一种盐酸拓扑替康靶向脂质体制剂及其制备方法.pdf

一种盐酸拓扑替康靶向脂质体制剂及其制备方法
    【技术领域】
     本发明涉及靶向脂质体制剂， 具体涉及含有盐酸拓扑替康的靶向脂质体及其制备方法。 背景技术 癌症严重威胁人类健康， 肿瘤靶向长循环脂质体是提高化疗效果、 降低抗肿瘤药 物毒性的理想的药物输送系统， 具有显著的临床意义和应用前景。它可通过靶向配基对 肿瘤细胞的特异性识别机制， 将药物载体导向肿瘤组织， 使包载的抗癌药物浓集在癌变部 位， 提高化疗效果， 降低细胞毒性药物对正常细胞组织的伤害。长循环脂质体表面的聚乙 二醇能在脂质体表面形成一层水化膜， 逃避网状内皮系统对脂质体的摄取， 使脂质体在 体循环中的时间延长， 不仅能增加靶向配体识别和结合靶细胞的机会， 还可借助肿瘤的 EPR(enhanced permeability and retention) 效应， 造成肿瘤局部高药物浓度， 逆转肿瘤 细胞的多药耐药性。
     整合素是介导细胞间， 细胞与细胞外基质间相互作用的透膜蛋白， 在细胞激活、 迁 移、 增殖、 存活和分化过程中起着极其重要的作用。其中整合素 αvβ3 在内皮细胞和成熟 内皮细胞呈低水平表达， 而高表达于肿瘤新生血管和肿瘤细胞表面， 目前已经发现其高表 达于骨肉瘤和侵入性肿瘤如晚期脑胶质瘤， 乳腺癌、 前列腺癌、 恶性黑色素瘤和卵巢癌。故 整合素 αvβ3 成为新的肿瘤治疗的重要靶标。整合素 αvβ3 能够和存在于细胞外基质蛋 白如纤维蛋白、 纤连蛋白、 层黏连蛋白的 RGD(Arg-Gly-Asp， 精氨酸 - 甘氨酸 - 天冬氨酸 ) 序 列特异性结合， 在生理和病理过程中发挥着重要的作用。利用外源性的 RGD 肽竞争性结合 肿瘤细胞表面的整合素， 可达到肿瘤的靶向治疗。即 RGD 肽能介导药物靶向表达 αvβ3 整 合素受体的肿瘤。
     通过化学方法将 RGD 肽与脂质体共价结合， 即在脂质体磷脂膜修饰多个 RGD 肽配 体， 形成的多价 RGD 结构有利于与靶细胞结合和内化， 达到药物主动靶向肿瘤细胞的作用。 但是， 由于整合素不仅存在于肿瘤细胞中， 在脾脏单核巨噬细胞也有表达， 导致 RGD 肽容易 被脾脏摄取， 缩短体内消除时间， 环 RGD 肽在体内消除半衰期仅为几分钟。因此， 将 RGD 肽 接枝到聚乙二醇远端的脂质体消除速率也很快。
     因此， 如何既使 RGD 肽能发挥肿瘤靶向作用， 又使聚乙二醇发挥其体内长循环作 用， 是制备聚乙二醇和 RGD 肽双重修饰脂质体需要解决的关键问题。
     发明内容 本发明旨在提供一种靶向长循环脂质体制剂及其制备方法， 以克服现有技术存在 的上述缺陷， 满足临床应用的需要。
     所述的靶向脂质体制剂， 为盐酸拓扑替康靶向脂质体制剂， 由盐酸拓扑替康和脂 质体组成， 重量比为 ：
     盐酸拓扑替康∶脂质体＝ 1 ∶ 5 ～ 1 ∶ 20 ；
     优选为 ： 盐酸拓扑替康∶脂质体＝ 1 ∶ 8 ～ 1 ∶ 16 ；
     所述脂质体靶向配基、 亲水性聚合物聚乙二醇 (PEG)、 马来酰亚胺化磷脂酰乙醇胺 (MBPE)、 磷脂和胆固醇各比例如下 ：
     磷脂和胆固醇摩尔比为 1 ∶ 1 ～ 10 ∶ 1 ； 磷脂和 MBPE 摩尔比为 200 ∶ 1 ～ 5 ∶ 1 ； 磷脂和 PEG 摩尔比为 100 ∶ 1 ～ 5 ∶ 1 ； MBPE 和靶向配基摩尔比为 10 ∶ 1 ～ 1 ∶ 1 ；
     优选为 ：
     磷脂和胆固醇摩尔比为 1.2 ∶ 1 ～ 5 ∶ 1 ； 磷脂和 MBPE 摩尔比为 40 ∶ 1 ～ 10 ∶ 1 ； 磷脂和 PEG 摩尔比为 80 ∶ 1 ～ 8 ∶ 1 ； MBPE 和靶向配基摩尔比为 8 ∶ 1 ～ 2 ∶ 1。
