经肠营养剂 技术领域 本发明涉及含有通过培养担子菌的菌丝体而获得的活化糖类相关化合物、 并对患 炎症性肠道疾病或易出现类似症状的患者有益的经肠营养剂。
背景技术 活化糖类相关化合物 (Active Hexose Correlated Compound) 是在大型罐中长 时间培养担子菌的菌丝体而提取出来的含有乙酰化 α- 葡聚糖及其他多糖类的组成物的 总称。活化糖类相关化合物的代表例子为由阿明诺化学株式会社 (http://www.aminoup. co.jp/index.shtml) 制造销售的、 将 ActiveHexose Correlated Compound 的简称作为注册 商标的 AHCC。
活化糖类相关化合物 ( 以下用作为注册商标使用的简称 AHCC 表示 ) 是指 “以免疫 反应为主的生物应答调节物质” (Biological Response Modifiers、 BRM)， 其是具有免疫活 性功能的物质， 在改善以癌为代表的生活习惯病方面发挥作用， 并且是基础研究和临床试 验中研究最深入的功能性多糖类之一。
含有 AHCC 的健康食品是在为数众多的药学研究和医学研究以外， 在医学和药学 方面也被医师确认具有临床效果的食品。特别是， 通过使接受抗癌剂治疗的患者摄取含有 AHCC 的食品， 可以减轻作为抗癌剂的副作用已知的骨髓抑制 ( 白细胞、 红细胞减少 )、 腹泻、 呕吐、 食欲不振、 脱发等副作用， 因此含有 AHCC 的食品一直作为提高癌症患者的 QOL 的健康 食品而被利用。
但是， 对于因为癌的发生部位或处于手术前后而经口摄取营养物困难的患者， 也 会发生难以有效地摄取 AHCC 的情况。
在因各种原因造成营养物经口摄取困难时使用的营养剂为经肠营养剂。 经肠营养 剂通常是针对经口摄取的营养摄取量易变少的老年人、 幼儿或有经口摄取功能障碍的人、 手术前后被限制饮食的人等， 用来直接将营养物供给到胃和肠道的营养剂。经肠营养剂需 要足够量且搭配均衡地配合有糖、 蛋白质、 脂肪、 矿物质、 维生素、 水分等人体必需的各种营 养素， 并被制备成容易接种的乳化液状。
最近， 对于经肠营养剂， 除了营养的补给外还积极添加能够改善摄取者的身体状 况的有效成分， 由此得到的经肠营养剂可被称为功能性经肠营养剂， 对该新型经肠营养剂 的需求正在增加。例如， 日本特开 2006-50935 号公报 ( 专利文献 1) 中公开了含有甲壳素 水解产物和 / 或壳聚糖水解产物、 并期待具有改善关节痛作用或预防褥疮发生和治疗褥疮 的效果的经肠营养剂。另外， 日本特开 2007-230998 号公报 ( 专利文献 2) 中公开了以含有 在低聚木糖分子中具有糖醛酸残基的酸性低聚木糖为特征的、 在抑制肠道的 TNF-α 产生 方面有效的经口性抗炎药。
专利文献 1 ： 日本特开 2006-50935 号公报
专利文献 2 ： 日本特开 2007-230998 号公报
发明内容 本发明的目的在于提供一种即使对经口补充营养困难的患者也能够供给 AHCC 的 新形式的含有 AHCC 的食品。
本发明人等在研究针对经口摄取营养困难的癌症患者的含有 AHCC 的经肠营养剂 的开发中发现， 通过经肠给予 AHCC 或其多糖类级分， 具有期待的能够缓解各种炎症性肠道 疾病的症状的炎症抑制效果， 从而完成了下述各发明。
(1) 一种炎症性肠道疾病患者用的经肠营养剂， 其含有通过培养担子菌的菌丝体 而得到的活化糖类相关化合物。
(2) 根据上述 (1) 所述的炎症性肠道疾病患者用的经肠营养剂， 其中， 担子菌为选 自 Lentinulla edodes、 Grifola frondosa、 Ganoderma lucidum、 Ganoderma applanatum 以 及 Schizophyllum commune 中的 1 种或 2 种以上的担子菌。
(3) 根据上述 (1) 所述的炎症性肠道疾病患者用的经肠营养剂， 其中， 活化糖类相 关化合物为 AHCC( 注册商标 ) 或其多糖类级分。
(4) 根据上述 (1) 或 (2) 所述的炎症性肠道疾病患者用的经肠营养剂， 其用于促进 白细胞介素 10 和 / 或白细胞介素 6 的产生。
(5) 根据上述 (1) 或 (2) 所述的炎症性肠道疾病患者用的经肠营养剂， 其中， 还含 有蛋白质和 / 或其分解物、 脂质、 糖质， 总热量为 70 ～ 200kcal/100ml。
本发明的经肠营养剂除了 AHCC 对癌症患者具有有利效果外， 还显示具有缓解炎 症性肠道疾病的炎症的作用， 对于罹患有溃疡性结肠炎或克隆氏病的患者， 也有望发挥抑 制其炎症的作用。特别是， 通过直接给予肠道组织， 能够更有效地发挥炎症抑制作用。
附图说明
图 1 为表示经肠给予 AHCC 后的小鼠树突状细胞的 IL-10 的产生能力亢进的图。
图 2 为表示经肠给予 AHCC 后小鼠的 IL-6 的产生能力亢进的图。
图 3 为表示经肠给予 AHCC 后小鼠的 IL-10 的产生能力亢进的图。
图 4 为表示 AHCC 抑制 LPS 刺激小鼠所引起的 IL-2 的产生的图。
图 5 为表示 AHCC 抑制 LPS 刺激小鼠所引起的 IL-6 的产生的图。
图 6 为表示 AHCC 抑制 LPS 刺激小鼠所引起的 TNF-α 的产生的图。
图 7 为表示 LPS 刺激小鼠后 IL-10 的产生能力亢进的图。
图 8 为表示 AHCC 抑制 LPS 刺激小鼠所引起的 IL-12 的产生的图。
图 9 为表示 AHCC 抑制 LPS 刺激树突状细胞所引起的 CD86、 CD40 以及 MHC II 类分 子的表达诱导的图。 具体实施方式
