治疗脱发组合物的制备方法.pdf

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1、(19)中华人民共和国国家知识产权局 (12)发明专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请号 201811109516.4 (22)申请日 2018.09.21 (71)申请人 黑龙江省中医药科学院 地址 150036 黑龙江省哈尔滨市香坊区三 辅街142号 (72)发明人 王伟明 霍金海 李梦雪 董文婷 刘华石 韩德强 (74)专利代理机构 哈尔滨市文洋专利代理事务 所(普通合伙) 23210 代理人 何强 (51)Int.Cl. A61K 8/73(2006.01) A61Q 7/00(2006.01) A61P 17/14(2006.01) A61P 17/08(2。

2、006.01) (54)发明名称 治疗脱发组合物的制备方法 (57)摘要 治疗脱发组合物的制备方法， 它涉及一种治 疗脱发组合物， 涉及日用化学品领域。 本发明是 为了解决人群中脱发现象日益突出， 并且呈现年 轻化趋势的技术问题。 本方法如下： 一、 膜分离木 耳多糖； 二、 制备发酵基质、 三、 在发酵基质接种 曲霉、 毛霉或枯草芽孢杆菌， 得到治疗脱发组合 物。 本发明的组合在动物实验中， 表现了极好的 固发效果， 为今后的大规模解决脱发问题， 寻找 了新的途径。 本发明的治疗脱发组合物对毛囊生 长有明显促进作用， 对脂溢性脱发有明显改善作 用。 权利要求书2页 说明书9页 CN 1092。

3、23603 A 2019.01.18 CN 109223603 A 1.治疗脱发组合物的制备方法， 其特征在于治疗脱发组合物的制备方法按照以下步骤 进行： 一、 膜分离木耳多糖: 将黑木耳洗净、 除杂、 粉碎后过40目筛， 制成黑木耳干粉， 按照黑木耳干粉与蒸馏水质 量比为140:1的比例将黑木耳干粉加入到蒸馏水中， 然后在超声功率为500w的条件下超声 15min， 水浴浸提3h， 之后将提取液以4500r/min离心10min， 除渣， 然后将提取液配制成浓度 为4g/L、 pH值5.6的料液， 然后在温度为40、 压力为0.17bar的条件下超滤， 得到分子截留 量300kDa的木耳多糖。

4、截留液； 二、 选取颗粒饱满， 大小均匀的黄豆， 称量洗净， 与水以1:3的体积比混合后于30下浸 泡3h， 至含水量45-55， 煮熟， 将熟料冷却至30-40， 然后将分子截留量300kDa的木 耳多糖截留液和曲霉接种液按1:3的质量比接种， 保持室温28， 制曲至20-24小时进行第 一次翻曲， 28小时进行第二次翻曲， 34小时后出曲， 出曲后洗曲,闷12小时入罐， 置于28恒 温室中保温发酵30天以上， 取出晾干， 即得曲菌型-木耳多糖300kDa截留液豉发酵物。 2.根据权利要求1所述治疗脱发组合物的制备方法， 其特征在于步骤二中至至含水量 50。 3.根据权利要求1所述治疗脱发组。

5、合物的制备方法， 其特征在于步骤二中将熟料冷却 至35。 4.根据权利要求1所述治疗脱发组合物的制备方法， 其特征在于步骤二中制曲至22小 时进行第一次翻曲。 5.治疗脱发组合物的制备方法， 其特征在于治疗脱发组合物的制备方法按照以下步骤 进行： 一、 膜分离木耳多糖: 将黑木耳洗净、 除杂、 粉碎后过40目筛， 制成黑木耳干粉， 按照黑木耳干粉与蒸馏水质 量比为140:1的比例将黑木耳干粉加入到蒸馏水中， 然后在超声功率为500w的条件下超声 15min， 水浴浸提3h， 之后将提取液以4500r/min离心10min， 除渣， 然后将提取液配制成浓度 为4g/L、 pH值5.6的料液， 然。

6、后在温度为40、 压力为0.17bar的条件下超滤， 得到分子截留 量300kDa的木耳多糖截留液； 二、 将毛霉菌种加入无菌生理盐水， 用移液器吸取菌液， 接种于麸皮培养基， 20下培 养96h， 至三角瓶内麸皮长满菌丝和灰色孢子后取出备用， 在培养好的种曲培养瓶中加入 500mL灭菌生理盐水充分摇匀， 双层纱布过滤， 滤渣再加500mL灭菌生理盐水洗涤一次过滤， 两次滤液混合制成孢子悬液， 将此孢子悬浮液置于4冰箱中； 三、 选取颗粒饱满， 大小均匀的黄豆， 称量洗净， 与水以1:3的体积比混合后于30下浸 泡3h， 沥干， 在高温高压灭菌锅下， 于121蒸煮30min， 冷却， 四、 混。

