用于治疗丙型肝炎的化合物 对相关申请的交叉参考 本申请要求 2008 年 3 月 27 日提交的美国临时申请 61/039976 的优先权。技术领域
本发明总体涉及新颖的式 I 化合物包括它们的盐， 所述化合物具有抗丙型肝炎病 毒 (HCV) 的活性且可用于治疗感染 HCV 的那些患者。本发明还涉及使用这些化合物的组合 物和使用这些化合物的方法。背景技术
丙型肝炎病毒 (HCV) 是主要的人类病原体， 其在世界范围内感染估计一亿七千万 人， 大致是 1 型人类免疫缺陷病毒感染数量的 5 倍。这些 HCV 感染个体中相当大的部分发 展成严重的进行性肝脏疾病， 包括肝硬化和肝细胞癌 (Lauer， G.M. ； Walker， B.D.N.Engl. J.Med.2001， 345， 41-52)。 HCV 是正链 RNA 病毒。基于对所推断氨基酸序列进行的比较和 5’ - 非翻译区的广 泛相似性， 已经把 HCV 归类为黄病毒科中独立的属。黄病毒科的所有成员都具有包封的病 毒体， 其含有的正链 RNA 基因组通过翻译单一的连续的可读框而编码所有已知的病毒专属 性蛋白质。
在整个 HCV 基因组的核苷酸和所编码的氨基酸序列中发现了相当程度的异质性。 已经表征了至少 6 种主要的基因型， 且已经描述了多于 50 种的亚型。HCV 的主要基因型在 世界范围内的分布是不同的， 且 HCV 遗传异质性的临床重要性仍然是难以确定的， 尽管对 基因型对发病和治疗的可能影响行了大量的研究。
单链 HCV RNA 基因组的长度大约是 9500 个核苷酸， 且具有单一的可读框 (ORF)， 其编码由大约 3000 个氨基酸组成的单一的大的多蛋白。在被感染的细胞中， 这种多蛋白在 多个位点被细胞蛋白酶和病毒蛋白酶裂解， 从而产生结构蛋白和非结构 (NS) 蛋白。就 HCV 来说， 成熟的非结构蛋白 (NS2、 NS3、 NS4A、 NS4B、 NS5A 和 NS5B) 的产生受到两种病毒蛋白酶 的影响。 认为第一种病毒蛋白酶是金属蛋白酶， 且在 NS2-NS3 接合处进行裂解 ； 第二种病毒 蛋白酶是包含在 NS3 的 N- 末端区域内的丝氨酸蛋白酶 ( 也称为 NS3 蛋白酶 )， 且介导 NS3 下游的所有随后裂解， 既在 NS3-NS4A 裂解位点以顺式进行裂解， 又在其余的 NS4A-NS4B、 NS4B-NS5A、 NS5A-NS5B 位点以反式进行裂解。 NS4A 蛋白似乎具有多种功能， 其充当 NS3 蛋白 酶的辅因子， 且可能有助于 NS3 及其它病毒复制酶组分的膜定位。NS3 蛋白与 NS4A 形成复 合物， 这似乎是在所有位点进行加工活动由此提高蛋白质水解效率所必需的。 NS3 蛋白还显 示出三磷酸核苷酶和 RNA 解旋酶活性。NS5B( 也称为 HCV 聚合酶 ) 是依赖于 RNA 的 RNA 聚 合酶， 在 HCV 的复制中涉及所述酶。 在 “Structural Analysis of the Hepatitis C Virus RNA Polymerasein Complex with Ribonucleotides” (Bressanelli ； S.et al.， Journal of Virology2002， 3482-3492) 和 Defrancesco and Rice， Clinics in Liver Disease 2003， 7， 211-242 中描述了 HCV NS5B 蛋白。
目前， 最有效的 HCV 疗法使用 α- 干扰素和利巴韦林的组合， 其在 40％的患者中产 生持续的效果 (Poynard， T.et al.Lancet 1998， 352， 1426-1432)。最新的临床结果证明， 作为单一疗法， PEG 化的 α- 干扰素优于未修饰的 α- 干扰素 (Zeuzem， S.et al.N.Engl. J.Med.2000， 343， 1666-1672)。然而， 即使就涉及 PEG 化 α- 干扰素和利巴韦林组合的实验 性治疗方案而言， 相当多的患者也没有出现病毒载量的持续减少。因此， 就开发用于治疗 HCV 感染的更有效化合物而言， 存在明显和迫切的需要。
本发明提供技术优点， 例如所述化合物是新颖的并可有效抗丙型肝炎。 此外， 例如 就所述化合物的作用机理、 结合、 抑制效力、 靶标选择性、 溶解度、 安全性分布或生物利用度 中的一项或多项而言， 所述化合物提供用于药物用途的优点。
HCV NS5B 抑制剂已经在美国专利 7,473,688 和 7,399,758 中披露。 发明内容 本发明涵盖式 I 化合物 ( 包括可药用盐 ) 和使用这些化合物的组合物及使用这些 化合物的治疗方法。
本发明一个方面为式 I 化合物或其可药用盐 ：
其中 R1 为 CO2R5 或 CONR6R7 ； R2 为取代有 1 个 Ar1 的哌啶基团 ； R3 为氢、 卤素、 烷基、 烯基、 羟基、 苄基氧基或烷氧基 ； 4 R 为环烷基 ； R5 为氢或烷基 ； R6 为氢、 烷基、 烷基 SO2、 环烷基 SO2、 卤代烷基 SO2、 (R8)(R9)NSO2 或 (R10)SO2 ；R7 为氢或烷基 ；
R8 为氢或烷基 ；
R9 为氢或烷基 ；
R10 为氮杂环丁烷基、 吡咯烷基、 哌啶基、 哌嗪基、 N-( 烷基 ) 哌嗪基、 吗啉基、 硫吗啉 基、 高哌啶基或高吗啉基 ；
Ar1 为吡咯基、 噻吩基、 呋喃基、 吡唑基、 异噁唑基、 异噻唑基、 咪唑基、 噁唑基、 噻唑 基、 三唑基、 噁二唑基、 噻二唑基、 吲哚基、 羟吲哚基、 苯并呋喃基、 苯并噻吩基、 吲唑基、 苯并 苯并噻唑基或苯并三唑 异噁唑基、 苯并异噻唑基、 苯并咪唑基、 苯并咪唑酮基、 苯并噁唑基、 1 基， 且 Ar 取代有 0-2 个取代基， 所述取代基选自卤素、 烷基、 环烷基、 烷氧基、 氨基、 烷基氨 基、 二烷基氨基、 羧基、 烷氧基羰基、 呋喃基和苯基， 其中所述苯基取代有卤素、 烷基或烷氧基取代基中的 0-2 个 ； 及
X 不存在或者 X 为键或亚甲基。
本发明另一个方面为式 I 化合物或其可药用盐， 其中 R1 为 CONR6R7 ； R2 为取代有 1 个 Ar1 的哌啶基团 ； R3 为烷氧基 ； R4 为环烷基 ； R6 为烷基 SO2 或 (R8)(R9)NSO2 ； R7 为氢 ； R8 为 烷基 ； R9 为烷基 ； Ar1 为吡唑基、 噁唑基、 噻唑基、 三唑基、 噁二唑基、 噻二唑基、 吲哚基、 苯并 1 呋喃基、 苯并异噁唑基、 苯并咪唑基、 苯并咪唑酮基或苯并噁唑基， 且 Ar 取代有 0-2 个取代 基， 所述取代基选自卤素、 烷基、 氨基、 烷氧基羰基、 呋喃基和苯基， 其中所述苯基取代有卤 素或烷氧基取代基中的 0-2 个 ； 及 X 为键或亚甲基。
本发明另一个方面为式 I 化合物或其可药用盐， 其中 R1 为 CONR6R7 ； R2 为取代有 1 个 Ar1 的哌啶基团 ； R3 为甲氧基 ； R4 为环己基 ； R6 为异丙基 SO2 或 ( 二甲基氨基 )SO2 ； R7 为 氢； Ar1 为 ( 呋喃基 ) 吡唑基、 ( 乙基羧基 ) 噁唑基、 噻唑基、 ( 甲基 ) 三唑基、 ( 二甲基 ) 三 唑基、 ( 甲基 ) 噁二唑基、 ( 乙基 ) 噁二唑基、 ( 丙基 ) 噁二唑基、 ( 异丙基 ) 噁二唑基、 (苯 基 ) 噁二唑基、 ( 氨基 ) 噻二唑基、 吲哚基、 苯并呋喃基、 氟苯并异噁唑基、 ( 甲基 ) 苯并咪唑 基、 ( 苯基 ) 吡唑基、 ( 氯苯基 ) 吡唑基、 ( 甲氧基苯基 ) 吡唑基、 苯并咪唑酮基或苯并噁唑 基； 及 X 为键或亚甲基。 本发明另一个方面为式 I 化合物， 其中 R1 为 CONR6R7 ； R6 为烷基 SO2、 环烷基 SO2、 卤 8 9 10 7 代烷基 SO2、 (R )(R )NSO2 或 (R )SO2 ； 及 R 为氢。
本发明另一个方面为式 I 化合物， 其中 R3 为氢。
本发明另一个方面为式 I 化合物， 其中 R3 为甲氧基。
本发明另一个方面为式 I 化合物， 其中 R4 为环己基。
本发明另一个方面为式 I 化合物， 其中 R6 为 (R8)(R9)NSO2 或 (R10)SO2。
本发明另一个方面为式 I 化合物， 其中 Ar1 为吡唑基、 噻唑基、 三唑基、 噁二唑基、 1 噻二唑基、 苯并异噁唑基、 苯并咪唑基、 苯并咪唑酮基或苯并噁唑基， 且 Ar 取代有 0-2 个取 代基， 所述取代基选自卤素、 烷基、 氨基、 烷基氨基、 二烷基氨基、 羧基、 烷氧基羰基、 呋喃基 和苯基， 其中所述苯基取代有卤素、 烷基或烷氧基取代基中的 0-2 个。
本发明另一个方面为式 I 化合物， 其中 Ar1 为吡唑基、 噁唑基、 噻唑基、 三唑基、 噁 二唑基、 噻二唑基、 吲哚基、 苯并呋喃基、 苯并异噁唑基、 苯并咪唑基、 苯并咪唑酮基或苯并 1 噁唑基， 且 Ar 取代有 0-2 个取代基， 所述取代基选自卤素、 烷基、 氨基、 烷氧基羰基、 呋喃基 和苯基， 其中所述苯基取代有卤素或烷氧基取代基中的 0-2 个。
本发明另一个方面为式 I 化合物， 其中 Ar1 为 ( 呋喃基 ) 吡唑基、 ( 乙基羧基 ) 噁 唑基、 噻唑基、 ( 甲基 ) 三唑基、 ( 二甲基 ) 三唑基、 ( 甲基 ) 噁二唑基、 ( 乙基 ) 噁二唑基、 ( 丙基 ) 噁二唑基、 ( 异丙基 ) 噁二唑基、 ( 苯基 ) 噁二唑基、 ( 氨基 ) 噻二唑基、 吲哚基、 苯 并呋喃基、 氟苯并异噁唑基、 ( 甲基 ) 苯并咪唑基、 ( 苯基 ) 吡唑基、 ( 氯苯基 ) 吡唑基、 (甲 氧基苯基 ) 吡唑基、 苯并咪唑酮基或苯并噁唑基。
本发明另一个方面为式 I 化合物， 其中 X 不存在。
本发明另一个方面为式 I 化合物， 其中 X 为键。
本发明另一个方面为式 I 化合物， 其中 X 为亚甲基。
本发明另一个方面为式 I 化合物， 其具有如下立体化学 ：
本发明另一个方面为式 I 化合物， 其具有如下立体化学 ：对于式 I 化合物， 任何变量 ( 包括 R1、 R2、 R3、 R4、 R 5、 R6、 R7、 R8、 R9、 R10、 Ar1 和 X) 的任 何范围可独立与任何其它变量的范围一起使用。因此， 本发明包括所述不同方面的组合。
除非另有说明， 这些术语具有下述意义。 “烷基” 的意思是由 1 至 6 个碳所组成的 直链或支链烷基。 “烯基” 的意思是由 2 至 6 个碳所组成且具有至少一个双键的直链或支链 烷基。 “炔基” 的意思是由 2 至 6 个碳所组成且具有至少一个叁键的直链或支链烷基。 “环 烷基” 的意思是由 3 至 7 个碳所组成的单环环系。 “卤代烷基” 与 “卤代烷氧基” 包括所有卤 化异构体， 从单卤素取代的烷基至全卤素取代的烷基。具有烃部分的术语 ( 例如烷氧基 ) 包括就所述烃部分而言的直链和支链异构体。 括号与多重括号术语意在向本领域技术人员 阐明键合关系。例如， 如 ((R) 烷基 ) 那样的术语指进一步被取代基 R 取代的烷基取代基。
本发明包括所述化合物的所有可药用盐形式。可药用盐为其中抗衡离子不会显 著地助长化合物的生理活性或毒性且其本身作为药理等价物的那些可药用盐。这些盐 可根据一般有机技术使用商购试剂来制备。一些阴离子盐形式包括醋酸盐、 醋硬脂酸盐 (acistrate)、 苯磺酸盐、 溴化物、 氯化物、 枸橼酸盐、 富马酸盐、 葡萄糖醛酸盐、 氢溴酸盐、 盐 酸盐、 氢碘酸盐、 碘化物、 乳酸盐、 马来酸盐、 甲磺酸盐、 硝酸盐、 双羟萘酸盐、 磷酸盐、 琥珀酸 盐、 硫酸盐、 酒石酸盐、 甲苯磺酸盐及昔萘酸盐 (xinofoate)。一些阳离子盐形式包括铵盐、 铝盐、 苄星 (benzathine) 盐、 铋盐、 钙盐、 胆碱盐、 二乙胺盐、 二乙醇胺盐、 锂盐、 镁盐、 葡甲 胺盐、 4- 苯基环己胺盐、 哌嗪盐、 钾盐、 钠盐、 丁三醇胺 (tromethamine) 盐及锌盐。
本发明一些化合物具有不对称碳原子 ( 参见例如下述化合物 )。本发明包括所有 立体异构形式， 包括对映异构体与非对映异构体及立体异构体的混合物如外消旋体。一些 立体异构体可使用本领域已知的方法来制备。 所述化合物的立体异构混合物与相关中间体 的立体异构混合物可根据本领域已知的方法来分离成单独的异构体。除非另有说明， 当在 以下方案和表格中描绘分子结构时使用的楔形线 (wedge) 和虚线 (hash) 仅意在表示相对 立体化学， 而不应该被解释为暗示绝对立体化学指定。
合成方法
所述化合物可通过本领域已知的方法 ( 包括如下所述的那些方法 ) 来制备。一些 试剂和中间体在本领域中是已知的。 其它试剂和中间体可通过本领域已知的方法使用容易 得到的原料来制备。用于描述化合物合成的变量 ( 例如所编号的 “R” 取代基 ) 仅意在说 明如何制备所述化合物， 而不应该与权利要求书中或说明书其它段落中所使用的变量相混 淆。以下方法用于说明目的， 而非意在限制本发明范围。
方案中所使用的缩写通常符合本领域中所使用的惯用意义。 说明书和实施例中所 使用的化学缩写如下定义 ： “NaHMDS” 为二 ( 三甲基甲硅烷基 ) 氨基钠的缩写 ； “DMF” 为 N， N- 二甲基甲酰胺的缩写 ； “MeOH” 为甲醇的缩写 ； “NBS” 为 N- 溴琥珀酰亚胺的缩写 ； “Ar” 为 芳基的缩写 ； “TFA” 为三氟乙酸的缩写 ； “LAH” 为氢化铝锂的缩写 ； “BOC” 为叔丁氧羰基的 缩写 ； “DMSO” 为二甲基亚砜的缩写 ； “h” 为小时的缩写 ； “rt” 为室温或保留时间的缩写 ( 根
据上下文 ) ； “min” 为分钟的缩写 ； “EtOAc” 为乙酸乙酯的缩写 ； “THF” 为四氢呋喃的缩写 ； “EDTA” 为乙二胺四乙酸的缩写 ； “Et2O” 为乙醚的缩写 ； “DMAP” 为 4- 二甲基氨基吡啶的缩 写； “DCE” 为 1， 2- 二氯乙烷的缩写 ； “ACN” 为乙腈的缩写 ； “DME” 为 1， 2- 二甲氧基乙烷的 缩写 ； “HOBt” 为 1- 羟基苯并三唑水合物的缩写 ； “DIEA” 为二异丙基乙基胺的缩写 ； “Nf” 为 CF3(CF2)3SO2- 的缩写 ； 及 “TMOF” 为原甲酸三甲酯的缩写。
方案 1 显示了如何在核心结构上形成哌啶酰胺。制备取代的哌啶的方法是本领域 已知的， 且下面描述了一些实例。
方案 1.
