一种香附四物汤透皮贴剂及其制备方法.pdf

《一种香附四物汤透皮贴剂及其制备方法.pdf》由会员分享，可在线阅读，更多相关《一种香附四物汤透皮贴剂及其制备方法.pdf（9页完整版）》请在专利查询网上搜索。

1、(10)授权公告号 CN 102940754 B (45)授权公告日 2014.04.09 CN 102940754 B (21)申请号 201210529345.7 (22)申请日 2012.12.11 A61K 36/8905(2006.01) A61K 9/70(2006.01) A61K 47/36(2006.01) A61K 47/38(2006.01) A61P 15/00(2006.01) (73)专利权人 南京中医药大学 地址 210029 江苏省南京市汉中路 282 号 (72)发明人 刘培 段金廒 钱大玮 宿树兰 唐于平 (74)专利代理机构 南京经纬专利商标代理有限 公司。

2、 32200 代理人 杨海军 (54) 发明名称 一种香附四物汤透皮贴剂及其制备方法 (57) 摘要 本发明公开了一种香附四物汤透皮贴剂及其 制备方法， 该贴剂包括发热袋、 固定在发热袋上的 背衬层、 固定在背衬层上的含药基质层和覆盖在 含药基质层上的防粘层， 所述的含药基质层包括 3070 份水凝胶基质、 1050 份香附四物汤提取部 位和 1040 份透皮促进剂。本发明提供的透皮贴 剂， 各组分配比科学合理， 具有较大的载药量， 制 备过程中无需添加有机溶剂， 无皮肤刺激性和致 敏性。并且实验结果表明， 本发明提供的透皮贴 剂， 具有很好的治疗原发性痛经作用， 生物利用度 高， 并且透皮贴。

3、剂可以持续、 恒速地释放， 有利于 维持平稳的血药浓度， 药效时间长， 并且贴剂的制 备工艺可操作性强， 可实现工业化生产。 (51)Int.Cl. 审查员 尹瑶菲 权利要求书 1 页 说明书 7 页 (19)中华人民共和国国家知识产权局 (12)发明专利 权利要求书1页 说明书7页 (10)授权公告号 CN 102940754 B CN 102940754 B 1/1 页 2 1. 一种香附四物汤透皮贴剂的制备方法， 其特征在于， 包括以下步骤 ： (1) 取由 16 20 份当归、 8 12 份川芍、 22 26 份熟地、 8 12 份白芍、 8 12 份香 附、 5 9 份木香、 8 1。

4、2 份延胡索组成的中药复方， 加入总药材 6 10 倍量的水煎煮 1 3 次， 并用挥发油提取器收集挥发油部位， 合并水煎液在 20 70减压浓缩得浓缩液 ； (2) 取步骤 (1) 得到的浓缩液加入乙醇， 使乙醇的浓度达到 50 85%， 静置沉淀， 分离 上清液， 浓缩， 得浓缩物 ； (3) 取步骤 (2) 得到的浓缩物上大孔吸附树脂柱， 用浓度 10% 至 60% 的乙醇梯度洗脱， 合并洗脱液， 浓缩， 干燥得乙醇洗脱部位 ； (4) 水凝胶基质的制备 ： 取黏合剂和骨架材料加入水， 放置 24 小时充分溶胀， 在水浴上 混合并加入保湿剂， 充分搅拌混匀， 得透明黏稠的水凝胶基质 ； 。

5、(5)取步骤(1)香附四物汤挥发油部位和步骤(3)乙醇洗脱部位， 分散于步骤(4)制备 得到的水凝胶基质中， 加入透皮促进剂， 混合均匀， 超声除去气泡， 趁热涂布于背衬层上， 干 燥后覆上防粘层， 并将发热袋固定于背衬层另一面， 即得。 2. 根据权利要求 1 所述的香附四物汤透皮贴剂的制备方法， 其特征在于， 所述的黏合 剂为海藻酸钠或羧甲基纤维素及其钠盐 ； 所述的骨架材料为聚乙烯醇或聚乙烯吡咯烷酮 K30 ； 所述的保湿剂为甘油或聚乙二醇 400。 权 利 要 求 书 CN 102940754 B 2 1/7 页 3 一种香附四物汤透皮贴剂及其制备方法 技术领域 ： 0001 本发明涉。

