一种载多烯紫杉醇混合胶束制剂及其制备方法.pdf

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1、(10)授权公告号 CN 102885772 B (45)授权公告日 2013.11.20 CN 102885772 B *CN102885772B* (21)申请号 201210372072.X (22)申请日 2012.09.29 A61K 9/10(2006.01) A61K 31/337(2006.01) A61K 47/36(2006.01) A61K 47/34(2006.01) A61P 35/00(2006.01) (73)专利权人 山东大学 地址 250014 山东省济南市历下区文化西路 44 号 (72)发明人 翟光喜 窦金凤 张海群 刘秀菊 (74)专利代理机构 济南圣达。

2、知识产权代理有限 公司 37221 代理人 邓建国 CN 101314041 A,2008.12.03, 全文 . CN 101439032 A,2009.05.27, 全文 . CN 102579341 A,2012.07.18, 第 0007、 0015-0018 段 . CN 101804021 A,2010.08.18, 全文 . US 2012082717 A1,2012.04.05, 全文 . Madaswamy S. Muthua， 等 .Vitamin E TPGS coated liposomes enhanced cellular uptake and cytotoxici。

3、ty of docetaxel in brain cancer cells.International Journal of Pharmaceutics .2011, 第 421 卷第 332-340 页 . 季冬英， 等， .PLA-mPEG 的合成和多西紫杉醇 聚合物胶束的制备 .中国药科大学学报 .2008, 第 39 卷 ( 第 3 期 ), 第 223-227 页 . (54) 发明名称 一种载多烯紫杉醇混合胶束制剂及其制备方 法 (57) 摘要 本发明公开了一种载多烯紫杉醇的混合胶 束制剂及其制备方法， 该制剂是采用薄膜水化法 制备的多烯紫杉醇混合胶束， 以两亲性的 TPGS、 M。

4、PEG-PLA、 CSO-SA 为胶束载体材料， 将多烯紫杉 醇包裹在疏水核内。本发明选择 TPGS、 MPEG-PLA、 CSO-SA 这三种两亲性材料制备载多烯紫杉醇混 合胶束以增加载药量、 溶解度和口服生物利用度， 可以解决疏水性药物在制备剂型时产生的水溶性 差、 药物释放速度和粒径大小不适等诸多问题。 (51)Int.Cl. (56)对比文件 审查员 石良 权利要求书 1 页 说明书 5 页 附图 2 页 (19)中华人民共和国国家知识产权局 (12)发明专利 权利要求书1页 说明书5页 附图2页 (10)授权公告号 CN 102885772 B CN 102885772 B *CN1。

5、02885772B* 1/1 页 2 1. 一种载多烯紫杉醇混合胶束制剂， 其特征在于， 它包括胶束载体材料和胶束载体 材料包裹的多烯紫杉醇， 胶束载体材料为两亲性的天然维生素 E- 聚乙二醇 1000 琥珀 酸酯、 聚乙二醇单甲醚 - 聚乳酸共聚物和壳寡糖 - 硬脂酸 ； 所述多烯紫杉醇、 聚乙二醇 单甲醚 - 聚乳酸共聚物、 天然维生素 E- 聚乙二醇 1000 琥珀酸酯、 壳寡糖 - 硬脂酸的质 量比为 1-4:20-40:20-40:10-30 ； 所述聚乙二醇单甲醚 - 聚乳酸共聚物为聚乙二醇单甲 醚 MPEG1000-4000- 聚乳酸 PLA3000-30000 的共聚物 ； 所。

6、述壳寡糖 - 硬脂酸的取代度为 10%-80% ； 所述壳寡糖 - 硬脂酸中， 壳寡糖的分子量为 2-10kDa ； 其制备包括以下步骤 ： （1） 将天然维生素 E- 聚乙二醇 1000 琥珀酸酯、 聚乙二醇单甲醚 - 聚乳酸共聚物和多烯 紫杉醇溶于有机溶剂， 使天然维生素 E- 聚乙二醇 1000 琥珀酸酯、 聚乙二醇单甲醚 - 聚乳酸 和多烯紫杉醇充分溶解， 形成溶液 A ； （2） A 溶液经旋转蒸发除去有机溶剂使之成膜 ； （3） 将壳寡糖 - 硬脂酸溶于水中形成溶液 B ； （4） 将溶液 B 转移至 A 成膜的容器中， 采用磁力搅拌进行水化， 水化产物进行离心取上 清即得载多烯紫。

