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1、(10)授权公告号 CN 102114093 B (45)授权公告日 2013.03.20 CN 102114093 B *CN102114093B* (21)申请号 201110041130.6 (22)申请日 2011.02.21 A61K 36/725(2006.01) A61P 9/12(2006.01) A61K 31/045(2006.01) A61K 35/62(2006.01) A61K 35/64(2006.01) (73)专利权人 荆志成 地址 200433 上海市杨浦区政民路 507 号 (72)发明人 荆志成 张锐 吴文汇 刘岽 蒋鑫 袁平 (74)专利代理机构 上海世。
2、贸专利代理有限责任 公司 31128 代理人 严新德 宿文军、 肖红 . 加用通心络胶囊治疗肺心病 肺动脉高压的临床观察 .成都医药 .2005, 第 31 卷 ( 第 1 期 ), 第 11 页第 11 段 . (54) 发明名称 通心络在制备治疗肺动脉高压药物中的应用 (57) 摘要 本发明公开了通心络在制备治疗肺动脉高压 药物中的应用， 涉及药物化学领域， 本发明通过实 验证明通心络可降低肺动脉高压大鼠的平均肺动 脉压， 改善心输出量， 降低肺血管阻力， 改善右心 室及肺血管重构。长期使用通心络可有效治疗肺 动脉高压， 改善右心功能。 (51)Int.Cl. (56)对比文件 审查员 郭。
3、洁 权利要求书 1 页 说明书 4 页 附图 2 页 (19)中华人民共和国国家知识产权局 (12)发明专利 权利要求书 1 页 说明书 4 页 附图 2 页 1/1 页 2 1. 通心络在制备治疗药物诱导 / 特发性肺动脉高压药物中的应用。 权 利 要 求 书 CN 102114093 B 2 1/4 页 3 通心络在制备治疗肺动脉高压药物中的应用 技术领域 ： 0001 本发明涉及药物化学领域， 尤其涉及通心络药物的新的用途， 特别是通心络在制 备治疗肺动脉高压药物中的应用。 背景技术 ： 0002 通心络胶囊 ( 中国药典 2005 版一部 -586 页 ) 是运用中医络病学说， 在益气。
4、、 活 血化瘀、 搜风解痉通络的治法指导下， 研制而成的中药复方胶囊， 主要成分为水蛭、 全蝎、 蜈 蚣、 蝉蜕、 土鳖虫五种虫类药物， 配以人参、 赤芍、 冰片、 檀香、 降香、 乳香 ( 制 )、 酸枣仁 ( 炒 ) 等药物而成， 具有益气活血、 通络止痛之功效， 在临床广泛应用于冠心病、 心绞痛、 动脉粥样 硬化、 脑梗塞等心脑血管疾病的预防和治疗。但对于肺血管疾病和肺动脉高压的治疗作用 目前尚未见报道。 发明内容 ： 0003 本发明的目的在于提供通心络在制备治疗肺动脉高压药物中的应用， 所述的通心 络在制备治疗肺动脉高压药物中的这种应用要解决现有技术中未出现通心络对肺血管疾 病和肺动。
5、脉高压的治疗作用的技术问题。 0004 本发明提供了通心络在制备治疗肺动脉高压药物中的应用。 0005 本发明和已有技术相比， 其效果是积极和明显的。本发明通过大鼠肺动脉高压模 型， 给予通心络干预治疗， 明确了通心络对于肺血管的作用。 通心络可降低肺动脉高压大鼠 的平均肺动脉， 改善心输出量， 降低肺血管阻力， 改善右心室及肺血管重构。长期使用通心 络可有效治疗肺动脉高压， 改善右心功能。 附图说明 ： 0006 图 1 是对照组中肺组织 HE 染色照片。 0007 图 2 是 MCT 组中肺组织 HE 染色照片。 0008 图 3 是采用 0.4g/kg 通心络治疗 MCT 所致肺动脉高压。
6、模型后的大鼠肺组织 HE 染 色照片。 0009 图 4 是采用 0.8g/kg 通心络治疗 MCT 所致肺动脉高压模型后的大鼠肺组织 HE 染 色照片。 具体实施方式 ： 0010 实施例 1 0011 一、 材料与方法 0012 1.1 建立大鼠肺动脉高压模型 0013 雄性 SPF 级 SD 大鼠， 体重 200-220g。一次性皮下注射野百合碱 (Monocrotaline， MCT， 40mg/kg)， 3 周后， 随机采用右心导管方法测定肺动脉压力及血流动力学参数， 鉴定是 说 明 书 CN 102114093 B 3 2/4 页 4 否造模成功。 0014 1.2 实验分组及药物。
