麦角甾酮在制备治疗慢性肾功能衰竭药物中的应用.pdf

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1、(10)授权公告号 CN 101785776 B (45)授权公告日 2011.07.27 CN 101785776 B *CN101785776B* (21)申请号 201010137836.8 (22)申请日 2010.04.02 A61K 31/575(2006.01) A61P 13/12(2006.01) (73)专利权人 西北大学 地址 710069 陕西省西安市太白北路 229 号 (72)发明人 赵英永 林瑞超 孙文基 谢人明 (74)专利代理机构 西安西达专利代理有限责任 公司 61202 代理人 谢钢 CN 101028421 A,2007.09.05,说明书第1页 第 2。

2、 段至第 4 页第 2 段 . CN 101085340 A,2007.12.12,说明书第1页 第 2 段至第 3 页第 1 段 . CN 101596201 A,2009.12.09,说明书第1页 第 2 段至第 3 页第 1 段 . 赵英永， 等 . 猪苓的化学成分与药理作用 研究进展 .中药材 .2009, 第 32 卷 ( 第 11 期 ),1785-1787. 赵英永， 等 .HPLC 法测定猪苓中麦角甾酮的 含量 .药物分析杂志 .2009, 第 29 卷 ( 第 9 期 ),1579-1581. Dan Yuan, et alAn Anti-aldosteronic Diure。

3、tic Component (Drain dampness) in Polyporus Sclerotium.Biol. Pharm. Bull. .2004, 第 27 卷 ( 第 6 期 ),867-870. (54) 发明名称 麦角甾酮在制备治疗慢性肾功能衰竭药物中 的应用 (57) 摘要 本发明涉及麦角甾酮在制备治疗慢性肾功能 衰竭药物中的应用。 麦角甾酮可以降低尿素氮、 血 肌酐， 能改善肾功能、 减少腺嘌呤代谢产物对肾脏 的病理性损害具有较好保护作用， 本发明为临床 提供了一种新的治疗由腺嘌呤、 马兜铃酸及大黄 等所致的慢性肾功能衰竭的药物。 (51)Int.Cl. (56)对比文。

4、件 审查员 郑少君 (19)中华人民共和国国家知识产权局 (12)发明专利 权利要求书 1 页 说明书 5 页 CN 101785776 B1/1 页 2 1. 麦角甾酮在制备治疗慢性肾功能衰竭药物中的应用。 权 利 要 求 书 CN 101785776 B1/5 页 3 麦角甾酮在制备治疗慢性肾功能衰竭药物中的应用 技术领域 0001 本发明涉及麦角甾酮在制备治疗慢性肾功能衰竭药物中的用途， 属于医药技术领 域。 背景技术 0002 肾功能衰竭疾病的治疗一直是困扰医学界的难题。 据国际肾脏病协会统计慢性肾 功能衰竭在自然人群中的年发病率为 98-198/100 万， 经济发达国家发病率更高，。

5、 美国和日 本的发病率分别达 802/100 万和 996/100 万。在西方国家中， 肾功能衰竭以继发性因素为 主要原因， 已经公认糖尿病和高血压是两大首位因素， 糖尿病人中至少 40有肾脏疾病， 高 血压病人中约 50有肾脏病。我国肾功能衰竭患者也在逐年递增。 0003 马兜铃、 关木通、 广防己、 天仙藤 ( 含马兜铃酸的中药约 200 种 ) 及大黄是常用中 药， 但是服用它们会导致各种与肾脏有关的疾病， 特别是慢性肾功能衰竭位居首位， 引起医 学界的广泛关注。 0004 目前， 对慢性肾功能衰竭的治疗， 西药有爱西特 ( 药用活性炭 ) ； 中药有尿毒清颗 粒、 肾衰宁、 血肌酐片等。

6、。西药虽然有一定的疗效， 但毒副作用大， 复发率高等缺点， 如爱西 特在初期是有效的， 但后期反而会使病情加重， 血肌酐、 尿素氮居高不下， 出现难以控制的 症状， 最终会发展为尿毒症。中药治疗， 效果缓慢， 服用一个月甚至几个月后才能感到是否 有效， 服用周期长， 有的患者服药长达几年， 长期服药对胃的刺激很大， 许多患 者食欲下 降， 身体消瘦， 疗效难以肯定。 当前医药界以及临床上迫切需要解决的技术问题是提供一种 治疗慢性肾功能衰竭的无毒副作用、 疗效显著的药物。 发明内容 0005 本发明的目的是提供麦角甾酮在制备治疗慢性肾功能衰竭药物中的新用途。 0006 麦角甾酮可以降低尿素氮、 。

