芒果苷作为抗真菌药物增效剂的用途.pdf

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1、(10)申请公布号 CN 102204909 A (43)申请公布日 2011.10.05 CN 102204909 A *CN102204909A* (21)申请号 201110087412.X (22)申请日 2011.04.08 A61K 31/4196(2006.01) A61K 31/496(2006.01) A61K 31/4174(2006.01) A61K 31/7048(2006.01) A61K 31/352(2006.01) A61P 31/10(2006.01) (71)申请人 中国人民解放军第二军医大学 地址 200433 上海市杨浦区翔殷路 800 号 (72)发明。

2、人 曹颖瑛 郑泽宇 朱臻宇 徐铮 姜远英 柴逸峰 (74)专利代理机构 上海德昭知识产权代理有限 公司 31204 代理人 丁振英 (54) 发明名称 芒果苷作为抗真菌药物增效剂的用途 (57) 摘要 本发明涉及医药技术领域， 是芒果苷作为抗 真菌药物增效剂的新用途。所说的抗真菌药物为 唑类或多烯类抗真菌药物， 芒果苷在抗真菌药物 有效浓度中加入量为 0.5-16g/ml。实验表明， 芒果苷与氟康唑、 酮康唑、 咪康唑或两性霉素 B 等 抗真菌药物合用时， 不仅能在减少用药量的情况 下确保其对真菌的抗菌效果， 并能使抗真菌药物 恢复对耐药真菌的作用， 因此可用作抗真菌药物 的增效剂。 芒果苷作。

3、为抗真菌药物的增效剂， 可降 低唑类或多烯类等抗真菌药物的用药剂量， 从而 减轻了药物的毒副作用， 尤其是使抗真菌药物恢 复对耐药真菌的作用， 有效治疗真菌感染特别是 耐药性真菌感染， 具有重要的临床应用价值。 (51)Int.Cl. (19)中华人民共和国国家知识产权局 (12)发明专利申请 权利要求书 1 页 说明书 7 页 CN 102204910 A1/1 页 2 1. 芒果苷作为唑类或多烯类抗真菌药物增效剂的用途。 2. 根据权利要求 1 所述的芒果苷作为唑类或多烯类抗真菌药物增效剂的用途， 其特征 在于芒果苷在抗真菌药物有效浓度中的加入量为 0.5 16g/ml 或 0.5 16g。

4、/mg。 3. 根据权利要求 2 所述的芒果苷作为唑类或多烯类抗真菌药物增效剂的用途， 其特征 在于芒果苷在抗真菌药物有效浓度中的加入量为 2g/ml 8g/ml 或 2g/ml 8g/ mg 。 4. 根据权利要求 1 或 2 或 3 所述的芒果苷作为抗真菌药物增效剂的用途， 其特征在于 所说的唑类或多烯类抗真菌药物为氟康唑、 酮康唑、 咪康唑或两性霉素 B。 权 利 要 求 书 CN 102204909 A CN 102204910 A1/7 页 3 芒果苷作为抗真菌药物增效剂的用途 技术领域 0001 本发明涉及医药技术领域， 是芒果苷作为抗真菌药物增效剂的新用途。 背景技术 0002 。

5、唑类 ( 包括咪唑类、 三唑类 ) 及多烯类等抗真菌药物是临床上常用的能有效治疗 深部及浅表部真菌感染的抗真菌药， 如咪唑类中的酮康唑、 克霉唑、 咪康唑、 益康唑等 ； 三唑 类中的氟康唑、 伊曲康唑和伏立康唑等 ； 多烯类中的两性霉素 B 等。但由于众所周知的原 因， 临床上的耐药菌株越来越普遍， 致使不得不加大用药剂量， 某些抗真菌药物甚至加大用 药量也无效。加大用药剂量必然会增加毒副作用， 尤其如酮康唑等对肝脏或心脏有毒副作 用的药物， 从而限制了这些药物在临床上的应用。 0003 芒果苷 (mangiferin)， 又名芒果素、 知母宁， 是一种四羟基吡酮的碳糖苷， 属双苯 吡酮类化。

