一种单唾液酸四己糖神经节苷脂钠注射液的制备方法.pdf

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1、(10)授权公告号 CN 102988284 B (45)授权公告日 2014.04.02 CN 102988284 B (21)申请号 201210538702.6 (22)申请日 2012.12.13 A61K 9/08(2006.01) A61K 31/7032(2006.01) A61K 47/02(2006.01) G01N 30/02(2006.01) A61P 25/00(2006.01) A61P 25/16(2006.01) (73)专利权人 哈药集团技术中心 地址 150025 黑龙江省哈尔滨市利民开发区 同盛路 98 号 (72)发明人 袁淑杰 王丽娜 李金花 户巧芬 戚。

2、亮 李超 刘恒 李郑武 高晶 宋紫玉 (74)专利代理机构 北京华科联合专利事务所 ( 普通合伙 ) 11130 代理人 王为 CN 1517094 A,2004.08.04, 权利要求 1 17. CN 20120307 A,2012.03.07, 权利要求 1 9. CN 102641281 A,2012.08.22,权利要求1 9. (54) 发明名称 一种单唾液酸四己糖神经节苷脂钠注射液的 制备方法 (57) 摘要 本发明涉及一种单唾液酸四己糖神经节苷脂 钠注射液的制备方法， 步骤如下 ： 1） 称取磷酸氢 二钠、 磷酸二氢钠、 氯化钠， 加入半量注射用水， 加 热到 40使溶解， 得。

3、到温度 40辅料溶液 ； 2） 称 取单唾液酸四己糖神经节苷脂钠原料， 加入到上 述辅料溶液中， 搅拌至全部溶解 ； 3） 加入 20g 活性 炭搅拌 30 分钟， 滤出活性炭 ； 4） 补加注射用水至 19L， 用氢氧化钠或盐酸调节 pH 值至 7.4 7.6， 补加注射用水到 20L ； 5） 灌装后， 采用旋转水浴式 灭菌， 灭菌条件为 ： 121灭菌 20 分钟。 (51)Int.Cl. (56)对比文件 审查员 陈卫星 权利要求书 2 页 说明书 5 页 附图 2 页 (19)中华人民共和国国家知识产权局 (12)发明专利 权利要求书2页 说明书5页 附图2页 (10)授权公告号 C。

4、N 102988284 B CN 102988284 B 1/2 页 2 1. 一种单唾液酸四己糖神经节苷脂钠注射液的制备方法， 所述的单唾液酸四己糖神经 节苷脂钠注射液， 配方组成如下 ： 单唾液酸四己糖神经节苷脂钠 200g 氯化钠 160g 磷酸氢二钠 23.8g 磷酸二氢钠 4.43g 注射用水 加到 20L 溶液 pH 值为 7.4 7.6， 其制备方法包括以下步骤 ： 1） 称取磷酸氢二钠、 磷酸二氢钠、 氯化钠， 加入 10L 注射用水， 加热到 40使溶解， 得到 温度 40辅料溶液 ； 2） 称取单唾液酸四己糖神经节苷脂钠原料， 加入到上述辅料溶液中， 搅拌至全部溶 解 ； 。

5、3） 加入 20g 活性炭搅拌 30 分钟， 滤出活性炭 ； 4） 补加注射用水至 19L， 用氢氧化钠或盐酸调节 pH 值至 7.4 7.6， 补加注射用水到 20L ； 5） 灌装后， 采用旋转水浴式灭菌， 灭菌条件为 ： 121灭菌 20 分钟。 2. 权利要求 1 所述的制备方法， 其特征在于， 步骤如下 ： 取精密称重的磷酸氢二钠 23.8g、 磷酸二氢钠 4.43g、 氯化钠 160g， 加入 50% 注射用 水， 温度为 40的注射用水搅拌溶解， 再将精密称重的单唾液酸四己糖神经节苷脂钠原料 200g 加入到温度为 40的上述溶液中， 转速 900rpm， 搅拌 30 分钟至全部。

6、溶解， 加入 0.1 活性炭， 转速 900rpm 搅拌吸附 30 分钟， 用 0.45m 金属滤芯脱炭， 加注射用水至 19L， 用浓 度为 1.0mol/L 的氢氧化钠溶液或盐酸调节 pH 值至 7.4 7.6， 加注射用水定容至 20L ； 过 滤、 灌装、 加塞压盖、 121， 20 分钟旋转水浴灭菌、 灯检、 包装即得。 3. 一种单唾液酸四己糖神经节苷脂钠注射液的检测方法， 包括以下步骤 ： 采用 HPLC 法检测 , 色谱条件 ： 用氨基键合硅胶为填充剂， 以乙腈 - 四氢呋喃 -0.1mol/L 磷酸溶液 =66 ： 8 ： 34 为流动 相， 流速为 1.0ml/min, 进。

