技术领域
本发明涉及生物医药领域，一种用于预防和治疗艾滋病的胶囊剂及其制备技术，特别是 涉及一种以高酯型儿茶素为主要活性成分的胶囊。本发明还涉及一种高酯型儿茶素微囊的制 备技术。
背景技术
20世纪80年代以来，获得性免疫缺陷综合症(又称艾滋病，AIDS)已经成为威胁人类健 康的重大疾病，且发病人数呈逐年上升的趋势。所以一位著名西方医学专家称艾滋病为“世 纪瘟疫”。2003年12月1日，由中国卫生部和联合国艾滋病中国专题组联合发布的《中国艾 滋病防治联合评估报告》显示中国目前有艾滋病病毒感染者约84万，艾滋病病人约8万，分 布在全国各省、自治区、直辖市，遍布社会各阶层。
目前抗艾滋病药物是世界药物研究领域的热点，在临床应用较多的主要是核苷类逆转录 酶抑制剂(nucleoside reverse transcriptase inhibitors，NRTI)；蛋白酶抑制剂(protease inhibitors，PI) 及非核苷类逆转录酶抑制剂(non-nucleoside reverse transcriptase inhibitors，NNRTI)。由于HIV 复制缺乏保真性(fidelity)，经常发生突变，致使抗HIV药物易产生耐药性。目前国际上对AIDS 的药物疗法趋向联合治疗，即鸡尾酒疗法，通常是一种HIV蛋白酶抑制剂加上二种核苷类逆 转录酶抑制剂，用于治疗急性或慢性的HIV感染或不同期的AIDS患者，及使用齐多夫定失 效或无反应者。已出现了四联和六联等不同疗法，替代疗法，间断疗法，高效抗逆转录病毒 联合疗法等多种方法。这些药物及方法有以下缺点：(1)诱导产生抗药性的HIV变异株；(2) 具短期和长期的毒副作用；(3)不能阻断HIV的早期感染过程。由于HIV变异快，不同地区 的毒株也可能不一样，使疫苗的研制难度很大。
自1987年齐多夫定首先被美国FDA批准上市，用于治疗HIV感染和AIDS，从此抗艾 滋病药物发展非常迅速，自1995年以来，每年都有2-3个新品种问世，目前抗AIDS药物 已成为抗病毒药物发展史上进展最快的一类药物。21世纪以来，研究人员的视线已集中到很 多新的靶点上，如反义核苷酸药物，融合抑制剂，各类编码基因拮抗剂，新受体合成阻断剂 等，它们具有药效明显，专一性强，不良反应低等优点。新靶点药物，复方制剂药物和天然 化合物已成为发展抗HIV药物的重要研究方向。
植物药在艾滋病治疗中能发挥以下作用：1.直接杀灭HIV病毒。2.增强免疫系统或纠 正因感染HIV而受损的免疫缺者。3.治疗/预防艾滋病人的微生物感染或肿瘤疾病。4.缓解 因使用常规艾滋病化学治疗剂所引起的毒副反应。
茶多酚具有抗氧化、延缓衰老、抗菌抗病毒、降低血脂，抑制癌细胞增生、抗癌、抗突 变等作用。新型酯型儿茶素是茶多酚家族中的新成员，主要由两种酯型儿茶素组成，即表没 食子儿茶素没食子酸酯(EGCG)和表儿茶素没食子酸酯(ECG)，国内初步研究高酯型儿茶素具 有抗病毒作用。