6、及一种贴剂， 具体涉及一种能预防并治疗痛经的香附四物汤透皮贴剂及 其制备方法。 背景技术 0002 痛经指女性在经期及其前后出现的下腹痉挛性疼痛， 严重者可伴随头疼、 恶心、 呕 吐、 腹胀、 腰酸、 腿痛等症状。目前临床将其分为原发性痛经和继发性痛经两种。流行病学 研究表明痛经是目前妇科最常见的疾病， 发病率在 20%90% 之间， 为影响妇女正常工作和 生活质量的常见原因。 0003 中医认为， 任何原因引起冲任气血不畅， 胞宫血脉瘀阻， 致使经隧不通， 或血不归 经， 或壅聚成症， 均可发生经、 孕、 产、 乳诸杂证， 一般认为情志所伤， 肝郁气滞， 肝肾亏损， 精 血不足， 脾肾亏虚，。

7、 冲任不盛， 是导致痛经的常见病因。中药复方在治疗痛经症方面有着明 显的优势， 既能止痛治标， 又可以对内分泌失调诸因素产生调节作用， 且较之使用性激素、 镇静及镇痛剂等， 更能全面消除病机和症状， 且副作用也较小。 0004 香附四物汤出自清代梁廉夫 不知医必要 卷四， 由四物汤加香附、 木香、 延胡索 组成， 具有养血调血行气止痛之功效， 主治气滞血瘀所致痛经、 月经不调等症。是行气化瘀 代表方之一。香附辛散温通， 入肝， 能通行气血， 善调理肝气之郁， 又能调畅经血之滞， 故有 调肝理气， 调经止痛之作用， 常与当归合用 ； 木香辛香行散， 苦降温通， 能升可降， 通理三焦， 有行气止痛。

8、， 健脾消食之功效， 常与香附、 延胡索等合用， 以疏肝活血调经止痛 ； 延胡索能 活血， 又能行血中之气， 且能止痛， 故为活血行气止痛之要药， 常配以当归等， 以通络行滞祛 痛。 0005 中药经皮给药是指采用适宜的方法和基质将中药制成专供外用的剂型施于皮肤 ( 患处或相应经穴 )， 通过皮肤吸收进入体循环或作用于皮肤局部产生药效， 或通过经穴效 应发挥药效， 达到治疗目的的给药方法。 但目前用于治疗痛经的中药大多以口服为主， 存在 首关效应和胃肠道的破坏， 生物利用度低等问题。因此很有必要开发一种使用方便、 药效 好、 生物利用度高的香附四物汤透皮贴剂。 发明内容 0006 发明目的 ：。

9、 本发明的目的是针对现有技术的不足， 提供一种使用方便、 药效成分明 确、 药效好、 生物利用度高的香附四物汤透皮贴剂， 本发明另一个目的是提供该透皮贴剂的 制备方法。 0007 技术方案 ： 为了实现以上目的， 本发明采取的技术方案为 ： 0008 一种香附四物汤透皮贴剂， 其它包括发热袋、 固定在发热袋上的背衬层、 固定在背 衬层上的含药基质层和覆盖在含药基质层上的防粘层， 所述的含药基质层包括 3070 份水 凝胶基质、 1050 份香附四物汤提取部位和 1040 份透皮促进剂。 0009 作为优选方案， 以上所述的香附四物汤透皮贴剂， 所述的含药基质层包括 3550 说 明 书 CN 。

10、102940754 B 3 2/7 页 4 份水凝胶基质、 1030 份香附四物汤提取部位和 1530 份透皮促进剂。 0010 作为优选方案， 以上所述的香附四物汤透皮贴剂， 所述的水凝胶基质包括 520 份 黏合剂、 2030 份骨架材料和 1020 份保湿剂。 0011 本发明采用 L9(34) 正交实验对黏合剂、 骨架材料和保湿剂的配比进行了筛选， 并 以水凝胶基质的经皮渗透性、 初黏力和感官指标为考察指标， 确定了上述最佳基质配比， 可 以很好的将有效成分 （挥发油部位和乙醇洗脱部位） 负载。本发明采用水凝胶基质， 制备 过程中无需添加有机试剂， 无皮肤刺激性和致敏性， 对于一些水溶。

