搅拌15min，并历时15min滴加三氟乙酸酐(2.98mL，21.08mmol)。移除干冰/丙酮浴，并将反应混合物搅拌4h，同时温热至室温。将反应混合物用水(50mL)，饱和NaCl(30mL)洗涤，并真空浓缩。所得粗物质通过快速色谱法(8‑60%EtOAc/己烷)纯化，得到实施例M.4e，为黄色油状物(2.85g)。1H NMR(CDCl3，400MHz，δ):6.36(s，0.5H)，6.25(s，0.5H)，4.70‑4.57(m，1H)，3.78(s，3H)，2.96(m，1H)，2.54(m，1H)，1.70(s，3H)，1.50(s，4.5H)，1.44(s，4.5H).

将二乙锌(1.1M，在甲苯中，59.1mL，65.0mmol)历时20min滴加至M.4e(5.23g，21.68mmol)的冷却的(‑23°C)甲苯(60mL)溶液，并搅拌10min。历时10min滴加氯碘甲烷(9.44mL，130mmol)，并将反应混合物在‑21°C搅拌16hr。将饱和NaHCO3(60mL)添加至反应混合物，移除冷却浴，并将混合物搅拌10min。然后过滤混合物，并用甲苯(50mL)洗涤滤饼。分配滤液，将有机层用Na2SO4干燥，并真空浓缩。所得粗物质通过快速色谱法(2‑10%EtOAc/己烷)纯化，得到实施例M.4f(第二个洗脱；无色油状物；1.01g)1H NMR(CDCl3，400MHz):3.99(m，1H)，3.76(s，3H)，3.28‑3.19(m，1H)，2.47‑2.41(m，1H)，2.00(m，1H)，1.45(s，9H)，1.25(s，3H)，0.70‑0.66(m，2H)，和主要异构体(第一个洗脱；无色油状物；2.88g)。基于NOE研究进行相对立体化学指定：1H NMR(CDCl3，400MHz):4.65‑4.52(m，1H)，3.72(s，3H)，3.28‑3.17(m，1H)，2.44‑2.32(m，1H)，2.16‑2.10(m，1H)，1.51‑1.42(两个单峰，9H)，1.24(s，3H)，1.07(m，1H)，0.69‑0.60(m，1H).

将氢氧化锂(0.305g，12.73mmol)在水(8mL)中的溶液添加至实施例M.4f(2.60g，10.18mmol)在甲醇(24mL)中的溶液，并将混合物搅拌16h。真空除去溶剂，将残留物吸收在乙酸乙酯(20mL)中并添加另外的水(10mL)。分离有机相，将水相用EtOAc稀释并用1N HCl酸化至pH=3(～5.5mL)。将有机相用盐水洗涤并干燥(Na2SO4)。浓缩得到实施例M.4g；RT=3.02min；(条件‑J2)；C₁₂H₁₉NO₄Na[M+Na]计算值为264.12；实验值：264.09；1H NMR(CDCl3，400MHz):4.13(表观宽单峰，1H)，3.06(表观宽单峰，1H)，2.55/2.41(重叠表观宽单峰，2H)，1.51(s，9H)，1.27(s，3H)，0.76(表观t，J=5.6，1H)，0.60(表观宽单峰，1H)。样品似乎含有约8%顺式异构体。
合成途径3

实施例J.6‑J.7b

将N,N‑二异丙基乙胺(18毫升，103.3毫摩尔)逐滴添加至N‑Boc‑L‑脯氨酸(7.139克，33.17毫摩尔)、HATU(13.324克，35.04毫摩尔)、2‑氨基‑1‑(4‑溴苯基)乙酮HCl盐(8.127克，32.44毫摩尔)在二甲基甲酰胺(105毫升)中的非均相混合物内，历经15分钟，并在环境条件下搅拌55分钟。真空除去二甲基甲酰胺，并使所得残留物于乙酸乙酯(300毫升)和水(200毫升)之间分配。将有机层用水(200毫升)和盐水洗涤，干燥(MgSO₄)，过滤并浓缩。从残留物制备过筛硅胶样品，并实施快速色谱法(硅胶；50‑60%乙酸乙酯/己烷)，提供J.6(S)‑2‑(2‑(4‑溴苯基)‑2‑氧代乙基氨基甲酰基)吡咯烷‑1‑羧酸叔‑丁酯，为白色固体(12.8克)。¹H NMR(DMSO‑d₆,δ=2.5ppm,400MHz)：δ8.25‑8.14(m,1H),7.92(br d,J=8.0,2H),7.75(br d,J=8.6,2H),4.61(dd,J=18.3,5.7,1H),4.53(dd,J=18.1,5.6,1H),4.22‑4.12(m,1H),3.43‑3.35(m,1H),3.30‑3.23(m,1H),2.18‑2.20(m,1H),1.90‑1.70(m,3H),1.40/1.34(两个表观宽单峰,9H).LC(条件‑J1)：RT=1.70分钟；LCMS：[M+Na]⁺C₁₈H₂₃BrN₂NaO₄的分析计算值：433.07；实验值433.09。

将J.6(S)‑2‑(2‑(4‑溴苯基)‑2‑氧代乙基氨基甲酰基)‑吡咯烷‑1‑羧酸叔‑丁酯(12.8克，31.12毫摩尔)和乙酸铵(12.0克，155.7毫摩尔)在二甲苯(155毫升)中的混合物于密封管中在140℃加热2小时。真空除去挥发性成份，并使残留物在乙酸乙酯和水之间小心地分配，由此添加足够的饱和NaHCO₃溶液，以在振荡两相系统之后使水相的pH值呈轻微碱性。分离各层，并用另外的乙酸乙酯萃取水层。将合并的有机相用盐水洗涤，干燥(MgSO₄)，过滤并浓缩。将所得物质从乙酸乙酯/己烷重结晶，提供两批J.7(S)‑2‑(5‑(4‑溴苯基)‑1H‑咪唑‑2‑基)吡咯烷‑1‑羧酸叔‑丁酯，5.85克。将母液真空浓缩，并对其实施快速色谱法(硅胶；30%乙酸乙酯/己烷)，提供另外2.23克。¹H NMR(DMSO‑d₆,δ=2.5ppm,400MHz)：δ12.17/11.92/11.86(m,1H),7.72‑7.46/7.28(m,5H),4.86‑4.70(m,1H),3.52(表观宽单峰,1H),3.36(m,1H),2.30‑1.75(m,4H),1.40/1.15(表观宽单峰,9H).LC(条件‑J1)：RT=1.71分钟；LC/MS：[M+H]⁺C₁₈H₂₃BrN₃O₂的分析计算值：392.10；实验值391.96.HRMS：[M+H]⁺C₁₈H₂₃BrN₃O₂的分析计算值：392.0974；实验值392.0959。

合成途径4

实施例J.8‑J.9e

在冷却至0℃后，将溴(0.23毫升，4.18毫摩尔)逐滴添加至J.32‑溴‑6,7,8,9‑四氢‑5H‑苯并[7]轮烯‑5‑酮(1.0克，4.18毫摩尔)在醚(50毫升)中的溶液内。将溶液搅拌3小时，并添加数滴另外的溴，同时通过TLC追踪反应，直到完成为止。通过旋转蒸发除去溶剂，将残留物吸收在乙腈(25毫升)中，逐滴添加M.4(950毫克，4.18毫摩尔)和许尼希氏碱(1.4毫升)。将反应混合物在60℃搅拌18小时，然后通过旋转蒸发除去溶剂。将粗产物装填(二氯甲烷)至40克Thompson硅胶柱中，并梯度洗脱(15‑100%B)，历经1升(A/B己烷/乙酸乙酯)，得到J.82‑氮杂二环[3.1.0]己烷‑2,3‑二羧酸(1R,3S,5R)‑3‑(2‑溴‑5‑氧代‑6,7,8,9‑四氢‑5H‑苯并[7]轮烯‑6‑基)酯·2‑叔‑丁酯1克(51.5%)，为油状物。RT=2.2分钟(条件‑J1).LCMS：C₂₂H₂₆BrNO₅Na的分析计算值：486.10；实验值：486.07(M+Na)+。

将乙酸铵(1.7克，21.54毫摩尔)添加至J.8(1.0克，2.15毫摩尔)在二甲苯(15毫升)中的溶液内，并将反应混合物在螺帽压力容器中于140℃搅拌3小时。在冷却后，使反应混合物于乙酸乙酯和饱和NaHCO₃溶液之间分配，并用乙酸乙酯萃取水层。将合并的有机层用盐水洗涤，浓缩，并将残留物施加至20克Thomson硅胶柱中。梯度洗脱(10‑50%B，历经1升；A/B己烷/乙酸乙酯)。分离主要和较低极性产物(噁唑450毫克)，得到J.9192毫克(20%)，为非对映异构混合物(J.9占优势；S/R脯氨酸的3:1混合物)。¹H NMR(300MHz,CDCl₃)δ10.6/10.3(宽单峰,1H),8.06(d,J=8.2Hz,0.6H),7.34(dd,J=6.4,1.8Hz,1H),7.28(s,0.3H),7.21(d,J=1.8Hz,0.7H),7.11(d,J=8.6Hz,0.3H),4.83‑4.77(m,1H),3.48(m,0.68H),3.23(m,1.2H),2.98(t,J=6.4Hz,0.65H),2.88(t,H=6.7Hz,1.35H),2.82‑2.79(m,2H),2.33(t,J=9.1Hz,1H),2.01‑1.95(m,2.4H),1.76‑1.72(m,1H),1.57/1.48(s,9H),0.87‑0.83(m,1.3H),0.44(宽单峰,1H).LC(条件‑J1)：RT=1.7分钟；LCMS：[M+H]⁺C₂₂H₂₆BrN₃O₂的分析计算值：444.13；实验值：444.07。

