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1、(10)授权公告号 CN 101612175 B (45)授权公告日 2011.07.06 CN 101612175 B *CN101612175B* (21)申请号 200910145725.9 (22)申请日 2009.05.31 A61K 36/185(2006.01) A61P 31/04(2006.01) A23L 1/30(2006.01) G01N 30/02(2006.01) G01N 30/72(2006.01) A61K 129/00(2006.01) (73)专利权人 山东大学威海分校 地址 264209 山东省威海市高技区文化西路 180 号 (72)发明人 张崇禧 (。
2、54) 发明名称 暴马丁香树皮挥发油成分的分离鉴定和用途 (57) 摘要 本发明所属医药产品研究开发技术领域。本 发明涉及暴马丁香 Syringa amurensis Rupr. 树 皮挥发油的分离鉴定和新用途。取暴马丁香树 皮， 干燥后剪碎， 用蒸馏水浸泡 6-8h 后超声 1h， 温度为 30功率为 80W。将药材与浸泡液一同 倒入挥发油提取器中， 采用水蒸气蒸馏法提取 4-5h。放出水层， 用乙醚反复洗挥发油提取器， 使 暴马丁香挥发油充分溶解到乙醚中。将溶有挥 发油的乙醚溶液倒入烧杯中， 再向烧杯中加无水 硫酸钠吸干水分， 回收乙醚后即得到纯净的挥发 油， 放入冰箱 4保存备用。暴马丁。
3、香树皮挥发油 用 6890/5973N 气相色谱与质谱联用仪器分析， 暴 马丁香挥发油主要化学成分为 n-Hexadecanoic acid(27.46)， 9， 12-Octadecadienoic acid(Z， Z)-(28.52 )， 9， 17-Octadecadienal(14.16 ) and Tricosane(2.44 )。本发明暴马丁香树皮 挥发油对大肠杆菌、 金黄色葡萄球菌、 巴氏菌、 链 球菌、 沙门氏菌均有不同程度的抑制作用， 可开发 为天然抗菌剂应用于食品、 药品等行业， 制备出具 有抑菌作用的各种形式的产品。 (51)Int.Cl. 审查员 康旭亮 (19)中华人。
4、民共和国国家知识产权局 (12)发明专利 权利要求书 1 页 说明书 6 页 CN 101612175 B1/1 页 2 1. 一种暴马丁香树皮挥发油的分离鉴定方法， 其特征在于包括以下步骤 ： ( 一 )、 取暴马丁香树皮， 干燥后剪碎， 用蒸馏水浸泡 6-8h 后超声 1h， 温度为 30， 功率 为 80W ； ( 二 )、 将药材与浸泡液一同倒入挥发油提取器中， 采用水蒸气蒸馏法提取 4-5h ； ( 三 )、 放出水层， 用乙醚反复洗挥发油提取器， 使暴马丁香挥发油充分溶解到乙醚中 ； ( 四 )、 将溶有挥发油的乙醚溶液倒入烧杯中， 再向烧杯中加无水硫酸钠吸干水分， 回 收乙醚后即。
5、得到纯净的挥发油， 放入冰箱 4保存备用 ； (五)、 步骤(四)中所得暴马丁香树皮挥发油用6890/5973N气相色谱与质谱联用仪分 析， 其主要化学成分为 27.46的 n- 十六酸， 28.52的 Z， Z-9， 12- 十八碳二烯酸， 14.16 Z-9， 17- 十八碳二烯醛， 2.44的二十三烷。 2. 如权利要求 1 所述的一种暴马丁香树皮挥发油在制备抑制大肠杆菌、 链球菌、 沙门 氏菌、 巴氏菌、 金黄色葡萄球菌的抑制剂中的用途。 权 利 要 求 书 CN 101612175 B1/6 页 3 暴马丁香树皮挥发油成分的分离鉴定和用途 技术领域 0001 本发明所属医药产品研究开。