7、合接种： 将分子截留量300kDa的木耳多糖截留液和孢子悬液按1:3质量比接种， 在25的温度下培养48h， 然后经后熟处理48h， 制得毛霉菌型-木耳多糖30000Da豆豉发酵 物。 6.治疗脱发组合物的制备方法， 其特征在于治疗脱发组合物的制备方法按照以下步骤 进行： 一、 膜分离木耳多糖: 权 利 要 求 书 1/2 页 2 CN 109223603 A 2 将黑木耳洗净、 除杂、 粉碎后过40目筛， 制成黑木耳干粉， 按照黑木耳干粉与蒸馏水质 量比为140:1的比例将黑木耳干粉加入到蒸馏水中， 然后在超声功率为500w的条件下超声 15min， 水浴浸提3h， 之后将提取液以4500r。

8、/min离心10min， 除渣， 然后将提取液配制成浓度 为4g/L、 pH值5.6的料液， 然后在温度为40、 压力为0.17bar的条件下超滤， 得到分子截留 量30000Da的木耳多糖截留液； 二、 选取颗粒饱满， 大小均匀的黄豆， 称量洗净， 与水以1： 3的体积比混合后在水中浸泡 10-18小时， 于120灭菌， 得到发酵基质； 三、 每250g发酵基质接种复合液至复合液在混合液中的浓度为2mol/L， 所述复合液由 木耳多糖300kDa截留液和谷草芽孢杆菌接种液按照1:3质量比混合， 摇匀， 于4-8培养72- 120小时， 得到枯草芽孢杆菌-木耳多糖300kDa截留液豆豉发酵物。。

9、 权 利 要 求 书 2/2 页 3 CN 109223603 A 3 治疗脱发组合物的制备方法 技术领域 0001 本发明涉及一种组合物制备方法， 涉及日用化学品领域。 背景技术 0002 随着生活节奏的加快， 工作压力的增大， 饮食及生活习惯的改变， 我国中青年男性 脱发的发病率较20年前增长了近10倍以上。 同时女性居民的脱发发病率也在逐年上升。 但 对脱发是种病需要去医院就诊的认知率仍然很低。 主要的原因有遗传因素、 生理功能失调、 工作和学习压力大、 精神紧张、 药物反应、 放射化疗、 环境污染、 营养不良等。 0003 但是最新的研究显示脱发与机体的肠道菌群不平衡有关， 肠道菌群紊。

10、乱导致鼠乳 杆菌增多， 进而导致某些物质或酶的缺乏， 而该物质又极有可能必须通过胃肠道微生物分 泌。 人类肠道菌群是一个复杂的群落， 健康成人肠道内的微生物总量大约1-1.5kg， 有1000 多种， 肠道微生物的数量是人类细胞数的10倍， 被称为 “人体隐形的超级器官” 。 肠道菌群在 消化、 代谢和免疫功能中起到重要的作用。 肠道菌群失衡可能是造成肥胖、 糖尿病、 肿瘤、 脱 发等多种多种代谢异常的重要原因之一。 所以本专利想通过口服该发明组合物能够起到补 充肠道菌群多样性， 改善肠道菌群的目的。 发明内容 0004 本发明的目的是为了改善肠道菌群， 从而解决人类脱发现象的技术问题， 提供。

11、了 一种治疗脱发组合物的制备方法。 0005 治疗脱发组合物的制备方法按照以下步骤进行： 0006 一、 膜分离木耳多糖: 0007 将黑木耳洗净、 除杂、 粉碎后过40目筛， 制成黑木耳干粉， 按照黑木耳干粉与蒸馏 水质量比为140:1的比例将黑木耳干粉加入到蒸馏水中， 然后在超声功率为500w的条件下 超声15min， 水浴浸提3h， 之后将提取液以4500r/min离心10min， 除渣， 然后将提取液配制成 浓度为4g/L、 pH值5.6的料液， 然后在温度为40、 压力为0.17bar的条件下超滤， 得到分子 截留量300kDa的木耳多糖截留液； 0008 二、 选取颗粒饱满， 大小。

