书签分享收藏举报版权申诉 / 73

立即下载加入VIP,免费下载

当前位置：首页 > 人类生活必需 > 医学或兽医学；卫生学 > 包含色氨酸羟化酶抑制剂的组合物.pdf

包含色氨酸羟化酶抑制剂的组合物.pdf

上传人：1****2

文档编号：840723

上传时间：2018-03-15

格式：PDF

页数：73

大小：921.47KB

《包含色氨酸羟化酶抑制剂的组合物.pdf》由会员分享，可在线阅读，更多相关《包含色氨酸羟化酶抑制剂的组合物.pdf（73页完整版）》请在专利查询网上搜索。

1、10申请公布号CN101969952A43申请公布日20110209CN101969952ACN101969952A21申请号200880022196722申请日2008062460/946,27420070626USA61K31/505200601A61K45/06200601A61P25/0020060171申请人莱西肯医药有限公司地址美国得克萨斯州72发明人菲利普曼顿布朗刘清云74专利代理机构中原信达知识产权代理有限责任公司11219代理人刘慧杨青54发明名称包含色氨酸羟化酶抑制剂的组合物57摘要本发明提供了包含色氨酸羟化酶抑制剂的方法和组合物。具体方法涉及减少或避免与一些药物有关的由5。

2、羟色胺介导的副作用。30优先权数据85PCT申请进入国家阶段日2009122886PCT申请的申请数据PCT/US2008/0679982008062487PCT申请的公布数据WO2009/002970EN2008123151INTCL19中华人民共和国国家知识产权局12发明专利申请权利要求书4页说明书67页附图1页CN101969952A1/4页21药物组合物，其包含第一活性药物成分和第二活性药物成分，其中第一活性药物成分与由5羟色胺介导的副作用有关以及第二活性药物成分是色氨酸羟化酶抑制剂。2权利要求1的组合物，其中第一活性药物成分是单胺氧化酶抑制剂。3权利要求1的组合物，其中第一活性药物成。

3、分是选择性5羟色胺再摄取抑制剂。4权利要求1的组合物，其中第一活性药物成分是曲坦类。5权利要求2的组合物，其中单胺氧化酶抑制剂是溴法罗明，右芬氟拉明，异康唑，异烟肼，异丙烟肼，芬氟拉明，吗氯贝胺，苯乙肼，伪麻黄碱，司来吉兰，托洛沙酮，或反苯环丙胺，或其药学可接受的盐，或其药理学活性的立体异构体或代谢物。6权利要求3的组合物，其中选择性5羟色胺再摄取抑制剂是阿米替林，西酞普兰，多塞平，氟西汀，氟伏沙明，丙米嗪，去甲氟西汀，帕罗西汀，舍曲林，文拉法辛或苯吡烯胺，或其药学可接受的盐，或其药理学活性的立体异构体或代谢物。7权利要求4的组合物，其中曲坦类是那拉曲坦，利扎曲普坦，舒马普坦或佐米曲普坦，或其。

4、药学可接受的盐，或其药理学活性的立体异构体或代谢物。8权利要求1的组合物，其中色氨酸羟化酶抑制剂是强力的TPH1抑制剂。9权利要求8的组合物，其中强力的TPH1抑制剂由下式I或其药学可接受的盐表示其中A是任选被取代的杂环基、芳基或杂环；X是键，O，S，CO，CR4，CR4，CR3R4，CR4CR4，CC，NR5，NR5CONR5，CR3R4NR5，NR5CR3R4，ONCR3，CR3NO，CR3R4O，OCR3R4，SO2，SO2NR5，NR5SO2，CR3R4SO2或SO2CR3R4；D是任选被取代的芳基或杂环；R1是氢或任选被取代的烷基、烷基芳基、烷基杂环、芳基或杂环；R2是氢或任选被取代。

5、的烷基、烷基芳基、烷基杂环、芳基或杂环；R3是氢，烷氧基，氨基，氰基，卤素，羟基，或任选被取代的烷基；R4是氢，烷氧基，氨基，氰基，卤素，羟基，或任选被取代的烷基或芳基；每个R5独立地是氢或任选被取代的烷基或芳基；和N是03。10权利要求9的方法，其中强力的TPH1抑制剂由下式表示其中E是任选被取代的芳基或杂环。权利要求书CN101969952A2/4页311权利要求10的方法，其中强力的TPH1抑制剂由下式表示其中A1和A2各自独立地是单环的、任选被取代的环烷基、芳基或杂环。12权利要求9的方法，其中强力的TPH1抑制剂由下式表示13权利要求9的方法，其中强力的TPH1抑制剂由下式表示其中Z。

6、1、Z2、Z3和Z4各自独立地是N或CR10；每个R10独立地是氨基，氰基，卤素，氢，OR11，SR11，NR12R13，或任选被取代的烷基、烷基芳基或烷基杂环；每个R11独立地是氢或任选被取代的烷基、烷基芳基或烷基杂环；每个R12独立地是氢或任选被取代的烷基、烷基芳基或烷基杂环；和每个R13独立地是氢或任选被取代的烷基、烷基芳基或烷基杂环。14权利要求13的方法，其中强力的TPH1抑制剂由下式表示权利要求书CN101969952A3/4页415权利要求1的组合物，其中色氨酸羟化酶抑制剂是下式的化合物或其药学可接受的盐；其中A是任选被取代的杂环基、芳基或杂环；X是键，O，S，CO，CR4，CR。

7、4，CR3R4，CR4CR4，CC，NR5，NR5CONR5，CR3R4NR5，NR5CR3R4，ONCR3，CR3NO，CR3R4O，OCR3R4，SO2，SO2NR5，NR5SO2，CR3R4SO2或SO2CR3R4；E是任选被取代的芳基或杂环；R1是氢或任选被取代的烷基、烷基芳基、烷基杂环、芳基或杂环；R2是氢或任选被取代的烷基、烷基芳基、烷基杂环、芳基或杂环；R3是氢，烷氧基，氨基，氰基，卤素，羟基，或任选被取代的烷基；R4是氢，烷氧基，氨基，氰基，卤素，羟基，或任选被取代的烷基或芳基；每个R5独立地是氢或任选被取代的烷基或芳基；和每个R10独立地是氨基，氰基，卤素，氢，OR11，SR。

8、11，NR12R13，或任选被取代的烷基、烷基芳基或烷基杂环；每个R11独立地是氢或任选被取代的烷基、烷基芳基或烷基杂环；每个R12独立地是氢或任选被取代的烷基、烷基芳基或烷基杂环；每个R13独立地是氢或任选被取代的烷基、烷基芳基或烷基杂环；N是03；和Q是12。16权利要求15的组合物，其中E是芳基。17权利要求15的组合物，其中X是O、CR3R4O或OCR3R4。18权利要求16的组合物，其中R3是氢或任选被取代的烷基，以及R4是氢或任选被取代的烷基。权利要求书CN101969952A4/4页519权利要求16的组合物，其中R3是氢以及R4是三氟甲基。20权利要求15的组合物，其中N是1。。

9、21权利要求15的组合物，其中Q是1。权利要求书CN101969952A1/67页6包含色氨酸羟化酶抑制剂的组合物0001本专利申请要求被并入本文作为参考的2007年6月26日提交的美国临时专利申请NO60/946,246的优先权。1技术领域0002本发明涉及包含色氨酸羟化酶抑制剂的组合物及其用法。2背景技术0003神经递质5羟色胺5羟色胺5HT参与了情绪控制和调节睡眠、焦虑、酗酒、药物滥用、进食和性行为的多个中枢神经方面。其还参予调节血管紧张度、内脏运动性和由细胞介导的免疫应答。WALTHER，DJ等人，SCIENCE299762003。5羟色胺还在凝血和止血中起作用血小板，其自身不能制造5。

10、羟色胺，接受大量的外周5HT。GOODMANGILMANSTHEPHARMACOLOGICALBASISOFTHERAPEUTICS，10THED，P2745MCGRAWHILL，2001。00045羟色胺从氨基酸色氨酸分两步被合成。GOODMANGILMANS，P270。第一步是限速步骤，并由酶色氨酸羟化酶TPH进行催化，该酶具有两个已知的同工型TPH1其在外周表达和TPH2其主要在脑中表达。WALTHER，同上。5羟色胺从体内被除去的基本途径牵涉酶单胺氧化酶MAO，其将所述化合物转化为5羟基吲哚乙醛，该物质然后通过酶醛脱氢酶被转化为5羟吲哚乙酸5HIAA。GOODMANGILMANS，P2。

11、702。0005已经报道了具有TPH1基因遗传缺陷的小鼠“敲除小鼠”。在一个案例中，该小鼠据报道在经典的5羟色胺脑区域中表达正常量的5羟色胺，但是在外周大量缺乏5羟色胺。WALTHER，同上。在另一个案例中，敲除小鼠表现出异常心搏动，这归于缺乏外周5羟色胺。F等人，PNAS1002313525135302003。在旨在了解酶在特发性肺动脉高压中的作用而进行的研究中，发现TPH1敲除小鼠对缺氧影响的应答与野生型小鼠不同。MORECROFT，I等人，HYPERTENSION492322362007。0006影响5羟色胺水平的药物诸如MAO抑制剂和选择性5羟色胺再摄取抑制剂SSRI其可抑制血小板接受。

12、5HT的能力通常伴有副作用。特别严重的例子是与服用芬氟拉明和芬特明的药物组合被称为“FENPHEN”有关的心脏毒性，其被认为由对身体控制血液5羟色胺水平的能力的组合影响所引起。MITNEWSOFFICE，“OUTDATESSICLABELMAYHAVELEDTOTOXICCOMBINATIONOFFENPHEN”HTTP/WEBMITEDU/NEWSOFFICE/1998/FENPHEN0902HTML19980007只是在最近才公开了被开发用于安全和有效地抑制TPH1的化合物。参见美国专利申请公开NO20070191370。这些化合物提供了治疗、处置和预防各种疾病和病症的全新手段。00083。

13、发明概述0009本发明部分地涉及减少和/或减轻与给药一种或多种药物有关的、由5羟色胺介导的副作用的方法。具体方法包括抑制色氨酸羟化酶TPH。说明书CN101969952A2/67页70010本发明还涵盖了包含两种活性药物成分的组合物，其中一种活性药物成分是TPH抑制剂且另一种活性药物成分是可引起由5羟色胺介导的副作用的药物。0011具体TPH抑制剂由下式I及其药学可接受的盐表示00120013其中A是任选被取代的杂环基、芳基或杂环；X是键即，A直接与D结合，O，S，CO，CR4，CR4，CR3R4，CR4CR4，CC，NR5，NR5CONR5，CR3R4NR5，NR5CR3R4，ONCR3，C。

14、R3NO，CR3R4O，OCR3R4，SO2，SO2NR5，NR5SO2，CR3R4SO2或SO2CR3R4；D是任选被取代的芳基或杂环；R1是氢或任选被取代的烷基、烷基芳基、烷基杂环、芳基或杂环；R2是氢或任选被取代的烷基、烷基芳基、烷基杂环、芳基或杂环；R3是氢，烷氧基，氨基，氰基，卤素，羟基，或任选被取代的烷基；R4是氢，烷氧基，氨基，氰基，卤素，羟基，或任选被取代的烷基或芳基；每个R5独立地是氢或任选被取代的烷基或芳基；以及N是03。4附图说明0014本发明的方面可参见附图得以了解。图1显示了本发明的强力TPH1抑制剂在口服给药后在小鼠胃肠道和脑中的效果。所有数据以对照给予媒介物的组的。

15、平均数的百分数表示。误差线是SEM。每组N5。符号是，P005，相对于对照组。对于脑数据，P05，单因素ANOVA。00155发明详述0016单胺氧化酶MAO抑制剂和选择性5羟色胺再摄取抑制剂SSRI以可引起多种副作用的方式影响外周5羟色胺的代谢和去向。其它的可影响5羟色胺途径的药物诸如曲坦类也可引起由5羟色胺介导的副作用。本发明的方法和组合物使得可减少和/或改善与5羟色胺相关的副作用。0017本发明部分地基于以下发现在小鼠中敲除TPH1基因显著降低胃肠道GI的5羟色胺水平，但是只引起很少的如果有的话对中枢神经系统CNS的可测量影响。本发明还基于发现抑制TPH例如TPH1的化合物。001851。

16、定义0019除非另有陈述，否则术语“烯基”是指含220个例如210个或26个碳原子并包括至少一个碳碳双键的直链、支链和/或环状烃。代表性烯基部分包括乙烯基，烯丙基，1丁烯基，2丁烯基，异丁烯基，1戊烯基，2戊烯基，3甲基1丁烯基，2甲基2丁烯基，2，3二甲基2丁烯基，1己烯基，2己烯基，3己烯基，1庚烯基，2庚烯基，3庚烯基，1辛烯基，2辛烯基，3辛烯基，1壬烯基，2壬烯基，3壬烯基，1癸烯基，2癸烯基和3癸烯基。说明书CN101969952A3/67页80020除非另有陈述，否则术语“烷基”是指含120个例如110个或14个碳原子的直链、支链和/或环状“环烷基”烃。含14个碳的烷基部分被称为。

17、“低级烷基”。烷基的例子包括甲基，乙基，丙基，异丙基，正丁基，叔丁基，异丁基，戊基，己基，异己基，庚基，4，4二甲基戊基，辛基，2，2，4三甲基戊基，壬基，癸基，十一烷基和十二烷基。环烷基部分可为单环或多环的，并且例子包括环丙基，环丁基，环戊基，环己基和金刚烷基。烷基部分的另外的例子具有直链、支链和/或环状部分例如，1乙基4甲基环己基。术语“烷基”包括饱和烃类以及烯基和炔基部分。0021除非另有陈述，否则术语“烷氧基”是指O烷基。烷氧基的例子包括OCH3，OCH2CH3，OCH22CH3，OCH23CH3，OCH24CH3和OCH25CH3。0022除非另有陈述，否则术语“烷基芳基”或“烷基芳。

18、基”是指与芳基部分结合的烷基部分。0023除非另有陈述，否则术语“烷基杂芳基”或“烷基杂芳基”是指与杂芳基部分结合的烷基部分。0024除非另有陈述，否则术语“烷基杂环”或“烷基杂环”是指与杂环部分结合的烷基部分。0025除非另有陈述，否则术语“炔基”是指含220个例如220个或26个碳原子并含有至少一个碳碳三键的直链、支链或环状烃。代表性的炔基部分包括乙炔基，丙炔基，1丁炔基，2丁炔基，1戊炔基，2戊炔基，3甲基1丁炔基，4戊炔基，1己炔基，2己炔基，5己炔基，1庚炔基，2庚炔基，6庚炔基，1辛炔基，2辛炔基，7辛炔基，1壬炔基，2壬炔基，8壬炔基，1癸炔基，2癸炔基和9癸炔基。0026除非另。

19、有陈述，否则术语“芳基”是指由碳原子和氢原子组成的芳香性环或芳香性或部分芳香性的环体系。芳基部分可包括结合或稠合在一起的多个环。芳基部分的例子包括蒽基，奥基，联苯基，芴基，茚满，茚基，萘基，菲基，苯基，1，2，3，4四氢萘和甲苯基。0027除非另有陈述，否则术语“芳基烷基”或“芳基烷基”是指与烷基部分结合的芳基部分。0028除非另有陈述，否则术语“可生物水解的酰胺”、“可生物水解的酯”、“可生物水解的氨基甲酸酯”、“可生物水解的碳酸酯”、“可生物水解的脲基”和“可生物水解的磷酸酯”分别是指化合物的酰胺、酯、氨基甲酸酯、碳酸酯、脲基或磷酸酯，它们1不妨碍化合物的生物活性，但是可赋予该化合物以有利。

20、的体内性质，诸如摄取、作用的持续时间或作用的开始；或者2是生物非活性的但是在体内被转化为生物活性化合物。可生物水解的酯的例子包括低级烷基酯，烷氧基酰基氧基酯，烷基酰基氨基烷基酯和胆碱酯。可生物水解的酰胺的例子包括低级烷基酰胺，氨基酸酰胺，烷氧基酰基酰胺和烷基氨基烷基羰基酰胺。可生物水解的氨基甲酸酯的例子包括低级烷基胺，被取代的乙二胺，氨基酸，羟基烷基胺，杂环和杂芳香胺和聚醚胺。0029除非另有陈述，否则术语“卤素”和“卤代”包括氟、氯、溴和碘。0030除非另有陈述，否则术语“杂烷基”是指烷基部分例如，直链、支链或环状，其中其碳原子中的至少一个被杂原子例如，N、O或S所置换。0031除非另有陈述。

21、，否则术语“杂芳基”是指其中其碳原子中的至少一个被杂原子例如，N、O或S所置换的芳基部分。例子包括吖啶基，苯并咪唑基，苯并呋喃基，苯并异说明书CN101969952A4/67页9噻唑基，苯并异噁唑基，苯并喹唑啉基，苯并噻唑基，苯并噁唑基，呋喃基，咪唑基，吲哚基，异噻唑基，异噁唑基，噁二唑基，噁唑基，酞嗪基，吡嗪基，吡唑基，哒嗪基，吡啶基，嘧啶基PYRIMIDINYL，嘧啶基PYRIMIDYL，吡咯基，喹唑啉基，喹啉基，四唑基，噻唑基和三嗪基。0032除非另有陈述，否则术语“杂芳基烷基”或“杂芳基烷基”是指与烷基部分结合的杂芳基部分。0033除非另有陈述，否则术语“杂环”是指由碳原子、氢原子和至。

22、少一个杂原子例如，N、O或S组成的芳香性、部分芳香性或非芳香性的单环或多环的环或环体系。杂环可包括稠合或结合在一起的多个即，两个或更多个环。杂环包括杂芳基。例子包括苯并1，3二氧杂环戊烯基，2，3二氢苯并1，4二氧杂芑基，噌啉基，呋喃基，乙内酰脲基，吗啉基，氧杂环丁基，氧杂环丙基，哌嗪基，哌啶基，吡咯烷酮基，吡咯烷基，四氢呋喃基，四氢吡喃基，四氢吡啶基，四氢嘧啶基，四氢噻吩基，四氢噻喃基和戊内酰胺基。0034除非另有陈述，否则术语“杂环基烷基”或“杂环烷基”是指与烷基部分结合的杂环部分。0035除非另有陈述，否则术语“杂环烷基”是指非芳香性的杂环。0036除非另有陈述，否则术语“杂环烷基烷基”。

23、或“杂环烷基烷基”是指与烷基部分结合的杂环烷基部分。0037除非另有陈述，否则术语“药学可接受的盐”是指从药学可接受的无毒的酸或碱包括无机酸和碱以及有机酸和碱制备的盐。合适的药学可接受的碱加成盐包括从铝、钙、锂、镁、钾、钠和锌制备的金属盐或从赖氨酸、N，N二苄基乙二胺、氯普鲁卡因、胆碱、二乙醇胺、乙二胺、葡甲胺N甲基葡糖胺和普鲁卡因制备的有机盐。合适的无毒的酸包括无机酸和有机酸，诸如，乙酸，藻酸，邻氨基苯甲酸，苯磺酸，苯甲酸，樟脑磺酸，柠檬酸，乙磺酸，甲酸，富马酸，糠酸，半乳糖醛酸，葡糖酸，葡糖醛酸，谷氨酸，羟基乙酸，氢溴酸，盐酸，羟乙磺酸，乳酸，马来酸，苹果酸，扁桃酸，甲磺酸，粘酸，硝酸，双。

24、羟萘酸，泛酸，苯乙酸，磷酸，丙酸，水杨酸，硬脂酸，琥珀酸，对氨基苯磺酸，硫酸，酒石酸和对甲苯磺酸。特定的无毒的酸包括盐酸，氢溴酸，磷酸，硫酸和甲磺酸。因此，特定的盐的例子包括盐酸盐和甲磺酸盐。其它是本领域公知的。例如，参见，REMINGTONSPHARMACEUTICALSCIENCES，18THEDMACKPUBLISHING，EASTONPA1990ANDREMINGTONTHESCIENCEANDPRACTICEOFPHARMACY，19THEDMACKPUBLISHING，EASTONPA1995。0038除非另有陈述，否则术语“强力的TPH1抑制剂”是具有小于约10M的TPH1_IC。

25、50的化合物。0039除非另有陈述，否则术语“前体药物”包括本文所公开的化合物的药学可接受的酯，碳酸酯，硫代碳酸酯，N酰基衍生物，N酰基氧基烷基衍生物，叔胺的季铵衍生物，N曼尼希碱，席夫碱，氨基酸缀合物，磷酸酯，金属盐和磺酸酯。前体药物的例子包括这样的化合物，该化合物包括可生物水解的部分例如，可生物水解的酰胺、可生物水解的氨基甲酸酯、可生物水解的碳酸酯、可生物水解的酯、可生物水解的磷酸酯或可生物水解的酰脲类似物。本文所公开的化合物的前体药物可由本领域普通技术人员容易地预见和制备。例如，参见，DESIGNOFPRODRUGS，BUNDGAARD，AED，ELSEVIEW，1985；BUNDGAA。

26、RD，H，“DESIGNANDAPPLICATIONOFPRODRUGS，”ATEXTBOOKOFDRUGDESIGNANDDEVELOPMENT，KROSGAARDLARSENANDHBUNDGAARD，ED，1991，CHAPTER5，P113191；和BUNDGAARD，H，说明书CN101969952A5/67页10ADVANCEDDRUGDELIVERYREVIEW，1992，8，138。0040除非另有陈述，否则化合物的“预防有效量”是指足以预防疾病或病况或与该疾病或病况有关的一种或多种症状或预防其复发的量。预防有效量的化合物是指一定量的治疗剂，其单独或与其它药剂组合，在疾病的预防。

27、中提供防病益处。术语“预防有效量”可包括改善总体防病性或增强其它预防性药剂的预防效力的量。0041除非另有陈述，否则术语“保护基”当用来指经历化学反应的分子的一部分时，是指在该化学反应条件下是非反应性的化学部分，并且其可被除去以提供在那些条件下具有反应性的部分。保护基是本领域公知的。例如，参见，GREENE，TW和WUTS，PGM，PROTECTIVEGROUPSINORGANICSYNTHESIS3RDED，JOHNWILEYSONS1999；LAROCK，RC，COMPREHENSIVEORGANICTRANSFORMATIONS2NDED，JOHNWILEYSONS1999。一些例子包括。

28、苄基，二苯基甲基，三苯甲基，CBZ，BOC，FMOC，甲氧基羰基，乙氧基羰基和邻苯二甲酰亚胺基。0042除非另有陈述，否则术语“拟卤素”是指多原子阴离子，其在酸碱、置换和氧化还原化学方面类似于卤素离子，一般具有低碱度，在原子转移自由基聚合条件下形成自由基。拟卤素的例子包括叠氮化物离子、氰化物CYANIDE、氰酸根CYANATE、硫氰酸根THIOCYANATE、硫代硫酸根THIOSULFATE、磺酸根SULFONATES和磺酰卤化物SULFONYLHALIDES。0043除非另有陈述，否则术语“选择性TPH1抑制剂”是具有的TPH2_IC50是其TPH1_IC50的至少约10倍的化合物。0044。

29、除非另有陈述，否则术语“由5羟色胺介导的副作用”是指可归因于外周5羟色胺5HT水平的增加所引起的副作用。0045除非另有陈述，否则术语化合物的“立体异构体富集的组合物”是指所述化合物及其立体异构体的混合物，该混合物包含的所述化合物多于其立体异构体。例如，S丁2醇的立体异构体富集的组合物包括S丁2醇和R丁2醇以例如约60/40、70/30、80/20、90/10、95/5和98/2的比例存在的混合物。0046除非另有陈述，否则术语“立体异构体混合物”包括外消旋混合物以及立体异构体富集的混合物例如，R/S30/70、35/65、40/60、45/55、55/45、60/40、65/35和70/30。

30、。0047除非另有陈述，否则术语“立体异构纯”是指包含化合物的一种立体异构体并且实质上不含该化合物的其它立体异构体的组合物。例如，具有一个立构中心的化合物的立体异构纯组合物实质上不含该化合物的相对的立体异构体。具有两个立构中心的化合物的立体异构纯组合物实质上不含该化合物的其它的非对映体。典型的立体异构纯化合物包括大于约80重量的化合物的一种立体异构体和小于约20重量的该化合物的其它立体异构体，大于约90重量的化合物的一种立体异构体和小于约10重量的该化合物的其它立体异构体，大于约95重量的化合物的一种立体异构体和小于约5重量的该化合物的其它立体异构体，大于约97重量的化合物的一种立体异构体和小。

31、于约3重量的该化合物的其它立体异构体，大于约99重量的化合物的一种立体异构体和小于约1重量的该化合物的其它立体异构体。0048除非另有陈述，否则术语“被取代的”当用于描述化学结构或部分时，是指该结构或部分的衍生物，其中其一个或多个氢原子被诸如但不限于以下的原子、化学部分或官能说明书CN101969952A6/67页11团取代醇，醛，烷氧基，烷酰基氧基，烷氧基羰基，烯基，烷基例如，甲基，乙基，丙基，叔丁基，炔基，烷基羰基氧基OCO烷基，酰胺CONH烷基或烷基NHCO烷基，脒基CNHNH烷基或CNRNH2，胺伯、仲和叔胺，诸如烷基氨基，芳基氨基，芳基烷基氨基，芳酰基，芳基，芳基氧基，偶氮基，氨基甲。

32、酰基NHCOO烷基或OCONH烷基，甲氨酰例如，CONH2，以及CONH烷基，CONH芳基和CONH芳基烷基，羰基，羧基，羧酸，羧酸酐，羧酸酰氯，氰基，酯，环氧化物，醚例如，甲氧基，乙氧基，胍基，卤代，卤代烷基例如，CCL3，CF3，CCF33，杂烷基，半缩醛，亚胺伯和仲亚胺，异氰酸酯，异硫氰酸酯，酮，腈，硝基，氧即，以提供氧代基团，磷酸二酯，硫化物，磺酰胺基例如，SO2NH2，砜，磺酰基包括烷基磺酰基，芳基磺酰基和芳基烷基磺酰基，亚砜，硫醇例如，巯基，硫醚和脲NHCONH烷基。0049除非另有陈述，否则化合物的“治疗有效量”是指足以在治疗或处置疾病或病况中提供治疗益处或足以延迟与疾病或病况有。

33、关的一种或多种症状或使与疾病或病况有关的一种或多种症状最小化的量。治疗有效量的化合物是指一定量的治疗剂，其单独或与其它药剂组合，在疾病或病况的治疗或处置中提供治疗益处。术语“治疗有效量”可涵盖改善总体治疗性、减少或避免疾病或病况的症状或病因、或增强其它治疗剂的治疗效力的量。0050除非另有陈述，否则术语“TPH1_IC50”是使用下文实施例中描述的体外抑制试验测定的化合物对TPH1的IC50。0051除非另有陈述，否则术语“TPH2_IC50”是使用下文实施例中描述的体外抑制试验测定的化合物对TPH2的IC50。0052除非另有陈述，否则术语“治疗”涵盖了在患者罹患所述疾病或病症的同时起作用，。

34、其减少了疾病或病症或其一种或多种症状的严重程度，或阻止或减缓疾病或病症的进展。0053除非另有陈述，否则术语“包括”与“包括”具有相同的含义并且术语“包括”与“包括但不限于”具有相同的含义。类似地，术语“诸如”与“诸如但不限于”具有相同的含义。0054除非另有陈述，否则紧跟在一系列名词前面的一个或多个修饰词被认为适用于每个名词。例如，措辞“任选被取代的烷基、芳基或杂芳基”与“任选被取代的烷基、任选被取代的芳基或任选被取代的杂芳基”具有相同的含义。0055注意到，构成更大化合物的一部分的化学部分在本文中可使用当该化合物部分作为单个分子存在时一般使用的名称或作为基团存在时一般使用的名称。例如，术语。

35、“吡啶”和“吡啶基”当用于描述与其它化学部分结合的部分时具有相同含义。因此，两个措辞“XOH，其中X是吡啶基”和“XOH，其中X是吡啶”以相同含义被使用，并且包括化合物吡啶2醇、吡啶3醇和吡啶4醇。0056也应注意，如果结构或结构的一部分的立体化学未用例如粗体或虚线表示时，该结构或该结构的一部分被理解为涵盖它们的所有的立体异构体。类似地，未具体说明具有一个或多个手性中心的化合物的手性中心的立体化学的化合物命名涵盖了纯的立体异构体及其混合物。另外，在图中显示的具有不饱和化合价的任何原子被假设为连接有足够的氢原子以满足化合价的要求。另外，用与一个虚线平行的一个实线表示的化学键涵盖了单键和双键例如，。

36、芳香，如果化合价允许的话。005752化合物说明书CN101969952A7/67页120058本发明的具体实施方案采用了能够抑制色氨酸羟化酶TPH的化合物。优选化合物是强力的TPH1抑制剂。强力TPH1抑制剂的例子公开在美国专利申请公报NO20070191370中。0059具体的实施方案采用了式I化合物及其药学可接受的盐00600061其中A是任选被取代的杂环基、芳基或杂环；X是键，O，S，CO，CR4，CR4，CR3R4，CR4CR4，CC，NR5，NR5CONR5，CR3R4NR5，NR5CR3R4，ONCR3，CR3NO，CR3R4O，OCR3R4，SO2，SO2NR5，NR5SO2，。

37、CR3R4SO2或SO2CR3R4；D是任选被取代的芳基或杂环；R1是氢或任选被取代的烷基、烷基芳基、烷基杂环、芳基或杂环；R2是氢或任选被取代的烷基、烷基芳基、烷基杂环、芳基或杂环；R3是氢，烷氧基，氨基，氰基，卤素，羟基，或任选被取代的烷基；R4是氢，烷氧基，氨基，氰基，卤素，羟基，或任选被取代的烷基或芳基；每个R5独立地是氢或任选被取代的烷基或芳基；以及N是03。0062具体化合物由式IA及其药学可接受的盐表示00630064其它化合物由式II及其药学可接受的盐表示00650066其中A是任选被取代的杂环基、芳基或杂环；X是键，O，S，CO，CR4，CR4，CR3R4，CR4CR4，CC。

38、，NR5，NR5CONR5，CR3R4NR5，NR5CR3R4，ONCR3，CR3NO，CR3R4O，OCR3R4，SO2，SO2NR5，NR5SO2，CR3R4SO2或SO2CR3R4；D是任选被取代的芳基或杂环；E是任选被取代的芳基或杂环；R1是氢或任选被取代的烷基、烷基芳基、烷基杂环、芳基或杂环；R2是氢或任选被取代的烷基、烷基芳基、烷基杂环、芳基或杂环；R3是氢，烷氧基，氨基，氰基，卤素，羟基，或任选被取代的烷基；R4是氢，烷氧基，氨基，氰基，卤素，羟基，或任说明书CN101969952A8/67页13选被取代的烷基或芳基；R5是氢或任选被取代的烷基或芳基；以及N是03。0067具体化。

39、合物由式IIA表示00680069关于本文所公开的式子例如，I，IA，II和IIA，具体化合物包括其中A是任选被取代的环烷基例如，6元和5元的那些。在一些化合物中，A是任选被取代的芳基例如，苯基或萘基。在其它化合物中，A是任选被取代的杂环例如，6元和5元。6元杂环的例子包括吡啶、哒嗪、嘧啶、吡嗪和三嗪。5元杂环的例子包括吡咯、咪唑、三唑、噻唑、噻吩和呋喃。在一些化合物中，A是芳香性的。在其它化合物中，A不是芳香性的。在一些化合物中。A是任选被取代的双环部分例如，吲哚、异吲哚、吡咯并吡啶或萘。0070具体化合物由下式表示00710072其中A1和A2各自独立地是单环的、任选被取代的环烷基、芳基或。

40、杂环。由该式所涵盖的化合物包括其中A1和/或A2是任选被取代的环烷基例如，6元和5元的那些。在一些化合物中，A1和/或A2是任选被取代的芳基例如，苯基或萘基。在其它化合物中，A1和/或A2是任选被取代的杂环例如，6元和5元。6元杂环的例子包括吡啶、哒嗪、嘧啶、吡嗪和三嗪。5元杂环的例子包括吡咯、咪唑、三唑、噻唑、噻吩和呋喃。在一些化合物中，A1和/或A2是芳香性的。在其它化合物中，A1和/或A2不是芳香性的。0073关于本文所公开的式子，具体化合物包括其中D是任选被取代的芳基例如，苯基或萘基的那些。在其它化合物中，D是任选被取代的杂环例如，6元和5元。6元杂环的例子包括吡啶、哒嗪、嘧啶、吡嗪和。

41、三嗪。5元杂环的例子包括吡咯、咪唑、三唑、噻唑、噻吩和呋喃。在一些化合物中，D是芳香性的。在其它化合物中，D不是芳香性的。在一些化合物中，D是任选被取代的双环部分例如，吲哚、异吲哚、吡咯并吡啶或萘。0074关于本文所公开的式子，具体化合物包括其中E是任选被取代的芳基例如，苯基或萘基的那些。在其它化合物中，E是任选被取代的杂环例如，6元和5元。6元杂环的例子包括吡啶、哒嗪、嘧啶、吡嗪和三嗪。5元杂环的例子包括吡咯、咪唑、三唑、噻唑、噻吩和呋喃。在一些化合物中，E是芳香性的。在其它化合物中，E不是芳香性的。在一些化合物中，E是任选被取代的双环部分例如，吲哚、异吲哚、吡咯并吡啶或萘。0075关于本文。

42、所公开的式子，具体化合物包括其中R1是氢或任选被取代的烷基的那些。0076在一些化合物中，R2是氢或任选被取代的烷基。说明书CN101969952A9/67页140077在一些化合物中，N是1或2。0078在一些化合物中，X是键或S。在其它化合物中，X是CR4，CR4，CR3R4，CR4CR4或CC，并且，例如，R4独立地是氢或任选被取代的烷基。在其它化合物中，X是O，CR3R4O或OCR3R4，并且，例如，R3是氢或任选被取代的烷基，以及R4是氢或任选被取代的烷基。在一些化合物中，R3是氢以及R4是三氟甲基。在一些化合物中，X是SO2，SO2NR5，NR5SO2，CR3R4SO2或SO2CR。

43、3R4，并且，例如，R3是氢或任选被取代的烷基，R4是氢或任选被取代的烷基，以及R5是氢或任选被取代的烷基。在其它化合物中，X是NR5，NR5CONR5，CR3R4NR5或NR5CR3R4，并且，例如，R3是氢或任选被取代的烷基，R4是氢或任选被取代的烷基，以及每个R5独立地是氢或任选被取代的烷基。0079其它化合物由下式表示00800081其中，例如，R3是三氟甲基。其它化合物由下式所涵盖00820083其中，例如，R3是氢。0084一些化合物由下式所涵盖00850086其中Z1，Z2，Z3和Z4各自独立地是N或CR6；每个R6独立地是氢，氰基，卤素，OR7，NR8R9，氨基，羟基，或任选被。