实施例J.9f

将HCl(0.871毫升，3.49毫摩尔，4N，在二氧六环中)的冷(0℃)溶液添加至J.9b(1.5克，3.49毫摩尔)在MeOH(20毫升)中的溶液内。将混合物搅拌2小时，然后将其浓缩至干。使浅棕色固体吸收在二氧六环(20毫升)和水(20毫升)中，冷却至0℃，并用碳酸钠(0.369克，3.49毫摩尔)和CBZ‑Cl(0.498毫升，3.49毫摩尔)处理。使反应混合物温热至室温，搅拌5小时，用乙酸乙酯稀释，并用饱和碳酸氢钠溶液洗涤。将有机相用盐水洗涤，并用硫酸钠干燥，得到J.9f(0.97克，60%)，为浅棕色泡沫状物，RT=2.47分钟(条件‑D1)；LC/MS：[M+H]⁺C₂₄H₂₃BrN₃O₂的分析计算值：464.10和466.10；实验值：463.95和465.98。
合成途径4.a

实施例J.9g1‑J.9g

将叠氮化二苯基磷酰(17.09毫升，79毫摩尔)添加至6‑溴‑2‑萘甲酸(16.5克，65.7毫摩尔)、三乙胺(18.32毫升，131毫摩尔)和叔‑丁醇(7.54毫升，79毫摩尔)在甲苯(225毫升)中的溶液内，并在100℃搅拌4小时。通过旋转蒸发除去挥发性物质，将残留物吸收在EtOAc(500毫升)中，并用水和盐水洗涤。在浓缩时形成沉淀物，将其通过过滤分离，并用1:1Et₂O/己烷洗涤，得到实施例J.9g1(10.5克)。第二批的较不纯产物在浓缩母液时分离(9.8克)；合并的产率(93%)。LC/MS(条件J2)：RT=3.44分钟.[M+Na]⁺C₁₅H₁₆BrNO₂的LC/MS分析计算值：345.02；实验值345.03。

将实施例J.9g1(5克，15.52毫摩尔)在乙酸(50毫升)中稀释，并逐滴添加发烟硝酸(2.3毫升)，历经20分钟。将反应混合物搅拌2小时，并使通过过滤分离的产物于CH₂Cl₂和饱和NaHCO₃溶液之间分配。浓缩有机层，提供6‑溴‑1‑硝基萘‑2‑基氨基甲酸叔‑丁酯5.7克(定量)。LC/MS(条件J2)：RT=3.52分钟.[M+Na]⁺C₁₅H₁₅BrN₂O₄的LC/MS分析计算值：390.02.；实验值390.99。
将氯化锡(II)脱水物(3克，16.34毫摩尔)添加至6‑溴‑1‑硝基萘‑2‑基氨基甲酸叔‑丁酯(2克，5.47毫摩尔)在MeOH(100毫升)中的溶液内，并将溶液于70℃搅拌18小时。通过旋转蒸发除去溶剂，并将实施例J.9g2(假定理论值1.25克)在高真空下干燥。LC/MS(条件J2)：RT=1.49分钟.[M+H]⁺C₁₀H₉BrN₂的LC/MS分析计算值：237.00；实验值236.96。

将EEDQ(1.67克，6.75毫摩尔)添加至实施例J.9g2(1.6克，6.75毫摩尔)和M.4a(1.55克，6.75毫摩尔)在DCM(100毫升)中的溶液内，并搅拌6小时。(注：二苯胺并非完全可溶)。将反应混合物用DCM(1份体积)稀释，并用半饱和NaHCO₃溶液洗涤。浓缩得到固体(2.5克)。LC/MS(条件J2)：RT=3.07分钟.[M+H]⁺C₂₁H₂₇BrN₃O₃的LC/MS分析计算值：448.13；实验值448.11。
将粗固体(2.5克，5.58毫摩尔)吸收在AcOH(200毫升)中，并在60℃搅拌18小时。在高真空下浓缩，除去溶剂。将残留物吸收在DCM中，用饱和NaHCO₃溶液洗涤，并浓缩。将残留物装填(DCM)至80克Thompson硅胶柱中，并从15%至100%B进行梯度洗脱，历经750毫升(A/B己烷/EtOAc)，得到实施例J.9g(2.6克)。¹H NMR(MeOD,500MHz,δ)：8.36‑8.35(m,2H),8.0(d,J=9Hz,1H),7.91(dd,J=9,2Hz,1H),7.87(d,J=9Hz,1H),5.31‑5.28(m,1H),4.17(宽单峰,1H),2.59‑2.56(m,1H),2.39‑2.31(m,2H)1.86‑1.83(m,1H),1.52‑1.19(m,12H).LC/MS(条件J2)：RT=2.57分钟。[M+H]⁺C₂₁H₂₅BrN₃O₂的LC/MS分析计算值：430.12；实验值430.09。
合成途径4.a.1

实施例J.9g.a和J.9g.b

实施例J.9g.a从实施例J.9g2，根据与合成途径4a的J.9g的操作相似的操作得到。J.9g2与M.4c偶合并在AcOH中环化，得到实施例J.9g.a；RT=3.32min，(条件‑J5)；C₂₁H₂₅BrN₃O₂[M+H]⁺的计算值430.12；实验值：430.30。

合成途径5

实施例J.10‑J.12

将EDCI·HCl(2.35克，12.25毫摩尔)添加至4‑溴苯‑1,2‑二胺(2.078克，11.11毫摩尔)、N‑Boc‑L‑脯氨酸(2.311克，10.74毫摩尔)和1‑羟基苯并三唑(1.742克，12.89毫摩尔)在二氯甲烷(40毫升)中的混合物内，并在环境条件下搅拌19小时。然后，将混合物用二氯甲烷稀释，用水洗涤(2x)，干燥(盐水；MgSO₄)，过滤，并真空浓缩，提供棕色泡沫状物。将乙酸(40毫升)添加至泡沫状物中，并将混合物在65℃加热90分钟。真空除去挥发性成份，将残留物溶于乙酸乙酯中，并用饱和NaHCO₃溶液小心地洗涤(2x)，然后将有机相干燥(盐水；MgSO₄)，过滤，并真空浓缩。对所得粗物质实施快速色谱法(硅胶；乙酸乙酯)，提供J.10，为浅棕色泡沫状物(2.5克)。¹H NMR(DMSO‑d₆,δ=2.5ppm,400MHz)：12.49‑12.33(四个宽单峰,1H),7.71(d,J=2,0.54H),7.60(表观宽单峰,0.46H),7.50(d,J=8.6,0.45H),7.40(d,J=8.4,0.55H),7.26(m,1H),4.96‑4.87(m,1H),3.64‑3.51(m,1H),3.44‑3.38(m,1H),2.38‑2.21(m,1H),1.99‑1.85(m,3H),1.39(s,3.7H),1.06(s,5.3H).(条件‑D2)LC/MS：[M+H]⁺C₁₆H₂₁BrN₃O₂的分析计算值：368.03；实验值：368.18。

将4‑碘‑2‑硝基苯胺(35.2克，0.133摩尔)经开口漏斗分批添加至SnCl₂·2H₂O(106.86克，0.465摩尔)和12N HCl(200毫升)的加热(65℃)的混合物中，历经25分钟。添加另外的12N HCl(30毫升)，然后将反应混合物于65℃再加热1小时，并在室温搅拌1小时。将其在冰箱中放置15小时，并过滤沉淀物。将所得固体转移至含有水(210毫升)的烧瓶中，冷却(冰/水)，并在搅拌下将NaOH溶液(水溶液)(35克，在70毫升水中)添加至其中，历经10分钟。除去冷却浴，并继续剧烈搅拌45分钟。过滤混合物，将固体用水洗涤，并真空干燥，提供4‑碘苯‑1,2‑二胺，为浅棕色固体(25.4克)。该产物不经进一步纯化就用于后续步骤中。¹H NMR(DMSO‑d₆,δ=2.5ppm,500MHz)：6.79(d,J=2,1H),6.63(dd,J=1.9,8.1,1H),6.31(d,J=8.1,1H),4.65(宽单峰,2H),4.59(宽单峰,2H).LC/MS：[M+H]⁺C₆H₈IN₂的分析计算值：234.97；实验值：234.9。
将HATU(6.5克，17.1毫摩尔)添加至4‑碘苯‑1,2‑二胺(4克，17.1毫摩尔)、(S)‑1‑(叔‑丁氧羰基)吡咯烷‑2‑羧酸(3.67克，17.1毫摩尔)和许尼希氏碱(3毫升)在二甲基甲酰胺(100毫升)中的溶液内。将反应混合物搅拌4小时，然后用乙酸乙酯(300毫升)稀释，并用饱和NaHCO₃、盐水洗涤，并干燥(Na₂SO₄)。将水相用乙酸乙酯再萃取两次，并与最初有机萃液合并，接着干燥。浓缩，得到残留物，将其吸收在冰乙酸(100毫升)中，并在65℃加热2小时。使已冷却的混合物真空浓缩，用乙酸乙酯(300毫升)和1N NaOH溶液稀释(至pH=10)，用盐水洗涤，并干燥(Na₂SO₄)。将粗产物施加至65(i)Biotage硅胶柱中。节段1.保持15%B，历经450毫升；节段2.15%至100%B的梯度洗脱，历经4.5升(A=己烷；B=乙酸乙酯)；节段3.保持100%B，历经2.5升，得到J.112‑(5‑碘‑1H‑苯并[d]咪唑‑2‑基)吡咯烷‑1‑(S)‑羧酸叔‑丁酯7.0克(99%)。¹H NMR(500MHz,DMSO‑d₆)δ7.85(宽单峰,1H),7.42(d,J=8.2Hz,1H),7.34(宽单峰,1H),4.97‑4.84(m,1H),3.6(宽单峰,1H),3.44‑3.40(m,1H),2.37‑2.25(m,1H),1.99‑1.87(m,3H),1.4/1.07(s,9H).LC(条件‑D2)：2.1分钟；LCMS：[M+H]⁺C₁₆H₂₀IN₃O₂的分析计算值：414.07；实验值：414.08。