生物学方法
当在以下 HCV RdRp 检测中测定时， 所述化合物展现了对抗 HCV NS5B 的活性。
对 HCV NS5B RdRp 进行克隆、 表达及纯化
将对 HCV 基因型 1b 的 NS5B 蛋白进行编码的 cDNA 克隆至 pET21a 表达载体中。将 所述蛋白质表达成截掉 C 末端的 18 个氨基酸 (the protein wasexpressed with an 18 amino acid C-terminal truncation) 以提高溶解度。大肠杆菌感受态细胞系 BL21(DE3) 用于所述蛋白质的表达。使培养物在 37℃生长约 4 小时， 直到培养物达到 600 纳米处的光 密度为 2.0。使培养物冷却至 20℃， 并用 1mM IPTG 进行诱导。加入新鲜的氨苄青霉素至最
终浓度为 50 微克 /mL， 并使细胞在 20℃生长过夜。
使细胞沉淀 (3 升 ) 溶解以供纯化， 得到 15-24mg 经纯化的 NS5B。溶胞缓冲剂由 20mM Tris-HCl(pH 7.4)、 500mM NaCl、 0.5％ Triton X-100、 1mM DTT、 1mM EDTA、 20％甘油、 0.5mg/mL 溶菌酶、 10mM MgCl2、 15 微克 /mL 脱氧核糖核酸酶 I 及完全 TM 蛋白酶抑制剂药片 (Roche) 所组成。 加入溶胞缓冲剂后， 使用组织匀浆器来使经冷冻的细胞沉淀重新悬浮。 为 了降低样品的粘度， 使用与 Branson 超声波处理器相连的微尖头来使溶胞产物的等分液在 冰上接受超声波处理。经超声波处理的溶胞产物在 4℃以 100,000×g 离心 1 小时， 并过滤 经过 0.2 微米滤器单元 (Corning)。
使用两个连续的色谱步骤来纯化蛋白质 ： 肝素琼脂糖 CL-6B 和 PolyU 琼脂糖 4B(Pharmacia)。 色谱缓冲剂与溶胞缓冲剂相同， 但不含有溶菌酶、 脱氧核糖核酸酶 I、 MgCl2 或蛋白酶抑制剂， 且缓冲剂的 NaCl 浓度根据将蛋白质加载至色谱柱上的需要而调整。各色 谱柱以 NaCl 梯度液洗脱， 所述梯度液的长度在 5 至 50 个柱体积之间变化， 这取决于色谱柱 的类型。在最终色谱步骤后， 所得到的酶纯度＞ 90％ ( 基于 SDS-PAGE 分析 )。将酶分成等 分液， 并贮存在 -80℃。
标准 HCV NS5B RdRp 酶检测
在 96 孔板 (Corning 3600) 中在最终体积为 60 微升的情况下进行 HCVRdRp 基因 型 1b 检测。 检测缓冲剂由 20mM Hepes(pH 7.5)、 2.5mM KCl、 2.5mMMgCl2、 1mM DTT、 1.6 单位 RNAse 抑制剂 (Promega N2515)、 0.01mg/mLBSA(Sigma B6917) 及 2％甘油所组成。 所有化合 物在 DMSO 中连续稀释 (3 倍 ) 并在水中进一步稀释以使 DMSO 在检测中的最终浓度为 2％。 HCVRdRp 基因型 1b 酶在最终浓度为 28nM 时使用。聚 A(polyA) 模板在 6nM 时使用， 且生物 素化的寡 dT12 引物在最终浓度为 180nM 时使用。 模板是商购得到的 (Amersham 27-4110)。 生物素化的引物由 Sigma Genosys 制备。3H-UTP 在 0.6μCi(0.29μM 总 UTP) 时使用。通 过加入酶来引发反应， 在 30℃孵育 60 分钟， 并通过加入 25 微升含有 SPA 珠粒 (4 微克 / 微 升， Amersham RPNQ 0007) 的 50mM EDTA 来停止。在室温孵育＞ 1 小时后， 将板在 Packard Top Count NXT 上读取。
经修改的 HCV NS5B RdRp 酶检测
经修改的酶检测基本如就标准酶检测所描述的那样来进行， 不同的是， 将生物素 化的寡 dT12 引物预捕获在链霉抗生物素 (streptavidin) 涂覆的 SPA 珠粒上， 其方式是将 引物与珠粒在检测缓冲剂中混合， 并在室温孵育一小时。离心除去未结合的引物。使与引 物结合的珠粒重新悬浮在 20mM Hepes 缓冲液 (pH 7.5) 中， 并在引物的最终浓度为 20nM 及 珠粒的最终浓度为 0.67 微克 / 微升时用于检测。检测中的加入顺序如下 ： 将酶 (1.75nM) 加到经稀释的化合物中， 接着加入模板 (0.36nM)、 3H-UTP(0.6μCi， 0.29μM) 及与引物结 合的珠粒的混合物以引发反应， 其中所给浓度为最终浓度。使反应在 30℃进行 4 小时。
化合物的 IC50 值使用七种不同的 [I]([I] 为抑制浓度 ) 来确定。使用方程式 y ＝ A+((B-A)/(1+((C/x)^D))) 通过抑制作用来计算 IC50 值。
FRET 检测制剂
在 96 孔细胞培养板中进行 HCV FRET 筛选检测。 FRET 肽 (Anaspec， Inc.)(Taliani et al.， Anal.Biochem.1996， 240， 60-67) 在其一端附近含有荧光供体即 EDANS， 且在另一端 附近含有受体即 DABCYL。 通过供体与受体之间的分子间共振能量转移 (RET) 来使所述肽的荧光淬灭， 但当 NS3 蛋白酶使所述肽裂解时， 产物不再发生 RET 淬灭， 且供体的荧光变得显 而易见。检测试剂如下制备 ： 得自 Promega(#E153A) 的 5× 细胞荧光素酶细胞培养物溶胞 试剂 (cell Luciferase cell culture lysis reagent) 用 dH2O 稀释至 1×， 加入 NaCl 至 最终为 150mM， 且将 FRET 肽自 2mM 储备液稀释至最终为 20μM。
为了制备板， 带有或不带有海紫罗兰属荧光素酶 (Renilla luciferase) 报告子基 因的 HCV 复制子细胞用胰蛋白酶处理， 并置于 96 孔板中， 其中将经滴定的测试化合物加到 第 3 列至第 12 列中 ； 第 1 列和第 2 列含有对照化合物 (HCV 对照抑制剂 )， 且最底行含有仅 带有 DMSO 的细胞。然后将板置于 37℃的 CO2 培养箱中。
检测
加入上述测试化合物 (FRET 检测制剂 ) 后， 在不同时间将板取出， 且向其中加入 Alamar 蓝色溶液 (Trek Diagnostics， #00-100) 以测量细胞毒性。 在 Cytoflour 4000 仪器 (PE Biosystems) 中读取后， 将板以 PBS 冲洗， 然后通过向每个孔中加入 30 微升上述 FRET 肽检测试剂 (FRET 检测制剂 ) 而用于 FRET 检测。接着， 将板置于 Cytoflour 4000 仪器中， 其已被设定成激发波长为 340nm/ 发射波长为 490nm， 以自动模式历时高达 20 次循环， 且板 在动态模式中读取。典型地， 在读取后使用终点分析的信号对噪声为至少三倍。或者， 在 Alamar 蓝色读取后， 将板以 PBS 冲洗， 然后用于使用 Promega Dual-Glo LuciferaseAssay System 的荧光素酶检测或用于 Promega EnduRen Live Cell Substrate 检测。
通过对相对的 HCV 复制子抑制作用及相对的细胞毒性值进行定量而对化合物进 行分析。为了计算细胞毒性值， 将得自对照孔的平均 Alamar 蓝色荧光信号设定为 100％无 毒性。 接着， 将各化合物测试孔中的各个信号除以平均对照信号并乘以 100％以确定细胞毒 性百分比。为了计算 HCV 复制子抑制值， 平均背景值得自在检测结束时含有最高量 HCV 对 照抑制剂的两个孔。这些值类似于得自天然 Huh-7 细胞的那些值。然后将背景值从得自对 照孔的平均信号中扣除， 且将此值用作 100％活性。接着， 将各化合物测试孔中的各个信号 除以背景扣除后的平均对照值并乘以 100％以确定活性百分比。将 EC50 值计算成可使 FRET 或荧光素酶活性降低 50％的浓度。 针对化合物板所得到的两个值即细胞毒性百分比与活性 百分比用于确定有待进一步分析的重要化合物。
化合物的代表性数据报道在表 1 中。
表 1.