7、血肌酐， 能改善肾功能、 减少腺嘌呤代谢产物对肾脏的 病理性损害具有较好保护作用， 可为临床提供一种新的治疗由腺嘌呤、 马兜铃酸及大黄等 所致的慢性肾功能衰竭的药物。 具体实施方式 0007 麦角甾酮是从中药猪苓中提取分离得到的一种化合物， 其也可以通过化学合成的 方法， 以麦角甾醇为底物合成麦角甾酮。 0008 麦角甾酮的提取分离工艺及有机合成工艺如下 ： 0009 麦角甾酮提取分离工艺 ： 猪苓样品经过切片、 干燥、 粉碎后， 用约 5 倍体积的 75 乙醇浸泡 24 小时后， 开始渗漉， 回收甲醇， 重新利用。浓缩得棕色膏状物。膏状物用 75乙 醇溶解， 用石油醚萃取 3 次， 浓缩石油。

8、醚提取物得膏状物。膏状物溶于乙醇， 用硅胶拌样， 上 100-200 目的硅胶柱， 石油醚 - 乙酸乙酯 (10 1) 洗脱， 收集馏分， 合并， 浓缩， 最后溶于乙 酸乙酯中， 放置， 析出结晶， 过滤， 得麦角甾酮纯品。 说 明 书 CN 101785776 B2/5 页 4 0010 麦角甾酮的合成工艺 1 ： 将 5.00g 麦角甾醇溶于丙酮和二氯甲烷 ( 体积比 1 1) 混合液， 然后将体积比为 1 1 1 的草酰氯、 DMSO、 三乙胺溶液 30ml 加入到 0的麦角甾 醇的丙酮和二氯甲烷溶液中， 搅拌 6h 后， 然后 加入异丙醇， 减压回收丙酮和二氯甲烷， 加 蒸馏水有沉淀出。

9、现， 放置， 过滤， 固体物进行干燥。取干燥的固体物和 DDQ 在丙酮中加热回 流 3h， 放置在 4的环境， 过滤， 减压回收丙酮得到固体物， 此固体物过 100-200 目氧化铝 柱， 洗脱剂为正己烷 - 丙酮， 最后得到 1.9g 麦角甾酮。 0011 麦角甾酮的合成工艺 2 ： 将 5.00g 麦角甾醇溶于三氯甲烷， 将 IBX 试剂 (2- 碘酰基 苯甲酸 )30ml 慢慢滴加到在 0的麦角甾醇的三氯甲烷溶液， 在 0搅拌 8h 之后， 然后加 入异丙醇， 减压回收二氯甲烷， 加蒸馏水有沉淀出现， 放置， 过滤， 固体物进行干燥。取干燥 的固体物和 DDQ 在二氯甲烷中加热回流 6h。

10、， 放置至室温， 过滤， 减压回收二氯甲烷得到固体 物， 此固体物 100-200 目硅胶柱， 洗脱剂为苯 - 丙酮， 最后得到 1.4g 麦角甾酮。 0012 有效成分用麦角甾酮制备治疗慢性肾功能衰竭药物以常规药用制剂的形式来使 用 ； 所述的常规药物用制剂含作为活性成分在制剂中与药学上可接受的载体， 如适宜于肠 胃内和肠胃外给药的有机或无机的固体或液体赋形剂混合， 该药用制剂可以是固体形式如 片剂、 胶囊剂、 散剂、 丸剂、 颗粒剂， 也可以是液体形式如注射剂、 乳剂等。 0013 上述制剂中可含有辅助物质、 稳定剂、 润湿剂和其它常用的添加剂， 如乳糖、 柠檬 酸、 酒石酸、 硬脂酸、 。

11、硬脂酸镁、 石膏粉、 蔗糖、 玉米淀粉、 滑石粉、 明胶、 琼脂、 果胶、 花生油、 橄榄油、 可可脂、 乙二醇、 抗坏血酸、 甘露醇等。 0014 上述的制剂可按照各种制剂常规的制备工艺制成。 0015 为了验证麦角甾酮治疗慢性肾功能衰竭的有益效果， 发明人采用腺嘌呤所致慢性 肾功能衰竭模型进行了药效学试验， 各种试验情况如下 ： 0016 1、 实验药物 0017 麦角甾酮悬浊液， 乳白色溶液， 含 2的阿拉伯树胶粉的生理盐水配制。 0018 2、 实验动物 0019 雄性SD大鼠， 体重190210g， 由西安交通大学医学院动物中心提供。 合格证号 ： 陕医动字第 08005。 0020。