11、性药物， 可载药量大大增 加， 更有利于药物透皮， 生物利用度提高， 疗效更好。 0012 作为优选方案， 以上所述的香附四物汤透皮贴剂， 所述的黏合剂可选用天然、 半合 成或合成的高分子材料， 如海藻酸钠、 明胶、 羧甲基纤维素及其钠盐等。本发明根据香附四 物汤有效成分的化学性质， 对比实验表明 ： 选用羧甲基纤维素钠具有稳定性好， 在水中溶解 后能形成粘稠状稳定胶体溶液， 与其它的水溶性胶或树脂具有良好的配伍性等优点 ； 选用 海藻酸钠具有粘度低， 粒度细， 附壁性好， 性能稳定等优点。 0013 作为优选方案， 以上所述的香附四物汤透皮贴剂， 所述的骨架材料可选用聚乙烯 醇、 聚乙烯吡咯。

12、烷酮、 聚丙烯酸盐等。本发明以香附四物汤有效成分的化学性质为基础， 对比实验表明， 聚乙烯醇易成膜， 其膜的机械性能优良， 且与亲水性的纤维素有很好的粘结 力 ； 另外聚乙烯吡咯烷酮 K30 也具有成膜性、 粘结性和吸湿性好等优点， 对有效成分具有优 异的溶解性能及生理相容性。 0014 作为优选方案， 以上所述的香附四物汤透皮贴剂， 所述的保湿剂可选用多元醇， 如 甘油、 山梨醇、 聚乙二醇等。对比实验结果表明， 当选用甘油和聚乙二醇 400 时具有与香附 四物汤有效成分更好的相容性， 并具有更好的吸湿性、 保润性和软化性。 0015 作为优选方案， 以上所述的香附四物汤透皮贴剂， 所述的香。

13、附四物汤提取部位包 括香附四物汤挥发油 510 份和乙醇洗脱部位 1020 份。所述香附四物汤提取部位的挥发 油部位和乙醇洗脱部位通过以下方法制备 ： 取由1620份当归、 812份川芍、 2226份熟地、 812 份白芍、 812 份香附、 59 份木香、 812 份延胡索组成的中药复方， 加入总药材 610 倍 量的水煎煮 13 次， 并用挥发油提取器收集挥发油部位， 合并水煎液在 2070减压浓缩得 浓缩液， 再加入乙醇， 使乙醇的浓度达到 5085%， 沉淀， 分离上清液， 浓缩， 得浓缩物上大孔 吸附树脂柱， 用浓度 10% 至 60% 的乙醇梯度洗脱， 洗脱液回收溶剂， 得乙醇洗脱。

14、部位。 0016 作为优选方案， 以上所述的香附四物汤透皮贴剂， 本发明以体外透皮时的经皮吸 收速率、 单位面积透过量和累积透过百分率为指标， 根据大量对比实验筛选出对有效成分 具有最佳促透效果的促透剂 ： 氮酮、 丙二醇和薄荷醇。 0017 本发明提供的香附四物汤透皮贴剂的制备方法， 其包括以下步骤 ： 0018 (1)取由1620份当归、 812份川芍、 2226份熟地、 812份白芍、 812份香附、 59 份木香、 812份延胡索组成的中药复方， 加入总药材610倍量的水煎煮13次， 并用挥发油 提取器收集挥发油部位， 合并水煎液在 2070减压浓缩得浓缩液 ； 0019 (2) 取步。

15、骤 (1) 得到的浓缩液加入乙醇， 使乙醇的浓度达到 5085%， 静置沉淀， 分 离上清液， 浓缩， 得浓缩物 ； 0020 (3)取步骤(2)得到的浓缩物上大孔吸附树脂柱， 用浓度10%至60%的乙醇梯度洗 脱， 合并洗脱液， 浓缩， 干燥得乙醇洗脱部位 ； 说 明 书 CN 102940754 B 4 3/7 页 5 0021 (4) 水凝胶基质的制备 ： 取黏合剂和骨架材料加入水， 放置 24 小时充分溶胀， 在水 浴上混合并加入保湿剂， 充分搅拌混匀， 得透明黏稠的水凝胶基质 ； 0022 (5) 取步骤 (1) 香附四物汤挥发油部位和步骤 (3) 乙醇洗脱部位， 分散于步骤 (4)。