7、杉醇纳米混合胶束制剂。 2. 如权利要求 1 所述的一种载多烯紫杉醇混合胶束制剂， 其特征在于， 步骤 （1） 中， 所 述有机溶剂为丙酮、 二氯甲烷、 三氯甲烷、 乙腈、 乙酸乙酯、 四氢呋喃或二甲基亚砜中的任一 种。 3.如权利要求1所述的一种载多烯紫杉醇混合胶束制剂， 其特征在于， 步骤(1)中所述 天然维生素 E- 聚乙二醇 1000 琥珀酸酯、 聚乙二醇单甲醚 - 聚乳酸和多烯紫杉醇充分溶解， 方法包括加热、 搅拌或超声促进溶解。 4.如权利要求1所述的一种载多烯紫杉醇混合胶束制剂， 其特征在于， 步骤(4)中薄膜 分散温度为 20-60， 水化时间为 15-180min。 权 利 。

8、要 求 书 CN 102885772 B 2 1/5 页 3 一种载多烯紫杉醇混合胶束制剂及其制备方法 技术领域 0001 本发明涉及一种载多烯紫杉醇混合胶束制剂及其制备方法。 背景技术 0002 多烯紫杉醇 （docetaxel， DTX） ， 又名多西他赛， 是近年来开发的一种新型抗肿瘤药 物， 为紫杉醇类第二代人工合成药物。 多烯紫杉醇的作用机制与紫杉醇类似， 抗肿瘤活性是 紫杉醇的 1.3-12 倍， 其通过干扰细胞有丝分裂和分裂期间细胞功能所必需的微管网络而 起抗肿瘤作用。 多烯紫杉醇可与游离的微管蛋白结合， 促进微管蛋白装配成稳定的微管， 同 时抑制其解聚， 导致丧失了正常功能的微。

9、管束的产生和微管的固定， 从而抑制细胞的有丝 分裂。 临床用于乳腺癌、 胰腺癌、 非小细胞肺癌、 软组织肉瘤、 头颈癌、 胃癌、 卵巢癌和前列腺 癌等， 单独用药和联合用药均有显著效果。 0003 多烯紫杉醇结构式为 ： C43H53NO14， 分子量为 807.88。结构式如下 ： 0004 0005 多烯紫杉醇难溶于水， 半衰期短及毒性大等缺点限制了它在临床上的应用。目 前国内及国外市售的多烯紫杉醇注射液如泰索帝是将多烯紫杉醇溶解于吐 温 -80 中。 0006 该制剂使用前需使用专用的注射用溶剂稀释， 对操作人员的要求极其严格且使用 方法繁琐 ： 制剂中含有大量的吐温易引起溶血及过敏等不。

10、良反应， 需提前服用地塞米松等 药物防治， 临床用药不方便， 用药安全性低。 为了避免这些缺点， 提高病人的方便， 便于更多 慢性治疗方案的应用， 许多研究已经指向新的多烯紫杉醇口服制剂的研究。口服多烯紫杉 醇存在的主要问题是由 p- 糖蛋白 （p-gp） 引起的低生物利用度。 0007 聚合物胶团给药系统是近年来研究十分活跃的靶向控释给药系统。其特有的 核 - 膜结构， 既提供了一个疏水的内核作为药物储库， 又提供了一个亲水的外膜以维持在 水性环境中的稳定性。因而它可以增加疏水性药物在水中的溶解度， 作为药物增溶的一条 途径。纳米级范围的粒径有效促进了聚合物胶团的 “渗透与保留作用” ， 赋。