微囊(Microcapsule)是采用成膜材料(通称囊材)将固体、液体或气体等活性物质(通称囊心) 包合成的微小粒子。微囊的粒径一般在微米范围，较大的在毫米范围，较小的在纳米范围(此 时称纳米囊)。药物微囊化(Microcapsulation)后，一般形成可流动的粉粒，可进一步将其制成 散剂、片剂、颗粒剂、胶囊剂和注射剂等剂型。药物微囊化的优点包括(毕殿洲.药剂学.第 四版.北京：人民卫生出版社，1999，121.140)：(1)提高药物的稳定性，防止空气、水分、 光线等因素引起药物的变化；(2)掩盖药物的不良气味和味道；(3)防止药物在胃酸的作用下失 活，同时减少药物对胃的刺激；(4)使液态药物转变为固态，便于贮存、运输和使用；(5)减少 复方药物的相互作用和配伍变化；(6)赋予药物缓释、控释和靶向性能。
发明内容
艾滋病已成为我国在21世纪面临的严重社会问题和医药界研究的重要课题。本发明的目 的在于制备一种对艾滋病具有预防和治疗功效的胶囊剂，同时通过微囊化提高稳定性，掩盖 不良气味和味道。应用该制剂进行有关抗艾滋病作用的体内外药效学研究，在此基础上进行 作用机制的研究。在完成上述主要药效学试验后，进行药代动力学及急、慢性毒性试验。此 后进行该药临床试验，确证其抗艾滋病疗效。
本发明的目的是通过以下技术方案实现的：
以高酯型儿茶素为有效成分，制成用于预防和治疗艾滋病的微囊胶囊剂。其中高酯型儿 茶素，其特征在于，总儿茶素含量达到98％以上(其中表没食子儿茶素没食子酸酯和表儿茶 素没食子酸酯的含量高于82％)，咖啡因降到0.1％以下。
所述微囊为高酯型儿茶素微囊，其特征在于，用高分子物质或共聚物包衣高酯型儿茶素 的表面，或以高分子物质或共聚物作核心，喷涂药物后再包衣，制成5-100μm的微粒。每 个微囊的高酯型儿茶素量控制在0.01-0.10mg的范围，余量为制备微囊剂所需的囊材或载体材 料。
高酯型儿茶素微囊，囊材成分选自西黄耆胶(Gum Tragacanth)、玉米朊(Zein)、果胶(Pectin)、 壳多糖(Chitin)、明胶(Gelatin)、阿拉伯胶(Arabic)、普鲁兰、海藻酸盐、蛋白类、淀粉等一种 或几种天然高分子材料；或者羧甲基纤维素盐(SCMC)、邻苯二甲酸醋酸纤维素(CAP)、乙基 纤维素(EC)、甲基纤维素(MC)、羟丙甲纤维素(HPMC)、醋酸纤维素酞酸酯、醋酸羟丙甲纤 维素琥珀酸酯等一种或几种半合成高分子材料；或者聚酯、聚乙二醇(PEG)、聚乙烯吡咯烷酮 (PVP)、聚乙烯醇(PVA)、聚氨基酸、聚酰胺、聚乳酸、聚合酸酐等一种或数种合成高分子材 料。在微囊制备处方的囊材或载体中加入环糊精、胆酸、磷脂或脂肪酸中的一种或几种，使 产品的生物利用度有一定的提高。
高酯型儿茶素微囊制备方法如下：将高酯型儿茶素粉末或溶于适量溶剂中的高酯型儿茶 素，采用凝聚法、溶剂-非溶剂法、复乳包囊法、界面缩聚法、辐射化学法、喷雾干燥法、 喷雾冻结法、空气悬浮法中的一种制备高酯型儿茶素微囊。
所述预防和治疗艾滋病的微囊胶囊剂中，高酯型儿茶素含量50-400mg。制备过程如下： 将高酯型儿茶素微囊与适量辅料混匀，过筛，装入胶囊内，即得。
本发明与现有技术相比较具有以下优点：工艺稳定，操作简单，生产周期短，质量稳定 可控的优点。经济效益可观，适合我国国情，市场前景十分巨大。本发明的剂型具有服用体 积小，适用人群更广泛的特点。
本发明提供的配方的优点在于：