     所述亲水性聚合物聚乙二醇选自二硬脂酰基磷脂酰乙醇胺 - 聚乙二醇 2000(DSPE-PEG2000) 或巯基化聚乙二醇 ( 聚乙二醇单甲醚 2000- 琥珀酰基半胱氨酸， PEG-SC) ；
     所述的靶向配基选自含有巯基的 RGD 肽及其类似物， RGD 肽是指含有精氨酸 - 甘 氨酸 - 天冬氨酸序列的环肽和线性肽， 如 RGDwc 或环 RGD 肽即 c(RGDfc) ；
     所述的 RGD 肽， 可采用文献 [1]Nefzi A， Fenwick JE.N-terminus 4-Chloromethyl Thiazole Peptide as a Macrocyclization Tool in the Synthesis of Cyclic Peptides ： Application to the Synthesis of Conformationally Constrained RGD-Containing Integrin Ligands. [2]Liu SQ， Tian Q， Wang L， Hedrick JL， Hui JH， Yang YY， Ee PL.Injectable Biodegradable Poly(ethylene glycol)/RGD Peptide Hybrid Hydrogels for in vitro Chondrogenesis of Human Mesenchymal Stem Cells. 报导的方法制备 ；
     所述的环 RGD 肽， 可以文献报导 [3]Haubner， R.， et al.， Radiolabeled alpha(v) beta3integrin antagonists ： a new class of tracers for tumor targeting 或 [4]Chen， X.， et al.Pharmacokinetics and tumor retention of 125I-labeled RGD peptide are improved by PEGylation. 为基础进行制备 ； 例如 ： 采用固相合成的方法， 以 2- 氯三苯甲 基树脂和 Fmoc 保护的氨基酸 ( 药甲基羰基 - 甘氨酸， 茐甲基羰基 - 天冬氨酸 β- 叔丁基 酯， 茐甲基羰基 -D- 苯丙氨酸， N- 芴甲氧羰酰基 -2， 2， 4， 6， 7- 五甲基二氢苯并呋喃 -5- 磺 酰 -L- 精氨酸， 芴甲氧羰基 -S- 三苯甲基 -L- 半胱氨酸 ) 为原料， 以 HBTU/HOBt/DIEA 为缩 合剂， 先将五个 Fmoc 保护的氨基酸通过接肽反应逐个接到树脂上， 再脱去树脂得到直链五 肽， 通过 DPPA/NaHCO3 环合， 经脱保护得到环五肽， 用制备液相 (RP-HPLC) 分离提纯。
     所述普通磷脂选自大豆卵磷脂、 蛋黄卵磷脂、 二硬脂酰磷脂酰胆碱 (DSPC)、 二棕榈 酰磷脂酰胆碱 (DPPC) 或氢化大豆磷脂 (HSPC) ；
     所述马来酰亚胺化磷脂酰乙醇胺的制备方法， 以及有关的理化鉴别参数， 在中国 专利， 申请号为 ： 200810205017.5 中有详细的报导 ；
     巯基化聚乙二醇的制备方法， 以及有关的理化鉴别参数， 在中国专利申请号 200810205019.4 中有详细的报导 ；
     所述二硬脂酰基磷脂酰乙醇胺 - 聚乙二醇 2000 为德国 Lipoid 公司产品 ；
     所述的盐酸拓扑替康靶向脂质体制剂的制备方法， 包括如下步骤 ：
     (1) 将普通磷脂、 胆固醇和马来酰亚胺化磷脂酰乙醇胺与有机溶剂混合溶解， 蒸发 除去有机溶剂， 加缓冲液水化， 再用洗脱剂置换外水相， 收集得到含马来酰亚胺化磷脂酰乙
     醇胺的空白脂质体 ；
     所述的有机溶剂为三氯甲烷、 二氯甲烷、 水乙醇、 乙醚或甲醇中的一种以上 ；