6、发技术领域。本发明涉及暴马丁香 Syringa amurensis Rupr. 树皮挥发油的分离鉴定和用途。 背景技术 0002 暴马丁香 Syringa amurensis Rupr. 为长白山常见药用植物之一， 在我国主要分 布在吉林、 辽宁、 华北、 西北和华中地区， 资源丰富。树皮、 树干及枝条均可药用， 味苦， 性微 寒， 经现代药理实验证明具有清肺祛痰、 止咳、 平喘、 消炎、 利尿的功能。 0003 目前， 关于暴马丁香树皮挥发油的分离鉴定和化学成分及药理作用研究鲜见报 道， 仅有几篇报道从树皮、 树枝中分离得到数个化合物， 未对暴马丁香树皮挥发油做过抑菌 研究。因此， 本发明采。
7、用水蒸气蒸馏法对药用植物暴马丁香树皮挥发油进行了提取， 利用 6890/5973N 气相色谱与质谱联用仪器分离和鉴定， 并对暴马丁香树皮挥发油进行了抑菌试 验。 0004 本发明的暴马丁香树皮挥发油对革兰氏阳性菌、 革兰氏阴性菌具有抑制作用， 这 种抑菌作用具有积极的应用价值。 发明内容 0005 本发明的目的是对暴马丁香树皮挥发油成分进行提取、 分离和鉴定并将暴马丁香 树皮挥发油进行抑菌试验， 利于在抑菌方面进行开发应用。 0006 本发明的暴马丁香树皮挥发油成分对大肠杆菌、 金黄色葡萄球菌、 巴氏菌、 链球 菌、 沙门氏菌均有不同程度的抑制作用， 可开发为天然抗菌剂应用于食品、 药品等行业。
8、， 制 备出具有抑菌作用的各种形式的产品。 0007 1.本发明涉及暴马丁香Syringa amurensis Rupr.树皮挥发油的分离鉴定和新用 途。取暴马丁香树皮， 干燥后剪碎， 用蒸馏水浸泡 6-8h 后超声 1h， 温度为 30功率为 80W。 将药材与浸泡液一同倒入挥发油提取器中， 采用水蒸气蒸馏法提取4-5h。 放出水层， 用乙醚 反复洗挥发油提取器， 使暴马丁香挥发油充分溶解到乙醚中。将溶有挥发油的乙醚溶液倒 入烧杯中， 再向烧杯中加无水硫酸钠吸干水分， 回收乙醚后即得到纯净的挥发油， 放入冰箱 4保存备用。 0008 暴马丁香树皮挥发油用 6890/5973N 气相色谱与质谱。
9、联用仪器分析， 暴马丁香挥 发油主要化学成分为 n-Hexadecanoic acid(27.46 )， 9， 12-Octadecadienoic acid(Z， Z)-(28.52 )， 9， 17-Octadecadienal(14.16 )and Tricosane(2.44 )。 0009 2. 暴马丁香树皮挥发油的提取、 分离和鉴定， 其特征在于该工艺包括以下过程 ： 0010 (1) 取暴马丁香树皮， 挑去杂物， 水洗， 烘干或晾干， 粉碎， 用蒸馏水浸泡 6-8h 后超 声 1h， 温度为 30功率为 80W ； 0011 (2) 将 (1) 中药材与浸泡液一同倒入挥发油提取器。
10、中， 采用水蒸气蒸馏法提取 4-5h， 获得上面浮有挥发油的水溶液 ； 说 明 书 CN 101612175 B2/6 页 4 0012 (3) 将 (2) 中上面浮有挥发油的水溶液放出水层， 用乙醚反复洗挥发油提取器， 使 暴马丁香挥发油充分溶解到乙醚中， 将溶有挥发油的乙醚溶液倒入烧杯中， 再向烧杯中加 无水硫酸钠吸干水分， 回收乙醚后即得到纯净的挥发油， 放入冰箱 4保存备用。 0013 (4) 将 (3) 中暴马丁香树皮挥发油用 6890/5973N 气相色谱与质谱联用仪器分析， 暴马丁香挥发油主要化学成分为n-Hexadecanoic acid(27.46)， 9， 12-Octad。