12、均匀的黄豆， 称量洗净， 与水以1:3的体积比混合后于30 下浸泡3h， 至含水量45-55， 煮熟， 将熟料冷却至30-40， 然后将分子截留量300kDa 的木耳多糖截留液和曲霉接种液按1:3的质量比接种， 保持室温28， 制曲至20-24小时进 行第一次翻曲， 28小时进行第二次翻曲， 34小时后出曲， 出曲后洗曲,闷12小时入罐， 置于28 恒温室中保温发酵30天以上， 取出晾干， 即得曲菌型-木耳多糖300kDa截留液豉发酵物。 0009 治疗脱发组合物的制备方法按照以下步骤进行： 0010 一、 膜分离木耳多糖: 0011 将黑木耳洗净、 除杂、 粉碎后过40目筛， 制成黑木耳干粉。

13、， 按照黑木耳干粉与蒸馏 水质量比为140:1的比例将黑木耳干粉加入到蒸馏水中， 然后在超声功率为500w的条件下 超声15min， 水浴浸提3h， 之后将提取液以4500r/min离心10min， 除渣， 然后将提取液配制成 说 明 书 1/9 页 4 CN 109223603 A 4 浓度为4g/L、 pH值5.6的料液， 然后在温度为40、 压力为0.17bar的条件下超滤， 得到分子 截留量300kDa的木耳多糖截留液； 0012 二、 将毛霉菌种加入无菌生理盐水， 用移液器吸取菌液， 接种于麸皮培养基， 20 下培养96h， 至三角瓶内麸皮长满菌丝和灰色孢子后取出备用， 在培养好的种。

14、曲培养瓶中加 入500mL灭菌生理盐水充分摇匀， 双层纱布过滤， 滤渣再加500mL灭菌生理盐水洗涤一次过 滤， 两次滤液混合制成孢子悬液， 将此孢子悬浮液置于4冰箱中； 0013 三、 选取颗粒饱满， 大小均匀的黄豆， 称量洗净， 与水以1:3的体积比比混合后于30 下浸泡3h， 沥干， 在高温高压灭菌锅下， 于121蒸煮30min， 冷却， 0014 四、 混合接种： 将分子截留量300kDa的木耳多糖截留液和孢子悬液按1:3质量比接 种， 在25的温度下培养48h， 然后经后熟处理48h， 制得毛霉菌型-木耳多糖300kDa豆豉发 酵物。 0015 治疗脱发组合物的制备方法按照以下步骤进。

15、行： 0016 一、 膜分离木耳多糖: 0017 将黑木耳洗净、 除杂、 粉碎后过40目筛， 制成黑木耳干粉， 按照黑木耳干粉与蒸馏 水质量比为140:1的比例将黑木耳干粉加入到蒸馏水中， 然后在超声功率为500w的条件下 超声15min， 水浴浸提3h， 之后将提取液以4500r/min离心10min， 除渣， 然后将提取液配制成 浓度为4g/L、 pH值5.6的料液， 然后在温度为40、 压力为0.17bar的条件下超滤， 得到分子 截留量300kDa的木耳多糖截留液； 0018 二、 选取颗粒饱满， 大小均匀的黄豆， 称量洗净， 与水以1： 3的体积比混合后在水中 浸泡10-18小时， 。

16、于120灭菌， 得到发酵基质； 0019 三、 每250g发酵基质接种复合液至复合液在混合液中的浓度为2mol/L， 所述复合 液由木耳多糖300kDa截留液和谷草芽孢杆菌接种液按照1:3质量比混合， 摇匀， 于4-8培 养72-120小时， 得到枯草芽孢杆菌-木耳多糖300kDa截留液豆豉发酵物。 0020 豆豉中含有丰富的营养物质， 主要包括蛋白质、 游离氨基酸、 必需脂肪酸、 可溶性 糖、 无机盐、 维生素等。 除此之外， 豆豉中还含有大豆异黄酮、 大豆皂甙、 褐色色素、 豆豉纤溶 酶、 -葡萄糖苷酶、 抗菌素等生理活性物质。 豆豉中这些活性物质部分来源于原料大豆中， 部分来源于参与发酵。

17、过程中的各种微生物及酶对原料大豆中有机物的分解、 重组等复杂的 生化反应。 0021 黑木耳所含的多糖体具有抗溃疡、 延缓衰老、 降低血脂、 抗肝炎、 抗突变、 抗肿瘤、 增强蛋白质和核酸代谢及促进机体免疫等功能， 采用膜分离法截断分离木耳多糖与豆豉联 合发酵， 固发效果明显。 0022 本发明的特点： 0023 1、 传统的生发多以生姜、 侧柏叶等用于表皮按摩， 促进头皮微循坏为主， 而口服本 发明发酵物， 能够修复肠道菌群结构， 恢复微生态平衡。 通过吃-肠道菌群调节达到固发作 用的， 还是空白领域。 0024 2、 本发明的组合在动物实验中， 表现了极好的固发效果， 为今后的大规模解决脱。