     所述的用于水化的缓冲液选自浓度为 0.125 ～ 0.250mol/L 的硫酸铵溶液或 pH 为 4.0 的柠檬酸盐缓冲液 ；
     所述的洗脱剂为缓冲液、 葡萄糖溶液或氯化钠溶液， 所述缓冲液选自磷酸缓冲液 如 pH7.4 的 PBS、 HEPES 缓冲液、 柠檬酸缓冲液或 Tris 缓冲液 ； 氯化钠溶液如生理盐水 ；
     (2) 再将上述空白脂质体与盐酸拓扑替康粉末或其溶液混合、 40 ℃～ 60 ℃孵育 5min ～ 1h， 与靶向配基溶液混合、 20℃～ 50℃孵育 10min ～ 1h， 与二硬脂酰基磷脂酰乙醇 胺 - 聚乙二醇 2000 或巯基化聚乙二醇溶液混合、 20℃～ 50℃孵育 10min ～ 1h， 即得聚乙二 醇和靶向配基修饰的盐酸拓扑替康脂质体 ；
     所述的盐酸拓扑替康溶液为盐酸拓扑替康水溶液、 盐酸拓扑替康缓冲液或盐酸拓 扑替康氯化钠溶液， 浓度为 2mg/ml ～ 15mg/ml ；
     靶向配基溶液为靶向配基水溶液、 靶向配基缓冲液或靶向配基氯化钠溶液， 浓度 为 0.1mg/ml ～ 3mg/ml ；
     所述缓冲液选自磷酸缓冲液如 pH7.4 的 PBS、 HEPES 缓冲液、 柠檬酸缓冲液或 Tris 缓冲液 ； 氯化钠溶液如生理盐水 ；
     发明人经过广泛深入的研究， 意外地发现， 利用功能性磷脂马来酰亚胺化磷脂酰 乙醇胺 (MBPE) 将靶向配基环 RGD 肽与巯基化 PEG 共价结合在脂质体膜表面， 构建靶向长循 环脂质体， 具有肿瘤细胞靶向性以及体内长循环作用。这种组装方式与文献常用的在脂质 体膜表面 PEG 远端连接配体的方式相比， 能够发挥 PEG 的长循环作用， 并且更为简单易行， 具有潜在的应用价值。且该法为后接枝 PEG 法， 还可解决普通方法制备时脂质体膜内 PEG 链段占位效应使载药量降低的问题， 即有望提高载药量。
     为了进一步阐述本发明， 下面给出一系列实施例。 这些实施例完全是例证性的， 它 们仅用来对本发明进行具体描述， 不应当理解为对本发明的限制。 具体实施方式
     实施例 1
     称取氢化大豆卵磷脂 HSPC 40mg(50μmol)、 胆固醇 9.7mg(25μmol) 和马来酰亚 胺化磷脂酰乙醇胺 (MBPE)2.23mg(2.5μmol) 于茄形瓶中， 加三氯甲烷， 超声溶解， 旋转蒸 发除去有机溶剂， 加入 0.200mol/L 硫酸铵溶液 4mL 于 60℃下水化 1h， 超声分散， 用薄膜挤 出仪经 400， 200， 100 和 50nm 聚碳酸酯膜各 15 次挤压得到脂质体， 再以 0.9％ NaCl 溶液为 洗脱剂， 通过葡聚糖凝胶 G-50 置换外水相， 得到含 MBPE 的空白脂质体 ； 将所得空白脂质体 与盐酸拓扑替康溶液 (2mg/mL)2mL 混合， 于 65℃孵育 20min， 包载拓扑替康 ； 再与环 RGD 肽 溶液 (1.45mg/mL)1mL( 即 2.5μmol) 混合， 于 37℃孵育 1h， 再与 DSPE-PEG2000 溶液 (7mg/ mL)1mL( 即 2.5μmol) 于 37℃孵育 1h ； 将上述脂质体用超滤管浓缩至 4mL， 即得 PEG 和 RGD 肽修饰的盐酸拓扑替康脂质体。
     实施例 2