7、样量 20l， 检测波长应为 205nm ； 系统适用性试验 ： 取对照品溶液 （1） 、 对照品溶液 （2） 、 对照品溶液 （3） 和供试品溶液等 量混合， 摇匀， 作为系统适用性试验溶液， 精密量取 40l 注入液相色谱仪， 记录色谱图， 按 单唾液酸四己糖神经节苷脂钠峰计， 理论板数不得低于 1000， 主峰与前后相邻的杂质峰的 分离度应大于 1.5 ； 有关物质对照品溶液的制备 ： 精密称取唾液酸对照品适量， 加水溶解并稀释制成 1ml 含 10g 的溶液， 摇匀， 即得对照品溶液 （1） ； 精密称取 GD1a 对照品适量， 加水溶解并稀释制成 1ml 含 40g 的溶液， 摇匀，。

8、 即得对照 品溶液 （2） ； 精密称取 GD3 对照品适量， 加水溶解并稀释制成每 1ml 含 20g 的溶液， 摇匀， 即得对 照品溶液 （3） ； 有关物质供试品溶液的制备取供试品适量， 加水稀释制成每 1ml 中含 GM12mg 的溶液， 权 利 要 求 书 CN 102988284 B 2 2/2 页 3 摇匀即得 ； 有关物质对照溶液的制备精密量取供试品溶液 1ml， 置 100ml 量瓶中， 加水稀释至刻 度， 摇匀即得 ； 测定法取对照溶液 20l， 注入液相色谱仪， 调节检测灵敏度， 使主成分峰高为满量程 的 20% 30%， 再精密量取供试品溶液、 对照品溶液 （1） （2。

9、） （3） 、 对照溶液各 20l， 分别注 入液相色谱仪， 进行测定。 权 利 要 求 书 CN 102988284 B 3 1/5 页 4 一种单唾液酸四己糖神经节苷脂钠注射液的制备方法 技术领域 0001 本发明属于药物制剂领域， 特别涉及一种质量稳定、 安全有效的单唾液酸四己糖 神经节苷脂钠注射液及其制备方法。 背景技术 0002 神经节苷脂 （gangliosides， GLS） 又称 N 物质， 是一组含有唾液酸的鞘糖脂， 分子 由疏水的神经酰胺和亲水的含唾液酸的寡糖链组成， 广泛分布于脊椎动物各组织的细胞膜 上， 其中以神经系统含量最为丰富 ； 通常根据唾液酸数目不同分为 GM(。

10、 单唾液酸神经节苷 脂 )、 GD( 二唾液酸神经节苷脂 ) 和 GT( 三唾液酸神经节苷脂 ) 等 ； 又根据糖基数目不同将 GM 分为 GM1( 含 4 个糖基 )、 GM2( 含 3 个糖基 ) 和 GM3( 含 2 个糖基 ) 0003 单唾液酸四己糖神经节苷脂 （GM-1) 是最重要的神经节苷脂之一， 可促使体外培 养的神经细胞生长、 分化、 再生， 对神经生长因子有调节作用， 能够促进神经元轴突和树突 增生， 侧突形成， 抑制细胞变性， 加强神经营养， 减少受损胞体的死亡， 促进神经元的再生和 机能恢复 0004 GM-1 的分子结构式如下 ： 0005 0006 单唾液酸四己糖神。

11、经节苷脂能促进由于各种原因引起的中枢神经系统损伤的功 能恢复。作用机理是促进 “神经重构 neuroplasticity” （包括神经细胞的生存、 轴突生长 和突触生长） 。单唾液酸四己糖神经节苷脂对损伤后继发性神经退化有保护作用。单唾液 酸四己糖神经节苷脂对脑血流动力学参数以及因损伤后导致脑水肿有积极的作用。 单唾液 酸四己糖神经节苷脂通过改善细胞膜酶的活性减轻神经细胞水肿。 动物实验显示单唾液酸 四己糖神经节苷脂可改善帕金森病所致的行为障碍。 0007 单唾液酸四己糖神经节苷脂钠 （GM1） 是主要的神经节苷脂之一， 临床上用于治疗 血管性或外伤性中枢神经系统损伤 ； 帕金森氏病。 000。

12、8 由于单唾液酸四己糖神经节苷脂钠是从猪脑中提取的生物制品， 为使其注射液保 持安全稳定， 避免过敏和其他副作用， 生产过程必须多层次的控制， 导致生产过程复杂， 中 间环节多， 成本高昂， 同时现有制备方法对操作过程以及工艺参数也没有明确的界定， 导致 说 明 书 CN 102988284 B 4 2/5 页 5 产品的质量出现差异。 本发明经过工艺改进， 通过关键工艺参数的设定和操作步骤的选定， 使本发明的工艺方法简单快捷， 生产出的产品稳定安全， 质量可控， 取得了意想不到的技术 效果。 发明内容 0009 本发明的目的在于提供一种质量更加稳定、 安全、 有效的单唾液酸四己糖神经节 苷脂。