在氮气下，将未经洗涤的60%氢化钠(48毫克，1.21毫摩尔)一次性添加至J.112‑(5‑碘‑1H‑苯并[d]咪唑‑2‑基)吡咯烷‑1‑(S)‑羧酸叔‑丁酯(500毫克，1.21毫摩尔)在无水二甲基甲酰胺(10毫升)中的搅拌着的溶液内。将混合物搅拌5分钟，然后添加SEM‑Cl(0.21毫升，1.21毫摩尔)，搅拌3小时，用饱和氯化铵(1毫升)淬灭反应，用乙酸乙酯(50毫升)稀释，并将有机相用饱和NaHCO₃溶液和盐水洗涤。用乙酸乙酯再萃取水相两次，并与最初有机萃液合并，接着干燥。浓缩得到残留物，将其施加(二氯甲烷)至40(i)Biotage硅胶柱中。节段1.保持5%B，历经150毫升；节段2.5%至100%B的梯度洗脱，历经2.5升(A=己烷；B=乙酸乙酯)B，得到区位异构产物(SEM位置)J.12316毫克(48%)。¹H NMR(500MHz,DMSO‑d₆)δ7.99(d,J=5.8Hz,1H),7.54‑7.49(m,2H),5.77‑5.64(m,2H),5.20‑5.11(m,1H),3.61‑3.43(m,4H),2.89‑2.05(m,2H),1.98‑1.87(m,2H),1.36/1.04(s,9H),0.91‑0.81(m,2H),‑0.06(s,9H).LC(条件‑D2)：RT=3.1分钟；LRMS：[M+H]⁺C₂₂H₃₄IN₃O₃Si的分析计算值：544.15；实验值：544.15。
合成途径5.1

实施例J.10e和J.11a
实施例J.10e从实施例M.4c，根据与合成途径5的J.10的操作相似的操作得到。在AcOH中环化得到实施例J.10e；RT=1.86min，(条件‑J4)；C₁₇H₂₃BrN₃O₂[M+H]⁺的计算值380.10；实验值：380.30。

合成途径6

实施例J.13‑J.13f

将Pd(Ph₃P)₄(469毫克，0.406毫摩尔)添加至含有J.7(S)‑2‑(5‑(4‑溴苯基)‑1H‑咪唑‑2‑基)吡咯烷‑1‑羧酸叔‑丁酯(4克，10.22毫摩尔)、二硼酸二(频那醇)酯(bis(pinacolato)diboron)(5.4克，21.35毫摩尔)、乙酸钾(2.6克，26.21毫摩尔)和1,4‑二氧六环(80毫升)的混合物的耐压管中。将反应烧瓶用氮气吹洗，加盖，并加热(油浴80℃)16小时。过滤反应混合物，并使滤液真空浓缩。使粗物质在二氯甲烷(150毫升)和水性介质(50毫升水+10毫升饱和NaHCO₃溶液)之间小心地分配。用二氯甲烷萃取水层，将合并的有机相干燥(MgSO₄)，过滤，并真空浓缩。将所得物质用快速色谱法纯化(用洗脱溶剂装填试样；20‑35%乙酸乙酯/二氯甲烷)，提供掺杂有频那醇的J.13(S)‑2‑(5‑(4‑(4,4,5,5‑四甲基‑1,3,2‑二氧杂硼杂环戊烷‑2‑基)苯基)‑1H‑咪唑‑2‑基)吡咯烷‑1‑羧酸叔‑丁酯，为灰白色致密固体；J.13对频那醇的相对摩尔比为约10:1(¹H NMR)。曝露于高真空～2.5天后，试样重为3.9克。¹H NMR(DMSO‑d₆,δ=2.5ppm,400MHz)：12.22/11.94/11.87(m,1H),7.79‑7.50/7.34‑7.27(m,5H),4.86‑4.70(m,1H),3.52(表观宽单峰,1H),3.36(m,1H),2.27‑1.77(m,4H),1.45‑1.10(m,21H).LC(条件‑J1)：RT=1.64分钟；LC/MS：[M+H]⁺C₂₄H₃₅BN₃O₄的分析计算值：440.27；实验值440.23。

合成途径7

实施例J.14‑J.14f.1

使苯并咪唑J.12(250毫克，0.46毫摩尔)、硼酸酯J.13c(217毫克，0.46毫摩尔)和NaHCO₃(95毫克，1.13毫摩尔)溶于1,2‑二甲氧基乙烷(4.5毫升)中，并添加水(1.1毫升)。将反应混合物排空，并用氮气吹洗(3x)，添加Pd(Ph₃P)₄(26毫克，0.022毫摩尔)，并将混合物于加盖的压力容器中加热(80℃的油浴)14小时。在冷却后，将溶液分配到乙酸乙酯/水中，然后将有机层用饱和NaHCO₃、盐水洗涤，并干燥(Na₂SO₄)。浓缩得到残留物，将其施加至用25%B预平衡的25M Biotage SiO₂柱(300毫升)中。梯度洗脱；节段1：25%B(60毫升)；节段2：25‑100%B(1440毫升)；节段3：保持在100%(600毫升)。A=己烷；B=乙酸乙酯，得到J.14，101.1毫克(29%)。¹H NMR(500MHz,DMSO‑d₆)δ8.10‑8.09(m,1H),7.96/7.91(s,1H),7.65‑7.47(m,4H),5.85‑5.70(m,2H),5.12/5.14(s,1H),4.83/4.73(s,1H),3.62‑3.54(m,4H),3.48‑3.26(m,2H),2.90(宽单峰,4H),2.37‑1.84(m,10H),1.42/1.08(s,9H),1.37/1.06(s,9H),0.92‑0.83(m,2H),0.06(s,9H).LC(条件‑D2)：2.8分钟；LCMS：[M+H]⁺C₄₃H₆₁N₆O₅Si的分析计算值769.45；实验值：769.43.HRMS：[M+H]⁺C₄₃H₆₁N₆O₅Si的分析计算值：769.4473；实验值769.4484。

合成途径8

实施例J.14g‑J.14g.1

将活化二氧化锰(122毫克，1.409毫摩尔)一次性添加至J.14d(S)‑2‑(7‑(2‑((S)‑1‑(叔‑丁氧羰基)吡咯烷‑2‑基)‑1H‑苯并[d]咪唑‑5‑基)‑4,5‑二氢‑1H‑萘并[1,2‑d]咪唑‑2‑基)吡咯烷‑1‑羧酸叔‑丁酯(88毫克，0.141毫摩尔)在无水二氯甲烷(2毫升)中的搅拌着的溶液内。将此悬浮液搅拌14小时，并添加另外的二氧化锰(1.5克)。将此悬浮液搅拌16小时，并再一次添加二氧化锰(1.5克)，并将其继续搅拌24小时。将反应混合物通过硅藻土过滤，浓缩，并在高真空下放置1小时。分离得到J.14g(85.0毫克，92%)，为稍带黄色的橙色固体。LCMS：2.14分钟(条件‑D2)C₃₆H₄₃N₆O₄[M+H]⁺的分析计算值623.33；实验值：623.46.HRMS：C₃₆H₄₃N₆O₄[M+H]⁺的分析计算值623.3340；实验值：623.3327。

合成途径8a

实施例JB.1‑JB.3

将乙二醛(2.0毫升，40%，在水中)逐滴添加至NH₄OH(32毫升)和(S)‑Boc‑脯氨醛(8.56克，43.0毫摩尔)的甲醇溶液中，历经11分钟，并在环境温度搅拌19小时。真空除去挥发性成份，将残留物通过快速色谱法纯化(硅胶，EtOAc)，接着重结晶(EtOAc，室温)，提供(S)‑2‑(1H‑咪唑‑2‑基)吡咯烷‑1‑羧酸叔‑丁酯(4.43克)，为白色蓬松固体。¹H NMR(DMSO‑d₆,400MHz)：11.68/11.59(宽单峰,1H),6.94(s,1H),6.76(s,1H),4.76(m,1H),3.48(m,1H),3.35‑3.29(m,1H),2.23‑1.73(m,4H),1.39/1.15(s,9H).RT=0.87分钟(条件‑JB.1)LC/MS：[M+H]⁺C₁₂H₂₀N₃O₂的分析计算值：238.16；实验值238.22。当在下文所指出的手性HPLC条件下分析时，化合物显示具有98.9ee%。柱：Chiralpak AD，10微米，4.6x50毫米，溶剂：1.7%乙醇/庚烷(恒定组成)，流速：1毫升/分钟，波长：220或256纳米。相对保留时间：3.25分钟(R),5.78分钟(S)