7、干预 0015 (1) 模型组 (MCT 组 ) ： 10 只大鼠， 肺动脉高压模型建立成功后， 灌胃给予生理盐 水， 连续 3 周。 0016 (2) 通心络小剂量组 (Tongxinluo 0.2gkgd 组 ) ： 10 只大鼠， 肺动脉高压模型 建立成功后， 灌胃给予通心络， 连续 3 周。 0017 (3) 通心络中剂量组 (Tongxinluo 0.4gkgd 组 ) ： 10 只大鼠， 肺动脉高压模型 建立成功后， 灌胃给予通心络， 连续 3 周。 0018 (4) 通心络大剂量组 (Tongxinluo 0.8gkgd 组 ) ： 10 只大鼠， 肺动脉高压模型 建立成功后， 。
8、灌胃给予通心络， 连续 3 周。 0019 (5) 正 常 对 照 组 (Control 组 ) ： 10 只 大 鼠， 正 常 大 鼠， 灌 胃 给 予 生 理 盐 水 (0.5mlkgd)， 连续 3 周。 0020 1.3 血流动力学测定 0021 1.3.1 右心导管法测定给药 3 周后各组动物的平均肺动脉压 (meanpulomonary arterial pressure， mPAP)、 右心室收缩末期压力 (right ventriclesystolic pressure， RVSP)、 心输出量以及心率等参数。具体方法如下 ： 大鼠经 6水合氯醛 (0.6ml/100g) 腹腔。
9、 麻醉， 仰卧固定后分离右侧颈外静脉约 1cm 左右， 结扎远心端， 并作 “V” 形切口， 将与换能器 连接并充满肝素盐水的右心导管 ( 自制末端弯曲 PE 50 导管， 内径 0.6mm， 外径 0.9mm) 插 入， 动物生理多导仪记录右心室收缩末期压力 RVSP、 肺动脉收缩压 (pulmonary arterial systolic pressure， PASP)、 肺动脉舒张压 (pulmonaryarterial diastolic pressure， PADP)， 计算 mPAP。 0022 mPAP(mmHg) 1/3PASP(mmHg)+2/3PADP(mmHg) 0023。
10、 1.3.2 心输出量 (Cardiac Output， CO) 测定 ： 热稀释法测定心输出量。具体方 法 ： 将右心导管回抽至上腔静脉， 分离左侧颈总动脉， 结扎远心端， 剪口， 将穿有温度探测 器的 PE 管插入胸主动脉或腹主动脉。用 1ml 针筒抽取 0-4肝素化生理盐水， 迅速向上 腔静脉推进 0.2-0.3ml， 观察并记录温度曲线的变化， 计算心输出量， 同时计算肺血管阻力 (pulmonary vesselresistance， PVR)。 0024 PVR(Wood) mPAP(mmHg)/CO(mlmin) 0025 1.4 右心室肥厚指数 (right ventricul。
11、ar hypertrophy index， RVHI) 测定 0026 血流动力学测定完毕后， 开胸取出整个心脏， 用预冷生理盐水冲洗， 沿着房室沟剪 去心房及大血管根部， 沿后室壁间沟将右心室游离壁分离， 滤纸吸水后称量右心室游离壁 (RV) 及左心室 + 室间隔 (LV+S) 的重量， 并计算右心室肥厚指数。 0027 右心室肥厚指数 (RVHI) RV/(LV+S)。 0028 1.5 肺组织苏木精 - 伊红 (HE) 染色 0029 处死大鼠后， 取右肺中叶以 10中性甲醛溶液固定 1 天， 石蜡包埋， 沿肺门水平横 切， 厚度约为 5m， 进行 HE 染色。切片经常规二甲苯脱蜡， 经。
12、各级乙醇至水洗， 苏木精染色 5min， 自来水冲洗。根据染色的深浅， 用 0.5盐酸乙醇分化， 自来水浸泡 15min， 置伊红液 2min， 常规脱水， 透明， 封片。 0030 1.6 肺小动脉血管形态分析 说 明 书 CN 102114093 B 4 3/4 页 5 0031 常规 HE 染色， 随机选取直径 100 200m 范围的肺小动脉， 运用 IPP6.0 图像分 析软件测定血管壁厚度 (wall thickness， WT)、 血管外径 (externaldiameter， ED)、 血管总 面积 (total area， TA) 以及血管腔面积 (lumen area， L。