A ＞ 0.5μM ； B 为 0.002μM-0.5μM ； C ＜ 0.02μM， 但没有确定确切值 ； 药物组合物和治疗方法所述化合物展现出对抗 HCV NS5B 的活性， 且可用于治疗 HCV 与 HCV 感染。因此， 本发明另一个方面为一种组合物， 其包含式 I 化合物或其可药用盐及可药用载体。
本发明另一个方面为式 I 化合物在制备用于治疗丙型肝炎的药物中的用途。
本发明另一个方面为一种组合物， 其还包含具有抗 HCV 活性的化合物。
本发明另一个方面为一种组合物， 其中具有抗 HCV 活性的化合物为干扰素。在本 发明另一个方面， 所述干扰素选自干扰素 α2B、 PEG 化的 (pegylated) 干扰素 α、 同感干扰 素 (consensus interferon)、 干扰素 α2A 及淋巴细胞样干扰素 τ。
本发明另一个方面为一种组合物， 其中具有抗 HCV 活性的化合物为环孢菌素。在 本发明另一个方面， 所述环孢菌素为环孢菌素 A。
本发明另一个方面为一种组合物， 其中具有抗 HCV 活性的化合物选自白细胞介素 2、 白细胞介素 6、 白细胞介素 12、 可提高 1 型辅助 T 细胞应答发展的化合物、 干扰 RNA、 反义 RNA、 Imiqimod、 利巴韦林、 5’ - 单磷酸肌苷脱氢酶抑制剂、 金刚烷胺及金刚乙胺。
本发明另一个方面为一种组合物， 其中具有抗 HCV 活性的化合物可有效抑制靶 标的功能以治疗 HCV 感染， 所述靶标选自 HCV 金属蛋白酶 (HCVmetalloprotease)、 HCV 丝 氨酸蛋白酶 (HCV serine protease)、 HCV 聚合酶 (HCVpolymerase)、 HCV 解螺旋酶 (HCV helicase)、 HCV NS4B 蛋 白 (HCV NS4Bprotein)、 HCV 进 入 (HCV entry)、 HCV 组 装 (HCV assembly)、 HCV 释出 (HCVegress)、 HCV NS5A 蛋白 (HCV NS5A protein)、 IMPDH 及核苷类似 物 (nucleoside analog)。
本发明另一个方面为一种组合物， 其包含式 I 化合物或其可药用盐、 可药用载体、 干扰素及利巴韦林。
本发明另一个方面为一种抑制 HCV 复制子 (HCV replicon) 功能的方法， 其包括使 HCV 复制子与式 I 化合物或其可药用盐接触。
本发明另一个方面为一种抑制 HCV NS5B 蛋白功能的方法， 其包括使 HCV NS5B 蛋 白与式 I 化合物或其可药用盐接触。
本发明另一个方面为治疗患者中 HCV 感染的方法， 其包括向所述患者给予治疗有 效量的式 I 化合物或其可药用盐。在另一个实施方案中， 所述化合物可有效抑制 HCV 复制 子的功能。在另一个实施方案中， 所述化合物可有效抑制 HCV NS5B 蛋白的功能。
本发明另一个方面为治疗患者中 HCV 感染的方法， 其包括向所述患者给予治疗有 效量的式 I 化合物或其可药用盐， 且给予 ( 之前、 之后或同时 ) 另一种具有抗 HCV 活性的化 合物。
本发明另一个方面为其中其它具有抗 HCV 活性的化合物为干扰素的方法。
本发明另一个方面为其中所述干扰素选自干扰素 α2B、 PEG 化的干扰素 α、 同感 干扰素、 干扰素 α2A 及淋巴细胞样干扰素 τ 的方法。
本发明另一个方面为其中其它具有抗 HCV 活性的化合物为环孢菌素的方法。
本发明另一个方面为其中所述环孢菌素为环孢菌素 A 的方法。
本发明另一个方面为其中其它具有抗 HCV 活性的化合物选自白细胞介素 2、 白细 胞介素 6、 白细胞介素 12、 可提高 1 型辅助 T 细胞应答发展的化合物、 干扰 RNA、 反义 RNA、 Imiqimod、 利巴韦林、 5’ - 单磷酸肌苷脱氢酶抑制剂、 金刚烷胺及金刚乙胺的方法。
本发明另一个方面为其中其它具有抗 HCV 活性的化合物可有效抑制靶标功能以治疗 HCV 感染的方法， 所述靶标选自 HCV 金属蛋白酶、 HCV 丝氨酸蛋白酶、 HCV 聚合酶、 HCV 解螺旋酶、 HCV NS4B 蛋白、 HCV 进入、 HCV 组装、 HCV 释出、 HCV NS5A 蛋白、 IMPDH 及核苷类似 物。
本发明另一个方面为其中其它具有抗 HCV 活性的化合物可有效抑制 HCV 生命循环 中靶标的功能而非抑制 HCV NS5B 蛋白的功能的方法。
“治疗有效” 的意思是提供有意义的患者益处所需要的药物量， 如肝炎与 HCV 感染 领域中的执业医师所理解的那样。治疗有效量是提供有意义的患者益处所需要的量。
“患者” 的意思是被 HCV 病毒感染且适于治疗的人们， 如肝炎与 HCV 感染领域中的 执业医师所理解的那样。
“治疗” 、 “疗法” 、 “给药方案” 、 “HCV 感染” 及相关术语如肝炎与 HCV 感染领域中的 执业医师所理解的那样来使用。
本发明化合物一般以药物组合物的形式来给予， 所述组合物包含治疗有效量的化 合物或其可药用盐及可药用载体， 且可含有常规赋形剂。可药用载体为具有可接受安全性 的常规已知载体。组合物涵盖所有常见的固体形式与液体形式， 包括例如胶囊剂、 片剂、 锭 剂与粉末剂及液体混悬剂、 糖浆剂、 酏剂及溶液剂。组合物使用一般制剂技术来制备， 且常 规赋形剂 ( 诸如粘合剂与润湿剂 ) 与媒介物 ( 诸如水与醇 ) 通常用于组合物。参见例如 Remington’ s Pharmaceutical Sciences， Mack Publishing Company， Easton， PA， 17th edition， 1985。 固体组合物通常被配制成剂量单位， 且每份剂量提供约 1 至 1000 毫克活性成份的 组合物是优选的。剂量的一些实例为 1 毫克、 10 毫克、 100 毫克、 250 毫克、 500 毫克及 1000 毫克。通常， 其它药物可按与临床上所使用的经典单位范围相似的单位范围存在。典型地， 其为 0.25-1000 毫克 / 单位。
液体组合物通常在剂量单位范围内。通常， 液体组合物的单位剂量范围可以是 1-100 毫克 / 毫升。剂量的一些实例为 1 毫克 / 毫升、 10 毫克 / 毫升、 25 毫克 / 毫升、 50 毫 克 / 毫升及 100 毫克 / 毫升。通常， 其它药物可按与临床上所使用的经典单位范围相似的 单位范围存在。典型地， 其为 1-100 毫克 / 毫升。
本发明涵盖所有常规给药模式， 且口服方法与肠胃外方法是优选的。 通常， 给药方 案可类似于临床上所使用的其它药物。典型地， 每日剂量可以是每日 1-100 毫克 / 公斤体 重。通常， 口服方式需要较多的化合物， 而肠胃外方式需要较少的化合物。然而， 具体的给 药方案可由医师通过合理的医药判断来确定。
本发明也涵盖在组合疗法中给予所述化合物的方法。 即所述化合物可与可用于治 疗肝炎及 HCV 感染的其它药物一起使用， 但所述化合物与所述其它药物分开使用。在这些 组合方法中， 所述化合物通常可搭配其它药物而以每日 1-100 毫克 / 公斤体重的每日剂量 来给予。其它药物一般可按治疗上所使用的量来给予。然而， 具体的给药方案可由医师通 过合理的医药判断来确定。
适于组合物及方法的化合物的一些实例列在表 2 中。
表2
具体实施方式
方案中所使用的缩写通常符合本领域中所使用的惯用意义。 说明书和实施例中所 使用的化学缩写如下定义 ： “NaHMDS” 为二 ( 三甲基甲硅烷基 ) 氨基钠的缩写 ； “DMF” 为 N， N- 二甲基甲酰胺的缩写 ； “MeOH” 为甲醇的缩写 ； “NBS” 为 N- 溴琥珀酰亚胺的缩写 ； “Ar” 为 芳基的缩写 ； “TFA” 为三氟乙酸的缩写 ； “LAH” 为氢化铝锂的缩写 ； “BOC” 为叔丁氧羰基的 缩写 ； “DMSO” 为二甲基亚砜的缩写 ； “h” 为小时的缩写 ； “rt” 为室温或保留时间的缩写 ( 根 据上下文 ) ； “min” 为分钟的缩写 ； “EtOAc” 为乙酸乙酯的缩写 ； “THF” 为四氢呋喃的缩写 ； “EDTA” 为乙二胺四乙酸的缩写 ； “Et2O” 为乙醚的缩写 ； “DMAP” 为 4- 二甲基氨基吡啶的缩 写； “DCE” 为 1， 2- 二氯乙烷的缩写 ； “ACN” 为乙腈的缩写 ； “DME” 为 1， 2- 二甲氧基乙烷的 缩写 ； “HOBt” 为 1- 羟基苯并三唑水合物的缩写 ； “DIEA” 为二异丙基乙基胺的缩写 ； “Nf” 为 CF3(CF2)3SO2- 的缩写 ； 及 “TMOF” 为原甲酸三甲酯的缩写。
本文所使用的缩写如下定义 ： “1×” 为一次的缩写， “2×” 为两次的缩写， “3×” 为 三次的缩写， “℃” 为摄氏度的缩写， “eq” 为当量的缩写， “g” 为克的缩写， “mg” 为毫克的缩 写， “L” 为升的缩写， “mL” 为毫升的缩写， “μL” 为微升的缩写， “N” 为当量浓度 (normal) 的 缩写， “M” 为摩尔浓度的缩写， “mmol” 为毫摩尔的缩写， “min” 为分钟的缩写， “h” 为小时的 缩写， “rt” 为室温的缩写， “RT” 为保留时间的缩写， “atm” 为大气压的缩写， “psi” 为磅 / 平 方英寸的缩写， “conc.” 为浓缩物的缩写， “sat” 或 “sat’ d” 为 “饱和的” 的缩写， “MW” 为分 子量的缩写， “mp” 为熔点的缩写， “ee” 为对映异构体过量的缩写， “MS” 或 “Mass Spec” 为 质谱的缩写， “ESI” 为电喷雾离子化质谱的缩写， “HR” 为高分辨的缩写， “HRMS” 为高分辨质 谱的缩写， “LCMS” 为液相色谱 - 质谱的缩写， “HPLC” 为高压液相色谱的缩写， “RP HPLC” 为 1 反相 HPLC 的缩写， “TLC” 或 “tlc” 为薄层色谱的缩写， “NMR” 为核磁共振波谱的缩写， “ H” 为质子的缩写， “δ” 为 delta 的缩写， “s” 为单峰的缩写， “d” 为二重峰的缩写， “t” 为三重 峰的缩写， “q” 为四重峰的缩写， “m” 为多重峰的缩写， “br” 为宽峰的缩写， “Hz” 为赫兹的 缩写， 及 “α” 、 “β” 、 “R” 、 “S” 、 “E” 和 “Z” 是本领域技术人员熟悉的立体化学指定符号。一般方法 在室温和氮气下向相应的酸 (30mg)、 杂芳基取代的哌啶 (1.5 当量 ) 和 2-(1H- 苯 四氟硼酸盐 (2 当量 ) 于 DMF(1ml) 中并 [d][1， 2， 3] 三唑 -1- 基 )-1， 1， 3， 3- 四甲基异脲的混合物中加入 N， N- 二异丙基乙胺 (3 当量 )。将混合物在室温搅拌约 17 小时。然后混 合物用 MeOH 稀释并通过 Shimadzu-VP 制备性反相 HPLC 来纯化。
8- 环 己 基 -N-[( 二 甲 基 氨 基 ) 磺 酰 基 ]-1， 1a， 2， 12b- 四 氢 -11- 甲 氧 基 -1a-[[2-( 噻唑 -2- 基 )- 哌啶 -1- 基 ] 羰基 ]- 环丙并 [d] 吲哚并 [2， 1-a][2] 苯并氮
杂-5- 甲酰胺以 与 上 述 相 似 的 方 式 通 过 外 消 旋 酸 8- 环 己 基 -5-[[[( 二 甲 基 氨 基 ) 磺 酰 基 ] 氨 基 ] 羰 基 ]-1， 12b- 二 氢 -11- 甲 氧 基 - 环 丙 并 [d] 吲 哚 并 [2， 1-a][2] 苯 并 氮
杂-1a(2H)- 甲酸与 2-( 哌啶 -2- 基 ) 噻唑之间的偶联反应来制备标题化合物， 其为TFA 盐。通过 Shimadzu-VP 制备性反相 HPLC 使用下述分离方法来纯化 ： 溶剂 A ＝ 10 ％ MeOH-90％ H2O-0.1％ TFA， 溶剂 B ＝ 90％ MeOH-10％ H2O-0.1％ TFA， 起始％ B ＝ 30， 最终％ B ＝ 100， 梯度时间＝ 10 分钟， 终止时间＝ 12 分钟， 流速＝ 30mL/min， 柱： Xterra Prep MS C185μ30×50mm， 馏分收集 ： 9.59-10.15 分钟。( 在 220nm 进行 UV 检测 )。通过使用 Shimadzu-VP 设备 ( 在 220nm 进行 UV 检测 ) 和 Waters Micromass 来进行 LC/MS。HPLC 方 法： 溶剂 A ＝ 10％ MeOH-90％ H2O-0.1％ TFA， 溶剂 B ＝ 90％ MeOH-10％ H2O-0.1％ TFA， 起始％ B ＝ 0， 最终％ B ＝ 100， 梯度时间＝ 2 分钟， 终止时间＝ 3 分钟， 流速＝ 5mL/min， 柱： Xterra MS C18S73.0×50mm ； (ES+)m/z(M+H)+ ＝ 702.41， HPLCRt ＝ 1.942 分钟。HPLC 方法 ： 溶剂 A ＝ 5 ％ MeCN-95 ％ H2O-10mM NH4OAc， 溶剂 B ＝ 95 ％ MeCN-5 ％ H2O-10mMNH4OAc， 起始％ B ＝ 0， 最终％ B ＝ 100， 梯度时间＝ 2 分钟， 终止时间＝ 3 分钟， 流速＝ 5mL/min， 柱： Phenomenex + Lina C185μm 3.0×50mm ； (ES+)m/z(M+H) ＝ 702.52， HPLC Rt ＝ 1.492 分钟。分析性 HPLC 方法 ： 溶剂 A ＝ 5 ％ MeCN-95 ％ H2O-0.1 ％ TFA， 溶剂 B ＝ 95 ％ MeCN-5 ％ H2O-0.1 ％ TFA， 起 始％ B ＝ 10， 最终％ B ＝ 100， 梯度时间＝ 10 分钟， 终止时间＝ 20 分钟， 流速＝ 1mL/min， 柱： Waters Sunfire C-18， 4.6×150mm， 3.5μm， Rt ＝ 12.47 分钟 ； 柱： Waters Xbridge Phenyl 柱 4.6×150mm， 3.5μm， Rt ＝ 10.93 分钟。