在环境温度，将碘(16.17克，63.7毫摩尔)添加至实施例JB.1(6.87克，29.0毫摩尔)和碳酸钠(9.21克，87毫摩尔)在二氧六环(72毫升)和水(72毫升)中的溶液内。将烧瓶用铝箔覆盖，并搅拌16小时。将反应混合物用EtOAc和饱和硫代硫酸钠水溶液稀释。将混合物搅拌15分钟，并分离各相。分离各层，将水相用乙酸乙酯萃取数次。将合并的有机相干燥(Na₂SO₄)，过滤，并真空浓缩，得到(S)‑2‑(4,5‑二碘‑1H‑咪唑‑2‑基)吡咯烷‑1‑羧酸叔‑丁酯(12.5克)，为浅棕色固体。¹H NMR(500MHz,MeOD)δppm4.72‑4.84(m,1H),3.58‑3.70(m,1H),3.43‑3.54(m,1H),2.36(宽单峰,1H),1.88‑2.08(m,3H),1.47(宽单峰,3H),1.27(宽单峰,6H).RT=1.40分钟(条件‑JB.1)LC/MS：[M+H]⁺C₁₂H₁₇I₂N₃O₂的分析计算值：488.94实验值；489.96。

将亚硫酸钠(10.31克，82毫摩尔)添加至实施例JB.2(4.0克，8.2毫摩尔)在乙醇(75毫升)和水(75毫升)中的溶液内。将此悬浮液用油浴在100℃加热4小时，并在90℃加热16小时。将反应混合物用EtOAc和水稀释。分离各层，将水层用EtOAc萃取数次。将合并的有机相干燥(盐水、Na₂SO₄)，过滤，并真空浓缩。将残留物通过快速色谱法纯化(将试样干装填在硅胶上，并用0至40%乙酸乙酯/CH₂Cl₂洗脱)，得到(S)‑2‑(5‑碘‑1H‑咪唑‑2‑基)吡咯烷‑1‑羧酸叔‑丁酯(2.17克)，为白色固体。¹H NMR(500MHz,MeOD)δppm7.52‑7.64(m,1H),4.95‑5.10(m,1H),3.57‑3.70(m,1H),3.47‑3.57(m,1H),2.37‑2.55(m,1H),1.94‑2.10(m,3H),1.46(s,4H),1.27(s,5H).RT=0.93分钟(条件‑JB.1)LC/MS：[M+H]⁺C₁₂H₁₈IN₃O₂的分析计算值363.04；实验值：364.06。
合成途径9

实施例J.15‑JB.4

将碘化铜(copper iodide)(299.6毫克，48.1毫摩尔)和Pd(PPh₃)₂Cl₂(1.29克，4.41毫摩尔)的混合物添加至J.11(16.0克，38.7毫摩尔)、(三甲基甲硅烷基)乙炔(6.8毫升，48.1毫摩尔)和三乙胺(16毫升)的二甲基甲酰胺(200毫升)溶液中，并将反应混合物在～25℃搅拌19.5小时。真空除去挥发性成份，从残留物制备过筛硅胶样品，并对其实施快速色谱法(硅胶；用40%乙酸乙酯/己烷洗脱)，提供炔烃J.15，为浅棕色泡沫状物(13.96克)。¹H NMR(DMSO‑d₆,δ=2.5ppm,500MHz)：12.52‑12.38(m,1H),7.62‑7.41(m,2H),7.24‑7.19(m,1H),5.01‑4.85(m,1H),3.64‑3.51(m,1H),3.46‑3.35(m,1H),2.38‑2.21(m,1H),2.07‑1.81(m,3H),1.39(s,4H),1.04(s,5H),0.23(s,9H).RT=2.09分钟(条件‑J1)LC/MS：[M+H]⁺C₂₁H₃₀N₃O₂Si的分析计算值：384.21；实验值：384.27。

实施例J.16‑JB.5

将碳酸钾(0.5526克，4毫摩尔)添加至炔烃J.15(13.9克，36.2毫摩尔)在甲醇(200毫升)中的溶液内，并将混合物在室温搅拌17小时。真空除去挥发性成份，并使残留物于乙酸乙酯和饱和氯化铵(水溶液)溶液之间分配，并分离有机层，并用盐水洗涤，干燥(MgSO₄)，过滤，和真空浓缩，提供炔烃J.16，为浅棕色泡沫状物(9.3克)。¹H NMR(DMSO‑d₆,δ=2.5ppm,500MHz)：12.58‑12.30(宽单峰,1H),7.72‑7.36(两个重叠的表观宽单峰,2H),7.23(d,J=8.1,1H),4.97‑4.88(m,1H),4.02(s,1H),3.64‑3.52(m,1H),3.44‑3.36(m,1H),2.40‑2.20(m,1H),2.06‑1.81(m,3H),1.39(s,4H),1.05(s,5H).LC/MS：[M+Na]⁺C₁₈H₂₁N₃NaO₂的分析计算值：334.15；实验值：334.24。

合成途径9a

合成途径9.1

实施例J.16e.1

实施例J.16e.1从实施例J.9g，根据与合成途径9的J.16的操作相似的两步操作得到。如在J.9g的J.15的制备中所述与TMS‑乙炔偶合，得到实施例J.15f.1；RT=3.95min，(条件‑J2)；C₂₆H₃₄N₃O₂Si[M+H]⁺的计算值448.24；实验值：448.14，其在脱甲硅烷基后得到实施例J.16e.1；RT=3.95min，(条件‑J4)；C₂₃H₂₆N₃O₂[M+H]⁺的计算值376.20；实验值：376.10。
合成途径9a.1

实施例J.16f.1

实施例J.16f.1从实施例J.16e.1，根据与合成途径9a的J.16f的操作相似的两步操作得到。如在J.19的制备中所述将实施例J.16e.1脱保护，在脯氨酸处形成HCl盐(RT=1.63min，(条件‑J1)；C₁₈H₁₈N₃[M+H]⁺的计算值276.15；实验值：276.10)，以及其在通过HATU，根据J.21的制备与cap‑170偶合后，得到实施例J.16f.1；RT=1.73min，(条件‑J1)；C₂₇H₃₀N₄O₄[M+H]⁺的计算值475.24；实验值：475.07。
实施例J.16f

实施例J.16f从实施例J.16e，根据下述的两步操作得到。如在J.19的制备中所述脱保护，形成HCl盐，其通过HATU，根据下面J.21的制备与cap‑170偶合，得到J.16f RT=1.59min，(条件‑D1)；C₂₇H₂₉N₄O₄[M+H]⁺的计算值473.22；实验值：473.06。
合成途径9.1a

实施例J.16e.2和J.16e.3

实施例J.16e.2从实施例J.9ga，根据与合成途径9的J.16的操作相似的两步操作得到。如J.9g的J.15的制备中所述与TMS‑乙炔偶合，得到实施例J.16f.2；RT=2.17min，(条件‑J2)；C₂₆H₃₄N₃O₂Si[M+H]⁺的计算值448.24；实验值：448.11，其在脱甲硅烷后得到实施例J.16e.2；RT=1.93min，(条件‑J4)；C₂₃H₂₆N₃O₂[M+H]⁺的计算值376.20；实验值：376.40。

合成途径10

实施例J.17‑17.a

将氢氧化铵(4毫升)添加至(S)‑脯氨醛(650毫克，3.26毫摩尔)在四氢呋喃(15毫升)中的溶液内，并在密封压力容器中于48℃搅拌6小时。添加α‑对甲苯磺酰基‑(3‑溴苄基)异氰化物(974毫克，2.77毫摩尔)和六氢吡嗪(281毫克，3.26毫摩尔)，并将反应混合物在48℃搅拌18小时。在冷却后，将反应混合物用乙酸乙酯(200毫升)稀释，用水和盐水洗涤，并浓缩。将粗产物吸收在二氯甲烷中，并装填至40克Thomson硅胶柱中。用20‑100%B进行梯度洗脱，历经750毫升，得到J.17(S)‑2‑(5‑(3‑溴苯基)‑1H‑咪唑‑4‑基)吡咯烷‑1‑羧酸叔‑丁酯413毫克(31%)。¹H NMR(CDCl₃,δ500MHz)：10.36/9.90(宽单峰,1H),7.75(宽单峰,1H),7.53(宽单峰,2H),7.38(宽单峰,1H),7.24(宽单峰,1H),5.11(宽单峰,1H),3.54(宽单峰,2H),2.32/2.19(m,1H),1.95‑1.85(m,2H),1.74(s,1H),1.45/1.18(s,9H).RT=1.7(条件‑J1)LC/MS：[M+H]⁺C₁₈H₂₃BrN₃O₂的分析计算值：392.09；实验值：392.13。