本发明提供一种含有 AHCC 或其多糖类级分的炎症性肠道疾病患者用的经肠营养 剂。本发明的经肠营养剂并不是以蛋白质等为代表的营养素， 其通过含有 AHCC 或其多糖类 级分作为功能性附加成分， 除了 AHCC 或其多糖类级分对癌症患者具有良好的作用外， 还能 够产生缓解炎症性肠道疾病患者的上述炎症的效果。
AHCC 并不单纯地是从担子菌得到的提取物， 而是将担子菌的菌丝体在液体罐中长时间例如 45 ～ 60 天培养， 并经过酶反应、 灭菌、 浓缩等工序制造而成的多糖类混合物。其 主要成分认为是乙酰化 α- 葡聚糖， 但也含有 β 葡聚糖及其他成分。
AHCC 制造中可使用的担子菌可列举出例如 Lentinulla edodes( 通用名香菇 )、 Agaricus bisporus( 通用名双孢蘑菇 )、 Grifola frondosa( 通用名灰树花 )、 Pholiota nameko( 通用名滑菇 )、 Pleurotus ostreatus( 通用名平菇 )、 Flammulina velutipes( 通 用名金针菇 )、 Ganoderma lucidum( 通用名灵芝 )、 Auricularia auricula、 通用名黑木 耳 )、 Ganoderma applanatum( 通用名树舌灵芝 )、 Coriolus lucidum( 通用名云芝灵芝 )、 Grifola umbellate( 通用名猪苓 )、 Schizophyllum commune( 通用名裂褶菌 )、 Volvariella volvaceae( 通用名草菇 ) 等。
这些担子菌可以单独使用也可以几种组合使用。其中， 优选使用 Lentinulla edodes( 通用名香菇 )、 Grifola frondosa( 通用名灰树花 )、 Ganoderma lucidum( 通用名 灵芝 )、 Ganoderma applanatum( 通用名树舌灵芝 )、 Schizophyllum commune( 通用名裂褶 菌 )。
上文所例示的担子菌的培养优选使用植物组织原料来进行。 植物组织原料只要是 植物组织来源的， 则没有特殊限制， 也可以使用木屑等， 但优选草本类植物来源的材料， 例 如米糠、 麸、 甘蔗渣、 玉米的根茎、 稻草、 麦秸、 豆渣等。 它们可以单独使用也可以多种适当组 合使用。另外， 为了使担子菌容易被利用， 可以使用预先将植物组织原料用纤维素酶、 淀粉 酶、 蛋白酶、 果胶酶、 甲壳素酶等处理， 并对其进行热水提取而得到的提取物。 植物组织原料 可根据担子菌的培养状态从培养初期添加， 也可于培养后期添加。
另外， 植物组织原料中也可添加各种碳源或氮源。 作为碳源的例子， 可列举出葡萄 糖、 砂糖 ( 日文原文为 ： シヨ類 )、 麦芽糖、 蔗糖、 精制糖、 黑糖、 糖蜜、 黑糖蜜、 麦芽提取物等。 作为氮源的例子， 可列举出肉提取物、 蛋白胨、 蛋白粉、 大豆粉、 干燥酵母、 酵母提取物、 硫酸 铵、 酒石酸铵、 尿素等。 另外， 根据需要还可以添加钠盐、 镁盐、 锰盐、 铁盐、 钙盐， 磷酸盐等无 机盐类或肌醇、 维生素 B1 盐酸盐、 L- 天冬酰胺、 生物素等维生素类。
使用上述培养基的担子菌的培养可以按照通常的中温菌的培养条件在例如 pH2 ～ 6、 10 ～ 45℃、 优选 15 ～ 30℃的温度下进行。培养时间根据菌量和植物组织原料的 形态通常可设定为 4 ～ 20 天左右， 但通过 40 ～ 60 天的长时间的培养， 可以制造出更加优 良的 AHCC。
培养后， 向培养物中加入纤维素酶、 淀粉酶、 蛋白酶、 果胶酶、 甲壳素酶等酶， 在最 佳的温度条件下反应 2 ～ 20 小时使菌体破碎， 之后， 进行加热处理使酶反应失活， 通过离心 分离等从该处理物中除去菌丝体残渣， 回收上清级分， 由此可回收含有目标 AHCC 的级分。
本发明中使用的 AHCC 只要是挑选培养上文所例示的菌体并进行酶处理而得到 的， 则均可利用， 但 AHCC 的品质根据制造条件的不同容易发生很大变化， 为使高品质保持 稳定， 需要对上述的培养条件和回收纯化进行严格的管理。目前， 阿明诺化学株式会社 (http://www.aminoup.co.jp/index.shtml) 根据基于药品的制造的规格， 正稳定而持续地 制造销售高品质的 AHCC。 本发明中优选使用由阿明诺化学株式会社以 AHCC( 注册商标 ) 市 售的产品。
另外， 在本发明中， AHCC 的多糖类级分也可以与 AHCC 一起使用或替代 AHCC 使用。 本发明中的 “AHCC 的多糖类级分” 是指由 AHCC 衍生的多糖类的水溶性级分， 其包括对 AHCC进行疏水性色谱法时得到的水溶性级分、 通过向该水溶性级分中添加乙醇而得到的沉淀级 分、 进而对该沉淀级分进行阳离子色谱法处理时得到的非吸附级分等。
本发明的经肠营养剂中的 AHCC 或其多糖类级分的配合量可适当设定为营养剂总 质量的 5 ～ 10 质量％范围内。另外， 关于其他成分， 可以任意使用在通常的经肠营养剂中 使用的物质。
例如， 作为蛋白质， 可列举出酪蛋白或酪蛋白酸钠、 酪蛋白酸钙等酪蛋白盐， 牛奶 蛋白质、 鸡蛋蛋白质、 鱼蛋白质、 肉蛋白质等动物性蛋白质， 大豆蛋白质等植物性蛋白质， 以 及它们的分解产物、 氨基酸等。它们可以 1 种单独使用， 也可以 2 种以上组合使用。蛋白质 的含量优选每单位质量的经肠营养剂为 2.0 ～ 10.0 质量％， 更优选为 3.5 ～ 6.0 质量％。