44、取代的烷基、烷基芳基或烷基杂环；每个R7独立地是氢或任选被取代的烷基、烷基芳基或烷基杂环；每个R8独立地是氢或任选被取代的烷基、烷说明书CN101969952A10/67页15基芳基或烷基杂环；每个R9独立地是氢或任选被取代的烷基、烷基芳基或烷基杂环；以及M是14。一些的这种化合物由下式表示00870088其它化合物由下式表示00890090其中，例如，R3是三氟甲基。其它化合物由下式表示00910092其中，例如，R3是氢。0093关于上述的各种式子，一些化合物为使得所有的Z1、Z2、Z3和Z4是N。在其它化合物中，Z1、Z2、Z3和Z4中只有三个是N。在其它化合物中，Z1、Z2、Z3和Z4。

45、只有两个是N。在其它化合物中，Z1、Z2、Z3和Z4中只有一个是N。在其它化合物中，Z1、Z2、Z3和Z4都不是N。0094一些化合物由下式表示0095说明书CN101969952A11/67页160096其中其中Z1、Z2和Z3各自独立地是N，NH，S，O或CR6；每个R6独立地是氨基，氰基，卤素，氢，OR7，SR7，NR8R9，或任选被取代的烷基、烷基芳基或烷基杂环；每个R7独立地是氢或任选被取代的烷基、烷基芳基或烷基杂环；每个R8独立地是氢或任选被取代的烷基、烷基芳基或烷基杂环；每个R9独立地是氢或任选被取代的烷基、烷基芳基或烷基杂环；以及P是13。一些的这种化合物由下式表示009700。

46、98其它化合物由下式表示00990100其中，例如，R3是三氟甲基。其它化合物由下式表示0101说明书CN101969952A12/67页170102其中，例如，R3是氢。0103关于上述的各种式子，一些化合物为使得所有的Z1、Z2和Z3是N或NH。在其它化合物中，Z1、Z2和Z3中只有两个是N或NH。在其它化合物中，Z1、Z2和Z3中只有一个是N或NH。在其它化合物中，Z1、Z2和Z3都不是N或NH。0104一些化合物由下式所涵盖01050106其中Z1、Z2、Z3和Z4各自独立地是N或CR10；每个R10独立地是氨基，氰基，卤素，氢，OR11，SR11，NR12R13，或任选被取代的烷基、。

47、烷基芳基或烷基杂环；每个R11独立地是氢或任选被取代的烷基、烷基芳基或烷基杂环；每个R12独立地是氢或任选被取代的烷基、烷基芳基或烷基杂环；和每个R13独立地是氢或任选被取代的烷基、烷基芳基或烷基杂环。一些的这种化合物由下式表示01070108其它化合物由下式表示0109说明书CN101969952A13/67页180110其中，例如，R3是三氟甲基。其它化合物由下式表示01110112其中，例如，R3是氢。0113关于上述的各种式子，一些化合物为使得所有的Z1、Z2、Z3和Z4是N。在其它化合物中，Z1、Z2、Z3和Z4中只有三个是N。在其它化合物中，Z1、Z2、Z3和Z4中只有两个是N。在。

48、其它化合物中，Z1、Z2、Z3和Z4中只有一个N。在其它化合物中，Z1、Z2、Z3和Z4都不是N。0114一些化合物由下式表示01150116其中Z1、Z2、Z3和Z4独立地是N或CR10；每个R10独立地是氨基，氰基，卤素，氢，OR11，SR11，NR12R13，或任选被取代的烷基、烷基芳基或烷基杂环；每个R11独立地是氢或任选被取代的烷基、烷基芳基或烷基杂环；每个R12独立地是氢或任选被取代的烷基、烷基芳基或烷基杂环；和每个R13独立地是氢或任选被取代的烷基、烷基芳基或烷基杂环。一些的这种化合物由下式表示0117说明书CN101969952A14/67页190118其它化合物由下式表示01。

49、190120其中，例如，R3是三氟甲基。其它化合物由下式表示01210122其中，例如，R3是氢。0123关于上述的各种式子，一些化合物为使得所有的Z1、Z2、Z3和Z4是N。在其它化合物中，Z1、Z2、Z3和Z4中只有三个是N。在其它化合物中，Z1、Z2、Z3和Z4中只有两个是N。在其它化合物中，Z1、Z2、Z3和Z4中只有一个是N。在其它化合物中，Z1、Z2、Z3和Z4都不是N。0124一些化合物由下式表示0125说明书CN101969952A15/67页200126其取代基如本文所定义。其它化合物由下式表示01270128其取代基如本文所定义。其它化合物由下式表示01290130其取代基如本文所定义。其它化合物由下式表示01310132其取代基如本文所定义。0133关于本文所公开的各种式子，具体化合物包括以下的那些，其中A和E二者都是任选被取代的苯基并且，例如，X是O、CR3R4O或OCR3R4，并且，例如，R3是氢和R4是三氟甲基，并且，例如，N是1。0134本发明涵盖了立体异构纯化合物和它们的立体异构体富集的组合物。立体异构体可通过不对称合成被。

摘要
申请专利号：	CN200880022196.7	申请日：	2008.06.24
公开号：	CN101969952A	公开日：	2011.02.09
当前法律状态：	撤回	有效性：	无权
法律详情：	发明专利申请公布后的视为撤回IPC(主分类):A61K 31/505申请公布日:20110209\|\|\|实质审查的生效IPC(主分类):A61K 31/505申请日:20080624\|\|\|公开
IPC分类号：	A61K31/505; A61K45/06; A61P25/00	主分类号：	A61K31/505
申请人：	莱西肯医药有限公司
发明人：	菲利普·曼顿·布朗; 刘清云
地址：	美国得克萨斯州
优先权：	2007.06.26 US 60/946,274
专利代理机构：	中原信达知识产权代理有限责任公司 11219	代理人：	刘慧;杨青
PDF完整版下载：	PDF下载

内容摘要

本发明提供了包含色氨酸羟化酶抑制剂的方法和组合物。具体方法涉及减少或避免与一些药物有关的由5-羟色胺介导的副作用。

权利要求书

1：药物组合物，其包含第一活性药物成分和第二活性药物成分，其中第一活性药物成分与由 5- 羟色胺介导的副作用有关以及第二活性药物成分是色氨酸羟化酶抑制剂。
2：权利要求 1 的组合物，其中第一活性药物成分是单胺氧化酶抑制剂。
3：权利要求 1 的组合物，其中第一活性药物成分是选择性 5- 羟色胺再摄取抑制剂。
4：权利要求 1 的组合物，其中第一活性药物成分是曲坦类。
5：权利要求 2 的组合物，其中单胺氧化酶抑制剂是溴法罗明，右芬氟拉明，异康唑，异烟肼，异丙烟肼，芬氟拉明，吗氯贝胺，苯乙肼，伪麻黄碱，司来吉兰，托洛沙酮，或反苯环丙胺，或其药学可接受的盐，或其药理学活性的立体异构体或代谢物。
6：权利要求 3 的组合物，其中选择性 5- 羟色胺再摄取抑制剂是阿米替林，西酞普兰，多塞平，氟西汀，氟伏沙明，丙米嗪，去甲氟西汀，帕罗西汀，舍曲林，文拉法辛或苯吡烯胺，或其药学可接受的盐，或其药理学活性的立体异构体或代谢物。
7：权利要求 4 的组合物，其中曲坦类是那拉曲坦，利扎曲普坦，舒马普坦或佐米曲普坦，或其药学可接受的盐，或其药理学活性的立体异构体或代谢物。
8：权利要求 1 的组合物，其中色氨酸羟化酶抑制剂是强力的 TPH1 抑制剂。
9：权利要求 8 的组合物，其中强力的 TPH1 抑制剂由下式 I 或其药学可接受的盐表示：其中： A 是任选被取代的杂环基、芳基或杂环； X 是键，- O - ，- S - ，- C ( O ) - ，- C ( R 4 ) ＝，＝ C ( R 4 ) - ，- C ( R 3 R 4 ) - ，- C ( R 4 ) ＝ C ( R 4 ) - ，- C ≡ C - ，- N ( R 5 ) - ，- N ( R 5 ) C ( O ) N ( R 5 ) - ，- C ( R 3 R 4 ) N ( R 5 ) - ，- N ( R 5 ) C(R3R4)-， -ONC(R3)-， -C(R3)NO-， -C(R3R4)O-， -OC(R3R4)-， -S(O2)-， -S(O2)N(R5)-， -N(R5) S(O2)-， -C(R3R4)S(O2)- 或 -S(O2)C(R3R4)- ； D 是任选被取代的芳基或杂环； R1 是氢或任选被取代的烷基、烷基 - 芳基、烷基 - 杂环、芳基或杂环； R2 是氢或任选被取代的烷基、烷基 - 芳基、烷基 - 杂环、芳基或杂环；烷氧基，氨基，氰基，卤素，羟基，或任选被取代的烷基； R3 是氢， R4 是氢，烷氧基，氨基，氰基，卤素，羟基，或任选被取代的烷基或芳基；每个 R5 独立地是氢或任选被取代的烷基或芳基；和 n 是 0-3。
10：权利要求 9 的方法，其中强力的 TPH1 抑制剂由下式表示：其中 E 是任选被取代的芳基或杂环。 2
11：权利要求 10 的方法，其中强力的 TPH1 抑制剂由下式表示：其中 A1 和 A2 各自独立地是单环的、任选被取代的环烷基、芳基或杂环。
12：权利要求 9 的方法，其中强力的 TPH1 抑制剂由下式表示：
13：权利要求 9 的方法，其中强力的 TPH1 抑制剂由下式表示：其中： Z″ 1、 Z″ 2、 Z″ 3 和 Z″ 4 各自独立地是 N 或 CR10 ；每个 R10 独立地是氨基，氰基，卤素，氢， OR11， SR11， NR12R13，或任选被取代的烷基、烷基 - 芳基或烷基 - 杂环；每个 R11 独立地是氢或任选被取代的烷基、烷基 - 芳基或烷基 - 杂环；每个 R12 独立地是氢或任选被取代的烷基、烷基 - 芳基或烷基 - 杂环；和每个 R13 独立地是氢或任选被取代的烷基、烷基 - 芳基或烷基 - 杂环。
14：权利要求 13 的方法，其中强力的 TPH1 抑制剂由下式表示： 3
15：权利要求 1 的组合物，其中色氨酸羟化酶抑制剂是下式的化合物或其药学可接受的盐；其中： A 是任选被取代的杂环基、芳基或杂环； X 是键，- O - ，- S - ，- C ( O ) - ，- C ( R 4 ) ＝，＝ C ( R 4 ) - ，- C ( R 3 R 4 ) - ，- C ( R 4 ) ＝ C ( R 4 ) - ，- C ≡ C - ，- N ( R 5 ) - ，- N ( R 5 ) C ( O ) N ( R 5 ) - ，- C ( R 3 R 4 ) N ( R 5 ) - ，- N ( R 5 ) C(R3R4)-， -ONC(R3)-， -C(R3)NO-， -C(R3R4)O-， -OC(R3R4)-， -S(O2)-， -S(O2)N(R5)-， -N(R5) S(O2)-， -C(R3R4)S(O2)- 或 --S(O2)C(R3R4)- ； E 是任选被取代的芳基或杂环； R1 是氢或任选被取代的烷基、烷基 - 芳基、烷基 - 杂环、芳基或杂环； R2 是氢或任选被取代的烷基、烷基 - 芳基、烷基 - 杂环、芳基或杂环； R3 是氢，烷氧基，氨基，氰基，卤素，羟基，或任选被取代的烷基； R4 是氢，烷氧基，氨基，氰基，卤素，羟基，或任选被取代的烷基或芳基；每个 R5 独立地是氢或任选被取代的烷基或芳基；和每个 R10 独立地是氨基，氰基，卤素，氢， OR11， SR11， NR12R13，或任选被取代的烷基、烷基 - 芳基或烷基 - 杂环；烷基 - 芳基或烷基 - 杂环；每个 R11 独立地是氢或任选被取代的烷基、每个 R12 独立地是氢或任选被取代的烷基、烷基 - 芳基或烷基 - 杂环；每个 R13 独立地是氢或任选被取代的烷基、烷基 - 芳基或烷基 - 杂环； n 是 0-3 ；和 q 是 1-2。
16：权利要求 15 的组合物，其中 E 是芳基。
17：权利要求 15 的组合物，其中 X 是 -O-、 -C(R3R4)O- 或 -OC(R3R4)-。
18：权利要求 16 的组合物，其中 R3 是氢或任选被取代的烷基，以及 R4 是氢或任选被取代的烷基。 4
19：权利要求 16 的组合物，其中 R3 是氢以及 R4 是三氟甲基。
20：权利要求 15 的组合物，其中 n 是 1。
21：权利要求 15 的组合物，其中 q 是 1。