1、本发明的产品应用于艾滋病的治疗，对艾滋病病毒具极强的杀伤力，同时具有抗菌抗 病毒、抗氧化、延缓衰老、降低血脂，抑制癌细胞增生、抗癌、抗突变的效果。可替代毒性 大且价格昂贵的进口药。
2、本发明中的主要活性成分高酯型儿茶素来源于茶叶。我国茶叶原料来源充分，因此本 技术的产品用于预防和治疗艾滋病疗效可靠、简便易行、价格低廉、适合我国国情。
3、本发明中的高酯型儿茶素含量及比例可根据病情的轻重缓急等具体应用情况在上述剂 量范围内进行调整。
具体实施方式
以下以具体的实施例对本发明作进一步的说明。下列实例仅为进一步详细说明本发明， 而不是限制本发明。不应将此理解为本发明上述主题的应用范围仅限于以下的实例。但凡基 于本发明上述内容所实现的技术，在不偏离本发明的精神和范围的情况下，可以做出一些变 化和修改，它们均被包括在本发明范畴内。
以下以具体的实施例对本发明的配方作进一步的说明：
实施实例1 单凝聚法制备高酯型儿茶素微囊剂
配方：
高酯型儿茶素 10g
明胶 80g
制备工艺：将高酯型儿茶素加入2400ml的60℃无盐水中，用0.01％NaOH小心调节 pH7.2～7.8，于37℃下加入明胶，保温，搅拌溶解，滴加10％的醋酸液至pH3.5-3.8，将反应 器置于50℃水浴中保温搅拌45分钟。滴加硫酸钠溶液(稀释液)，在显微镜下观察至聚成囊为 止，立即倒入搅拌着的稀释液中，待胶凝沉降后，倾去上清液，用稀释液洗涤2～3次，除去 未凝聚的囊材。最后再将微囊混悬于适量稀释液中，加入37％甲醛溶液2-3ml，搅拌，滴加 氢氧化钠调节pH至8-9，低温放置过夜，过滤，用水洗涤至无甲醛味，低温干燥即得。
实施实例2 溶剂-非溶剂法制备高酯型儿茶素微囊剂
配方：
高酯型儿茶素 10g
醋酸纤维素丁酯 240g
丁酮 6000g
制备工艺：将醋酸纤维素丁酯先溶于6000ml丁酮的中，并注意使其完全溶解，待用。再 将高酯型儿茶素加入其中，把盛有反应液的反应器置于55℃水浴中加温搅拌45分钟。在搅 拌情况下将非溶剂异丙醚缓慢加入，当发生凝聚相分离时即将混悬的芯材包成微囊。慢慢冷 至室温，用离心法分离微囊，异丙醚洗涤，真空干燥即得所需的微囊。
实施实例3 复乳包囊法制备高酯型儿茶素微囊剂
配方：
高酯型儿茶素 10g
乙基纤维素 98g
阿拉伯胶 38g
制备工艺：将乙基纤维素先溶于2500ml的醋酸乙酯中，并注意使其完全溶解，再将高酯 型儿茶素加入其中，得有机相(含适量邻苯二甲酸二正丁酯作增塑剂)。以5％阿拉伯胶溶液 2500ml，滴加分散在上述有机相中，形成W/O型乳剂。并进一步形成复乳。过滤，低温干燥 即得微囊直径在50μm以下，多数为15μm左右。该微囊的内外层是阿拉伯胶膜，中间层是 乙基纤维素膜。
实施实例4 界面缩聚法制备高酯型儿茶素微囊剂
配方：
高酯型儿茶素 10g
羟乙基淀粉 100g
邻苯二甲酰氯 6g
制备工艺：将高酯型儿茶素加于600ml的氯仿/环己烷中，加入Span8530g，滴加入400ml 羟乙基淀粉溶于的pH9.8的缓冲液中，乳化成W/O型乳状液。加入邻苯二甲酰氯搅拌30分 钟，进行交联反应，加环己烷稀释，离心。微囊分别用Tween-80的95％乙醇溶液、95％乙 醇及水洗涤。抽干、低温干燥即得微囊。