11、予其被动靶向肿 瘤组织的功能。混合胶束的制剂稳定性、 载药量等指标优于单一聚合物胶束。 0008 天然维生素 E- 聚乙二醇 1000 琥珀酸酯 （TPGS） ， 因其亲脂部分较大而广泛被用作 说 明 书 CN 102885772 B 3 2/5 页 4 增溶剂、 吸收促进剂和脂质类载药制剂。研究发现 TPGS 能增强抗癌药物的溶解度和口服生 物利用度。 0009 两亲性嵌段聚合物聚乙二醇单甲醚 - 聚乳酸 （MPEG-PLA） 有良好的胶束形成、 载药 能力、 释药行为良好， 由于其优异的生物相容性和可降解性能， 在生物科学领域的应用越来 越广泛。 0010 壳聚糖是一种具有良好生物相容性和。

12、生物可降解性特征的药物载体材料， 在水 溶性好的低分子壳聚糖 （壳寡糖） 上引入疏水性的硬脂酸基团得到两亲性的壳寡糖 - 硬脂 酸 （CSO-SA） ， 该材料在水中可自发形成纳米范围的胶束， 研究显示该胶束能抑制 p-gp 排出 泵。 0011 综上所述， 选择 MPEG-PLA、 TPGS、 CSO-SA 这三种两亲性材料制备载多烯紫杉醇混 合胶束以增加载药量、 溶解度和口服生物利用度， 可以解决疏水性药物在制备剂型时产生 的水溶性差、 药物释放速度和粒径大小不适等诸多问题。 发明内容 0012 本发明的目的是针对上述现有技术， 提供一种多烯紫杉醇的新剂型， 即载多烯紫 杉醇的混合胶束制剂。

13、， 该制剂能增加多烯紫杉醇的溶解度和代谢稳定性， 并可通过抑制 p-gp 增加多烯紫杉醇的体内吸收提高其生物利用度。 0013 为实现上述目的， 本发明采用下述技术方案 ： 0014 一种载多烯紫杉醇混合胶束制剂， 它包括两亲性的天然维生素 E- 聚乙二醇 1000 琥珀酸酯 （TPGS） 、 聚乙二醇单甲醚 - 聚乳酸共聚物共聚物 （TPGS）和壳寡糖 - 硬脂酸 （CSO-SA） 为胶束载体材料和胶束载体材料包裹的多烯紫杉醇。 0015 所述多烯紫杉醇、 聚乙二醇单甲醚 - 聚乳酸共聚物、 天然维生素 E- 聚乙二醇 1000 琥珀酸酯、 壳寡糖 - 硬脂酸的质量比为 (1-4):(20-。

14、40):(20-40):(10-30)。 0016 本发明还提供载多烯紫杉醇混合胶束制剂的制备方法， 包括以下步骤 ： 0017 （1） 将天然维生素 E- 聚乙二醇 1000 琥珀酸酯、 聚乙二醇单甲醚 - 聚乳酸共聚物和 多烯紫杉醇溶于有机溶剂， 使维生素 E- 聚乙二醇 1000 琥珀酸酯、 聚乙二醇单甲醚 - 聚乳酸 和多烯紫杉醇充分溶解， 形成溶液 A ； 0018 （2） A 溶液经旋转蒸发除去有机溶剂使之成膜 ； 0019 （3） 将壳寡糖 - 硬脂酸溶于水中形成溶液 B ； 0020 （4） 将溶液 B 转移至 A 成膜的容器中， 采用磁力搅拌进行水化， 水化产物进行离心 取上。

15、清即得载多烯紫杉醇纳米混合胶束制剂。 0021 该制剂采用薄膜分散法制备， 以两亲性的 TPGS、 MPEG-PLA、 CSO-SA 为胶束载体材 料， 将多烯紫杉醇包裹在疏水核内。 0022 步骤 （1）中所述聚乙二醇单甲醚 - 聚乳酸共聚物优选聚乙二醇单甲醚 MPEG 1000-4000- 聚乳酸 PLA2000-30000 的共聚物。 0023 步骤 （1） 中， 胶束载体材料 （TPGS、 MPEG-PLA 和 CSO-SA） 总量与多烯紫杉醇的质量 比 20-100:1。所述的三种两亲性材料的用量分别占载体材料总重为 ： TPGS(0.01%-99.9%) ； MPEG-PLA(0.。