13、A)， 分析 WT和 WA等衡量血管重 构的指标。 0032 WT (2WT/ED)100 0033 WA (TA-LA)/TA100 0034 1.6 统计学处理 0035 数据均采用均值 标准差表示， 组间比较采用 t 检验， 统计处理由 SPSS1.0 完成， 以 P 0.05 为差异有统计学意义。 0036 二、 结果 0037 2.1 大鼠一般情况与死亡情况 0038 对照组及通心络给药组大鼠体毛光泽， 反应敏捷， 饮食正常。MCT 组大鼠逐渐变得 虚弱， 反应迟钝， 蜷缩少动， 体毛暗淡无光泽。 0039 实验动物死亡情况 ： 本实验公用 50 只 SD 大鼠， 死亡 2 只， 均。
14、为 MCT 组， 分别死于实 验第 18 天和 20 天。大鼠死亡前表现为呼吸困难、 口唇发绀。解剖后可见胸腔积液， 腹腔积 液， 肝脏淤血肿胀。 取出心肺后， 大体可见肺部瘀点瘀斑， 短轴横切心脏， 可见右心室游离壁 明显肥厚， 提示大鼠在肺动脉高压病程中发生了右心衰竭。 0040 2.2 血流动力学变化 0041 MCT组大鼠mPAP明显高于对照组， 模型建立成功。 与MCT组相比， 通心络各个剂量 组均可显著降低肺动脉高压大鼠的 mPAP 和 RVSP(p 0.01 或 p 0.05)。通心络各剂量组 均可明显改善肺动脉高压所致心输出量减少， 降低肺血管阻力 (PVR)， 不影响心率。(。
15、 见表 1) 0042 表 1 各组大鼠血流动力学参数比较 0043 0044 p* 0.05， compared with control group ； p* 0.01， compared with MCT group ； 0045 p# 0.05， compared with control group ； p# 0.05， compared with MCT 说 明 书 CN 102114093 B 5 4/4 页 6 group ； 0046 2.3 右心室肥厚指数和肺血管重构 0047 一次性皮下注射MCT21天后， 可见明显的右心室肥厚， RVHI为(0.230.02)， 通心 。
16、络大剂量和小剂量组可明显改善大鼠右心肥厚指数 (p 0.05 或 p 0.01)。大鼠肺中小 动脉图像分析结果可见， 通心络可明显改善肺动脉高压大鼠的右心和肺血管重构。 MCT组大 鼠肺中小动脉 WT和 WA均明显高于正常对照组。通心络组大鼠肺中小动脉 WT和 WA 均明显低于MCT组(p0.01)， 但通心络组大鼠肺中小动脉WT和WA均明显高于对照组 (p 0.05)。( 见表 2) 0048 表 2 各组大鼠中 RVHI， WT and WA比较 0049 0050 p* 0.05， compared with control group ； p* 0.01， compared with 。
17、MCT group ； 0051 p# 0.05， compared with control group ； p# 0.05， compared with MCT group ； 0052 肺组织 HE 染色显示， 对照组大鼠肺小动脉内皮连续性好， 细胞分布均匀， 薄厚一 致 ； MCT 组大鼠内皮细胞连续性破坏， 呈立方形或柱状突向管腔， 中层管壁厚度明显增加， 管腔面积明显变小， 伴有血管周围炎。 通心络剂量组大鼠肺血管小动脉内皮连续性良好， 管 壁厚度较 MCT 组明显减少， 管腔变宽， 血管周围炎症减轻。( 见图 1、 图 2、 图 3 和图 4) 0053 由图 3 和图 4 可知， 通心络能有效抑制 MCT 所致大鼠肺血管微小动脉中层增厚。 0054 三、 结论 0055 通心络可降低肺动脉高压大鼠的平均肺动脉， 改善心输出量， 降低肺血管阻力， 改 善右心室及肺血管重构。长期使用通心络可有效治疗肺动脉高压， 改善右心功能。 说 明 书 CN 102114093 B 6 1/2 页 7 图 1 图 2 说 明 书 附 图 CN 102114093 B 7 2/2 页 8 图 3 图 4 说 明 书 附 图 CN 102114093 B 8 。