说明书

包含色氨酸羟化酶抑制剂的组合物
     本专利申请要求被并入本文作为参考的 2007 年 6 月 26 日提交的美国临时专利申请 No.60/946,246 的优先权。1. 技术领域
     本发明涉及包含色氨酸羟化酶抑制剂的组合物及其用法。 2. 背景技术
     神经递质 5- 羟色胺 [5- 羟色胺 (5-HT)] 参与了情绪控制和调节睡眠、焦虑、酗酒、药物滥用、进食和性行为的多个中枢神经方面。其还参予调节血管紧张度、内脏运动性和由细胞介导的免疫应答。Walther， D.J. 等人， Science 299 ： 76(2003)。5- 羟色胺还在凝血和止血中起作用：血小板，其自身不能制造 5- 羟色胺，接受大量的外周 5-HT。Goodman &Gilman’ s The Pharmacological Basis of Therapeutics， 10thed.， p.274-5(McGraw-Hill， 2001)。 5- 羟色胺从氨基酸色氨酸分两步被合成。Goodman & Gilman’ s， p.270。第一步是限速步骤，并由酶色氨酸羟化酶 (TPH) 进行催化，该酶具有两个已知的同工型： TPH1( 其在外周表达 ) 和 TPH2( 其主要在脑中表达 )。Walther，同上。5- 羟色胺从体内被除去的基本途径牵涉酶单胺氧化酶 (MAO)，其将所述化合物转化为 5- 羟基吲哚乙醛，该物质然后通过酶醛脱氢酶被转化为 5- 羟吲哚乙酸 (5-HIAA)。Goodman &Gilman’ s， p.270-2。
     已经报道了具有 tph1 基因遗传缺陷的小鼠 (“敲除小鼠” )。在一个案例中，该小鼠据报道在经典的 5- 羟色胺脑区域中表达正常量的 5- 羟色胺，但是在外周大量缺乏 5- 羟色胺。 Walther，同上。在另一个案例中，敲除小鼠表现出异常心搏动，这归于缺乏外周 5- 羟
     色胺。F. 等人， PNAS 100(23) ： 13525-13530(2003)。在旨在了解酶在特发性肺动脉高压中的作用而进行的研究中，发现 tph1 敲除小鼠对缺氧影响的应答与野生型小鼠不同。 Morecroft， I. 等人， Hypertension 49 ： 232-236(2007)。
     影响 5- 羟色胺水平的药物诸如 MAO 抑制剂和选择性 5- 羟色胺再摄取抑制剂 (SSRI)- 其可抑制血小板接受 5-HT 的能力 - 通常伴有副作用。特别严重的例子是与服用芬氟拉明和芬特明的药物组合 ( 被称为 “fen-phen” ) 有关的心脏毒性，其被认为由对身体控制血液 5- 羟色胺水平的能力的组合影响所引起。MIT News Office， “Outdates[sic] labelmay have led to toxic combination of ‘fen-phen’ ” http://web.mit.edu/ newsoffice/1998/fenphen-0902.html(1998).
     只是在最近才公开了被开发用于安全和有效地抑制 TPH1 的化合物。参见美国专利申请公开 No.2007-0191370。这些化合物提供了治疗、处置和预防各种疾病和病症的全新手段。
     3. 发明概述
     本发明部分地涉及减少和 / 或减轻与给药一种或多种药物有关的、由 5- 羟色胺介导的副作用的方法。具体方法包括抑制色氨酸羟化酶 (TPH)。本发明还涵盖了包含两种活性药物成分的组合物，其中一种活性药物成分是 TPH 抑制剂且另一种活性药物成分是可引起由 5- 羟色胺介导的副作用的药物。
     具体 TPH 抑制剂由下式 I 及其药学可接受的盐表示：
     其中： A 是任选被取代的杂环基、芳基或杂环； X 是键 ( 即， A直接与 D 结合 ) ，-O- ，-S- ，-C(O)- ，-C(R 4 ) ＝，＝ C(R 4 )- ，-C(R 3 R 4 )- ，-C(R 4 ) ＝ C ( R 4 ) - ，- C ≡ C - ，- N ( R 5 ) - ，- N ( R 5 ) C ( O ) N ( R 5 ) - ，- C ( R 3 R 4 ) N ( R 5 ) - ，- N ( R 5 ) C(R3R4)-， -ONC(R3)-， -C(R3)NO-， -C(R3R4)O-， -OC(R3R4)-， -S(O2)-， -S(O2)N(R5)-， -N(R5) S(O2)-， -C(R3R4)S(O2)- 或 -S(O2)C(R3R4)- ； D 是任选被取代的芳基或杂环； R1 是氢或任选被取代的烷基、烷基 - 芳基、烷基 - 杂环、芳基或杂环； R2 是氢或任选被取代的烷基、烷基 - 芳
     基、烷基 - 杂环、芳基或杂环； R3 是氢，烷氧基，氨基，氰基，卤素，羟基，或任选被取代的烷基； R4 是氢，烷氧基，氨基，氰基，卤素，羟基，或任选被取代的烷基或芳基；每个 R5 独立地是氢或任选被取代的烷基或芳基；以及 n 是 0-3。 4. 附图说明
     本发明的方面可参见附图得以了解。图 1 显示了本发明的强力 TPH1 抑制剂在口服给药后在小鼠胃肠道和脑中的效果。所有数据以对照 ( 给予媒介物的 ) 组的平均数的百分数表示。误差线是 S.E.M。每组 N ＝ 5。符号是 *， p ＜ 0.05，相对于对照组。对于脑数据， p ＝ 0.5，单因素 ANOVA。
     5. 发明详述
     单胺氧化酶 (MAO) 抑制剂和选择性 5- 羟色胺再摄取抑制剂 (SSRI) 以可引起多种副作用的方式影响外周 5- 羟色胺的代谢和去向。其它的可影响 5- 羟色胺途径的药物诸如曲坦类也可引起由 5- 羟色胺介导的副作用。本发明的方法和组合物使得可减少和 / 或改善与 5- 羟色胺相关的副作用。
     本发明部分地基于以下发现：在小鼠中敲除 tph1 基因显著降低胃肠道 (GI) 的 5- 羟色胺水平，但是只引起很少的 ( 如果有的话 ) 对中枢神经系统 (CNS) 的可测量影响。本发明还基于发现抑制 TPH( 例如 TPH1) 的化合物。
     5.1 定义
     除非另有陈述，否则术语 “烯基” 是指含 2-20 个 ( 例如 2-10 个或 2-6 个 ) 碳原子并包括至少一个碳 - 碳双键的直链、支链和 / 或环状烃。代表性烯基部分包括乙烯基，烯丙基， 1- 丁烯基， 2- 丁烯基，异丁烯基， 1- 戊烯基， 2- 戊烯基， 3- 甲基 -1- 丁烯基， 2- 甲基 -2- 丁烯基， 2， 3- 二甲基 -2- 丁烯基， 1- 己烯基， 2- 己烯基， 3- 己烯基， 1- 庚烯基， 2- 庚烯基， 3- 庚烯基， 1- 辛烯基， 2- 辛烯基， 3- 辛烯基， 1- 壬烯基， 2- 壬烯基， 3- 壬烯基， 1- 癸烯基， 2- 癸烯基和 3- 癸烯基。除非另有陈述，否则术语 “烷基” 是指含 1-20 个 ( 例如 1-10 个或 1-4 个 ) 碳原子的直链、支链和 / 或环状 (“环烷基” ) 烃。含 1-4 个碳的烷基部分被称为 “低级烷基” 。烷基的例子包括甲基，乙基，丙基，异丙基，正丁基，叔丁基，异丁基，戊基，己基，异己基，庚基， 4， 4- 二甲基戊基，辛基， 2， 2， 4- 三甲基戊基，壬基，癸基，十一烷基和十二烷基。环烷基部分可为单环或多环的，并且例子包括环丙基，环丁基，环戊基，环己基和金刚烷基。烷基部分的另外的例子具有直链、支链和 / 或环状部分 ( 例如， 1- 乙基 -4- 甲基 - 环己基 )。术语 “烷基” 包括饱和烃类以及烯基和炔基部分。
     除非另有陈述，否则术语 “烷氧基” 是指 -O- 烷基。烷氧基的例子包括 -OCH3， -OCH -O(CH2)2CH3， -O(CH2)3CH3， -O(CH2)4CH3 和 -O(CH2)5CH3。 2CH3，
     除非另有陈述，否则术语 “烷基芳基” 或 “烷基 - 芳基” 是指与芳基部分结合的烷基部分。
     除非另有陈述，否则术语 “烷基杂芳基” 或 “烷基 - 杂芳基” 是指与杂芳基部分结合的烷基部分。
     除非另有陈述，否则术语 “烷基杂环” 或 “烷基 - 杂环” 是指与杂环部分结合的烷基部分。除非另有陈述，否则术语 “炔基” 是指含 2-20 个 ( 例如 2-20 个或 2-6 个 ) 碳原子并含有至少一个碳 - 碳三键的直链、支链或环状烃。代表性的炔基部分包括乙炔基，丙炔基， 1- 丁炔基， 2- 丁炔基， 1- 戊炔基， 2- 戊炔基， 3- 甲基 -1- 丁炔基， 4- 戊炔基， 1- 己炔基， 2- 己炔基， 5- 己炔基， 1- 庚炔基， 2- 庚炔基， 6- 庚炔基， 1- 辛炔基， 2- 辛炔基， 7- 辛炔基， 1- 壬炔基， 2- 壬炔基， 8- 壬炔基， 1- 癸炔基， 2- 癸炔基和 9- 癸炔基。
     除非另有陈述，否则术语 “芳基” 是指由碳原子和氢原子组成的芳香性环或芳香性或部分芳香性的环体系。芳基部分可包括结合或稠合在一起的多个环。芳基部分的例子包括蒽基，奥基，联苯基，芴基，茚满，茚基，萘基，菲基，苯基， 1， 2， 3， 4- 四氢 - 萘和甲苯基。
     除非另有陈述，否则术语 “芳基烷基” 或 “芳基 - 烷基” 是指与烷基部分结合的芳基部分。
     除非另有陈述，否则术语 “可生物水解的酰胺” 、 “可生物水解的酯” 、 “可生物水解的氨基甲酸酯” 、 “可生物水解的碳酸酯” 、 “可生物水解的脲基” 和 “可生物水解的磷酸酯” 分别是指化合物的酰胺、酯、氨基甲酸酯、碳酸酯、脲基或磷酸酯，它们 1) 不妨碍化合物的生物活性，但是可赋予该化合物以有利的体内性质，诸如摄取、作用的持续时间或作用的开始；或者 2) 是生物非活性的但是在体内被转化为生物活性化合物。可生物水解的酯的例子包括低级烷基酯，烷氧基酰基氧基酯，烷基酰基氨基烷基酯和胆碱酯。可生物水解的酰胺的例子包括低级烷基酰胺， α- 氨基酸酰胺，烷氧基酰基酰胺和烷基氨基烷基 - 羰基酰胺。可生物水解的氨基甲酸酯的例子包括低级烷基胺，被取代的乙二胺，氨基酸，羟基烷基胺，杂环和杂芳香胺和聚醚胺。
     除非另有陈述，否则术语 “卤素” 和 “卤代” 包括氟、氯、溴和碘。
     除非另有陈述，否则术语 “杂烷基” 是指烷基部分 ( 例如，直链、支链或环状 )，其中其碳原子中的至少一个被杂原子 ( 例如， N、 O 或 S) 所置换。
     除非另有陈述，否则术语 “杂芳基”是指其中其碳原子中的至少一个被杂原子 ( 例如， N、 O 或 S) 所置换的芳基部分。例子包括吖啶基，苯并咪唑基，苯并呋喃基，苯并异
     噻唑基，苯并异噁唑基，苯并喹唑啉基，苯并噻唑基，苯并噁唑基，呋喃基，咪唑基，吲哚基，异噻唑基，异噁唑基，噁二唑基，噁唑基，酞嗪基，吡嗪基，吡唑基，哒嗪基，吡啶基，嘧啶基 (pyrimidinyl)，嘧啶基 (pyrimidyl)，吡咯基，喹唑啉基，喹啉基，四唑基，噻唑基和三嗪基。
     除非另有陈述，否则术语 “杂芳基烷基” 或 “杂芳基 - 烷基” 是指与烷基部分结合的杂芳基部分。
     除非另有陈述，否则术语 “杂环” 是指由碳原子、氢原子和至少一个杂原子 ( 例如， N、 O 或 S) 组成的芳香性、部分芳香性或非芳香性的单环或多环的环或环体系。杂环可包括稠合或结合在一起的多个 ( 即，两个或更多个 ) 环。杂环包括杂芳基。例子包括苯并 [1， 3] 二氧杂环戊烯基， 2， 3- 二氢 - 苯并 [1， 4] 二氧杂芑基，噌啉基，呋喃基，乙内酰脲基，吗啉基，氧杂环丁基，氧杂环丙基，哌嗪基，哌啶基，吡咯烷酮基，吡咯烷基，四氢呋喃基，四氢吡喃基，四氢吡啶基，四氢嘧啶基，四氢噻吩基，四氢噻喃基和戊内酰胺基。
     除非另有陈述，否则术语 “杂环基烷基” 或 “杂环 - 烷基” 是指与烷基部分结合的杂环部分。
     除非另有陈述，否则术语 “杂环烷基” 是指非芳香性的杂环。
     除非另有陈述，否则术语 “杂环烷基烷基” 或 “杂环烷基 - 烷基” 是指与烷基部分结合的杂环烷基部分。
     除非另有陈述，否则术语 “药学可接受的盐” 是指从药学可接受的无毒的酸或碱 ( 包括无机酸和碱以及有机酸和碱 ) 制备的盐。合适的药学可接受的碱加成盐包括从铝、钙、锂、镁、钾、钠和锌制备的金属盐或从赖氨酸、 N， N′ - 二苄基乙二胺、氯普鲁卡因、胆碱、二乙醇胺、乙二胺、葡甲胺 (N- 甲基葡糖胺 ) 和普鲁卡因制备的有机盐。合适的无毒的酸包括无机酸和有机酸，诸如，乙酸，藻酸，邻氨基苯甲酸，苯磺酸，苯甲酸，樟脑磺酸，柠檬酸，乙磺酸，甲酸，富马酸，糠酸，半乳糖醛酸，葡糖酸，葡糖醛酸，谷氨酸，羟基乙酸，氢溴酸，盐酸，羟乙磺酸，乳酸，马来酸，苹果酸，扁桃酸，甲磺酸，粘酸，硝酸，双羟萘酸，泛酸，苯乙酸，磷酸，丙酸，水杨酸，硬脂酸，琥珀酸，对氨基苯磺酸，硫酸，酒石酸和对甲苯磺酸。特定的无毒的酸包括盐酸，氢溴酸，磷酸，硫酸和甲磺酸。因此，特定的盐的例子包括盐酸盐和甲磺酸盐。其它是本领域公知的。例如，参见， Remington ′ sPharmaceutical Sciences， th 18 ed.(Mack Publishing， Easton PA ： 1990)andRemington ： The Science and Practice of th Pharmacy， 19 ed.(MackPublishing， Easton PA ： 1995)。
     除非另有陈述，否则术语 “强力的 TPH1 抑制剂” 是具有小于约 10μM 的 TPH1_IC50 的化合物。
     除非另有陈述，否则术语 “前体药物”包括本文所公开的化合物的药学可接受的酯，碳酸酯，硫代碳酸酯， N- 酰基衍生物， N- 酰基氧基烷基衍生物，叔胺的季铵衍生物， N- 曼尼希碱，席夫碱，氨基酸缀合物，磷酸酯，金属盐和磺酸酯。前体药物的例子包括这样的化合物，该化合物包括可生物水解的部分 ( 例如，可生物水解的酰胺、可生物水解的氨基甲酸酯、可生物水解的碳酸酯、可生物水解的酯、可生物水解的磷酸酯或可生物水解的酰脲类似物 )。本文所公开的化合物的前体药物可由本领域普通技术人员容易地预见和制备。例如，参见， Designof Prodrugs， Bundgaard， A.Ed.， Elseview， 1985 ； Bundgaard， H.， “Designand Application of Prodrugs， ” A Textbook of Drug Design andDevelopment， Krosgaard-Larsen and H.Bundgaard， Ed.， 1991， Chapter 5， p.113-191 ；和 Bundgaard， H.，Advanced Drug Delivery Review， 1992， 8， 1-38。
     除非另有陈述，否则化合物的 “预防有效量” 是指足以预防疾病或病况或与该疾病或病况有关的一种或多种症状或预防其复发的量。预防有效量的化合物是指一定量的治疗剂，其单独或与其它药剂组合，在疾病的预防中提供防病益处。术语 “预防有效量” 可包括改善总体防病性或增强其它预防性药剂的预防效力的量。
     除非另有陈述，否则术语 “保护基” 当用来指经历化学反应的分子的一部分时，是指在该化学反应条件下是非反应性的化学部分，并且其可被除去以提供在那些条件下具有反应性的部分。保护基是本领域公知的。例如，参见， Greene， T.W. 和 Wuts， P.G.M.， rd Protective groups inOrganic Synthesis(3 ed.， John Wiley & Sons ： 1999) ； Larock， nd R.C.， Comprehensive Organic Transformations(2 ed.， John Wiley & Sons ： 1999)。一些例子包括苄基，二苯基甲基，三苯甲基， Cbz， Boc， Fmoc，甲氧基羰基，乙氧基羰基和邻苯二甲酰亚胺基。
     除非另有陈述，否则术语 “拟卤素”是指多原子阴离子，其在酸 - 碱、置换和氧化还原化学方面类似于卤素离子，一般具有低碱度，在原子转移自由基聚合条件下形成自由基。拟卤素的例子包括叠氮化物离子、氰化物 (cyanide)、氰酸根 (cyanate)、硫氰酸根 (thiocyanate)、硫代硫酸根 (thiosulfate)、磺酸根 (sulfonates) 和磺酰卤化物 (sulfonyl halides)。除非另有陈述，否则术语 “选择性 TPH1 抑制剂” 是具有的 TPH2_IC50 是其 TPH1_IC50 的至少约 10 倍的化合物。
     除非另有陈述，否则术语 “由 5- 羟色胺介导的副作用” 是指可归因于外周 5- 羟色胺 (5-HT) 水平的增加所引起的副作用。
     除非另有陈述，否则术语化合物的 “立体异构体富集的组合物”是指所述化合物及其立体异构体的混合物，该混合物包含的所述化合物多于其立体异构体。例如， (S)- 丁 -2- 醇的立体异构体富集的组合物包括 (S)- 丁 -2- 醇和 (R)- 丁 -2- 醇以例如约 60/40、 70/30、 80/20、 90/10、 95/5 和 98/2 的比例存在的混合物。
     除非另有陈述，否则术语 “立体异构体混合物” 包括外消旋混合物以及立体异构体富集的混合物 ( 例如， R/S ＝ 30/70、 35/65、 40/60、 45/55、 55/45、 60/40、 65/35 和 70/30)。
     除非另有陈述，否则术语 “立体异构纯” 是指包含化合物的一种立体异构体并且实质上不含该化合物的其它立体异构体的组合物。例如，具有一个立构中心的化合物的立体异构纯组合物实质上不含该化合物的相对的立体异构体。具有两个立构中心的化合物的立体异构纯组合物实质上不含该化合物的其它的非对映体。典型的立体异构纯化合物包括大于约 80 重量％的化合物的一种立体异构体和小于约 20 重量％的该化合物的其它立体异构体，大于约 90 重量％的化合物的一种立体异构体和小于约 10 重量％的该化合物的其它立体异构体，大于约 95 重量％的化合物的一种立体异构体和小于约 5 重量％的该化合物的其它立体异构体，大于约 97 重量％的化合物的一种立体异构体和小于约 3 重量％的该化合物的其它立体异构体，大于约 99 重量％的化合物的一种立体异构体和小于约 1 重量％的该化合物的其它立体异构体。
     除非另有陈述，否则术语 “被取代的” 当用于描述化学结构或部分时，是指该结构或部分的衍生物，其中其一个或多个氢原子被诸如但不限于以下的原子、化学部分或官能
     团取代：醇，醛，烷氧基，烷酰基氧基，烷氧基羰基，烯基，烷基 ( 例如，甲基，乙基，丙基，叔丁基 )，炔基，烷基羰基氧基 (-OC(O) 烷基 )，酰胺 (-C(O)NH- 烷基 - 或 - 烷基 NHC(O) 烷基 )，脒基 (-C(NH)NH- 烷基或 -C(NR)NH2)，胺 ( 伯、仲和叔胺，诸如烷基氨基，芳基氨基，芳基烷基氨基 )，芳酰基，芳基，芳基氧基，偶氮基，氨基甲酰基 (-NHC(O)O- 烷基 - 或 -OC(O)NH- 烷基 )，甲氨酰 ( 例如， CONH2，以及 CONH- 烷基， CONH- 芳基和 CONH- 芳基烷基 )，羰基，羧基，羧酸，羧酸酐，羧酸酰氯，氰基，酯，环氧化物，醚 ( 例如，甲氧基，乙氧基 )，胍基，卤代，卤代烷基 ( 例如， -CCl3， -CF3， -C(CF3)3)，杂烷基，半缩醛，亚胺 ( 伯和仲亚胺 )，异氰酸酯，异硫氰酸酯，酮，腈，硝基，氧 ( 即，以提供氧代基团 )，磷酸二酯，硫化物，磺酰胺基 ( 例如， SO2NH2)，砜，磺酰基 ( 包括烷基磺酰基，芳基磺酰基和芳基烷基磺酰基 )，亚砜，硫醇 ( 例如，巯基，硫醚 ) 和脲 (-NHCONH- 烷基 -)。
     除非另有陈述，否则化合物的 “治疗有效量” ” 是指足以在治疗或处置疾病或病况中提供治疗益处或足以延迟与疾病或病况有关的一种或多种症状或使与疾病或病况有关的一种或多种症状最小化的量。治疗有效量的化合物是指一定量的治疗剂，其单独或与其它药剂组合，在疾病或病况的治疗或处置中提供治疗益处。术语 “治疗有效量” 可涵盖改善总体治疗性、减少或避免疾病或病况的症状或病因、或增强其它治疗剂的治疗效力的量。除非另有陈述，否则术语 “TPH1_IC50” 是使用下文实施例中描述的体外抑制试验测定的化合物对 TPH1 的 IC50。
     除非另有陈述，否则术语 “TPH2_IC50” 是使用下文实施例中描述的体外抑制试验测定的化合物对 TPH2 的 IC50。
     除非另有陈述，否则术语 “治疗” 涵盖了在患者罹患所述疾病或病症的同时起作用，其减少了疾病或病症或其一种或多种症状的严重程度，或阻止或减缓疾病或病症的进展。
     除非另有陈述，否则术语 “包括” 与 “包括” 具有相同的含义并且术语 “包括” 与 “包括但不限于” 具有相同的含义。类似地，术语 “诸如” 与 “诸如但不限于” 具有相同的含义。
     除非另有陈述，否则紧跟在一系列名词前面的一个或多个修饰词被认为适用于每个名词。例如，措辞 “任选被取代的烷基、芳基或杂芳基” 与 “任选被取代的烷基、任选被取代的芳基或任选被取代的杂芳基” 具有相同的含义。
     注意到，构成更大化合物的一部分的化学部分在本文中可使用当该化合物部分作为单个分子存在时一般使用的名称或作为基团存在时一般使用的名称。例如，术语 “吡啶” 和 “吡啶基” 当用于描述与其它化学部分结合的部分时具有相同含义。因此，两个措辞 “XOH，其中 X 是吡啶基” 和 “XOH，其中 X 是吡啶” 以相同含义被使用，并且包括化合物吡啶 -2- 醇、吡啶 -3- 醇和吡啶 -4- 醇。
     也应注意，如果结构或结构的一部分的立体化学未用例如粗体或虚线表示时，该结构或该结构的一部分被理解为涵盖它们的所有的立体异构体。类似地，未具体说明具有一个或多个手性中心的化合物的手性中心的立体化学的化合物命名涵盖了纯的立体异构体及其混合物。另外，在图中显示的具有不饱和化合价的任何原子被假设为连接有足够的氢原子以满足化合价的要求。另外，用与一个虚线平行的一个实线表示的化学键涵盖了单键和双键 ( 例如，芳香 )，如果化合价允许的话。
     5.2 化合物
     本发明的具体实施方案采用了能够抑制色氨酸羟化酶 (TPH) 的化合物。优选化合物是强力的 TPH1 抑制剂。强力 TPH1 抑制剂的例子公开在美国专利申请公报 No.2007-0191370 中。
     具体的实施方案采用了式 I 化合物及其药学可接受的盐：
     其中： A 是任选被取代的杂环基、芳基或杂环； X 是键， -O-， -S-， -C(O)-， -C(R4) ＝，＝ C(R4)-， -C(R3R4)-， -C(R4) ＝ C(R4)-， -C ≡ C-， -N(R5)-， -N(R5)C(O)N(R5)-， -C(R3R4) N(R5)-， -N(R5)C(R3R4)-， -ONC(R3)-， -C(R3)NO-， -C(R3R4)O-， -OC(R3R4)-， -S(O2)-， -S(O2) N(R5)-， -N(R5)S(O2)-， -C(R3R4)S(O2)- 或 -S(O2)C(R3R4)- ； D 是任选被取代的芳基或杂环； R1 是氢或任选被取代的烷基、烷基 - 芳基、烷基 - 杂环、芳基或杂环； R2 是氢或任选被取代的烷基、烷基 - 芳基、烷基 - 杂环、芳基或杂环； R3 是氢，烷氧基，氨基，氰基，卤素，羟基，或任选被
     取代的烷基； R4 是氢，烷氧基，氨基，氰基，卤素，羟基，或任选被取代的烷基或芳基；每个 R5 独立地是氢或任选被取代的烷基或芳基；以及 n 是 0-3。
     具体化合物由式 I(A) 及其药学可接受的盐表示：
     其它化合物由式 II 及其药学可接受的盐表示：
     其中： A 是任选被取代的杂环基、芳基或杂环； X 是键， -O-， -S-， -C(O)-， -C(R4) ＝，＝ C(R4)-， -C(R3R4)-， -C(R4) ＝ C(R4)-， -C ≡ C-， -N(R5)-， -N(R5)C(O)N(R5)-， -C(R3R4) N(R5)-， -N(R5)C(R3R4)-， -ONC(R3)-， -C(R3)NO-， -C(R3R4)O-， -OC(R3R4)-， -S(O2)-， -S(O2) N(R5)-， -N(R5)S(O2)-， -C(R3R4)S(O2)- 或 -S(O2)C(R3R4)- ； D 是任选被取代的芳基或杂环； E 是任选被取代的芳基或杂环； R1 是氢或任选被取代的烷基、烷基 - 芳基、烷基 - 杂环、芳基或杂环； R2 是氢或任选被取代的烷基、烷基 - 芳基、烷基 - 杂环、芳基或杂环； R3 是氢，烷氧基，氨基，氰基，卤素，羟基，或任选被取代的烷基； R4 是氢，烷氧基，氨基，氰基，卤素，羟基，或任选被取代的烷基或芳基； R5 是氢或任选被取代的烷基或芳基；以及 n 是 0-3。
     具体化合物由式 II(A) 表示：
     关于本文所公开的式子 ( 例如， I， I(A)， II 和 II(A))，具体化合物包括其中 A 是任选被取代的环烷基 ( 例如， 6- 元和 5- 元 ) 的那些。在一些化合物中， A 是任选被取代的芳基 ( 例如，苯基或萘基 )。在其它化合物中， A 是任选被取代的杂环 ( 例如， 6- 元和 5- 元 )。 6- 元杂环的例子包括吡啶、哒嗪、嘧啶、吡嗪和三嗪。5- 元杂环的例子包括吡咯、咪唑、三唑、噻唑、噻吩和呋喃。在一些化合物中， A 是芳香性的。在其它化合物中， A 不是芳香性的。在一些化合物中。A 是任选被取代的双环部分 ( 例如，吲哚、异吲哚、吡咯并吡啶或萘 )。
     具体化合物由下式表示：
     其中： A1 和 A2 各自独立地是单环的、任选被取代的环烷基、芳基或杂环。由该式所涵盖的化合物包括其中 A1 和 / 或 A2 是任选被取代的环烷基 ( 例如， 6- 元和 5- 元 ) 的那些。在一些化合物中， A1 和 / 或 A2 是任选被取代的芳基 ( 例如，苯基或萘基 )。在其它化合物中， A1 和 / 或 A2 是任选被取代的杂环 ( 例如， 6- 元和 5- 元 )。6- 元杂环的例子包括吡啶、哒嗪、嘧啶、吡嗪和三嗪。 5- 元杂环的例子包括吡咯、咪唑、三唑、噻唑、噻吩和呋喃。在一些化合物中， A1 和 / 或 A2 是芳香性的。在其它化合物中， A1 和 / 或 A2 不是芳香性的。
     关于本文所公开的式子，具体化合物包括其中 D 是任选被取代的芳基 ( 例如，苯基或萘基 ) 的那些。在其它化合物中， D 是任选被取代的杂环 ( 例如， 6- 元和 5- 元 )。6- 元杂环的例子包括吡啶、哒嗪、嘧啶、吡嗪和三嗪。5- 元杂环的例子包括吡咯、咪唑、三唑、噻唑、噻吩和呋喃。在一些化合物中， D 是芳香性的。在其它化合物中， D 不是芳香性的。在一些化合物中， D 是任选被取代的双环部分 ( 例如，吲哚、异吲哚、吡咯并吡啶或萘 )。
     关于本文所公开的式子，具体化合物包括其中 E 是任选被取代的芳基 ( 例如，苯基或萘基 ) 的那些。在其它化合物中， E 是任选被取代的杂环 ( 例如， 6- 元和 5- 元 )。6- 元杂环的例子包括吡啶、哒嗪、嘧啶、吡嗪和三嗪。5- 元杂环的例子包括吡咯、咪唑、三唑、噻唑、噻吩和呋喃。在一些化合物中， E 是芳香性的。在其它化合物中， E 不是芳香性的。在一些化合物中， E 是任选被取代的双环部分 ( 例如，吲哚、异吲哚、吡咯并吡啶或萘 )。
     关于本文所公开的式子，具体化合物包括其中 R1 是氢或任选被取代的烷基的那些。
     在一些化合物中， R2 是氢或任选被取代的烷基。
     在一些化合物中， n 是 1 或 2。
     在一些化合物中， X 是键或 S。在其它化合物中， X 是 -C(R4) ＝，＝ C(R4)-， -C(R3R4)-， -C(R4) ＝ C(R4)- 或 -C ≡ C-，并且，例如， R4 独立地是氢或任选被取代的烷基。在其它化合物中， X 是 -O-， -C(R3R4)O- 或 -OC(R3R4)-，并且，例如， R3 是氢或任选被取代的烷基，以及 R4 是氢或任选被取代的烷基。在一些化合物中， R3 是氢以及 R4 是三氟甲基。在一些化合物中， X 是 -S(O2)-， -S(O2)N(R5)-， -N(R5)S(O2)-， -C(R3R4)S(O2)- 或 -S(O2)C(R3R4)-，并且，例如， R3 是氢或任选被取代的烷基， R4 是氢或任选被取代的烷基，以及 R5 是氢或任选被取代的烷基。在其它化合物中， X 是 -N(R5)-， -N(R5)C(O)N(R5)-， -C(R3R4)N(R5)- 或 -N(R5) C(R3R4)-，并且，例如， R3 是氢或任选被取代的烷基， R4 是氢或任选被取代的烷基，以及每个 R5 独立地是氢或任选被取代的烷基。
     其它化合物由下式表示：
     其中，例如， R3 是三氟甲基。其它化合物由下式所涵盖
     其中，例如， R3 是氢。一些化合物由下式所涵盖：
     其中： Z1， Z2， Z3 和 Z4 各自独立地是 N 或 CR6 ；每个 R6 独立地是氢，氰基，卤素， OR7， NR8R9，氨基，羟基，或任选被取代的烷基、烷基 - 芳基或烷基 - 杂环；每个 R7 独立地是氢或任选被取代的烷基、烷基 - 芳基或烷基 - 杂环；每个 R8 独立地是氢或任选被取代的烷基、烷基 - 芳基或烷基 - 杂环；每个 R9 独立地是氢或任选被取代的烷基、烷基 - 芳基或烷基 - 杂环；以及 m 是 1-4。一些的这种化合物由下式表示：
     其它化合物由下式表示：
     其中，例如， R3 是三氟甲基。其它化合物由下式表示：其中，例如， R3 是氢。
     关于上述的各种式子，一些化合物为使得所有的 Z1、 Z2、 Z3 和 Z4 是 N。在其它化合物中， Z1、 Z2、 Z3 和 Z4 中只有三个是 N。在其它化合物中， Z1、 Z2、 Z3 和 Z4 只有两个是 N。在其它化合物中， Z1、 Z2、 Z3 和 Z4 中只有一个是 N。在其它化合物中， Z1、 Z2、 Z3 和 Z4 都不是 N。
     一些化合物由下式表示：
     其中：其中： Z′ 1、 Z′ 2 和 Z′ 3 各自独立地是 N， NH， S， O 或 CR6 ；每个 R6 独立地是氨基，氰基，卤素，氢， OR7， SR7， NR8R9，或任选被取代的烷基、烷基 - 芳基或烷基 - 杂环；每个 R7 独立地是氢或任选被取代的烷基、烷基 - 芳基或烷基 - 杂环；每个 R8 独立地是氢或任选被取代的烷基、烷基 - 芳基或烷基 - 杂环；每个 R9 独立地是氢或任选被取代的烷基、烷基 - 芳基或烷基 - 杂环；以及 p 是 1-3。一些的这种化合物由下式表示：
     其它化合物由下式表示：
     其中，例如， R3 是三氟甲基。其它化合物由下式表示：其中，例如， R3 是氢。
     关于上述的各种式子，一些化合物为使得所有的 Z′ 1、 Z′ 2 和 Z′ 3 是 N 或 NH。在其它化合物中， Z′ 1、 Z′ 2 和 Z′ 3 中只有两个是 N 或 NH。在其它化合物中， Z′ 1、 Z′ 2 和 Z′ 3 中只有一个是 N 或 NH。在其它化合物中， Z′ 1、 Z′ 2 和 Z′ 3 都不是 N 或 NH。
     一些化合物由下式所涵盖：其中： Z″ 1、 Z″ 2、 Z″ 3 和 Z″ 4 各自独立地是 N 或 CR10 ；每个 R10 独立地是氨基，氰基，卤素，氢， OR11， SR11， NR12R13，或任选被取代的烷基、烷基 - 芳基或烷基 - 杂环；每个 R11 独立地是氢或任选被取代的烷基、烷基 - 芳基或烷基 - 杂环；每个 R12 独立地是氢或任选被取代的烷基、烷基 - 芳基或烷基 - 杂环；和每个 R13 独立地是氢或任选被取代的烷基、烷基 - 芳基或烷基 - 杂环。一些的这种化合物由下式表示：
     其它化合物由下式表示：
     其中，例如， R3 是三氟甲基。其它化合物由下式表示：其中，例如， R3 是氢。
     关于上述的各种式子，一些化合物为使得所有的 Z″ 1、 Z″ 2、 Z″ 3 和 Z″ 4 是 N。在其它化合物中， Z″ 1、 Z″ 2、 Z″ 3 和 Z″ 4 中只有三个是 N。在其它化合物中， Z″ 1、 Z″ 2、 Z″ 3 和 Z″ 4 中只有两个是 N。在其它化合物中， Z″ 1、 Z″ 2、 Z″ 3 和 Z″ 4 中只有一个 N。在其它化合物中， Z″ 1、 Z″ 2、 Z″ 3 和 Z″ 4 都不是 N。
     一些化合物由下式表示：
     其中： Z″ 1、 Z″ 2、 Z″ 3 和 Z″ 4 独立地是 N 或 CR10 ；每个 R10 独立地是氨基，氰基，卤素，氢， OR11， SR11， NR12R13，或任选被取代的烷基、烷基 - 芳基或烷基 - 杂环；每个 R11 独立地是氢或任选被取代的烷基、烷基 - 芳基或烷基 - 杂环；每个 R12 独立地是氢或任选被取代的烷基、烷基 - 芳基或烷基 - 杂环；和每个 R13 独立地是氢或任选被取代的烷基、烷基 - 芳基或烷基 - 杂环。一些的这种化合物由下式表示：
     其它化合物由下式表示：
     其中，例如， R3 是三氟甲基。其它化合物由下式表示：
     其中，例如， R3 是氢。关于上述的各种式子，一些化合物为使得所有的 Z″ 1、 Z″ 2、 Z″ 3 和 Z″ 4 是 N。在其它化合物中， Z″ 1、 Z″ 2、 Z″ 3 和 Z″ 4 中只有三个是 N。在其它化合物中， Z″ 1、 Z″ 2、 Z″ 3 和 Z″ 4 中只有两个是 N。在其它化合物中， Z″ 1、 Z″ 2、 Z″ 3 和 Z″ 4 中只有一个是 N。在其它化合物中， Z″ 1、 Z″ 2、 Z″ 3 和 Z″ 4 都不是 N。
     一些化合物由下式表示：
     其取代基如本文所定义。其它化合物由下式表示：
     其取代基如本文所定义。其它化合物由下式表示：
     其取代基如本文所定义。其它化合物由下式表示：其取代基如本文所定义。
     关于本文所公开的各种式子，具体化合物包括以下的那些，其中 A 和 E 二者都是任选被取代的苯基并且，例如， X 是 -O-、 -C(R3R4)O- 或 -OC(R3R4)-，并且，例如， R3 是氢和 R4 是三氟甲基，并且，例如， n 是 1。
     本发明涵盖了立体异构纯化合物和它们的立体异构体富集的组合物。立体异构体可通过不对称合成被制得或者使用标准技术诸如手性柱、手性拆解试剂或酶拆分技术被拆分得到。例如，参见， Jacques， J. 等人， Enantiomers， Racemates and Resolutions(Wiley Interscience， NewYork， 1981) ； Wilen， S.H. 等人， Tetrahedron 33 ： 2725(1977) ； Eliel， E.L.， Stereochemistry of Carbon Compounds(McGraw Hill， NY， 1962) ；和 Wilen， S.H.， Tables of Resolving Agents and Optical Resolutions， p.268(E.L.Eliel， Ed.， Univ. of Notre Dame Press， Notre Dame， IN， 1972)。