16、 制备得到的水凝胶基质中， 加入透皮促进剂， 混合均匀， 超声除去气泡， 趁热涂布于背衬层 上， 干燥后覆上防粘层， 并将发热袋固定于背衬层另一面， 即得。 0023 以上所述的香附四物汤透皮贴剂的制备方法， 所述的为黏合剂海藻酸钠或羧甲基 纤维素及其钠盐 ； 所述的骨架材料为聚乙烯醇或聚乙烯吡咯烷酮 K30 ； 所述的保湿剂为甘 油、 山梨醇或聚乙二醇 400。 0024 有益效果 ： 本发明提供的香附四物汤透皮贴剂和现有技术相比具有以下优点 ： 0025 1、 本发明提供的香附四物汤透皮贴剂， 通过大量实验筛选水凝胶基质、 香附四物 汤提取部位和透皮促进剂的组成和配备， 实验结果表明， 所。

17、采用的水凝胶基质具有较大的 载药量， 能有效的将挥发油部位和乙醇洗脱部位负载， 并且制备过程中无需添加有机试剂， 无皮肤刺激性和致敏性， 不容易污染衣物， 对于水溶性成分也有很好的促渗性 ； 选用的羧甲 基纤维素钠、 海藻酸钠、 聚乙烯醇、 聚乙烯吡咯烷酮 K30、 甘油和聚乙二醇 400 经过正交实验 筛选， 配比合理， 工艺明确， 形成的基质外观、 黏附性和经皮渗透性均符合规定 ； 本发明还将 发热袋引入经皮给药系统中， 水凝胶基质里的药物在较高的温度下渗透速率更快， 可以加 快药物的吸收， 迅速起效， 生物利用度高， 同时， 发热袋产生的热量还可以使毛细血管扩张， 促进血液循环， 对痛经。

18、症状也有很好的缓解作用。 0026 2、 本发明提供的透皮贴剂， 含药基质层的香附四物汤提取部位 ( 包括挥发油部位 和乙醇洗脱部位 ) 以中医药理论和痛经的发病机制为基础， 选取合理的配伍组方进行提 取， 通过现代分离纯化手段进行去粗存精所得， 并对其进行了成分分析及药效学研究， 所得 的中药复方提取部位活性成分明确、 具有很好的活血化瘀、 止痛等作用， 且在较低浓度下， 就有显著的生理活性， 可以获得较好的疗效， 可解决现有技术中药透皮贴剂载药量过大， 中 药浸膏与基质互相作用导致黏性下降等问题。 具体实施方式 0027 下面结合具体实施例， 进一步阐明本发明， 应理解这些实施例仅用于说明。

19、本发明 而不用于限制本发明的范围， 在阅读了本发明之后， 本领域技术人员对本发明的各种等价 形式的修改均落于本申请所附权利要求所限定的范围。 0028 实施例 1 0029 一种用于治疗痛经的香附四物汤透皮贴剂， 包括发热袋、 背衬层、 含药基质层和防 粘层， 其制备方法为 ： 0030 (1)香附四物汤提取部位的制备 ： 取当归450克， 川芎225克， 白芍225克， 熟地600 克， 木香 150 克， 香附 225 克， 延胡索 225 克， 加 10 倍量水浸泡 12 小时， 煎煮 2 小时后倒出 水煎液， 继续加 8 倍量水煎煮 2 小时， 煎煮时用挥发油提取器收集挥发油部位， 合。

20、并两次水 煎液， 在 50减压浓缩得浓度为 1 克生药 / 毫升的浓缩液 2100 毫升， 之后加入浓度为 95% 的乙醇， 使浓缩液中乙醇的浓度达到 80%， 静置 24 小时， 取上清液浓缩至无醇味， 浓缩液经 大孔吸附树脂以浓度 10% 至 60% 的乙醇梯度洗脱， 洗脱液浓缩干燥， 即得乙醇洗脱部位。得 到挥发油部位 3.2 毫升， 乙醇洗脱部位 10.8 克。 说 明 书 CN 102940754 B 5 4/7 页 6 0031 (2) 含药基质层的制备 ： 取 10 份羧甲基纤维素钠， 15 份聚乙烯吡咯烷酮 K30， 混合 后加入 150 份 60水， 之后静置 24 小时充分。

21、溶胀， 得凝胶 A ； 取聚乙烯醇 15 份， 加入 140 份 水， 在 95水浴上溶解， 搅拌均匀后超声除气， 静置 24 小时充分溶胀后， 得凝胶 B。在 60 水浴上混合凝胶A和凝胶B， 搅拌至凝胶混合均匀， 加入15份甘油， 充分搅拌， 之后加入步骤 (1) 中所得挥发油部位和乙醇洗脱部位 ( 乙醇洗脱部位用 4 份聚乙二醇 400 分散并浸润 )， 搅拌至充分混匀， 最后加入 20 份氮酮， 充分搅拌后即得含药基质层。 0032 (3) 步骤 (2) 所得的含药基质层趁热涂布于背衬层上， 干燥后覆上防粘层， 切割成 适宜的大小， 并将发热袋固定于背衬层另一面， 包装即得。 0033。