     称 取 大 豆 卵 磷 脂 S10040mg(50μmol)、 胆 固 醇 19.3mg(50μmol) 和 MBPE2.23mg(2.5μmol) 于茄形瓶中， 加 2mL 二氯甲烷和 8mL 乙醇溶解后， 旋转蒸发除去有机溶剂， 加 0.125mol/L 硫酸铵溶液 4mL 于 60 ℃下水化 30min， 超声分散， 用薄膜挤出仪 经 400， 200， 100 和 50nm 聚碳酸酯膜 15 次挤压， 再以 0.9 ％ NaCl 溶液为洗脱剂， 通过葡 聚糖凝胶 G-50 置换外水相， 得到含 MBPE 的空白脂质体 ； 将所得空白脂质体与环 RGD 肽 溶液 (0.58mg/mL)0.5mL( 即 0.5μmol) 混合， 于 37 ℃孵育 1h， 再与 PEG-SC 溶液 (3.5mg/ mL)1mL( 即 1.25μmol) 于 37℃孵育 1h， 再与盐酸拓扑替康溶液 (2mg/mL)2mL 混合后于 60℃ 孵育 20min， 用超滤管浓缩至 4mL， 即得 PEG 和 RGD 肽修饰的盐酸拓扑替康脂质体。
     实施例 3
     称 取 氢 化 大 豆 卵 磷 脂 HSPC 40mg(50μmol)、胆 固 醇 3.9mg(10μmol) 和 MBPE4.45mg(5μmol) 于茄形瓶中， 加 8mL 三氯甲烷和 2mL 甲醇溶解后， 旋转蒸发除去有 机溶剂， 加 0.150mol/L 硫酸铵溶液 4mL 于 60 ℃下水化 30min， 超声分散， 用薄膜挤出仪经 400， 200， 100 和 50nm 聚碳酸酯膜 15 次挤压， 再以 5％葡萄糖溶液为洗脱剂， 透析置换外水 相， 得到含 MBPE 的空白脂质体 ； 将所得空白脂质体与环 RGD 肽溶液 (0.58mg/mL)0.5mL( 即 0.5μmol) 混合， 于 37℃孵育 1h， 再与 PEG-SC 溶液 (1.75mg/mL)1mL( 即 0.63μmol) 于 37℃ 孵育 1h， 再加入盐酸拓扑替康粉末 4mg， 而后于 60℃孵育 30min， 用超滤管浓缩至 4mL， 即得 PEG 和 RGD 肽修饰的盐酸拓扑替康脂质体。 实施例 4
     称 取 DPPC 32mg(40μmol)、 DSPC 8mg(10μmol)、 胆 固 醇 2mg(5μmol) 和 MBPE8.9mg(10μmol) 于 茄 形 瓶 中， 加 三 氯 甲 烷 溶 解 后， 旋 转 蒸 发 除 去 有 机 溶 剂， 加 0.250mol/L 硫酸铵溶液 4mL 于 60℃下水化 1h， 超声分散， 用薄膜挤出仪经 400， 200， 100 和 50nm 聚碳酸酯膜 20 次挤压， 再以 0.9％ NaCl 溶液为洗脱剂， 通过葡聚糖凝胶 G-50 置换外 水相， 得到含 MBPE 的空白脂质体 ； 将所得空白脂质体与环 RGD 肽溶液 (1.45mg/mL)1mL( 即 2.5μmol) 混合， 于 37℃孵育 1h， 再与 PEG-SC 溶液 (5.6mg/mL)1mL( 即 2μmol) 于 37℃孵 育 1h， 再与盐酸拓扑替康溶液 (8mg/mL)0.5mL 混合后于 65℃孵育 30min， 用超滤管浓缩至 4mL， 即得 PEG 和 RGD 肽修饰的盐酸拓扑替康脂质体。
     实施例 5
     称 取 氢 化 大 豆 卵 磷 脂 HSPC 40mg(50μmol)、胆 固 醇 16.1mg(41μmol) 和 MBPE1.1mg(1.2μmol) 于茄形瓶中， 加 6ml 二氯甲烷和 4ml 乙醚， 超声溶解， 旋转蒸发除去有 机溶剂， 加入 pH4.0 柠檬酸缓冲溶液 4mL 于 60℃下水化 30min， 超声分散， 用薄膜挤出仪经 400， 200， 100 和 50nm 聚碳酸酯膜各 15 次挤压得到脂质体， 再用 5％葡萄糖溶液透析置换外 水相， 得到含 MBPE 的空白脂质体 ； 将所得空白脂质体与盐酸拓扑替康溶液 (15mg/mL)1mL 混 合， 于 65℃孵育 30min， 包载拓扑替康 ； 再与环 RGD 肽溶液 (0.36mg/mL)1mL( 即 0.63μmol) 混合， 于 37℃孵育 1h， 再与 DSPE-PEG2000 溶液 (8.75mg/mL)2mL( 即 6.25μmol) 于 37℃孵 育 1h， 即得 PEG 和 RGD 肽修饰的盐酸拓扑替康脂质体。