     本发明的具体化合物是强力的 TPH1 抑制剂。特定化合物具有小于约 10、 5、 2.5、 1、 0.75、 0.5、 0.4、 0.3、 0.2、 0.1 或 0.05μM 的 TPH1_IC50。
     具体化合物是选择性 TPH1 抑制剂。特定化合物具有的 TPH1_IC50 是它们的 TPH2_ IC50 的约 1/10、 1/25、 1/50、 1/100、 1/250、 1/500 或 1/1000。
     具体化合物不显著抑制人酪氨酸羟化酶 (TH)。例如，具体化合物具有的对 TH 的 IC50 大于约 100、 250、 500 或 1000μM。
     具体化合物不显著抑制人苯基丙氨酸羟化酶 (PAH)。例如，具体化合物具有的对 PAH 的 IC50 大于约 100、 250、 500 或 1000μM。
     本发明的具体化合物不显著结合于 ( 例如，抑制 IC50 大于约 10、 25、 50、 100、 250、 500、 750 或 1000μM) 以下的一种或多种：血管紧张肽转化酶，红细胞生成素 (EPO) 受体，因
     子 IX，因子 XI，整联蛋白 ( 例如， α4)，异噁唑啉或异噁唑纤维蛋白原受体，金属蛋白酶，中性肽链内切酶 (NEP)，磷酸酶 ( 例如，酪氨酸磷酸酶 )，磷酸二酯酶 ( 例如， PDE-4)，聚合酶， PPARγ， TNF-α，血管细胞粘着分子 -1(VCAM-1)，或玻连蛋白受体。化合物结合于 ( 例如，抑制 ) 任何这些靶标的能力可以容易地使用本领域已知方法 ( 如上面引用的参考文献中所述的方法 ) 测定。本发明的具体化合物不抑制细胞粘合。
     当被给予到哺乳动物 ( 例如，小鼠，大鼠，狗，猴子或人 ) 时，本发明的某些化合物不容易穿过血 / 脑屏障 ( 例如，血液中低于约 5、 2.5、 2、 1.5、 1、 0.5 或 0.01 ％的化合物进入脑 )。化合物穿过血 / 脑屏障的能力或无能力可以采用本领域已知的方法测定。例如，参见， Riant， P. 等人， Journal of Neurochemistry 51 ： 421-425(1988) ； Kastin， A.J.， Akerstrom， V.， J.Pharmacol.Exp.Therapeutics 294 ： 633-636(2000) ； W.A.Banks， W.A. 等人， J.Pharmacol.Exp.Therapeutics302 ： 1062-1069(2002)。
     5.3 化合物的合成
     本发明的化合物可由本领域已知方法或本文所述方法制备。
     例如，关于式 I，其中 E 是苯基和 D 是任选被取代的吡嗪、哒嗪、吡啶或苯基的化合物一般地可通过路线 1 中所示方法制备：
     路线 1 其中，例如：
     其中 X 是 -OCR3- 的化合物一般地可使用如路线 2 中所示的方法制备，其中 R3 是 CF3 和 D 是嘧啶：
     路线 2 其中，例如， A 是任选被取代的苯基、联苯基或萘基。本发明的化合物还可使用如路线 3 中所示的方法制备：路线 3
     其中 P1 是 R1 或保护基； P2 是保护基； P3 是 OR2 或保护基； X′是例如 O 或 N ； Y1 和 Y3 是卤素 ( 例如， Br、 Cl) 或合适的拟卤化物 ( 例如，三氟甲磺酸酯 ) ；和每个 R′独立地是氢或任选被取代的烷基、烷基 - 芳基、烷基 - 杂环、芳基或杂环，或者与它们所连接的氧原子一起形成环状二氧杂硼戊烷 ( 例如， 4， 4， 5， 5- 四甲基 -1， 3， 2- 二氧杂硼戊烷 )。基团 A、 R1、 R2、 R3、 R6 和 m 的定义如本文别处的定义。部分 Z″ 1、 Z″ 2、 Z″ 3 和 Z″ 4 也如本文所定义，尽管可理解为关于上面所示的路线，它们中之一连接于苯基环。例如， Z″ 1 和 Z″ 4 可独立地是 CR10( 其定义如本文所述 )，同时 Z″ 2 是 N 和 Z″ 3 是与相邻苯基环结合的碳原子。
     上面所示的单独的反应可以使用本领域已知的条件进行。例如，适于硼和含卤素
     的部分进行 Suzuki 偶合的钯催化剂和条件是公知，并且如下提供了实施例。另外，保护基的类型和合适的应用是公知的，诸如用诸如但不限于氢的部分除去和替换它们 ( 例如，在酸或碱条件下进行水解 )。
     A 部分可以是双环 ( 例如，任选被取代的联苯基 )。在此情况下，含有 A 的起始材料可如下制备：
     其中 Y2 是卤素或拟卤素，以及每个 R 独立地是氢或任选被取代的烷基、烷基 - 芳基、烷基 - 杂环、芳基或杂环，或者与它们所连接的氧原子一起形成环状二氧杂硼戊烷 ( 例如， 4， 4， 5， 5- 四甲基 -1， 3， 2- 二氧杂硼戊烷 )。
     另一个制备其中 D 是任选被取代的嘧啶或三嗪的化合物的方法如以下路线 4 所示：
     FG ＝ B(OH)2，当 E 是任选被取代的苯基时
     本发明的化合物的酯衍生物和其它化合物可容易地使用如以下路线 5 所示的方法制备，其中 E 是任选被取代的苯基：
     路线 5 可供选择的制备三嗪基化合物的方法如路线 6 所示：路线 6
     环状部分 D 可具有多种结构中的任一种，其可容易地被并入到本发明的化合物中。例如，其中 D 是噁唑的化合物可如以下路线 7 所示制备：
     路线 7
     使用本领域已知的方法，可将上文所示的合成方法容易地进行修改以获得各种化合物。例如，可使用本领域已知的手性色谱法和其它技术来分离最终产品的立体异构体。例如，参见， Jacques， J. 等人， Enantiomers， Racemates and Resolutions(Wiley Interscience， New York， 1981) ； Wilen， S.H. 等人， Tetrahedron 33 ： 2725(1977) ； Eliel， E.L.， Stereochemistry of Carbon Compounds(McGraw Hill， NY， 1962) ；和 Wilen， S.H.， Tables of Resolving Agents and Optical Resolutions， p.268(E.L.Eliel， Ed.， Univ. of Notre Dame Press， Notre Dame， IN， 1972)。另外，如上文一些路线所示的，合成可采用手性起始材料以获得立体异构体富集的或纯的产物。
     5.4 用法
     本发明涵盖了减少和 / 或改善与给药一种或多种药物有关的一种或多种由 5- 羟色胺介导的副作用的方法。具体方法包括对有需要的患者给药一定量的足以减少或改善由 5- 羟色胺介导的副作用的 TPH 抑制剂 ( 例如强力 TPH1 抑制剂 )。
     由 5- 羟色胺介导的副作用的例子包括心血管和胃肠道 (GI) 的副作用。心血管副作用包括心脏和肺的损伤，诸如血管 ( 例如肺内血管 ) 和心脏瓣膜的损伤。这些损伤可能，但不一定，导致肺动脉高压和心脏瓣膜病灶。胃肠道副作用包括 GI 不适和疼痛，以及肠运动 (bowel motility) 和肠不运动 (bowel immotility)。
     在一个实施方案中，由 5- 羟色胺介导的副作用与单胺氧化酶 (MAO) 抑制剂有关。在另一个实施方案中，由 5- 羟色胺介导的副作用与选择性 5- 羟色胺再摄取抑制剂 (SSRI) 有关。在另一个实施方案中，由 5- 羟色胺介导的副作用与曲坦类有关。在另一个实施方案中，由 5- 羟色胺介导的副作用与 MAO 抑制剂、 SSRI 和 / 或曲坦类中的至少两种的组合有关。
     MAO 抑制剂的例子包括溴法罗明，右芬氟拉明，异康唑，异烟肼，异丙烟肼，芬氟拉明，吗氯贝胺，苯乙肼，伪麻黄碱，司来吉兰，托洛沙酮或反苯环丙胺，及其药学可接受的盐，及其药理学活性的立体异构体和代谢物。
     SSRI 的例子包括阿米替林，西酞普兰，多塞平，氟西汀，氟伏沙明，丙米嗪，去甲氟西汀，帕罗西汀，舍曲林，文拉法辛或苯吡烯胺，及其药学可接受的盐，及其药理学活性的立体异构体和代谢物。
     曲坦类的例子包括那拉曲坦，利扎曲普坦，舒马普坦或佐米曲普坦，及其药学可接受的盐，及其药理学活性的立体异构体和代谢物。
     TPH 抑制剂的给药剂量和给药方法可由本领域普通技术人员容易地确定。例如，抑制剂可以逐渐增量直到由 5- 羟色胺介导的副作用的减小。或者，可以直接测量血液 5-HT 水平并且与 TPH 抑制剂的给药量相关。
     5.5 药物组合物
     本发明涵盖了药物组合物，其包含 TPH 抑制剂 ( 例如强力 TPH1 抑制剂 ) 和至少一种其它的活性药物成分，该活性药物成分当被给予至患者 ( 例如人 ) 时可影响外周 5- 羟色胺的水平或分布。具体组合物包括包含 TPH 抑制剂以及 MAO 抑制剂、 SSRI 和 / 或曲坦类中的至少一种。
     本发明涵盖了包含本发明的一种或多种化合物的药物组合物。某些药物组合物是适于经口、经粘膜 ( 例如，经鼻，舌下，阴道，经颊或直肠 )，非肠道 ( 例如，皮下，静脉内，快速浓注，肌肉内或动脉内 ) 或透皮给药至患者的单一单位剂量形式。剂量形式的例子包括但不限于：片剂；锭剂；胶囊，诸如软弹性明胶胶囊；扁囊剂；菱形剂；糖锭；分散体；栓剂；膏剂；泥敷剂 ( 泥罨剂 ) ；糊剂；粉剂；敷料；霜剂；膏药；溶液；贴剂；气雾剂 ( 例如，经鼻喷雾剂或吸入剂 ) ；凝胶剂；适于经口或粘膜给药至患者的液体剂型，包括悬浮液 ( 例如，水性或非水性的液体悬浮液，水包油型乳液，或油包水型液体乳液 )，溶液和酏剂；适于非肠道给药至患者的液体剂型；和无菌固体 ( 例如，晶体或无定形固体 )，其可被重构以提供适于非肠道给药至患者的液体剂型。
     所述制剂将适合给药方式。例如，对在胃内降解敏感的化合物的口服给药可使用肠溶衣来实现。类似地，制剂可含有促进活性成分递送到达作用部位的成分。例如，化合物可在脂质体配方中被给予以便保护它们免受降解酶的破坏，促进在循环系统中的转运，和实现它们的跨细胞膜递送。
     类似地，溶解性差的化合物在以下试剂的帮助下可被并入液体剂型 ( 和适于重建的剂型 ) 中：增溶剂，乳化剂，和表面活性剂诸如但不限于环糊精 ( 例如， α- 环糊精， β- 环糊精，和 EncapsinTM( 例如，参见， Davis 和 Brewster， Nat.Rev.Drug Disc.3 ： cremaforh 和非水性溶剂，诸如1023-1034(2004))，但不限于乙醇，异丙醇，碳酸乙酯，乙酸乙酯，苄基醇，苯甲酸苄基酯，丙二醇， 1， 3- 丁二醇，二甲基甲酰胺，二甲基亚砜 (DMSO)，生物相容性油 ( 例如，棉籽油，花生油，玉米油，胚芽油，，橄榄油，蓖麻油和芝麻油 )，甘油，四氢糠醇，聚乙二醇，山梨糖醇酐的脂肪酸酯，及其混合物 ( 例如 DMSO ：玉米油 )。
     溶解性差的化合物还可采用本领域已知的其它技术被并入到悬浮液中。例如，化合物的纳米粒子可被悬浮在液体中以提供纳米悬浮液 ( 例如，参见， Rabinow， Nature Rev.Drug Disc.3 ： 785-796(2004))。本文所述的化合物的纳米粒子形式可通过以下的文献中所述的方法制备：美国专利公开 Nos.2004-0164194， 2004-0195413， 2004-0251332， 2005-0042177 A1， 2005-0031691 A1，和美国专利 Nos.5,145,684， 5,510,118， 5,518,187， 5,534,270 ， 5,543,133 ， 5,662,883 ， 5,665,331 ， 5,718,388 ， 5,718,919 ， 5,834,025 ， 5,862,999， 6,431,478， 6,742,734， 6,745,962，所述文献各自以全文被并入本文作为参考。在一个实施方案中，纳米粒子形式包括平均粒度小于约 2000 纳米、小于约 1000 纳米或小于约 500 纳米的粒子。
     剂量形式的组成、形状和类型一般地随着使用的不同而异。例如，在疾病的快速治疗中所用的剂量形式与在相同疾病的长期治疗中使用的剂量形式相比，前者可包含更大量的一种或多种活性成分。类似地，非肠道剂量形式与用于治疗相同疾病的口服剂量形式相比，前者包含更少量的一种或多种活性成分。如何解决这些差异对于本领域技术人员而言是显而易见的，例如，参见， Remington′ s Pharmaceutical Sciences， 18th ed.， Mack Publishing， Easton PA(1990)。
     5.5.1 口服剂量形式
     本发明的适于口服给药的药物组合物可作为离散的剂量形式存在，诸如但不限于片剂 ( 例如，咀嚼片 )，锭剂，胶囊和液体 ( 例如，加香糖浆剂 )。这种剂量形式含有预定量的活性成分，并且可通过本领域技术人员公知的制药方法来制备。一般地，参见 Remington′ sPharmaceutical Sciences， 18th ed.， Mack Publishing， Easton PA(1990)。
     典型的口服剂量形式通过将活性成分与符合常规药物配合技术的至少一种赋形剂密切混合来制备。根据希望给药的制剂形式而异，赋形剂可采取多种形式。
     因为片剂和胶囊容易给药，它们代表了最有利的口服剂量单位形式。如果希望，片剂可通过标准的水性或非水性技术进行包衣。这种剂量形式可通过常规的制药方法被制得。通常，通过将活性成分与液体载体、细分散的固体载体或二者均匀地和密切地混合，并且如有必要然后使产品成型来所需形式来制备药物组合物和剂量形式。崩解剂可被并入到固体剂型中以促进快速崩解。润滑剂可被并入以帮助剂量形式 ( 例如，片剂 ) 的制备。
     5.5.2 非肠道剂量形式
     非肠道可通过各种途径，包括皮下、静脉内 ( 包括快速浓注 )、肌肉内和动脉内途径，被给予到患者。因为非肠道剂型的给药通常绕开患者对污染物的天然防御，因此，非肠道剂型特别是无菌的或者能够在对患者给药前经过灭菌。非肠道剂型的例子包括准备用于注射的溶液，准备被溶解或悬浮在药学可接受的注射用媒介物中的干燥产品，准备用于注射的悬浮液，以及乳液。
     可用于提供本发明的非肠道剂型的合适的媒介物是本领域技术人员公知的。实施例包括：注射用水 USP ；含水媒介物诸如氯化钠注射液，林格注射液，葡萄糖注射液，葡萄糖和氯化钠注射液，和乳酸化林格注射液；与水可混溶的媒介物诸如乙醇、聚乙二醇和聚丙二醇；和无水媒介物诸如玉米油、棉子油、花生油、芝麻油、油酸乙酯、肉豆蔻酸异丙酯和苯甲酸苄基酯。 6. 实施例
     6.1 获得 tph1 基因被破坏的小鼠
     通过基本上如 Wattler 等人， Biotechniques 26(6) ： 1150-6(1999) 所述的基因寻靶除去鼠科动物 TPH1 基因的外显子 3。得到的敲除动物在脑中显示出正常的 TPH 活性，但是在内脏中显示剧烈降低的 TPH 表达。
     6.2tph1 基因破坏的生理效应
     结合用于基因破坏的小鼠杂合子 (+/-) 以及野生型 (+/+) 同窝仔研究了用于 tph1 破坏的小鼠纯合子 (-/-)。在该分析期间，使用一整套被设计用于评价哺乳动物受试者中的主要器官系统的功能的医学诊断过程来对小鼠进行医学处理。通过研究所述数目的纯合子 (-/-) 敲除小鼠并结合杂合 (+/-) 和野生型 (+/+) 同窝仔，获得更可靠的和可重复的数据。
     tph1 基因的破坏主要影响 TPH 的胃肠道同工型 (TPH1)，并且对 TPH 的脑同工型 (TPH2) 有很少的影响或没有影响。基因的破坏不引起对中枢神经系统具有可测量的有害影响。这通过 5- 羟色胺免疫化学被证实，其表明了 5- 羟色胺在胃、十二指肠、空肠、回肠、盲肠和结肠中被大大地减少或缺乏，而在缝核神经元中的 5- 羟色胺水平不受影响。
     用于 tph1 基因破坏的小鼠纯合子 (-/-) 具有的血栓形成减小，而不显著增加出血或其它有害的适应症。
     6.3HPLC 表征
     在一些以下的合成实施例中，提供了高效液相色谱法 (HPLC) 的保留时间。除非另作说明，否则用来获得这些保留时间的各种条件如下描述：
     方法 A ： YMC-PACK ODS-A 3.0x50mm ；溶剂 A ＝ 90％水， 10％ MeOH， 0.1％ TFA ；溶剂 B ＝ 90％ MeOH， 10％水， 0.1％ TFA ； B％ 0-100％，在 4 分钟内；流速＝ 2ml/min ；检测波长＝ 220nm.
     方法 B ： YMC-PACK ODS-A 3.0x50mm ；溶剂 A ＝ 90％水， 10％ MeOH， 0.1％ TFA ；溶剂 B ＝ 90％ MeOH， 10％水， 0.1％ TFA ；％ B10-100％，在 4 分钟内；流速＝ 3ml/min ；检测波长＝ 220nm.
     方法 C ： YMC-PACK ODS-A 3.0x50mm ；溶剂 A ＝ 90％水， 10％ MeOH， 0.1％ TFA ；溶剂 B ＝ 90％ MeOH， 10％水， 0.1％ TFA ； B％ 0-100％，在 5 分钟内；流速＝ 2ml/min. ；检测波长＝ 220nm.
     方法 D ： Shim VP ODS 4.6x50mm ；溶剂 A ＝ 90％水， 10％ MeOH， 0.1％ TFA ；溶剂 B ＝ 90％ MeOH， 10％水， 0.1％ TFA ； B％ 0-100％，在 4 分钟内；流速＝ 3ml/min. ；检测波长＝ 220nm.
     方法 E ： Shim VP ODS 4.6x50mm ；溶剂 A ＝ 90％水， 10％ MeOH， 0.1％ TFA ；溶剂 B ＝ 90 ％ MeOH， 10 ％水， 0.1 ％ TFA ； B ％ 0-100 ％，在 4 分钟内；流速＝ 3ml/min ；检测波长＝ 254nm.
     方法 F ： YMC-PACK ODS-A 4.6x33mm ；溶剂 A ＝ 90％水， 10％ MeOH， 0.1％ TFA ；溶剂 B ＝ 90％ MeOH， 10％水， 0.1％ TFA ； B％ 0-100％，在 4 分钟内；流速＝ 3ml/min. ；检测波长＝ 220nm.
     方法 G ： YMC-PACK ODS-A 4.6x50mm ；溶剂 A ＝ 90％水， 10％ MeOH， 0.1％ TFA ；溶剂 B ＝ 90％ MeOH， 10％水， 0.1％ TFA ； B％ 0-100％，在 2 分钟内；流速＝ 2.5ml/min. ；检测波长＝ 220nm.
     方法 H ： C18 4.6x20mm ；溶剂 A ＝ 90 ％水， 10 ％ MeOH， 0.1 ％ TFA ；溶剂 B ＝ 90 ％ MeOH， 10％水， 0.1％ TFA ； B％ 0-100％，在 2 分钟内，流速＝ 2ml/min. ；检测波长＝ 220nm.
     方法 I ： YMC PACK ODS-A 3.0x50mm ；溶剂 A ＝ 90％水， 10％ MeOH， 0.1％ TFA ；溶剂 B ＝ 90％ MeOH， 10％水， 0.1％ TFA ； B％ 10-100％，在 4 分钟内；流速＝ 2ml/min. ；检测波长＝ 220nm.
     方法 J ： YMC Pack ODS-A 3.0x50mm ；溶剂 A ＝ H2O， 0.1％ TFA ；溶剂 B ＝ MeOH， 0.1％ TFA ；％ B 约 10 到约 90％，在 4 分钟内；流速＝ 2ml/min. ；检测波长＝ 220nm.
     方法 K ： Sunfire C18 50mmx4.6mmx3.5μm ；溶剂 A ＝ 10mMNH4OAc，在水中；溶剂 B ＝ MeCN ； B％ 10-95％，在 2 分钟内；流速＝ 4.5ml/min. ；检测波长＝ 220nm.
     方法 L ： Sunfire C18 50mmx4.6mmx3.5μm ；溶剂 A ＝ 10mMNH4OAc ；溶剂 B ＝ MeCN ； B％ 2-20％在 0.8 分钟内，然后达到 95％ B，在 2 分钟内；流速＝ 4.5ml/min. ；检测波长＝ 220nm.方法 M ： YMC-PACK ODS-A 4.6x33mm ；溶剂 A ＝ 90％水， 10％ MeOH， 0.1％ TFA ；溶剂 B ＝ 90％ MeOH， 10％水， 0.1％ TFA ； B％ 0-100％，在 5 分钟内；流速＝ 2.5ml/min. ；检测波长＝ 254nm.
     方法 N ： YMC-PACK ODS-A 3.0x50mm ；溶剂 A ＝ H2O， 0.1％ TFA ；溶剂 B ＝ MeOH， 0.1％ TFA ； B％ 10-90％，在 4 分钟内；流速＝ 2ml/min. ；检测波长＝ 220 和 254nm.
     方法 O ： YMC-PACK ODS-A 3.0x50mm ；溶剂 A ＝ 90％水， 10％ MeOH 含 0.1％ TFA ；溶剂 B ＝ 90％ MeOH， 10％水，含 0.1％ TFA ； B％ 0-100％，在 4 分钟内；流速＝ 2ml/min. ；检测波长＝ 220 和 254nm.
     方法 P ： ShimPack VP ODS 4.6x50mm ；溶剂 A ＝ 90％ H2O， 10％ MeOH， 1％ TFA ；溶剂 B ＝ 10％ H2O， 90％ MeOH， 1％ TFA ； B％ 0-100％，在 2 分钟内；流速＝ 3.5ml/min. ；检测波长＝ 220 和 254nm.
     方法 Q ： Shim VP ODS 4.6x50mm ；溶剂 A ＝ H2O，含 0.1 ％ TFA ；溶剂 B ＝ MeOH，含 0.1％ TFA ； B％ 0-100％，在 4 分钟内；流速＝ 3ml/min. ；检测波长＝ 254nm.
     方法 R ： YMC Pack ODS-A 4.6x33mm ；溶剂 A ＝ H2O， 0.1 ％ TFA ；溶剂 B ＝ MeOH 含 0.1％ TFA ； B％ 10-90％，在 3 分钟内；流速 2ml/min. ；检测波长 220 和 254nm.
     方法 S ： YMC-Pack ODS-A 3.0x50mm ；溶剂 A ＝ 90％ H2O， 10％ MeOH， 1％ TFA ；溶剂 B ＝ 10％ H2O， 90％ MeOH， 1％ TFA ； B％ 10-90％，在 4 分钟内；流速＝ 2ml/min. 检测波长＝ 220 和 254nm。
     6.4(S)-2- 氨基 -3-(4-(4- 氨基 -6-((R)-1-( 萘 -2- 基 ) 乙基氨基 )-1， 3， 5- 三嗪 -2- 基 ) 苯基 ) 丙酸的合成
     将 2- 氨基 -4， 6- 二氯 -[1， 3， 5] 三嗪 (200mg， 1.21mmol)、 (R)-(+)-1-(2- 萘基 ) 乙基胺 (207mg， 1.21mmol) 和二异丙基 - 乙基胺 (3.63mmol) 的混合物溶解在 150ml 的 1， 4- 二氧杂环己烷中。将溶液在 90℃回流 3 小时。在反应完成 ( 通过 LCMS 监控 ) 后，除去溶剂，用 CH2Cl2(100ml) 和 H2O(100ml) 提取反应混合物。分离有机层并用 H2O(2x100ml) 洗
     涤，用 Na2SO4 干燥并真空浓缩，得到粗制中间体。将粗制化合物溶解在位于 20ml 微波反应小瓶中的 5ml 的 MeCN 和 5ml 的 H2O 中。向该溶液中加入 L- 对 - 硼基 - 苯基丙氨酸 (253mg， 1.21mmol)、碳酸钠 (256mg， 2.42mmol) 和催化量的二氯二 ( 三苯基膦 )- 钯 (II)(42.1mg， 0.06mmol)。将该混合物密封并在微波反应器中在 150 ℃搅拌 5 分钟，然后通过硅藻土过滤。将滤液浓缩并溶解在 MeOH 和 H2O(1 ∶ 1) 中，通过制备性 HPLC 纯化，使用 MeOH/H2O/ TFA 溶剂系统。将合并的纯级分真空蒸发并进一步在冷冻干燥器干燥，得到 238mg 的 2- 氨基 -3-{4-[4- 氨基 -6-(1- 萘 -2- 基 )- 乙基氨基 )-[1， 3， 5] 三嗪 -2- 基 ]- 苯基 }- 丙酸 ( 收率： 46％， LC ：柱： YMC PackODS-A 3.0x50mm，％ B ＝ 0 ～ 100％，梯度时间＝ 4min，流速＝2ml/min，波长＝ 220，溶剂 A ＝ 90 ∶ 10 水∶ MeOH w/0.1％ TFA，溶剂 B ＝ 90 ∶ 10 MeOH ∶ 1 水 w/0.1％ TFA， RT ＝ 2.785min， MS ： M+1 ＝ 429).NMR ： H-NMR(400MHz， CD3OD) ： δ1.65(d， 3H)， 3.22-3.42(m， 2H)， 4.3(m， 1H)， 5.45(m， 1H)， 7.4(m， 1H)， 7.6(m 4H)， 7.8(m， 4H)， 8.2(m， 2H)。
     6.5(S)-2- 氨基 -3-(4-(4- 氨基 -6-((R)-1-( 萘 -2- 基 ) 乙基氨基 )-1， 3， 5- 三嗪 -2- 基 ) 苯基 ) 丙酸的可供选择的合成
     通过形成萘胺 (1 当量 )、二氰化钠 (0.95eq.) 以及在 n-BuOH ∶ H2O(1 ∶ 1) 中的 5N HCl(1eq.) 的混合物，制备 (R)-1-(1-( 萘 -2- 基 ) 乙基 ) 氰基胍。将该混合物在密封管中在 160℃回流 1 天，并通过 LCMS 监控反应进程。在反应完成后，减压除去溶剂 (n-BuOH) 并加入 1N HCl 以调节 pH 到 3-5 的范围。用 EtOAc(2x100) 提取含水溶液并将合并的有机相用 Na2SO4 干燥。真空除去溶剂得到粗产物。将该化合物用 ISCO 柱色谱法纯化，使用溶剂体系 EtOAc ∶己烷 (7 ∶ 3 和 1 ∶ 1)，获得 1-22.5 克规模，白色固体， 48-71 ％收率。 1 NMR ： H-NMR(400MHz， CD3OD) ： δ1.5(d， 3H)， 5.1(m， 1H)， 7.5(m， 4H)， 7.8(s， 1H)， 7.9(m， 2H) ； LCMS ： RT1.69， M+1 ： 239，收率： 71％。
     根据路线 6 所示方法，从 (R)-1-(1-( 萘 -2- 基 ) 乙基 ) 氰基胍制备标题化合物。
     6.6(S)-2- 氨基 -3-(4-(4- 氨基 -6-((4 ′ - 甲基联苯 -4- 基 ) 甲基氨基 )-1， 3， 5- 三嗪 -2- 基 ) 苯基 ) 丙酸的合成
     将 2- 氨基 -4， 6- 二氯 -[1， 3， 5] 三嗪 (100mg， 0.606mmol)、 4′-甲基-联苯 -4- 基 - 甲基胺 (142mg， 0.606mmol) 和碳酸铯 (394mg， 1.21mmol) 的混合物溶解在位于 5ml 微波小瓶中的 1， 4- 二氧杂环己烷 (1.5ml) 和 H2O(1.5ml) 中。将混合物在微波反应器中在 100℃搅拌 15 分钟。除去溶剂并将残余物溶解在 CH2Cl2(20ml) 中并用 H2O(2x20ml) 洗涤，用 Na2SO4 干燥，然后真空除去溶剂。然后将粗制中间体溶解在位于 5ml 微波小瓶中的 1.5ml 的 MeCN 和 1.5ml 的 H2O 中。向该溶液中加入 L- 对 - 硼基 - 苯基丙氨酸 (126mg， 0.606mmol)、碳酸钠 (128mg， 1.21mmol) 和催化量的二氯二 ( 三苯基膦 )- 钯 (II)(21.1mg， 0.03mmol)。将该混合物密封并在微波反应器中在 150℃搅拌 5 分钟，然后通过硅藻土过滤。浓缩滤液并溶解在 MeOH 和 H2O(1 ∶ 1) 中，通过制备性 HPLC 纯化，使用 MeOH/H2O/TFA 溶剂系统。将合并的纯级分真空蒸发并另外在冷冻干燥器中干燥，得到 21.6mg 的 2- 氨基 -3-(4-{4- 氨基 -6-[(4′ - 甲基 - 联苯 -4- 基甲基 )- 氨基 ]-[1， 3， 5] 三嗪 -2- 基 }- 苯基 )- 丙酸 (LC ：柱： YMC Pack ODS-A 3.0x50mm，％ B ＝ 0 ～ 100％，梯度时间＝ 4min，流速＝ 2ml/min，波长＝ 220，溶剂 A ＝ 90 ∶ 10 水∶ MeOHw/0.1％ TFA，溶剂 B ＝ 90 ∶ 10MeOH ∶水 w/0.1％ TFA， RT ＝ 3.096min， MS ： M+1 ＝ 455).1H NMR(400MHz， CD3OD)δ2.33(s， 3H)， 3.24-3.44(m， 2H)， 4.38(m， 1H)， 7.02(d， 2H)， 7.42(m， 2H)， 7.50-7.60(m， 6H)， 8.22(m， 2H)。
     6.7(S)-2- 氨基 -3-(4-(4- 吗啉基 -6-( 萘 -2- 基甲基氨基 )-1， 3， 5- 三嗪 -2- 基 ) 苯基 ) 丙酸的合成
     将 2， 4- 二氯 -6- 吗啉 -4- 基 -[1， 3， 5] 三嗪 (121mg， 0.516mmol)、 C- 萘 -2- 基 - 甲基胺盐酸盐 (100mg， 0.516mmol)、碳酸铯 (336mg， 1.03mmol) 的混合物溶解在位于 5ml 微波小瓶中的 1， 4- 二氧杂环己烷 (1.5ml) 和 H2O(1.5ml) 中。将该混合物在微波反应器中在 180℃搅拌 600 秒。除去溶剂，将残余物溶解在 CH2Cl2(10ml) 中并用 H2O(2x10ml) 洗涤，用 Na2SO4 干燥，然后真空干燥。将残余物用制备性 HPLC 纯化，得到 20mg 的中间体 ( 收率 11％，
     M+1 ＝ 356)。然后将该中间体溶解在位于 2ml 微波小瓶中的 0.5ml 的 MeCN 和 0.5ml 的 H2O 中。向该溶液中加入 L- 对 - 硼基 - 苯基丙氨酸 (11.7mg， 0.0562mmol)、碳酸钠 (11.9mg， 0.112mmol) 和催化量的二氯二 ( 三苯基膦 )- 钯 (II)(2.0mg， 5％ )。将混合物密封并在微波反应器中在 150℃搅拌 5 分钟，然后通过硅藻土过滤。浓缩滤液并溶解在 MeOH 和 H2O(1 ∶ 1) 中，并通过制备性 HPLC 纯化，使用 MeOH/H2O/TFA 溶剂系统。将合并的纯级分真空蒸发并进一步在冷冻干燥器上干燥，得到 17mg 的 2- 氨基 -3-(4-{4- 吗啉 -4- 基 -6-[( 萘 -2- 基甲基 )- 氨基 ]-[1， 3， 5] 三嗪 -2- 基 }- 苯基 )- 丙酸 ( 收率： 63％， LC ：方法 B， RT ＝ 3.108min， MS ： M+1 ＝ 486)。
     6.8(2S)-2- 氨基 -3-(4-(2- 氨基 -6-(2， 2， 2- 三氟 -1-(2-( 三氟甲基 ) 苯基 ) 乙氧基 ) 嘧啶 -4- 基 ) 苯基 ) 丙酸的合成
     在 0 ℃将四丁基氟化铵 (0.1ml ； 1.0M，在四氢呋喃中的溶液 ) 加入到 2- 三氟甲基 - 苯甲醛 (1.74g， 10mmol) 和三氟甲基三甲基硅烷 (TMSCF3)(1.8ml， 12mmol) 在 10ml THF 中的溶液中。将形成的混合物回温到室温并搅拌 4 小时。然后用 12ml 的 1N HCl 处理反应混合物并搅拌过夜。将产物用乙酸乙酯 (3x20ml) 提取。分离有机层并用硫酸钠干燥。蒸发有机溶剂，得到 2.2g 的 1-(2- 三氟甲基苯基 )-2， 2， 2- 三氟 - 乙醇，收率 90％。
     将 NaH(80mg， 60 ％， 3.0mmol) 加入到 1-(2- 三氟甲基苯基 )-2， 2， 2- 三氟 - 乙醇
     (244mg， 1mmol) 在 10ml 的无水 THF 的溶液中。将混合物搅拌 20 分钟，加入 2- 氨基 -4， 6- 二氯 - 嘧啶 (164mg， 1mmol)，然后将反应混合物在 70℃加热 1 小时。冷却后，加入 5ml 的水并使用乙酸乙酯 (20ml) 提取产物。有机层用硫酸钠干燥。旋转蒸发除去溶剂，得到 267mg 的 4- 氯 -6-[2， 2， 2- 三氟 -1-(2- 三氟甲基苯基 )- 乙氧基 ]- 嘧啶 -2- 基胺，收率 71％。
     在微波小瓶中加入 4- 氯 -2- 氨基 -6-[1-(2- 三氟甲基苯基 )-2， 2， 2- 三氟 - 乙氧基 ]- 嘧啶 (33mg， 0.1mmol)、 4- 硼基 -L- 苯基丙氨酸 (31mg， 0.15mmol) 和 1ml 的乙腈， 0.7ml 的水。向上述溶液中加入 0.3ml 的 1N 碳酸钠水溶液，然后加入 5 摩尔％的二氯二 ( 三苯基膦 )- 钯 (II)。将反应容器密封并用微波照射加热到 150℃历时 5 分钟。冷却后，将反应混合物蒸干。将残余物溶解在 2.5ml 的甲醇中，然后通过制备性 LC 进行纯化，得到 5.6mg 的 2- 氨基 -3-(4-{2- 氨基 -6-[2， 2， 2- 三氟 -1-(2- 三氟甲基苯基 )- 乙氧基 ]- 嘧 1 啶 -4- 基 }- 苯基 )- 丙酸。 H NMR(400MHz， CD3OD)δ7.96(m， 3H)， 7.80(d， J ＝ 8.06Hz， 1H)， 7.74(t， J ＝ 7.91Hz 1H)， 7.63(t， J ＝ 8.06Hz， 1H)， 7.41(d， J ＝ 8.3Hz， 2H)， 7.21(m， 1H)， 6.69(s， 1H)， 3.87(m， 1H)， 3.34(m， 1H)， 3.08(m， 1H)。
     6.9(2S)-2- 氨基 -3-(4-(2- 氨基 -6-(2， 2， 2- 三氟 -1- 对 - 甲苯基乙氧基 ) 嘧啶 -4- 基 ) 苯基 ) 丙酸的合成
     在 0℃将四丁基氟化铵 (0.1ml ； 1.0M，在四氢呋喃中的溶液 ) 加入到 4- 甲基 - 苯甲醛 (1.2g， 10mmol) 和 TMSCF3(1.8ml， 12mmol) 在 10mlTHF 中的溶液中。将形成的混合物回温到室温并搅拌 4 小时。然后用 12ml 的 1N HCl 处理反应混合物并搅拌过夜。将产物用乙酸乙酯 (3x20ml) 提取。分离有机层并用硫酸钠干燥。蒸发有机溶剂，得到 1.6g 的 1-(4- 甲基苯基 )-2， 2， 2- 三氟 - 乙醇，收率 86％。