合成途径11

实施例J.18‑JB.6

将碘化铜(9.8毫克，0.051毫摩尔)和Pd(PPh₃)₄(59.4毫克，0.051毫摩尔)添加至含有二甲基甲酰胺(3毫升)中的Et₃N(0.2毫升)的J.16(S)‑2‑(5‑乙炔基‑1H‑苯并[d]咪唑‑2‑基)吡咯烷‑1‑羧酸叔‑丁酯(160毫克，0.514毫摩尔)和J.7(S)‑2‑(4‑(4‑溴苯基)‑1H‑咪唑‑2‑基)吡咯烷‑1‑羧酸叔‑丁酯(171毫克，0.437毫摩尔)的经氮气吹洗的溶液内，并将反应混合物在室温搅拌48小时。真空除去挥发性成份，将残留物施加(二氯甲烷)至20克Thomson柱中，并用50‑100%B洗脱，历经500毫升(A/B二氯甲烷/在乙酸乙酯中的20%甲醇)，提供J.18；87毫克(26%)。¹H NMR(CDCl₃,δ,500MHz)：10.97‑10.51(m,2H),7.9(s,0.41H),7.75(d,J=8.2,1.26H),7.69‑7.66(m,0.55H),7.59(s,0.54H),7.54‑7.51(m,1.85H),7.42‑7.32(m,2H),7.25(s,1H),7.22(宽单峰,0.32)(宽单峰,1H),4.99‑4.94(m,1H),3.31(宽单峰,3H),3.04/2.92(宽单峰,2H),2.19‑2.15(m,3H),2.03‑1.95(m,2H),1.62/1.50(宽单峰,20H).LC(条件‑J1)：1.6分钟；LC/MS：[M+H]⁺C₃₆H₄₃N₆O₄的分析计算值：623.34；实验值：623.52；HRMS：[M+H]⁺C₃₆H₄₃N₆O₄的分析计算值：623.3340；实验值：623.3344。

合成途径11.1

实施例J.18i.3a
实施例J.18i.3a从实施例J.16f.1和实施例J.10d，根据对合成途径11的J.18的操作所述的操作得到。偶合得到实施例J.18i.3a；RT=1.88min，(条件‑J4)；C₄₄H₅₂N₇O₆[M+H]⁺的计算值774.40；实验值：774.50。
合成途径11.2

实施例J.18n和J.18o
实施例J.18n从实施例J.16e.2和实施例J.10e，根据对合成途径11的J.18的操作所述的操作得到。偶合得到实施例J.18n；RT=3.49min，(条件‑J5)；C₄₀H₄₇N₆O₄[M+H]⁺的计算值675.37；实验值：675.80。

合成途径12

实施例J.19‑JB.7

使实施例J.14(85毫克，0.11毫摩尔)溶于甲醇(1毫升)中，并添加4N HCl/二氧六环(5毫升)，并将反应混合物搅拌16小时。真空除去溶剂，并使四HCl盐J.19曝露至高真空，历经18小时。LC(条件‑D2)：1.4分钟；LRMS：[M+H]⁺C₂₇H₃₁N₆的分析计算值：439.26；实验值：439.29.HRMS：[M+H]⁺C₂₇H₃₁N₆的分析计算值：439.2610；实验值439.2593。

合成途径12.1

实施例J.20h.1a
实施例J.20h.1a从实施例J.18i.3a，根据与合成途径12的J.19的操作相似的操作得到。脱保护得到实施例J.20h.1a；RT=1.71min，(条件‑J1)；C₃₉H₄₄N₇O₄[M+H]⁺的计算值674.35；实验值：674.30。
合成途径12.2

实施例J.20m和J.20n
实施例J.20m从实施例J.18n，根据与合成途径12的J.19的操作相似的操作得到。脱保护得到实施例J.20m；RT=1.64min，(条件‑J1)；C₃₀H₃₁N₆[M+H]⁺的计算值475.26；实验值：475.25。

合成途径13

实施例J.21‑JB.12

将HATU(60毫克，0.16毫摩尔)添加至实施例J.19(38.18毫克，0.075毫摩尔)、N‑甲氧基羰基‑L‑缬氨酸(26.2毫克，0.15毫摩尔)和许尼希氏碱(0.095毫升，0.54毫摩尔)在二甲基甲酰胺(1.5毫升)中的迅速搅拌着的溶液内。将反应混合物搅拌2小时，并在氮气吹洗下除去溶剂。将残留物用甲醇稀释，并对其实施制备性HPLC(Phenomenex LUNA C18(30x100毫米)；5%‑100%B，历经40分钟；流速=40毫升/分钟；波长=220纳米；溶剂A=0.1%TFA/10%甲醇/90%水；溶剂B=0.1%TFA/90%甲醇/10%水)，得到双TFA盐J.21，17.6毫克(24%)。¹H NMR(500MHz,DMSO‑d₆)δ7.91‑7.84(m,1H),7.72‑7.57(系列m,5H),7.30‑6.8(m,2H),5.50‑5.17(系列m,4H),4.20(m,1H),4.10(宽单峰,1H),3.34‑3.25(m,6H),3.17(s,6H),3.14‑2.90(系列m,4H),2.23‑2.20(m,2H),2.13‑1.93(m,8H),1.32‑1.03(m,12H).LC(条件‑D2)：1.8分钟；LCMS：[M+H]⁺C₄₁H₅₃N₈O₆的分析计算值753.41；实验值：753.55.HRMS：[M+H]⁺C₄₁H₅₃N₈O₆的分析计算值753.4088；实验值：753.4108。

合成途径13.1

实施例J.28i.4a‑J.28i.4b
实施例J.28i.4a从实施例J.20h.1a，根据与合成途径13的J.21的操作相似的操作得到。与cap‑51、N‑甲氧基羰基‑L‑缬氨酸偶合，得到实施例J.28i.4a；RT=1.81min，(条件‑J4)；C₄₆H₅₅N₈O₇[M+H]⁺的计算值831.42；实验值：831.60。

合成途径13a.

实施例J.28q–JB.13

在氮气氛下，将实施例J.28k.1(286.6毫克，0.376毫摩尔)在MeOH(2毫升)中的溶液添加至20%氢氧化钯/碳(52.8毫克，0.376毫摩尔)和碳酸钾(104毫克，0.752毫摩尔)在MeOH(4毫升)中的搅拌着的悬浮液内。将烧瓶排空，并装填氢(3x；气球，14psi)，并搅拌3小时。注：如果反应超过3小时，则显著量的N‑甲基化产物形成。用Celite过滤混合物，将Celite垫用MeOH(100毫升)、二氯甲烷(50毫升)，和再次的MeOH(100毫升)洗涤。将滤液浓缩，并在高真空下放置0.5小时，然后，将其吸收在MeOH中，并通过尼龙注射玻料(nylon syringe frit)(以除去痕量催化剂)。得到实施例J.28q(202毫克，85%产率)，为黄色固体。RT：1.62分钟(条件‑D1)；C₃₇H₄₂N₇O₂[M+H]⁺的分析计算值632.34；实验值：632.21。

将10%Pd/C(50毫克，0.470毫摩尔)一次性添加至实施例JB.6的TFA盐(100毫克，0.118毫摩尔)在MeOH(10毫升)中的悬浮液内。将反应混合物用氢气吹洗，并在氢气球下于室温搅拌过夜。将反应混合物通过Celite过滤并浓缩。将残留物通过制备性HPLC纯化(Waters Sunfire C18柱30X150毫米5u，用10至100%ACN‑水+0.1%TFA梯度洗脱)，得到(2S)‑2‑(4‑(2‑(4‑(2‑((2S)‑1‑(叔‑丁氧羰基)‑2‑吡咯烷基)‑1H‑苯并咪唑‑5‑基)苯基)乙基)‑1H‑咪唑‑2‑基)‑1‑吡咯烷羧酸叔‑丁酯的TFA盐(70毫克)，为白色固体。¹H NMR(500MHz,MeOD)δppm7.95(d,J=9.5Hz,1H),7.85(d,J=9.2Hz,2H),7.66(宽单峰,2H),7.31‑7.44(m,2H),7.26(s,0.5H),7.14(s,0.5H),5.29(宽单峰,1H),5.04(宽单峰,1H),3.73‑3.82(m,1H),3.64(宽单峰,2H),3.55(宽单峰,1H),3.02‑3.15(m,4H),2.56‑2.70(m,1H),2.41‑2.55(m,1H),2.24(宽单峰,1H),2.08‑2.18(m,2H),2.03(宽单峰,3H),1.49(d,J=7.9Hz,9H),1.26(宽单峰,4.5H),1.22(宽单峰,4.5H).RT：1.16分钟(条件‑JB‑1)；C₃₆H₄₆N₆O₄[M+H]⁺的分析计算值627.37；实验值：627.31[M+H]⁺。
实施例J.28r‑JB.15

合成途径13.2

实施例J.28q‑J.28t
实施例J.28q从实施例J.20m，根据与合成途径13的J.21的操作相似的操作得到。与cap‑51、N‑甲氧基羰基‑L‑缬氨酸偶合，得到实施例J.28q；RT=3.19min，(条件‑J5)；C₄₄H₅₃N₈O₆[M+H]⁺的计算值789.41；实验值：789.90。

合成途径14

实施例M.5‑M.9

实施例M.5根据Gudasheva等人,Eur.J.Med.Chem.1996,31,151中所述的操作，从L‑脯氨酸制备。

将EDCI·HCl(1.76克，9.22毫摩尔)添加至4‑溴苯‑1,2‑二胺(1.50克，8.03毫摩尔)、M.5(1.88克，8.06毫摩尔)和1‑羟基苯并三唑(1.31克，9.70毫摩尔)在二氯甲烷(30毫升)中的混合物内，并在环境条件下搅拌19小时。然后，将混合物用二氯甲烷稀释，用水洗涤(2x)，干燥(盐水；MgSO₄)，过滤，并真空浓缩，提供棕色泡沫状物。将乙酸(30毫升)添加至泡沫状物中，并将混合物在65℃加热90分钟。真空除去挥发性成份，将残留物溶于乙酸乙酯中，并用饱和NaHCO₃溶液小心洗涤(2x)，然后将有机相干燥(盐水；MgSO₄)，过滤，并真空浓缩。对所得粗物质实施快速色谱法(硅胶；乙酸乙酯)，提供实施例M.6，为浅棕色泡沫状物(1.67克)。¹H NMR(CDCl₃,δ=7.24ppm,500MHz)：10.71/10.68(重叠的宽单峰,1H),7.85(s,0.48H),7.56(d,J=8.6,0.52H),7.50(s,0.52H),7.35‑7.22(m,6.48H),5.38(表观br d,J=8.1,1H),3.73(d,J=15.7,1H),3.67(d,J=15.6,1H),3.64‑3.51(m,2H),3.12‑3.04(m,1H),2.41‑2.28(m,1H),2.20‑2.08(m,2H).LC/MS：[M+H]⁺C₁₉H₁₈BrN₃O的分析计算值：386.07；实验值：386.10。