作为脂质， 可列举出例如大豆油、 玉米油、 菜籽油、 椰子油、 红花油、 紫苏油、 芝麻 油、 棕榈油等植物油， 猪油、 牛油等动物油， 鱼油、 中链脂肪酸甘油三酯及其他的合成甘油三 酯， 以及它们的加工油脂。它们可以 1 种单独使用， 也可以 2 种以上组合使用。特别是， 作 为脂质的构成成分的脂肪酸优选搭配均衡地配合饱和脂肪酸、 单不饱和脂肪酸、 多不饱和 脂肪酸。另外， 脂质的含量优选每单位质量的经肠营养剂为 1.0 ～ 10.0 质量％， 更优选为 2.0 ～ 8.0 质量％。 作为糖类， 可列举出葡萄糖、 果糖等单糖类， 麦芽糖、 乳糖等二糖类， 低聚糖类及多 糖类。其中， 从易消化吸收性和恰当的渗透压的理由出发， 优选使用麦芽糊精、 糊精、 寡糖 等。它们可以 1 种单独使用， 也可以 2 种以上组合使用。另外， 糖质的含量优选每单位质量 的经肠营养剂为 10.0 ～ 30 质量％， 更优选为 15.0 ～ 25.0 质量％。
为了充分补充人体必需的营养， 本发明的经肠营养剂除上述以外的成分外， 还优 选配合例如纤维素、 聚葡萄糖、 瓜尔胶酶分解物、 难消化性的多糖类等、 膳食纤维、 维生素 类、 矿物质类。
本发明的经肠营养剂的总热量优选为 70 ～ 200kcal/100ml， 更优选为 100 ～ 150kcal/100ml， 按照总热量达到上述范围的方式来适当调整水的添加量。
本发明的经肠营养剂的优选形态为液体制剂、 乳化液制剂或软胶状剂。乳化液制 剂优选使用例如大豆磷脂、 卵黄磷脂、 单甘油酯、 蔗糖脂肪酸酯、 脱水山梨糖醇脂肪酸酯、 丙 二醇脂肪酸酯、 聚甘油脂肪酸酯、 单甘油酯的琥珀酸单甘油酯或柠檬酸酯等单甘油酯衍生 物等乳化剂。乳化剂的含量优选每单位质量的经肠营养剂为 0.05 ～ 1.0 质量％， 更优选为 0.2 ～ 0.7 质量％。
本发明的经肠营养剂可按照常规方法制备。对于液体制剂， 将配合成分溶解于水 中即可。另外， 对于乳化液制剂， 可以使配合成分溶解于水优选热水中、 并加入油分和乳化 剂， 然后使用均化器等进行乳化来制备。制备的液体制剂或乳化液制剂可通过过滤灭菌或 者在填充到小袋或软袋中密封后进行加热杀菌来制造。
含有 AHCC 或其多糖类级分的本发明的经肠营养剂有望对炎症性肠道疾病发挥缓 解炎症的效果。如后述实施例中所详细说明的， 在经肠给予了 AHCC 或其多糖类级分的哺乳 动物中， 可确认具有诱导抗炎症细胞因子白细胞介素 10(IL-10) 的产生的效果。
另外， 还确认了 AHCC 在没有脂多糖 (Lipopolysaccharide， LPS) 刺激的状态下具 有诱导对抑制炎症有效的白细胞介素 6(IL-6) 的产生的效果。另一方面还确认了， AHCC 具有抑制在受到 LPS 刺激等时被诱导的炎症活化细胞因子即白细胞介素 6、 白细胞介素
2(IL-2)、 TNF-α、 白细胞介素 12(IL-12) 的产生的效果。此外还明确了， AHCC 还显示以树 突状细胞 (DC) 为作用点的抗炎症扩大的作用。
由于这些生理作用， 含有 AHCC 或其多糖类级分的本发明的经肠营养剂有望发挥 抑制各种炎症性肠道疾病例如克隆氏病或溃疡性结肠炎等的炎症的效果。另外， 当炎症性 肠道疾病患者处于术后、 创伤等病理状态时， 经肠营养剂的抗炎症改善作用也是有效的。
以下给出实施例以更加详细地说明本发明， 但本发明并不受下述实施例的限定。 实施例 [ 实施例 1]
将 AHCC( 阿明诺化学株式会社 ) 浓缩液 80mL 注入填充有事先用水驯化的聚苯乙 烯型凝胶 DIAION HP-20(Mitsubishi Chemical Corporation) 的柱子 (5.0cm i.d.×25cm) 中。用水、 甲醇、 50％丙酮各 1L 依次进行洗脱。将该水级分在减压下浓缩后， 进行冷冻干 燥得到黄白色的固体 (18.1g)。向该级分中加入 35mL 的水使其溶解后， 一边剧烈搅拌， 一 边滴加 180mL 的乙醇。离心 (3000rpm、 15min) 后， 弃去上清。向沉淀中加入 35mL 的水进 行同样的操作， 在得到的沉淀中加入少量的水使其溶解， 进行冷冻干燥， 得到淡褐色的固体 (5.87g)。向该级分中加入 100mL 的水使其溶解， 注入填充有阳离子交换型凝胶 Dowex 50W X-8(The Dow Chemical Company) 的柱子 (4.4cm i.d.×17cm) 中。 用水和 3M 氨水各 0.50L 依次洗脱。将该水级分在减压下浓缩后， 进行冷冻干燥， 得到淡黄色固体 (AHCC 的多糖类级 分 )(4.93g)。
[ 实施例 2]
使用胃探针将 AHCC( 阿明诺化学株式会社 ) 连续 10 天给予 6 周龄的 C57BL/6 小鼠 ( 雌性、 n ＝ 30)(AHCC 的给予量为 20mg/1ml/ 只 / 天 )。 第 10 天腹腔内给予 LPS 0.1mg/2mL/ 只， 2 小时后从脾脏和小肠集合淋巴小结分离树突状细胞， 通过使用了 Applied Biosystems 7500 Real Time PCR System 的实时 PCR 法来测定 IL-10 的产生量。另外， 作为对照， 准备 与上述同样地给予了除了不含 AHCC 以外与实施例 2 具有相同组成的经肠营养剂的小鼠组。
其结果， 从脾脏分离出的树突状细胞中的 IL-10 的产生量与对照相比上升了 67.1％。另外， 从小肠集合淋巴小结分离出的树突状细胞中的 IL-10 的产生量与对照相比 上升了 22.5％ ( 图 1)。
[ 实施例 3]
使用胃探针将 AHCC( 阿明诺化学株式会社 ) 连续 15 天给予 8 周龄的 C57BL/6 小 鼠 ( 雌性、 n ＝ 10)(AHCC 的给予量为 20mg/1ml/ 只 / 天 )。在第 10 日经静脉给予红球菌 (Rhodococcus aurantiacus)1×108CFU/0.2mL/ 只。已知红球菌是喜好聚集在脾脏细胞和 肝脏细胞的微生物， 因此为了研究两个器官的感染状态， 从给予后第 1 天和第 3 天采取脾脏 和肝脏， 使用 DuoSetELISADevelopment System(R&D 公司制 ) 测定 IL-6 和 IL-10 的表达量。