     将 NaH(80mg， 60％， 3.0mmol) 加入到 1-(4- 甲基苯基 )-2， 2， 2- 三氟 - 乙醇 (190mg， 1mmol) 在 10ml 的无水 THF 中的溶液中。将混合物搅拌 20 分钟，加入 2- 氨基 -4， 6- 二氯 - 嘧啶 (164mg， 1mmol)，然后将反应混合物在 70℃加热 1 小时。冷却后，加入 5ml 的水，并使用得到 209mg 的乙酸乙酯 (20ml) 提取产物。有机层用硫酸钠干燥。通过旋转蒸发除去溶剂， 4- 氯 -6-[1-(4- 甲基苯基 )-2， 2， 2- 三氟 - 乙氧基 ]- 嘧啶 -2- 基胺，收率 66％。
     在微波小瓶中加入 4- 氯 -2- 氨基 -6-[1-(4- 甲基苯基 )-2， 2， 2- 三氟 - 乙氧基 ]- 嘧啶 (33mg， 0.1mmol)、 4- 硼基 -L- 苯基丙氨酸 (31mg， 0.15mmol) 和 1ml 的乙腈、 0.7ml 的水。向上述溶液中加入碳酸钠水溶液 (0.3ml， 1N)，然后加入 5 摩尔％的二氯二 ( 三苯基膦 )- 钯 (II)。将该反应容器密封并使用微波加热到 150℃历时 5 分钟。冷却后，将反应混合物蒸干。将残余物溶解在 2.5ml 的甲醇中，然后通过制备性 LC 进行纯化，得到 14.6mg 的 2- 氨基 -3-(4-{2- 氨基 -6-[2， 2， 2- 三氟 -1-(4- 甲基苯基 )- 乙氧基 ]- 嘧啶 -4- 基 }- 苯 1 基 )- 丙酸。 H NMR(300MHz， CD3OD)δ7.94(d， J ＝ 8.20Hz， 2H)， 7.47(d， J ＝ 7.24Hz， 4H)，
     7.27(d， J ＝ 8.01Hz， 2H)6.80(s， 1H)， 6.75(m， 1H)， 4.30(t， 1H)， 3.21-3.44(m， 2H)， 2.37(s， 3H)。
     6.10(2S)-2- 氨基 -3-(4-(2- 氨基 -6-(1- 环己基 -2， 2， 2- 三氟乙氧基 ) 嘧啶 -4- 基 ) 苯基 ) 丙酸的合成
     将环己烷甲醛 (0.9g， 5mmol) 溶解在 10ml 的含水的 1， 4- 二氧杂环己烷中，向其中加入 200mg(10mmol) 的氢化硼钠。反应在室温下进行过夜。在反应完成后，加入 5ml 的 10％ HCl 溶液并用乙酸乙酯提取产物。分离有机层并用硫酸钠干燥。蒸发有机溶剂，得到 0.8g 的 1- 环己基 -2， 2， 2- 三氟 - 乙醇，收率 88％。
     将 NaH(80mg， 60％， 3.0mmol) 加入到 1- 环己基 -2， 2， 2- 三氟 - 乙醇 (182mg， 1mmol) 在 10ml 的无水 THF 中的溶液中。将混合物搅拌 20 分钟，加入 2- 氨基 -4， 6- 二氯 - 嘧啶 (164mg， 1mmol)，然后将反应混合物在 70℃加热 1 小时。冷却后，加入 5ml 的水，并使用乙酸乙酯 (20ml) 提取产物。有机层用硫酸钠干燥。通过旋转蒸发除去溶剂，得到 202mg 的 4- 氯 -6-[1- 环己基 -2， 2， 2- 三氟 - 乙氧基 ]- 嘧啶 -2- 基胺，收率 65％。
     在微波小瓶中加入 4- 氯 -2- 氨基 -6-[1- 环己烷 -2， 2， 2- 三氟 - 乙氧基 ]- 嘧啶 (33mg， 0.1mmol)、 4- 硼基 -L- 苯基丙氨酸 (31mg， 0.15mmol) 和 1ml 的乙腈、 0.7ml 的水，向上述溶液中加入 0.3ml 的碳酸钠水溶液 (1M)，然后加入 5 摩尔％的二氯二 ( 三苯基膦 )- 钯 (II)。将该反应容器密封并用微波加热到 150 ℃历时 5 分钟。冷却后，将反应混合物蒸干，将残余物溶解在 2.5ml 的甲醇中，产物通过制备性 LC 进行纯化，得到 4.9mg 的 2- 氨基 -3-{4-[2- 氨基 -6-(1- 环己基 -2， 2， 2- 三氟 - 乙氧基 ]- 嘧啶 -4- 基 }- 苯基 )- 丙酸。 1 H NMR(300MHz， CD3Cl)δ7.95(d， J ＝ 8.39Hz， 2H)， 7.49(d， J ＝ 8.39Hz， 2H)， 6.72(s， 1H)， 5.90(m， 1H)， 4.33(t， 1H)， 3.21-3.44(m， 2H)， 1.73-2.00(m， 6H)， 1.23-1.39(m， 5H)。
     6.11(S)-2- 氨基 -3-(4-(6-(2- 氟苯氧基 ) 嘧啶 -4- 基 ) 苯基 ) 丙酸的合成
     将 NaH(80mg， 60％， 3.0mmol) 加入到 2- 氟苯酚 (112mg， 1mmol) 在 10ml 的无水 THF 中的溶液中。将混合物搅拌 20 分钟，加入 4， 6- 二氯 - 嘧啶 (149mg， 1mmol)，然后将反应混合物在 70℃加热 1 小时。冷却后，加入 5ml 的水，并使用乙酸乙酯 (20ml) 提取产物。有机层用硫酸钠干燥。通过旋转蒸发除去溶剂，得到 146mg 的 4- 氯 -6-(2- 氟苯氧基 )- 嘧啶，
     收率 65％。
     在微波小瓶 (2ml) 中加入 4- 氯 -6-[2- 氟苯氧基 ]- 嘧啶 (33mg， 0.1mmol)、 4- 硼基 -L- 苯基丙氨酸 (31mg， 0.15mmol) 和 1ml 的乙腈、 0.7ml 的水，向上述溶液中加入 0.3ml 的碳酸钠水溶液 (1M)，然后加入 5 摩尔％的二氯二 ( 三苯基膦 )- 钯 (II)。将该反应容器密封并用微波加热到 150℃历时 5 分钟。冷却后，将反应混合物蒸干，将残余物溶解在 2.5ml 的甲醇中，产物通过制备性 LC 进行纯化，得到 4.9mg 的 2- 氨基 -3-{4-[2- 氨基 -6-(1-2- 氟苯 1 基 -2， 2， 2- 三氟 - 乙氧基 ]- 嘧啶 -4- 基 }- 苯基 )- 丙酸。 H NMR(400MHz， CD3OD)δ8.74(s， 1H)， 8.17(d， J ＝ 8.06Hz， 2H)， 7.63(s， 1H)， 7.50(d， J ＝ 8.06Hz， 2H)， 7.30(m， 5H)， 4.33(m， 1H)， 3.34(m， 1H)。
     6.12(2S)-2- 氨基 -3-(4-(4-(3-(4- 氯苯基 ) 哌啶 -1- 基 )-1， 3， 5- 三嗪 -2- 基 ) 苯基 ) 丙酸的合成
     在 0℃将 3-(4- 氯苯基 ) 哌啶 (232mg， 1mmol) 加入到 2， 4- 二氯三嗪 (149.97mg， 1mmol) 和 300mg 的二异丙基乙基胺在 10ml 的 THF 中的溶液中。将形成的混合物回温到室温并搅拌 1 小时。将产物用乙酸乙酯 (3x20ml) 提取。分离有机层并用硫酸钠干燥。蒸发有机溶剂，得到 328mg 的 2- 氯 -4-[3-(4- 氯苯基 )- 哌啶 -1- 基 ]-[1， 3， 5] 三嗪。
     在微波小瓶中加入 2- 氯 -4-[3-(4- 氯苯基 )- 哌啶 -1- 基 ]-[1， 3， 5] 三嗪 (62mg， 0.2mmol)、 4- 硼基 -L- 苯基丙氨酸 (60mg， 0.3mmol)、 1ml 的乙腈和 0.7ml 的水。向上述溶液中加入碳酸钠水溶液 (0.6ml ； 1M)，然后加入 5 摩尔％的二氯二 ( 三苯基膦 )- 钯 (II)。将该反应容器密封并用微波加热到 150 ℃历时 5 分钟。冷却后，将反应混合物蒸干。将残余物溶解在 2.5ml 的甲醇中，然后通过制备性 LC 进行纯化，得到 5.1mg 的 2- 氨基 -3-(4-{4-[3-(4- 氯苯基 )- 哌啶 -1- 基 ]-[1， 3， 5] 三嗪 -2- 基 }- 苯基 )- 丙酸。
     HNMR(400MHz， CD3Cl)δ8.58(d， 2H)， 8.05(d， 2H)， 7.47(m， 5H)， 4.96(m， 1H)， 4.23(m， 2H)， 3.21-3.44(m， 4H)， 2.37(m， 5H)。
     6.13(2S)-2- 氨基 -3-(4-(4- 氨基 -6-(2， 2， 2- 三氟 -1- 苯基乙氧基 )-1， 3， 5- 三嗪 -2- 基 ) 苯基 ) 丙酸的合成
     1将 NaH(80mg， 60％， 3.0mmol) 加入到 2， 2， 2- 三氟 -1- 苯基 - 乙醇 (176mg， 1mmol) 在 10ml 的无水 1， 4- 二氧杂环己烷的溶液中。将混合物搅拌 20 分钟，然后在 0 ℃加入到 2- 氨基 -4， 6- 二氯 - 三嗪 (164mg， 1mmol) 在 30ml 的 1， 4- 二氧杂环己烷中的溶液中历时 1 小时。然后将反应混合物回温到室温。在反应完成后，加入 5ml 的水并用乙酸乙酯 (20ml) 提取产物。有机层用硫酸钠干燥。通过旋转蒸发除去溶剂，得到 198mg 的 4- 氯 -6-[2， 2， 2- 三氟 -1- 苯基 - 乙氧基 ]-[1， 3， 5] 三嗪 -2- 基胺，收率 65％。
     在微波小瓶中加入 4- 氯 -6-[2， 2， 2- 三氟 -1- 苯基 - 乙氧基 ]-[1， 3， 5] 三嗪 -2- 基胺 (33mg， 0.1mmol)、 4- 硼基 -L- 苯基丙氨酸 (31mg， 0.15mmol)、 1ml 的乙腈和 0.7ml 的水。向上述溶液中加入碳酸钠水溶液 (0.3ml， 1M，然后加入 5 摩尔％的二氯二 ( 三苯基膦 )- 钯 (II)。将该反应容器密封并用微波加热到 150 ℃历时 5 分钟。冷却后，将反应混合物蒸干。将残余物溶解在 2.5ml 的甲醇中，然后通过制备性 LC 进行纯化，得到 3.2mg 的 2- 氨基 -3-{4-[4- 氨基 -6-(1- 苯基 -2， 2， 2- 三氟 - 乙氧基 ]-[1， 3， 5] 三嗪 -2- 基 ]- 苯基 )- 丙 1 酸。 H NMR(300MHz， CD3OD)δ8.22(d， J ＝ 8.20Hz， 2H)， 7.52(m， 2H)， 7.33(m， 5H)6.62(m， 1H)， 4.19(t， 1H)， 3.1-3.33(m， 2H)。
     6.14(S)-2- 氨基 -3-(5-(4- 氨基 -6-((R)-1-( 萘 -2- 基 ) 乙基氨基 )-1， 3， 5- 三嗪 -2- 基 ) 吡啶 -2- 基 ) 丙酸的合成
     在微波小瓶中加入 6- 氯 -N-[1- 萘 -2- 基 - 乙基 ]-[1， 3， 5] 三嗪 -2， 4- 二胺 (30mg， 0.1mmol)、被 2-boc 保护的 - 氨基 -3-{5-[4， 4， 5， 5， - 四甲基 -[1， 3， 2] 二氧杂硼戊烷 -2- 基 )- 吡啶 -2- 基 -]- 丙酸 (50mg， 0.15mmol)、 1ml 的乙腈和 0.7ml 的水。向上述溶液中加入碳酸钠水溶液 (0.3ml ； 1N)，然后加入 5 摩尔％的二氯二 ( 三苯基膦 )- 钯 (II)。将该反应容器密封并用微波加热到 150℃历时 5 分钟。A 冷却后，将反应混合物蒸干，将残余物溶解在 2.5ml 的甲醇中，然后通过制备性 LC 进行纯化，得到 7mg 的被 boc 保护的 2- 氨基 -3-{5-[4- 氨基 -6-(1- 萘 -2- 基 - 乙基氨基 )-[1， 3， 5] 三嗪 -2- 基 ]- 吡啶 -2- 基 } 丙酸。
     将上述产物 (7.0mg) 溶解在 0.1ml 的 10 ％ TFA/DCM 溶液中历时 2 小时，得到
     1.1mg 的 2- 氨基 -3-{3-[4- 氨基 -6-(1- 萘 -2- 基 - 乙基氨基 )-[1， 3， 5] 三嗪 -2- 基 ]- 吡 1 啶 -2- 基 } 丙酸。 H NMR(300MHz， CD3Cl)δ9.35(d， 1H)， 8.57(m， 1H)， 7.85(m， 4H)， 7.45(m， 4H)， 6.94(s， 1H)， 5.58(m， 1H)， 4.72(m， 2H)， 4.44(m， 1H)， 1.42(d， 3H)。
     6.15(S)-2- 氨基 -3-(3-(4- 氨基 -6-((R)-1-( 萘 -2- 基 ) 乙基氨基 )-1， 3， 5- 三嗪 -2- 基 )-1H- 吡唑 -1- 基 ) 丙酸的合成
     将 6- 氯 -N-[1- 萘 -2- 基 - 乙基 ]-[1， 3， 5] 三嗪 -2， 4- 二胺 (30mg， 0.1mmol)、 2-boc- 保护的氨基 -3-{3-[4， 4， 5， 5， - 四甲基 -[1， 3， 2] 二氧杂硼戊烷 -2- 基 )- 吡唑 -1- 基 ]- 丙酸 (50mg， 0.15mmol)、 1ml 的乙腈和 0.7ml 的水加入到微波小瓶中。将碳酸钠水溶液 (0.3ml and 1N) 加入到微波小瓶中，然后加入 5 摩尔％的二氯二 ( 三苯基膦 )- 钯 (II)。将该反应容器密封并用微波加热到 150℃历时 5 分钟。冷却后，将反应混合物蒸干，将残余物溶解在 2.5ml 的甲醇中，然后通过制备性 LC 进行纯化，得到 6.8mg 的被 boc 保护的 2- 氨基 -3-{3-[4- 氨基 -6-(1- 萘 -2- 基 - 乙基氨基 )[1， 3， 5] 三嗪 -2- 基 ]- 吡唑 -1- 基 } 丙酸。
     将上述产物 (6.8mg) 在 0.1ml10％ TFA/DCM 溶液中搅拌 2 小时，得到 3mg 的 2- 氨基 -3-{3-[4- 氨基 -6-(1- 萘 -2- 基 - 乙基氨基 )-[1， 3， 5] 三嗪 -2- 基 ]- 吡唑 -1- 基 } 丙 1 酸。 H NMR(300MHz， CD3Cl)δ8.52(s， 1H)， 8.21(s， 1H)， 7.74(m， 4H)， 7.36(m， 3H)， 5.35(m， 1H)， 4.72(m， 2H)， 4.44(m， 1H)， 1.55(d， 3H)。
     6.16(S)-2- 氨基 -3-(4′ -(3-( 环戊基氧基 )-4- 甲氧基苄基氨基 ) 联苯 -4- 基 ) 丙酸的合成
     将三乙酰氧基 - 硼氢化钠 (470mg， 2.21mmol) 加入到 4- 溴 - 苯基胺 (252mg， 1.47mmol) 和 3- 环戊基氧基 -4- 甲氧基 - 苯甲醛 (324mg， 1.47mmol) 在 10ml 的 1， 2- 二氯乙烷 (DCE) 的溶液中，加入 0.5ml 的 HOAc。将混合物在室温下搅拌过夜，然后加入 15ml 的 DCE。有机相用水洗涤并用硫酸钠干燥。通过旋转蒸发除去溶剂，得到 656mg 的粗制 (4- 溴 - 苯基 )-(3- 环戊基氧基 -4- 甲氧基 - 苄基 )- 胺。其无需进一步纯化即可用于下一步。
     向 Emrys 微波用工艺小瓶 (2-5ml) 中加入 (4- 溴 - 苯基 )-(3- 环戊基氧基 -4- 甲氧基 - 苄基 )- 胺 (84mg， 0.22mmol)、 4- 硼基 -L- 苯基丙氨酸 (46mg， 0.22mmol) 和 2ml 的乙腈。向上述溶液中加入碳酸钠水溶液 (2ml， 1M)，然后加入 5 摩尔％的二氯二 -( 三苯基膦 )- 钯 (II)。将该反应容器密封并用微波加热到 150℃历时 5 分钟。冷却后，将反应混合物蒸干。将残余物溶解在 2.5ml 的甲醇中并通过制备性 LD 进行纯化，得到 5mg 的 2- 氨基 -3-[4 ′ -(3- 环戊基氧基 -4- 甲氧基 - 苄基氨基 )- 联苯 -4- 基 ]- 丙酸，收率 5 ％。 1 H-NMR(400MHz， DMSO-d6) ： δ1.46(m， 2H)， 1.62(m， 4H)， 3.01(m， 2H)， 3.64(s， 3H)， 4.14(s， 3H)， 4.66(m， 1H)， 6.61(d， 2H)， 6.81(s， 2H)， 6.88(s， 1H)， 7.18(d， 2H)， 7.31(d， 2H)， 7.44(d， 2H)， 7.60(m， 1H)， 8.19(s， 3H)。
     6.17(S)-2- 氨基 -3-(4-(6-(3-( 环戊基氧基 )-4- 甲氧基苄基氨基 ) 嘧啶 -4- 基 ) 苯基 ) 丙酸的合成
     将三乙酰氧基 - 硼氢化钠 (985mg， 4.65mmol) 加入到 6- 氯 - 嘧啶 -4- 基胺 (200mg， 1.55mmol) 和 3- 环戊基氧基 -4- 甲氧基 - 苯甲醛 (682mg， 3.1mmol) 在 25ml 的 DCE 中的溶液中。加入 1ml 的 HOAc，并将混合物在 50℃搅拌过夜，然后加入 25ml 的 DCE。有机相用水洗涤，产物通过柱色谱进行纯化 ( 硅胶，己烷∶ EtOAc 5 ∶ 1)，得到 64mg 的 (6- 氯 - 嘧啶 -4- 基 )-(3- 环戊基氧基 -4- 甲氧基 - 苄基 )- 胺，收率 12％。
     向 Emrys 微波用工艺小瓶 (2-5ml) 中加入 (6- 氯 - 嘧啶 -4- 基 )-(3- 环戊基氧基 -4- 甲氧基 - 苄基 )- 胺 (64mg， 0.19mmol)、 4- 硼基 -L- 苯基丙氨酸 (40mg， 0.19mmol) 和 2ml 的乙腈。向上述溶液中加入碳酸钠水溶液 (2ml， 1M)，然后加入 5 摩尔％的二氯二 -( 三苯基膦 )- 钯 (II)。将该反应容器密封并用微波加热到 150℃历时 5 分钟。冷却后，将反应混合物蒸干。将残余物溶解在 2.5ml 的甲醇中并通过制备性 LD 进行纯化，得到 5.3mg 的 2- 氨基 -3-{4-[6-(3- 环戊基氧基 -4- 甲氧基 - 苄基氨基 )- 嘧啶 -4- 基 ]- 苯基 }- 丙酸，收率 6％。1H-NMR(400MHz， DMSO-d6) ： δ1.46(m， 2H)， 1.62(m， 4H)， 3.01(m， 2H)， 3.08(m， 2H)， 3.65(s， 3H)， 4.20(m， 1H)， 4.46(d， 2H)， 4.68(m， 1H)， 6.82(t， 2H)， 6.87(d， 2H)， 7.40(d， 2H)， 7.90(s， 2H)， 8.25(s， 2H)， 8.6(s， 1H)。
     6.18(S)-2- 氨基 -3-(4-(6-(3-( 环戊基氧基 )-4- 甲氧基苄基氨基 ) 吡嗪 -2- 基 ) 苯基 ) 丙酸的合成
     将三乙酰氧基 - 硼氢化钠 (1315mg， 6.2mmol) 加入到 6- 氯 - 吡嗪 -2- 基 - 胺 (400mg， 3.10mmol) 和 3- 环戊基氧基 -4- 甲氧基 - 苯甲醛 (818mg， 3.7mmol) 在 50ml 的 DCE 中的溶液中，加入 1ml 的 HOAc，并将混合物在 50 ℃搅拌过夜，然后加入另外 50ml 的 DCE。有机相用水洗涤，产物通过柱色谱进行纯化 ( 硅胶，己烷∶ EtOAc 6 ∶ 1)，得到 50mg 的 (6- 氯 - 吡嗪 -2- 基 )-(3- 环戊基氧基 -4- 甲氧基 - 苄基 )- 胺，收率 10％。
     向 Emrys 微波用工艺小瓶 (2-5ml) 中加入 (6- 氯 - 吡嗪 -2- 基 )-(3- 环戊基氧基 -4- 甲氧基 - 苄基 )- 胺 (50mg， 0.15mmol)、 4- 硼基 -L- 苯基丙氨酸 (31mg， 0.15mmol) 和 2ml 的乙腈。向上述溶液中加入碳酸钠水溶液 (2ml， 1M)，然后加入 5 摩尔％的二氯二 ( 三苯基膦 )- 钯 (II)。将该反应容器密封并用微波加热到 150℃历时 5 分钟。冷却后，将反应
     混合物蒸干。将残余物溶解在 2.5ml 的甲醇中，产物通过制备性 LC 进行纯化，得到 5.5mg 的 2- 氨基 -3-{4-[6-(3- 环戊基氧基 -4- 甲氧基 - 苄基氨基 )- 吡嗪 -2- 基 ]- 苯基 }- 丙酸，收率 6％。1H-NMR(400MHz， DMSO-d6) ： δ1.46(m， 2H)， 1.62(m， 4H)， 3.01(m， 2H)， 3.08(m， 2H)， 3.65(s， 3H)， 4.0(m， 1H)， 4.45(d， 2H)， 4.65(m， 1H)， 6.90(s， 2H)， 6.95(s， 1H)， 7.32(d， 2H)， 7.60(t， 1H)， 7.90(s， 1H)， 7.95(d， 2H)， 8.25(s， 1H)。
     6.19(S)-2- 氨基 -3-(4-(5-((4 ′ - 甲基联苯 -2- 基 ) 甲基氨基 ) 吡嗪 -2- 基 ) 苯基 ) 丙酸的合成
     将三乙酰氧基硼氢化钠 (215mg， 1.02mmol) 加入到 4 ′ - 甲基 - 联苯 -2- 甲醛和 5- 溴 - 吡嗪 -2- 基胺在 5ml 的 DCE 中的溶液中，加入 0.1ml 的 HOAc，并将混合物在室温下搅拌过夜，然后加入 5ml 的 DCE。有机相用水洗涤，并通过柱色谱进行纯化 ( 硅胶，己烷∶ EtOAc 6 ∶ 1)，得到 100mg 的 (5- 溴 - 吡嗪 -2- 基 )-(4 ′ - 甲基 - 联苯 -2- 基甲基 )- 胺，收率 55％。
     向 Emrys 微波用工艺小瓶 (2-5ml) 中加入 (5- 溴 - 吡嗪 -2- 基 )-(4′ - 甲基 - 联苯 -2- 基甲基 )- 胺 (25mg， 0.071mmol)、 4- 硼基 -L- 苯基丙氨酸 (22mg， 0.11mmol) 和 1ml 的乙腈。向上述溶液中加入碳酸钠水溶液 (1ml， 1M)，然后加入 5 摩尔％的二氯二 ( 三苯基
     膦 )- 钯 (II)。将该反应容器密封并用微波加热到 150℃历时 5 分钟。冷却后，将反应混合物蒸干。将残余物溶解在 2.5ml 的甲醇中，产物通过制备性 LC 进行纯化，得到 19mg 的 2- 氨基 -3-{4-[6-(3- 环戊基氧基 -4- 甲氧基 - 苄基氨基 )- 吡嗪 -2- 基 ]- 苯基 }- 丙酸，收率 63％。1H-NMR(400MHz， CD3OD) ： δ2.22(s， 3H)， 3.09(m， 1H)， 3.25(m， 1H)， 4.18(t， 1H)， 4.40(s， 2H)， 7.07(d， 2H)， 7.14(m， 3H)， 7.24(m， 4H)， 7.36(m， 1H)， 7.72(d， 2H)， 7.84(s， 1H)， 8.20(d， 1H)。
     6.20(2S)-2- 氨基 -3-(4-(6-(2， 2， 2- 三氟 -1- 苯基乙氧基 )- 嘧啶 -4- 基 ) 苯基 ) 丙酸的合成
     将 NaH(60 ％， 120mg， 3.0mmol) 加入到 2， 2， 2- 三氟 -1- 苯基 - 乙醇 (350mg， 2.03mmol) 在 5ml 的 THF 中的溶液中。将混合物在室温下搅拌 20 分钟。加入 4， 6- 二氯 - 嘧啶 (300mg， 2.03mmol)，然后将反应混合物在 70℃加热 1 小时。冷却后，蒸发 THF 得到残余物，将该残余物溶解在 15ml 的 EtOAc 中，然后用水洗涤，并用硫酸钠干燥。通过旋转蒸发除去溶剂，得到 550mg 的 4- 氯 -6-(2， 2， 2- 三氟 -1- 苯基 - 乙氧基 )- 嘧啶，收率 95％。
     向 Emrys 微波用工艺小瓶 (2-5ml) 中加入 4- 氯 -6-(2， 2， 2- 三氟 -1- 苯基 - 乙氧基 )- 嘧啶 (30mg， 0.11mmol)、 4- 硼基 -L- 苯基丙氨酸 (32mg， 0.16mmol)、 1ml 的乙腈和 0.6ml 的水。向上述溶液中加入碳酸钠水溶液 (0.42ml， 1M)，然后加入 10 摩尔％的 POPd2( 二氢二 -μ- 氯二氯二 ( 二 - 叔丁基单氧亚膦基 -κP) 二钯盐。将该反应容器密封并用微波加热到 120℃历时 30 分钟。冷却后，将反应混合物蒸干。将残余物溶解在 2.5ml 的甲醇中，产物通过制备性 LC 进行纯化，得到 4.8mg 的 2- 氨基 -3-{4-[6-(2， 2， 2- 三氟 -1 苯基 - 乙 1 氧基 )- 嘧啶 -4- 基 ]- 苯基 }- 丙酸，收率 11 ％。 H-NMR(400MHz， CD3OD) ： δ3.20(m， 1H)， 3.40(m， 1H)， 4.25(t， 1H)， 6.82(dd， 1H)， 7.43(m， 5H)， 7.57(s， 1H)， 7.60(m， 2H)， 8.10(d， 2H)， 8.75(s， 1H)。
     6.21(2S)-2- 氨基 -3-(4-(6-(1-(3， 4- 二氟苯基 )-2， 2， 2- 三氟乙氧基 ) 嘧啶 -4- 基 ) 苯基 ) 丙酸的合成
     在 0℃将在 THF 中的四丁基氟化铵 (TBAF ： 0.1m1， 1M) 加入到 3， 4- 二氟 - 苯甲醛 (1.42g， 10mmol) 和 ( 三氟甲基 ) 三甲基硅烷 (1.70g， 12mmol) 在 10ml 的 THF 中的溶液中。
     将混合物回温到室温并搅拌 4 小时。将反应混合物用 12ml 的 1M HCl 处理并搅拌过夜。用二氯甲烷 (3x20ml) 提取产物，合并有机层并通过硅胶垫。蒸发有机溶剂，得到 1.9g 的 1-(3， 4- 二氟 - 苯基 )-2， 2， 2- 三氟 - 乙醇，收率 90％。
     将 NaH(80mg， 60 ％， 3.0mmol) 加入到 1-(3， 4- 二氟 - 苯基 )-2， 2， 2- 三氟 - 乙醇 (212mg， 1mmol) 在 5ml 的 THF 中的溶液中，将混合物在室温下搅拌 20 分钟。加入 4， 6- 二氯 - 嘧啶 (149mg， 1mmol)，然后将反应混合物在 70℃加热 1 小时。冷却后，蒸发 THF。将残余物溶解在 15ml 的 EtOAc 中，然后用水洗涤，用硫酸钠干燥。通过旋转蒸发除去溶剂，得到 230mg 的 4- 氯 -6-[1-(3， 4- 二氟 - 苯基 )-2， 2， 2- 三氟 - 乙氧基 ]- 嘧啶，收率 70％。
     向 Emrys 微波用工艺小瓶 (2-5ml) 中加入 4- 氯 -6-[1-(3， 4- 二氟 - 苯基 )-2， 2， 2- 三氟 - 乙氧基 ]- 嘧啶 (33mg， 0.1mmol)、 4- 硼基 -L- 苯基丙氨酸 (31mg， 0.15mmol)、 1ml 的乙腈和 0.7ml 的水。向上述溶液中加入碳酸钠水溶液 (0.3ml， 1M)，然后加入 5 摩尔％的二氯二 ( 三苯基膦 )- 钯 (II)。将该反应容器密封并用微波加热到 150℃历时 5 分钟。冷却后，将反应混合物蒸干。将残余物溶解在 2.5ml 的甲醇中，然后通过制备性 LC 进行纯化，得到 10mg 的 2- 氨基 -3-(4-{6-[1-(3， 4- 二氟 - 苯基 )-2， 2， 2- 三氟 - 乙氧基 ]- 吡啶 -4- 基 }- 苯 1 基 )- 丙酸，收率 21％。 H-NMR(400MHz， CD3OD) ： δ3.11(m， 1H)， 3.27(m， 1H)， 4.19(dd， 1H)， 6.78(q， 1H)， 7.26(m， 2H)， 7.35(d， 3H)， 7.49(m， 2H)， 8.02(d， 2H)， 8.66(s， 1H)。
     6.22(S)-2- 氨基 -3-(4-(5-(3-( 环戊基氧基 )-4- 甲氧基苄基氨基 )- 吡嗪 -2- 基 ) 苯基 ) 丙酸的合成
     将 3- 环戊基氧基 -4- 甲氧基 - 苯甲醛 (417mg， 1.895mmol)、 2- 氨基 -5- 溴吡嗪 (300mg， 1.724mmol)、三乙酰氧基硼氢化钠 (1.5eq) 和冰醋酸 (3eq) 在二氯甲烷 (10ml) 中的混合物在室温下搅拌过夜。然后将反应混合物用乙酸乙酯稀释，并用水洗涤。有机层用 MgSO4 干燥并过滤。将滤液浓缩，得到粗产物，其通过 ISCO 进行纯化 (SiO2 急骤柱色谱 )( 己烷 / 乙酸乙酯＝ 100/0 到 3/2)，得到约 400mg 的 6- 溴 - 吡嗪 -2- 基 )-(3- 环戊基氧基 -4- 甲氧基 - 苄基 )- 胺。收率： 61％。
     向 5ml 的微波小瓶中加入上述的 6- 溴 - 吡嗪 -2- 基 )-(3- 环戊基氧基 -4- 甲氧基 - 苄基 )- 胺 (50mg， 0.132mmol)、 4- 硼基 -L- 苯基丙氨酸 (30mg， 0.144mmol)、 Na2CO3(31mg， 0.288mmol)、乙腈 (2ml) 和水 (2ml)。加入二氯二 ( 三苯基膦 )- 钯 (5mg， 0.007mmol)。将小瓶盖盖并在微波照射下在 150℃搅拌 5 分钟。将反应混合物冷却，过滤通过针筒式滤器，然后通过反相制备性 HPLC 进行分离，使用 YMC-Pack ODS 100x30mm ID 柱 (MeOH/H2O/TFA 溶剂系统 )。将纯级分真空浓缩。然后将产物悬浮在 5ml 的水中，冷冻和冻干，得到标题化合 1 物，为三氟盐 (12mg， 20％ )。 H NMR(CD3OD)δ8.41(s， 1H)， 7.99(s， 1H)， 7.83(d， J ＝ 9.0Hz， 2H)， 7.37(d， J ＝ 6.0Hz， 2H)， 6.90-6.95(m， 3H)， 4.78(m， 1H)， 4.50(s， 2H)， 4.22-4.26(m， 1H)， 3.79(s， 3H)， 3.12-3.39(m， 2H)， 1.80-1.81(m， 6H)， 1.60(m， 2H)。M+1 ＝ 463.
     6.23(S)-2- 氨基 -3-(4-(5-((3-( 环戊基氧基 )-4- 甲氧基苄基 )-( 甲基 ) 氨基 ) 吡嗪 -2- 基 ) 苯基 ) 丙酸的合成
     向 (6- 溴 - 吡嗪 -2- 基 )-(3- 环戊基氧基 -4- 甲氧基 - 苄基 )- 胺 (70mg， 0.185mmol) 在乙腈 (10ml) 中的溶液中加入甲醛 (18.5mmol) 和氰基硼氢化钠 (17mg， 0.278mmol)。然后，滴加浓 HCl 水溶液，直到 pH 约等于 2。将混合物在室温下搅拌约 6 小时。然后用乙酸乙酯稀释，用水洗涤 (3X5ml)，用 MgSO4 干燥。真空除去溶剂，得到 70mg 的粗产物 5-( 溴 - 吡嗪 -2- 基 )-(3- 环戊基氧基 -4- 甲氧基 - 苄基 )- 甲基 - 胺 (95％粗制收率 )。其无需进一步纯化即可用于后面步骤。
     使 5-( 溴 - 吡嗪 -2- 基 )-(3- 环戊基氧基 -4- 甲氧基 - 苄基 )- 甲基 - 胺 (37mg， 0.094mmol) 经历如上所述的 Suzuki 偶合反应，得到 6mg 的标题化合物。收率： 1 13 ％。 H NMR(CD3OD)δ8.59(s， 1H)， 8.12(s， 1H)， 7.85(d， 2H)， 7.39(d， 2H)， 6.81-6.91(m， 3H)， 4.72(m， 1H)， 4.30(m， 1H)， 3.79(s， 3H)， 3.20-3.40(m， 2H)， 3.18(s， 3H)， 3.79(s， 3H)， 1.80(m， 6H)， 1.58(m， 2H)。M+1 ＝ 477。
     6.24(S)-2- 氨基 -3-(4-(5-((1， 3- 二甲基 -1H- 吡唑 -4- 基 ) 甲基氨基 ) 吡嗪 -2- 基 ) 苯基 ) 丙酸的合成
     将 1， 3- 二甲基 -1H- 吡唑 -4- 甲醛 (142mg， 1.145mmol)、 2- 氨基 -5- 溴吡嗪 (200mg， 1.149mmol)、硼烷三甲基胺复合物 (126mg， 1.73mmol) 和冰醋酸 (137mg， 2.29mmol)在无水甲醇 (3ml) 中的混合物在室温下搅拌过夜。然后用乙酸乙酯稀释反应混合物，用水洗涤，用 MgSO4 干燥并过滤。将滤液浓缩，得到 300mg 的 (5- 溴 - 吡嗪 -2- 基 )-(1， 3- 二甲基 -1H- 吡唑 -4- 基甲基 ) 胺为粗产物，其无需进一步纯化即可用于下一步反应。粗制收率： 93％。
     使 (5- 溴 - 吡嗪 -2- 基 )-(1， 3- 二甲基 -1H- 吡唑 -4- 基甲基 ) 胺 (40mg， 0.142mmol) 经历如上所述的 Suzuki 偶合反应，得到 19mg 的标题化合物。收率： 36.5 ％。 1 H NMR(CD3OD)δ8.48(s， 1H)， 8.05(s， 1H)， 7.87(d， 2H)， 7.39(d， 2H)， 6.10(s， 1H)， 4.81(s， 2H)， 4.30(m， 1H)， 3.83(s， 3H)， 3.11-3.38(m， 2H)， 2.10(s， 3H)。M+1 ＝ 367.
     6.25(S)-2- 氨基 -3-(4-(4- 氨基 -6-((S)-1-( 萘 -2- 基 ) 乙基氨基 )-1， 3， 5- 三嗪 -2- 基氧基 ) 苯基 ) 丙酸的合成
     向 250ml 的烧瓶中加入 R-(+)-1-(2- 萘基 ) 乙基胺 (400mg， 2.424mmol)、 2- 氨基 -4， 6- 二氯三嗪 (373mg， 2.181mmol)、无水 1， 4- 二氧杂环己烷 (40ml) 和 N， N- 二异丙基乙基胺 (1ml， 5.732mmol) 并加热至温和回流历时约 4 小时。小心地监控反应以免形成被二取代的产物。( 观察到反应时间越长，则形成越多的被二取代的产物 )。4 小时后，将反应混合物冷却并减压除去溶剂。将水加入到残余物中，将溶液进行声处理 2-3 分钟。然后过滤溶剂，用水洗涤并干燥，得到 540mg(83％粗收率 ) 的单盐酸盐， 6- 氯 -N-(1- 萘 -2- 基 - 乙基 )-[1， 3， 5] 三嗪 -2， 2- 二胺，其无需进一步纯化即可用于后面步骤。
     将 6- 氯 -N-(1- 萘 -2- 基 - 乙基 )-[1， 3， 5] 三嗪 -2， 2- 二胺 (90mg， 0.300mmol)、 2- 叔丁氧基羰基氨基 -3-(4- 羟基 - 苯基 )- 丙酸叔丁基酯 (102mg， 0.303mmol) 和碳酸钾 (82mg， 0.594mmol) 在异丙醇 (8ml) 中的混合物回流过夜。减压除去溶剂并将残余物悬浮在乙酸乙酯中。将固体过滤并用乙酸乙酯洗涤。将滤液浓缩，然后溶解在甲醇 / 水 (90 ∶ 10) 的混合物中，并用过制备性 LC 进行纯化，使用 Sunfire C18 OBD 100x30mm ID 柱 (MeOH/H2O/TFA 溶剂系统 )。将纯级分合并，并浓缩，得到 50mg 的纯产物， 3-{4-[4- 氨基 -6-(1- 萘 -2- 基 - 乙基氨基 )-[1， 3， 5] 三嗪 -2- 基氧基 ]- 苯基 }2- 叔丁氧基羰基氨基 - 丙酸叔丁基酯， (28％收率 )。