6、合物， 存在于多种植物中， 如漆树科芒果树， 百合科知母等， 其结构如式 (I) 所示。 0004 0005 药理实验表明， 芒果苷具有多种生物学活性， 如抗炎、 抗氧化、 抗糖尿病、 抗菌、 抗 病毒、 免疫调节等。但至今未见芒果苷可作为唑类或多烯类等抗真菌药物增效剂的报道。 发明内容 0006 本发明的目的是对芒果苷提供一种作为抗真菌药物增效剂的新用途。所说的抗 真菌药物是唑类或多烯类等抗真菌药物， 芒果苷的用量为在抗真菌药物有效浓度中加入 0.5 16g/ml 或 0.5 16g/mg， 优选用量为 2g/ml 8g/ml 或 2g/ml 8g/ mg。例如， 在每毫升含氟康唑、 酮康唑。

7、、 咪康唑或两性霉素 B 0.031 1 微克的液体制剂中， 加入芒果苷 0.5 16 微克 ； 或者在每毫克含氟康唑、 酮康唑、 咪康唑或两性霉素 B0.031 1 微克的固体制剂中加入芒果苷 0.5 16 微克。 0007 经实验表明， 当抗真菌药物与芒果苷合用时， 芒果苷能降低抗真菌药物的用药剂 量， 不仅能在减少抗真菌药物用药量的情况下确保其对真菌的抗菌效果， 而且对于临床分 离的耐药性菌株或实验室诱导的耐药性菌株均具有明显的增效作用， 还能使已被认为对耐 药真菌治疗无效的抗真菌药物恢复对耐药真菌的作用。 因此芒果苷可用作抗真菌药物的增 效剂， 用于不同深部或浅表真菌感染的治疗。 说 。

8、明 书 CN 102204909 A CN 102204910 A2/7 页 4 0008 本发明为芒果苷开辟了一种新用途， 作为抗真菌药物的增效剂， 可降低唑类或多 烯类等抗真菌药物的用药剂量， 从而减轻了药物的毒副作用， 特别是氟康唑、 酮康唑、 咪康 唑及两性霉素 B 等。尤其是芒果苷作为抗真菌药物的增效剂， 使抗真菌药物恢复对耐药真 菌的作用， 有效治疗真菌感染特别是耐药性真菌感染， 具有重要的临床应用价值。 具体实施方式 0009 下面结合实施例对本发明作进一步说明， 但本发明的保护范围不限于实施例。 0010 实施例 1 ： 芒果苷和氟康唑合用对不同临床真菌株的作用。 0011 材。

9、料和方法 0012 1. 试药 ： 0013 芒果苷 ： 中国药品生物制品检定所 ( 下同 )。 0014 氟康唑 ： 辉瑞制药有限公司 ( 下同 )。 0015 二甲亚砜 ： 中国医药 ( 集团 ) 上海化学试剂公司。 0016 芒果苷的浓度为 8mg/ml， 氟康唑的浓度为 2mg/ml， 受试药物于 -20保存。实验 前， 将药物贮存液取出置 35温箱融化， 充分混匀， 分别进行药效学试验。 0017 2. 菌株 ： 0018 白念珠菌、 克柔氏念珠菌和羊毛状小孢子菌临床株， 由上海长海医院真菌室提供， 均经形态学和生化学鉴定。 0019 所有实验用菌株均于沙堡葡萄糖琼脂培养基(SDA)。

10、划板活化， 于35培养1周后， 分别挑取单克隆再次划板活化， 取第二次所得单克隆置 SDA 斜面， 用上述方法培养后于 4 保存备用。 0020 3. 培养液 ： 0021 RPMI 1640培养液 ： RPMI 1640(Gibco BRL公司)10.0g， NaHCO32.0g， 吗啡啉丙磺酸 (Sigma)34.5g， 加三蒸水900ml溶解， 1N NaOH调pH至7.0， 定容至1000ml， 滤过消毒， 4保 存。 0022 沙堡葡萄糖琼脂(SDA)培养基 ： 蛋白胨10g， 葡萄糖40g， 琼脂18g， 加三蒸水900ml 溶解， 加入浓度为 2mg/ml 氯霉素水溶液 50ml。

11、， 调整 pH 至 7.0， 定容至 1000ml， 高压灭菌后 4保存。 0023 YEPD培养液 ： 酵母浸膏10g， 蛋白胨20g， 葡萄糖20g， 加三蒸水900ml溶解， 加入浓 度为 2mg/ml 氯霉素水溶液 50ml， 定容至 1000ml， 高压灭菌后 4保存。 0024 4. 仪器 ： 0025 隔水式电热恒温培养箱 ( 上海跃进医疗器械厂 ) ； 0026 THZ-82A 台式恒温振荡器 ( 上海跃进医疗器械厂 ) ； 0027 511 型酶标分析仪 ( 上海第三分析仪器厂 ) ； 0028 5. 菌液制备 ： 0029 (1) 念珠菌菌液 0030 从 4保存的 SDA。