13、钠注射液的制备方法。 0010 进一步地， 本发明提供了制备单唾液酸四己糖神经节苷脂钠注射液时， 原料药需 要采用特殊溶解条件及特殊灭菌方式的最佳制备工艺及关键工艺参数 ； 0011 本发明所述的单唾液酸四己糖神经节苷脂钠注射液， 配方组成如下 ： 0012 单唾液酸四己糖神经节苷脂钠 200g 0013 氯化钠 160g 0014 磷酸氢二钠 23.8g 0015 磷酸二氢钠 4.43g 0016 注射用水 加到 20L 0017 溶液 pH 值为 7.4 7.6。 0018 其制备方法包括以下步骤 ： 0019 1） 称取磷酸氢二钠、 磷酸二氢钠、 氯化钠， 加入 10L 注射用水， 加热。

14、到 40使溶解， 得到温度 40辅料溶液 ； 0020 2） 称取单唾液酸四己糖神经节苷脂钠原料， 加入到上述辅料溶液中， 搅拌至全部 溶解 ； 0021 3） 加入 20g 活性炭搅拌 30 分钟， 滤出活性炭 ； 0022 4） 补加注射用水至 19L， 用氢氧化钠或盐酸调节 pH 值至 7.4 7.6， 补加注射用 水到 20L ； 0023 5） 灌装后， 采用旋转水浴式灭菌， 灭菌条件为 ： 121灭菌 20 分钟。 0024 本发明上述制备方法， 是经过筛选获得的， 筛选过程如下 ： 0025 说 明 书 CN 102988284 B 5 3/5 页 6 0026 本发明产品与进口。

15、产品的检测色谱图见附图 1、 2， 从中可见进口产品施捷因中产 生了降解杂质 GD3, 而采用本发明工艺制备的产品没有产生降解杂质 GD3。 0027 本发明技术方案制备的单唾液酸四己糖神经节苷脂钠注射液与现有市售产品相 比， 澄明度检测仪检查， 外观更澄清， 高效液相色谱检测， 杂质更少， 可以显著增强产品的安 全性和稳定性， 以下通过试验数据进一步说明本发明的有益效果 ： 0028 试验例 1 灭菌稳定性试验 0029 对实施例 1、 实施例 2 灭菌后单唾液酸四己糖神经节苷脂钠注射液和同样的制备 方法但采用湿热灭菌法灭菌的样品进行比较， 考察其灭菌后制剂性状、 pH值及降解杂质。 结 果。

16、见表 1。 0030 表 1 不同灭菌方法得到的产品的观察结果 0031 0032 由表 1 可见， 本发明灭菌法制备的单唾液酸四己糖神经节苷脂钠注射液 （旋转水 浴灭菌） 较湿热灭菌法得到的产品效果更好， 杂质更小， 可以显著增强产品的安全性和稳定 性。 0033 试验例 2 贮藏稳定性试验 0034 将实施例 1、 实施例 2 制备的单唾液酸四己糖神经节苷脂钠注射液和市场上的市 售样品进行比较， 在常温下贮藏 12 个月， 以降解杂质为考察指标， 进行长期稳定性考察试 验。结果见表 2。 0035 表 2 不同处方单唾液酸四己糖神经节苷脂钠注射液长期稳定性考察结果 0036 测定时间实施例。

17、 1实施例 2市售样品 0 月0.02%0.03%0.14% 3 月0.03%0.04%0.16% 6 月0.05%0.06%0.19% 9 月0.07%0.08%0.21% 12 月0.08%0.10%0.23% 0037 由表 2 可见， 本发明制备的单唾液酸四己糖神经节苷脂钠注射液， 在常温下考察 说 明 书 CN 102988284 B 6 4/5 页 7 12 个月， 降解杂质明显低于市售样品。 0038 综上所述， 本发明提供了一种新的单唾液酸四己糖神经节苷脂钠注射液制备方 法， 生产工艺过程简单， 具有鲜明的创造性和实用性， 在临床使用上必将有良好的应用前 景。 附图说明 003。

18、9 图 1 ： 由本申请实施例 1 制得的单唾液酸四己糖神经节苷脂钠注射液有关物质检 测高效液相色谱图。 0040 图 2 ： 进口上市产品 “施捷因” 的有关物质检测高效液相色谱图。 0041 为了更好地理解本发明， 下面通过对本发明较佳实施方式的描述， 详细说明但不 限制本发明。 具体实施方式 0042 本发明所用原辅材料， 如无特别说明， 均为药用级别。 0043 实施例 1 0044 取精密称重的磷酸氢二钠 23.8g、 磷酸二氢钠 4.43g、 氯化钠 160g， 加入配剂量 50%(10L)、 温度为 40的注射用水中搅拌溶解， 再将精密称重的单唾液酸四己糖神经节苷 脂钠原料 20。