11、ecadienoic acid(Z， Z)-(28.52 )， 9， 17-Octadecadienal(14.16 )and Tricosane(2.44 )。 0014 3. 根据本发明 1 至 2 所述的制备暴马丁香树皮挥发油的原料为暴马丁香 Syringaamurensis Rupr. 的树皮。 0015 4.根据本发明1至2所述的暴马丁香树皮挥发油对大肠杆菌、 金黄色葡萄球菌、 巴 氏菌、 链球菌、 沙门氏菌均有不同程度的抑制作用。 0016 5. 根据本发明 1 至 2 所述的暴马丁香树皮挥发油， 其特征在于该树皮挥发油可作 为天然抗菌剂用于食品、 药品等行业， 代替有毒副作用的合。
12、成抗菌剂。 0017 根据本发明， 本发明中的 “” 是重量百分比。 具体实施方式 0018 本发明所述的暴马丁香树皮挥发油成分的提取、 分离和鉴定包括以下实施例， 下 面的实施例可进一步说明本发明， 但不以任何方式限制本发明。 0019 实施例 1 ： 0020 (1) 取暴马丁香树皮 100g， 挑去杂物， 水洗， 烘干或晾干， 粉碎， 用蒸馏水 300mL 浸 泡 6h 后超声 1h， 温度为 30功率为 80W ； 0021 (2)将(1)中药材与浸泡液一同倒入挥发油提取器中， 采用水蒸气蒸馏法提取4h， 获得上面浮有挥发油的水溶液 ； 0022 (3) 将 (2) 中上面浮有挥发油的。
13、水溶液放出水层， 用乙醚反复洗挥发油提取器， 使 暴马丁香挥发油充分溶解到乙醚中， 将溶有挥发油的乙醚溶液倒入烧杯中， 再向烧杯中加 无水硫 酸钠吸干水分， 回收乙醚后即得到纯净的挥发油， 放入冰箱 4保存备用。 0023 (4) 将 (3) 中暴马丁香树皮挥发油用 6890/5973N 气相色谱与质谱联用仪器分析， 暴马丁香挥发油主要化学成分为n-Hexadecanoic acid(27.46)， 9， 12-Octadecadienoic acid(Z， Z)-(28.52 )， 9， 17-Octadecadienal(14.16 )and Tricosane(2.44 )。 0024 。
14、实施例 2 ： 0025 (1) 取暴马丁香树皮 200g， 挑去杂物， 水洗， 烘干或晾干， 粉碎， 用蒸馏水 600mL 浸 泡 8h 后超声 1h， 温度为 30功率为 80W ； 0026 (2)将(1)中药材与浸泡液一同倒入挥发油提取器中， 采用水蒸气蒸馏法提取5h， 获得上面浮有挥发油的水溶液 ； 0027 (3) 将 (2) 中上面浮有挥发油的水溶液放出水层， 用乙醚反复洗挥发油提取器， 使 暴马丁香挥发油充分溶解到乙醚中， 将溶有挥发油的乙醚溶液倒入烧杯中， 再向烧杯中加 无水硫酸钠吸干水分， 回收乙醚后即得到纯净的挥发油， 放入冰箱 4保存备用。 0028 (4) 将 (3)。
15、 中暴马丁香树皮挥发油用 6890/5973N 气相色谱与质谱联用仪器分析， 暴马丁香挥发油主要化学成分为n-Hexadecanoic acid(27.46)， 9， 12-Octadecadienoic acid(Z， Z)-(28.52 )， 9， 17-Octadecadienal(14.16 )and Tricosane(2.44 )， 详细化 说 明 书 CN 101612175 B3/6 页 5 学成分见表 2。 0029 药理试验例 ： 暴马丁香树皮挥发油的抑菌作用 0030 1 实验材料 0031 大肠杆菌、 链球菌、 沙门氏菌、 巴氏菌和金黄色葡萄球菌均来自于美国菌种保藏中 。