将Pd(Ph₃P)₂Cl₂(13.3毫克，0.019毫摩尔)添加至M.6(152.9毫克，0.40毫摩尔)、4‑乙炔基苯胺(69.6毫克，0.59毫摩尔)和Et₃N(2.20毫升)在二甲基甲酰胺(2.0毫升)中的混合物内，并将反应混合物加热至50℃，在此温度保持8.5小时。真空除去挥发性成份，并对残留物实施快速色谱法(0‑30%甲醇/二氯甲烷)，然后在反相HPLC上进一步纯化(甲醇/水/TFA)，得到M.7的TFA盐(50毫克)。LC/MS：[M+H]⁺C₂₇H₂₅N₄O的分析计算值：421.2；实验值421.21。

将二氯甲烷(3.0毫升)添加至M.7(57.0毫克，0.14毫摩尔)、(S)‑1‑乙酰基吡咯烷‑2‑羧酸(23.3毫克，0.15毫摩尔)和EEDQ(39.0毫克，0.16毫摩尔)的混合物中，并在环境条件下搅拌16小时。真空除去挥发性成份，将残留物溶于甲醇中，并对其实施反相HPLC纯化(甲醇/水/TFA)，接着游离碱化(SCX柱；甲醇洗涤；2.0M氨/甲醇洗脱)和快速色谱法纯化(5‑15%甲醇/乙酸乙酯)，得到M.8，为棕色固体(38.0毫克)。LC/MS：[M+H]⁺C₃₄H₃₄N₅O₃的分析计算值：560.27；实验值：560.28。

实施例M.10‑M.11

将M.8(24.0毫克，0.04毫摩尔)和Pd/C(10%，14.1毫克)在甲醇(3.0毫升)中的混合物于H₂气球下(1大气压)搅拌3小时。将此悬浮液通过硅藻土垫过滤并真空浓缩，得到M.10，为灰白色泡沫状物(22.0毫克)。LC/MS：[M+H]⁺C₃₄H₃₈N₅O₃的分析计算值：564.30；实验值：564.43。

合成途径15

实施例J.29‑J.32a

将N‑(4‑(2‑氯代乙酰基)‑2‑硝基苯基)乙酰胺(25.7克，0.1摩尔)悬浮于250毫升3N HCl中，并在1升压力容器中于80℃加热20小时。在冷却至室温后，将1‑(4‑氨基‑3‑硝基苯基)‑2‑氯代乙酮·HCl(23.2克，92%)通过真空过滤分离，为亮黄色固体。使此盐(23.2克，0.092摩尔)悬浮于甲醇(600毫升)中，并一次性添加氯化锡二水合物(65克，0.29摩尔)。将混合物在70℃加热14小时，同时剧烈搅拌。添加另外20克氯化锡二水合物，并将反应混合物搅拌8小时。通过旋转蒸发除去溶剂，并将残留物吸收在乙酸乙酯/NaHCO₃溶液中(注意：许多二氧化碳逸出)。通过过滤除去沉淀的盐，并分离有机层。将水层再萃取两次(乙酸乙酯)，然后将合并的有机层用盐水洗涤，干燥(Na₂SO₄)，并浓缩至1/4体积。通过真空过滤分离2‑氯‑1‑(3,4‑二氨基苯基)乙酮，J.29，10.03克(59%)，为砖红色固体。¹H NMR(400MHz,DMSO‑d₆)δ：8.17(dd,J=8.3,2.3Hz,1H),7.14(d,J=2.0Hz,1H),6.51(d,J=8.0Hz,1H),5.57(宽单峰,2H),4.85(s,2H),4.78(宽单峰,2H).LC(条件‑D2)：0.65分钟；LC/MS：[M+H]⁺C₈H₁₀ClN₂O的分析计算值：185.05；实验值：185.02.HRMS：[M+H]⁺C₈H₁₀ClN₂O的分析计算值：185.0482；实验值：185.0480。重复反应以供应更多物质。

将HATU(38.5克，101.3毫摩尔)分批添加至J.29(17.0克，92毫摩尔)、N‑Boc‑L‑脯氨酸(19.82克，92毫摩尔)和许尼希氏碱(17.6毫升，101.3毫摩尔)在二甲基甲酰胺(200毫升)中的剧烈搅拌着的溶液内。6小时后，真空浓缩反应混合物以除去溶剂，然后将残留物吸收在乙酸乙酯中，用饱和NaHCO₃溶液、盐水洗涤，并干燥(Na₂SO₄)。浓缩产生粘性棕色油状物，将其吸收在冰乙酸(100毫升)中，并在60℃加热20小时。真空除去溶剂，将残留物吸收在乙酸乙酯中，用饱和NaHCO₃溶液(用1N NaOH溶液调节，直到pH=9为止)、盐水洗涤，并干燥(Na₂SO₄)。将浓缩时得到的残留物预吸附至SiO₂(二氯甲烷)上，并对其实施快速色谱法，相继用50%、75%、100%乙酸乙酯/己烷洗脱，得到J.30(S)‑2‑(6‑(2‑氯代乙酰基)‑1H‑苯并[d]咪唑‑2‑基)吡咯烷‑1‑羧酸叔‑丁酯22.37克(67%)，为黄色泡沫状物。¹H NMR(400MHz,DMSO‑d₆)δ：8.20(s,1H),7.81(dd,J=8.3,2.3Hz,1H),7.59(d,J=8.0Hz,1H),5.24(s,2H),4.99/4.93(s,1H),3.60(宽单峰,1H),3.46‑3.41(m,1H),2.36‑2.30(m,1H),2.01‑1.89(m,3H),1.39/1.06(s,9H).LC(条件‑D2)：1.85分钟；LC/MS：[M+H]⁺C₁₈H₂₃ClN₃O₃的分析计算值：364.14；实验值：364.20.HRMS：[M+H]⁺C₁₈H₂₃ClN₃O₃的分析计算值：364.1428；实验值：364.1427。

将叠氮化钠(1.79克，27.48毫摩尔)一次性添加至J.30(S)‑2‑(6‑(2‑氯代乙酰基)‑1H‑苯并[d]咪唑‑2‑基)吡咯烷‑1‑羧酸叔‑丁酯(10.0克，27.48毫摩尔)在乙腈(200毫升)中的溶液内，并在60℃搅拌16小时。将反应混合物浓缩至1/5体积，用乙酸乙酯稀释，并用水和盐水洗涤，然后干燥(Na₂SO₄)。浓缩得到J.31(S)‑2‑(6‑(2‑叠氮基乙酰基)‑1H‑苯并[d]咪唑‑2‑基)吡咯烷‑1‑羧酸叔‑丁酯6.8克(48%)，为金橙色泡沫状物。¹H NMR(500MHz,DMSO‑d₆)δ：8.22/8.03(s,1H),7.80‑7.75(m,1H),7.65/7.56(d,J=8.5Hz,1H),4.99‑4.93(m,3H),3.60(宽单峰,1H),3.46‑3.41(m,1H),2.38‑2.27(m,1H),2.01‑1.89(m,3H),1.40/1.06(s,9H).LC(条件‑D2)：1.97分钟；LC/MS：[M+H]⁺C₁₈H₂₃N₆O₃的分析计算值：371.19；实验值：371.32.HRMS：[M+H]⁺C₁₈H₂₃N₆O₃的分析计算值：371.1832；实验值：371.1825。

于J.31(1.8克，4.86毫摩尔)在乙酸乙酯(5毫升)中的溶液内，添加HCl/二氧六环(10毫升，4N)，并将反应混合物搅拌4小时。真空除去溶剂，并使HCl盐曝露于高真空18小时，得到(S)‑2‑叠氮基‑1‑(2‑(吡咯烷‑2‑基)‑1H‑苯并[d]咪唑‑6‑基)乙酮·2HCl黄色固体。将HATU(1.94克，5.10毫摩尔)添加至二甲基甲酰胺(50毫升)中的(S)‑2‑叠氮基‑1‑(2‑(吡咯烷‑2‑基)‑1H‑苯并[d]咪唑‑6‑基)乙酮的HCl盐(1.8克，4.86毫摩尔)、(R)‑2‑(二甲氨基)‑2‑苯基乙酸HCl盐(1.05克，4.86毫摩尔)和许尼希氏碱(3.4毫升，19.4毫摩尔)内，同时迅速搅拌6小时。真空除去溶剂，将残留物分成二份批料，并分别预吸附至SiO₂(二氯甲烷)上，并在用2%B预平衡的40M Biotage硅胶柱上实施快速色谱法，并用2%B(150毫升)；节段2：2‑40%B(1200毫升)；节段3：40‑80%(600毫升)洗脱。A=二氯甲烷；B=25%甲醇/二氯甲烷，得到J.31a(R)‑1‑((S)‑2‑(6‑(2‑叠氮基乙酰基)‑1H‑苯并[d]咪唑‑2‑基)吡咯烷‑1‑基)‑2‑(二甲氨基)‑2‑苯基乙酮(合并的批料：1.05克(50%))，为黄色泡沫状物。¹H NMR(500MHz,DMSO‑d₆)δ：8.16(s,1H),7.82(dd,J=8.8,1.5Hz,1H),7.65(d,J=8.5Hz,1H),7.60‑7.56(m,5H),5.51(s,1H),5.22(dd,J=8.2,2.8,1H),4.95(m,2H),4.09‑4.05(m,1H),3.17‑3.12(m,1H),2.90/2.84(宽单峰,6H),2.23‑2.19(m,1H),2.21‑1.89(m,3H).LC(D‑条件1)：RT=1.5分钟；LC/MS：[M+H]⁺C₂₃H₂₆N₇O₂的分析计算值：432.22；实验值：431.93.HRMS：[M+H]⁺C₂₃H₂₆N₇O₂的分析计算值：432.2148；实验值：432.2127。