实施实例5 喷雾干燥法制备高酯型儿茶素微囊剂
配方：
高酯型儿茶素 10g
乙基纤维素 258g
L-精氨酸 6g
羟丙甲纤维素 9g
PEG-10000 2g
制备工艺：将高酯型儿茶素和精氨酸加入3500ml的乙基纤维素和羟丙甲纤维素、PEG- 10000的异丙醇溶液中，选择进口温度在80℃～95℃，出口温度在50℃～72℃。经喷雾干燥 即得高酯型儿茶素微囊。
实施实例6 空气悬浮法制备微囊剂
配方：
高酯型儿茶素 10g
海藻酸钠 1670g
乙基纤维素 240g
制备工艺：将高酯型儿茶素先溶于1800ml的无盐水(用0.01％NaOH调节pH至7以上 溶解)得溶液(1)，再将海藻酸钠溶于1670ml水中得溶液(2)，然后将溶液(1)于搅拌下加入溶 液(2)，加完后搅拌均匀，置冰箱于5℃下静置，分离出固体物，干燥研细作心材。置流化床 中，用囊材溶液(将乙基纤维素240g溶入3600ml的二氯甲烷及适量环己烷中)沸腾包衣即 得高酯型儿茶素微囊。
实施实例7 高酯型儿茶素微囊胶囊剂的制备
配方(1000粒)：
所得高酯型儿茶素微囊 400g
乳糖 330g
淀粉 510g
糊精 480g
PEG-2000 9g
薄荷醇 0.2g
制备工艺：将上述处方量的原辅料进行制粒、整粒、干燥、装胶囊即可得含有高酯型儿 茶素微囊的胶囊。
以下以具体的实施例对本发明作进一步的说明：
实施实例1 高酯型儿茶素在MT-4细胞中抑制HIV-1 P24抗原活性试验
MT-4细胞预先用100TCID50 HIV-1IIIB吸附感染1.5小时，制成细胞浓度为2×105/ml 的细胞悬液，接种100μl于96孔细胞培养板内，同时分别加入100μl不同浓度的高酯型儿 茶素，或阳性对照药齐多夫定(AZT)，每浓度2孔，设细胞和病毒对照组。置37℃、5％CO2饱和湿度培养箱内培养，于加药96小时吸出上清液，以抗原试剂盒测定P24抗原含量，用 Reed-Muench法计算药物半数有效浓度(EC50)。培养板内细胞用M′IT染色，在酶标仪上测定 波长为570nm的OD570nm值，用Reed-Muench法计算药物半数有毒浓度(CC50)，并计算治疗 指数(TI)。结果见表1，高酯型儿茶素在细胞内具有明显的抗HIV-1的作用。
表1高酯型儿茶素对MT-4细胞毒性和在MT-4细胞培养中抑制H1V-1 P24抗原活性
药物 CC50(μg/ml) EC50(μg/ml) TI 高酯型儿茶素 齐多夫定(AZT) ＞2000 ＞0.625 1.225 0.0364 ＞1632 ＞17200
实施实例2 高酯型儿茶素抑制HIV-l逆转录酶(RT)活性试验
将标定浓度的基因工程HIV逆转录酶(p66/51)和不同浓度药液及含有3H-dTTP反应缓冲 液加入96孔细胞培养板后，混合，37℃反应30分钟，0℃终止反应。反应液滴加于滤纸片上， 冷三氯乙酸洗涤、乙醇脱水后烤干。液闪仪测定CPM值。同时设酶对照、阴性对照及阳性有 效药物奈韦拉平(nevirapine NVP)对照，用Reed-Muench法计算IC50。
结果表明：高酯型儿茶素抑制HIV-1逆转录酶(RT)活性，IC50＝24μg/ml。