22、 实施例 2 0034 一种用于治疗痛经的香附四物汤透皮贴剂， 包括发热袋、 背衬层、 含药基质层和防 粘层， 其制备方法为 ： 0035 (1) 香附四物汤提取部位的制备 ： 取当归 90 克， 川芎 45 克， 白芍 45 克， 熟地 120 克， 木香 30 克， 香附 45 克， 延胡索 45 克， 加 10 倍量水浸泡 12 小时， 煎煮 2 小时后倒出水煎 液， 继续加8倍量水煎煮2小时， 煎煮时用挥发油提取器收集挥发油部位， 合并两次水煎液， 在50减压浓缩得浓度为1克生药/毫升的浓缩液420毫升， 之后加入浓度为95%的乙醇， 使浓缩液中乙醇的浓度达到 80%， 静置 24 小。

23、时， 取上清液浓缩至无醇味， 浓缩液经大孔吸附 树脂以浓度 10% 至 60% 的乙醇梯度洗脱， 洗脱液浓缩干燥， 即得乙醇洗脱部位。以此方法得 到挥发油部位 0.6 毫升， 乙醇洗脱部位 2.3 克。 0036 (2)含药基质层的制备 ： 取海藻酸钠1份， 聚乙烯吡咯烷酮K302份， 混合后加入15 份水， 静置 24 小时， 充分溶胀， 得凝胶 A ； 取聚乙烯醇 2 份， 加入 10 份水， 静置 24 小时， 充分 溶胀后在 95水浴上溶解， 得凝胶 B。在 70水浴上混合凝胶 A 和凝胶 B， 搅拌至凝胶混合 均匀， 加入 2 份聚乙二醇 400， 充分搅拌， 之后加入步骤 (1) 。

24、中所得挥发油部位和乙醇洗脱 部位 ( 乙醇洗脱部位用 1 份聚乙二醇 400 分散并浸润 )， 搅拌至充分混匀， 最后加入 1 份氮 酮、 3 份丙二醇， 充分搅拌混匀后即得含药基质层。 0037 (3) 取步骤 (2) 所得的含药基质层趁热涂布于背衬层上， 干燥后覆上防粘层， 切割 成适宜的大小， 并将发热袋固定于背衬层另一面， 包装即得。 0038 实施例 3 0039 一种用于治疗痛经的香附四物汤透皮贴剂， 包括发热袋、 背衬层、 含药基质层和防 粘层， 其制备方法为 ： 0040 (1) 香附四物汤提取部位的制备 ： 取当归 900 克， 川芎 450 克， 白芍 450 克， 熟地 。

25、1200 克， 木香 300 克， 香附 450 克， 延胡索 450 克， 加 10 倍量水浸泡 12 小时， 煎煮 2 小时后 倒出水煎液， 继续加 8 倍量水煎煮 2 小时， 煎煮时用挥发油提取器收集挥发油部位， 合并两 次水煎液， 在 50减压浓缩得浓度为 1 克生药 / 毫升的浓缩液 4200 毫升， 之后加入浓度为 95%的乙醇， 使浓缩液中乙醇的浓度达到80%， 静置24小时， 取上清液浓缩至无醇味， 浓缩液 经大孔吸附树脂以浓度 10% 至 60% 的乙醇梯度洗脱， 洗脱液浓缩干燥， 即得乙醇洗脱部位。 以此方法得到挥发油部位 7.8 毫升， 乙醇洗脱部位 26.9 克。 00。

26、41 (2) 含药基质层的制备 ： 取海藻酸钠 20 份， 聚乙烯吡咯烷酮 K3030 份， 混合后加入 300 份水， 静置 24 小时， 充分溶胀， 得凝胶 A ； 取聚乙烯醇 40 份， 加入 200 份水， 静置 24 小 时， 充分溶胀后在 95水浴上溶解， 得凝胶 B。在 70水浴上混合凝胶 A 和凝胶 B， 搅拌至 说 明 书 CN 102940754 B 6 5/7 页 7 凝胶混合均匀， 加入40份山梨醇， 充分搅拌， 之后加入步骤(1)中所得中药复方挥发油部位 和中药复方乙醇洗脱部位 ( 乙醇洗脱部位用 10 份聚乙二醇 400 分散并浸润 )， 搅拌至充分 混匀， 最后加。

