一种治疗ER阴性乳腺癌的药物.pdf

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1、(10)申请公布号 CN 102204927 A (43)申请公布日 2011.10.05 CN 102204927 A *CN102204927A* (21)申请号 201110153926.0 (22)申请日 2011.06.09 A61K 33/36(2006.01) A61K 47/42(2006.01) A61P 15/14(2006.01) A61P 35/00(2006.01) A61K 31/138(2006.01) (71)申请人 郑州大学 地址 450001 河南省郑州市高新区科学大道 100 号 (72)发明人 王留兴 陆士新 樊青霞 张伟杰 王瑞林 赵培荣 (74)专利。

2、代理机构 郑州联科专利事务所 ( 普通 合伙 ) 41104 代理人 时立新 (54) 发明名称 一种治疗 ER 阴性乳腺癌的药物 (57) 摘要 一种治疗 ER 阴性乳腺癌的药物， 属于制药技 术领域， 其有效成份为三氧化二砷和三苯氧胺。 实 验证实， 三氧化二砷与三苯氧胺联用后效果明显 ； 对于接种后的 BALB/c-nu 雌性裸鼠， 该组和药物 对瘤体积的抑制率达到了 77.42%， 瘤重抑制率达 到 76.28%。此外， 本发明还在药物剂型上做了改 进 ： 先将三氧化二砷用胶原包裹， 然后再与三苯 氧胺混合， 添加适量稀释剂后制成散剂、 片剂或胶 囊等口服剂型。用常见的食物成份水溶性胶。

3、原做 载体， 对三氧化二砷的包封率高且操作简单， 能够 在降低三氧化二砷胃肠道副作用的同时延长其体 内留存时间， 保持长时间有效的血药浓度， 在维持 药物有效的同时， 大大方便了患者用药， 减轻了患 者的注射痛苦。 (51)Int.Cl. (19)中华人民共和国国家知识产权局 (12)发明专利申请 权利要求书 1 页 说明书 5 页 CN 102204928 A1/1 页 2 1. 一种治疗 ER 阴性乳腺癌的药物， 其特征在于， 该药物的有效成份为三氧化二砷和三 苯氧胺。 2. 如权利要求 1 所述的药物， 其特征在于， 所述药物中三氧化二砷和三苯氧胺的重量 比为 1:14。 3. 如权利要。

4、求 1 或 2 所述的药物， 其特征在于， 所述药物是由三氧化二砷胶原颗粒、 三 苯氧胺以及药学上可接受的稀释剂制成的散剂、 颗粒剂、 片剂或胶囊剂。 4. 如权利要求 3 所述的药物， 其特征在于， 所述稀释剂为淀粉、 糖粉、 糊精、 乳糖或微晶 纤维素。 5. 如权利要求 3 所述的药物， 其特征在于， 所述三氧化二砷胶原颗粒通过以下方法制 得 ： 取 210 重量份的水溶性胶原溶解到 pH=23 的稀酸中配制成浓度为 0.52wt% 的溶液， 然后取 1 重量份三氧化二砷用水溶解后与之混合 ； 将混合溶液浓缩、 干燥并粉碎成颗粒即 得。 6. 如权利要求 5 所述的药物， 其特征在于， 。

5、所述稀酸由柠檬酸或醋酸配制而成。 权 利 要 求 书 CN 102204927 A CN 102204928 A1/5 页 3 一种治疗 ER 阴性乳腺癌的药物 技术领域 0001 本发明属于制药技术领域， 具体涉及一种治疗 ER 阴性乳腺癌的药物。 背景技术 0002 乳腺癌是女性最常见的恶性肿瘤之一， 其发病率呈逐年增多的趋势， 目前已跃居 40-55 岁女性死因首位。在众多乳腺癌患者中， 约有 30-40% 为 ER 阴性乳腺癌， 与 ER 阳性乳 腺癌相比， 阴性乳腺癌的恶性程度更高， 不仅术后易复发和转移， 更重要的是 ER 阴性乳腺 癌患者对三苯氧胺 (TAM) 等内分泌治疗药物不。