     将上述产物 (50mg， 0.083mmol) 溶解在三氟乙酸 / 二氯甲烷 (8ml/2ml) 中并在室温下搅拌过夜。减压除去溶剂。然后将残余物再溶解甲醇 / 水 (90 ∶ 10) 的混合物中并通过制备性 LC 进行纯化，使用 SunfireC18 OBD 100x30mm ID 柱 (MeOH/H2O/TFA 溶剂系统 )。将纯级分合并，并减压浓缩，得到约 4ml，其经过冷冻和冻干，得到 4mg 的标题化合物，为 TFA 1 盐 (11％收率 )。 H NMR(CD3OD)δ7.37-7.81(m， 8H)， 7.19(m， 2H)， 6.98(m， 1H)， 5.37(m， 1H)， 4.19(m， 1H)， 3.17-3.38(m， 2H)， 1.56(m， 3H)。M+1 ＝ 445。
     6.26(S)-2- 氨基 -3-(4-(4- 氨基 -6-((R)-1-( 联苯 -2- 基 )-2， 2， 2- 三氟乙氧基 )-1， 3， 5- 三嗪 -2- 基 ) 苯基 ) 丙酸的合成
     将 1- 联苯 -2- 基 -2， 2， 2- 三氟 - 乙酮 (300mg， 1.2mmol)、硼烷四氢呋喃复合物 (1.2ml， 1M，在 THF 中， 1.2mmol) 和 S-2- 甲基 -CBS- 噁唑硼烷 (0.24ml， 1M，在甲苯中， 0.24mmol) 在 THF(8ml) 中的混合物在室温下搅拌过夜。加入几滴浓 HCl 并将混合物搅拌 30 分钟。产物通过 SiO2 色谱进行纯化 ( 己烷 / 乙酸乙酯＝ 100/0 到 3/1)，得到 290mg 的 1- 联苯 -2- 基 -2， 2， 2- 三氟 - 乙醇 (96％收率 )。
     将上述的醇 (290mg， 1.151mmol) 溶解在无水 THF(10ml) 中。一次性加入氢化钠 (55mg， 1.375mmol)，并将混合物在室温下搅拌 30 分钟。然后将溶液转移到烧瓶中，该烧瓶含有 2- 氨基 -4， 6- 二氯 - 三嗪 (190mg， 1.152mmol) 在 THF(20ml) 中的悬浮液。将混合物在室温下搅拌过夜。加入水，然后用乙酸乙酯稀释混合物。有机层用水洗涤，用 MgSO4 干燥，然后浓缩，得到 400mg 的粗产物， 2- 氨基 -4-(1- 联苯 -2- 基 -2， 2， 2- 三氟 - 乙氧基 -6- 氯 - 三嗪。
     使 2- 氨基 -4-(1- 联苯 -2- 基 -2， 2， 2- 三氟 - 乙氧基 -6- 氯 - 三嗪 (40mg， 0.105mmol) 经历如上所述的相同的 Suzuki 偶合反应，得到 5mg 的标题化合物。收率： 1 9.4％。 H NMR(CD3OD)δ8.18(d， 2H)， 7.86(m， 1H)， 7.40-7.52(m， 9H)， 7.32(m， 1H)， 7.07(m， 1H)， 4.32(m， 1H)， 3.22-3.41(m， 2H)。M+1 ＝ 510.
     6.27(2S)-2- 氨基 -3-(4-(4- 氨基 -6-(1-(6， 8- 二氟萘 -2- 基 ) 乙基氨基 )-1， 3， 5- 三嗪 -2- 基 ) 苯基 ) 丙酸的合成
     在三颈烧瓶中，在氮气中向无水 THF(60ml) 中加入碘化铜 (CuI)(299mg， 1.515mmol) 和氯化锂 (LiCl)(145mg， 3.452mmol)。将混合物在室温下搅拌直到获得浅黄色溶液。冷却到 0℃后，加入甲基乙烯基酮和氯三甲基硅烷，将混合物搅拌直到观察到橙色 ( 约 20 分钟 )。冷却到约 -40 ℃后，慢慢地加入在 THF(0.5M) 中的 3， 5- 二氟苯基溴化镁 (27.65ml， 13.8mmol)。将反应混合物在大约 -40℃搅拌 0.5 小时，然后除去冷浴，并使温度
     慢慢地回温到室温。蒸发溶剂并将残余物用己烷 (4x20ml) 提取。将收集的提取物用冷的 10％ NaHCO3 水溶液洗涤并用 Na2SO4 干燥。减压蒸发溶剂得到 3， 5- 二氟苯基 -1- 三甲基甲硅烷基氧基烯烃 (2.03g， 7.929mmol， 57％粗品收率 )，其无需进一步纯化即可用于后面的反应。
     在氮气气氛中将粉状碳酸钙 (3.806g， 38.06mmol) 和乙基乙烯基醚 (2.184g， 30.329mmol) 加入到硝酸高铈铵 (10.430g， 19.033mmol) 在甲醇 (40ml) 中的溶液中。在剧烈搅拌下向得到的悬浮液中滴加在上面制备的 3， 5- 二氟苯基 -1- 三甲基甲硅烷基氧基烯烃 (2.03g， 7.929mmol) 在乙基乙烯基 (6ml， 4.518g， 62.75mmol) 中的溶液，并将混合物在室温下搅拌过夜。将固体过滤通过硅藻土层，将滤液浓缩到其初始体积的四分之一。在剧烈搅拌下，将得到的浓稠的混合物慢慢地倾入到 1 ∶ 1v/v 的乙醚 -10％ NaHCO3 水溶液中。滤出沉淀物，分离醚性溶液，减压蒸发溶剂，得到透明液体。在 0℃将所得液体 ( 非环状和环状的乙酸酯的混合物 ) 在甲醇 (4ml) 中的溶液滴加到二氯二氰基苯醌 (1.77g， 7.797mmol) 在 80％的硫酸水溶液中。在加入完成后，除去冰浴并继续搅拌 30 分钟。将混合物倾入到冰水中；将所得的褐色沉淀物过滤并溶解在丙酮中。加入硅胶制得短筛，粗产物进行色谱纯化 ( 己烷 / 乙酸乙酯＝ 100/0 到 3/1)，得到 760mg 的 1-(5， 7- 二氟 - 萘 -2- 基 )- 乙酮 (48％两步收率 )，为浅黄色固体。
     将上述的酮 (760mg， 3.689mmol) 溶解在甲醇 (40ml) 中。然后加入乙酸铵 (2.841g， 36.896mmol)、氰基硼氢化钠 (232mg， 3.389mmol) 和分子筛 ( 7.6g)。将混合物在室温下搅拌 2 天。将固体过滤并浓缩滤液。将残余物溶解在水中，并滴加浓 HCl 水溶液直到 pH 约等于 2。然后用乙酸乙酯提取混合物以除去未反应的酮和其它副产物。使用氢氧化钠水溶液 (1M) 将水层碱化到 pH 约等于 10，用二氯甲烷提取，并合并有机层，用硫酸镁干燥并浓缩，得到 290mg 的 1-(5， 7- 二氟 - 萘 -2- 基 )- 乙基胺 (38％收率 )。
     将新制备的胺 (290mg， 1.401mmol) 直接加入到 2- 氨基 -4， 6- 二氯三嗪 (277mg， 1.678mmol) 在无水 1， 4- 二氧杂环己烷 (60ml) 中的悬浮液中，然后加入 N， N- 二异丙基乙基胺 (1ml， 5.732mmol)。将混合物加热至温和回流历时约 3 小时。然后将反应混合物冷却，并减压除去溶剂。向残余物中加入水并对混合物进行声处理 2-3 分钟。将所得的固体过滤并用水洗涤和干燥，得到 395mg(60％粗品收率 ) 的 6- 氯 -N-[1-(6， 8- 二氟 - 萘 -2- 基 - 乙基 )-[1， 3， 5] 三嗪 -2， 4- 二胺，其无需进一步纯化即可用于后面步骤。
     使如上制备的一 - 氯化物 (48mg， 0.144mmol) 经历如上所述的相同的 Suzuki 偶合反应，得到 12mg 的标题产物。收率： 17.9 ％。1H NMR(CD3OD)δ8.14-8.22(m， 2H)， 8.05(m， 1H)， 7.92(m， 1H)， 7.63(m， 1H)， 7.32-7.51(m， 3H)， 7.11(m， 1H)， 5.48(m， 1H)， 4.13(m， 1H)， 3.13-3.41(m， 2H)， 1.66(d， 3H)。M+1 ＝ 465.
     6.28(2S)-2- 氨基 -3-(4-(4- 氨基 -6-(2， 2， 2- 三氟 -1-(3′ - 甲基联苯 -2- 基 ) 乙氧基 )-1， 3， 5- 三嗪 -2- 基 ) 苯基 ) 丙酸的合成
     在 0℃向 3′ - 甲基 -1- 联苯 -2- 甲醛 (500mg， 2.551mmol) 和三氟甲基三甲基硅烷 (435mg， 3.061mmol) 在 THF(3ml) 中的混合物中加入四丁基氟化铵 (13mg， 0.05mmol)。将温度回温到室温。将混合物在室温下搅拌 5 小时，然后用乙酸乙酯稀释，用水和盐水洗涤并用 MgSO4 干燥。减压除去溶剂，得到 660mg(97％粗品收率 ) 的 2， 2， 2- 三氟 -1-(3′ - 甲基 - 联苯 -2- 基 )- 乙醇，为粗产物，其无需进一步纯化即可用于后面步骤。
     将如上制备的醇 (660mg， 2.481mmol) 溶解在无水 1， 4- 二氧杂环己烷 (10ml) 中。一次性加入氢化钠 (119mg， 60％，在矿物油中， 2.975mmol) 并将混合物在室温下搅拌 30 分钟。将溶液转移到含有 2- 氨基 -4， 6- 二氯 - 三嗪 (491mg， 2.976mmol) 在 1， 4- 二氧杂环己烷并将残余物悬浮 (70ml) 中的悬浮液的烧瓶中。将混合物在室温下搅拌 6 小时。除去溶剂，在乙酸乙酯中，其用水洗涤，用 MgSO4 干燥，然后浓缩，得到 790mg 的粗产物，其含有约 57％的所需产物 2- 氨基 -4-(1-(3′ - 甲基 - 联苯 -2- 基 -2， 2， 2- 三氟 - 乙氧基 -6- 氯 - 三嗪和约 43％的副产物 ( 被二取代的产物 )。粗产物无需进一步纯化即可使用。
     使 2- 氨基 -4-(1-(3′ - 甲基 - 联苯 -2- 基 -2， 2， 2- 三氟 - 乙氧基 -6- 氯 - 三嗪 (98mg， 57％纯度， 0.142mmol) 经历如上所述的相同的 Suzuki 偶合反应，得到 9mg 的标题化 1 合物。收率： 12.0％。 H NMR(CD3OD)δ8.09(m， 2H)， 7.85(m， 1H)， 7.50(m， 2H)， 7.28-7.43(m， 5H)， 7.17-7.26(m， 2H)， 7.18(m， 1H)， 3.85(m， 1H)， 3.08-3.44(m， 2H)， 2.33(s， 3H)。M+1 ＝ 524.
     6.29(S)-2- 氨基 -3-(4-(5-(3， 4- 二甲氧基苯基氨基甲酰基 )- 吡嗪 -2- 基 ) 苯基 ) 丙酸的合成
     在 -5℃向 3， 4- 二甲氧基苯基胺 (0.306g， 2mmol) 和三乙基胺 (0.557ml， 4mmol) 在二氯甲烷 (20ml) 中的混合物中加入 5- 氯 - 吡嗪 -2- 羰基氯 (0.354g， 2mmol)。将混合物在室温下搅拌 3 小时。将混合物用二氯己烷 (20ml) 稀释，用饱和 NaHCO3(20ml)、盐水 (20ml) 洗涤，干燥 ( 无水 Na2SO4) 并浓缩，得到 0.42g 的粗产物 5- 氯 - 吡嗪 -2 羧酸 (3， 4- 二甲氧
     基 - 苯基 )- 酰胺，直接用于后面的反应。
     将 5- 氯 - 吡嗪 -2- 羧酸 (3， 4- 二甲氧基 - 苯基 )- 酰胺 (0.18g， 0.61mmol)、 L- 对 - 硼基苯基丙氨酸 (0.146g， 0.70mmol)、 CH3CN(2.5ml)、 H2O(2.5ml)、 Na2CO3(0.129g， 1.22mmol) 合并在微波小瓶中。将混合物密封并在 150℃保持 5 分钟。将混合物过滤并浓缩。将残余物溶解在甲醇 / 水 (1 ∶ 1) 中并通过制备性 HPLC 进行纯化，使用 MeOH/H2O/TFA 作为溶剂，得到 2- 氨基 -3-{4-[5-(3， 4- 二甲氧基 - 苯基氨基甲酰基 )- 吡嗪 -2- 基 ]- 苯基 }- 丙酸，为 TFA 盐 (HPLC ：方法 A，保留时间＝ 2.846min， LCMS M+1 423).1H NMR(400MHz， DMSO-d6)δ3.10-3.30(m， 2H)， 3.72(d， 6H)， 4.05(m， 1H)， 7.42-7.62(m， 4H)， 8.22(m， 3H)， 9.30(m， 2H)。
     6.30(S)-2- 氨基 -3-(4-(2- 氨基 -6-(4-(2-( 三氟甲基 ) 苯基 )- 哌啶 -1- 基 ) 嘧啶 -4- 基 ) 苯基 ) 丙酸的合成
     将 2- 氨基 -4， 6- 二氯嘧啶 (0.164g， 1mmol)、 4-(2- 三氟甲基 - 苯基 )- 哌啶盐酸盐 (0.266g， 1mmol) 和碳酸铯 (0.684g， 2.1mmol) 溶解在位于微波小瓶中的 1， 4- 二氧杂环己烷 (5ml) 和 H2O(5ml) 的混合物中。将该混合物在微波反应器中在 210℃搅拌 20 分钟。除去溶剂并将残余物溶解在含 5％甲醇的 CH2Cl2(20ml) 中，用 Na2SO4 干燥并浓缩，得到粗制中间体， 4- 氯 -6-[4-(2- 三氟甲基 - 苯基 )- 哌啶 -1- 基 ]- 嘧啶 -2- 基胺 (0.42g)，其直接用于后面的步骤。
     将粗制中间体 (0.42g)、 L- 对 - 硼基 - 苯基丙氨酸 (0.209g， 1mmol)、碳酸钠 (0.210g， 2mmol) 和二氯二 ( 三苯基膦 )- 钯 (II)(35mg， 0.05mmol) 溶解在位于 10ml 微波中的 MeCN(2.5ml) 和 H2O(2.5ml) 的混合物中。将小瓶密封并在微波反应器中在 150℃搅拌 6 分钟。将混合物过滤，浓缩滤液，将残余物溶解在 MeOH 和 H2O(1 ∶ 1) 中并通过制备性 HPLC 进行纯化，使用 MeOH/H2O/TFA 作为溶剂系统，得到 2- 氨基 -3-(4-{4-(2- 三氟甲基 - 苯基 )- 哌啶 -1- 基 ]- 嘧啶 -4- 基 }- 苯基 )- 丙酸，为 TFA 盐。HPLC ：方法 A，保留时间＝ 3.203min. 1 LCMS M+1486. H NMR(400MHz， CD3OD)δ1.80-2.20(m， 5H)， 3.0-3.16(m， 2H)， 3.22-3.42(m， 2H)， 4.22(t， 1H)， 4.42-4.54(m， 1H)， 5.22-5.34(m， 1H)，
     6.80(s， 1H)， 7.40(t， 1H)， 7.50-7.60(m， 4H)， 7.68(d， 1H)， 7.82(d， 2H)。
     6.31(S)-2- 氨基 -3-(4-(2- 氨基 -6-((R)-1-( 萘 -2- 基 ) 乙基氨基 ) 嘧啶 -4- 基 ) 苯基 ) 丙酸的合成
     将 2- 氨基 -4， 6- 二氯嘧啶 (0.164g， 1mmol)、 (R)-(+)-1-(2- 萘基 )- 乙基胺 (0.171g， 1mmol) 和碳酸铯 (0.358g， 1.1mmol) 溶解在位于 20ml 微波小瓶中的 1， 4- 二氧杂环己烷 (4ml) 和 H2O(4ml) 的混合物中。将小瓶密封并在微波反应器中在 210 ℃搅拌 20 分钟。除去溶剂，并将残余物溶解在 CH2Cl2(50ml) 中，用水 (20ml)、盐水 (20ml) 洗涤，干燥 (Na2SO4) 并浓缩，得到粗制中间体 6- 氯 -N-4-( 萘 -2- 基 - 乙基 )- 嘧啶 -2， 4- 二胺 (0.270g)，其直接用于以下步骤。
     将粗制中间体 (0.27g)、 L- 对 - 硼基 - 苯基丙氨酸 (0.209g， 1mmol)、碳酸钠 (0.210g， 2mmol) 和二氯二 ( 三苯基膦 )- 钯 (II)(25mg， 0.036mmol) 溶解在位于微波小瓶中的 MeCN(2.5ml) 和 H2O(2.5ml) 的混合物中。将小瓶密封并在微波反应器中在 150 ℃
     搅拌 6 分钟。将混合物过滤，浓缩滤液，将残余物溶解在 MeOH 和 H2O(1 ∶ 1) 中并通过制备性 HPLC 进行纯化，使用 MeOH/H2O/TFA 作为溶剂系统，得到 2- 氨基 -3-{4-[2- 氨基 -6-(1- 萘 -2- 基 - 乙基氨基 )- 嘧啶 -4- 基 ]- 苯基 }- 丙酸，为 TFA 盐。HPLC ：方法 A， 1 保留时间＝ 3.276min.LCMS M+1 428. H NMR(400MHz， CD3OD)δ1.68(d， 3H)， 3.22-3.40(m， 2H)， 4.30(t， 1H)， 5.60(q， 1H)， 6.42(s， 1H)， 7.42-7.54(m， 5H)， 7.72(m， 2H)， 7.82-7.84(m， 4H)。
     6.32(S)-2- 氨基 -3-(4-(2- 氨基 -6-( 甲基 ((R)-1-( 萘 -2- 基 ) 乙基 ) 氨基 ) 嘧啶 -4- 基 ) 苯基 ) 丙酸的合成
     将 2- 氨基 -4， 6- 二氯嘧啶 (0.327g， 2mmo1)、甲基 -(1- 萘 -2- 基 - 乙基 )- 胺 (0.360g， 2mmol) 和碳酸铯 (0.717g， 2.2mmol) 溶解在位于 20ml 微波小瓶中的 1， 4- 二氧杂环己烷 (7.5ml) 和 H2O(7.5ml) 的混合物中。将小瓶密封并在微波反应器中在 210℃搅拌 20 分钟。除去溶剂并将残余物溶解在 CH2Cl2(50ml) 中，用水 (20ml)、盐水 (20ml) 洗涤，干燥 (Na2SO4) 并浓缩，得到粗制中间体 6- 氯 -N-4- 甲基 -N-4-(1- 萘 -2- 基 - 乙基 )- 嘧啶 -2， 4- 二胺 (0.600g)，其直接用于以下步骤。
     将粗制中间体 (0.30g)、 L- 对 - 硼基 - 苯基丙氨酸 (0.209g， 1mmol)、碳酸钠 (0.210g， 2mmol) 和二氯二 ( 三苯基膦 )- 钯 (II)(25mg， 0.036mmol) 溶解在位于微波小瓶
     中的 MeCN(2.5ml) 和 H2O(2.5ml) 的混合物中。将小瓶密封并在微波反应器中在 150 ℃搅拌 6 分钟。将混合物过滤，浓缩滤液，将残余物溶解在 MeOH 和 H2O(1 ∶ 1) 中并通过制备性 HPLC 进行纯化，使用 MeOH/H2O/TFA 作为溶剂系统，得到 2- 氨基 -3-(4-{2- 氨基 -6-[ 甲基 -(1- 萘 -2- 基 - 乙基 ) 氨基 ]- 嘧啶 -4- 基 }- 苯基 )- 丙酸，为 TFA 盐 (HPLC ：方法 C， 1 保留时间＝ 2.945min， LCMS M+1 442) H NMR(400MHz， CD3OD)δ1.70(m， 3H)， 2.92(s， 3H)， 3.22-3.42(m， 2H)， 4.28(m， 1H)， 6.60(s， 1H)， 6.72(m， 1H)， 7.40-7.92(m， 11H)。
     6.33(S)-2- 氨基 -3-(4-(2- 氨基 -6-((S)-2， 2， 2- 三氟 -1-(6- 甲氧基萘 -2- 基 ) 乙氧基 ) 嘧啶 -4- 基 ) 苯基 ) 丙酸的合成
     在氮气气氛下将 2- 氨基 -4， 6- 二氯嘧啶 (0.096g， 0.6mmol)、 2， 2， 2- 三氟 -1-(6- 甲氧基 - 萘 -2- 基 )- 乙醇 (0.140g， 0.55mmol) 和 NaH(96mg， 0.60mmol) 加入到无水二氧杂环己烷 (20ml) 中。将反应在 80℃搅拌 12 小时，冷却到室温，并用水 (0.2ml) 淬灭。将反应混合物浓缩，并将残余物溶解在 CH2Cl2(50ml) 中，用水 (20ml)、盐水 (20ml) 洗涤，干燥 (Na2SO4) 并浓缩，得到粗制中间体， 4- 氯 -6-[2， 2， 2- 三氟 -1-(6- 甲氧基 - 萘 -2- 基 )- 乙氧基 ]- 嘧啶 -2- 基胺 (0.22g)，其直接用于以下步骤。
     将粗制中间体 (0.22g)、 L- 对 - 硼基 - 苯基丙氨酸 (0.126g， 0.6mmol)、碳酸钠 (0.126g， 1.2mmol) 和二氯二 ( 三苯基膦 )- 钯 (II)(15mg， 0.021mmol) 溶解在位于微波小瓶中的 MeCN(2.0ml) 和 H2O(2.0ml) 的混合物中。将小瓶密封并在微波反应器中在 150 ℃ 搅拌 6 分钟。将混合物过滤，浓缩滤液，将残余物溶解在 MeOH 和 H2O(1 ∶ 1) 中并通过制备性 HPLC 进行纯化，使用 MeOH/H2O/TFA 作为溶剂系统，得到 2- 氨基 -3-(4-{2- 氨基 -6-[2， 2， 2- 三氟 -1-(6- 甲氧基 - 萘 -2- 基 )- 乙氧基 ]- 嘧啶 -4- 基 ]- 苯基 )- 丙酸，为 TFA 盐 1 (HPLC ：方法 C，保留时间＝ 3.190min.LCMS M+1513. H NMR(400MHz， CD3OD)δ3.22-3.42(m， 2H)， 3.86(s， 3H)， 4.32(1H)， 6.88(m， 1H)， 6.92(1H)， 7.20(dd， 1H)， 7.26(s， 1H)， 7.50(d， 2H)， 7.63(d， 1H)， 7.80-7.90(m， 4H)， 8.05(s， 1H)。
     6.34(S)-2- 氨基 -3-(4-(5-( 联苯 -4- 基甲基氨基 ) 吡嗪 -2- 基 ) 苯基 ) 丙酸的合成
     将 4- 苯基苯甲醛 (0.3g， 1.65mmol) 和 2- 氨基 -5- 溴吡嗪 (0.24g， 1.37mmol) 用在二氯乙烷 (7.0ml) 和乙酸 (0.25ml) 中的 Na(OAc)3BH(0.44g， 2.06mmol) 在室温下处理 18 小时。将混合物用二氯甲烷稀释，用 1.0NNaOH 洗涤，用盐水洗涤，用 MgSO4 干燥并浓缩。色谱分离 (SiO2， EtOAc ∶ Hex， 1 ∶ 1)，得到 0.18g 的 N-( 联苯 -4- 基甲基 )-5- 溴吡嗪 -2- 胺。
     将 N-( 联苯 -4- 基甲基 )-5- 溴吡嗪 -2- 胺 (60mg， 0.176mmol)、 L- 对 - 硼基 - 苯基丙氨酸 (37mg， 0.176mmol)、三苯基膦二氯化钯 (3.6mg， 0.0052mmol)、 Na2CO3(37mg， 0.353mmol)、乙腈 (1.25ml) 和水 (1.25ml) 在微波反应器中在 150℃加热 5 分钟。浓缩混合物，将其溶解在 1.0N HCl 中，用醚洗涤两次，浓缩并通过制备性 HPLC 进行纯化，得到 41mg 1 的标题化合物。 M+1 ＝ 425 ； H NMR(CD3OD)δ8.42(s， 1H)， 8.05(s， 1H)， 7.92(d， 2H)， 7.58(d， 4H)， 7.40(m， 7H)， 4.60(s， 2H)， 4.25(m， 1H)， 3.40(m， 1H)， 3.20(m， 1H)。
     6.35(S)-2- 氨基 -3-(4-(5-( 萘 -2- 基甲基氨基 ) 吡嗪 -2- 基 ) 苯基 ) 丙酸的合成
     将 2- 萘甲醛 (0.6g， 3.84mmol) 和 2- 氨基 -5- 溴吡嗪 (0.56g， 3.201mmol) 用在二氯乙烷 (15.0ml) 和乙酸 (0.5ml) 中的 Na(OAc)3BH(1.02g， 4.802mmol) 在室温下处理 18 小时。将混合物用二氯甲烷稀释，用 1.0NNaOH 洗涤，用盐水洗涤，用 MgSO4 干燥并浓缩。色谱
     分离 (SiO2， EtOAc ∶ Hex， 1 ∶ 1)，得到 0.49g 的 5- 溴 -N-( 萘 -2- 基甲基 ) 吡嗪 -2- 胺。
     将 5- 溴 -N-( 萘 -2- 基甲基 ) 吡嗪 -2- 胺 (0.2g， 0.637mmol)、 L- 对 - 硼基 - 苯基丙氨酸 (0.13g， 0.637mmol)、三苯基膦二氯化钯 (13mg， 0.019mmol)、 Na2CO3(0.13g， 1.27mmol)、乙腈 (5ml) 和水 (5ml) 在微波反应器中在 150℃加热 5 分钟。将混合物浓缩，溶解在 1.0N HCl 中，用醚洗涤两次，浓缩，溶解在甲醇中，过滤并浓缩，得到 0.12g 的标题 1 化合物。M+1 ＝ 399 ； H NMR(CD3OD)δ8.51(s， 1H)， 8.37(s， 1H)， 7.90(m， 6H)， 7.50(m， 5H)， 4.85(s， 2H)， 4.30(t， 1H)， 3.38(m， 1H)， 3.22(m， 1H)。
     6.36(S)-2-( 叔丁氧基羰基氨基 )-3-(4-(5-( 萘 -2- 基甲基氨基 ) 吡嗪 -2- 基 ) 苯基 ) 丙酸的合成
     在 0℃将 (S)-2- 氨基 -3-(4-(5-( 萘 -2- 基甲基氨基 ) 吡嗪 -2- 基 ) 苯基 ) 丙酸 (0.15g， 0.345mmol) 用在二氧杂环己烷 (3ml) 和 H2O(3ml) 中的三乙基胺 (87mg， 0.862mmol) 和 boc- 酐 (84mg， 0.379) 处理。将混合物回温到室温并搅拌过夜。将混合物浓缩，并在 EtOAc 和 H2O 之间分配。使用 1.0N HCl 将水相酸化到 pH ＝ 1 并用 EtOAc 提取。将有机物合并，用盐水洗涤，用 MgSO4 干燥并浓缩，得到 48mg 的标题化合物。
     6.37(S)-2- 吗啉基乙基 2- 氨基 -3-(4-(5-( 萘 -2- 基甲基氨基 ) 吡嗪 -2- 基 ) 苯基 ) 丙酸酯的合成
     ( 将 (S)-2-( 叔丁氧基羰基氨基 )-3-(4-(5-( 萘 -2- 基甲基氨基 ) 吡嗪 -2- 基 ) 苯基 ) 丙酸 (48mg， 0.090mmol)、 4-(2- 羟基乙基 ) 吗啉 (12mg， 0.090mmol)、三乙基胺 (18mg， 0.180mmol) 和苯并三唑 -1- 基氧基三 ( 二甲基氨基 )- 膦鎓六氟磷酸盐 (BOP， 18mg， 0.090mmol) 在二氯甲烷 (3.0ml) 中在室温下搅拌 5 小时。加入另外的三乙基胺 (18mg， 0.180mmol) 和 BOP(18mg， 0.090mmol)，将混合物搅拌过夜。将混合物浓缩并通过制备性 HPLC 进行纯化，得到 2mg 的标题化合物。
     6.38(2S)-2- 氨基 -3-(4-(2- 氨基 -6-(2， 2， 2- 三氟 -1-(3′ - 氟联苯 -4- 基 ) 乙氧基 ) 嘧啶 -4- 基 ) 苯基 ) 丙酸的合成
     在 0℃向在 THF(50ml) 中的 4′ - 溴 -2， 2， 2- 三氟苯乙酮 (5.0g， 19.76mmol) 中加入 NaBH4(1.5g， 39.52mmol)。将混合物回温到室温并搅拌 1 小时。通过 TLC(CH2Cl2) 监控显示反应完成。将混合物用水淬灭，旋转蒸发以除去大部分 THF，用 CH2Cl2 提取两次。合并有机物，用盐水洗涤，浓缩到小体积并过滤通过硅胶短筛。二氧化硅用 CH2Cl2 洗涤以洗脱产物，将得到的溶液浓缩，得到 4.65g 的 1-(4- 溴苯基 )-2， 2， 2- 三氟乙醇。收率 92％。
     在 0℃在 15 分钟内向 Pd(PPh3)4(2.1g， 1.823mmol) 中加入 3- 氟苯基溴化镁 (55ml， 1.0M，在 THF 中， 55mmol)。除去冰浴并将混合物搅拌 30 分钟。在 10 分钟内加入在 THF(50ml) 中的 1-(4- 溴苯基 )-2， 2， 2- 三氟乙醇 (4.65g， 18.23mmol)。将混合物加热至回流 3 小时，并且通过 LC(Sunfire 柱， TFA) 监控显示反应完成。将混合物冷却，用 H2O 淬灭，旋转蒸发以除去大部分 THF，用 CH2Cl2 提取三次。合并有机物并用盐水洗涤，用 MgSO4 干燥并浓缩，色谱分离 (SiO2， CH2Cl2) 得到 4.64g 的 2， 2， 2- 三氟 -1-(3′ - 氟联苯 -4- 基 ) 乙醇。收率 94％。
     在 0 ℃向在 THF(50ml) 中的 2， 2， 2- 三氟 -1-(3 ′ - 氟联苯 -4- 基 ) 乙醇 (1.4g， 5.18mmol) 中加入 NaH(60％在矿物油中， 0.31g， 7.77mmol)。除去冰浴并将混合物搅拌 30 分钟。一次性加入在 THF(25ml) 中的 2- 氨基 -4， 6- 二氯嘧啶 (1.0g， 6.22mmol)。将混合物加热到 50℃历时 5 小时。通过 LCMS(Sunfire， TFA) 监控显示反应完成。将混合物冷却，用盐水淬灭，用 CH2Cl2 提取三次。合并有机物，用盐水洗涤，用 MgSO4 干燥并。进行色谱分离 (SiO2， CH2Cl2) 得到 1.48g 的 4- 氯 -6-(2， 2， 2- 三氟 -1-(3′ - 氟联苯 -4- 基 ) 乙氧基 ) 嘧啶 -2- 胺。收率 73％。
     将 4- 氯 -6-(2， 2， 2- 三氟 -1-(3′ - 氟联苯 -4- 基 ) 乙氧基 ) 嘧啶 -2- 胺 (0.75g， 1.89mmol)、 L- 对 - 硼基 - 苯基丙氨酸 (0.47g， 2.26mmol)、 Pd(PPh3)2Cl2(79mgs， 0.113mmol)、 Na2CO3(0.44g， 4.15mmol)、乙腈 (10ml) 和 H2O(10ml) 合并在 20ml 的微波反应器中并在微波中在 150℃加热 7 分钟。通过 LCMS(Sunfire，中性 ) 监控显示反应完成。将混合物浓缩，溶解在 NaOH(20ml， 0.5N) 中，过滤，用醚提取三次，并冷却到 0℃。在 0℃，慢慢地加入 1.0N HCl 直到 pH 为 6.5。将混合物在 0℃搅拌 30 分钟，并过滤产物，在空气中干燥，用过量的在醚中的 2.0N HCl 处理，浓缩，然后与 CH2Cl2 研磨，得到 1.12g， 99％ (95.5％纯度 )。将 385mg 通过制备性 HPLC(Sunfire， TFA) 进行纯化，浓缩，用过量的 1.0N HCl( 水溶液 ) 处理，浓缩成小 1 体积并冻干，得到 240mgs 的标题化合物。 M+1 ＝ 527 ； H NMRδ(CD3OD)7.86(d， 2H)， 7.64(s， 4H)， 7.49(d， 2H)， 7.36(m， 2H)， 7.28(m， 1H)， 7.02(m， 1H)， 6.95(s， 1H)， 6.75(q， 1H)， 4.26(t， 1H)， 3.32(m， 1H)， 3.21(m， 1H)。
     6.39(S)-2- 氨基 -3-(4-(2- 氨基 -6-( 苄基硫基 ) 嘧啶 -4- 基 ) 苯基 ) 丙酸的合成
     将苄基硫醇 (0.14g， 1.11mmol) 用在无水 THF(15ml) 中的 NaH(60％，在矿物油中，67mg， 1.66mmol) 处理 30 分钟。加入 2- 氨基 -4， 6- 二氯嘧啶 (0.2g， 1.22mmol) 并将混合物搅拌过夜。将混合物用二氯己烷稀释，用水洗涤，然后用盐水洗涤，用 MgSO4 干燥并浓缩，得到 0.11g 的 4-( 苄基硫基 )-6- 氯嘧啶 -2- 胺。
     将 4-( 苄基硫基 )-6- 氯嘧啶 -2- 胺 (0.1g， 0.397mmol)、 L- 对 - 硼基 - 苯基丙氨酸 (0.1g， 0.477mmol)、 Pd(PPh3)2Cl2(17mg， 0.024mmol)、 Na2CO3(93mg， 0.874mmol)、 MeCN(2.5ml) 和水 (2.5ml) 在微波中在 150℃加热 5 分钟。将混合物浓缩并通过制备性 HPLC 1 进行纯化，得到 0.42g 的标题化合物。 M+1 ＝ 381 ； H NMR(CD3OD)δ7.8(d， 2H)， 7.37(t， 4H)， 7.23(m， 2H)， 7.16(m， 1H)， 6.98(s， 1H)， 4.43(s， 2H)， 4.20(t， 1H)， 3.29(m， 1H)， 3.13(M， 1H)。
     6.40(S)-2- 氨基 -3-(4-(2- 氨基 -6-( 萘 -2- 基甲基硫基 ) 嘧啶 -4- 基 ) 苯基 ) 丙酸的合成
     将 2- 巯基萘 (0.2g， 1.148) 用在无水 THF(10ml) 中的 NaH(60 ％，在矿物油中， 92mg， 2.30mmol) 处理 30 分钟。加入 2- 氨基 -4， 6- 二氯嘧啶 (0.21g， 1.26mmol) 并将混合物搅拌过夜。将混合物用二氯甲烷稀释，用水洗涤，然后用盐水洗涤，用 MgSO4 干燥并浓缩，得到 0.18gd 4- 氯 -6-( 萘 -2- 基甲基硫基 ) 嘧啶 -2- 胺。
     将 4- 氯 -6-( 萘 -2- 基甲基硫基 ) 嘧啶 -2- 胺 (0.1g， 0.331mmol)、 L- 对 - 硼基 - 苯基丙氨酸 (83mg， 0.397mmol)、 Pd(PPh3)2Cl2(14mg， 0.020mmol)、 Na2CO3(77mg， 0.729mmol)、 MeCN(2.5ml) 和水 (2.5ml) 在微波中在 150℃加热 5 分钟。将混合物浓缩并通过制备性 HPLC 1 进行纯化，得到 57mg 的标题化合物。 M+1 ＝ 431 ； H NMR(CD3OD)δ7.85(s， 1H)， 7.79(d， 2H)， 7.72(d， 3H)， 7.46(dd， 1H)， 7.35(m， 4H)， 6.95(s， 1H)， 4.58(s， 2H)， 4.17(m， 1H)， 3.26(m， 1H)， 3.11(m， 1H)。
     6.41(2S)-2- 氨基 -3-(4-(2- 氨基 -6-(1-(3， 4- 二氟苯基 )-2， 2， 2- 三氟乙氧基 ) 嘧啶 -4- 基 ) 苯基 ) 丙酸的合成
     将 3， 5- 二氟苯基 - 三氟甲基酮用在无水 THF(5ml) 中的 NaBH4(0.18g， 4.76mmol) 处理 2 小时。将混合物用水淬灭，用二氯甲烷 (2x) 提取。合并有机物，过滤通过硅胶并浓缩，得到 0.46g 的 1-(3， 4- 二氟苯基 )-2， 2， 2- 三氟乙醇。
     将 1-(3， 4- 二氟苯基 )-2， 2， 2- 三氟乙醇 (0.1g， 0.471mmol) 用在无水 THF(3ml) 中的 NaH(60 ％，在矿物油中， 38mg， 0.943mmol) 处理 30 分钟。加入 2- 氨基 -4， 6- 二氯嘧啶 (77mg， 0.471mmol) 并将混合物在 50℃搅拌 6 小时。将混合物用水淬灭，并用二氯甲烷 (2x) 提取。合并有机物，用水洗涤，然后用盐水洗涤，用 MgSO4 干燥并浓缩，得到 0.14g 的 4- 氯 -6-(1-(3， 4- 二氟苯基 )-2， 2， 2- 三氟乙氧基 )- 嘧啶 -2- 胺。