27、入 50 份氮酮， 10 份薄荷醇， 充分搅拌混匀后即得含药基质层。 0042 (3) 取步骤 (2) 所得的含药基质层趁热涂布于背衬层上， 干燥后覆上防粘层， 切割 成适宜的大小， 并将发热袋固定于背衬层另一面， 包装即得。 0043 实施例 4 小鼠热板致痛实验 0044 1、 实验方法 0045 雌性ICR小鼠， 20只， 体重2226克， 随机分为空白对照组、 本发明实施例1制备得 到的透皮贴剂组， 每组 10 只。以热板刺激法评价香附四物汤透皮贴剂的镇痛效应。实验前 用脱毛剂在小鼠腹部脱毛。 24小时后在小鼠腹部分别贴上空白透皮贴剂和香附四物汤透皮 贴剂， 并用胶带纸进行固定， 防止。

28、脱落。每天给药 1 次， 连续 2 天， 于末次给药后 30 分钟， 1 小时， 2 小时， 4 小时， 10 小时测定痛阈时间， 比较组间差异。 0046 2、 实验结果 0047 透皮贴剂组在给药后对热板刺激所致小鼠痛阈时间较给药前痛阈时间有延长作 用， 且 10 小时后依然有明显的镇痛作用， 与空白对照组相比， 能显著提高小鼠痛阈时间。具 体实验结果如表 1。 0048 表 1 香附四物汤透皮贴剂对小鼠热板实验的镇痛作用 (n=10) 0049 0050 与空白对照组比较 *P 0.05， *P 0.01 0051 由以上表 1 的实验结果表明， 本发明提供的香附四物汤透皮贴剂具有很好的。

29、镇痛 作用， 可以提高痛阈值。 0052 实施例 5 香附四物汤透皮贴剂治疗原发性痛经大鼠的实验研究 0053 1、 实验方法 0054 雌性 SD 大鼠， 24 只， 体重 200240 克， 随机分为空白对照组、 模型组、 口服阳性药 （布洛芬） 组、 本发明实施例 2 透皮贴剂组， 每组 6 只， 适应性饲养后除空白对照组外其余 各组皮下注射苯甲酸雌二醇， 连续 10 天， 每天一次， 第 1 天及第 10 天 0.5mg/ 只， 第 2-9 天 0.2mg/ 只， 第 5 天开始， 大鼠腹部脱毛， 分别给予空白对照组、 模型组、 阳性药组、 透皮贴剂 组空白基质、 空白基质、 空白基质。

30、、 本发明实施例 2 透皮贴剂， 每天一次， 连续 7 天， 第 7 天开 始阳性药组灌胃阳性药， 连续 5 天， 末次给药后 4 小时， 腹腔注射缩宫素 2U/ 只， 记录 30 分 钟内各组老鼠的扭体反应。30 分钟后各组老鼠采取血浆样品， 进行试剂盒检测 ： 包括一氧 化氮 (NO)、 雌二醇 (E2)、 孕酮 (P)、 前列腺素 E2(PGE2)。 0055 2、 实验结果 0056 实验结果表明， 阳性药组与透皮贴剂组 30 分钟内的扭体次数与模型组相比， 显著 减小， 透皮贴剂镇痛效果比较明显。具体结果见表 2。 说 明 书 CN 102940754 B 7 6/7 页 8 005。

31、7 表 2 香附四物汤透皮贴剂对原发性痛经大鼠扭体的抑制作用 （n=6） 0058 0059 与模型组相比， *P 0.05 0060 E2、 P、 PGE2均采用酶联免疫测定法检测。NO 采用硝酸还原酶法检测。按照试剂盒 说明书测定各个指标， 具体结果见表 3。 0061 表 3 香附四物汤透皮贴剂对原发性痛经大鼠内分泌免疫指标的影响 0062 0063 与空白对照组相比， #P 0.05，#P 0.01 ； 与模型组相比，*P 0.05，*P 0.01 0064 由表 3 的实验结果表明， 模型组各项指标与空白对照组相比差异具有统计学意义 (P 0.05 或 P 0.01)， 且造模后大鼠。