6、敏感， 除化疗外目前尚无有效治疗策略。 0003 DNA 甲基化状态的改变被认为是肿瘤形成过程中最为普遍的一种现象， 基因启动 子区的过甲基化也被证实是一种引起基因功能缺失的常见机制。近期研究表明， ER 基因缺 失、 突变等遗传改变的发生率较低 , 推测与其启动子区 CpG 岛甲基化有关。与甲基化进程 有关的是 DNA 甲基转移酶 （DNMT） 家族成员有 DNMT1、 DNMT3a 和 DNMT3b， 其中 DNMT1 是 DNA 复制后维持甲基化的关键酶。因此， 设法抑制 DNA 甲基转移酶的活性、 降低基因的甲基化水 平、 恢复 ER 阴性乳腺癌患者的 ER 表达， 有可能给予此类患者。

7、重获内分泌治疗的机会。 发明内容 0004 本发明的目的在于针对 ER 阴性乳腺癌患者提供了一种有效的治疗药物。 0005 基于上述目的， 本发明采取了如下技术方案 ： 一种治疗 ER 阴性乳腺癌的药物， 其 特征在于， 该药物的有效成份为三氧化二砷和三苯氧胺。 0006 所述药物中三氧化二砷和三苯氧胺的重量比为 1:14。 0007 所述药物是由三氧化二砷胶原颗粒、 三苯氧胺以及药学上可接受的稀释剂制成的 散剂、 颗粒剂、 片剂或胶囊剂。 0008 所述稀释剂为淀粉、 糖粉、 糊精、 乳糖或微晶纤维素。 0009 所述三氧化二砷胶原颗粒通过以下方法制得 ： 取 210 重量份药学上可接受的水。

8、 溶性胶原溶解到 pH=23 的稀酸中配制成浓度为 0.52wt% 的溶液， 然后取 1 重量份三氧化 二砷用水溶解后与之混合 ； 将混合溶液浓缩、 干燥并粉碎成颗粒即得。 0010 所述稀酸由柠檬酸或醋酸配制而成。 0011 三苯氧胺是化学合成的非甾体抗雌激素类抗癌药， 其与雌二醇竞争胞内雌激素受 体， 与受体形成稳定的复合物并转运于核内， 使胞内雌激素受体被耗竭， 阻断雌二醇体内吸 收， 从而可以抑制雌激素依赖性乳腺癌的生长。本药由帝国化学工业公司 （ICI） 研制开发， 1971 年首次应用于临床， 1978 年获美国 FDA 批准， 其近期有效率高达 55%-60% 且少有不良 反应，。

9、 是激素受体阳性各期乳腺癌内分泌治疗的首选药物。 0012 三氧化二砷 (As2O3) 俗称砒霜， 作为传统中药已经有 2000 多年历史。近年来， 国 内学者应用 As2O3治疗急性早幼粒细胞白血病取得了令人瞩目的成就， 因而一直被认为有 剧毒的传统中药 As2O3又引起了人们的关注， 并开展了治疗血液肿瘤如淋巴瘤、 多发性骨髓 瘤， 实体瘤如前列腺癌、 肾癌、 肝癌等的研究。 目前， 有关三氧化二砷抗肿瘤作用的研究主要 说 明 书 CN 102204927 A CN 102204928 A2/5 页 4 集中于凋亡上， 其用药方式以注射为主。 0013 本发明通过实验证实， As2O3能够。

10、竞争利用 S- 腺苷蛋氨酸， 直接和间接地抑制甲 基化转移酶， 从而发挥去甲基化作用， 恢复 ER 阴性乳腺癌细胞的 ER 表达， 使患者对内分泌 治疗重获敏感性。动物实验结果显示， 对于接种成瘤后的 BALB/c-nu 雌性裸鼠， 4mg/kdd As2O3 的施药量对肿瘤具有良好的抑制作用， 瘤体积抑制率为 61.29%， 瘤重抑制率可达 66.80%。而 As2O3与 TAM 联用后显示了更加明显的效果， 4mg/kgd As2O3 +5mg/kgd TAM 的施药量可使瘤体积抑制率达到 77.42%， 瘤重抑制率达 76.28%。 0014 为减轻患者的注射痛苦， 便于患者自行用药， 。