12、 培养基上挑取念珠菌少量， 接种至 1mlYEPD 培养液， 于 30以 200rpm 振荡培养活化， 使真菌处于指数生长期后期。取该菌液至 1mlYEPD 培养液中， 用上 述方法再次活化 16 小时后， 用血细胞计数板计数， 以 RPMI 1640 培养液调整菌液浓度至 说 明 书 CN 102204909 A CN 102204910 A3/7 页 5 3103 5103个 /ml。 0031 (2) 羊毛状小孢子菌菌液 0032 从 4保存的 SDA 培养基上挑取丝状菌少量接种至 SDA 斜面， 于 35培养一周后， 再次挑取少量丝状菌接种至 SDA 斜面， 于 35培养一周。实验前加。

13、适量 RPMI 1640 培养液 于 SDA 斜面， 用吸管吹打菌落， 使真菌孢子游离于 RPMI 1640 培养液中， 然后经四层无菌纱 布过滤。培养液经血细胞计数板计数后， 加 RPMI 1640 培养液调整孢子浓度至 3103 5103个 /ml 的浓度。 0033 6. 药敏板制备 ： 0034 取无菌96孔板， 于每排1号孔加RPMI 1640培养液100l作空白对照 ； 311号 孔加入新鲜配制的菌液 100l ； 2 号孔分别加入菌液 196l 和氟康唑溶液 2l。在 2 号 孔加入相应浓度的芒果苷 2l， 3 11 号孔加入芒果苷 1l。 0035 对211号孔进行倍比稀释， 。

14、使211号孔的最终氟康唑浓度分别为64、 32、 16、 8、 4、 2、 1、 0.5、 0.25 和 0.125g/ml ； 1 号孔为不含药物的 RPMI 1640 培养液， 作为阴性对 照， 12 号孔为不含药物的菌液 100l， 作为阳性对照。各药敏板于 30培养。 0036 7.MIC80值判定 ： 0037 含菌 96 孔板分别于 30培养 24 小时或一周后， 按常规用酶标分析仪于 620nm 测 各孔OD值。 与阳性对照孔比， 以OD值下降80以上的最低浓度孔中的药物浓度为MIC80(真 菌生长 80被抑制时的药物浓度 )。 0038 当药物的MIC80值超过测定浓度范围时，。

15、 按以下方法进行统计 ： MIC80值高于最高浓 度 64g/ml 时， 计为 “ 64g/ml” 。上述实验均平行操作 2 到 3 次， 当 MIC80值能准确重 复时才被接受 ； 当 MIC80值相差一个浓度以上时， 则需要重新实验， 直到符合要求为止。 0039 实验结果见表 1， 表 2。 0040 表 1 芒果苷与氟康唑单用和合用时， 5 株临床白念珠菌的 MIC80值 0041 0042 注 ： Flu 表示氟康唑 ( 下同 )。 0043 表 2 芒果苷与氟康唑单用和合用时， 3 株临床克柔氏念珠菌和羊毛状小孢子菌的 MIC80值 说 明 书 CN 102204909 A CN 。

16、102204910 A4/7 页 6 0044 0045 由表 1 和表 2 可见， 合用时， 1 4g/ml 的芒果苷可使白念珠菌对氟康唑的 MIC80 值下降1664倍， 28g/ml的芒果苷可使临床克柔氏念珠菌和羊毛状小孢子菌对氟康 唑的 MIC80值从 64 降为 1， 说明芒果苷能明显增强氟康唑的抗真菌作用。 0046 实施例 2 ： 芒果苷与氟康唑合用对不同临床和实验室诱导耐药株的作用 0047 材料和方法 0048 1. 试药 ： 0049 芒果苷和氟康唑来源同上。 0050 二甲亚砜 ： 中国医药 ( 集团 ) 上海化学试剂公司。 0051 芒果苷的浓度为 8mg/ml， 氟康。

17、唑的浓度为 2mg/ml， 受试药物于 -20保存。实验 前， 将药物贮存液取出置 35温箱融化， 充分混匀， 分别进行药效学试验。 0052 2. 菌株 ： 0053 临床耐药株 ： 白念珠菌， 由上海长海医院真菌室提供， 经形态学和生化学鉴定确 认。 0054 实验室诱导耐药株 ： 白念珠菌 (SC5314-R、 Y01-R) 为白念珠菌标准株 SC5314、 ATCC76625 经氟康唑诱导形成的耐药株， 经形态学和生化学鉴定确认。 0055 其它实验步骤与方法同实施例 1。 0056 实验结果见表 3、 表 4。 0057 表 3 芒果苷与氟康唑单用和合用时， 2 株实验室诱导白念珠菌。