     实施例 6
     称 取 蛋 黄 卵 磷 脂 79mg(100μmol)、胆 固 醇 13mg(33.3μmol) 和 MBPE 1mg(1.1μmol) 于 茄 形 瓶 中， 加 三 氯 甲 烷， 超 声 溶 解， 旋 转 蒸 发 除 去 有 机 溶 剂， 加入 0.200mol/L 硫酸铵溶液 6mL 于 60 ℃下水化 1h， 超声分散， 用薄膜挤出仪经 400， 200， 100 和 50nm 聚碳酸酯膜各 15 次挤压得到脂质体， 再以 0.9 ％ NaCl 溶液为洗脱剂， 通过葡聚 糖凝胶 G-50 置换外水相， 得到含 MBPE 的空白脂质体 ； 将所得空白脂质体与盐酸拓扑替康
     溶液 (3mg/mL)4mL 混合， 于 65 ℃孵育 20min， 包载拓扑替康 ； 再与环 RGD 肽溶液 (0.1mg/ mL)1mL( 即 0.16μmol) 混 合，于 37 ℃ 孵 育 10min，再 与 DSPE-PEG2000 溶 液 (2.8mg/ mL)0.5mL( 即 0.5μmol) 于 37℃孵育 30min， 即得。
     实施例 7
     称 取 蛋 黄 卵 磷 脂 39mg(50μmol)、胆 固 醇 6.5mg(16.7μmol) 和 MBPE 4.45mg(5μmol) 于 茄 形 瓶 中， 加 三 氯 甲 烷， 超 声 溶 解， 旋 转 蒸 发 除 去 有 机 溶 剂， 加入 0.150mol/L 硫酸铵溶液 4mL 于 60℃下水化 1h， 超声分散， 用薄膜挤出仪经 400， 200， 100 和 50nm 聚碳酸酯膜各 15 次挤压得到脂质体， 再以 5％葡萄糖凝溶液透析置换外水相， 得到含 MBPE 的空白脂质体 ； 将所得空白脂质体与盐酸拓扑替康溶液 (2mg/mL)2mL 混合， 于 60℃孵 育 20min， 包载拓扑替康 ； 再与环 RGD 肽溶液 (2.89mg/mL)1mL( 即 5μmol) 混合， 于 37℃孵 育 1h， 再与 DSPE-PEG2000 溶液 (14mg/mL)2mL( 即 10μmol) 于 40℃孵育 1h， 即得。
     实施例 8
     称 取 大 豆 卵 磷 脂 S10039mg(50μmol)、 胆 固 醇 4.8mg(12.5μmol) 和 MBPE4.45mg(5μmol) 于茄形瓶中， 加三氯甲烷， 超声溶解， 旋转蒸发除去有机溶剂， 加入 0.125mol/L 硫酸铵溶液 4mL 于 60℃下水化 1h， 超声分散， 用薄膜挤出仪经 400， 200， 100 和 50nm 聚碳酸酯膜各 15 次挤压得到脂质体， 再以 5％葡萄糖凝溶液透析置换外水相， 得到含 MBPE 的空白脂质体 ； 将所得空白脂质体与盐酸拓扑替康溶液 (2mg/mL)2mL 混合， 于 60℃孵 育 10min ； 再与环 RGD 肽溶液 (0.36mg/mL)1mL( 即 0.63μmol) 混合， 于 37℃孵育 30min， 再 与 DSPE-PEG2000 溶液 (14mg/mL)1mL( 即 5μmol) 于 40℃孵育 1h， 用超滤管浓缩至 4mL， 即 得 PEG 和 RGD 肽修饰的盐酸拓扑替康脂质体。
     对比例 1
     称取氢化大豆磷脂 HSPC 44.2mg(56μmol)、 胆固醇 14.7mg(38μmol)、 PEG 化磷脂 (DSPE-PEG2000)14mg(5μmol) 于茄形瓶中， 加 8mL 三氯甲烷， 超声溶解， 旋转蒸发除去有机 溶剂， 加入 0.200mol/L 硫酸铵溶液 2mL 于 60 ℃下水化 30min， 超声分散， 用薄膜挤出仪经 400， 200， 100 和 50nm 聚碳酸酯膜各 15 次挤压得到脂质体， 再以 pH7.4 的 PBS 为洗脱剂， 通 过葡聚糖凝胶 G-50 置换外水相， 得到空白脂质体 ； 将所得空白脂质体与盐酸拓扑替康水溶 液 (4mg/mL)1mL 混合， 于 60℃孵育 1h， 将上述脂质体用超滤管浓缩至 2mL， 即得盐酸拓扑替 康 PEG 修饰脂质体。