18、 发问题， 寻找了新的途径。 0025 本发明的治疗脱发组合物对毛囊生长有明显促进作用， 对脂溢性脱发有明显改善 作用。 说 明 书 2/9 页 5 CN 109223603 A 5 具体实施方式 0026 本发明技术方案不局限于以下所列举具体实施方式， 还包括各具体实施方式间的 任意组合。 0027 具体实施方式一： 治疗脱发组合物的制备方法按照以下步骤进行： 0028 一、 膜分离木耳多糖: 0029 将黑木耳洗净、 除杂、 粉碎后过40目筛， 制成黑木耳干粉， 按照黑木耳干粉与蒸馏 水质量比为140:1的比例将黑木耳干粉加入到蒸馏水中， 然后在超声功率为500w的条件下 超声15min，。

19、 水浴浸提3h， 之后将提取液以4500r/min离心10min， 除渣， 然后将提取液配制成 浓度为4g/L、 pH值5.6的料液， 然后在温度为40、 压力为0.17bar的条件下超滤， 得到分子 截留量300kDa的木耳多糖截留液； 0030 二、 选取颗粒饱满， 大小均匀的黄豆， 称量洗净， 与水以1:3的体积比混合后于30 下浸泡3h， 至含水量45-55， 煮熟， 将熟料冷却至30-40， 然后将分子截留量300kDa 的木耳多糖截留液和曲霉接种液按1:3的质量比接种， 保持室温28， 制曲至20-24小时进 行第一次翻曲， 28小时进行第二次翻曲， 34小时后出曲， 出曲后洗曲,。

20、闷12小时入罐， 置于28 恒温室中保温发酵30天以上， 取出晾干， 即得曲菌型-木耳多糖300kDa截留液豉发酵物。 0031 具体实施方式二： 本实施方式与具体实施方式一不同的是步骤二中至至含水量 50。 其它与具体实施方式一相同。 0032 具体实施方式三： 本实施方式与具体实施方式一或二不同的是步骤二中将熟料冷 却至35。 其它与具体实施方式一或二相同。 0033 具体实施方式四： 本具体实施方式与具体实施方式一至三之一不同的是步骤二中 制曲至22小时进行第一次翻曲。 其它与具体实施方式一至三之一相同。 0034 具体实施方式五： 本具体实施方式治疗脱发组合物的制备方法按照以下步骤进 。

21、行： 0035 一、 膜分离木耳多糖: 0036 将黑木耳洗净、 除杂、 粉碎后过40目筛， 制成黑木耳干粉， 按照黑木耳干粉与蒸馏 水质量比为140:1的比例将黑木耳干粉加入到蒸馏水中， 然后在超声功率为500w的条件下 超声15min， 水浴浸提3h， 之后将提取液以4500r/min离心10min， 除渣， 然后将提取液配制成 浓度为4g/L、 pH值5.6的料液， 然后在温度为40、 压力为0.17bar的条件下超滤， 得到分子 截留量300kDa的木耳多糖截留液； 0037 二、 将毛霉菌种加入无菌生理盐水， 用移液器吸取菌液， 接种于麸皮培养基， 20 下培养96h， 至三角瓶内麸。

22、皮长满菌丝和灰色孢子后取出备用， 在培养好的种曲培养瓶中加 入500mL灭菌生理盐水充分摇匀， 双层纱布过滤， 滤渣再加500mL灭菌生理盐水洗涤一次过 滤， 两次滤液混合制成孢子悬液， 将此孢子悬浮液置于4冰箱中； 0038 三、 选取颗粒饱满， 大小均匀的黄豆， 称量洗净， 与水以1:3的体积比混合后于30 下浸泡3h， 沥干， 在高温高压灭菌锅下， 于121蒸煮30min， 冷却， 0039 四、 混合接种： 将分子截留量300kDa的木耳多糖截留液和孢子悬液按1:3质量比接 种， 在25的温度下培养48h， 然后经后熟处理48h， 制得毛霉菌型-木耳多糖300kDa豆豉发 酵物。 00。