其结果， 确认在脾脏细胞和肝脏细胞中， IL-6( 图 2)、 IL-10( 图 3) 的产生量均上 升。已知在红球菌引起的感染症中， IL-10 和 IL-6 都是作为炎症抑制性细胞因子而被诱导 的， 因此可以说上述实验的结果显示 AHCC 促进炎症抑制性细胞因子 IL-10 和 IL-6 的产生， 即 AHCC 具有抑制炎症的作用。
[ 实施例 4]
使用胃探针将 AHCC( 阿明诺化学株式会社 ) 或其多糖类级分、 作为对照的 β 葡聚 糖连续 15 天分别给予 8 周龄的 C57BL/6 小鼠 ( 雌性、 n ＝ 10)(AHCC、 多糖类级分的给予量 为 20mg/1ml/ 只 / 天 )。在第 10 天腹腔内给予 LPS 0.1mg/2mL/ 只后， 第 3 天采取肝脏和脾 脏。
以从脾脏和肝脏分离出的树突状细胞中提取的总 RNA 1000ng 为模板， 使用 AMV Reverse TranscriptaseXL(Takara 公 司 ) 和 Random 9mer 进 行 RT-PCR。 进 而， 以通过 RT-PCR 获得的 cDNA 为模板， 通过进行分别使用了特异性的下述引物对的实时 PCR(9500 Real Time Pcr System、 AppliedBiosystems 公司 ) 来测定 IL-2、 IL-6、 IL-10 及 TNF-α 的 表达量。
IL-2 ：
正向 5′ -GGAGCAGCTGTTGATGGACCTAC-3′ ( 序列编号 1)
反向 5′ -AATCCAGAACATGCCGCAGAG-3′ ( 序列编号 2)
IL-6 ：
正向 5′ -CAAGAAAGACAAAGCCAGAGTC-3′ ( 序列编号 3)
反向 5′ -GGTTTGCCGAGTAGATCTCAA-3′ ( 序列编号 4) IL-10 ：
正向 5′ -AGCCTTATCGGAAATGATCCAG-3′ ( 序列编号 5)
反向 5′ -TGCTCCACTGCCTTGCTCTTA-3′ ( 序列编号 6)
TNF-α ：
正向 5′ -AGAAGAGGCACTCCCCCAAAAG-3′ ( 序列编号 7)
反向 5′ -GGCTACAGGCTTGTCACTCGAA-3′ ( 序列编号 8)
以 GAP-DH 为对照， 纵轴取拷贝数， 横轴取循环数， 通过将循环数换算拷贝数来对 表达量进行定量。另外， 总 RNA 量的差异通过将各对象的拷贝数除以 GAP-DH 的拷贝数来进 行校正。
其结果， 确认了 AHCC 强烈抑制 LPS 刺激所引起的 IL-2( 图 4)、 IL-6( 图 5) 及 TNF-α( 图 6) 的表达。另外确认， AHCC 和其多糖类级分具有诱导 IL-10( 图 7) 的产生的作 用。
[ 实施例 5]
给予红球菌 5 小时后采取脾脏细胞及肝脏细胞， IL-12 的表达量通过进行使用了 下述引物对的实时 PCR(9500 Real Time Pcr System， AppliedBiosystems 公司 ) 来测定。
IL-12 ：
正向 5′ -CCAGAGACATGGAGTCATAGGC-3′ ( 序列编号 9)
反向 5′ -CAAGTCCATGTTTCTTTGCACC-3′ ( 序列编号 10)
其结果， 确认 AHCC 强烈抑制 LPS 刺激所引起的 IL-12 的产生 ( 图 8)。
[ 实施例 6]
将从正常小鼠的骨髓及脾脏中分离的树突状细胞置于塑料培养皿中， 观察只添加 LPS 以使终浓度为 5μg/ml 时和添加 LPS 与 AHCC( 终浓度为 5mg/ml) 或 β 葡聚糖 ( 终浓度 为 1mg/ml) 时的树突状细胞的外观。其结果示于表中。
[ 表 1]
另外， 关于这些树突状细胞的成熟度， 通过以 CD86、 CD40 以及 MHCII 类分子的表达 量为指标的 Facs 分析来测定。
其结果， 确认通过添加 AHCC 可显著地抑制 LPS 添加所引起的上述 3 种蛋白质的表 达量， 即树突状细胞即使受到 LPS 的刺激也不会成熟 ( 图 9)。该结果表明 AHCC 能够抑制 LPS 添加所引起的炎症。
[ 参考例 1]
将糊精 70g、 酪蛋白酸钠 8g、 AHCC( 阿明诺化学株式会社 )12g、 维生素混合物和无 机盐类均少量溶解到 50℃的热水中， 然后加入玉米油 9g 以及 0.025g 糖酯， 乳化后制备成总 量为 100mL 的经肠营养剂。
[ 参考例 2]
将糊精 18g、 蛋清水解产物 4g、 无机盐类混合物、 维生素混合物、 AHCC( 阿明诺化学 株式会社 )4g 溶解到水中使总量达到 100mL， 然后进行过滤灭菌， 得到液态的经肠营养剂。 该经肠营养剂中的 AHCC 的含量为 20mg/mL。
背景技术 活化糖类相关化合物 (Active Hexose Correlated Compound) 是在大型罐中长 时间培养担子菌的菌丝体而提取出来的含有乙酰化 α- 葡聚糖及其他多糖类的组成物的 总称。活化糖类相关化合物的代表例子为由阿明诺化学株式会社 (http://www.aminoup. co.jp/index.shtml) 制造销售的、 将 ActiveHexose Correlated Compound 的简称作为注册 商标的 AHCC。
活化糖类相关化合物 ( 以下用作为注册商标使用的简称 AHCC 表示 ) 是指 “以免疫 反应为主的生物应答调节物质” (Biological Response Modifiers、 BRM)， 其是具有免疫活 性功能的物质， 在改善以癌为代表的生活习惯病方面发挥作用， 并且是基础研究和临床试 验中研究最深入的功能性多糖类之一。