16、心 (ATCC)， 37在蛋白胨牛肉汤中培养 12h。 0032 培养基为牛肉膏蛋白胨培养基。菌的活化与培养时用液体培养基， 组成为 ： 牛肉 膏蛋白胨氯化钠蒸馏水 (3 10 5 1000)。菌的保存及抑菌实验时用固体培养 基， 组成为 ： 牛肉膏蛋白胨氯化钠琼脂蒸馏水 (3 10 5 22 1000)。 0033 2 实验方法 0034 2.1 培养基的配制 0035 取牛肉膏0.6g、 蛋白胨2g、 氯化钠1g、 蒸馏水200ml， 混合并搅拌使其完全溶解， 配 成液体培养基。 用量筒量取液体培养基， 将其平均分装在10个50ml的三角瓶内， 每瓶20ml。 取牛肉膏 3g、 蛋白胨 1。
17、0g、 氯化钠 5g、 琼脂 22g、 蒸馏水 1000ml， 混合后将其置于电炉子上加 热， 使琼脂完全溶解， 配成固体培养基。 用量筒量取固体培养基， 将其平均分装在5个150ml 的三角瓶内， 每瓶 100ml。三角瓶瓶口均用棉塞塞紧并用牛皮纸包扎。 0036 2.2 灭菌 0037 将配好的固体培养基、 液体培养基均放入高压灭菌锅中灭菌， 温度上升到 121 时， 开始计时20min。 培养皿、 量筒、 镊子、 剪刀、 6mm滤纸片(放在小烧杯中)、 滴管、 氨瓶等实 验器材均放入烘箱中170灭菌2h。 实验前用75乙醇擦拭超净工作台并紫外灭菌20min。 37恒温培养箱在使用前需用 。
18、75乙醇擦拭灭菌。 0038 2.3 菌的培养与查菌 0039 将 5 个菌种在超净工作台上、 酒精灯环境下倒入装有液体培养基的三角瓶中， 每 种菌培养两份。将这 10 个三角瓶放入摇床 37摇菌 6h。显微镜做镜检后开始查菌， 记录 数据并计算菌浓度， 若 5 个中方格总菌数为 A， 菌液稀释倍数为 B， 则 1ml 菌液中总菌数 A/5251000013 50000AB 0040 2.4 样品液及滤纸片的制备 0041 将暴马丁香树皮挥发油配制成5mg/ml的溶液(可加04L二甲基亚砜助容)， 按 1 2n稀释成 2.5mg/ml、 1.25mg/ml、 0.625mg/ml、 0.312。
19、5mg/ml 的溶液。将滤纸片用打 孔器打成直径为 6mm 的圆片， 在超净工作台将滤纸片放进各梯度样品中浸泡 2h。 0042 2.5 有菌琼脂平板的制备 0043 将稀释好的菌液与固体培养基混合并摇晃均匀， 此时菌的浓度应达到 3.6108CFU/ml。将有菌培养基依次倒入各培养皿中， 晃动培养皿使培养基均匀地铺在培 养皿底部， 冷却至凝固。 0044 2.6 抑菌实验方法 0045 用记号笔在有菌琼脂平板上标号， 将浸泡好的滤纸片用镊子夹出， 放入写相应对 照编号的培养皿中， 每个样品做三个平行， 放入 37恒温培养箱培养。 0046 3. 实验结果 0047 抑菌效果用抑菌圈直径 DD。
20、 表示 ( 单位 mm)。 0048 在抑菌实验结束后的第 12h、 24h、 36h、 48h 观察菌的生长情况， 测量抑菌圈直径并 说 明 书 CN 101612175 B4/6 页 6 记录。 0049 表 1 暴马丁香树皮挥发油的抑菌活性 0050 0051 结果表明 ： 暴马丁香树皮挥发油对大肠杆菌、 金黄色葡萄球菌、 巴氏菌、 链球菌、 沙 门氏菌均有不同程度的抑制作用。 0052 通过具体实施实例说明暴马丁香树皮挥发油可作为天然抗菌剂用于食品、 药品等 行业， 代替有毒副作用的合成抗菌剂。 0053 表 2 暴马丁香挥发油化学成分 0054 说 明 书 CN 101612175 B5/6 页 7 0055 说 明 书 CN 101612175 B6/6 页 8 说 明 书 。