23、40 具体实施方式六： 本具体实施方式治疗脱发组合物的制备方法按照以下步骤进 说 明 书 3/9 页 6 CN 109223603 A 6 行： 0041 一、 膜分离木耳多糖: 0042 将黑木耳洗净、 除杂、 粉碎后过40目筛， 制成黑木耳干粉， 按照黑木耳干粉与蒸馏 水质量比为140:1的比例将黑木耳干粉加入到蒸馏水中， 然后在超声功率为500w的条件下 超声15min， 水浴浸提3h， 之后将提取液以4500r/min离心10min， 除渣， 然后将提取液配制成 浓度为4g/L、 pH值5.6的料液， 然后在温度为40、 压力为0.17bar的条件下超滤， 得到分子 截留量300kDa。

24、的木耳多糖截留液； 0043 二、 选取颗粒饱满， 大小均匀的黄豆， 称量洗净， 与水以1： 3的体积比比混合后在水 中浸泡10-18小时， 于120灭菌， 得到发酵基质； 0044 三、 每250g发酵基质接种复合液至复合液在混合液中的浓度为2mol/L， 所述复合 液由木耳多糖300kDa截留液和谷草芽孢杆菌按照1:3质量比混合， 摇匀， 于4-8培养72- 120小时， 得到枯草芽孢杆菌-木耳多糖300kDa截留液豆豉发酵物。 0045 采用下述实验验证本发明效果： 0046 实施例1： 治疗脱发组合物的制备方法按照以下步骤进行： 0047 一、 膜分离木耳多糖: 0048 将黑木耳洗净。

25、、 除杂、 粉碎后过40目筛， 制成黑木耳干粉， 按照黑木耳干粉与蒸馏 水质量比为140:1的比例将黑木耳干粉加入到蒸馏水中， 然后在超声功率为500w的条件下 超声15min， 水浴浸提3h， 之后将提取液以4500r/min离心10min， 除渣， 然后将提取液配制成 浓度为4g/L、 pH值5.6的料液， 然后在温度为40、 压力为0.17bar的条件下超滤， 得到分子 截留量300kDa的木耳多糖截留液； 0049 二、 选取颗粒饱满， 大小均匀的黄豆， 称量洗净， 与水以1:3的体积比于30下浸泡 3h， 沥干， 在高温高压灭菌锅下， 121蒸煮30min， 冷却， 加入分子截留量3。

26、00kDa的木耳多糖 截留液， 在25的温度下培养48h， 即得豆豉前发酵产物； 然后经后熟处理48h。 即得黄豆-木 耳多糖300kDa截流液。 0050 实施例2： 治疗脱发组合物的制备方法按照以下步骤进行： 0051 一、 膜分离木耳多糖: 0052 将黑木耳洗净、 除杂、 粉碎后过40目筛， 制成黑木耳干粉， 按照黑木耳干粉与蒸馏 水质量比为140:1的比例将黑木耳干粉加入到蒸馏水中， 然后在超声功率为500w的条件下 超声15min， 水浴浸提3h， 之后将提取液以4500r/min离心10min， 除渣， 然后将提取液配制成 浓度为4g/L、 pH值5.6的料液， 然后在温度为40。

27、、 压力为0.17bar的条件下超滤， 得到木耳 多糖300kDa透过液； 0053 二、 选取颗粒饱满， 大小均匀的黄豆， 称量洗净， 与水以1:3的体积比于30下浸泡 3h， 沥干， 在高温高压灭菌锅下， 121蒸煮30min， 冷却， 加入木耳多糖300kDa透过液， 在25 的温度下培养， 48h， 即得豆豉前发酵产物； 然后经后熟处理48h。 即得黄豆-木耳多糖 300kDa透过液。 0054 实施例3： 治疗脱发组合物的制备方法按照以下步骤进行： 0055 一、 膜分离木耳多糖: 0056 将黑木耳洗净、 除杂、 粉碎后过40目筛， 制成黑木耳干粉， 按照黑木耳干粉与蒸馏 水质量比。

28、为140:1的比例将黑木耳干粉加入到蒸馏水中， 然后在超声功率为500w的条件下 说 明 书 4/9 页 7 CN 109223603 A 7 超声15min， 水浴浸提3h， 之后将提取液以4500r/min离心10min， 除渣， 然后将提取液配制成 浓度为4g/L、 pH值5.6的料液， 然后在温度为40、 压力为0.17bar的条件下超滤， 得到分子 截留量300kDa的木耳多糖截留液； 0057 二、 将毛霉菌种加入无菌生理盐水， 用移液器吸取菌液， 接种于麸皮培养基， 20 下培养96h， 至三角瓶内麸皮长满菌丝和灰色孢子后取出备用， 在培养好的种曲培养瓶中加 入500mL灭菌生理。