含有 AHCC 的健康食品是在为数众多的药学研究和医学研究以外， 在医学和药学 方面也被医师确认具有临床效果的食品。特别是， 通过使接受抗癌剂治疗的患者摄取含有 AHCC 的食品， 可以减轻作为抗癌剂的副作用已知的骨髓抑制 ( 白细胞、 红细胞减少 )、 腹泻、 呕吐、 食欲不振、 脱发等副作用， 因此含有 AHCC 的食品一直作为提高癌症患者的 QOL 的健康 食品而被利用。
但是， 对于因为癌的发生部位或处于手术前后而经口摄取营养物困难的患者， 也 会发生难以有效地摄取 AHCC 的情况。
在因各种原因造成营养物经口摄取困难时使用的营养剂为经肠营养剂。 经肠营养 剂通常是针对经口摄取的营养摄取量易变少的老年人、 幼儿或有经口摄取功能障碍的人、 手术前后被限制饮食的人等， 用来直接将营养物供给到胃和肠道的营养剂。经肠营养剂需 要足够量且搭配均衡地配合有糖、 蛋白质、 脂肪、 矿物质、 维生素、 水分等人体必需的各种营 养素， 并被制备成容易接种的乳化液状。
最近， 对于经肠营养剂， 除了营养的补给外还积极添加能够改善摄取者的身体状 况的有效成分， 由此得到的经肠营养剂可被称为功能性经肠营养剂， 对该新型经肠营养剂 的需求正在增加。例如， 日本特开 2006-50935 号公报 ( 专利文献 1) 中公开了含有甲壳素 水解产物和 / 或壳聚糖水解产物、 并期待具有改善关节痛作用或预防褥疮发生和治疗褥疮 的效果的经肠营养剂。另外， 日本特开 2007-230998 号公报 ( 专利文献 2) 中公开了以含有 在低聚木糖分子中具有糖醛酸残基的酸性低聚木糖为特征的、 在抑制肠道的 TNF-α 产生 方面有效的经口性抗炎药。
专利文献 1 ： 日本特开 2006-50935 号公报
专利文献 2 ： 日本特开 2007-230998 号公报
活化糖类相关化合物 ( 以下用作为注册商标使用的简称 AHCC 表示 ) 是指 “以免疫 反应为主的生物应答调节物质” (Biological Response Modifiers、 BRM)， 其是具有免疫活 性功能的物质， 在改善以癌为代表的生活习惯病方面发挥作用， 并且是基础研究和临床试 验中研究最深入的功能性多糖类之一。
含有 AHCC 的健康食品是在为数众多的药学研究和医学研究以外， 在医学和药学 方面也被医师确认具有临床效果的食品。特别是， 通过使接受抗癌剂治疗的患者摄取含有 AHCC 的食品， 可以减轻作为抗癌剂的副作用已知的骨髓抑制 ( 白细胞、 红细胞减少 )、 腹泻、 呕吐、 食欲不振、 脱发等副作用， 因此含有 AHCC 的食品一直作为提高癌症患者的 QOL 的健康 食品而被利用。
但是， 对于因为癌的发生部位或处于手术前后而经口摄取营养物困难的患者， 也 会发生难以有效地摄取 AHCC 的情况。
在因各种原因造成营养物经口摄取困难时使用的营养剂为经肠营养剂。 经肠营养 剂通常是针对经口摄取的营养摄取量易变少的老年人、 幼儿或有经口摄取功能障碍的人、 手术前后被限制饮食的人等， 用来直接将营养物供给到胃和肠道的营养剂。经肠营养剂需 要足够量且搭配均衡地配合有糖、 蛋白质、 脂肪、 矿物质、 维生素、 水分等人体必需的各种营 养素， 并被制备成容易接种的乳化液状。
最近， 对于经肠营养剂， 除了营养的补给外还积极添加能够改善摄取者的身体状 况的有效成分， 由此得到的经肠营养剂可被称为功能性经肠营养剂， 对该新型经肠营养剂 的需求正在增加。例如， 日本特开 2006-50935 号公报 ( 专利文献 1) 中公开了含有甲壳素 水解产物和 / 或壳聚糖水解产物、 并期待具有改善关节痛作用或预防褥疮发生和治疗褥疮 的效果的经肠营养剂。另外， 日本特开 2007-230998 号公报 ( 专利文献 2) 中公开了以含有 在低聚木糖分子中具有糖醛酸残基的酸性低聚木糖为特征的、 在抑制肠道的 TNF-α 产生 方面有效的经口性抗炎药。
专利文献 1 ： 日本特开 2006-50935 号公报
专利文献 2 ： 日本特开 2007-230998 号公报
发明内容 本发明的目的在于提供一种即使对经口补充营养困难的患者也能够供给 AHCC 的 新形式的含有 AHCC 的食品。
本发明人等在研究针对经口摄取营养困难的癌症患者的含有 AHCC 的经肠营养剂 的开发中发现， 通过经肠给予 AHCC 或其多糖类级分， 具有期待的能够缓解各种炎症性肠道 疾病的症状的炎症抑制效果， 从而完成了下述各发明。
(1) 一种炎症性肠道疾病患者用的经肠营养剂， 其含有通过培养担子菌的菌丝体 而得到的活化糖类相关化合物。
(2) 根据上述 (1) 所述的炎症性肠道疾病患者用的经肠营养剂， 其中， 担子菌为选 自 Lentinulla edodes、 Grifola frondosa、 Ganoderma lucidum、 Ganoderma applanatum 以 及 Schizophyllum commune 中的 1 种或 2 种以上的担子菌。
(3) 根据上述 (1) 所述的炎症性肠道疾病患者用的经肠营养剂， 其中， 活化糖类相 关化合物为 AHCC( 注册商标 ) 或其多糖类级分。
(4) 根据上述 (1) 或 (2) 所述的炎症性肠道疾病患者用的经肠营养剂， 其用于促进 白细胞介素 10 和 / 或白细胞介素 6 的产生。
(5) 根据上述 (1) 或 (2) 所述的炎症性肠道疾病患者用的经肠营养剂， 其中， 还含 有蛋白质和 / 或其分解物、 脂质、 糖质， 总热量为 70 ～ 200kcal/100ml。
本发明的经肠营养剂除了 AHCC 对癌症患者具有有利效果外， 还显示具有缓解炎 症性肠道疾病的炎症的作用， 对于罹患有溃疡性结肠炎或克隆氏病的患者， 也有望发挥抑 制其炎症的作用。特别是， 通过直接给予肠道组织， 能够更有效地发挥炎症抑制作用。
附图说明
图 1 为表示经肠给予 AHCC 后的小鼠树突状细胞的 IL-10 的产生能力亢进的图。
