技术领域
本发明公开了一种提取雷公藤有效成分的方法。
背景技术
雷公藤，又叫黄藤、黄腊藤、菜虫药、红药、水莽草，拉丁学名：Tripterygium wilfordii Hook. f.为卫矛科、雷公藤属植物雷公藤的根，藤本灌木，植物雷公藤在我国分布很广，如：台湾、福建、江苏、浙江、安徽、湖北、湖南、广西等省份都有分布。雷公藤有效成分在医药和农药领域具有很广泛的应用前景，它主要具有免疫调节作用、抗肿瘤作用、改善微循环作用、抗炎的作用以及杀菌灭鼠和抗生育作用等。雷公藤中含有370多种化合物，有效成分提取难度大，提取成本高。
雷公藤甲素被公认为最主要的活性成分，而雷公藤红素则被认为是具有较大毒副作用，所以，在制药行业中，对提取物中雷公藤有效成分含量的测定主要是测定提取物中最主要的活性成分（即雷公藤甲素）的含量。目前，一般的制药企业提取的雷公藤有效成分中，雷公藤甲素的重量百分含量仅为0.01%。又有研究报道，雷公藤红素具有抗肿瘤等药理作用。如何分离雷公藤红素与甲素，一直是雷公藤制剂研究中急待解决的问题。
发明内容
本发明的目的是克服现有技术中存在的不足，提供一种工艺简单、操作方便、能大大提高收率并能有效地降低生产成本的一种提取雷公藤有效成分的方法。
按照本发明提供的技术方案，所述提取雷公藤有效成分的方法包括以下步骤：
a、在提取锅中加入经粉碎的植物雷公藤以及植物雷公藤2.5~3.5倍重量的提取溶剂，夹套蒸汽加热到65~75℃，回流3~4小时，得到一次提取液；一次提取液经冷却、过滤后放入冷却储罐内，使一次提取液继续冷却至室温，然后压滤到第一提取液浓缩锅内；
b、取经过步骤a处理的植物雷公藤放入到提取锅中，再加入植物雷公藤1.5~2.5倍重量的提取溶剂，夹套蒸汽加热到65~75℃，回流3~4小时，得到二次提取液；二次提取液经冷却、过滤后放入冷却储罐内，使二次提取液继续冷却至室温，然后再次压滤到第二提取液浓缩锅内；
c、取经过步骤b处理的植物雷公藤放入到提取锅中，再加入植物雷公藤1.5~2.5倍重量的提取溶剂，夹套蒸汽加热到65~75℃，回流3~4小时，得到三次提取液；三次提取液过滤后加入到提取溶剂储罐内，以便下次提取时使用；
d、第一提取液浓缩锅夹套蒸汽加热，加热温度控制在60~70℃，回收料液，然后冷却至20~30℃后放料，得到第一提取浓缩液，备用；第二提取液浓缩锅夹套蒸汽加热，加热温度控制在60~70℃，回收料液，然后冷却至20~30℃后放料，得到第二提取浓缩液，然后将第二提取浓缩液和第一提取浓缩液一起抽到萃取锅中，准备进行第一次萃取；
e、在步骤d所述萃取锅中加入占第二提取浓缩液和第一提取浓缩液重量3~4倍的三氯甲烷进行第一次萃取，泡制30~60分钟后，静止分层，下层溶液抽至第一萃取液浓缩锅内，得到第一萃取液，上层溶液留在萃取锅内准备进行第二次萃取；
f、在经过步骤e萃取的萃取锅内加入提取浓缩液重量1.5~2.5倍的三氯甲烷进行第二次萃取，泡制30~60分钟后，静止分层，下层溶液抽至第二萃取液浓缩锅内，得到第二萃取液，上层溶液留在萃取锅内准备进行第三次萃取；