19、0g 加入到温度为 40的上述溶液中， 转速 900rpm， 搅拌 10 分钟以上至全部溶 解。加入 0.1活性炭 （W/V） ， 转速 900rpm 搅拌吸附 30 分钟。用 0.45m 金属滤芯脱炭。 加注射用水至配剂量 95%(19L)， 用浓度约为 1.0mol/L 氢氧化钠溶液或盐酸调节 pH 值至 7.4 7.6， 加注射用水定容至 20L ； 过滤、 灌装、 加塞压盖、 121， 20 分钟旋转水浴灭菌、 灯 检、 包装即得。 0045 实施例 2 0046 取精密称重的磷酸氢二钠 23.8g、 磷酸二氢钠 4.43g、 氯化钠 160g， 加入配剂量 50%(10L)、 温度为。

20、 60的注射用水搅拌溶解， 再将精密称重的单唾液酸四己糖神经节苷脂 钠 200g 加入到温度为 60的磷酸盐溶液中， 转速 1000rpm， 搅拌 30 分钟至全部溶解。加入 0.1活性炭 （W/V） ， 转速 1000rpm 搅拌吸附 15 分钟。用 0.45m 金属滤芯脱炭。加注射用 水至配剂量 95%， 用浓度约为 0.5mol/L 氢氧化钠溶液或盐酸调节 pH 值至 7.4 7.6， 加注 射用水定容至 20L。过滤、 灌装、 加塞压盖、 121， 30 分钟旋转水浴灭菌、 灯检、 包装即得。 0047 实施例 3 0048 对单唾液酸四己糖神经节苷脂钠注射液有关物质进行检测， 方法如。

21、下 ： 0049 HPLC 法 , 色谱条件 ： 用氨基键合硅胶为填充剂， 以乙腈一四氢呋喃 -0.1mol/L 磷 酸溶液 （66 ： 8 ： 34） 为流动相， 流速为 1.0ml/min, 进样量 20l， 检测波长应为 205nm。 0050 系统适用性试验 ： 取对照品溶液 （1） 、 对照品溶液 （2） 、 对照品溶液 （3） 和供试品溶 液等量混合。摇匀， 作为系统适用性试验溶液。精密量取 40l 注入液相色谱仪， 记录色谱 图。 按单唾液酸四己糖神经节苷脂钠峰计， 理论板数不得低于1000， 主峰与前后相邻的杂质 峰的分离度应大于 1.5。 0051 有关物质对照品溶液的制备 。

22、： 精密称取唾液酸对照品适量， 加水溶解并稀释制 成 1ml 含 10g 的溶液， 摇匀， 即得对照品溶液 （1） ； 精密称取 GD1a 对照品适量， 加水溶解并 说 明 书 CN 102988284 B 7 5/5 页 8 稀释制成 1ml 含 40g 的溶液， 摇匀， 即得对照品溶液 （2） ； 精密称取 GD3 对照品适量， 加水 溶解并稀释制成每 1ml 含 20g 的溶液， 摇匀， 即得对照品溶液 （3） 。 0052 有关物质供试品溶液的制备 取供试品适量， 加水稀释制成每 1ml 中含 GM1 2mg 的溶液， 摇匀即得。 0053 有关物质对照溶液的制备 精密量取供试品溶液 。

23、1ml， 置 100ml 量瓶中， 加水稀释 至刻度， 摇匀即得。 0054 测定法 取对照溶液 20l， 注入液相色谱仪， 调节检测灵敏度， 使主成分峰高为 满量程的 20% 30%。再精密量取供试品溶液、 对照品溶液 （1）（2）（3） 、 对照溶液各 20l， 分别注入液相色谱仪， 记录色谱图至主峰保留时间的 5 倍。在供试品溶液记录的色谱图中， 如有保留时间与对照品溶液 （1） 、（2） 、（3） 主峰保留时间一致的峰， 其峰面积分别不能大于 对照品溶液 （1） 、（2） 、（3） 主峰峰面积 （游离唾液酸不得过 0.40%、 GD1a 不得过 2.00%、 GD3 不得过 1.00%） ， 其他单个杂质峰面积不得大于对照溶液主峰面积的 1/2 （0.40%） ， 各杂质峰 （溶剂峰不计） 面积的和不得大于对照溶液的主峰面积的 5 倍 （5.00%） 。 说 明 书 CN 102988284 B 8 1/2 页 9 图 1 说 明 书 附 图 CN 102988284 B 9 2/2 页 10 图 2 说 明 书 附 图 CN 102988284 B 10 。