12、 3、 实验试剂 0021 腺嘌呤购于 sigma 公司 ( 批号 ： A8626-5g， 纯度 99 )， 阿拉伯树胶粉购于上海 化学试剂采购供应站英国进口分装。 其它的血样测定试剂有西安交通大学口腔医院提供。 0022 4、 实验方法 0023 (1) 模型建立及药物治疗试验 0024 动物模型的制备与分组动物购置后适应环境一周， 根据其体重、 性别随机分为 水正常组、 腺嘌呤模型组、 腺嘌呤加麦角甾酮给药组， 每组均为 8 只。实验期间动物自由 饮水、 摄食。实验开始后， 正常组以蒸馏水 10mlkg-1d-1灌胃 ； 腺嘌呤模型组以腺嘌呤 200mgkg-1d-1灌胃 ； 腺嘌呤加麦角。

13、甾酮给药组， 每天先以腺嘌呤 200mgkg-1d-1灌胃， 3 个小时后， 再以麦角甾酮 20mgkg-1d-1灌胃。所有动物于实验第 12 天、 第 24 天置于代 谢笼中， 留取尿液进行蛋白定量测定， 于最后一次留尿后活杀取血及心、 肝、 肾等组织进行 生化测定、 重量变化及病检。定量测定麦角甾酮对腺嘌呤所致大鼠慢性肾功能衰竭的血液 生化指标、 肾指数、 肾体积及胸腺、 肾上腺指数、 主要脏器指数及血液学指标， 并作统计学分 说 明 书 CN 101785776 B3/5 页 5 析。结果见表 1、 2、 3、 4。 0025 (2) 检测方法 0026 各种脏器用 TD 型电子天平， 。

14、美特列 - 托利多十万分之一分析天平并记录。生化指 标的测定委托西安交通大学口腔医院完成。 0027 (3) 药效计算 0028 结果均以平均值 SD 表示， 采用 t 检验， 计算 t， P 值， 将模型组与空白组、 麦角甾 酮组与模型进行组间差异性比较， t 检验， P 0.05 为有显著性差异， P 0.01 为有非常显 著性差异， 判断药物对腺嘌呤所致慢性肾功能衰竭的治疗效果。 0029 (4) 实验结果 0030 A. 以麦角甾醇为底物合成麦角甾酮， 本实验探索了 2 个合成路线， 它们的产率分 别为 38、 28。其中合成路线 1 产率高， 且使用的试剂容易得到， 合成所需的时间最。

15、短。 减少有色的其它杂质的产生， 易上柱分离纯化。合成路线 2 的产物采用氧化铝柱无法与其 他的杂质分离， 采用硅胶柱分离时需要经过 2 次上柱才能够得到麦角甾酮纯品。 0031 B. 病理学检查 0032 正常组 ： 各动物肾脏大小适中、 颜色鲜红、 表面光滑。模型组 ： 各动物肾脏明显肿 大， 体积增大、 颜色苍白、 表面凹凸不平， 似人类的 “大白肾” ， 个别动物肾体积较正常组可增 大 1 倍以上。各肾均存在区域性肾单位萎缩、 消失， 纤维组织增生明显及炎细胞浸润。部 分肾小管上皮细胞坏死、 消失或扩张， 甚至呈囊性。肾间质内肾小球数目明显减少， 并可 见大小不一、 数量不等的棕褐色结。

16、晶或异物肉芽肿形成及粉染匀质的管型。上述病变与 Yokozawa报道的类似。 同时肾指数、 肾长度和宽度显著增大， 心、 脾及肾上腺指数显著升高， 它们与正常组比较明显升高， 存在统计学上的非常显 著差异 (P 0.01)。尿量与模型组 比较也显著增加。结果见表 2， 3。麦角甾酮组 ： 结果见表 1， 2。结果显示麦角甾酮对此模 型有对抗作用， 表现为肾脏体积变小， 颜色苍白度减轻、 肾指数、 肾长度和宽度降低。同时， 心、 脾及肾上腺指数也减小， 而且肾上腺指数与模型比较存在统计学上的非常显著差异， 结 果接近空白组。 另外， 尿量与模型组比较没有变化， 可能是麦角甾酮有促进利尿的影响造成。

17、 的。 0033 C. 生化指标的变化 0034 模型组 ： 从表 3， 4 可见， 血中尿素氮 (BUN)、 血肌酐 (Scr) 与正常组比较显著升高。 血红细胞、 血红蛋白、 红细胞压积与正常组比较显著降低， 造成贫血状态。 白细胞显著升高， 血总胆固醇显著升高， 血甘油三酯显著降低。 均存在统计学上的非常显著差异(P0.01)。 0035 麦角甾酮组 ： 观察麦角甾酮对此模型动物的生化指标的影响， 结果见表 1， 4。从表 1 可见， 两个衡量肾功能衰竭的重要指标尿素氮 (BUN)、 血肌酐 (Scr) 与模型组比较明显下 降， 存在统计学上的显著差异。 甘油三酯与模型组比较明显升高， 。