将二氯化锡(II)脱水物(12.24克，54.26毫摩尔)添加至溶于甲醇(200毫升)中的J.31(6.8克，18.08毫摩尔)内。将反应混合物在60℃加热6小时，并浓缩，并在高真空下干燥，得到J.32(S)‑2‑(6‑(2‑氨基乙酰基)‑1H‑苯并[d]咪唑‑2‑基)吡咯烷‑1‑羧酸叔‑丁酯的HCl盐，16.6克，其含有锡盐。LC(条件‑D2)：1.21分钟；LC/MS：[M+H]⁺C₁₈H₂₅N₄O₃的分析计算值：345.18；实验值：345。此物质不经纯化就使用。

合成途径16

实施例J.33‑J.34a

在氮气下，将氯化锡(II)二水合物(17.25克，76.5毫摩尔)一次性添加至甲醇(100毫升)中的2‑氨基‑3‑硝基苯甲酸甲酯(5.0克，25.5毫摩尔)内。将黄色混合物在65℃剧烈搅拌16小时，并通过旋转蒸发除去溶剂，至接近干涸。将残留物吸收在乙酸乙酯中，然后将溶液倒入含有1:1乙酸乙酯/NaHCO₃溶液(300毫升)的大烧杯中，并搅拌15分钟。通过过滤除去沉淀物，并分离有机层。用乙酸乙酯萃取水层两次，然后将合并的有机层用饱和NaHCO₃溶液、盐水洗涤，并干燥(Na2SO₄)。浓缩得到2,3‑二氨基苯甲酸甲酯，为深红色粘性油状物4.1克(97%)。
将HATU(10.66克，28.0毫摩尔)一次性添加至2,3‑二氨基苯甲酸甲酯(4.1克，24.7毫摩尔)、N‑Boc‑L‑脯氨酸(5.49克，25.5毫摩尔)和许尼希氏碱(4.9毫升，28.0毫摩尔)在二甲基甲酰胺(50毫升)中的搅拌着的溶液内。将反应混合物搅拌3小时，然后真空除去溶剂，将残留物用乙酸乙酯稀释，用0.1N HCl、饱和NaHCO₃、盐水洗涤，并干燥(Na₂SO₄)。浓缩得到红棕色粘性油状物，将其吸收在冰乙酸(60毫升)中，并在60℃加热16小时。真空除去溶剂，将残留物用乙酸乙酯稀释，用饱和NaHCO₃溶液、盐水洗涤，并干燥(Na₂SO₄)。浓缩得到残留物，将其分成二份批料，将各批料预吸附至SiO₂(二氯甲烷)上，施加至40M Biotage SiO₂柱中，并通过10%‑100%B(1440毫升)梯度洗脱；A=己烷；B=乙酸乙酯，得到J.33(S)‑2‑(1‑(叔‑丁氧羰基)吡咯烷‑2‑基)‑1H‑苯并[d]咪唑‑7‑羧酸甲酯7.05克(83%)，为稍带红色的油状物。¹H NMR(500MHz,DMSO‑d₆)δ：7.86(d,J=7.9Hz,1H),7.78(t,J=5Hz,1H),7.28‑7.24(m,1H),5.20‑5.11(m,1H),3.95(s,3H),3.60‑3.52(m,1H),3.43‑3.38(m,1H),2.33‑2.22(m,1H),2.15‑2.0(m,2H),1.91‑1.86(m,1H),1.40/1.05(s,9H).LC(条件‑D2)：RT=1.86分钟；LC/MS：[M+H]⁺C₁₈H₂₄N₃O₄的分析计算值：346.18；实验值346.26；HRMS：[M+H]⁺C₁₈H₂₄N₃O₄的分析计算值：346.1767；实验值：346.1776。

实施例J.34

将5N氢氧化钠溶液(8毫升)添加至甲醇(80毫升)中的甲酯J.33(7.0克，20.3毫摩尔)，并搅拌8小时。添加另外4毫升，并继续搅拌18小时，此时，使反应温度升至45℃，在此温度保持最后8小时，完成水解作用。通过旋转蒸发除去大部分甲醇，并用乙酸乙酯稀释碱性水溶液。沉淀物形成，并通过过滤分离。将有机层分离，并用盐水洗涤。另一批沉淀物在部分浓缩至1/4体积期间形成，J.34(S)‑2‑(1‑(叔‑丁氧羰基)吡咯烷‑2‑基)‑1H‑苯并[d]咪唑‑7‑羧酸的合并批料总计5.49克(82%)。¹H NMR(500MHz,DMSO‑d₆)δ：8.04‑8.0(m,2H),7.58(宽单峰,1H),5.32(s,1H),3.67‑3.63(m,1H),3.47‑3.43(m,1H),2.44‑2.36(m,1H),2.17‑2.11(m,1H),2.05‑1.93(m,2H),1.40/1.06(s,9H).LC(条件‑D2)：1.68分钟；LC/MS：[M+H]⁺C₁₇H₂₂N₃O₄的分析计算值：332.16；实验值：332.25.HRMS：[M+H]⁺C₁₇H₂₂N₃O₄的分析计算值：322.1610；实验值：322.1625。

合成途径17

实施例J.35‑J.35a

于氮气下，将氯甲酸异丁酯(0.45毫升，3.4毫摩尔)逐滴添加至酸J.34(1.0克，3.02毫摩尔)和N‑甲基吗啉(1.2毫升，10毫摩尔)在四氢呋喃(50毫升)中的在0℃冷却的溶液内，并除去冰浴，将反应混合物搅拌30分钟。使溶液再冷却，并添加另外0.5毫升碱，接着添加2‑硝基苯甲酰甲基胺·HCl(700毫克，3.2毫摩尔)。将反应混合物在室温搅拌18小时，并用乙酸乙酯和饱和NaHCO₃溶液稀释。通过过滤除去沉淀物，并浓缩有机相。将残留物吸收在甲醇中并过滤，提供第二批沉淀物。J.35的合并批料，796毫克(65%)，不经进一步纯化就用于后续步骤。¹H NMR(300MHz,DMSO‑d₆)δ：10.5(宽单峰,1H),8.73(s,1H),8.52‑8.49(m,1H),7.88(t,J=8.0Hz,1H),7.80(d,J=7.7Hz,1H),7.65(d,J=7.7Hz,1H),7.25(t,J=7.7Hz,1H),5.11‑5.05(m,3H),3.70‑3.33(m,2H),2.39‑2.31(m,1H),2.14‑1.89(m,3H),1.38/1.07(s,9H).LC(条件‑J1)：1.64分钟；LRMS：[M+H]⁺C₂₅H₂₈N₅O₆的分析计算值：494.21；实验值：494.17。

合成途径18

实施例J.36‑J.37e

将N‑(3‑二甲氨基丙基)‑N‑乙基碳化二亚胺·HCl盐(3.1克，16.6毫摩尔)添加至3‑氨基‑2‑甲基苯甲酸(2.5克，16.6毫摩尔)和N‑Boc‑L‑脯氨酸(3.5克，16.6毫摩尔)在二氯甲烷(40毫升)中的悬浮液内。将反应混合物在氮气下搅拌18小时，用溶剂(1份体积)稀释，并用1N HCl、盐水洗涤，并干燥(MgSO₄)。浓缩得到泡沫状物，将其施加至40M Biotage SiO₂柱中，并通过20%‑60%B(1000毫升)梯度洗脱；A=1%乙酸/己烷；B=1%乙酸/乙酸乙酯，得到J.36(S)‑3‑(1‑(叔‑丁氧羰基)吡咯烷‑2‑羧酰氨基)‑2‑甲基苯甲酸2.6克(45%)。¹H NMR(300MHz,DMSO‑d₆)δ：12.5(宽单峰,1H),9.52/9.46(s,1H),7.57(d,J=7.3Hz,1H),7.44‑7.40(m,1H),7.29‑7.24(m,1H),4.32‑4.28(m,1H),3.47‑3.48(m,1H),3.34‑3.29(m,1H),2.33(s,3H),1.93‑1.80(m,4H),1.41/1.36(s,9H).LC(条件‑J1)：1.55分钟；LCMS：[M+H]⁺C₁₈H₂₅N₂O₅的分析计算值：349.18；实验值349.33。