29、盐水充分摇匀， 双层纱布过滤， 滤渣再加500mL灭菌生理盐水洗涤一次过 滤， 两次滤液混合制成孢子悬液， 将此孢子悬浮液置于4冰箱中； 0058 三、 选取颗粒饱满， 大小均匀的黄豆， 称量洗净， 与水以1:3的质量比混合后于30 下浸泡3h， 沥干， 在高温高压灭菌锅下， 于121蒸煮30min， 冷却， 0059 四、 混合接种： 将分子截留量300kDa的木耳多糖截留液和孢子悬液按1:3质量比接 种， 在25的温度下培养48h， 然后经后熟处理48h， 制得毛霉菌型-木耳多糖300kDa豆豉发 酵物。 0060 实施例4： 0061 治疗脱发组合物的制备方法按照以下步骤进行： 0062。

30、 一、 膜分离木耳多糖: 0063 将黑木耳洗净、 除杂、 粉碎后过40目筛， 制成黑木耳干粉， 按照黑木耳干粉与蒸馏 水质量比为140:1的比例将黑木耳干粉加入到蒸馏水中， 然后在超声功率为500w的条件下 超声15min， 水浴浸提3h， 之后将提取液以4500r/min离心10min， 除渣， 然后将提取液配制成 浓度为4g/L、 pH值5.6的料液， 然后在温度为40、 压力为0.17bar的条件下超滤， 得到木耳 多糖300kDa透过液； 0064 二、 将毛霉菌种加入无菌生理盐水， 用移液器吸取菌液， 接种于麸皮培养基， 20 下培养96h， 至三角瓶内麸皮长满菌丝和灰色孢子后取出。

31、备用， 在培养好的种曲培养瓶中加 入500mL灭菌生理盐水充分摇匀， 双层纱布过滤， 滤渣再加500mL灭菌生理盐水洗涤一次过 滤， 两次滤液混合制成孢子悬液， 将此孢子悬浮液置于4冰箱中， 作为菌种保存； 0065 三、 选取颗粒饱满， 大小均匀的黄豆， 称量洗净， 与水以1:3的体积比于30下浸泡 3h， 沥干， 在高温高压灭菌锅下， 121蒸煮30min， 冷却， 待用， 将木耳多糖300kDa透过液和 毛霉按1:3的质量比接种， 在25的温度下培养48h， 即得豆豉前发酵产物； 然后经后熟处理 48h， 制得毛霉菌型-木耳多糖300kDa透过液豆豉发酵物。 0066 实施例5： 006。

32、7 治疗脱发组合物的制备方法按照以下步骤进行： 0068 一、 膜分离木耳多糖: 0069 将黑木耳洗净、 除杂、 粉碎后过40目筛， 制成黑木耳干粉， 按照黑木耳干粉与蒸馏 水质量比为140:1的比例将黑木耳干粉加入到蒸馏水中， 然后在超声功率为500w的条件下 超声15min， 水浴浸提3h， 之后将提取液以4500r/min离心10min， 除渣， 然后将提取液配制成 浓度为4g/L、 pH值5.6的料液， 然后在温度为40、 压力为0.17bar的条件下超滤， 得到分子 截留量300kDa的木耳多糖截留液； 0070 二、 选取颗粒饱满， 大小均匀的黄豆， 称量洗净， 与水以1:3的体。

33、积比混合后于30 下浸泡3h， 至含水量45-55， 煮熟， 将熟料冷却至30-40， 然后将分子截留量300kDa 的木耳多糖截留液和曲霉接种液按1:3的质量比接种， 保持室温28， 制曲至20-24小时进 说 明 书 5/9 页 8 CN 109223603 A 8 行第一次翻曲， 28小时进行第二次翻曲， 34小时后出曲， 出曲后洗曲,闷12小时入罐， 置于28 恒温室中保温发酵30天以上， 取出晾干， 即得曲菌型-木耳多糖300kDa截留液豉发酵物。 0071 实施例6： 0072 治疗脱发组合物的制备方法按照以下步骤进行： 0073 一、 膜分离木耳多糖: 0074 将黑木耳洗净、 。

34、除杂、 粉碎后过40目筛， 制成黑木耳干粉， 按照黑木耳干粉与蒸馏 水质量比为140:1的比例将黑木耳干粉加入到蒸馏水中， 然后在超声功率为500w的条件下 超声15min， 水浴浸提3h， 之后将提取液以4500r/min离心10min， 除渣， 然后将提取液配制成 浓度为4g/L、 pH值5.6的料液， 然后在温度为40、 压力为0.17bar的条件下超滤， 得到木耳 多糖300kDa透过液； 0075 二、 选取颗粒饱满， 大小均匀的黄豆， 称量洗净， 与水以1:3的体积比于30下浸泡 3h， 至含水量50， 煮熟， 将熟料冷却至35， 将木耳多糖300kDa透过液和曲霉接种液按1:3 。