13- 环己基 -N-[( 二甲基氨基 ) 磺酰基 ]-3- 甲氧基 -6-[[2-( 噻唑 -2- 基 )- 哌 -10- 甲酰胺 -6- 甲酸与 2-( 哌啶 -2- 基 ) 噻 以与上述相似的方式通过不饱和酸 13- 环己基 -10-[[[( 二甲基氨基 ) 磺酰基 ] 氨啶 -1- 基 ] 羰基 ]-7H- 吲哚并 [2， 1-a][2] 苯并氮杂
基 ] 羰基 ]-3- 甲氧基 -7H- 吲哚并 [2， 1-a][2] 苯并氮杂唑之间的偶联反应来制备标题化合物， 其为 TFA 盐。通过 Shimadzu-VP 制备性反相 HPLC 使 用下述分离方法来纯化 ： 溶剂 A ＝ 10％ MeOH-90％ H2O-0.1％ TFA， 溶剂 B ＝ 90％ MeOH-10％ H2O-0.1％ TFA， 起始％ B ＝ 30， 最终％ B ＝ 100， 梯度时间＝ 10 分钟， 终止时间＝ 12 分钟， 流速＝ 30mL/min， 柱： Xterra Prep MS C185μ30×50mm， 馏分收集 ： 10.15-10.76 分钟。 (在 220nm 进行 UV 检测 )。通过使用 Shimadzu-VP 设备 ( 在 220nm 进行 UV 检测 ) 和 Waters Micromass 来进行 LC/MS。HPLC 方法 ： 溶剂 A ＝ 10 ％ MeOH-90 ％ H2O-0.1 ％ TFA， 溶剂 B ＝ 90％ MeOH-10％ H2O-0.1％ TFA， 起始％ B ＝ 0， 最终％ B ＝ 100， 梯度时间＝ 2 分钟， 终止时 间＝ 3 分钟， 流速＝ 5mL/min， 柱： Xterra MS C18S73.0×50mm ； (ES+)m/z(M+H)+ ＝ 688.38， HPLCRt ＝ 1.957 分钟。HPLC 方法 ： 溶剂 A ＝ 5％ MeCN-95％ H2O-10mM NH4OAc， 溶剂 B ＝ 95％ MeCN-5 ％ H2O-10mM NH4OAc， 起始％ B ＝ 0， 最终％ B ＝ 100， 梯度时间＝ 2 分钟， 终止时间 ＝ 3 分钟， 流速＝ 5mL/min， 柱： Phenomenex Lina C185μm 3.0×50mm ； (ES+)m/z(M+H)+ ＝ 688.49， HPLC Rt ＝ 1.530 分钟。分析性 HPLC 方法 ： 溶剂 A ＝ 5％ MeCN-95％ H2O-0.1％ TFA， 溶剂 B ＝ 95％ MeCN-5％ H2O-0.1％ TFA， 起始％ B ＝ 10， 最终％ B ＝ 100， 梯度时间＝ 10 分 钟， 终止时间＝ 20 分钟， 流速＝ 1mL/min， 柱： Waters Sunfire C-18， 4.6×150mm， 3.5μm， Rt ＝ 12.29 分钟 ； 柱： Waters Xbridge Phenyl 柱 4.6×150mm， 3.5μm， Rt ＝ 10.94 分钟。
8- 环 己 基 -N-[( 二 甲 基 氨 基 ) 磺 酰 基 ]-1， 1a， 2， 12b- 四 氢 -11- 甲 氧 基 -1a-[[2-[3-(1- 甲基乙基 )-1， 2， 4- 噁二唑 -5- 基 ]- 哌啶 -1- 基 ] 羰基 ]- 环丙并 [d] 吲哚并 [2， 1-a][2] 苯并氮杂
-5- 甲酰胺以与上述相似的方式通过外消旋酸与 3- 异丙基 -5-( 哌啶 -2- 基 )-1， 2， 4- 噁二 唑之间的偶联反应来制备标题化合物， 其为 TFA 盐。通过 Shimadzu-VP 制备性反相 HPLC 使 用下述分离方法来纯化 ： 溶剂 A ＝ 10％ MeOH-90％ H2O-0.1％ TFA， 溶剂 B ＝ 90％ MeOH-10％ H2O-0.1％ TFA， 起始％ B ＝ 30， 最终％ B ＝ 100， 梯度时间＝ 10 分钟， 终止时间＝ 12 分钟， 流速＝ 30mL/min， 柱： Xterra Prep MS C185μ30×50mm， 馏分收集 ： 10.44-11.29 分钟。 (在 220nm 进行 UV 检测 )。通过使用 Shimadzu-VP 设备 ( 在 220nm 进行 UV 检测 ) 和 Waters Micromass 来进行 LC/MS。HPLC 方法 ： 溶剂 A ＝ 10 ％ MeOH-90 ％ H2O-0.1 ％ TFA， 溶剂 B ＝ 90％ MeOH-10％ H2O-0.1％ TFA， 起始％ B ＝ 0， 最终％ B ＝ 100， 梯度时间＝ 2 分钟， 终止时 + 间＝ 3 分钟， 流速＝ 5mL/min， 柱： Xterra MS C 18S73.0×50mm ； (ES+)m/z(M+H) ＝ 729.46， HPLCRt ＝ 2.027 分钟。HPLC 方法 ： 溶剂 A ＝ 5％ MeCN-95％ H2O-10mM NH4OAc， 溶剂 B ＝ 95％ MeCN-5 ％ H2O-10mM NH4OAc， 起始％ B ＝ 0， 最终％ B ＝ 100， 梯度时间＝ 2 分钟， 终止时间 ＝ 3 分钟， 流速＝ 5mL/min， 柱： Phenomenex Lina C185μm 3.0×50mm ； (ES+)m/z(M+H)+ ＝ 729.50， HPLCRt ＝ 1.663 分钟。 分析性 HPLC 方法 ： 溶剂 A ＝ 5％ MeCN-95％ H2O-0.1％ TFA， 溶 剂 B ＝ 95％ MeCN-5％ H2O-0.1％ TFA， 起始％ B ＝ 10， 最终％ B ＝ 100， 梯度时间＝ 10 分钟， 终止时间＝ 20 分钟， 流速＝ 1mL/min， 柱： Waters Xbridge Phenyl 柱 4.6×150mm， 3.5μm， Rt ＝ 11.35 分钟。
13- 环己基 -N-[( 二甲基氨基 ) 磺酰基 ]-3- 甲氧基 -6-[[2-[3-(1- 甲基乙基 )-1， -10- 甲酰2， 4- 噁二唑 -5- 基 ]- 哌啶 -1- 基 ] 羰基 ]-7H- 吲哚并 [2， 1-a][2] 苯并氮杂 胺
以与上述相似的方式通过不饱和酸与 3- 异丙基 -5-( 哌啶 -2- 基 )-1， 2， 4- 噁二 唑之间的偶联反应来制备标题化合物， 其为 TFA 盐。通过 Shimadzu-VP 制备性反相 HPLC 使 用下述分离方法来纯化 ： 溶剂 A ＝ 10％ MeOH-90％ H2O-0.1％ TFA， 溶剂 B ＝ 90％ MeOH-10％ H2O-0.1％ TFA， 起始％ B ＝ 30， 最终％ B ＝ 100， 梯度时间＝ 10 分钟， 终止时间＝ 12 分钟， 流 速 ＝ 30mL/min， 柱： Xterra Prep MS C185μ30×50mm， 馏分收集 ： 10.59-11.20 分 钟。 1 ( 在 220nm 进行 UV 检测 )。 H NMR(500MHz， CD3OD)δ8.15( 宽单峰， 1H)， 7.91( 宽单峰， 1H)， 7.59( 宽单峰， 1H)， 7.57(d， J ＝ 8.5， 1H)， 7.16( 宽二重峰， 1H)， 7.06( 宽单峰， 2H)， 5.20( 宽单 峰， 1H)， 4.42( 宽 单 峰， 1H)， 3.93(s， 3H)， 3.17(m， 1H)， 3.09( 宽 单 峰， 1H)， 3.03(s， 6H)， 2.88( 宽多重峰， 2H)， 2.35( 宽单峰， 1H)， 2.21-1.88( 重叠的宽多重峰， 5H)， 1.86-1.67( 重 叠的宽多重峰， 3H)， 1.67-1.16( 重叠的宽多重峰， 8H)， 1.32(s， 6H)。通过使用 Shimadzu-VP 设备 ( 在 220nm 进行 UV 检测 ) 和 Waters Micromass 来进行 LC/MS。HPLC 方法 ： 溶剂 A ＝ 10 ％ MeOH-90 ％ H2O-0.1 ％ TFA， 溶剂 B ＝ 90 ％ MeOH-10 ％ H2O-0.1 ％ TFA， 起始％ B ＝ 0， 最终％ B ＝ 100， 梯度时间＝ 2 分钟， 终止时间＝ 3 分钟， 流速＝ 5mL/min， 柱： Xterra MS + C18S73.0×50mm ； (ES+)m/z(M+H) ＝ 715.41， HPLC Rt ＝ 2.025 分钟。HPLC 方法 ： 溶剂 A ＝ 5 ％ MeCN-95 ％ H2O-10mM NH4OAc， 溶剂 B ＝ 95 ％ MeCN-5 ％ H2O-10mMNH4OAc， 起始％ B ＝ 0， 最终％ B ＝ 100， 梯度时间＝ 2 分钟， 终止时间＝ 3 分钟， 流速＝ 5mL/min， 柱： Phenomenex + Lina C185μm 3.0×50mm ； (ES+)m/z(M+H) ＝ 715.45， HPLC Rt ＝ 1.657 分钟。分析性 HPLC 方法 ： 溶剂 A ＝ 5 ％ MeCN-95 ％ H2O-0.1 ％ TFA， 溶剂 B ＝ 95 ％ MeCN-5 ％ H2O-0.1 ％ TFA， 起 始％ B ＝ 10， 最终％ B ＝ 100， 梯度时间＝ 10 分钟， 终止时间＝ 20 分钟， 流速＝ 1mL/min， Waters Sunfire C-18， 4.6×150mm， 3.5μm， Rt ＝ 13.06 分钟 ； 柱： Waters Xbridge Phenyl 柱 4.6×150mm， 3.5μm， Rt ＝ 11.38 分钟。
8- 环 己 基 -N-[( 二 甲 基 氨 基 ) 磺 酰 基 ]-1， 1a， 2， 12b- 四 氢 -11- 甲 氧 基 -1a-[[4-(3- 甲基 -1， 2， 4- 噁二唑 -5- 基 )- 哌啶 -1- 基 ] 羰基 ]- 环丙并 [d] 吲哚并
[2， 1-a][2] 苯并氮杂
-5- 甲酰胺以与上述相似的方式通过外消旋酸与 3- 甲基 -5-( 哌啶 -4- 基 )-1， 2， 4- 噁二唑 之间的偶联反应来制备标题化合物， 其为 TFA 盐。通过 Shimadzu-VP 制备性反相 HPLC 使用 下述分离方法来纯化 ： 溶剂 A ＝ 10％ MeOH-90％ H2O-0.1％ TFA， 溶剂 B ＝ 90％ MeOH-10％ H2O-0.1％ TFA， 起始％ B ＝ 30， 最终％ B ＝ 100， 梯度时间＝ 10 分钟， 终止时间＝ 12 分钟， 流速＝ 30mL/min， 柱： Xterra Prep MS C185μ30×50mm， 馏分收集 ： 9.37-9.97 分钟。( 在 1 220nm 进行 UV 检测 )。 H NMR(500MHz， CD3OD， 其为两种异构体约 2 ∶ 1 比例的混合物 ) δ8.10(s， 0.5H)， 7.96(s， 1H)， 7.91(d， J ＝ 8.5， 0.5H)， 7.85(d， J ＝ 8.0， 1H)， 7.62(dd， J＝ 8.5， 1.5， 0.5H)， 7.52(d， J ＝ 8.0， 1H)， 7.324(d， J ＝ 8.5， 0.5H)， 7.315(d， J ＝ 8.5， 1H)， 7.20(d， J ＝ 2， 1H)， 7.18(d， J ＝ 2， 0.5H)， 7.02(dd， J ＝ 8.5， 2.5， 1H)， 7.00(dd， 0.5H)， 5.09( 宽 二 重 峰， J ＝ 15.5， 1H)， 4.84(d， 0.5H)， 4.13(d， J ＝ 15， 0.5H)， 3.91(s， 1.5H)， 3.90(s， 3H)， 3.66(d， J ＝ 15.5， 1H)， 3.34-3.23( 重叠的多重峰， 2.5H)， 3.23-3.17( 重叠的 多重峰， 0.5H)， 3.11-2.90( 重叠的多重峰， 2.5H)， 3.01(s， 9H)， 2.84(m， 1H)， 2.72( 宽多重峰， 1H)， 2.65( 宽多重峰， 1H)， 2.52(dd， J ＝ 9.9， 6.3， 0.5H)， 2.37(s， 4.5H)， 2.28-1.72( 重 叠的宽多重峰， 14H)， 1.62( 宽二重峰， 1.5H)， 1.57-1.18( 重叠的宽多重峰， 9H)， 1.07(dd， J ＝ 9.9， 6.0， 0.5H)， 0.18(t， J ＝ 6.0， 0.5H)。 通过使用 Shimadzu-VP 设备 ( 在 220nm 进行 UV 检测 ) 和 Waters Micromass 来进行 LC/MS。 HPLC 方法 ： 溶剂 A ＝ 10％ MeOH-90％ H2O-0.1％ TFA， 溶剂 B ＝ 90％ MeOH-10％ H2O-0.1％ TFA， 起始％ B ＝ 0， 最终％ B ＝ 100， 梯度时间＝ 2 分钟， 终止时间＝ 3 分钟， 流速＝ 5mL/min， 柱： Xterra MS C18S73.0×50mm ； (ES+)m/z(M+H)+ ＝ 701.46， HPLCRt ＝ 1.870 分钟。 HPLC 方法 ： 溶剂 A ＝ 5％ MeCN-95％ H2O-10mM NH4OAc， 溶剂 B ＝ 95％ MeCN-5％ H2O-10mMNH4OAc， 起始％ B ＝ 0， 最终％ B ＝ 100， 梯度时间＝ 2 分钟， 终止 时间＝ 3 分钟， 流速＝ 5mL/min， 柱： Phenomenex Lina C185μm 3.0×50mm ； (ES+)m/z(M+H)+ ＝ 701.46， HPLC Rt ＝ 1.390 分钟。通过使用 Shimadzu-VP 设备 ( 在 254nm 和 256nm 进行 UV 检测 ) 来进行分析性 HPLC。分析性 HPLC 方法 ： 溶剂 A ＝ 5％ MeCN-95％ H2O-0.1％ TFA， 溶剂 B ＝ 95％ MeCN-5％ H2O-0.1％ TFA， 起始％ B ＝ 10， 最终％ B ＝ 100， 梯度时间＝ 10 分 钟， 终止时间＝ 20 分钟， 流速＝ 1mL/min， 柱： Waters Sunfire C-18， 4.6×150mm， 3.5μm， Rt ＝ 11.66 分钟 ； 柱： Waters Xbridge Phenyl 柱 4.6×150mm， 3.5μm， Rt ＝ 10.40 分钟。