18、耐药株的 MIC80值 0058 0059 表 4 芒果苷与氟康唑单用和合用时， 5 株临床白念珠菌耐药株的 MIC80值 说 明 书 CN 102204909 A CN 102204910 A5/7 页 7 0060 0061 由表 3、 表 4 可以看出， 原先对氟康唑耐药的临床白念珠菌 MIC80值 64， 合用时， 2 8g/ml 的芒果苷即可使氟康唑的 MIC80值下降为 0.125 0.25g/ml， 对实验室诱导 的白念珠菌， 合用时， 2g/ml 的芒果苷即可使氟康唑的 MIC80值下降为 0.125g/ml， 表明 芒果苷能使耐药菌株恢复对药物的敏感性， 大大增强氟康唑的抗菌。

19、效力。 0062 实施例 3 ： 芒果苷与咪康唑、 酮康唑的联合用药 0063 材料和方法 0064 1. 试药 ： 0065 芒果苷 ： 中国药品生物制品检定所。 0066 氟康唑 ： 辉瑞制药有限公司。 0067 酮康唑 ： 中国药品生物制品检定所。 0068 咪康唑 ： 中国药品生物制品检定所。 0069 二甲亚砜 ： 中国医药 ( 集团 ) 上海化学试剂公司。 0070 芒果苷的浓度为 8mg/ml， 咪康唑和酮康唑的浓度为 6.4mg/ml， 受试药物于 -20 保存。实验前， 将药物贮存液取出置 35温箱融化， 充分混匀， 分别进行药效学试验。 0071 其它实验步骤与方法同实施例。

20、 1。 0072 实验结果见表 5， 表 6。 0073 表 5 芒果苷与咪康唑单用和合用时， 3 株临床白念珠菌耐药株的 MIC80值 0074 0075 注 ： Micon 表示咪康唑。 0076 表 6 芒果苷与酮康唑单用和合用时， 3 株临床白念珠菌耐药株的 MIC80值 说 明 书 CN 102204909 A CN 102204910 A6/7 页 8 0077 0078 注 ： Ketocon 表示酮康唑。 0079 由表 5、 6 可见， 芒果苷不但可对氟康唑合用产生增效作用， 而且对咪康唑、 酮康唑 等抗真菌药同样具有抗菌增效作用。合用时， 2 8g/ml 的芒果苷即可使咪康。

21、唑、 酮康唑 对耐药白念珠菌的 MIC80值从 32 64g/ml 下降为 0.125 0.5g/ml。 0080 实施例 4 ： 芒果苷与两性霉素 B 的联合用药 0081 材料和方法 0082 1. 试药 ： 0083 芒果苷 ： 中国药品生物制品检定所。 0084 氟康唑 ： 辉瑞制药有限公司。 0085 两性霉素 B ： 中国药品生物制品检定所。 0086 二甲亚砜 ： 中国医药 ( 集团 ) 上海化学试剂公司。 0087 芒果苷的浓度为 8mg/ml， 两性霉素 B 的浓度为 6.4mg/ml， 受试药物于 -20保存。 实验前， 将药物贮存液取出置 35温箱融化， 充分混匀， 分别。

22、进行药效学试验。 0088 其它实验步骤与方法同实施例 1。 0089 实验结果见表 7。 0090 表 7 芒果苷与两性霉素 B 单用和合用时， 5 株临床白念珠菌的 MIC80值 0091 0092 注 ： AmB 表示两性霉素 B。 0093 由表 7 可见， 芒果苷不但可与唑类抗真菌药物合用产生增效作用， 而且对多烯类 抗真菌药物两性霉素B同样具有抗菌增效作用。 合用时， 18g/ml的芒果苷即可使两性 霉素 B 对白念珠菌的 MIC80值从 1 2g/ml 下降为 0.062 0.031g/ml。 说 明 书 CN 102204909 A CN 102204910 A7/7 页 9 0094 综上所述， 芒果苷与唑类或多烯类抗真菌药物合用能产生增效作用， 因此可用作 唑类或多烯类抗真菌药物的增效剂。 说 明 书 CN 102204909 A 。