     对比例 2
     称取氢化大豆磷脂 HSPC 44.2mg(56μmol)、 胆固醇 14.7mg(38μmol) 于茄形瓶 中， 加 6mL 三氯甲烷， 超声溶解， 旋转蒸发除去有机溶剂， 加入 0.200mol/L 硫酸铵溶液 2mL 于 60℃下水化 30min， 超声分散， 用薄膜挤出仪经 400， 200， 100 和 50nm 聚碳酸酯膜各 15 次 挤压得到脂质体， 再以 pH7.4 的 PBS 为洗脱剂， 通过葡聚糖凝胶 G-50 置换外水相， 得到空白 脂质体 ； 将所得空白脂质体与盐酸拓扑替康水溶液 (4mg/mL)1mL 混合， 于 60℃孵育 1h， 将上 述脂质体用超滤管浓缩至 2mL， 即得盐酸拓扑替康普通脂质体。
     实施例 9
     小鼠腹腔巨噬细胞 (MPM) 体外摄取实验
     MPM 悬液的制备 ： 取 (20±2)g 昆明小鼠若干， 断颈处死， 在无菌操作下， 腹腔注射 RPMI-1640 培养液 5ml， 按压腹腔 2min， 吸出腹腔液， 600rpm 离心 5min， 弃上清液， 用含 10％胎牛血清的 RPMI-1640 培养液漂洗稀释至每毫升 1×105 备用。取上述 MPM 悬液 1.0ml 和制 剂样品 0.5ml， 制剂样品分别为实施例 1 制备的 PEG 和 RGD 肽修饰的盐酸拓扑替康脂质体、 对比例 1 制备的盐酸拓扑替康 PEG 修饰脂质体以及对比例 2 制备的盐酸拓扑替康普通脂质 体。而后， 于 (37±0.5)℃水浴中培养 30min， 再在冰浴中终止吞噬， 1000rpm 离心 5min， 弃 去上清液。用生理盐水洗涤， 离心， 弃去上清， 得待测细胞样品。测定细胞样品中的盐酸拓 扑替康的浓度， 计算得 MPM 摄取的药物量， 再与加入的药物总量相比， 计算得出盐酸拓扑替 康 MPM 摄取率。
     结果表明， 实施例 1 制备的 PEG 和 RGD 肽修饰的盐酸拓扑替康脂质体与对比 例 1 制 备 的 盐 酸 拓 扑 替 康 PEG 修 饰 脂 质 体 的 MPM 摄 取 率 分 别 为 20.41 ％ ±5.87 ％ 和 18.62±4.52％， 两者无显著差异 (P ＞ 0.05)， 且均比对比例 2 制备的盐酸拓扑替康普通脂 质体 (MPM 摄取率为 34.9±4.59％ ) 显著减少 (P ＜ 0.01)。说明 PEG 和 RGD 肽修饰的盐酸 拓扑替康脂质体可减少巨噬细胞对脂质体的摄取， 有长循环特性。
     实施例 10
     实施例 2 ～ 8 制备的聚乙二醇和环 RGD 肽修饰的盐酸拓扑替康脂质体的小鼠腹腔 巨噬细胞 (MPM) 体外摄取实验 实验方法同实施例 9。计算 MPM 摄取率， 并与对比例 1 制备的盐酸拓扑替康 PEG 修 饰脂质体以及对比例 2 制备的盐酸拓扑替康普通脂质体组相比， 结果显示， 实施例 2 ～ 8 制 备的 PEG 和 RGD 肽修饰的盐酸拓扑替康脂质体的 MPM 摄取率为 16.57 ～ 25.35％， 均与 PEG 修饰脂质体组无显著差异 (P ＞ 0.05)， 均比普通脂质体组显著减少 (P ＜ 0.05)， 说明其可 减少巨噬细胞对脂质体的摄取， 有长循环特性。
     以上所述仅为本发明的较佳实施例而已， 并非用以限定本发明的实质技术内容范 围， 本发明的实质技术内容是广义地定义于申请的权利要求范围中， 任何他人完成的技术 实体或方法， 若是与申请的权利要求范围所定义的完全相同， 也或是一种等效的变更， 均将 被视为涵盖于该权利要求范围之中。
     9