     将 4- 氯 -6-(1-(3， 4- 二氟苯基 )-2， 2， 2- 三氟乙氧基 ) 嘧啶 -2- 胺 (0.14g， 0.421mmol)、 L- 对 - 硼基 - 苯基丙氨酸 (110mg， 0.505mmol)、 Pd(PPh3)2Cl2(18mg， 0.025mmol)、 Na2CO3(98mg， 0.926mmol)、 MeCN(2.5ml) 和水 (2.5ml) 在微波中在 150℃加热 5 分钟。将混合物浓缩并通过制备性 HPLC 进行纯化，得到 74mg 的标题化合物。M+1 ＝ 469 ； 1 H NMR(CD3OD)δ7.83(d， 2H)， 7.47(m， 1H)， 7.38(m， 4H)， 7.28(m， 1H)， 4.21(t， 1H)， 3.29(m， 1H)， 3.15(m， 1H)。
     6.42(2S)-2- 氨基 -3-(4-(2- 氨基 -6-(2， 2， 2- 三氟 -1-(3′ - 甲基联苯 -2- 基 ) 乙氧基 ) 嘧啶 -4- 基 ) 苯基 ) 丙酸的合成
     在 0℃向在 THF(50ml) 中的 4′ - 溴 -2， 2， 2- 三氟苯乙酮 (5.0g， 19.76mmol) 中加入 NaBH4(1.5g， 39.52mmol)。将混合物回温到室温并搅拌 1 小时。通过 TLC(CH2Cl2) 监控显示反应完成。将混合物用 H2O 淬灭，旋转蒸发以除去大部分 THF，并用 CH2Cl2 提取两次。合并有机物，用盐水洗涤，浓缩成小体积并过滤通过硅胶短筛。二氧化硅用 CH2Cl2 洗涤以洗脱产物，并将得到的溶液浓缩，得到 4.65g 的 1-(4- 溴苯基 )-2， 2， 2- 三氟乙醇。收率： 92％。
     将 1-(4- 溴苯基 )-2， 2， 2- 三氟乙醇 (0.13g， 0.525mmol)、间 - 甲苯基硼酸 (0.1g， 0.736mmol)、 Fibercat(4.28 ％ Pd， 47mgs， 0.0157mmol Pd)、 K2CO3(0.22g， 1.576mmol)、 EtOH(3ml) 和 H2O(0.5ml) 合并并在 80℃加热 4 小时。通过 TLC(CH2Cl2) 监控显示反应完成。将混合物冷却、过滤、浓缩、在 CH2Cl2 中成淤浆，并且进行硅胶色谱分离 (CH2Cl2)，得到 0.1g 的 2， 2， 2- 三氟 -1-(3′ - 甲基联苯 -2- 基 ) 乙醇。收率： 72％。
     或者，将 1-(4- 溴苯基 )-2， 2， 2- 三氟乙醇 (0.98g， 3.86mmol)、间 - 甲苯基硼酸 (0.63g， 4.63mmol)、 Pd(PPh3)2Cl2(0.16g， 0.232mmol Pd)、 Na2CO3(0.90g， 8.49mmol)、 AcCN(10ml) 和 H2O(10ml) 合并并在微波中在 150℃加热 10 分钟。通过 TLC(CH2Cl2) 显示反应完成。将混合物冷却、浓缩、在 CH2Cl2 中成淤浆、过滤并进行硅胶色谱分离 (CH2Cl2)，得到 0.80g 的 2， 2， 2- 三氟 -1-(3′ - 甲基联苯 -2- 基 ) 乙醇。收率： 79％。
     或者，在 0℃将四丁基氟化铵 (TBAF 1.0N，在 THF 中， 13uL， 3.3mg， 0.013mmol) 加入
     到 3- 甲基 - 联苯 -2- 甲醛 (0.25g， 1.27mmol) 和三氟甲基三甲基硅烷 (0.25g， 1.53mmol) 在 THF(1.5ml) 中的混合物中。将反应回温到室温并搅拌 4 小时。加入 HCl(3.0N， 2.0ml) 并将混合物搅拌 3 小时。将混合物浓缩，溶解在二氯甲烷中，过滤通过硅胶，并浓缩，得到 0.15g 的 2， 2， 2- 三氟 -1-(3′ - 甲基联苯 -2- 基 ) 乙醇。
     将 2， 2， 2- 三氟 -1-(3 ′ - 甲基联苯 -2- 基 ) 乙醇 (0.15g， 0.563mmol) 用在无水 THF(5ml) 中的 NaH(60％在矿物油中， 45mg， 1.12mmol) 处理 30 分钟。加入 2- 氨基 -4， 6- 二氯嘧啶 (92mg， 0.5633mmol) 并将混合物在 50℃搅拌 6 小时。将混合物用水淬灭并用二氯甲烷 (2x) 提取。合并有机物，用水洗涤，然后用盐水洗涤，用 MgSO4 干燥，并浓缩，得到 0.16g 的 4- 氯 -6-(2， 2， 2- 三氟 -1-(3′ - 甲基联苯 -2- 基 ) 乙氧基 ) 嘧啶 -2- 胺。
     将 4- 氯 -6-(2， 2， 2- 三氟 -1-(3′ - 甲基联苯 -2- 基 ) 乙氧基 ) 嘧啶 -2- 胺 (0.16g， 0.406mmol)、 L- 对 - 硼基 - 苯基丙氨酸 (10mg， 0.487mmol)、 Pd(PPh3)2Cl2(17mg， 0.024mmol)、 Na2CO3(95mg， 0.894mmol)、 MeCN(2.5ml) 和水 (2.5ml) 在微波中在 150℃加热 5 分钟。将混合 1 物浓缩并通过制备性 HPLC 进行纯化，得到 105mg 的标题化合物。M+1 ＝ 523 ； H NMR(CD3OD) δ7.85(d， 2H)， 7.70(d， 1H)， 7.44(m， 4H)， 7.31(t， 1H)， 7.21(m， 2H)， 7.10(m， 2H)， 6.87(q， 1H)， 6.84(s， 1H)， 4.25(t， 1H)， 3.30(m， 1H)， 3.18(m， 1H)。
     6.43(S)-2- 氨基 -3-(4-(5-(3-( 环戊基氧基 )-4- 甲氧基苄基氨基 ) 吡啶 -3- 基 ) 苯基 ) 丙酸的合成
     将三乙酰氧基 - 硼氢化钠 (245mg， 1.16mmol) 加入到 5- 溴 - 吡啶 -3- 胺 (100mg， 0.57mmol) 和 3- 环戊基氧基 -4- 甲氧基 - 苯甲醛 (127mg， 0.57mmol) 在 10ml 的 1， 2- 二氯乙烷 (DCE) 中的溶液中，加入 HOAc(66μL， 2eq.1.16mmol)，将混合物在室温下搅拌过夜，然后加入 15ml 的 DCE。有机相用水洗涤，并用硫酸钠干燥。减压除去溶剂，得到 200mg 的粗制 5- 溴 -N-(3-( 环戊基氧基 )-4- 甲氧基苄基 ) 吡啶 -3- 胺，其无需进一步纯化即可用于后面步骤。
     向 Emrys 微波用工艺小瓶 (2-5ml) 中加入 5- 溴 -N-(3-( 环戊基氧基 )-4- 甲氧基苄基 ) 吡啶 -3- 胺 (40mg， 0.106mmol)、 4- 硼基 -L- 苯基丙氨酸 (22mg， 0.106mmol) 和 2ml 的乙腈。向上述溶液中加入碳酸钠水溶液 (2ml， 1M)，然后加入 10 摩尔％的二氯二 ( 三苯基膦 )- 钯 (II)。将反应容器密封并用微波加热至 180℃历时 10 分钟。冷却后，将反应混合物蒸干，将残余物溶解在 2.5ml 的甲醇中并通过制备性 LD 进行纯化，得到 20mg 的 (S)-2- 氨基 -3-(4-(5-3-( 环戊基氧基 -4- 甲氧基 - 苄基氨基 ) 吡啶 -3- 基 ) 苯基 )- 丙酸。NMR ： 1 H-NMR(400MHz， CD3OD) ： δ1.59(m， 2H)， 1.7(m， 6H)， 3.17(m， 1H)， 3.3(m， 1H)， 3.75(s， 3H)， 4.2(dd， 1H)4.39(s， 2H)， 4.7(m， 1H)， 6.9(m， 3H)， 7.4(d， 2H)， 7.6(d， 2H)， 7.7(s， 1H)， 7.9(s， 1H)， 8.15(s， 1H) ；分析性 HPLC ： RT 2.69 ； M+1 ： 462(RT ： 1.285).
     6.442- 氨基 -3-(3-(4- 氨基 -6-((R)-1-( 萘 -2- 基 ) 乙基氨基 )-1， 3， 5- 三嗪 -2- 基 ) 苯基 ) 丙酸的合成
     在 -78 ℃ 在 5 分钟内向 2-( 二苯基亚甲基 - 氨基 ) 乙酸叔丁基酯 (400mg， 1.35mmol) 在 THF(25ml) 中的溶液中加入 LDA(1.8M，在 THF 中， 2eq， 2.7mmol，得自 Aldrich 的新鲜小瓶 )，并将得到的混合物搅拌 20 分钟。在 5 分钟内向反应混合物中滴加 2-(3-( 溴甲基 ) 苯基 )-5， 5- 二甲基 -1， 3， 2- 二氧杂硼己烷 (460mg， 1.2eq.1.62mmol) 在 THF(10ml) 中的溶液。将反应在相同 (-78℃ ) 温度下继续搅拌 30 分钟，并在室温下放置 3 小时。将反应用饱和 NH4Cl 淬灭，然后加入水 (30ml)，用 EtOAc(2x40ml) 提取。合并有机级分并用 Na2SO4 干燥。然后减压浓缩溶剂，并将粗制的 3-(3-(5， 5- 二甲基 -1， 3， 2- 二氧杂硼戊烷 -2- 基 ) 苯基 )2( 二苯基亚甲基氨基 ) 丙酸叔丁基酯通过柱色谱进行纯化，得到产物，为半固体。 2
     向 Emrys 微波用工艺小瓶 (20ml) 中加入 (R)-6- 氯 -N -(1-( 萘 -2- 基 ) 乙基 )-1， 3， 5- 三嗪 -2， 4- 二胺 (100mg， 0.33mmol)、 3-(3-(5， 5- 二甲基 -1， 3， 2- 二氧杂硼戊烷 -2- 基 ) 苯基 )-2-( 二苯基亚甲基氨基 ) 丙酸叔丁基酯 (248mg， 0.5mmol， 1.5eq.) 和 6ml 的乙腈，向上述溶液中加入 6ml 的碳酸钠水溶液 (1M)，然后加入 10 摩尔％的二氯二 ( 三苯基膦 )- 钯 (II)。将该反应容器密封并用微波加热至 190℃历时 10 分钟。冷却后，将反应混合物蒸干，将残余物溶解在 10ml 的 THF 中，向其中加入 5N.HCl(5ml)。将混合物回流 2 小时以便对二苯甲酮和叔丁基基团进行脱保护。将所得的反应混合物浓缩并溶解在甲醇 (8ml) 中，并通过制备性 LC 进行纯化，得到 15mg 的 2- 氨基 -3-(4(4- 氨基 -6-((R)-1-( 萘 -2- 基 ) 1 乙基氨基 )-1， 3， 5- 三嗪 -2- 基 ) 苯基 ) 丙酸。NMR ： H-NMR(400MHz， CD3OD) ： δ1.85(d， 3H)， 3.2-3.45(m， 2H)， 4.37(m， 1H)， 5.5(m， 1H)， 7.4(m， 1H)， 7.6(m 4H)， 7.9(m， 4H)， 8.18(m， 2H)，分析性 HPLC ： RT 2.79M+1 ： 429(RT ： 1.35)。
     6.452- 氨基 -3-(4-(4- 氨基 -6-((R)-1-( 萘 -2- 基 ) 乙基氨基 )-1， 3， 5- 三嗪 -2- 基 )-2- 氟苯基 ) 丙酸的合成
     在 -78℃在 5 分钟内向 2-( 二苯基亚甲基 - 氨基 ) 乙酸叔丁基酯 (1.1g， 3.73mmol) 在 THF(30ml) 中的溶液中加入 LDA(1.8M，在 THF 中， 1eq， 3.73mmol，得自 Aldrich 的新鲜小
     瓶 )，并将得到的混合物搅拌 20 分钟。在 5 分钟内向反应混合物中滴加 4- 溴 -1-( 溴甲基 )-2- 氟苯 (1g， 3.74mmol) 在 THF(10ml) 中的溶液。反应在 -78℃继续进行 30 分钟，然后在室温放置 3 小时。将反应用饱和 NH4Cl 淬灭，之后加入水 (30ml)。产物用 EtOAc(2x40ml) 提取，合并有机级分并用 Na2SO4 干燥。减压浓缩溶剂并将粗制 3-(4- 溴 -2- 氟苯基 )-2-( 二苯基亚甲基氨基 )- 丙酸叔丁基酯通过柱色谱进行纯化。得到产物，为固体。
     向 Emrys 微波用工艺小瓶 (20ml) 中加 3-(4- 溴 -2- 氟苯基 )-2-( 二苯基亚甲基 - 氨基 ) 丙酸入叔丁基酯 (600mg， 1.24mmol)、 Pd(dba)2(71mg， 0.124mmol)、 PCy3(35mg， 0.124mmol)、 4， 4， 4 ′， 4 ′， 5， 5， 5 ′， 5 ′ - 八甲基 -2， 2 ′ - 二 (1， 3， 2- 二氧杂硼戊烷 (346mg， 1.1eq.1.36mmol) 和 KOAc(182mg， 1.5eq.， 1.86mmol) 和 20ml 的 DMF。将该反应容器密封并用微波加热至 160℃历时 20 分钟。冷却后，将反应混合物减压蒸干。将残余物溶解在 H2O(30ml) 中，用 EtOAc(2x40ml) 提取，并通过制备性 LD 进行纯化，得到 220mg 的 2-( 二苯基亚甲基氨基 )-3-(2- 氟 -4-(4， 4， 5， 5- 四甲基 -1， 3， 2- 二氧杂硼戊烷 -2- 基 ) 苯基 ) 丙酸叔丁基酯。
     向 Emrys 微波用工艺小瓶 (5m l) 中加入 (R)-6- 氯 -N2-(1-( 萘 -2- 基 ) 乙基 )-1， 3， 5- 三嗪 -2， 4- 二胺 (67mg， 0.22mmol)、 2-( 二苯基亚甲基氨基 )-3-(2- 氟 -4-(4， 4， 5， 5- 四甲基 -1， 3， 2- 二氧杂硼戊烷 -2- 基 ) 苯基 ) 丙酸叔丁基酯 (120mg， 0.22mmol) 和 2ml 的乙腈。向上述溶液中加入碳酸钠水溶液 (2ml， 1M)，然后加入 10 摩尔％的二氯二 ( 三苯基膦 )- 钯 (II)。将该反应容器密封并用微波加热至 190℃历时 10 分钟。冷却后，将反应混合物蒸干。将残余物溶解在 10ml 的 THF 中，然后向其中加入 5N.HCl(2ml)。将混合物回流 2 小时 ( 进行苯乙酮和叔丁基的脱保护 )。在进行两个基团的脱保护后，将混合物浓缩，溶解在甲醇 (5ml) 中，并通过制备性 LD 进行纯化，得到 10mg 的 2- 氨基 -3-(4-(4- 氨基 -6-((R)-1-( 萘 -2- 基 ) 乙基氨基 )-1， 3， 5- 三嗪 -2- 基 )-2- 氟苯基 ) 丙酸。NMR ： 1 H-NMR(400MHz， CD3OD) ： δ1.6(d， 3H)， 3.07(m， 1H)， 3.45(m， 1H)， 3.8(m， 1H)， 5.45(m， 1H)， 7.4(m， 4H)， 7.6(m 1H)， 7.8(m， 4H)， 8.08(m， 1H)，分析性 HPLC ： RT 2.88， M+1 ： 447(RT ： 1.44)。
     6.46(2S)-2- 氨基 -3-(4-(4- 氨基 -6-(1-( 金刚烷基 ) 乙基氨基 )-1， 3， 5- 三嗪 -2- 基 ) 苯基 ) 丙酸的合成
     将金刚烷胺 (1 当量 )、 2- 氨基 -4， 6- 二氯 -[1， 3， 5] 三嗪 (1 当量 ) 和二异丙基乙基胺 (5 当量， Aldrich) 在无水 1， 4- 二氧杂环己烷中的溶液在 130℃回流 3 小时。在反应完成后，减压除去二氧杂环己烷。然后将反应冷却室温，加入水，用二氯甲烷 (2x40m1) 提取
     产物。将合并的有机溶液用 Na2SO4 干燥并浓缩，得到产物，其无需纯化即可用于下一步。
     向 Emrys 微波用工艺小瓶 (20ml) 中加入金刚烷三嗪氯化物 (200mg， 0.65mmol)、 4- 硼基 -L- 苯基丙氨酸 (135mg， 0.65mmol) 和 5ml 的乙腈。向上述溶液中加入碳酸钠水溶液 (5ml， 1M)，然后加入 5 摩尔％的二氯二 ( 三苯基膦 )- 钯 (II)。将该反应容器密封并用微波加热至 190℃历时 20 分钟。冷却后，将反应混合物蒸干。将残余物溶解在 4ml 的甲醇中并 1 通过制备性 LD 进行纯化，得到 60mg( 收率 21％ ) 的偶合产物。 NMR ： H-NMR(400MHz， CD3OD) ： δ1.22(m， 3H)， 1.6-1-8(m， 12H)， 2.01(d， 3H)， 3.25-3.42(m， 2H)， 4.0(m， 1H)， 4.40(m， 1H)， 7.6(d， 2H)， 8.2(d， 2H)，分析性 HPLC ： RT 3.11， M+1 ： 437(RT ： 1.76)。
     6.47(2S)-2- 氨基 -3-(4-(4- 氨基 -6-(1-( 金刚烷基 ) 乙基氨基 )-1， 3， 5- 三嗪 -2- 基 ) 苯基 ) 丙酸的可供选择的合成
     金刚烷 (2- 基 ) 乙基氰基胍通过形成氰基胍 (1 当量 )、 (S)-2- 氨基 -3-(4- 氰基苯基丙酸 (1 当量 ) 和叔丁醇钾 (3.5 当量， Aldrich) 在无水 n-BuOH 中的溶液来制备，该溶液在密封管中在 160℃剧烈搅拌 2 天。在反应完成后，使混合物冷却到室温，并将反应用水淬灭。减压除去溶剂。再次，在冷却到室温后，通过加入 1N NaOH 使反应混合物的 pH 达 12-14。然后，用醚∶ EtOAc(9 ∶ 1， 2x100ml) 提取以除去杂质。将含水溶液冷却到 0℃，然后加入 1N HCl 以调节到 pH 7。将浅黄色产物在水中慢慢地碾碎溶解，混合物在冰箱中保存 30 分钟，通过过滤获得固体，具有 92％的纯度。该化合物从 MeOH 结晶，得到白色固体。( ＞ 98％ 1 pure， 48-78％收率 )。 H-NMR(400MHz， CD3OD) ： δ1.0(d， 3H)， 1.45-1.6(m， 6H)， 4.62-4.8(m， 4H)2.0(m， 2H)， 3.3(m， 1H)， 3.5(m， 1H) ；分析性 HPLC ： RT2.69 ； M+1 ： 462(RT ： 1.285)。
     使用如路线 6 所示的方法从金刚烷 (2- 基 ) 乙基氰基胍制备标题化合物。
     6.48(S)-2- 氨基 -3-(4-(5- 氟 -4-((R)-1-( 萘 -2- 基 ) 乙基氨基 ) 嘧啶 -2- 基 ) 苯基 ) 丙酸的合成
     将 (R)-(+)-1-(2- 萘基 ) 乙基胺 (102.6mg， 0.599mmol)、 2， 4- 二氯 -5- 氟嘧啶 (100mg， 0.599mmol) 和碳酸铯 (390mg， 1.2mmol) 的混合物溶解在位于 10ml 微波小瓶中的 1， 4- 二氧杂环己烷 (3ml) 和 H2O(3ml) 中。将混合物在微波反应器中在 80℃搅拌 10 分钟。将残余物溶解在 CH2Cl2(50ml) 中，用水 (20ml)、盐水 (20ml) 洗涤，干燥 (Na2SO4) 并浓缩，得到粗制中间体 2- 氯 -5- 氟 - 嘧啶 -4- 基 )-(1- 萘 -2- 基 - 乙基 )- 胺。
     然后将粗制中间体 (250mg， 0.83mmol) 溶解在位于 20ml 微波小瓶中的 6.0ml 的 MeCN 和 6ml 的 H2O 中。向该溶液中加入 L- 对 - 硼基 - 苯基丙氨酸 (173.6mg， 0.83mmol)、碳酸钠 (173.6mg， 1.66mmol) 和催化量的二氯二 ( 三苯基膦 )- 钯 (II)(11.6mg， 0.0166mmol)。将该反应小瓶密封并在微波反应器中在 150℃搅拌 7 分钟。然后过滤内容物，并将滤液浓
     缩并溶解在 MeOH 和 H2O(1 ∶ 1)，并通过制备性 HPLC 进行纯化，使用 MeOH/H2O/TFA 作为溶剂系统。将合并的纯级分真空蒸发并进一步在在冷冻干燥器上进一步干燥，得到 154mg 的 2- 氨基 -3-{4-[5- 氟 -4-(1- 萘 -2- 基 - 乙基氨基 )- 嘧啶 -2- 基 ]- 苯基 }- 丙酸。NMR ： 1 H-NMR(400MHz， CD3OD)δ1.8(d， 3H)3.2-3.4(m， 2H)， 4.35(m， 1H)， 5.7(q， 1H)， 7.5(m， 4H)， 7.6(d， 1H)， 7.8-7.9(m， 4H)， 8.1(d， 2H)， 8.3(d， 1H)。LCMS ： M+1 ＝ 431.
     6.49(S)-2- 氨基 -3-(4-(2- 氨基 -6-(4-( 三氟甲基 )- 苄基氨基 ) 嘧啶 -4- 基 ) 苯基 ) 丙酸的合成
     将三氟甲基苄基胺 (106.8mg， 0.610mmol)、 2- 氨基 -4， 6- 二氯嘧啶 (100mg， 0.610mmol) 和碳酸铯 (217mg， 1.2mmol) 的混合物溶解在位于 20ml 微波小瓶中的 1， 4- 二氧杂环己烷 (6ml) 和 H2O(6ml) 中。将混合物在微波反应器中在 210℃搅拌 25 分钟。然后除去溶剂。将残余物溶解在 CH2Cl2(50ml) 中，用水 (20ml)、盐水 (20ml) 洗涤，干燥 (Na2SO4) 并浓缩，得到粗制中间体 6- 氯 -N-4′ -( 三氟甲基 - 苄基 )- 嘧啶 -2-4- 二胺。
     将粗制中间体 (150mg， 0.497mmol) 溶解在位于 10ml 微波小瓶中的 3.0ml 的 MeCN 和 3ml 的 H2O 中。向该溶液中加入 L- 对 - 硼基 - 苯基丙氨酸 (104mg， 0.497mmol)、碳酸钠 (150mg， 0.994mmol) 和催化量的二氯二 ( 三苯基膦 )- 钯 (II)(6.9mg， 0.00994mmol)。将该反应小瓶密封并在微波反应器中在 150℃搅拌 5 分钟。过滤内容物，将滤液浓缩并溶解在 MeOH 和 H2O(1 ∶ 1) 中并通过制备性 HPLC 进行纯化，使用 MeOH/H2O/TFA 作为溶剂系统。将合并的纯级分真空蒸发并在冷冻干燥器上进一步干燥，得到 2- 氨基 -3-{4-[2- 氨 1 基 -6-(4- 三氟甲基 - 苄基氨基 )- 嘧啶 -4- 基 ]- 苯基 }- 丙酸。 NMR ： H-NMR(300MHz， CD3OD) δ3.1-3.3(m， 2H)， 4.2(t， 1H)， 4.7(s， 2H)， 6.3(s， 1H)， 7.4-7.5(m， 4H)， 7.6(d， 2H)， 7.7(d， 2H)。LCMS ： M+1 ＝ 432.
     6.502- 氨基 -3-(5-(5- 苯基噻吩 -2- 基 )-1H- 吲哚 -3- 基 ) 丙酸的合成
     将 2- 氨基 -3-(5- 溴 -1H- 吲哚 -3- 基 )- 丙酸 (0.020g， 0.071mmol) 加入到 5ml 的微波小瓶中，该微波小瓶含有 5- 苯基 - 噻吩 -2- 硼酸 (0.016g， 0.078mmol)、 Na2CO3(0.015g， 0.142mmol)、乙腈 (1.5ml)、水 (1.5ml) 和二氯二 ( 三苯基膦 )- 钯 (3mg， 0.003mmol)。将该微波小瓶盖盖并在微波照射下在 150℃搅拌 5 分钟。将反应混合物冷却，过滤通过针筒式滤器，然后通过反相制备性 HPLC 进行分离，使用 YMC-Pack ODS 100x30mm ID 柱 (MeOH/H2O/TFA 溶剂系统 )。将纯级分真空浓缩。然后将产物悬浮在 5ml 的水中，冷冻并冻干，得到 5mg 的纯产物， 2- 氨基 -3-[5-(5- 苯基 - 噻吩 -2- 基 )-1H- 吲哚 -3- 基 ]- 丙酸。1H-NMR(300MHz， CD3OD) ： 3.21-3.26(m， 2H)， 4.25(q， 1H)， 7.15-7.35(m， 8H)， 7.58(d， 2H)， 7.82(d， 1H)。
     6.51(S)-2- 氨基 -3-(4-(4-(4- 苯氧基苯基 )-1H-1， 2， 3- 三唑 -1- 基 ) 苯基 ) 丙酸的合成
     将 1- 乙炔基 -4- 苯氧基 - 苯 (126mg， 0.65mmol) 和 (S)-3-(4- 叠氮基 - 苯基 )-2- 叔丁氧基羰基氨基 - 丙酸 (200mg， 0.65mg) 在 H2O ∶二氧杂环己烷 (5 ∶ 1) 中的混合物在密封管中在 100℃加热过夜。在反应完成后，加入 3N HCl(5ml) 并将混合物在 50℃ 搅拌 2 小时。除去溶剂得到粗产物，将其溶解在 MeOH 中并通过制备性 HPLC 进行纯化，得到 45mg 的所需产物 ( 收率： 29％ )1H-NMR(400MHz， CD3OD) ： δ(ppm)3.2(m， 1H)， 3.4(m， 1H)， 4.3(m， 1H)， 6.9(d， 2H)， 7.0(d， 2H)， 7.2(m， 1H)， 7.3(d， 2H)， 7.4-7.55(m， 6H)， 8.0(s， 1H)。
     6.52(S)-2- 氨基 -3-(4-(4-(4-( 噻吩 -2- 甲酰胺基 ) 苯基 )-1H-1， 2， 3- 三唑 -1- 基 ) 苯基 ) 丙酸和 (S)-2- 氨基 -3-(4-(5-(4-( 噻吩 -2- 甲酰胺基 ) 苯基 )-1H-1， 2， 3- 三唑 -1- 基 ) 苯基 ) 丙酸的合成
     将噻吩 -2- 羧酸 (4- 乙基 - 苯基 ) 酰胺 (117mg， 0.49mmol) 和 (S)-3-(4- 叠氮基 - 苯基 )-2- 叔丁氧基羰基氨基 - 丙酸 (150mg， 0.49mg) 在 5ml 的 H2O ∶二氧杂环己烷
     (5 ∶ 1) 中的混合物在密封管中在 100℃加热过夜。在反应完成后，加入 3N HCl(5ml) 并将混合物在 50℃搅拌 2 小时。除去溶剂，得到粗产物，将其溶解在 MeOH 中并通过制备性 HPLC 进行纯化。根据 LCMS( 保留时间 ) 和 NMR，获得了两个区域异构体 ( 总收率： 70mg， 66％ )。主要产物是 (S)-2- 氨基 -3-(4-(4-(4-( 噻吩 -2- 甲酰胺基 ) 苯基 )-1H-1， 2， 3- 三唑 -1- 基 ) 1 苯基 ) 丙酸。 H-NMR(400MHz， CD3OD) ： δ3.2(m， 1H)， 3.4(m， 1H)， 4.35(m， 1H)， 7.2(m， 1H)， 7.3(d， 2H)， 7.5-7.6(m， 4H)， 7.75(m， 3H)， 7.95(d， 1H)， 8.05(s， 1H)。
     6.53(S)-2- 氨基 -3-(4-(2- 氨基 -6-( 苯基乙炔基 ) 嘧啶 -4- 基 ) 苯基 ) 丙酸的合成
     将 2- 氨基 -4， 6- 二氯嘧啶 (0.180g， 1.1mmol)、三甲基 - 苯基乙炔基 - 氢化锡 (0.264g， 1mmol) 溶解在 THF(20ml) 中并将混合物在 65℃搅拌 12 小时。LCMS 显示反应完成。除去溶剂并将残余物直接用于以下步骤。
     将粗制中间体 (0.42g)、 L- 对 - 硼基 - 苯基丙氨酸 (0.210g， 1mmol)、碳酸钠 (0.210g， 2mmol) 和二氯二 ( 三苯膦 )- 钯 (II)(25mg， 0.036mmo l) 溶解在位于 10ml 微波小瓶中的 MeCN(3ml) 和 H2O(3ml) 的混合物中。将该小瓶密封并在微波反应器中在 150℃ 搅拌 6 分钟。将混合物过滤器并浓缩滤液。残余物通过制备性 HPLC 进行纯化，使用 MeOH/ H2O/TFA 作为溶剂系统，得到 (S)-2- 氨基 -3-[4-(2- 氨基 -6- 苯基乙炔基 - 嘧啶 -4- 基 1 (- 苯基 ]- 丙酸，为 TFA 盐。 H-NMR(400MHz， CD3OD) ： δ(ppm)3.20-3.42(m， 2H)， 4.31(m， 1H)， 7.40-7.51(m， 6H)， 7.62(d， 2H)， 8.18(d， 2H)。
     6.54 另外的化合物
     使用本领域已知的和 / 或本文描述的方法制备的另外的化合物列举如下：
     LCMS 化合物 (M+1) (S)-2- 氨基 -3-(4-(5-(2- 氟 -4， 5- 二甲氧基苄基氨基 ) 吡嗪 -2- 基 ) 苯基 ) 丙酸 (S)-2- 氨基 -3-(4-(2- 氨基 -6-(4-(2- 甲氧基苯基 ) 哌啶 -1- 基 ) 嘧啶 -4- 基 ) 苯基 ) 丙酸 (S)-2- 氨基 -3-(4-(6-(3-( 环戊基氧基 )-4- 甲氧基苄基氨基 )-2-( 二甲基氨基 ) 嘧啶 -4- 基 ) 苯基 ) 丙酸 (S)-2- 氨基 -3-(4-(5-(3， 4- 二甲基苄基氨基 ) 吡嗪 -2- 基 ) 苯基 ) 丙酸 377 C(3.15) 426 ( 时间 ( 分钟 )) C(3.04) HPLC 方法4481(3.03)507J(3.21)61CN 101969952 A说明书425 46057/67 页D(4.00) F(2.52)(S)-2- 氨基 -3-(4-(5-( 联苯 -2- 基甲基氨基 ) 吡嗪 -2- 基 ) 苯基 ) 丙酸 (S)- 乙基 2- 氨基 -3-(4-(2- 氨基 -6-(4-( 三氟甲基 ) 苄基氨基 ) 嘧啶 -4- 基 ) 苯基 ) 丙酸酯 (S)-2- 氨基 -3-(4-(5-( 环戊基甲基氨基 ) 吡嗪 -2- 基 ) 苯基 ) 丙酸 (2S)-2- 氨基 -3-(4-(2- 氨基 -6-(3-(2-( 三氟甲基 ) 苯基 ) 吡咯烷 -1- 基 ) 嘧啶 -4- 基 ) 苯基 ) 丙酸 (2S)-2- 氨基 -3-(4-(2- 氨基 -6-(1， 2， 3， 4- 四氢萘 -1- 基氨基 ) 嘧啶 -4- 基 ) 苯基 ) 丙酸 (S)-2- 氨基 -3-(4-(2- 氨基 -6-((R)-1-( 萘 -2- 基 ) 乙氧基 ) 嘧啶 -4- 基 ) 苯基 ) 丙酸 (2S)-2- 氨基 -3-(4-(2- 氨基 -6-(1， 2- 二苯基乙基氨基 ) 嘧啶 -4- 基 ) 苯基 ) 丙酸 (S)-2- 氨基 -3-(4-(2- 氨基 -6-((R)-1-(4-( 苯并 [b] 噻吩 -3- 基 ) 苯基 ) 乙基氨基 ) 嘧啶 -4- 基 ) 苯基 ) 丙酸 (S)-2- 氨基 -3-(4-(4- 氨基 -6-((R)-1-(4′ - 甲氧基联苯 -4- 基 ) 乙基氨基 )-1， 3， 5- 三嗪 -2- 基 ) 苯基 ) 丙酸 2- 氨基 -3-(1-(4- 氨基 -6-((R)-1-( 萘 -2- 基 ) 乙基氨基 )-1， 3， 5- 三嗪 -2- 基 ) 哌啶 -4- 基 ) 丙酸 (2S)-2- 氨基 -3-(4-(4- 氨基 -6-(1-(4- 氟萘 -1- 基 ) 乙基氨基 )-1， 3， 5- 三嗪 -2基 ) 苯基 ) 丙酸 (S)-2- 氨基 -3-(4-(4- 氨基 -6-((3′ - 氟联苯 -4- 基 ) 甲基氨基 )-1， 3， 5- 三嗪 -2基 ) 苯基 ) 丙酸 2- 氨基 -3-(4-(4- 氨基 -6-((R)-1-( 萘 -2- 基 ) 乙基氨基 )-1， 3， 5- 三嗪 -2基 )-2- 氟苯基 ) 丙酸 (S)-2- 氨基 -3-(4-(2- 氨基 -6-((R)-2， 2， 2- 三氟 -1-(3′ - 甲氧基联苯 -4- 基 ) 乙氧基 ) 嘧啶 -4- 基 ) 苯基 ) 丙酸 (2S)-2- 氨基 -3-(4-(4- 氨基 -6-(2， 2， 2- 三氟 -1-(3′ - 氟联苯 -2- 基 ) 乙氧基 )-1， 3， 5- 三嗪 -2- 基 ) 苯基 ) 丙酸 (2S)-2- 氨基 -3-(4-(4- 氨基 -6-(1-(4- 叔丁基苯基 ) 乙基氨基 )-1， 3， 5- 三嗪 -2- 基 ) 苯基 ) 丙酸 (2S)-2- 氨基 -3-(4-(2- 氨基 -6-(2， 2， 2- 三氟 -1-(3′ - 氟联苯 -4- 基 ) 乙氧基 ) 嘧啶 -4- 基 ) 苯基 ) 丙酸 (2S)-2- 氨基 -3-(4-(4- 氨基 -6-(6， 7- 二羟基 -1- 甲基 -3， 4- 二氢异喹啉 -2(1H)- 基 )-1， 3， 5- 三嗪 -2- 基 ) 苯基 ) 丙酸 (2S)-2- 氨基 -3-(4-(4- 氨基 -6-(2， 2， 2- 三氟 -1-(3′ - 甲基联苯 -4- 基 ) 乙氧基 )-1， 3， 5- 三嗪 -2- 基 ) 苯基 ) 丙酸341 472C(2.77) A(2.87)404A(2.65)429A(2.73)454K(1.34)510D(2.02)485J(2.99)436B(2.25)447H(1.68)459J(2.89)447A(2.88)539M(3.83)528F(3.41)435J(1.82)527D(2.09)437B(2.47)524D(2.22)62CN 101969952 A说明书42858/67 页A(2.90)(S)-2- 氨基 -3-(4-(4- 氨基 -6-((R)-1-( 萘 -2- 基 ) 乙基氨基 ) 嘧啶 -2- 基 ) 苯基 ) 丙酸 (S)-2- 氨基 -3-(4-(2- 氨基 -6-( 苄基硫基 ) 嘧啶 -4- 基 ) 苯基 ) 丙酸 (2S)-2- 氨基 -3-(4-(2- 氨基 -6-(2， 2， 2- 三氟 -1-(4′ - 氟联苯 -4- 基 ) 乙氧基 ) 嘧啶 -4- 基 ) 苯基 ) 丙酸 (2S)-2- 氨基 -3-(4-(6-(3-(4- 氯苯氧基 ) 哌啶 -1- 基 ) 嘧啶 -4- 基 ) 苯基 ) 丙酸 (S)-3-(4-(4- 氨基 -6-((R)-1-( 萘 -2- 基 ) 乙基氨基 )-1， 3， 5- 三嗪 -2- 基 ) 苯基 )-2-(2- 氨基乙酰胺基 ) 丙酸 (S)-2- 氨基 -3-(4-(6-((R)-1-( 萘 -2- 基 ) 乙基氨基 )-2-( 三氟甲基 ) 嘧啶 -4基 ) 苯基 ) 丙酸 (S)-2- 氨基 -3-(4-(2- 氨基 -6-(4-(3- 氯苯基 ) 哌嗪 -1- 基 ) 嘧啶 -4- 基 ) 苯基 ) 丙酸 (S)-2- 氨基 -3-(4-(2- 氨基 -6-((R)-2， 2， 2- 三氟 -1- 苯基乙氧基 ) 嘧啶 -4- 基 ) 苯基 ) 丙酸 (2S)-2- 氨基 -3-(4-(2- 氨基 -6-(1， 4- 二苯基丁基氨基 ) 嘧啶 -4- 基 ) 苯基 ) 丙酸 (2S)-2- 氨基 -3-(4-(6-(1-(3′ - 氯联苯 -2- 基 )-2， 2， 2- 三氟乙氧基 ) 嘧啶 -4基 ) 苯基 ) 丙酸 (2S)-2- 氨基 -3-(4-(4- 氨基 -6-(1-( 联苯 -4- 基 )-2， 2， 2- 三氟乙氧基 )-1， 3， 5三嗪 -2- 基 ) 苯基 ) 丙酸 (2S)-2- 氨基 -3-(4-(2- 氨基 -6-(2， 2， 3， 3， 3- 五氟 -1-(3- 氟 -4- 甲基苯基 ) 丙氧基 ) 嘧啶 -4- 基 ) 苯基 ) 丙酸 (S)- 乙基 2- 氨基 -3-(4-(2- 氨基 -6-((R)-2， 2， 2- 三氟 -1-(3′ - 甲氧基联苯 -4基 ) 乙氧基 ) 嘧啶 -4- 基 ) 苯基 ) 丙酸酯 (S)-2- 氨基 -3-(4-(2- 氨基 -6-((S)-2， 2， 2- 三氟 -1-(3′ - 甲氧基联苯 -4- 基 ) 乙氧基 ) 嘧啶 -4- 基 ) 苯基 ) 丙酸 (2S)-2- 氨基 -3-(4-(2- 氨基 -6-(2， 2， 2- 三氟 -1-(3- 氟 -3′ - 甲氧基联苯 -4- 基 ) 乙氧基 ) 嘧啶 -4- 基 ) 苯基 ) 丙酸 (2S)-2- 氨基 -3-(4-(2- 