16、01%-99.9%) ； CSO-SA(0.01%-50%)。优选的， 所述多烯紫杉醇、 聚乙二醇单甲 醚 - 聚乳酸共聚物、 天然维生素 E- 聚乙二醇 1000 琥珀酸酯、 壳寡糖 - 硬脂酸的质量比为 说 明 书 CN 102885772 B 4 3/5 页 5 (1-4):(20-40):(20-40):(10-30)。 0024 步骤 （1） 中， 所述有机溶剂为丙酮、 二氯甲烷、 三氯甲烷、 乙腈、 乙酸乙酯、 四氢呋喃 或二甲基亚砜中的任一种。 0025 步骤 (1) 中所述天然维生素 E- 聚乙二醇 1000 琥珀酸酯、 聚乙二醇单甲醚 - 聚乳 酸和多烯紫杉醇充分溶解， 方法。

17、包括加热、 搅拌或超声促进溶解。 0026 所述 CSO-SA 的氨基取代度为 10%-80%， 优选 30%-70% ； 所述 CSO-SA 中壳寡糖的分 子量为 2-10kDa ； 0027 步骤 (4) 中薄膜分散温度为 20-60， 水化时间为 15-180min， 优选 30-60min。 0028 本发明所采用的方法为薄膜分散法， 但不限于薄膜分散法， 也可以采用透析法或 溶剂挥发法。 0029 本发明的有益效果是， 跟市售的多烯紫杉醇注射液不同， 该制剂不需使用易引起 溶血及过敏等不良反应的吐温 -80 进行增溶， 临床用药方便， 用药安全性高， 避免了由 p-gp 引起的低生物。

18、利用度。聚合物胶团给药系统特有的核 - 膜结构， 既提供了一个疏水的内核 作为药物储库， 又提供了一个亲水的外膜以维持在水性环境中的稳定性， 因而本发明利用 聚合物胶团给药系统来增加疏水性药物在水中的溶解度。 纳米级范围的粒径有效促进了聚 合物胶团的 “渗透与保留作用” ， 赋予其被动靶向肿瘤组织的功能， 混合胶束的制剂稳定性、 载药量等指标优于单一聚合物胶束。TPGS 因其亲脂部分较大而广泛被用作增溶剂、 吸收促 进剂和脂质类载药制剂。MPEG-PLA 有良好的胶束形成、 载药能力、 释药行为良好， 壳聚糖是 一种具有良好生物相容性和生物可降解性特征的药物载体材料， 在水溶性好的低分子壳聚 。

19、糖 （壳寡糖） 上引入疏水性的硬脂酸基团得到两亲性的 CSO-SA， 该材料在水中可自发形成纳 米范围的胶束， 研究显示该胶束能抑制 p-gp 排出泵。本发明选择这三种两亲性材料制备载 多烯紫杉醇混合胶束以增加载药量、 溶解度和口服生物利用度， 可以解决疏水性药物在制 备剂型时产生的水溶性差、 药物释放速度和粒径大小不适等诸多问题。 附图说明 0030 图 1 是载多烯紫杉醇混合胶束制剂的粒径分布图 ； 0031 图 2 是载多烯紫杉醇混合胶束制剂的透射电镜扫描图 ； 0032 图 3 为药动学试验多烯紫杉醇的血药浓度 - 时间曲线图。 具体实施方式 0033 下面结合附图和实施例对本发明进行。

20、进一步的阐述， 应该说明的是， 下述说明仅 是为了解释本发明， 并不对其内容进行限定。 0034 实施例 1 ： 0035 称取 4mg 多烯紫杉醇， 40mg MPEG3000-PLA2000共聚物， 20mg TPGS， 加入 4mL 乙腈， 超 声使载体材料和药物完全溶解， 经旋转蒸发除去有机溶剂乙腈， 使材料 （MPEG-PLA 共聚物 和 TPGS） 和药物在器壁上形成均匀的膜。称取 10mg 氨基取代度 50% 的 CSO5000-SA 溶于 2mL 水形成水溶液， 将该水溶液转移至成膜的容器中， 该水溶液磁力搅拌分散膜， 温度是 30， 搅拌 30min 后， 所得溶液离心取上清。