图 2 为表示经肠给予 AHCC 后小鼠的 IL-6 的产生能力亢进的图。
图 3 为表示经肠给予 AHCC 后小鼠的 IL-10 的产生能力亢进的图。
图 4 为表示 AHCC 抑制 LPS 刺激小鼠所引起的 IL-2 的产生的图。
图 5 为表示 AHCC 抑制 LPS 刺激小鼠所引起的 IL-6 的产生的图。
图 6 为表示 AHCC 抑制 LPS 刺激小鼠所引起的 TNF-α 的产生的图。
图 7 为表示 LPS 刺激小鼠后 IL-10 的产生能力亢进的图。
图 8 为表示 AHCC 抑制 LPS 刺激小鼠所引起的 IL-12 的产生的图。
图 9 为表示 AHCC 抑制 LPS 刺激树突状细胞所引起的 CD86、 CD40 以及 MHC II 类分 子的表达诱导的图。 具体实施方式
本发明提供一种含有 AHCC 或其多糖类级分的炎症性肠道疾病患者用的经肠营养 剂。本发明的经肠营养剂并不是以蛋白质等为代表的营养素， 其通过含有 AHCC 或其多糖类 级分作为功能性附加成分， 除了 AHCC 或其多糖类级分对癌症患者具有良好的作用外， 还能 够产生缓解炎症性肠道疾病患者的上述炎症的效果。
AHCC 并不单纯地是从担子菌得到的提取物， 而是将担子菌的菌丝体在液体罐中长时间例如 45 ～ 60 天培养， 并经过酶反应、 灭菌、 浓缩等工序制造而成的多糖类混合物。其 主要成分认为是乙酰化 α- 葡聚糖， 但也含有 β 葡聚糖及其他成分。
AHCC 制造中可使用的担子菌可列举出例如 Lentinulla edodes( 通用名香菇 )、 Agaricus bisporus( 通用名双孢蘑菇 )、 Grifola frondosa( 通用名灰树花 )、 Pholiota nameko( 通用名滑菇 )、 Pleurotus ostreatus( 通用名平菇 )、 Flammulina velutipes( 通 用名金针菇 )、 Ganoderma lucidum( 通用名灵芝 )、 Auricularia auricula、 通用名黑木 耳 )、 Ganoderma applanatum( 通用名树舌灵芝 )、 Coriolus lucidum( 通用名云芝灵芝 )、 Grifola umbellate( 通用名猪苓 )、 Schizophyllum commune( 通用名裂褶菌 )、 Volvariella volvaceae( 通用名草菇 ) 等。
这些担子菌可以单独使用也可以几种组合使用。其中， 优选使用 Lentinulla edodes( 通用名香菇 )、 Grifola frondosa( 通用名灰树花 )、 Ganoderma lucidum( 通用名 灵芝 )、 Ganoderma applanatum( 通用名树舌灵芝 )、 Schizophyllum commune( 通用名裂褶 菌 )。
上文所例示的担子菌的培养优选使用植物组织原料来进行。 植物组织原料只要是 植物组织来源的， 则没有特殊限制， 也可以使用木屑等， 但优选草本类植物来源的材料， 例 如米糠、 麸、 甘蔗渣、 玉米的根茎、 稻草、 麦秸、 豆渣等。 它们可以单独使用也可以多种适当组 合使用。另外， 为了使担子菌容易被利用， 可以使用预先将植物组织原料用纤维素酶、 淀粉 酶、 蛋白酶、 果胶酶、 甲壳素酶等处理， 并对其进行热水提取而得到的提取物。 植物组织原料 可根据担子菌的培养状态从培养初期添加， 也可于培养后期添加。
另外， 植物组织原料中也可添加各种碳源或氮源。 作为碳源的例子， 可列举出葡萄 糖、 砂糖 ( 日文原文为 ： シヨ類 )、 麦芽糖、 蔗糖、 精制糖、 黑糖、 糖蜜、 黑糖蜜、 麦芽提取物等。 作为氮源的例子， 可列举出肉提取物、 蛋白胨、 蛋白粉、 大豆粉、 干燥酵母、 酵母提取物、 硫酸 铵、 酒石酸铵、 尿素等。 另外， 根据需要还可以添加钠盐、 镁盐、 锰盐、 铁盐、 钙盐， 磷酸盐等无 机盐类或肌醇、 维生素 B1 盐酸盐、 L- 天冬酰胺、 生物素等维生素类。
使用上述培养基的担子菌的培养可以按照通常的中温菌的培养条件在例如 pH2 ～ 6、 10 ～ 45℃、 优选 15 ～ 30℃的温度下进行。培养时间根据菌量和植物组织原料的 形态通常可设定为 4 ～ 20 天左右， 但通过 40 ～ 60 天的长时间的培养， 可以制造出更加优 良的 AHCC。
培养后， 向培养物中加入纤维素酶、 淀粉酶、 蛋白酶、 果胶酶、 甲壳素酶等酶， 在最 佳的温度条件下反应 2 ～ 20 小时使菌体破碎， 之后， 进行加热处理使酶反应失活， 通过离心 分离等从该处理物中除去菌丝体残渣， 回收上清级分， 由此可回收含有目标 AHCC 的级分。
本发明中使用的 AHCC 只要是挑选培养上文所例示的菌体并进行酶处理而得到 的， 则均可利用， 但 AHCC 的品质根据制造条件的不同容易发生很大变化， 为使高品质保持 稳定， 需要对上述的培养条件和回收纯化进行严格的管理。目前， 阿明诺化学株式会社 (http://www.aminoup.co.jp/index.shtml) 根据基于药品的制造的规格， 正稳定而持续地 制造销售高品质的 AHCC。 本发明中优选使用由阿明诺化学株式会社以 AHCC( 注册商标 ) 市 售的产品。
另外， 在本发明中， AHCC 的多糖类级分也可以与 AHCC 一起使用或替代 AHCC 使用。 本发明中的 “AHCC 的多糖类级分” 是指由 AHCC 衍生的多糖类的水溶性级分， 其包括对 AHCC进行疏水性色谱法时得到的水溶性级分、 通过向该水溶性级分中添加乙醇而得到的沉淀级 分、 进而对该沉淀级分进行阳离子色谱法处理时得到的非吸附级分等。
本发明的经肠营养剂中的 AHCC 或其多糖类级分的配合量可适当设定为营养剂总 质量的 5 ～ 10 质量％范围内。另外， 关于其他成分， 可以任意使用在通常的经肠营养剂中 使用的物质。