18、甚至达到正常组的正常水 平， 存在统计学上的非常显著差异 (P 0.01)。总胆固醇、 白细胞与模型组比较降低。红细 胞、 血红蛋白、 红细胞压积高于模型组。与模型组比较， 这些生化指标的变化说明麦角甾酮 能促进体内的氮质化合物的排出， 对腺嘌呤所致大鼠慢性肾功能衰竭有较好治疗作用。 0036 5 结论 0037 麦角甾酮在腺嘌呤所致慢性肾功能衰竭的大鼠体内进行治疗实验。实验结果表 明 ： 麦角甾酮可以降低尿素氮 (BUN)、 血肌酐 (Scr)， 统计学处 理结果有非常显著和显著性 说 明 书 CN 101785776 B4/5 页 6 差异治疗作用(P0.01-0.05)。 麦角甾酮能改善。

19、肾功能、 减少腺嘌呤代谢产物对肾脏的病 理性损害具有较好保护作用。可为临床提供一种新的治疗由腺嘌呤、 马兜铃酸及大黄等所 致的慢性肾功能衰竭的药物。 0038 表 1 麦角甾酮对腺嘌呤所致大鼠慢性肾功能衰竭的肾指数、 肾体积及胸腺、 肾上 腺指数的影响 0039 分组 动物数 尿量 肾指数 g 肾长度 mm 肾宽度 mm 胸腺指数 mg 肾上腺指数 mg 正常组 8 9.303.3 0.7670.106 19.101.10 12.400.84 11514 155 模型组 8 28.55.1* 1.9210.322* 24.751.58* 14.881.85* 10848 11833* 麦角甾酮。

20、组 8 26.53.1 1.7580.263 22.601.26 13.901.10 10119 216 0040 与正常组比较 ： *P 0.05，*P 0.01 ； 与模型组比较 ：P 0.05，P 0.01 0041 表 2 麦角甾酮对腺嘌呤所致大鼠慢性肾功能衰竭的主要脏器指数的影响 0042 分组 动物数 心 g 肝 g 脾 g 肺 g 睾丸 g 精囊前列腺g 正常组 8 0.3100.015 3.3820.325 0.1480.021 0.4710.057 1.1030.031 0.6000.077 模型组 8 0.3640.033* 3.6190.243 0.2360.027* 0。

21、.5080.081 1.1480.121 0.4340.025* 麦角甾酮组 8 0.3510.024 3.8160.307 0.2190.025 0.5520.101 1.1220.107 0.3890.042 0043 与正常组比较 ： *P 0.05，*P 0.01 ； 与模型组比较 ：P 0.05，P 0.01 0044 表 3 麦角甾酮对腺嘌呤所致大鼠慢性肾功能衰竭的血液生化指标的影响 0045 分组 动物数 尿素氮 mmol/L 肌酐 mol/L 总蛋白 g/L 白蛋白 g/L 球蛋白 g/L 白球蛋白比 值 总胆固醇 mmol/L 甘油三酯 mmol/L 正常组 8 5.170.。

22、69 56.206.75 53.403.58 30.801.48 22.602.61 1.380.15 1.430.17 1.220.43 模型组 8 27.683.53* 105.110.8* 56.752.87 30.250.50 26.503.00 1.150.10* 2.200.27* 0.640.13* 麦角甾酮组 8 17.812.88 80.6412.25* 54.253.30 28.000.82 26.253.59 1.100.18 2.080.28 1.220.57 0046 与正常组比较 ： *P 0.05，*P 0.01 ； 与模型组比较 ：P 0.05，P 0.01 0。

23、047 表 4 麦角甾酮对腺嘌呤所致大鼠慢性肾功能衰竭的血液学指标的影响 0048 说 明 书 CN 101785776 B5/5 页 7 分组 动物数 白细胞 109/L 红细胞 1012/L 血红蛋白 g/L 红细胞压积 血小板 1 正常组 8 17.302.77 10.060.61 185.0812.43 50.223.22 898.88109.34 模型组 8 36.306.66* 8.020.30* 147.604.95* 40.951.28* 958.10261.02 麦角甾酮组 8 29.698.18 8.400.53 153.209.52 42.942.29 1127.0291.14 0049 与正常组比较 ： *P 0.05，*P 0.01 ； 与模型组比较 ：P 0.05，P 0.01 说 明 书 。