氨基 -6-(1-(3′ -( 二甲基氨基 ) 联苯 -2- 基 )-2， 2， 2- 三氟乙氧基 ) 嘧啶 -4- 基 ) 苯基 ) 丙酸 (2S)-2- 氨基 -3-(4-(2- 氨基 -6-(2， 2， 2- 三氟 -1-(3′ - 甲氧基 -5- 甲基联苯 -2基 ) 乙氧基 ) 嘧啶 -4- 基 ) 苯基 ) 丙酸 (2S)-2- 氨基 -3-(4-(2- 氨基 -6-(2， 2， 2- 三氟 -1-(4′ - 甲氧基 -5- 甲基联苯 -2基 ) 乙氧基 ) 嘧啶 -4- 基 ) 苯基 ) 丙酸 (2S)-2- 氨基 -3-(4-(2- 氨基 -6-(2， 2， 2- 三氟 -1-(3′ - 甲氧基 -3-( 甲基磺酰基 ) 联苯 -4- 基 ) 乙氧基 ) 嘧啶 -4- 基 ) 苯基 ) 丙酸379 527E(1.66) E(2.07)453 486A(2.67) J(2.83)481A(3.70)453L(0.72)433E(1.77)482A(3.15)528E(2.35)510D(2.14)515N(3.34)567N(2.17)539N(3.36)557O(3.52)552Q(3.00)553N(3.63)553N(3.61)617O(3.28)63CN 101969952 A说明书52159/67 页N(1.57)(2S)-2- 氨基 -3-(4-(2- 氨基 -6-(1-(2-( 环丙基甲氧基 )-4- 氟苯基 )-2， 2， 2三氟乙氧基 ) 嘧啶 -4- 基 ) 苯基 ) 丙酸 (2S)-2- 氨基 -3-(4-(6-(1-(2-( 环丙基甲氧基 )-4- 氟苯基 )-2， 2， 2- 三氟乙氧基 ) 嘧啶 -4- 基 ) 苯基 ) 丙酸 (2S)-2- 氨基 -3-(4-(2- 氨基 -6-(2， 2， 2- 三氟 -1-(2-( 异戊基氧基 ) 苯基 ) 乙氧基 ) 嘧啶 -4- 基 ) 苯基 ) 丙酸 (2S)-2- 氨基 -3-(4-(5-(2， 2， 2- 三氟 -1-(3′ - 氟联苯 -4- 基 ) 乙氧基 ) 吡嗪 -2基 ) 苯基 ) 丙酸 (2S)-2- 氨基 -3-(4-(2- 氨基 -6-(2， 2， 2- 三氟 -1-(4′ - 甲氧基联苯 -2- 基 ) 乙氧基 ) 嘧啶 -4- 基 ) 苯基 ) 丙酸 (2S)-2- 氨基 -3-(4-(2- 氨基 -6-(1-(3′ - 氨基甲酰基联苯 -2- 基 )-2， 2， 2- 三氟乙氧基 ) 嘧啶 -4- 基 ) 苯基 ) 丙酸 (2S)-2- 氨基 -3-(4-(2- 氨基 -6-(1-(4′ - 氨基甲酰基联苯 -2- 基 )-2， 2， 2- 三氟乙氧基 ) 嘧啶 -4- 基 ) 苯基 ) 丙酸 (2S)-2- 氨基 -3-(4-(2- 氨基 -6-(2， 2， 2- 三氟 -1-(4-(2- 甲氧基苯氧基 ) 苯基 ) 乙氧基 ) 嘧啶 -4- 基 ) 苯基 ) 丙酸 (2S)-2- 氨基 -3-(4-(6-(2， 2， 2- 三氟 -1-(4-(2- 甲氧基苯氧基 ) 苯基 ) 乙氧基 ) 嘧啶 -4- 基 ) 苯基 ) 丙酸 (2S)-2- 氨基 -3-(4-(6-(2， 2， 2- 三氟 -1-(2-( 异戊基氧基 ) 苯基 ) 乙氧基 ) 嘧啶 -4- 基 ) 苯基 ) 丙酸 (2S)-3-(4-(6-(1-(3′ - 乙酰胺基联苯 -2- 基 )-2， 2， 2- 三氟乙氧基 )-2- 氨基嘧啶 -4- 基 ) 苯基 )-2- 氨基丙酸 (2S)-3-(4-(6-(1-(4′ - 乙酰胺基联苯 -2- 基 )-2， 2， 2- 三氟乙氧基 )-2- 氨基嘧啶 -4- 基 ) 苯基 )-2- 氨基丙酸 (2S)-2- 氨基 -3-(4-(2- 氨基 -6-(1-(4- 氰基苯基 )-2， 2， 2- 三氟乙氧基 ) 嘧啶 -4- 基 ) 苯基 ) 丙酸 (S)- 乙基 2- 氨基 -3-(4-(2- 氨基 -6-((R)-2， 2， 2- 三氟 -1- 对 - 甲苯基乙氧基 ) 嘧啶 -4- 基 ) 苯基 ) 丙酸酯 (2S)-2- 氨基 -3-(4-(2- 氨基 -6-(2， 2， 2- 三氟 -1-(1- 甲氧基二环 [2.2.2] 辛 -5烯 -2- 基 ) 乙氧基 ) 嘧啶 -4- 基 ) 苯基 ) 丙酸 (2S)-2- 氨基 -3-(4-(2- 氨基 -6-(1-(4-( 环戊基氧基 ) 苯基 )-2， 2， 2- 三氟乙氧基 ) 嘧啶 -4- 基 ) 苯基 ) 丙酸 (2S)-2- 氨基 -3-(4-(6-(1-(4-( 环戊基氧基 ) 苯基 )-2， 2， 2- 三氟乙氧基 ) 嘧啶 -4- 基 ) 苯基 ) 丙酸 (2S)-2- 氨基 -3-(4-(2- 氨基 -6-(2， 2， 2- 三氟 -1-(4-(3- 甲氧基苯氧基 ) 苯基 ) 乙氧基 ) 嘧啶 -4- 基 ) 苯基 ) 丙酸507N(1.62)520N(1.69)512--539N(3.50)552N(3.14)552N(3.05)555N(1.55)541N(1.59)505N(1.74)566N(3.18)566N(3.23)458--475--493O(2.97)517N(1.61)503N(1.67)556N(1.59)64CN 101969952 A说明书56960/67 页S(3.34)(2S)-2- 氨基 -3-(4-(2- 氨基 -6-(1-(4， 5- 二甲氧基联苯 -2- 基 )-2， 2， 2- 三氟乙氧基 ) 嘧啶 -4- 基 ) 苯基 ) 丙酸 (2S)-2- 氨基 -3-(4-(2- 氨基 -6-(1-(4， 5- 二甲氧基 -3′ - 甲基联苯 -2基 )-2， 2， 2- 三氟乙氧基 ) 嘧啶 -4- 基 ) 苯基 ) 丙酸 (2S)-2- 氨基 -3-(4-(5-(2， 2， 2- 三氟 -1-(2′ - 甲基联苯 -2- 基 ) 乙氧基 ) 吡嗪 -2基 ) 苯基 ) 丙酸 (2S)-2- 氨基 -3-(4-(6-(2， 2， 2- 三氟 -1-(4-(3- 甲氧基苯氧基 ) 苯基 ) 乙氧基 ) 嘧啶 -4- 基 ) 苯基 ) 丙酸 (2S)-2- 氨基 -3-(4-(2- 氨基 -6-(1-(2-(3， 5- 二氟苯氧基 ) 苯基 )-2， 2， 2- 三氟乙氧基 ) 嘧啶 -4- 基 ) 苯基 ) 丙酸 (2S)-2- 氨基 -3-(4-(2- 氨基 -6-(2， 2， 2- 三氟 -1-(4-(4- 甲氧基苯氧基 ) 苯基 ) 乙氧基 ) 嘧啶 -4- 基 ) 苯基 ) 丙酸 (2S)-2- 氨基 -3-(4-(2- 氨基 -6-(1-(4′ -((S)-2- 氨基 -2- 羧基乙基 ) 联苯 -2基 )-2， 2， 2- 三氟乙氧基 ) 嘧啶 -4- 基 ) 苯基 ) 丙酸 (2S)-2- 氨基 -3-(4-(2- 氨基 -6-(1-(2- 溴苯基 )-2， 2， 2- 三氟乙氧基 ) 嘧啶 -4基 ) 苯基 ) 丙酸 (2S)-2- 氨基 -3-(4-(5-(2， 2， 2- 三氟 -1-(3′ - 甲基联苯 -2- 基 ) 乙氧基 ) 吡嗪 -2基 ) 苯基 ) 丙酸 (2S)-2- 氨基 -3-(4-(2- 氨基 -6-(2， 2， 2- 三氟 -1-(4- 甲氧基联苯 -2- 基 ) 乙氧基 ) 嘧啶 -4- 基 ) 苯基 ) 丙酸 (2S)-2- 氨基 -3-(4-(5-(2， 2， 2- 三氟 -1-(2-(4- 甲基噻吩 -3- 基 ) 苯基 ) 乙氧基 ) 吡嗪 -2- 基 ) 苯基 ) 丙酸 (2S)-2- 氨基 -3-(4-(2- 氨基 -6-(2， 2， 2- 三氟 -1-(4- 甲氧基 -3′ - 甲基联苯 -2基 ) 乙氧基 ) 嘧啶 -4- 基 ) 苯基 ) 丙酸 (2S)-2- 氨基 -3-(4-(2- 氨基 -6-(2， 2， 2- 三氟 -1-(3′ -( 羟基甲基 ) 联苯 -2- 基 ) 乙氧基 ) 嘧啶 -4- 基 ) 苯基 ) 丙酸 (2S)-2- 氨基 -3-(4-(2- 氨基 -6-(1-(3′ - 氰基联苯 -2- 基 )-2， 2， 2- 三氟乙氧基 ) 嘧啶 -4- 基 ) 苯基 ) 丙酸 (2S)-2- 氨基 -3-(4-(6-(1-(2-(3， 5- 二氟苯氧基 ) 苯基 )-2， 2， 2- 三氟乙氧基 ) 嘧啶 -4- 基 ) 苯基 ) 丙酸 (2S)-2- 氨基 -3-(4-(6-(2， 2， 2- 三氟 -1-(4-(4- 甲氧基苯氧基 ) 苯基 ) 乙氧基 ) 嘧啶 -4- 基 ) 苯基 ) 丙酸 (2S)-2- 氨基 -3-(4-(2- 氨基 -6-(2， 2， 2- 三氟 -1-(2-(4- 甲基噻唑 -2- 基 ) 噻吩 -3- 基 ) 乙氧基 ) 嘧啶 -4- 基 ) 苯基 ) 丙酸 (2S)-2- 氨基 -3-(4-(2- 氨基 -6-(2， 2， 2- 三氟 -1-(5-(4- 甲氧基苯基 ) 异噁唑 -3- 基 ) 乙氧基 ) 嘧啶 -4- 基 ) 苯基 ) 丙酸583S(3.50)508--541N(1.64)561N(1.64)556N(1.58)596--513--508--539S(3.51)514--553S(3.66)539--534--547N(1.69)541N(1.63)536--530O(3.14)65CN 101969952 A说明书56761/67 页O(3.24)(2S)-2- 氨基 -3-(4-(2- 氨基 -6-(2， 2， 2- 三氟 -1-(1- 苯基 -5-( 三氟甲基 )-1H吡唑 -4- 基 ) 乙氧基 ) 嘧啶 -4- 基 ) 苯基 ) 丙酸 (2S)-2- 氨基 -3-(4-(2- 氨基 -6-(1-(2-( 环己基氧基 )-4- 甲基苯基 )-2， 2， 2三氟乙氧基 ) 嘧啶 -4- 基 ) 苯基 ) 丙酸 (2S)-2- 氨基 -3-(4-(2- 氨基 -6-(1-(2-( 环戊基氧基 )-4- 甲基苯基 )-2， 2， 2三氟乙氧基 ) 嘧啶 -4- 基 ) 苯基 ) 丙酸 (2S)-2- 氨基 -3-(4-(2- 氨基 -6-(1-( 苯并 [d] 噻唑 -6- 基 )-2， 2， 2- 三氟乙氧基 ) 嘧啶 -4- 基 ) 苯基 ) 丙酸 (2S)-2- 氨基 -3-(4-(2- 氨基 -6-(2， 2， 2- 三氟 -1-(1- 甲基 -1H- 咪唑 -5- 基 ) 乙氧基 ) 嘧啶 -4- 基 ) 苯基 ) 丙酸 (2S)-2- 氨基 -3-(4-(6-(1-(2-( 环戊基氧基 )-4- 甲基苯基 )-2， 2， 2- 三氟乙氧基 ) 嘧啶 -4- 基 ) 苯基 ) 丙酸 (2S)-2- 氨基 -3-(4-(6-(1-(2-( 环己基氧基 )-4- 甲基苯基 )-2， 2， 2- 三氟乙氧基 ) 嘧啶 -4- 基 ) 苯基 ) 丙酸 (2S)-2- 氨基 -3-(4-(2- 氨基 -6-(2， 2， 2- 三氟 -1-( 吡啶 -3- 基 ) 乙氧基 ) 嘧啶 -4- 基 ) 苯基 ) 丙酸 (2S)-2- 氨基 -3-(4-(2- 氨基 -6-(1-(1， 3- 二甲基 -1H- 吡唑 -5- 基 )-2， 2， 2- 三氟乙氧基 ) 嘧啶 -4- 基 ) 苯基 ) 丙酸 (S)-2- 氨基 -3-(4-(2- 氨基 -6-(3- 羟基苯基 ) 嘧啶 -4- 基 ) 苯基 ) 丙酸 (2S)-2- 氨基 -3-(4-(2- 氨基 -6-(2， 2， 2- 三氟 -1-(3′ - 羟基联苯 -2- 基 ) 乙氧基 ) 嘧啶 -4- 基 ) 苯基 ) 丙酸 (S)-2- 氨基 -3-(4-(2- 氨基 -6-(3， 5- 二氟苯基 ) 嘧啶 -4- 基 ) 苯基 ) 丙酸 (2S)-2- 氨基 -3-(4-(2- 氨基 -6-(1-(3′， 5′ - 二氟联苯 -2- 基 )-2， 2， 2- 三氟乙氧基 ) 嘧啶 -4- 基 ) 苯基 ) 丙酸 (2S)-2- 氨基 -3-(4-(6-(2， 2， 2- 三氟 -1-(3′ - 氟联苯 -3- 基 ) 乙氧基 ) 吡嗪 -2基 ) 苯基 ) 丙酸 (2S)-2- 氨基 -3-(4-(2- 氨基 -6-(1-(5- 乙氧基 -2- 甲基 -2， 3- 二氢苯并呋喃 -6- 基 )-2， 2， 2- 三氟乙氧基 ) 嘧啶 -4- 基 ) 苯基 ) 丙酸 (2S)-2- 氨基 -3-(4-(2- 氨基 -6-(1-( 苯并呋喃 -5- 基 )-2， 2， 2- 三氟乙氧基 ) 嘧啶 -4- 基 ) 苯基 ) 丙酸 (2S)-2- 氨基 -3-(4-(2- 氨基 -6-(2， 2， 2- 三氟 -1-(2- 间 - 甲苯基呋喃 -3- 基 ) 乙氧基 ) 嘧啶 -4- 基 ) 苯基 ) 丙酸 (S)- 乙基 3-(4-(2- 氨基 -6-((R)-2， 2， 2- 三氟 -1-(3′ - 甲氧基联苯 -4- 基 ) 乙氧基 ) 嘧啶 -4- 基 ) 苯基 )-2-(2- 氨基乙酰胺基 ) 丙酸酯 (2S)-2- 氨基 -3-(4-(6-(2， 2， 2- 三氟 -1-(2-(4- 甲基噻吩 -3- 基 ) 苯基 ) 乙氧基 ) 吡嗪 -2- 基 ) 苯基 ) 丙酸545N(1.76)532N(1.71)490O(2.66)437--517N(1.78)531N(1.87)434--451--351 526---371 546---512--533O(3.16)473--513--596N(3.55)514--66CN 101969952 A说明书51462/67 页N(3.12)(2S)-2- 氨基 -3-(4-(2- 氨基 -6-(2， 2， 2- 三氟 -1-(5- 甲基 -3- 苯基异噁唑 -4基 ) 乙氧基 ) 嘧啶 -4- 基 ) 苯基 ) 丙酸 (S)-2- 氨基 -3-(4-(2- 氨基 -6-(3-( 甲基硫基 ) 苯基 ) 嘧啶 -4- 基 ) 苯基 ) 丙酸 (2S)-2- 氨基 -3-(4-(2- 氨基 -6-(2， 2， 2- 三氟 -1-(3′ -( 甲基硫基 ) 联苯 -2- 基 ) 乙氧基 ) 嘧啶 -4- 基 ) 苯基 ) 丙酸 (2S)-2- 氨基 -3-(4-(2- 氨基 -6-(1-(3′ -(( 二甲基氨基 ) 甲基 ) 联苯 -2基 )-2， 2， 2- 三氟乙氧基 ) 嘧啶 -4- 基 ) 苯基 ) 丙酸 (S)-2- 氨基 -3-(4-(2- 氨基 -6-(3-( 三氟甲氧基 ) 苯基 ) 嘧啶 -4- 基 ) 苯基 ) 丙酸 (2S)-2- 氨基 -3-(4-(2- 氨基 -6-(2， 2， 2- 三氟 -1-(3′ -( 三氟甲氧基 ) 联苯 -2基 ) 乙氧基 ) 嘧啶 -4- 基 ) 苯基 ) 丙酸 (S)-3-(4-(2- 氨基 -6-((R)-2， 2， 2- 三氟 -1-(3′ - 甲氧基联苯 -4- 基 ) 乙氧基 ) 嘧啶 -4- 基 ) 苯基 )-2-(2- 氨基乙酰胺基 ) 丙酸 (2S)-2- 氨基 -3-(4-(2- 氨基 -6-(2， 2， 2- 三氟 -1-(1- 甲基 -5- 苯基 -1H- 吡唑 -4- 基 ) 乙氧基 ) 嘧啶 -4- 基 ) 苯基 ) 丙酸 (2S)-2- 氨基 -3-(4-(2- 氨基 -6-(2， 2， 2- 三氟 -1-(4-( 甲基磺酰基 ) 苯基 ) 乙氧基 ) 嘧啶 -4- 基 ) 苯基 ) 丙酸 (S)-2- 氨基 -3-(4-(2- 氨基 -6-((R)-1-(3′ -( 二甲基氨基 ) 联苯 -2- 基 )-2， 2， 2三氟乙氧基 ) 嘧啶 -4- 基 ) 苯基 ) 丙酸 (2S)-2- 氨基 -3-(4-(2- 氨基 -6-(1-(2- 氯 -4-( 甲基磺酰基 ) 苯基 )-2， 2， 2- 三氟乙氧基 ) 嘧啶 -4- 基 ) 苯基 ) 丙酸 (2S)-2- 氨基 -3-(4-(2- 氨基 -6-(2， 2， 2- 三氟 -1-(3-( 呋喃 -2- 基 ) 噻吩 -2- 基 ) 乙氧基 ) 嘧啶 -4- 基 ) 苯基 ) 丙酸 (2S)-2- 氨基 -3-(4-(2- 氨基 -6-(1-(2-( 环戊基氧基 )-4- 氟苯基 )-2， 2， 2- 三氟乙氧基 ) 嘧啶 -4- 基 ) 苯基 ) 丙酸 (2S)-2- 氨基 -3-(4-(2- 氨基 -6-(2， 2， 2- 三氟 -1-(2-(3- 甲氧基苯基 ) 环己 -1烯基 ) 乙氧基 ) 嘧啶 -4- 基 ) 苯基 ) 丙酸 (2S)-2- 氨基 -3-(4-(2- 氨基 -6-(2， 2， 2- 三氟 -1-( 嘧啶 -5- 基 ) 乙氧基 ) 嘧啶 -4- 基 ) 苯基 ) 丙酸 (2S)-2- 氨基 -3-(4-(5-(2， 2， 2- 三氟 -1-(3′ - 甲氧基联苯 -3- 基 ) 乙氧基 ) 吡嗪 -2- 基 ) 苯基 ) 丙酸 (S)-2- 氨基 -3-(4-(2- 氨基 -6-((S)-1-(3′ -( 二甲基氨基 ) 联苯 -2- 基 )-2， 2， 2三氟乙氧基 ) 嘧啶 -4- 基 ) 苯基 ) 丙酸 (2S)-2- 氨基 -3-(4-(2- 氨基 -6-(2， 2， 2- 三氟 -1-(2-( 呋喃 -2- 甲酰胺基 ) 苯基 ) 乙氧基 ) 嘧啶 -4- 基 ) 苯基 ) 丙酸381 555---566--419--593--596N(1.51)513N(2.88)511--552S(3.09)545--505--543N(1.66)543O(3.59)435--524--552N(3.08)542N(2.61)67CN 101969952 A说明书545 --63/67 页(2S)-2- 氨基 -3-(4-(2- 氨基 -6-(1-(4- 氯 -2-( 甲基磺酰基 ) 苯基 )-2， 2， 2- 三氟乙氧基 ) 嘧啶 -4- 基 ) 苯基 ) 丙酸 (S)- 异丙基 2- 氨基 -3-(4-(2- 氨基 -6-((R)-2， 2， 2- 三氟 -1-(3′ - 甲氧基联苯 -4- 基 ) 乙氧基 ) 嘧啶 -4- 基 ) 苯基 ) 丙酸酯 (2S)-2- 氨基 -3-(4-(6-(1-(2-( 环戊基氧基 )-4- 氟苯基 )-2， 2， 2- 三氟乙氧基 ) 嘧啶 -4- 基 ) 苯基 ) 丙酸 (2S)-2- 氨基 -3-(4-(6-(1-(2-( 环己基氧基 )-4- 氟苯基 )-2， 2， 2- 三氟乙氧基 ) 嘧啶 -4- 基 ) 苯基 ) 丙酸 (2S)-2- 氨基 -3-(4-(2- 氨基 -6-(2， 2， 2- 三氟 -1-(1-( 噻吩 -2- 基 ) 环己基 ) 乙氧基 ) 嘧啶 -4- 基 ) 苯基 ) 丙酸 (2S)-2- 氨基 -3-(4-(2-(2， 2， 2- 三氟 -1-(3′ - 甲氧基联苯 -4- 基 ) 乙氧基 ) 噻唑 -5- 基 ) 苯基 ) 丙酸 (2S)-2- 氨基 -3-(4-(2- 氨基 -6-(1-(2-( 环己基氧基 )-4- 氟苯基 )-2， 2， 2- 三氟乙氧基 ) 嘧啶 -4- 基 ) 苯基 ) 丙酸 (2S)-2- 氨基 -3-(4-(2- 氨基 -6-(2， 2， 2- 三氟 -1-(1-(4- 甲氧基苯基 ) 环己基 ) 乙氧基 ) 嘧啶 -4- 基 ) 苯基 ) 丙酸 (2S)-2- 氨基 -3-(4-(6-(2， 2， 2- 三氟 -1-(4- 氟 -2- 甲基苯基 ) 乙氧基 ) 嘧啶 -4基 ) 苯基 ) 丙酸 (2S)-2- 氨基 -3-(4-(2- 氨基 -6-(2， 2， 2- 三氟 -1-(4- 氟 -2- 甲基苯基 ) 乙氧基 ) 嘧啶 -4- 基 ) 苯基 ) 丙酸 (2S)-2- 氨基 -3-(4-(2- 氨基 -6-( 噁唑 -2- 基 ( 苯基 ) 甲氧基 ) 嘧啶 -4- 基 ) 苯基 ) 丙酸 (S)-2- 氨基 -3-(4-(2- 氨基 -6-(1- 环己基 -2， 2， 2- 三氟亚乙基氨基氧基 ) 嘧啶 -4- 基 ) 苯基 ) 丙酸 (2S)-2- 氨基 -3-(4-(2- 氨基 -6-(1-(2-(3-( 二甲基氨基 ) 苯基 ) 呋喃 -3基 )-2， 2， 2- 三氟乙氧基 ) 嘧啶 -4- 基 ) 苯基 ) 丙酸 (2S)-2- 氨基 -3-(4-(2- 氨基 -6-(2， 2， 2- 三氟 -1-(5- 苯基噻吩 -2- 基 ) 乙氧基 ) 嘧啶 -4- 基 ) 苯基 ) 丙酸 (S)- 苯基 2- 氨基 -3-(4-(2- 氨基 -6-((R)-2， 2， 2- 三氟 -1-(3′ - 甲氧基联苯 -4基 ) 乙氧基 ) 嘧啶 -4- 基 ) 苯基 ) 丙酸酯 (S)-2- 氨基 -3-(4-(2- 氨基 -6-((R)-1-(3′ -(( 二甲基氨基 ) 甲基 ) 联苯 -4基 )-2， 2， 2- 三氟乙氧基 ) 嘧啶 -4- 基 ) 苯基 ) 丙酸 (S)-2- 氨基 -3-(4-(1-(3- 甲氧基苯甲酰基 )-1H- 吡唑 -4- 基 ) 苯基 ) 丙酸 (2S)-2- 氨基 -3-(4-(6-(2， 2， 2- 三氟 -1-(5- 苯基呋喃 -2- 基 ) 乙氧基 ) 嘧啶 -4基 ) 苯基 ) 丙酸581--520N(1.73)534N(1.81)521O(3.36)529Q(2.30)549N(1.70)545O(3.41)450N(1.50)465N(1.45)432O(1.76)452O(3.47)543N(3.02)515N(3.39)615Q(3.00)566N(2.60)366 484O(2.55) N(3.65)68CN 101969952 A说明书48664/67 页N(3.14)(2S)-2- 氨基 -3-(4-(2- 氨基 -6-(1-(4- 氯 -2- 氟苯基 )-2， 2， 2- 三氟乙氧基 ) 嘧啶 -4- 基 ) 苯基 ) 丙酸 (S， E)-2- 氨基 -3-(4-(2- 氨基 -6-(4-( 三氟甲基 ) 苯乙烯基 ) 嘧啶 -4- 基 ) 苯基 ) 丙酸 (2S)-2- 氨基 -3-(4-(2- 氨基 -6-(1-(3， 4- 二氯苯基 )-2， 2， 2- 三氟乙氧基 ) 嘧啶 -4- 基 ) 苯基 ) 丙酸 (2S)-2- 氨基 -3-(4-(2- 氨基 -6-(1-(4- 氯 -3- 氟苯基 )-2， 2， 2- 三氟乙氧基 ) 嘧啶 -4- 基 ) 苯基 ) 丙酸 (S)-2- 氨基 -3-(4-(2- 氨基 -6-((R)-1-(3′ -( 二甲基氨基 ) 联苯 -4- 基 )-2， 2， 2三氟乙氧基 ) 嘧啶 -4- 基 ) 苯基 ) 丙酸 (2S)-2- 氨基 -3-(4-(2- 氨基 -6-(1- 氯 -2， 2， 2- 三氟 -1-(4- 甲氧基联苯 -2- 基 ) 乙氧基 ) 嘧啶 -4- 基 ) 苯基 ) 丙酸 (2S)-2- 氨基 -3-(4-(6-(2， 2， 2- 三氟 -1-(5- 苯基噻吩 -2- 基 ) 乙氧基 ) 嘧啶 -4基 ) 苯基 ) 丙酸 (S)-2- 氨基 -3-(4-(5-(4- 苯氧基苯基 )-1H-1， 2， 3- 三唑 -1- 基 ) 苯基 ) 丙酸 (S， E)-2- 氨基 -3-(4-(2- 氨基 -6-(2-( 联苯 -4- 基 ) 乙烯基 ) 嘧啶 -4- 基 ) 苯基 ) 丙酸 (S)-2- 氨基 -3-(4-(4- 氨基 -6-((R)-2， 2， 2- 三氟 -1-(3′ - 甲氧基联苯 -4- 基 ) 乙氧基 ) 嘧啶 -2- 基 ) 苯基 ) 丙酸 (S)-2- 氨基 -3-(4-(4′ - 甲氧基联苯 -4- 基磺酰胺基 ) 苯基 ) 丙酸 (2S)-2- 氨基 -3-(4-(2- 氨基 -6-(2， 2， 2- 三氟 -1-(6-(3- 甲氧基苯基 ) 吡啶 -3基 ) 乙氧基 ) 嘧啶 -4- 基 ) 苯基 ) 丙酸 (2S)-2- 氨基 -3-(4-(2- 氨基 -6-(2， 2， 2- 三氟 -1-(6-(2- 氟 -3- 甲氧基苯基 ) 吡啶 -3- 基 ) 乙氧基 ) 嘧啶 -4- 基 ) 苯基 ) 丙酸 2- 氨基 -3-(5-(4′ - 甲基联苯 -4- 基 )-1H- 吲哚 -3- 基 ) 丙酸 2- 氨基 -3-(5- 间 - 甲苯基 -1H- 吲哚 -3- 基 ) 丙酸 (2S)-2- 氨基 -3-(4-(2-(2- 甲氧基苯基 ) 呋喃 -3- 甲酰胺基 ) 苯基 ) 丙酸 2- 氨基 -3-(5-(1- 苄基 -1H- 吡唑 -4- 基 )-1H- 吲哚 -3- 基 ) 丙酸 (2S)-2- 氨基 -3-(4-(2- 氨基 -6-(2， 2， 2- 三氟 -1-(6-( 噻吩 -2- 基 ) 吡啶 -3- 基 ) 乙氧基 ) 嘧啶 -4- 基 ) 苯基 ) 丙酸 2- 氨基 -3-(6-(1- 苄基 -1H- 吡唑 -4- 基 )-1H- 吲哚 -3- 基 ) 丙酸 (S)-2- 氨基 -3-(4-((2-(4-( 三氟甲基 ) 苯基 ) 噻唑 -4- 基 ) 甲基氨基 ) 苯基 ) 丙酸 (S)-2- 氨基 -3-(4-((4′ - 甲氧基联苯 -4- 基磺酰胺基 ) 甲基 ) 苯基 ) 丙酸429N(2.94)502N(3.31)486N(3.13)552 573N(2.66) N(3.77)500N(3.75)401 437O(3.20) N(3.17)539--428 540N(2.78) N(3.09)558N(3.00)371 295 358 361 516N(1.48) N(1.19) O(2.68) N(1.10) N(1.42)361 422N(1.09) O(3.00)441O(2.94)69CN 101969952 A说明书420 404 266 41065/67 页O(3.36) O(2.97) N(2.91) N(1.39)(S)-2- 氨基 -3-(4-(3-(2- 甲氧基二苯并 [b， d] 呋喃 -3- 基 ) 脲基 ) 苯基 ) 丙酸 (S)-2- 氨基 -3-(4-(3-(2， 2- 二苯基乙基 ) 脲基 ) 苯基 ) 丙酸 (S)-2- 氨基 -3-(4-( 苯基乙炔基 ) 苯基 ) 丙酸 (S)-2- 氨基 -3-(4-(2- 氨基 -6-((5-(1- 甲基 -5-( 三氟甲基 )-1H- 吡唑 -3- 基 ) 噻吩 -2- 基 ) 甲氧基 ) 嘧啶 -4- 基 ) 苯基 ) 丙酸 (2S)-2- 氨基 -3-(4-(2- 氨基 -6-(1， 1， 1- 三氟 -3-((R)-2， 2， 3- 三甲基环戊 -3烯基 ) 丙烷 -2- 基氧基 ) 嘧啶 -4- 基 ) 苯基 ) 丙酸 (2S)-2- 氨基 -3-(4-(2- 氨基 -6-(3-(2- 羟基乙基氨基甲酰基 ) 哌啶 -1- 基 ) 嘧啶 -4- 基 ) 苯基 ) 丙酸 (2S)-2- 氨基 -3-(4-(2- 氨基 -6-(3-( 吡啶 -2- 基氧基 ) 哌啶 -1- 基 ) 嘧啶 -4- 基 ) 苯基 ) 丙酸 (S)-2- 氨基 -3-(4-(2- 氨基 -6-(4- 氯 -3-( 哌啶 -1- 羰基 ) 苯基 ) 嘧啶 -4- 基 ) 苯基 ) 丙酸479O(3.42)429N(1.53)435N(2.11)480N(2.75)
     6.55 体外抑制试验
     使用分别具有以下登录号： x52836、 ay098914、 x05290 和 U49897 的基因制备了人 TPH1、 TPH2、酪氨酸羟化酶 (TH) 和苯基丙氨酸羟化酶 (PH)。
     人 TPH1 的全长编码序列被克隆到细菌表达载体 pET24(Novagen， Madison， WI， USA) 中。将携带表达载体的 BL21(DE3) 细胞的单个集落接种在 50ml 的 L 肉汤 (LB)- 卡拉霉素培养基中并在振摇下在 37℃生长过夜。然后将一半培养物 (25ml) 转移到 3L 的培养基中，该培养基含有 1.5％酵母抽提物、 2％ Bacto Peptone、 0.1mM 色氨酸、 0.1mM 硫酸亚铁铵、和 50mM 磷酸盐缓冲剂 (7.0)，并在 37℃使用补充有 40％的氧气、保持在 7.0 的 pH 和加入葡萄糖的条件下生长到 OD600 ＝ 6。在 10 小时内在 25℃使用 15％ D- 乳糖诱导 TPH1 表达。将细胞旋转分级并用磷酸盐缓冲盐水 (PBS) 洗涤一次。
     根据 TPH1 与蝶呤结合，用亲和色谱法对 TPH1 进行纯化。将细胞小球再悬浮溶胞缓冲液 (100ml/20g) 中，该溶胞缓冲液含有 50mMTris-Cl， pH 7.6、 0.5M NaCl、 0.1 ％ Tween-20、 2mM EDTA、 5mM DT、蛋白酶抑制剂混合物 (Roche Applied Science， Indianapolis， IN， USA) 和 1mM 苯基甲烷磺酰氟 (PMSF)，将细胞用微流化器进行溶胞。将溶胞产物进行离心并将上清液装载到与蝶呤结合的琼脂糖凝胶 4B 柱上，该柱用含有 50mM Tris、 pH 8.0、 2M NaCl、 0.1 ％ Tween-20、 0.5mM EDTA 和 2mM DTT 的缓冲液平衡。该柱用 50ml 的该缓冲液洗涤，用含 30mMNaHCO3， pH 10.5， 0.5M NaCl， 0.1％ Tween-20， 0.5mM EDTA， 2mMDTT 和 10 ％甘油的缓冲液洗脱 TPH1。被洗脱的酶立即用 200mMKH2PO4， pH 7.0， 0.5M
     NaCl， 20mM DTT， 0.5mM EDTA 和 10％甘油中和，并保存在 -80℃。
     以同样的方法表达和纯化了人色氨酸羟化酶 II 型 (TPH2)，酪氨酸羟化酶 (TH) 和苯基丙氨酸羟化酶 (PAH)，不同之处在于，在生长期间，对于 TH 为细胞补充酪氨酸，对于 PAH 为细胞补充 PAH。
     在含有 50mM 4- 吗啉丙磺酸 (MOPS)， pH 7.0， 60μM 色氨酸， 100mM 硫酸铵， 100μM 硫酸亚铁铵， 0.5mM 三 (2- 羧基乙基 ) 膦 (TCEP)， 0.3mM 6- 甲基四氢蝶呤， 0.05mg/ml 过氧化氢酶和 0.9mM DTT 的反应混合物中测量 TPH1 和 TPH2 活性。通过加入 TPH1 达到 7.5nM 的最终浓度引发反应。根据在 360nm( 激发波长＝ 300nm) 处的荧光的改变来测定反应初始速度。通过测量在各种化合物浓度下它们的活性来测定 TPH1 和 TPH2 抑制，并且使用以下方程式计算所给出的化合物的效力：
     其中 v 是在所给的化合物浓度 C 下的初始速度， v0 是当 C ＝ 0 时的 v， b 是背景信号， D 是近似等于 1 的 Hill 斜率，并且 IC50 是化合物抑制半数最大酶活性的浓度。
     通过分别使用 L-[3， 4-3H]- 酪氨酸和 L-[4-3H]- 苯基丙氨酸测量所产生的 3H2O 的量来测定人 TH 和 PAH 的活性。首先将酶 (100nM) 与其 0.1mM 下的底物温育约 10 分钟，并加入到包含 50mM MOPS， pH 7.2， 100mM 硫酸铵， 0.05％ Tween-20， 1.5mM TCEP， 100μM 硫酸亚铁铵， 0.1mM 酪氨酸或苯基丙氨酸， 0.2mM 6- 甲基四氢蝶呤， 0.05mg/ml 过氧化氢酶和 2mM DTT 的反应混合物中。使反应进行 10-15 分钟，并通过加入 2M HCl 使反应终止。然后将混合物过滤通过活性炭并通过闪烁计数测定滤液的放射活性。使用该试验测定并且使用与 TPH1 和 TPH2 一样的方法计算化合物对 TH 和 PAH 的活性。
     6.56 细胞基抑制试验
     使用两种类型的细胞系用于筛选： RBL2H3 是大鼠肥大细胞瘤细胞系，其含有 TPH1 并自发产生 5- 羟基色胺 (5HT) ； BON 是人类癌瘤细胞系，其含有 TPH1 并产生 5- 羟基色氨酸 (5HTP)。在 96 孔板形式中进行 CBA。在 HPLC 中使用的流动相含有 97％的 mM 乙酸钠 (pH 3.5) 和 3％的乙腈。使用 Waters C18 柱 (4.6x50mm) 和 Waters HPLC( 型号 2795)。使用多通道荧光计 ( 型号 2475) 通过设定 280nm 作为激发波长和 360nm 作为发射波长来监控流过。
     RBL CBA ：细胞在完全培养基 ( 含有 5％牛血清 ) 中生长 3-4 小时以使得细胞附加于板孔 (7K 细胞 / 孔 )。然后将化合物以 0.016μM 到 11.36μM 的浓度加入到每个孔中。对照是在不存在任何化合物的完全培养基中的细胞。在 37℃温育 3 天后收获细胞。细胞在不存在化合物下＞ 95％融合。从板除去培养基并用等量的 0.1N NaOH 使细胞溶胞。通过与等量的 1M TCA 混合然后过滤通过玻璃纤维对大部分的细胞溶胞产物进行处理。将滤液装载到反相 HPLC 上用于分析 5HT 浓度。还取得小部分的细胞溶胞产物来测定细胞的蛋白质浓度，其反映了在所用浓度下的化合物的细胞毒性。使用 BCA 法测量蛋白质浓度。
     在无化合物处理下细胞中的平均 5HT 水平在根据上述方程式进行 IC50 推导中用作最大值。5HT 的最小值设为 0 或得自用最高浓度 ( 如果化合物在该浓度下无细胞毒性 ) 的化合物处理的细胞。BON CBA ：细胞在等量的含 5％牛血清的 DMEM 和 F12K 中生长 3-4 小时 (20K 细胞 / 孔 ) 并加入在 0.07μM 到 50μM 浓度的化合物。将细胞在 37℃温育过夜。然后取得 50μM 的培养物上清液用于测量 5HTP。将上清液与等量的 1M TCA 混合，然后过滤通过玻璃纤维。将滤液装载到反相 HPLC 上用于测量 5HTP 浓度。通过用 PromegaCelltiter-Glo Luminescent 细胞存活试验处理剩余细胞来测量细胞的存活率。然后以与 RBL CBA 中的相同方式计算化合物效力。
     6.57 体内效果
     通过在口服给药化合物后在小鼠的肠和脑中的 5-HT 水平的改变，在几个研究中评价本发明的强力的 TPH1 抑制剂的体内效果。
     将化合物配制在不同的媒介物中以提供悬浮液或溶液。一般地，通过每日在 5ml/ kg 下进行口服强饲，对 14 周龄雄性 C57 白化病小鼠剂量给药，连续四天。在最后一次剂量给药后 5 小时，将动物迅速处死。取得肠道的各个区域和全脑并立即冻干。从组织提取 5-HT 并通过 HPLC 进行测量。取得血样用于暴露分析。
     发现强力的 TPH 1 抑制剂在小肠和大肠中都降低 5-HT 水平，但是不降低脑中的 5-HT 水平。在一个研究中，将化合物配制在 H2O 中并以四个不同的剂量水平对小鼠经口强饲给药： 15、 50、 150 和 500mg/kg，每天一次。如图 1 所示，化合物以剂量依赖性方式引起在空肠和回肠中的 5-HT 的明显减少。在结肠中，在 50、 150 和 500mg/kg/ 天的剂量水平下观察到 5-HT 的统计学显著减少。在脑中，在任何剂量水平下都未观测到 5-HT 水平有显著变化。
     上文引用的所有的公开 ( 例如，专利和专利申请 ) 以全文被并入本文作为参考。