13- 环己基 -N-[( 二甲基氨基 ) 磺酰基 ]-3- 甲氧基 -6-[[4-(3- 甲基 -1， 2， 4- 噁 -10- 甲酰胺二唑 -5- 基 )- 哌啶 -1- 基 ] 羰基 ]-7H- 吲哚并 [2， 1-a][2] 苯并氮杂
以与上述相似的方式通过不饱和酸与 3- 甲基 -5-( 哌啶 -4- 基 )-1， 2， 4- 噁二唑 之间的偶联反应来制备标题化合物， 其为 TFA 盐。通过 Shimadzu-VP 制备性反相 HPLC 使用 下述分离方法来纯化 ： 溶剂 A ＝ 10％ MeOH-90％ H2O-0.1％ TFA， 溶剂 B ＝ 90％ MeOH-10％ H2O-0.1％ TFA， 起始％ B ＝ 30， 最终％ B ＝ 100， 梯度时间＝ 10 分钟， 终止时间＝ 12 分钟， 流速＝ 30mL/min， 柱： Xterra Prep MS C185μ30×50mm， 馏分收集 ： 9.48-10.08 分钟。( 在 1 220nm 进行 UV 检测 )。H NMR(500MHz， CD3OD)δ8.12(s， 1H)， 7.91(d， J ＝ 8.5， 1H)， 7.59(dd， J ＝ 8.5， 1.5， 1H)， 7.55(d， J ＝ 8.5， 1H)， 7.15(dd， J ＝ 8.5， 2.5， 1H)， 7.10(s， 1H)， 6.98(s， 1H)， 5.13( 宽多重峰， 1H)， 4.37( 宽多重峰， 1H)， 3.93(s， 3H)， 3.27-3.07( 重叠的多重峰， 4H)， 3.02(s， 6H)， 2.92-2.81( 重叠的多重峰， 2H)， 2.35(s， 3H)， 2.21-1.67( 重叠的宽多重 峰， 10H)， 1.57-1.32( 重叠的宽多重峰， 3H)， 1-24( 宽多重峰， 1H)。通过使用 Shimadzu-VP 设备 ( 在 220nm 进行 UV 检测 ) 和 Waters Micromass 来进行 LC/MS。HPLC 方法 ： 溶剂 A ＝ 10 ％ MeOH-90 ％ H2O-0.1 ％ TFA， 溶剂 B ＝ 90 ％ MeOH-10 ％ H2O-0.1 ％ TFA， 起始％ B ＝ 0， 最终％ B ＝ 100， 梯度时间＝ 2 分钟， 终止时间＝ 3 分钟， 流速＝ 5mL/min， 柱： Xterra MSC18S73.0×50mm ； (ES+)m/z(M+H)+ ＝ 687.42， HPLCRt ＝ 1.882 分钟。HPLC 方法 ： 溶剂 A ＝ 5 ％ MeCN-95 ％ H2O-10mM NH4OAc， 溶剂 B ＝ 95 ％ MeCN-5 ％ H2O-10mMNH4OAc， 起始％ B ＝ 0， 最终％ B ＝ 100， 梯度时间＝ 2 分钟， 终止时间＝ 3 分钟， 流速＝ 5mL/min， 柱： Phenomenex + Lina C185μm 3.0×50mm ； (ES+)m/z(M+H) ＝ 687.40， HPLCRt ＝ 1.440 分 钟。 通 过 使 用 Shimadzu-VP 设备 ( 在 254nm 和 256nm 进行 UV 检测 ) 来进行分析性 HPLC。分析性 HPLC 方 法： 溶剂 A ＝ 5％ MeCN-95％ H2O-0.1％ TFA， 溶剂 B ＝ 95％ MeCN-5％ H2O-O.1％ TFA， 起始％ B ＝ 10， 最终％ B ＝ 100， 梯度时间＝ 10 分钟， 终止时间＝ 20 分钟， 流速＝ 1mL/min， 柱： Waters Sunfire C-18， 4.6×150mm， 3.5μm， Rt ＝ 11.62 分钟 ； 柱： Waters Xbridge Phenyl 柱 4.6×150mm， 3.5μm， Rt ＝ 10.46 分钟。
8- 环 己 基 -N-[( 二 甲 基 氨 基 ) 磺 酰 基 ]-1， 1a， 2， 12b- 四 氢 -11- 甲 氧 基 -1a-[[4-(4- 甲基 -4H-1， 2， 4- 三唑 -3- 基 )- 哌啶 -1- 基 ] 羰基 ]- 环丙并 [d] 吲哚并
[2， 1-a][2] 苯并氮杂
-5- 甲酰胺以与上述相似的方式通过外消旋酸与 4-(4- 甲基 -4H-1， 2， 4- 三唑 -3- 基 ) 哌啶 (2HCl， H2O) 之间的偶联反应来制备标题化合物， 其为 TFA 盐。通过 Shimadzu-VP 制备性反 相 HPLC 使用下述分离方法来纯化 ： 溶剂 A ＝ 1O％ MeOH-90％ H2O-0.1％ TFA， 溶剂 B ＝ 90％ MeOH-1O％ H2O-0.1％ TFA， 起始％ B ＝ 30， 最终％ B ＝ 100， 梯度时间＝ 10 分钟， 终止时间＝ 12 分钟， 流速＝ 30mL/min， 柱： Xterra Prep MS C185μ30×50mm， 馏分收集 ： 9.23-9.83 分 钟。( 在 220nm 进行 UV 检测 )。通过使用 Shimadzu-VP 设备 ( 在 220nm 进行 UV 检测 ) 和 Waters Micromass 来进行 LC/MS。HPLC 方法 ： 溶剂 A ＝ 1O％ MeOH-90％ H2O-0.1％ TFA， 溶 剂 B ＝ 90％ MeOH-1O％ H2O-O.1％ TFA， 起始％ B ＝ O， 最终％ B ＝ 100， 梯度时间＝ 2 分钟， 终止时间＝ 3 分钟， 流速＝ 5mL/min， 柱： Xterra MS C18S73.O×50mm ； (ES+)m/z(M+H)+ ＝ 700.46， HPLCRt ＝ 1.707 分钟。 HPLC 方法 ： 溶剂 A ＝ 5％ MeCN-95％ H2O-1OmM NH4OAc， 溶剂 B ＝ 95％ MeCN-5％ H2O-10mM NH4OAc， 起始％ B ＝ O， 最终％ B ＝ 100， 梯度时间＝ 2 分钟， 终止 时间＝ 3 分钟， 流速＝ 5mL/min， 柱： Phenomenex Lina C185μm3.O×50mm ； (ES+)m/z(M+H)+ ＝ 700.39， HPLC Rt ＝ 1.283 分钟。通过使用 Shimadzu-VP 设备 ( 在 254nm 和 256nm 进行 UV 检测 ) 来进行分析性 HPLC。分析性 HPLC 方法 ： 溶剂 A ＝ 5％ MeCN-95％ H2O-0.1％ TFA， 溶剂 B ＝ 95％ MeCN-5％ H2O-0.1％ TFA， 起始％ B ＝ 10， 最终％ B ＝ 100， 梯度时间＝ 10 分 钟， 终止时间＝ 20 分钟， 流速＝ 1mL/min， 柱： Waters Sunfire C-18， 4.6×150mm， 3.5μm， Rt ＝ 8.49 分钟 ； 柱： Waters Xbridge Phenyl 柱 4.6×150mm， 3.5μm， Rt ＝ 8.37 分钟。
13- 环己基 -N-[( 二甲基氨基 ) 磺酰基 ]-3- 甲氧基 -6-[[4-(4- 甲基 -4H-1， 2， -10- 甲酰胺4- 三唑 -3- 基 )- 哌啶 -1- 基 ] 羰基 ]-7H- 吲哚并 [2， 1-a][2] 苯并氮杂
以与上述相似的方式通过不饱和酸与 4-(4- 甲基 -4H-1， 2， 4- 三唑 -3- 基 ) 哌啶 (2HCl， H2O) 之间的偶联反应来制备标题化合物， 其为 TFA 盐。通过 Shimadzu-VP 制备性反 相 HPLC 使用下述分离方法来纯化 ： 溶剂 A ＝ 10％ MeOH-90％ H2O-0.1％ TFA， 溶剂 B ＝ 90％ MeOH-10％ H2O-0.1％ TFA， 起始％ B ＝ 30， 最终％ B ＝ 100， 梯度时间＝ 10 分钟， 终止时间＝ 12 分钟， 流速＝ 30mL/min， 柱： Xterra Prep MS C185μ30×50mm， 馏分收集 ： 9.34-9.94 分 1 钟。( 在 220nm 进行 UV 检测 )。 H NMR(500MHz， CD3OD)δ9.22(s， 1H)， 8.12(s， 1H)， 7.91(d， J ＝ 9， 1H)， 7.58(dd， J ＝ 8.5， 1.5， 1H)， 7.56(d， J ＝ 9， 1H)， 7.16(dd， J ＝ 8.5， 2.5， 1H)， 7.10(d， J ＝ 2.5， 1H)， 7.01(s， 1H)， 5.15( 宽多重峰， 1H)， 4.38( 宽多重峰， 1H)， 3.93(s， 3H)， 3.88(s， 3H)， 3.40-3.26( 重叠的多重溶剂峰， 2H)， 3.14( 重叠的多重峰， 2H)， 3.02(s， 6H)， 2.88( 重叠的多重峰， 2H)， 2.21-1.88( 重叠的多重峰， 6H)， 1.79( 重叠的宽多重峰， 4H)， 1.45( 重叠的宽多重峰， 3H)， 1.24( 宽多重峰， 1H)。通过使用 Shimadzu-VP 设备 ( 在 220nm 进行 UV 检测 ) 和 Waters Micromass 来进行 LC/MS。HPLC 方法 ： 溶剂 A ＝ 10％ MeOH-90％ H2O-0.1％ TFA， 溶剂 B ＝ 90％ MeOH-10％ H2O-0.1％ TFA， 起始％ B ＝ 0， 最终％ B ＝ 100， 梯度 时间＝ 2 分钟， 终止时间＝ 3 分钟， 流速＝ 5mL/min， 柱： Xterra MS C18S73.0×50mm ； (ES+) + m/z(M+H) ＝ 686.43， HPLCRt ＝ 1.688 分钟。HPLC 方法 ： 溶剂 A ＝ 5％ MeCN-95％ H2O-10mM NH4OAc， 溶剂 B ＝ 95％ MeCN-5％ H2O-10mMNH4OAc， 起始％ B ＝ 0， 最终％ B ＝ 100， 梯度时间 ＝ 2 分钟， 终止时间＝ 3 分钟， 流速＝ 5mL/min， 柱： Phenomenex Lina C185μm 3.0×50mm ； + (ES+)m/z(M+H) ＝ 686.41， HPLC Rt ＝ 1.282 分钟。通过使用 Shimadzu-VP 设备 ( 在 254nm 和 256nm 进行 UV 检测 ) 来进行分析性 HPLC。分析性 HPLC 方法 ： 溶剂 A ＝ 5％ MeCN-95％ H2O-0.1 ％ TFA， 溶剂 B ＝ 95 ％ MeCN-5 ％ H2O-0.1 ％ TFA， 起始％ B ＝ 10， 最终％ B ＝ 100， 梯度时间＝ 10 分钟， 终止时间＝ 20 分钟， 流速＝ 1mL/min， 柱： Waters Sunfire C-18， 4.6×150mm， 3.5μm， Rt ＝ 8.28 分钟 ； 柱： Waters Xbridge Phenyl 柱 4.6×150mm， 3.5μm， Rt ＝ 8.57 分钟。
8- 环 己 基 -1， 1a， 2， 12b- 四 氢 -11- 甲 氧 基 -N-[(1- 甲 基 乙 基 ) 磺 酰 基 ]-1a-[[4-(3- 甲基 -1， 2， 4- 噁二唑 -5- 基 )- 哌啶 -1- 基 ] 羰基 ]- 环丙并 [d] 吲哚并
[2， 1-a][2] 苯并氮杂