11、除疗效之外， 本发明还在剂型上做了 改进， 即 ： 先将三氧化二砷用胶原包裹， 然后再与三苯氧胺混合， 添加适量稀释剂后制成散 剂、 片剂或胶囊等口服剂型。 三氧化二砷作为传统剧毒， 直接口服会对胃肠道产生较大刺激 性。本发明用常见的食物成份水溶性胶原做载体， 对三氧化二砷的包封率高且操作简 单， 能够在降低三氧化二砷胃肠道副作用的同时延长其体内留存时间， 保持长时间有效的 血药浓度。 具体实施方式 0015 实施例 1 一种治疗ER阴性乳腺癌的药物 （胶囊剂） ， 以重量份计， 由5份三氧化二砷、 20份三苯氧 胺、 10 份水溶性胶原、 165 份糖粉通过以下方法制得 ： 将水溶性胶原溶解。

12、到 pH=3 的稀柠檬酸中配制成浓度为 0.5wt% 的溶液， 然后取 1 重量 份三氧化二砷用水溶解后与之混合 ； 将混合溶液浓缩、 干燥、 粉碎， 过 100 目筛， 得到三氧化 二砷胶原颗粒。 0016 将三氧化二砷胶原颗粒、 三苯氧胺与糖粉混匀后装入胶囊， 每粒 200mg。 0017 每天 1 粒， 连续服用 1428 天。 0018 实施例 2 一种治疗ER阴性乳腺癌的药物 （片剂） ， 以重量份计， 由5份三氧化二砷、 5份三苯氧胺、 30 份水溶性胶原、 160 份微晶纤维素通过以下方法制得 ： 将水溶性胶原溶解到 pH=2 的稀醋酸中配制成浓度为 1wt% 的溶液， 然后取 。

13、1 重量份三 氧化二砷用水溶解后与之混合 ； 将混合溶液浓缩、 干燥、 粉碎后过 120 目筛， 得到三氧化二 砷胶原颗粒。 0019 将三氧化二砷胶原颗粒、 三苯氧胺与微晶纤维素混匀后直接压片， 每片 200mg。 0020 每天一片， 连续服用 1428 天。 0021 实施例 3 一种治疗ER阴性乳腺癌的药物 （颗粒剂） ， 以重量份计， 由5份三氧化二砷、 10份三苯氧 胺、 50 份水溶性胶原、 135 份糊精通过以下方法制得 ： 将水溶性胶原溶解到 pH=2 的稀醋酸中配制成浓度为 2wt% 的溶液， 然后取 1 重量份三 氧化二砷用水溶解后与之混合 ； 将混合溶液浓缩、 干燥、 。

14、粉碎后过 80 目筛， 即得三氧化二砷 胶原颗粒。 0022 将三氧化二砷胶原颗粒、 三苯氧胺和糊精混合均匀并加水雾湿， 造粒， 过 60 目筛， 得颗粒剂。 说 明 书 CN 102204927 A CN 102204928 A3/5 页 5 0023 每天服用 200mg， 连续服用 1428 天。 0024 药物试验 一、 药效体外实验 1.1 实验方法 将人源性雌激素受体阴性乳腺癌细胞株MDA-MB-435s细胞接种于96孔板中， 每孔 103-104个， 每孔体积 200ul， 分作空白组和 4 个试验组。同时设阳性对照组， 接种雌激素受 体阳性细胞 MCF-7。24 小时细胞贴壁后。

15、吸出原培养液， 各试验组加入新鲜配制的含有不同 浓度 As2O3（0.5mol/L、 1mol/L、 2mol/L、 4mol/L） 的培养液 200ul， 空白组和阳性对 照组分别加入 200ul 不含 As2O3的新鲜培养液 ； 继续培养 48 小时后， 每孔加入含 2mol/L TAM 的培养液培养 24 小时。每天同一时间拿出一个板进行 MTT 检测， 检测结果如表 1 所示。 0025 实验结果 表 1 结果显示， MDA-MB-435s 细胞经不同浓度的 As2O3作用 48h 后又加 TAM 作用 24h， 各组细胞增殖均明显受到抑制， 抑制率随着剂量的增加而升高。 0026 表。

16、 1 TAM 作用于不同浓度 As2O3处理 MDA-MB-435 细胞 48h 后的细胞增殖抑制率 二、 药效动物实验 2.1 实验方法 选取 36 只 BALB/c-nu 雌性裸鼠 （上海斯莱克实验动物有限公司） ， SPF 级， 4-5 周龄， 体 重 14-16g， 随机分成 6 组， 即 ： 阴性对照组 （A 组） 、 试验组 （B-F 组） 。 0027 裸鼠接种 ： 细胞密度调整至 1107/ml， 按照 0.2ml/ 只的量接种于裸鼠右侧第二 乳腺乳垫处， 一周后成瘤率 100%。 0028 各组用药及剂量 ： A 组 ： 0.2ml 生理盐水 ； B 组 ： TAM(5mg/。