21、得多烯紫杉醇混合胶束制剂， 4密封保存。 0036 结果 ： 制得的多烯紫杉醇混合胶束制剂的载药量为 4.2%， 包封率为 77.1%。 说 明 书 CN 102885772 B 5 4/5 页 6 0037 制备的载多烯紫杉醇混合胶束制剂的粒径分布图如图 1 所示。 0038 实施例 2 ： 0039 称取 4mg 多烯紫杉醇， 20mg MPEG3000-PLA10000共聚物， 40mg TPGS， 加入 4mL 三氯甲 烷， 超声使载体材料和药物完全溶解， 旋蒸除去有机溶剂， 使材料和药物在器壁上形成均匀 的膜。称取 10mg 氨基取代度 50% 的 CSO10000-SA 溶于 2m。

22、L 水形成水溶液， 将该水溶液转移至 成膜的容器中， 用该水溶液在磁力搅拌下分散有机膜， 温度是 40， 搅拌 50min 后， 所得溶 液离心取上清得多烯紫杉醇混合胶束制剂， 4密封保存。 0040 结果 ： 制得的多烯紫杉醇混合胶束制剂的载药量为 3.1%， 包封率为 54.4%。 0041 实施例 3 ： 0042 称取 4mg 多烯紫杉醇， 20mg MPEG1000-PLA8000共聚物， 40mg TPGS， 加入 3mL 乙酸乙 酯， 超声使载体材料和药物完全溶解， 旋蒸除去有机溶剂， 使材料和药物在器壁上形成均匀 的膜。称取 10mg 取代度 50% 的 CSO8000-SA 。

23、溶于 5mL 水形成水溶液， 将该水溶液转移至成膜 的容器中， 该水溶液在磁力搅拌分散膜， 温度是 25， 搅拌 40min 后， 所得溶液离心取上清 得多烯紫杉醇混合胶束制剂， 4密封保存。 0043 结果 ： 制得的多烯紫杉醇混合胶束制剂的载药量为 5.2%， 包封率为 83.6%。 0044 实施例 4 ： 0045 称取 3mg 多烯紫杉醇， 30mg MPEG4000-PLA12000 共聚物， 30mg TPGS， 加入 3mL 乙 腈， 超声使载体材料和药物完全溶解， 旋蒸除去有机溶剂， 使材料和药物在器壁上形成均匀 的膜。称取 25mg 取代度 70% 的 CSO5000-SA。

24、 溶于 5mL 水形成水溶液， 将该水溶液转移至成 膜的容器中， 该水溶液磁力搅拌分散膜， 温度是 60， 搅拌 50min 后， 所得溶液离心取上清 得多烯紫杉醇混合胶束制剂， 4密封保存。 0046 结果 ： 制得的多烯紫杉醇混合胶束制剂的载药量为 3.0%， 包封率为 85.2%。 0047 实施例 5 ： 0048 称取3mg多烯紫杉醇， 30mg MPEG2000-PLA30000共聚物， 30mg TPGS， 加入3mL乙酸 乙酯， 超声使载体材料和药物完全溶解， 旋蒸出去有机溶剂， 使材料和药物在器壁上形成均 匀的膜。称取 30mg 取代度 30% 的 CSO8000-SA 溶于。

25、 5mL 水形成水溶液， 将该水溶液转移至 成膜的容器中， 该水溶液磁力搅拌分散膜， 温度是 50， 搅拌 50min 后， 所得溶液离心取上 清得多烯紫杉醇混合胶束制剂， 4密封保存。 0049 结果 ： 制得的多烯紫杉醇混合胶束制剂的载药量为 1.3%， 包封率为 45.2%。 0050 实施例 6 ： 0051 称取 1mg 多烯紫杉醇， 30mg MPEG3000-PLA10000 共聚物， 30mg TPGS， 加入 3mL 乙 腈， 超声使载体材料和药物完全溶解， 旋蒸除去有机溶剂， 使材料和药物在器壁上形成均匀 的膜。称取 20mg 取代度 50% 的 CSO2000-SA 溶于。