-5- 甲酰胺 -1a(2H)- 甲以与上述相似的方式通过 8- 环己基 -1， 12b- 二氢 -11- 甲氧基 -5-[[[(1- 甲基乙基 ) 磺酰基 ] 氨基 ] 羰基 ]- 环丙并 [d] 吲哚并 [2， 1-a][2] 苯并氮杂酸与 3- 甲基 -5-( 哌啶 -4- 基 )-1， 2， 4- 噁二唑之间的偶联反应来制备标题化合物， 其为 TFA 盐。通过 Shimadzu-VP 制备性反相 HPLC 使用下述分离方法来纯化 ： 溶剂 A ＝ 10 ％ MeOH-90％ H2O-0.1％ TFA， 溶剂 B ＝ 90％ MeOH-10％ H2O-0.1％ TFA， 起始％ B ＝ 30， 最终％ B ＝ 100， 梯度时间＝ 10 分钟， 终止时间＝ 12 分钟， 流速＝ 30mL/min， 柱： Xterra Prep MS C185μ30×50mm， 馏分收集 ： 9.35-9.95 分钟。( 在 220nm 进行 UV 检测 )。1HNMR(500MHz， CD3OD， 其为两种异构体约 2.5 ∶ 1 比例的混合物 )δ8.12(s， 0.4H)， 7.97(s， 1H)， 7.91(d， J ＝ 8.5， 0.4H)， 7.85(d， J ＝ 8.5， 1H)， 7.63(d， J ＝ 9.0， 0.4H)， 7.53(d， J ＝ 8.0， 1H)， 7.32(d， J ＝ 8.5， 0.4H)， 7.31(d， J ＝ 8.5， 1H)， 7.19(d， J ＝ 2.5， 1H)， 7.18(d， J ＝ 2.5， 0.4H)， 7.02(dd， J ＝ 8.5， 2.5， 1H)， 7.00(dd， 0.4H)， 5.07( 宽二重峰， J ＝ 15， 1H)， 4.80(d， 0.4H)， 4.12(d， J ＝ 15， 0.4H)， 3.99(m， 1.4H)， 3.91(s， 1.2H)， 3.90(s， 3H)， 3.64(d， J ＝ 15， 1H)， 3.42-3.30( 重叠的多重峰， 1.2H)， 3.30-3.17(m， 1H)， 3.10( 宽多重峰， 1H)， 2.98(m， 1.4H)， 2.91-2.69( 重 叠 的 多 重 峰， 2.4H)， 2.63( 宽 多 重 峰， 1H)， 2.53(dd， J ＝ 9.9， 6.3， 0.4H)， 2.38(s， 4.2H)， 2.27-1.74( 重 叠 的 多 重 峰， 13H)， 1.64( 宽 二 重 峰， 1.4H)， 1.56-1.37( 重 叠的多重峰， 5.6H)， 1.47-1.44( 与多重峰重叠的单峰， 8.4H)， 1.36-1.19( 重叠的多重峰， 3H)， 1.08(dd， J ＝ 9.8， 6.0， 0.4H)， 0.17(t， J ＝ 6.0， 0.4H)。 通 过 使 用 Shimadzu-VP 设 备 ( 在 220nm 进行 UV 检测 ) 和 Waters Micromass 来进行 LC/MS。HPLC 方法 ： 溶剂 A ＝ 10 ％ MeOH-90 ％ H2O-0.1 ％ TFA， 溶剂 B ＝ 90 ％ MeOH-10 ％ H2O-0.1 ％ TFA， 起始％ B ＝ 0， 最终％ B ＝ 100， 梯度时间＝ 2 分钟， 终止时间＝ 3 分钟， 流速＝ 5mL/min， 柱： Xterra MS + C18S73.0×50mm ； (ES+)m/z(M+H) ＝ 700.38， HPLCRt ＝ 1.897 分钟。HPLC 方法 ： 溶剂 A ＝ 5％ MeCN-95％ H2O-10mM NH4OAc， 溶剂 B ＝ 95％ MeCN-5％ H2O-10mM NH4OAc， 起始％ B ＝ 0， 最终％ B ＝ 100， 梯度时间＝ 2 分钟， 终止时间＝ 3 分钟， 流速＝ 5mL/min， 柱： Phenomenex + Lina C185μm 3.0×50mm ； (ES+)m/z(M+H) ＝ 700.45， HPLCRt ＝ 1.265 分 钟。 通 过 使 用 Shimadzu-VP 设备 ( 在 254nm 和 256nm 进行 UV 检测 ) 来进行分析性 HPLC。分析性 HPLC 方 法： 溶剂 A ＝ 5％ MeCN-95％ H2O-0.1％ TFA， 溶剂 B ＝ 95％ MeCN-5％ H2O-0.1％ TFA， 起始％ B ＝ 10， 最终％ B ＝ 100， 梯度时间＝ 10 分钟， 终止时间＝ 20 分钟， 流速＝ 1mL/min， 柱：Waters Sunfire C-18， 4.6×150mm， 3.5μm， Rt ＝ 11.49 分钟 ； 柱： Waters Xbridge Phenyl 柱 4.6×150mm， 3.5μm， Rt ＝ 10.30 分钟。
8- 环 己 基 -N-[( 二 甲 基 氨 基 ) 磺 酰 基 ]-1， 1a， 2， 12b- 四 氢 -11- 甲 氧 基 -1a-[[4-(5- 甲基 -1， 3， 4- 噁二唑 -2- 基 )- 哌啶 -1- 基 ] 羰基 ]- 环丙并 [d] 吲哚并
[2， 1-a][2] 苯并氮杂
-5- 甲酰胺以与上述相似的方式通过外消旋酸与 2- 甲基 -5-( 哌啶 -4- 基 )-1， 3， 4- 噁二唑 之间的偶联反应来制备标题化合物， 其为 TFA 盐。通过 Shimadzu-VP 制备性反相 HPLC 使用 下述分离方法来纯化 ： 溶剂 A ＝ 10％ MeOH-90％ H2O-0.1％ TFA， 溶剂 B ＝ 90％ MeOH-10％ H2O-0.1％ TFA， 起始％ B ＝ 30， 最终％ B ＝ 100， 梯度时间＝ 10 分钟， 终止时间＝ 12 分钟， 流速＝ 30mL/min， 柱： Xterra Prep MS C185μ30×50mm， 馏分收集 ： 8.85-9.45 分钟。( 在 1 220nm 进行 UV 检测 )。 H NMR(500MHz， CD3OD， 其为两种异构体约 2 ∶ 1 比例的混合物 ) δ8.09(s， 0.5H)， 7.99(s， 1H)， 7.91(d， J ＝ 8.5， 0.5H)， 7.87(d， J ＝ 8.5， 1H)， 7.62(dd， 0.5H)， 7.55(dd， 1H)， 7.33(d， J ＝ 8.5， 0.5H)， 7.32(d， J ＝ 8.5， 1H)， 7.20(d， J ＝ 2.5， 1H)， 7.19(d， J ＝ 2.5， 0.5H)， 7.03(dd， J ＝ 8.5， 2.5， 1H)， 7.00(dd， J ＝ 8.5， 2.5， 0.5H)， 5.10( 宽 二 重 峰， J ＝ 15， 1H)， 4.82(d， 0.5H)， 4.15(d， J ＝ 15， 0.5H)， 3.92(s， 1.5H)， 3.90(s， 3H)， 3.67(d， J ＝ 15， 1H)， 3.39-3.10( 重 叠 的 多 重 峰， 3H)3.10-2.93( 重 叠 的 多 重 峰， 2.5H)， 3.00(s， 9H)， 2.91-2.80( 重叠的多重峰， 1.5H)， 2.72( 宽多重峰， 0.5H)， 2.65( 宽多重峰， 1H)， 2.55(s， 4.5H)， 2.52(m， 0.5H)， 2.29-1.74( 重 叠 的 宽 多 重 峰， 14H)， 1.63( 宽 二 重 峰， 1.5H)， 1.57-1.38( 重叠的宽多重峰， 5.5H)， 1.38-1.19( 重叠的宽多重峰， 3.5H)， 1.07(dd， J ＝ 9.6， 6.0， 0.5H)， 0.18(t， J ＝ 6.0， 0.5H)。 通过使用 Shimadzu-VP 设备 ( 在 220nm 进行 UV 检测 ) 和 Waters Micromass 来进行 LC/MS。 HPLC 方法 ： 溶剂 A ＝ 10％ MeOH-90％ H2O-0.1％ TFA， 溶剂 B ＝ 90％ MeOH-10％ H2O-0.1％ TFA， 起始％ B ＝ 0， 最终％ B ＝ 100， 梯度时间＝ 2 分钟， 终止时间＝ 3 分钟， 流速＝ 5mL/min， 柱： Xterra MS C18S73.0×50mm ； (ES+)m/z(M+H)+ ＝ 701.34， HPLC Rt ＝ 1.842 分钟。 HPLC 方法 ： 溶剂 A ＝ 5％ MeCN-95％ H2O-10mM NH4OAc， 溶剂 B ＝ 95％ MeCN-5％ H2O-10mMNH4OAc， 起始％ B ＝ 0， 最终％ B ＝ 100， 梯度时间＝ 2 分钟， 终止 时间＝ 3 分钟， 流速＝ 4mL/min， 柱： Phenomenex Lina C185μm 3.0×50mm ； (ES+)m/z(M+H)+ ＝ 701.40， HPLC Rt ＝ 1.315 分钟。通过使用 Shimadzu-VP 设备 ( 在 254nm 和 256nm 进行 UV 检测 ) 来进行分析性 HPLC。分析性 HPLC 方法 ： 溶剂 A ＝ 5％ MeCN-95％ H2O-0.1％ TFA， 溶剂 B ＝ 95％ MeCN-5％ H2O-0.1％ TFA， 起始％ B ＝ 10， 最终％ B ＝ 100， 梯度时间＝ 10 分钟， 终止时间＝ 20 分钟， 流速＝ 1mL/min， 柱： Waters Sunfire C-18， 4.6×150mm， 3.5μm， Rt ＝ 10.78 分钟 ； 柱： Waters Xbridge Phenyl 柱 4.6×150mm， 3.5μm， Rt ＝ 9.65 分钟。
(1aR， 12bS)-8- 环己基 -N-[( 二甲基氨基 ) 磺酰基 ]-1， 1a， 2， 12b- 四氢 -11- 甲 氧基 -1a-[[4-(5- 甲基 -1， 3， 4- 噁二唑 -2- 基 )- 哌啶 -1- 基 ] 羰基 ]- 环丙并 [d] 吲哚并 [2， 1-a][2] 苯并氮杂 -5- 甲酰胺
以与上述相似的方式通过手性酸 (1aR， 12bS)-8- 环己基 -5-[[[( 二甲基氨基 ) 磺 酰基 ] 氨基 ] 羰基 ]-1， 12b- 二氢 -11- 甲氧基 - 环丙并 [d] 吲哚并 [2， 1-a][2] 苯并氮杂 -1a(2H)- 甲酸与 2- 甲基 -5-( 哌啶 -4- 基 )-1， 3， 4- 噁二唑之间的偶联反应来制备标题化合物， 其为 TFA 盐。通过 Shimadzu-VP 制备性反相 HPLC 使用下述分离方法来纯化 ： 溶剂 A ＝ 10％ MeOH-90％ H2O-0.1％ TFA， 溶剂 B ＝ 90％ MeOH-10％ H2O-0.1％ TFA， 起始％ B ＝ 30， 最终％ B ＝ 100， 梯度时间＝ 10 分钟， 终止时间＝ 12 分钟， 流速＝ 30mL/min， 柱： Xterra Prep MS C185μ30×50mm， 馏分收集 ： 8.85-9.45 分钟。( 在 220nm 进行 UV 检测 )。通过使 用 Shimadzu-VP 设备 ( 在 220nm 进行 UV 检测 ) 和 Waters Micromass 来进行 LC/MS。HPLC 方法 ： 溶剂 A ＝ 10％ MeOH-90％ H2O-0.1％ TFA， 溶剂 B ＝ 90％ MeOH-10％ H2O-0.1％ TFA， 起 始％ B ＝ 0， 最终％ B ＝ 100， 梯度时间＝ 2 分钟， 终止时间＝ 3 分钟， 流速＝ 5mL/min， 柱： + Xterra MS C18S73.0×50mm ； (ES+)m/z(M+H) ＝ 701.34， HPLC Rt ＝ 1.817 分钟。HPLC 方 法： 溶剂 A ＝ 5％ MeCN-95％ H2O-10mM NH4OAc， 溶剂 B ＝ 95％ MeCN-5％ H2O-10mMNH4OAc， 起 始％ B ＝ 0， 最终％ B ＝ 100， 梯度时间＝ 2 分钟， 终止时间＝ 3 分钟， 流速＝ 4mL/min， 柱： + HPLC Rt ＝ 1.345 分钟。 Phenomenex Lina C185μm 3.0×50mm ； (ES+)m/z(M+H) ＝ 701.34， 分析性 HPLC 方法 ： 溶剂 A ＝ 5 ％ MeOH-95 ％ H2O-10mM NH4HCO3(pH ＝ 9.5)， 溶剂 B ＝ 95 ％ MeOH-5％ H2O-10mM NH4HCO3(pH ＝ 9.5)， 起始％ B ＝ 10， 最终％ B ＝ 100， 梯度时间＝ 10 分钟， 终止时间＝ 20 分钟， 流速＝ 1mL/min， 柱： PhenomenexGemini， Rt ＝ 10.89 分钟 ； 柱： Waters Xbridge Phe， Rt ＝ 10.42 分钟。旋光度 [α] ＝ -66.64， c ＝ 3.14mg/ml(MeOH)， 589nm， 50mm 样品池。
1a-[[4-(5- 氨基 -1， 3， 4- 噻二唑 -2- 基 )- 哌啶 -1- 基 ] 羰基 ]-8- 环己基 -N-[( 二 甲基氨基 ) 磺酰基 ]-1， 1a， 2， 12b- 四氢 -11- 甲氧基 - 环丙并 [d] 吲哚并 [2， 1-a][2] 苯并
氮杂