32、出现了明显的扭体现象， 表明原发性痛经模型复制 成功 ； 本发明透皮贴剂组大鼠扭体次数明显减少 (P 0.05)， 表现出了明显的镇痛作用， 同 时， 与模型组相比， 透皮贴剂组升高了大鼠血浆中 NO 和 P 的含量， 降低了 E2(P 0.05 或 P 0.01) 和 PGE2含量， 部分指标甚至优于阳性药布洛芬， 表明贴剂是通过抑制 E2含量并同 时升高 NO 和 P 含量来预防与治疗痛经的。研究表明， 原发性痛经与体内前列腺素异常升 高、 雌激素与孕激素代谢失衡、 一氧化氮含量降低等原因有关， 而香附四物汤透皮贴剂对多 个靶点均有调节作用， 显示出了比较优越的治疗作用， 因此本发明提供的。

33、香附四物汤透皮 贴剂有望进一步开发成为新的痛经治疗制剂。 0065 实施例 6 体外透皮实验 0066 1、 雄性SD大鼠3只， 体重20020克， 麻醉后用刀片剔除腹部毛发， 24小时后再次 麻醉取其腹部皮肤， 仔细去除皮下组织、 血管和脂肪， 用生理盐水反复冲洗至无白色浑浊， 立即使用。 0067 2、 采用垂直式 Franz 扩散池进行体外透皮实验， 透皮面积 2.92 平方厘米， 扩散池 容积 7 毫升， 接收液为 20% 乙醇水溶液， 水浴温度 37 摄氏度， 搅拌速度 200 转 / 分钟， 将本 发明实施例 3 制备得到的透皮贴剂贴于大鼠离体皮肤上并固定在扩散池上， 加 7.7 。

34、毫升接 收液， 于 1、 3、 4、 6、 8、 10、 12、 24 小时取样 250 微升， 并补充等量等温接收液。样品用 LC-MS/ MS 测定浓度， 条件如下 ： 0068 ACQUITYTM UPLC 超 高 效 液 相 色 谱 系 统， XevoTM TQ 质 谱 系 统，色 谱 柱 为 说 明 书 CN 102940754 B 8 7/7 页 9 ACQUITYTMUPLC BEH C18柱， 流动相 A 为 0.1% 甲酸水溶液， B 为乙腈。梯度洗脱条件为 ： 05min， 10%B30%B， 57min， 30%B100%B， 78min， 100%B， 89min， 1。

35、00%B10%B， 离 子 源 ： ESI 源 ； 扫描方式 ： 多反应监测 (MRM) 方式， 选择监测的离子反应分别为 (+)m/z195 m/ z144( 阿魏酸 )， (+)m/z354 m/z88( 普鲁托品 )， (+)m/z356 m/z92( 延胡索乙素 )， (+) m/z342m/z178(四氢非洲防己碱)， (-)m/z525m/z449(芍药苷)， (+)m/z481m/z197 （芍药内酯苷） 。计算单位面积累积渗透量 ： 0069 0070 Q ： 单位面积累积渗透量 ； Cn、 Ct： 第 n 个和第 t 个取样点测得的药物浓度 ； v ： 扩散 池体积 (7.7。

36、 毫升 ) ； v0： 每次取样体积 (0.25 毫升 ) ； A ： 扩散面积 (2.92 平方厘米 )。 0071 以单位面积累积渗透量 Q 与时间 t 进行线性拟合， 求出释放方程。具体实验结果 见表 4、 表 5。 0072 表 4 透皮贴剂各成分累积渗透量 (g/cm2) 0073 0074 表 5 透皮贴剂各成分渗透曲线回归方程 0075 0076 由以上表 4 和表 5 的实验结果表明， 本发明提供的香附四物汤透皮贴剂中各成分 的释放过程符合零级释放方程， 拟合结果良好， 贴剂中各成分可以持续、 恒速的释放， 有利 于维持平稳的血药浓度， 维持较长的作用时间， 减少给药次数， 取得了很好的技术效果。 0077 以上实施方式只为说明本发明的技术构思及特点， 其目的在于让熟悉此项技术的 人了解本发明内容并加以实施， 并不能以此限制本发明的保护范围， 凡根据本发明精神实 质所做的等效变化或修饰， 都应涵盖在本发明的保护范围内。 说 明 书 CN 102940754 B 9 。