例如， 作为蛋白质， 可列举出酪蛋白或酪蛋白酸钠、 酪蛋白酸钙等酪蛋白盐， 牛奶 蛋白质、 鸡蛋蛋白质、 鱼蛋白质、 肉蛋白质等动物性蛋白质， 大豆蛋白质等植物性蛋白质， 以 及它们的分解产物、 氨基酸等。它们可以 1 种单独使用， 也可以 2 种以上组合使用。蛋白质 的含量优选每单位质量的经肠营养剂为 2.0 ～ 10.0 质量％， 更优选为 3.5 ～ 6.0 质量％。
作为脂质， 可列举出例如大豆油、 玉米油、 菜籽油、 椰子油、 红花油、 紫苏油、 芝麻 油、 棕榈油等植物油， 猪油、 牛油等动物油， 鱼油、 中链脂肪酸甘油三酯及其他的合成甘油三 酯， 以及它们的加工油脂。它们可以 1 种单独使用， 也可以 2 种以上组合使用。特别是， 作 为脂质的构成成分的脂肪酸优选搭配均衡地配合饱和脂肪酸、 单不饱和脂肪酸、 多不饱和 脂肪酸。另外， 脂质的含量优选每单位质量的经肠营养剂为 1.0 ～ 10.0 质量％， 更优选为 2.0 ～ 8.0 质量％。 作为糖类， 可列举出葡萄糖、 果糖等单糖类， 麦芽糖、 乳糖等二糖类， 低聚糖类及多 糖类。其中， 从易消化吸收性和恰当的渗透压的理由出发， 优选使用麦芽糊精、 糊精、 寡糖 等。它们可以 1 种单独使用， 也可以 2 种以上组合使用。另外， 糖质的含量优选每单位质量 的经肠营养剂为 10.0 ～ 30 质量％， 更优选为 15.0 ～ 25.0 质量％。
为了充分补充人体必需的营养， 本发明的经肠营养剂除上述以外的成分外， 还优 选配合例如纤维素、 聚葡萄糖、 瓜尔胶酶分解物、 难消化性的多糖类等、 膳食纤维、 维生素 类、 矿物质类。
本发明的经肠营养剂的总热量优选为 70 ～ 200kcal/100ml， 更优选为 100 ～ 150kcal/100ml， 按照总热量达到上述范围的方式来适当调整水的添加量。
本发明的经肠营养剂的优选形态为液体制剂、 乳化液制剂或软胶状剂。乳化液制 剂优选使用例如大豆磷脂、 卵黄磷脂、 单甘油酯、 蔗糖脂肪酸酯、 脱水山梨糖醇脂肪酸酯、 丙 二醇脂肪酸酯、 聚甘油脂肪酸酯、 单甘油酯的琥珀酸单甘油酯或柠檬酸酯等单甘油酯衍生 物等乳化剂。乳化剂的含量优选每单位质量的经肠营养剂为 0.05 ～ 1.0 质量％， 更优选为 0.2 ～ 0.7 质量％。
本发明的经肠营养剂可按照常规方法制备。对于液体制剂， 将配合成分溶解于水 中即可。另外， 对于乳化液制剂， 可以使配合成分溶解于水优选热水中、 并加入油分和乳化 剂， 然后使用均化器等进行乳化来制备。制备的液体制剂或乳化液制剂可通过过滤灭菌或 者在填充到小袋或软袋中密封后进行加热杀菌来制造。
含有 AHCC 或其多糖类级分的本发明的经肠营养剂有望对炎症性肠道疾病发挥缓 解炎症的效果。如后述实施例中所详细说明的， 在经肠给予了 AHCC 或其多糖类级分的哺乳 动物中， 可确认具有诱导抗炎症细胞因子白细胞介素 10(IL-10) 的产生的效果。
另外， 还确认了 AHCC 在没有脂多糖 (Lipopolysaccharide， LPS) 刺激的状态下具 有诱导对抑制炎症有效的白细胞介素 6(IL-6) 的产生的效果。另一方面还确认了， AHCC 具有抑制在受到 LPS 刺激等时被诱导的炎症活化细胞因子即白细胞介素 6、 白细胞介素
2(IL-2)、 TNF-α、 白细胞介素 12(IL-12) 的产生的效果。此外还明确了， AHCC 还显示以树 突状细胞 (DC) 为作用点的抗炎症扩大的作用。
由于这些生理作用， 含有 AHCC 或其多糖类级分的本发明的经肠营养剂有望发挥 抑制各种炎症性肠道疾病例如克隆氏病或溃疡性结肠炎等的炎症的效果。另外， 当炎症性 肠道疾病患者处于术后、 创伤等病理状态时， 经肠营养剂的抗炎症改善作用也是有效的。
以下给出实施例以更加详细地说明本发明， 但本发明并不受下述实施例的限定。 实施例 [ 实施例 1]
将 AHCC( 阿明诺化学株式会社 ) 浓缩液 80mL 注入填充有事先用水驯化的聚苯乙 烯型凝胶 DIAION HP-20(Mitsubishi Chemical Corporation) 的柱子 (5.0cm i.d.×25cm) 中。用水、 甲醇、 50％丙酮各 1L 依次进行洗脱。将该水级分在减压下浓缩后， 进行冷冻干 燥得到黄白色的固体 (18.1g)。向该级分中加入 35mL 的水使其溶解后， 一边剧烈搅拌， 一 边滴加 180mL 的乙醇。离心 (3000rpm、 15min) 后， 弃去上清。向沉淀中加入 35mL 的水进 行同样的操作， 在得到的沉淀中加入少量的水使其溶解， 进行冷冻干燥， 得到淡褐色的固体 (5.87g)。向该级分中加入 100mL 的水使其溶解， 注入填充有阳离子交换型凝胶 Dowex 50W X-8(The Dow Chemical Company) 的柱子 (4.4cm i.d.×17cm) 中。 用水和 3M 氨水各 0.50L 依次洗脱。将该水级分在减压下浓缩后， 进行冷冻干燥， 得到淡黄色固体 (AHCC 的多糖类级 分 )(4.93g)。
[ 实施例 2]
使用胃探针将 AHCC( 阿明诺化学株式会社 ) 连续 10 天给予 6 周龄的 C57BL/6 小鼠 ( 雌性、 n ＝ 30)(AHCC 的给予量为 20mg/1ml/ 只 / 天 )。 第 10 天腹腔内给予 LPS 0.1mg/2mL/ 只， 2 小时后从脾脏和小肠集合淋巴小结分离树突状细胞， 通过使用了 Applied Biosystems 7500 Real Time PCR System 的实时 PCR 法来测定 IL-10 的产生量。另外， 作为对照， 准备 与上述同样地给予了除了不含 AHCC 以外与实施例 2 具有相同组成的经肠营养剂的小鼠组。