-5- 甲酰胺以与上述相似的方式通过外消旋酸与 5-( 哌啶 -4- 基 )-1， 3， 4- 噻二唑 -2- 胺之 间的偶联反应来制备标题化合物， 其为 TFA 盐。通过 Shimadzu-VP 制备性反相 HPLC 使用 下述分离方法来纯化 ： 溶剂 A ＝ 10％ MeOH-90％ H2O-0.1％ TFA， 溶剂 B ＝ 90％ MeOH-10％ H2O-0.1 ％ TFA， 起始％ B ＝ 30， 最终％ B ＝ 100， 梯度时间＝ 10 分钟， 终止时间＝ 12 分 钟， 流速＝ 30mL/min， 柱： Xterra Prep MS C185μ30×50mm， 馏分收集 ： 8.18-8.78 分钟。 1 ( 在 220nm 进行 UV 检测 )。 H NMR(500MHz， CD3OD， 其为两种异构体约 2.5 ∶ 1 比例的混合 物 )δ8.09(s， 0.4H)， 7.99(s， 1H)， 7.93(d， J ＝ 8.5， 0.4H)， 7.89(d， J ＝ 8.5， 1H)， 7.63(d， J ＝ 7.0， 0.4H)， 7.56(d， J ＝ 8.5， 1H)， 7.34(d， J ＝ 8.5， 1.4H)， 7.21(d， J ＝ 2.5， 1H)， 7.19(d， J ＝ 2.5， 0.4H)， 7.04(dd， J ＝ 8.5， 2.5， 1H)， 7.02(dd， 0.4H)， 5.14( 宽二重峰， 1H)， 4.94-4.83( 与溶剂峰重叠的二重峰， 0.4H)， 4.17(d， J ＝ 15， 0.4H)， 3.92(s， 1.2H)， 3.91(s， 3H)， 3.70(d， J ＝ 15， 1H)， 3.36-3.27( 重叠的多重峰， 2.8H)， 3.2( 重叠的多重峰， 1.4H)， 3.06-2.95( 重叠的多重峰， 2H)， 3.01(s， 8.4H)， 2.86( 宽多重峰， 0.4H)， 2.67( 宽多重峰， 1.4H)， 2.55(dd， J ＝ 9.6， 6.3， 0.4H)， 2.30-1.88( 重叠的宽多重峰， 8H)， 1.88-1.74( 重叠 的宽多重峰， 4H)， 1.65( 宽二重峰， 1H)， 1.58-1.37( 重叠的宽多重峰， 5H)， 1.37-1.20( 重 叠 的 宽 多 重 峰， 5H)， 1.08(dd， J ＝ 9.9， 6.0， 0.4H)， 0.22(t， J ＝ 6.0， 0.4H)。 通 过 使 用 Shimadzu-VP 设备 ( 在 220nm 进行 UV 检测 ) 和 Waters Micromass 来进行 LC/MS。HPLC 方 法： 溶剂 A ＝ 10 ％ MeOH-90 ％ H2O-0.1 ％ TFA， 溶剂 B ＝ 90 ％ MeOH-10 ％ H2O-0.1 ％ TFA， 起 始％ B ＝ 0， 最终％ B ＝ 100， 梯度时间＝ 2 分钟， 终止时间＝ 3 分钟， 流速＝ 5mL/min， 柱： + Xterra MS C18S73.0×50mm ； (ES+)m/z(M+H) ＝ 718.28， HPLCRt ＝ 1.715 分 钟。HPLC 方 法： 溶剂 A ＝ 5％ MeCN-95％ H2O-10mM NH4OAc， 溶剂 B ＝ 95％ MeCN-5％ H2O-10mM NH4OAc， 起始％ B ＝ 0， 最终％ B ＝ 100， 梯度时间＝ 2 分钟， 终止时间＝ 3 分钟， 流速＝ 4mL/min， 柱： + Phenomenex Lina C185μm 3.0×50mm ； (ES+)m/z(M+H) ＝ 718.38， HPLC Rt ＝ 1.210 分钟。 通过使用 Shimadzu-VP 设备 ( 在 254nm 和 256nm 进行 LV 检测 ) 来进行分析性 HPLC。分析 性 HPLC 方法 ： 溶剂 A ＝ 5％ MeCN-95％ H2O-0.1％ TFA， 溶剂 B ＝ 95％ MeCN-5％ H2O-0.1％ TFA， 起始％ B ＝ 10， 最终％ B ＝ 100， 梯度时间＝ 10 分钟， 终止时间＝ 20 分钟， 流速＝ 1mL/ min， 柱： Waters Sunfire C-18， 4.6×150mm， 3.5μm， Rt ＝ 8.80 分钟 ； 柱： Waters Xbridge Phenyl 柱 4.6×150mm， 3.5μm， Rt ＝ 8.52 分钟。
8- 环 己 基 -N-[( 二 甲 基 氨 基 ) 磺 酰 基 ]-1a-[[4-(3， 5- 二 甲 基 -4H-1， 2， 4- 三 唑 -4- 基 )- 哌啶 -1- 基 ] 羰基 ]-1， 1a， 2， 12b- 四氢 -11- 甲氧基 - 环丙并 [d] 吲哚并 [2， -5- 甲酰胺1-a][2] 苯并氮杂
以与上述相似的方式通过外消旋酸与 3， 5- 二甲基 -4-( 哌啶 -4- 基 )-4H-1， 2， 4- 三唑之间的偶联反应来制备标题化合物， 其为 TFA 盐。通过 Shimadzu-VP 制备性反相 HPLC 使用下述分离方法来纯化 ： 溶剂 A ＝ 10 ％ MeOH-90 ％ H2O-0.1 ％ TFA， 溶剂 B ＝ 90 ％ MeOH-10％ H2O-0.1％ TFA， 起始％ B ＝ 30， 最终％ B ＝ 100， 梯度时间＝ 10 分钟， 终止时间 ＝ 12 分钟， 流速＝ 30mL/min， 柱： Xterra Prep MS C185μ30×50mm， 馏分收集 ： 7.59-8.19 1 分钟。( 在 220nm 进行 UV 检测 )。 H NMR(500MHz， CD3OD， 其为两种异构体约 2 ∶ 1 比例的 混合物 )δ8.03( 重叠的单峰， 1.5H)， 7.93( 重叠的二重峰， 1.5H)， 7.59( 重叠的双二重峰， 1.5H)， 7.34(d， J ＝ 8.5， 1.5H)， 7.21( 重叠的多重峰， 1.5H)， 7.04(dd， J ＝ 8.5， 2.5， 1H)， 7.01(dd， J ＝ 8.5， 2.5， 0.5H)， 5.16(d， J ＝ 15， 1H)， 4.93(d， 0.5H)， 4.69(m， 1H)， 4.43(m， 0.5H)， 4.21(d， J ＝ 15.5， 0.5H)， 3.92(s， 1.5H)， 3.91(s， 3H)， 3.69(d， J ＝ 15.5， 1H)， 3.20(m， 1H)， 3.09-2.92(m， 1H)， 3.02(s， 6H)， 2.97(s， 3H)， 2.90-2.76( 单 峰 和 重 叠 的 多 重 峰， 5.5H)， 2.76-2.41( 宽单峰和重叠的多重峰， 9H)， 2.31( 宽多重峰， 1.5H)， 2.25-1.88( 重 叠的宽多重峰， 9H)， 1.88( 宽多重峰， 4H)， 1.63( 宽二重峰， 1H)， 1.55-1.37( 重叠的宽多重 峰， 5.5H)， 1.37-1.18( 重叠的宽多重峰， 3.5H)， 1.06( 宽多重峰， 0.5H)， 0.21(t， J ＝ 6.1， 0.5H)。通过使用 Shimadzu-VP 设备 ( 在 220nm 进行 UV 检测 ) 和 Waters Micromass 来进 行 LC/MS。HPLC 方法 ： 溶剂 A ＝ 10％ MeOH-90％ H2O-0.1％ TFA， 溶剂 B ＝ 90％ MeOH-10％ H2O-0.1％ TFA， 起始％ B ＝ 0， 最终％ B ＝ 100， 梯度时间＝ 2 分钟， 终止时间＝ 3 分钟， 流速 + ＝ 5mL/min， 柱： Xterra MS C18S73.0×50mm ； (ES+)m/z(M+H) ＝ 714.46， HPLCRt ＝ 1.675 分 钟。 HPLC 方法 ： 溶剂 A ＝ 5％ MeCN-95％ H2O-10mM NH4OAc， 溶剂 B ＝ 95％ MeCN-5％ H2O-10mM NH4OAc， 起始％ B ＝ 0， 最终％ B ＝ 100， 梯度时间＝ 2 分钟， 终止时间＝ 3 分钟， 流速＝ 4mL/ + min，柱 ： Phenomenex Lina C185μm 3.0×50mm ； (ES+)m/z(M+H) ＝ 714.47， HPLC Rt ＝ 1.207min。通过使用 Shimadzu-VP 设备 ( 在 254nm 和 256nm 进行 UV 检测 ) 来进行分析性 HPLC。分析性 HPLC 方法 ： 溶剂 A ＝ 5％ MeCN-95％ H2O-0.1％ TFA， 溶剂 B ＝ 95％ MeCN-5％ H2O-0.1％ TFA， 起始％ B ＝ 10， 最终％ B ＝ 100， 梯度时间＝ 10 分钟， 终止时间＝ 20 分钟， 流 速＝ 1mL/min， 柱： Waters Sunfire C-18， 4.6×150mm， 3.5μm， Rt ＝ 7.65 分钟 ； 柱： Waters Xbridge Phenyl 柱 4.6×150mm， 3.5μm， Rt ＝ 8.31 分钟。8- 环 己 基 -1， 1a， 2， 12b- 四 氢 -11- 甲 氧 基 -N-[(1- 甲 基 乙 基 ) 磺 酰 基 ]-1a-[[4-(5- 甲基 -1， 3， 4- 噁二唑 -2- 基 )- 哌啶 -1- 基 ] 羰基 ]- 环丙并 [d] 吲哚并
[2， 1-a][2] 苯并氮杂
-5- 甲酰胺以 与 上 述 相 似 的 方 式 通 过 外 消 旋 酸 8- 环 己 基 -1， 12b- 二 氢 -11- 甲 氧 基 -5-[[[(1- 甲基乙基 ) 磺酰基 ] 氨基 ] 羰基 ]- 环丙并 [d] 吲哚并 [2， 1-a][2] 苯并氮 杂 -1a(2H)- 甲酸与 2- 甲基 -5-( 哌啶 -4- 基 )-1， 3， 4- 噁二唑之间的偶联反应来制备 标题化合物， 其为 TFA 盐。通过 Shimadzu-VP 制备性反相 HPLC 使用下述分离方法来纯化 ： 溶剂 A ＝ 10％ MeOH-90％ H2O-0.1％ TFA， 溶剂 B ＝ 90％ MeOH-10％ H2O-0.1％ TFA， 起始％ B ＝ 30， 最终％ B ＝ 100， 梯度时间＝ 10 分钟， 终止时间＝ 12 分钟， 流速＝ 30mL/min， 柱： Xterra Prep MS C185μ30×50mm， 馏分收集 ： 8.68-9.91 分钟。( 在 220nm 进行 UV 检测 )。 1 HNMR(500MHz， CD3OD， 其为两种异构体约 2 ∶ 1 比例的混合物 )δ8.10(s， 0.5H)， 7.99(s， 1H)， 7.92(d， J ＝ 8.5， 0.5H)， 7.87(d， J ＝ 8.5， 1H)， 7.63(dd， J ＝ 8.5， 1.5， 0.5H)， 7.56(d， J ＝ 8.0， 1H)， 7.31(d， J ＝ 8.5， 1.5H)， 7.19(d， J ＝ 2.5， 1H)， 7.18(d， J ＝ 2.5， 0.5H)， 7.02(dd， J ＝ 8.5， 2.5， 1H)， 6.99(dd， 0.5H)， 5.08( 宽二重峰， J ＝ 14.7， 1H)， 4.80(d， J＝ 14.7， 0.5H)， 4.13(d， J ＝ 15， 0.5H)， 3.98(m， 1.5H)， 3.91(s， 1.5H)， 3.90(s， 3H)， 3.65(d， J ＝ 15， 1H)， 3.38-3.23( 重 叠 的 多 重 峰， 2H)， 3.20(m， 0.5H)， 3.07( 宽 多 重 峰， 1H)， 2.98(m， 1.5H)， 2.92-2.67( 重 叠 的 多 重 峰， 2.5H)， 2.63( 宽 多 重 峰， 1H)， 2.53(m， 0.5H)， 2.56(s， 4.5H)， 2.29-1.86( 重叠的多重峰， 10H)， 1.86-1.73( 重叠的多重峰， 4H)， 1.63( 宽二重峰， 1.5H)， 1.56-1.36( 重叠的多重峰， 5H)， 1.44( 与多重峰重叠的宽单峰， 9H)， 1.36-1.19( 重 叠 的 多 重 峰， 4H)， 1.06(dd， J ＝ 9.9， 6.0， 0.5H)， 0.18(t， J ＝ 6.0， 0.5H)。 通 过 使 用 Shimadzu-VP 设备 ( 在 220nm 进行 UV 检测 ) 和 WatersMicromass 来进行 LC/MS。HPLC 方 法： 溶剂 A ＝ 10 ％ MeOH-90 ％ H2O-0.1 ％ TFA， 溶剂 B ＝ 90 ％ MeOH-10 ％ H2O-0.1 ％ TFA， 起 始％ B ＝ 0， 最终％ B ＝ 100， 梯度时间＝ 2 分钟， 终止时间＝ 3 分钟， 流速＝ 5mL/min， 柱： + Xterra MS C18S73.0×50mm ； (ES+)m/z(M+H) ＝ 700.34， HPLCRt ＝ 1.837 分 钟。HPLC 方 法： 溶剂 A ＝ 5％ MeCN-95％ H2O-10mM NH4OAc， 溶剂 B ＝ 95％ MeCN-5％ H2O-10mM NH4OAc， 起始％ B ＝ 0， 最终％ B ＝ 100， 梯度时间＝ 2 分钟， 终止时间＝ 3 分钟， 流速＝ 4mL/min， 柱： + Phenomenex Lina C185μm 3.0×50mm ； (ES+)m/z(M+H) ＝ 700.46， HPLC Rt ＝ 1.207 分钟。 通过使用 Shimadzu-VP 设备 ( 在 254nm 和 256nm 进行 UV 检测 ) 来进行分析性 HPLC。分析 性 HPLC 方法 ： 溶剂 A ＝ 5％ MeCN-95％ H2O-0.1％ TFA， 溶剂 B ＝ 95％ MeCN-5％ H2O-0.1％TFA， 起始％ B ＝ 10， 最终％ B ＝ 100， 梯度时间＝ 10 分钟， 终止时间＝ 20 分钟， 流速＝ 1mL/ min， 柱： Waters Sunfire C-18， 4.6×150mm， 3.5μm， Rt ＝ 10.67 分钟 ； 柱： Waters Xbridge Phenyl 柱 4.6×150mm， 3.5μm， Rt ＝ 9.61 分钟。
8- 环 己 基 -N-[( 二 甲 基 氨 基 ) 磺 酰 基 ]-1， 1a， 2， 12b- 四 氢 -11- 甲 氧 基 -1a-[[4-(5- 苯基 -1， 3， 4- 噁二唑 -2- 基 )- 哌啶 -1- 基 ] 羰基 ]- 环丙并 [d] 吲哚并