17、kgd) ； C 组 ： As2O3(2mg/ kg d) ； D 组 ： As2O3(2mg/kg d)+TAM（5mg/kg d） ； E 组 ： As2O3(4mg/kd d) ； F 组 ： As2O3(4mg/ kdd) +TAM（5mg/kgd） 第 14 天开始用药， A 组以 0.2ml 生理盐水灌胃， BF 组按照每只 鼠每日的剂量要求将As2O3配制成0.2ml液体， 进行腹腔注射， 每日1次 ； 用三蒸水将TAM配 成 1ml 液体， 灌胃， 每日一次 ； 每组给药 28 天。观察用药后裸鼠的毒副反应， 每隔七天记录 裸鼠体重的变化和瘤块大小 , 绘制瘤体积生长曲线 ( 。

18、游标卡尺测量瘤体长径 a 和横径 b， 瘤体积 =(ab2)/2)。用药结束后第 2d 处死裸鼠， 完整剥取肿瘤， 分别用电子天平称重、 用 游标卡尺测量尺寸 , 计算瘤重抑制率和瘤体积抑制率。瘤重抑制率 =( 阴性对照组平均瘤 重 - 试验组平均瘤重阴性对照组平均瘤重 )100% ； 瘤体积抑制率 =( 阴性对照组平均瘤 体积 - 试验组平均瘤体积 / 阴性对照组平均瘤体积 )100%。测量结果列于表 2。 0029 实验结果 从表 2 可以看出， E 组 （4mg As2O3） 及 F 组 （ 4mg As2O3 + TAM（5mg/kg d） ） 的肿瘤抑 说 明 书 CN 102204。

19、927 A CN 102204928 A4/5 页 6 制效果最强， 其他各用药组与生理盐水组相比瘤体积均明显缩小， 提示任何有效量的三氧 化二砷都对裸鼠移植瘤有抑制作用， 且联用三苯氧胺后效果更加明显。 0030 表 2 不同药物对移植瘤生长的抑制结果 (S, n=6) 三、 兔药代动力学试验 3.1 实验方法 取 10 只体重 2-2.5kg 的健康家兔随机分成两组， 每组 5 只， 即对照组和试验组。对照 组按照 5mg/kg 的剂量耳缘静脉注射 As2O3液， 试验组灌胃 200mg/kg As2O3- 胶原颗粒组， 分 别在用药后 0.5h、 1h、 2h， 4h， 8h， 12h，。

20、 24h， 48h 共 8 个时相点采用氢化物发生原子荧光分 光光谱法测定血药浓度， 采用 PKS 程序进行房室模型的拟合并计算药代动力学参数。 测定 结果参见表 3 和表 4. 3.2 实验结果 从表 3 可以看出， 分别给予两种剂型后， 在 0.5h、 1h 和 2h 三个时相点， 试验组血浆药物 浓度均低于相应时间对照组的药物浓度 ； 此后时相点， 试验组血药浓度高于对照组。 试验组 Cmax 为 872.5035.54g /L， 对照组 Cmax 为 1209.5036.50g /L。 0031 表 3 不同给药组不同时相点的血药浓度 （g /L， x s, n 10） 这些数据表明，。

21、 将 As2O3制成胶原颗粒后， 其在血液中消除减慢， 提示胶原颗粒对 As2O3 有缓释作用， 可延长其在循环系统内的滞留时间， 进而延长 As2O3在血浆中的维持时间， 进 一步提高药效。 0032 表 4 不同给药组的血浆药代动力学参数 （ x s,n=10） 说 明 书 CN 102204927 A CN 102204928 A5/5 页 7 表 4 的血浆药代动力学参数也显示， As2O3制成胶原颗粒后， 在血中消除减慢， 提示胶原 颗粒对As2O3有缓释作用， 可延长其在循环系统内的滞留时间进一步提高药效。 血中 t1/2 明显延长及 CLS 明显减低， 我们推测可能是因为其被动靶向于肝、 脾等脏器， 并逐渐将药物 缓慢释放回血液中所致。 说 明 书 CN 102204927 A 。