其结果， 从脾脏分离出的树突状细胞中的 IL-10 的产生量与对照相比上升了 67.1％。另外， 从小肠集合淋巴小结分离出的树突状细胞中的 IL-10 的产生量与对照相比 上升了 22.5％ ( 图 1)。
[ 实施例 3]
使用胃探针将 AHCC( 阿明诺化学株式会社 ) 连续 15 天给予 8 周龄的 C57BL/6 小 鼠 ( 雌性、 n ＝ 10)(AHCC 的给予量为 20mg/1ml/ 只 / 天 )。在第 10 日经静脉给予红球菌 (Rhodococcus aurantiacus)1×108CFU/0.2mL/ 只。已知红球菌是喜好聚集在脾脏细胞和 肝脏细胞的微生物， 因此为了研究两个器官的感染状态， 从给予后第 1 天和第 3 天采取脾脏 和肝脏， 使用 DuoSetELISADevelopment System(R&D 公司制 ) 测定 IL-6 和 IL-10 的表达量。
其结果， 确认在脾脏细胞和肝脏细胞中， IL-6( 图 2)、 IL-10( 图 3) 的产生量均上 升。已知在红球菌引起的感染症中， IL-10 和 IL-6 都是作为炎症抑制性细胞因子而被诱导 的， 因此可以说上述实验的结果显示 AHCC 促进炎症抑制性细胞因子 IL-10 和 IL-6 的产生， 即 AHCC 具有抑制炎症的作用。
[ 实施例 4]
使用胃探针将 AHCC( 阿明诺化学株式会社 ) 或其多糖类级分、 作为对照的 β 葡聚 糖连续 15 天分别给予 8 周龄的 C57BL/6 小鼠 ( 雌性、 n ＝ 10)(AHCC、 多糖类级分的给予量 为 20mg/1ml/ 只 / 天 )。在第 10 天腹腔内给予 LPS 0.1mg/2mL/ 只后， 第 3 天采取肝脏和脾 脏。
以从脾脏和肝脏分离出的树突状细胞中提取的总 RNA 1000ng 为模板， 使用 AMV Reverse TranscriptaseXL(Takara 公 司 ) 和 Random 9mer 进 行 RT-PCR。 进 而， 以通过 RT-PCR 获得的 cDNA 为模板， 通过进行分别使用了特异性的下述引物对的实时 PCR(9500 Real Time Pcr System、 AppliedBiosystems 公司 ) 来测定 IL-2、 IL-6、 IL-10 及 TNF-α 的 表达量。
IL-2 ：
正向 5′ -GGAGCAGCTGTTGATGGACCTAC-3′ ( 序列编号 1)
反向 5′ -AATCCAGAACATGCCGCAGAG-3′ ( 序列编号 2)
IL-6 ：
正向 5′ -CAAGAAAGACAAAGCCAGAGTC-3′ ( 序列编号 3)
反向 5′ -GGTTTGCCGAGTAGATCTCAA-3′ ( 序列编号 4) IL-10 ：
正向 5′ -AGCCTTATCGGAAATGATCCAG-3′ ( 序列编号 5)
反向 5′ -TGCTCCACTGCCTTGCTCTTA-3′ ( 序列编号 6)
TNF-α ：
正向 5′ -AGAAGAGGCACTCCCCCAAAAG-3′ ( 序列编号 7)
反向 5′ -GGCTACAGGCTTGTCACTCGAA-3′ ( 序列编号 8)
以 GAP-DH 为对照， 纵轴取拷贝数， 横轴取循环数， 通过将循环数换算拷贝数来对 表达量进行定量。另外， 总 RNA 量的差异通过将各对象的拷贝数除以 GAP-DH 的拷贝数来进 行校正。
其结果， 确认了 AHCC 强烈抑制 LPS 刺激所引起的 IL-2( 图 4)、 IL-6( 图 5) 及 TNF-α( 图 6) 的表达。另外确认， AHCC 和其多糖类级分具有诱导 IL-10( 图 7) 的产生的作 用。
[ 实施例 5]
给予红球菌 5 小时后采取脾脏细胞及肝脏细胞， IL-12 的表达量通过进行使用了 下述引物对的实时 PCR(9500 Real Time Pcr System， AppliedBiosystems 公司 ) 来测定。
IL-12 ：
正向 5′ -CCAGAGACATGGAGTCATAGGC-3′ ( 序列编号 9)
反向 5′ -CAAGTCCATGTTTCTTTGCACC-3′ ( 序列编号 10)
其结果， 确认 AHCC 强烈抑制 LPS 刺激所引起的 IL-12 的产生 ( 图 8)。
[ 实施例 6]
将从正常小鼠的骨髓及脾脏中分离的树突状细胞置于塑料培养皿中， 观察只添加 LPS 以使终浓度为 5μg/ml 时和添加 LPS 与 AHCC( 终浓度为 5mg/ml) 或 β 葡聚糖 ( 终浓度 为 1mg/ml) 时的树突状细胞的外观。其结果示于表中。
[ 表 1]
另外， 关于这些树突状细胞的成熟度， 通过以 CD86、 CD40 以及 MHCII 类分子的表达 量为指标的 Facs 分析来测定。
其结果， 确认通过添加 AHCC 可显著地抑制 LPS 添加所引起的上述 3 种蛋白质的表 达量， 即树突状细胞即使受到 LPS 的刺激也不会成熟 ( 图 9)。该结果表明 AHCC 能够抑制 LPS 添加所引起的炎症。
[ 参考例 1]
将糊精 70g、 酪蛋白酸钠 8g、 AHCC( 阿明诺化学株式会社 )12g、 维生素混合物和无 机盐类均少量溶解到 50℃的热水中， 然后加入玉米油 9g 以及 0.025g 糖酯， 乳化后制备成总 量为 100mL 的经肠营养剂。
[ 参考例 2]
将糊精 18g、 蛋清水解产物 4g、 无机盐类混合物、 维生素混合物、 AHCC( 阿明诺化学 株式会社 )4g 溶解到水中使总量达到 100mL， 然后进行过滤灭菌， 得到液态的经肠营养剂。 该经肠营养剂中的 AHCC 的含量为 20mg/mL。
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