[2， 1-a][2] 苯并氮杂
-5- 甲酰胺以与上述相似的方式通过外消旋酸与 2- 苯基 -5-( 哌啶 -4- 基 )-1， 3， 4- 噁二唑 之间的偶联反应来制备标题化合物， 其为 TFA 盐。通过 Shimadzu-VP 制备性反相 HPLC 使用 下述分离方法来纯化 ： 溶剂 A ＝ 10％ MeOH-90％ H2O-0.1％ TFA， 溶剂 B ＝ 90％ MeOH-10％ H2O-0.1 ％ TFA， 起始％ B ＝ 30， 最终％ B ＝ 100， 梯度时间＝ 10 分钟， 终止时间＝ 12 分 钟， 流 速 ＝ 30mL/min， 柱： Xterra Prep MS C185μ30×50mm， 馏分收集 ： 9.79-10.39 分 1 钟。( 在 220nm 进行 UV 检测 )。 H NMR(500MHz， CD3OD， 其为两种异构体约 2 ∶ 1 比例的 混合物 )δ8.11(s， 0.5H)， 8.09-8.02( 重叠的多重峰， 3H)， 7.99(s， 1H)， 7.90(d， J ＝ 8.6， 0.5H)， 7.81( 宽单峰， 1H)， 7.67-7.54( 重叠的多重峰， 5H)， 7.50( 宽二重峰， 1H)， 7.32(d， J ＝ 8.5， 0.5H)， 7.31(d， J ＝ 8.5， 1H)， 7.20( 重叠的二重峰， 1.5H)， 7.02(dd， J ＝ 8.7， 2.5， 1H)， 6.99(dd， 0.5H)， 5.10( 宽二重峰， J ＝ 15， 1H)， 4.84(d， 0.5H)， 4.14(d， J ＝ 15， 0.5H)， 3.91(s， 1.5H)， 3.90(s， 3H)， 3.66(d， J ＝ 15， 1H)， 3.43( 宽 多 重 峰， 1H)， 3.39-3.30( 重 叠的多重峰， 1H)， 3.29(m， 0.5H)， 3.20， 3.18， 3.14( 与 1 组宽多重峰重叠的 2 组多重逢， 2H)， 3.08-2.88( 重 叠 的 多 重 峰， 1.5H)， 2.96( 宽 单 峰， 9H)， 2.83( 重 叠 的 多 重 峰， 1.5H)， 2.66( 宽多重峰， 1H)， 2.55(dd， J ＝ 9.9， 6.3， 0.5H)， 2.40-2.21( 重叠的宽多重峰， 1.5H)， 2.21-1.87( 重叠的宽多重峰， 10H)， 1.87-1.72( 重叠的宽多重峰， 4H)， 1.65( 宽二重峰， 1H)， 1.57-1.17( 重叠的多重峰， 8H)， 1.08(dd， J ＝ 9.8， 6.0， 0.5H)， 0.18(t， J ＝ 6.0， 0.5H)。 通过使用 Shimadzu-VP 设备 ( 在 220nm 进行 UV 检测 ) 和 Waters Micromass 来进行 LC/MS。 HPLC 方法 ： 溶剂 A ＝ 10 ％ MeOH-90 ％ H2O-0.1 ％ TFA， 溶剂 B ＝ 90 ％ MeOH-10 ％ H2O-0.1 ％ TFA， 起始％ B ＝ 0， 最终％ B ＝ 100， 梯度时间＝ 2 分钟， 终止时间＝ 3 分钟， 流速＝ 5mL/min， + 柱： Xterra MS C18S73.0×50mm ； (ES+)m/z(M+H) ＝ 763.36， HPLCRt ＝ 1.937 分钟。HPLC 方法 ： 溶剂 A ＝ 5％ MeCN-95％ H2O-10mM NH4OAc， 溶剂 B ＝ 95％ MeCN-5％ H2O-10mMNH4OAc， 起始％ B ＝ 0， 最终％ B ＝ 100， 梯度时间＝ 2 分钟， 终止时间＝ 3 分钟， 流速＝ 4mL/min， 柱：Phenomenex Lina C185μm3.0×50mm ； (ES+)m/z(M+H)+ ＝ 763.36， HPLCRt ＝ 1.583 分钟。 通 过使用 Shimadzu-VP 设备 ( 在 254nm 和 256nm 进行 UV 检测 ) 来进行分析性 HPLC。分析性 HPLC 方法 ： 溶剂 A ＝ 5％ MeOH-95％ H2O-10mM NH4HCO3(pH ＝ 9.5)， 溶剂 B ＝ 95％ MeOH-5％ H2O-10mM NH4HCO3(pH ＝ 9.5)， 起始％ B ＝ 10， 最终％ B ＝ 100， 梯度时间＝ 10 分钟， 终止时 间＝ 20 分钟， 流速＝ 1mL/min， 柱： PhenomenexGemini， Rt ＝ 11.46 分钟 ； 柱： Waters Xbridge Phe， Rt ＝ 10.34 分钟。
1a-[[4-( 苯并噁唑 -2- 基 )- 哌啶 -1- 基 ] 羰基 ]-8- 环己基 -N-[( 二甲基氨基 ) -5- 甲磺酰基 ]-1， 1a， 2， 12b- 四氢 -11- 甲氧基 - 环丙并 [d] 吲哚并 [2， 1-a][2] 苯并氮杂 酰胺
以与上述相似的方式通过外消旋酸与 2-( 哌啶 -4- 基 ) 苯并 [d] 噁唑之间的偶联 反应来制备标题化合物， 其为 TFA 盐。通过 Shimadzu-VP 制备性反相 HPLC 使用下述分离 方法来纯化 ： 溶剂 A ＝ 10％ MeOH-90％ H2O-0.1％ TFA， 溶剂 B ＝ 90％ MeOH-10％ H2O-0.1％ TFA， 起始％ B ＝ 30， 最终％ B ＝ 100， 梯度时间＝ 10 分钟， 终止时间＝ 12 分钟， 流速＝ 30mL/ min， 柱： Xterra Prep MS C185μ30×50mm， 馏分收集 ： 10.05-10.65 分钟。( 在 220nm 进 1 行 UV 检测 )。 HNMR(500MHz， CD3OD， 其为两种异构体约 2 ∶ 1 比例的混合物 )δ8.12(s， 0.5H)， 8.01(s， 1H)， 7.90(d， J ＝ 8.5， 0.5H)， 7.79( 宽单峰， 1H)， 7.67-7.59( 重叠的多重峰， 3.5H)， 7.49( 宽 二 重 峰， 1H)， 7.38( 重 叠 的 多 重 峰， 3H)， 7.33(d， 0.5H)， 7.31(d， J ＝ 8.5， 1H)， 7.19( 重叠的二重峰， 1.5H)， 7.02(dd， J ＝ 8.7， 2.5， 1H)， 6.99(dd， 0.5H)， 5.11( 宽二 重 峰， J ＝ 14.6， 1H)， 4.84(d， 0.5H)， 4.14(d， J ＝ 15， 0.5H)， 3.91(s， 1.5H)， 3.90(s， 3H)， 3.66(d， J ＝ 15， 1H)， 3.40(m， 0.5H)， 3.37(m， 0.5H)， 3.20(m， 0.5H)， 3.14-3.03( 重 叠 的 宽 多重峰， 2H)， 3.03-2.90( 重叠的多重峰， 1.5H)， 2.96( 宽单峰， 9H)， 2.84( 重叠的多重峰， 2H)， 2.66( 宽多重峰， 1.5H)， 2.54(dd， J ＝ 9.9， 6.3， 0.5H)， 2.37-2.21( 重叠的宽多重峰， 1.5H)， 2.21-1.86( 重叠的宽多重峰， 9H)， 1.86-1.70( 重叠的宽多重峰， 4H)， 1.61( 宽二重 峰， 1.5H)， 1.56-1.17( 重 叠 的 多 重 峰， 8.5H)， 1.08(dd， J ＝ 9.8， 6.0， 0.5H)， 0.18(t， J＝ 6.0， 0.5H)。通过使用 Shimadzu-VP 设备 ( 在 220nm 进行 UV 检测 ) 和 Waters Micromass 来 进行 LC/MS。HPLC 方法 ： 溶剂 A ＝ 10％ MeOH-90％ H2O-0.1％ TFA， 溶剂 B ＝ 90％ MeOH-10％ H2O-0.1％ TFA， 起始％ B ＝ 0， 最终％ B ＝ 100， 梯度时间＝ 2 分钟， 终止时间＝ 3 分钟， 流速 + ＝ 5mL/min， 柱： Xterra MS C18S73.0×50mm ； (ES+)m/z(M+H) ＝ 736.35， HPLCRt ＝ 1.978 分钟。 HPLC 方法 ： 溶剂 A ＝ 5％ MeCN-95％ H2O-10mM NH4OAc， 溶剂 B ＝ 95％ MeCN-5％ H2O-10mM NH4OAc， 起始％ B ＝ 0， 最终％ B ＝ 100， 梯度时间＝ 2 分钟， 终止时间＝ 3 分钟， 流速＝ 4mL/ + min，柱 ： Phenomenex Lina C185μm 3.0×50mm ； (ES+)m/z(M+H) ＝ 736.41， HPLC Rt ＝ 1.622 分钟。通过使用 Shimadzu-VP 设备 ( 在 254nm 和 256nm 进行 UV 检测 ) 来进行分析性 HPLC。分析性 HPLC 方法 ： 溶剂 A ＝ 5％ MeOH-95％ H2O-10mM NH4HCO3(pH ＝ 9.5)， 溶剂 B ＝ 95％ MeOH-5％ H2O-10mM NH4HCO3(pH ＝ 9.5)， 起始％ B ＝ 10， 最终％ B ＝ 100， 梯度时间＝ 10 分钟， 终止时间＝ 20 分钟， 流速＝ 1mL/min， 柱： Phenomenex Gemini， Rt ＝ 11.47 分钟 ； 柱： Waters Xbridge Phe， Rt ＝ 10.28 分钟。
下表显示了使用与上述相似的化学方法来制备的化合物， 且使用下述方法来表 征。 纯化方法 ： Dionex LC ； Chromeleon 6.70sp1LC 软件 ； 用于分析的 HP 1100 四元泵 ； 用于 制备的带有 50mL/min 头件的 Varian prostar 二元泵 ； Dionex UVD340U UV 光谱仪 ； Sedex 75ELS 检 测 仪 ； Thermo-FinnigenMSQ Surveyor Plus 质 谱 仪。LC 条 件 ： 柱： Phenomenex Gemini 21.2×250mm5μm C18 ； 流动相 ： A ＝水 ； B ＝ ACN ； 调节剂＝ 0.1 ％ TFA/ 水。最终 分析方法 ： MassLynx 4.0SP4LC-MS 软件 ； CTC-Leap HTS-PAL 自动进样器 ； Agilent1100 二 元泵 ； Agilent 1100 光敏二极管阵列 ； Polymer Lab 2100ELS 检测器 ( 蒸发温度＝ 45℃且 喷雾温度＝ 35 ℃ ) ； 与 ESCi 质谱仪相连的 Waters zQ。LC 条件 ： 柱： Suppelco Ascentis C184.6×50mm 2.7 微米 ； 流动相 ： A ＝水 +10mMNH4OAc ； B ＝ CAN。
以下化合物以与上述相似的方式来制备， 且使用下述方法来表征。纯化方法 ： 柱： Phenomenex Gemini 21.2×250mm 5μm C18 ； 保护柱 ： PhenomenexGemini 21.2×10mm 5μm C18 ； 溶剂 A ＝ 5 ∶ 95MeCN ∶水 ； 溶剂 B ＝ 95 ∶ 5MeCN ∶水 ； 调节剂＝ 10mM NH4OAc ； 流速＝ 20mL/min ； ％ B ＝ 30(0 至 5 分钟 )， 30 至 95(5 至 23 分钟 )， 95(23 至 27 分钟 )， 95 至 30(27 至 27.5 分钟 )， 30(27.5 至 30 分钟 )。分析方法 ： 与 ESCi 质谱仪相连的 Waters ZQ ； HPLC 保留时间以分钟计 ； 溶剂 A ＝ 5 ∶ 95MeCN ∶ Water ； 溶剂 B ＝ 95 ∶ 5MeCN ∶水 ； 调节剂为 10mMNH4OAc ； 柱： Supelco Ascentis 4.6×50mm 2.7μm C18 ； 流速＝ 2mL/min ； ％ B ＝ 10 至 95(0 至 8 分钟 )， 95(8 至 9 分钟 )， 95 至 10(9 至 9.2 分钟 )， 10(9.2 至 10 分钟且 3mL/min)。
8- 环己基 -1， 1a， 2， 12b- 四氢 -11- 甲氧基 -1a-[[4-[5-(1- 甲基乙基 )-1， 3， 4- 噁 二唑 -2- 基 ]- 哌啶 -1- 基 ] 羰基 ]-N-[(1- 甲基乙基 ) 磺酰基 ]- 环丙并 [d] 吲哚并 [2，
1-a][2] 苯并氮杂
-5- 甲酰胺在 0℃向酸 (35.1mg、 0.053mmol) 于 1， 2- 二氯乙烷 (1mL) 中的溶液中加入 1， 1’ -羰 基二咪唑 (9.45mg、 58.3μmol)。30 分钟后， 加入异丁酰肼 (5.41mg、 53μmol)。使偶联反应在 0℃进行 45 分钟， 然后一次性加入 CBr4(35.2mg、 106μmol) 和 Ph3P( 三苯基膦 )(27.8mg、 106μmol)。将混合物在室温搅拌过夜。产物通过制备性 HPLC 来纯化。MH+ ＝ 728.7。
对于本领域技术人员显而易见的是， 本发明不限于上述示例性实施例， 且本发明 可按其它具体形式来实施而不背离本发明基本属性。因此期望的是， 所述实施例应该被视 为是示例性而非限制性的， 因此参考所附权利要求而非前述实施例， 落在这些权利要求等 同意义和范围内的所有变化都涵盖在这些权利要求中。46