35、的质量比接种， 拌匀入室， 保持室温28， 制曲至22小时进行第一次翻曲， 28小时进行第二 次翻曲， 34小时后出曲， 出曲后洗曲,闷12小时入罐， 置于28恒温室中保温发酵30天以上。 取出晾干即得曲菌型-木耳多糖300kDa透过液豆豉发酵物。 0076 实施例7： 0077 治疗脱发组合物的制备方法按照以下步骤进行： 0078 一、 膜分离木耳多糖: 0079 将黑木耳洗净、 除杂、 粉碎后过40目筛， 制成黑木耳干粉， 按照黑木耳干粉与蒸馏 水质量比为140:1的比例将黑木耳干粉加入到蒸馏水中， 然后在超声功率为500w的条件下 超声15min， 水浴浸提3h， 之后将提取液以4500。

36、r/min离心10min， 除渣， 然后将提取液配制成 浓度为4g/L、 pH值5.6的料液， 然后在温度为40、 压力为0.17bar的条件下超滤， 得到分子 截留量300kDa的木耳多糖截留液； 0080 二、 选取颗粒饱满， 大小均匀的黄豆， 称量洗净， 与水以1： 3的质量比混合后在水中 浸泡10-18小时， 于120灭菌， 得到发酵基质； 0081 三、 每250g发酵基质接种复合液至复合液在混合液中的浓度为2mol/L， 所述复合 液由木耳多糖300kDa截留液和谷草芽孢杆菌接种液按照1:3质量比混合， 摇匀， 于4-8培 养72-120小时， 得到枯草芽孢杆菌-木耳多糖300kD。

37、a截留液豆豉发酵物。 0082 实施例8： 0083 治疗脱发组合物的制备方法按照以下步骤进行： 0084 一、 膜分离木耳多糖: 0085 将黑木耳洗净、 除杂、 粉碎后过40目筛， 制成黑木耳干粉， 按照黑木耳干粉与蒸馏 水质量比为140:1的比例将黑木耳干粉加入到蒸馏水中， 然后在超声功率为500w的条件下 超声15min， 水浴浸提3h， 之后将提取液以4500r/min离心10min， 除渣， 然后将提取液配制成 浓度为4g/L、 pH值5.6的料液， 然后在温度为40、 压力为0.17bar的条件下超滤， 得到木耳 多糖300kDa透过液； 0086 二、 选取颗粒饱满， 大小均匀。

38、的黄豆， 称量洗净， 与水以1:3比例在水中浸泡10-18 小时， 于120灭菌， 得到发酵基质； 0087 三、 每250g发酵基质接种复合液至复合液在混合液中的浓度为2mol/L， 所述复合 说 明 书 6/9 页 9 CN 109223603 A 9 液由木耳多糖300kDa透过液和谷草芽孢杆菌接种液按照1:3质量比混合， 摇匀， 于4-8培 养72-120小时， 得到枯草芽孢杆菌-木耳多糖300kDa透过液豆豉发酵物。 0088 实验一： 本发明口服组合物对脂溢性小鼠脱发的抑制实验 0089 1、 实验材料 0090 丙酸睾酮注射液25mg/1ml， 购自宁波第二激素厂， 生产批号： 。

39、11025 0091 色拉油90ml/瓶， 金龙鱼有限公司 0092 成年雄性B6CBAF1/J小鼠， 体重18-22g， 清洁级， 购自北京维通利华实验动物技术 有限公司 【许可证号： SCXK(京)2017-0011】 ， 室温23， 湿度50-60， 每天通风2次， 每次持 续1小时， 按照小鼠的自然生活模式， 使B6CBAF1/J小鼠自由进行自由活动、 饮水和进食。 0093 2、 实验方法 0094 2.1实验分组 0095 100只雄性小鼠中随机选出10只B6CBAF1/J小鼠作为实验空白对照组， 其余90只 B6CBAF1/J小鼠作为实验小鼠， 分笼饲养。 即脱发模型组、 口服组。