26、 5mL 水形成水溶液， 将该水溶液转移至成 膜的容器中， 该水溶液磁力搅拌分散膜， 温度是 30， 搅拌 50min 后， 所得溶液离心取上清 得多烯紫杉醇混合胶束制剂， 4密封保存。 0052 结果 ： 制得的多烯紫杉醇混合胶束制剂的载药量为 1.4%， 包封率为 95.0%。 0053 取上述胶束适量， 将胶束滴在铜网上， 用 2% 的磷钨酸染色干燥后， 在透射电镜下 观察， 如图 2 所示。在电镜下呈椭圆形， 粒径在 10100nm 范围内， 分散良好。 0054 试验例 1:Caco-2 单细胞渗透试验 说 明 书 CN 102885772 B 6 5/5 页 7 0055 取已培养。

27、的 Caco-2 细胞， 向肠腔侧 (AP 侧 ) 分别加入 40g/ml 的 DTX 胶束和原 料药溶液 0.4ml， 同时在基底侧加入含 5mM 葡萄糖和 5mM4-(2- 羟乙基 )-1- 哌嗪乙烷磺酸 的汉克斯平衡盐 （江苏普诺生生物科技有限公司， 不含酚红） 0.6ml 作为接收介质。给药后 20， 40， 60 和 120min 于基底侧 （BL 侧） 取样 0.3ml 进行测定， 随即补充新鲜接收介质。按公 式其中 dQ/dt 为渗透速率 （g/s） ， 根据药物在不同时间内转运通过 Caco-2 细胞 BL 侧药量对时间回归得到直线斜率。C0为 Caco-2 细胞 AP 侧初始。

28、质量浓度 （g/ml） ， A 是空肠囊或 Transwell 的表面积 （cm2） 。 0056 结果 ： 通过对实验结果计算得到 A to B（AP 侧到 BP 侧） 的渗透系数 ： DTX 胶束为 0.150.01610-5cm/s， 与 DTX 溶液存在明显差异 （0.070.003cm/s， P0.05） ， 说明该混 合胶束能增强多烯紫杉醇的细胞渗透能力。 0057 试验例 2: 0058 按照实施例 1 制备多烯紫杉醇混合胶束制剂进行药动学试验 ： 取健康雄性 Wistar 大鼠 10 只， 随机分成 2 组， 每组 5 只， 给药前禁食 12h( 可自由饮水 )。分别灌胃给予多。

29、烯紫 杉醇混合胶束溶液 （试验组， 给药剂量 20mg/kg， 按 DTX 计算） 和 DTX 市售制剂泰索帝 （对照 组， 给药剂量 20mg/kg） 。给药后试验组和对照组分别于 0.25、 0.5、 1.0、 2.0、 4.0、 6.0、 8.0、 12.0、 24.0h自大鼠颈静脉窦取血0.8mL， 置于加有肝素钠的离心管中， 4000rpm离心15min， 取上层血浆， -20保存待测。 0059 结果 ： 如图 3 所示， 试验组的血药浓度 - 时间曲线下面积 （AUC） 是对照组的 2.9 倍 (P0.01)， 最大血药浓度试验组是对照组的 3.5 倍 (P0.01)， 多烯紫杉。

30、醇胶束制剂的绝对 口服生物利用度明显高于原料药组 （8.5%， 2.4%） 。 结果表明， 多烯紫杉醇混合胶束制剂能促 进多烯紫杉醇的口服吸收， 提高多烯紫杉醇的口服生物利用度。 0060 上述虽然结合附图对本发明的具体实施方式进行了描述， 但并非对本发明保护范 围的限制， 在本发明的技术方案的基础上， 本领域技术人员不需要付出创造性劳动即可做 出的各种修改或变形仍在本发明的保护范围以内。 说 明 书 CN 102885772 B 7 1/2 页 8 图 1 图 2 说 明 书 附 图 CN 102885772 B 8 2/2 页 9 图 3 说 明 书 附 图 CN 102885772 B 9 。