将HATU(462毫克，1.22毫摩尔)一次性添加至J.32(450毫克，1.22毫摩尔)、J.36(423毫克，1.22毫摩尔)和许尼希氏碱(1.0毫升)在二甲基甲酰胺(10毫升)中的搅拌着的溶液内，并将反应混合物搅拌18小时。真空除去溶剂，将残留物施加至25M Biotage SiO₂柱中，并通过5%‑60%B(500毫升)梯度洗脱；A=乙酸乙酯；B=10%甲醇/乙酸乙酯，得到J.37，439.6毫克(50%)。¹H NMR(300MHz,DMSO‑d₆)δ：12.73‑12.58(m,1H),9.45/9.35(s,1H),8.59(宽单峰,1H),8.33/8.12(s,1H),7.86(d,J=8.4Hz,1H),7.66/7.56(d,J=8.4Hz,1H),7.40‑7.36(m,1H),7.25(表观宽单峰,2H),5.0‑4.92(m,1H),4.79(d,J=4.8Hz,2H),4.33‑4.30(m,1H),3.60(宽单峰,1H),3.47‑3.41(m,2H),3.35‑3.29(m,1H),2.24(s,3H),2.02‑1.87(m,8H),1.42‑1.37/1.05(m,18H).LC(条件‑J1)：1.65分钟；LRMS：[M+H]⁺C₃₆H₄₇N₆O₇的分析计算值：675.35；实验值675.30。

合成途径19

实施例J.38‑J.40

将二氯化锡(II)二水合物(37克，168毫摩尔)添加至溶于甲醇(350毫升)中的4‑甲基‑3‑硝基苯乙酮(10克，56毫摩尔)内。将反应混合物在60℃加热18小时，浓缩，并在高真空下干燥，得到含有锡盐的1‑(3‑氨基‑4‑甲基苯基)乙酮。LC(条件‑J1)：0.73分钟；LC/MS：[M+H]⁺C₉H₁₁NO的分析计算值：150.08；实验值：150。此物质不经纯化就使用。将HATU(10.6克，28毫摩尔)一次性添加至1‑(3‑氨基‑4‑甲基苯基)乙酮(4.1克，28毫摩尔)、N‑Boc‑L‑脯氨酸(6克，28毫摩尔)和许尼希氏碱(25毫升)在DMF(225毫升)中的搅拌着的溶液内，并将反应混合物搅拌18小时。真空除去溶剂，将残留物吸收在乙酸乙酯/甲醇(1:1)中，并施加至快速SiO₂柱中。通过梯度20%；50%；75%；100%B(总洗脱体积1500毫升)分步洗脱；A=己烷；B=乙酸乙酯；并用10%甲醇/乙酸乙酯进行最后洗脱，得到J.38，4.4克(46%)。¹H NMR(300MHz,DMSO‑d₆)δ：9.51/9.45(s,1H),7.95‑7.92(m,1H),7.70(d,J=8.0Hz,1H),7.37(d,J=7.7Hz,1H),4.33‑4.29(m,1H),3.48‑3.29(m,2H),2.50(s,3H),2.26(s,3H),1.98‑1.80(m,4H),1.41/1.36(m,9H).LC(条件‑J1)：1.70分钟；LRMS：[M+H]⁺C₁₉H₂₇N₂O₄的分析计算值：347.20；实验值347.41。

将实施例J.38(3克，83毫摩尔)溶于甲醇(30毫升)中，并添加4N HCl/二氧六环(50毫升)，然后将反应混合物搅拌18小时。真空除去溶剂，并使(S)‑N‑(5‑乙酰基‑2‑甲基苯基)吡咯烷‑2‑甲酰胺HCl盐曝露至真空。LC(条件‑J1)：0.9分钟。将HATU(1.4克，3.5毫摩尔)一次性添加至(S)‑N‑(5‑乙酰基‑2‑甲基苯基)吡咯烷‑2‑甲酰胺·HCl(1.0克，3.5毫摩尔)、(R)‑2‑(甲氧基羰基氨基)‑2‑苯基乙酸(740毫克，3.5毫摩尔)和许尼希氏碱(2.9毫升)在二甲基甲酰胺(25毫升)中的搅拌着的溶液内，并将反应混合物搅拌18小时。真空除去溶剂，将残留物施加至40M Biotage SiO₂柱中，并通过50%‑100%B(500毫升)梯度洗脱；A=己烷；B=乙酸乙酯，得到J.39(R)‑2‑((S)‑2‑(5‑乙酰基‑2‑甲基苯基氨基甲酰基)吡咯烷‑1‑基)‑2‑氧代‑1‑苯基乙基氨基甲酸甲酯1.25克(87%)。¹H NMR(300MHz,DMSO‑d₆)δ：9.42(s,1H),7.95(s,1H),7.75‑7.69(m,2H),7.43‑7.19(m,6H),5.50/5.40(d,J=7.7Hz,1H),4.49‑4.47(m,1H),3.87‑3.81(m,1H),3.58‑3.54(m,1H),3.50(s,3H),2.54(s,3H),2.27(s,3H),1.99‑1.83(m,4H).LC(条件‑J1)：1.65分钟；LRMS：[M+H]⁺C₂₄H₂₈N₃O₅的分析计算值：438.20；实验值438.20。
参考文献：Synthesis(1988)第545页(氯化)。

将三甲基二氯碘酸苄酯(2.0克，5.72毫摩尔)添加至J.39(1.25克，2.86毫摩尔)在二氯甲烷(65毫升)和甲醇(20毫升)中的溶液内。将反应混合物在75℃加热3小时，然后通过旋转蒸发浓缩。将残留物吸收在乙酸乙酯中，用硫代硫酸钠溶液、盐水洗涤，并干燥(MgSO₄)，得到α‑氯代酮。LC(条件‑J1)：1.70分钟；LC/MS：[M+H]⁺C₂₄H₂₇ClN₃O₅的分析计算值：471.16；实验值：471。
按实施例J.31中所述，使α‑氯代酮转化成α‑氨基酮J.40。[α‑叠氮基酮：LC(条件‑J1)：1.70分钟；LRMS：[M+H]⁺C₂₄H₂₇N₆O₅的分析计算值：479.20；实验值：479.20]。J.26LC(条件‑J1)：1.70分钟；LRMS：[M+H]⁺C₂₄H₂₉N₄O₅的分析计算值：453.21；实验值：453。
合成途径20

实施例J.41‑J.42h

按实施例J.37中所述，使α‑氨基酮J.40与J.34a偶合，得到J.41：LC(条件‑J1)：1.90分钟；LRMS：[M+H]⁺C₄₁H₄₈N₇O₈的分析计算值：766.36；实验值：766.37。

将J.41(237毫克，0.31毫摩尔)、三苯膦(162毫克，0.62毫摩尔)和三乙胺(0.2毫升，1.74毫摩尔)在二氯甲烷(3毫升)中的溶液在氮气氛下搅拌约5分钟，然后一次性添加六氯乙烷(146毫克，0.62毫摩尔)。将反应混合物搅拌18小时，部分浓缩，并施加至12M Biotage硅胶柱中，并通过40%‑100%B梯度洗脱，A=己烷；B=乙酸乙酯，得到J.42，95毫克(41%)。LC(条件‑J1)：1.95分钟；LRMS：[M+H]⁺C₄₁H₄₆N₇O₇的分析计算值：748.36；实验值：748.29。

实施例J.43‑J.43j
按实施例J.39中所述，将吡咯烷实施例J.42‑J.42h用HCl处理，得到实施例J.43‑J.43j，为HCl盐。

实施例J.44‑J.53a
实施例J.44‑J.53a按实施例J.21中所述制成。

生物学活性
在本发明中使用HCV复制子测定，且如共同拥有的PCT/US2006/022197和O'Boyle等人，Antimicrob Agents Chemother.2005年4月；49(4):1346‑53中所述进行制备、实施和验证。并入荧光素酶报道子的测定方法也如所述(Apath.com)使用。
使用HCV‑neo复制子细胞和在NS5A区中含有突变的复制子细胞来测试当前所述的化合物家族。经测定，所述化合物对含有所述突变的细胞的抑制活性比野生型细胞小10倍以上。因此，本发明的化合物可有效抑制HCV NS5A蛋白的功能，且已了解其组合形式与先前在申请PCT/US2006/022197和共同拥有的WO/O4014852中所述同样有效。此外，本发明的化合物可有效对抗HCV1b基因型。还应该理解的是，本发明的化合物可抑制HCV的多种基因型。表2显示本发明的代表性化合物针对HCV1b基因型的EC₅₀(有效的50%抑制浓度)值。在一个实施方案中，本发明的化合物可抑制1a、1b、2a、2b、3a、4a和5a基因型。针对HCV1b的EC₅₀值如下：A(1‑10μM);B(100‑999nM);C(4.57‑99nM);D(0.5pM‑4.57nM)。
本发明的化合物可通过除NS5A抑制以外或非NS5A抑制的机制来抑制HCV。在一个实施方案中，本发明的化合物抑制HCV复制子，在另一个实施方案中，本发明的化合物抑制NS5A。
表2

本领域技术人员应该明白的是，本发明不限于前述示例性实施例，并且在不背离本发明基本属性的情况下本发明可按其它具体形式来实施。因此期望的是，所述实施例在各个方面都应该被视为示例性的而非限制性的，应该参考所附的权利要求书而不是前述实施例，并且落入所述权利要求书的等价意义和范围内的所有变化形式都应该包括在本发明的范围内。
本发明的化合物可通过除NS5A抑制以外或非NS5A抑制的机制来抑制HCV。在一个实施方案中，本发明的化合物抑制HCV复制子，在另一个实施方案中，本发明的化合物抑制NS5A。本发明的化合物可抑制HCV的多种基因型。