40、合物实施例1-8组。 0096 2.2动物模型制备和给药方法 0097 脱发动物模型采用注射给药造模方式， 注射部位为小鼠背部平行于脊柱区皮下， 除空白对照组给予注射生理盐水外， 其余9组给予注射丙酸睾酮， 注射剂量为5mg/kgd， 注 射时间为4周。 0098 在B6CBAF1/J小鼠脱发动物模型成功造模第4周时， 开始给予药物治疗， 除空白组 外， 脱发模型组均灌胃给予各实施例组合物， 给药治疗6周。 观察小鼠脱毛部位小鼠的毛发 生长状况， 统计小鼠脱毛重量； 并结合病理学观察， 与模型组相比， 显微镜下终毛/毳毛的比 值， 计算出平均数。 0099 3.数据统计分析 0100 采用SP。

41、SS 20.0软件进行数据处理， 组间差异采用单因素方差分析， p0.05显著 性差异， 认为具有统计学意义。 0101 4实验结果 0102 (1)脱毛重量测定 0103 由表1可知： 与空白对照组相比， 其他各实验小鼠均发生不同程度的脱毛现象， 除 实施例3、 5、 7存在显著性差异外(p0.05)， 其余各组均存在极显著性差异(p0.01)； 与模型 组相比， 实施例3、 5、 7组小鼠脱毛现象均有所改善(p0.01)， 其他各实施例组均没有显著差 异， 对脱发没有改善趋势。 0104 (2)小鼠终毛/毫毛比例测定 0105 由表2可知， 与空白对照组相比， 模型组的终毛/毫毛的比例显著。

42、下降(p0.01)； 与 模型组相比， 实施例3、 5、 7能明显提高终毛/毫毛的比例(p0.01)， 其他实验例终毛/毫毛比 例没有改变。 0106 (3)本发明口服组合物实施例3、 5、 7对脂溢性脱发有明显改善作用， 表明大豆经菌 种发酵后， 可发挥明显的固发作用。 0107 表1小鼠脱毛重量测定结果 说 明 书 7/9 页 10 CN 109223603 A 10 0108 0109 *与空白对照组相比p0.01； 与模型组相比p0.01。 0110 表2小鼠终毛/毫毛比例测定结果 0111 0112 *与空白对照组相比p0.01； 与模型组相比p0.01。 0113 实验二： 口服组。

43、合物对毛发生长期小鼠毛囊数目的影响 0114 1、 实验材料 0115 松香购自于(深圳市吉田化工有限公司)； 石蜡购自于(奥伟胶业蜡制品)； 成年雌 性C57BL/6小鼠， 体重18-22g， 清洁级， 选择皮色粉红， 毛发属于休止期的小鼠。 购自北京维 通利华实验动物技术有限公司 【许可证号： SCXK(京)2017-0149】 ， 室温23， 湿度50-60， 每天通风2次， 每次持续1小时， 按照小鼠的自然生活模式， 进行自由活动、 饮水和进食。 说 明 书 8/9 页 11 CN 109223603 A 11 0116 2、 实验方法 0117 2.1实验分组 0118 90只雌性C。

44、57BL/6小鼠随机分为9组， 空白对照组， 口服组合物实施例1-8组， 分笼 饲养。 0119 2.2动物模型制备和给药方法 0120 将松香与石蜡1:1混合加热融化后， 均匀涂于小鼠背部， 涂抹面积约2cm3cm， 冷 却凝固后揭去， 以去除背毛(确认毛发生长期处于休止期)。 脱毛次日， 除空白组灌胃给予蒸 馏水外， 其他各组分别灌胃给药， 每天定时给药1次， 灌胃体积为2ml/100g， 连续给药20天。 第20天时， 取各组小鼠背部相同位置皮肤组织块， 用10福尔马林固定， 石蜡包埋切片， 切 片厚约4-5微米， HE染色， 高倍视野(400)的毛囊数， 取其均值， 并进行统计学处理。。

45、 0121 3.数据统计分析 0122 采用SPSS 20.0软件进行数据处理， 组间差异采用单因素方差分析， p0.05显著 性差异， 具有统计学意义。 0123 4实验结果 0124 (1)毛囊密度的影响 0125 实验第20天， 各组小鼠毛囊数目见表3。 与空白对照组相比， 实施例3、 5、 7可增加空 白小鼠的毛囊数目(p 0.05)； 提示大豆发酵物其可诱导C57BL/6小鼠毛囊进入生长期， 延长生长期时间， 并推迟进 入退行期， 具有促进毛囊生长的作用。 0126 表3小鼠脱毛重量测定结果 0127 0128 0129 *与空白对照组相比p0.05， *与空白对照组相比P0.01。 说 明 书 9/9 页 12 CN 109223603 A 12 。