g、在经过步骤f萃取的萃取锅内加入提取浓缩液重量1~2倍的三氯甲烷进行第三次萃取，泡制30~60分钟后，静止分层，下层溶液抽至三氯甲烷储罐内，以便下次萃取时使用；
h、第一萃取液浓缩锅夹套开蒸汽进行蒸馏，蒸馏温度控制在60~65℃，蒸到适量后，停止蒸馏，等到第一萃取液浓缩锅内的混合液冷却到室温后，将第二萃取液抽至第一萃取液浓缩锅内，继续蒸馏，蒸馏温度控制在60~65℃，等到第一萃取液浓缩锅内的混合液变得粘稠时，停止蒸馏；
i、将步骤h得到的混合液放在干燥机中进行旋转干燥，干燥机中用于加热的水温调至70~80℃，干燥后得到的物料粉碎至粉状，在60目的筛网中过筛，得到含有雷公藤有效成分的粉末。
所述提取溶剂为体积百分含量为70%的甲醇溶液或者体积百分含量为70%的乙醇溶液。
本发明的方法工艺简单、操作方便，本发明的方法能大大提高收率，并能有效地降低生产成本。
附图说明
图1是雷公藤甲素标样的液相色谱图。
图2是第一粉末试样的液相色谱图。
具体实施方式
下面结合具体实施例对本发明作进一步说明。
实施例1
一种提取雷公藤有效成分的方法包括以下步骤：
a、在提取锅中加入经粉碎的植物雷公藤以及植物雷公藤2.5~3.5倍重量的提取溶剂，提取溶剂选用体积百分含量为70%的甲醇溶液，夹套蒸汽加热到65~75℃，回流3~4小时，得到一次提取液，一次提取液经冷却、过滤后放入低位冷却储罐内，一次提取液继续冷却至室温，然后压滤到第一提取液浓缩锅内；
b、取经过步骤a所使用的植物雷公藤放入到提取锅中，再加入植物雷公藤1.5~2.5倍重量的提取溶剂，提取溶剂选用体积百分含量为70%的甲醇溶液，夹套蒸汽加热到65~75℃，回流3~4小时，得到二次提取液，二次提取液经冷却、过滤后放入低位冷却储罐内，二次提取液继续冷却至室温，然后再次压滤到第二提取液浓缩锅内；
c、取经过步骤b所使用的植物雷公藤放入到提取锅中，再加入植物雷公藤1.5~2.5倍重量的提取溶剂，提取溶剂选用体积百分含量为70%的甲醇溶液，夹套蒸汽加热到65~75℃，回流3~4小时，得到三次提取液，三次提取液过滤后加入到提取溶剂储罐内，以便下次提取时使用；
d、第一提取液浓缩锅夹套蒸汽加热，加热温度控制在60~70℃，回收料液，然后冷却至20~30℃后放料，得到第一提取浓缩液，备用；第二提取液浓缩锅夹套蒸汽加热，加热温度控制在60~70℃，回收料液，然后冷却至20~30℃后放料，得到第二提取浓缩液，然后将第二提取浓缩液和第一提取浓缩液一起抽到萃取锅中，准备进行第一次萃取；
e、在萃取锅中加入提取浓缩液重量3~4倍的三氯甲烷进行第一次萃取，鼓泡（泡制）30~60分钟后，静止分层，下层溶液抽至第一萃取液浓缩锅内，得到第一萃取液，上层溶液留在萃取锅内准备进行第二次萃取；
f、在经过步骤e萃取的萃取锅后加入提取浓缩液重量1.5~2.5倍的三氯甲烷进行第二次萃取，鼓泡30~60分钟后，静止分层，下层溶液抽至第二萃取液浓缩锅内，得到第二萃取液，上层溶液留在萃取锅内准备进行第三次萃取；
g、在经过步骤f萃取的萃取锅后加入提取浓缩液重量1~2倍的三氯甲烷进行第三次萃取，鼓泡30~60分钟后，静止分层，下层溶液抽至三氯甲烷储罐内，以便下次萃取时使用；
h、第一萃取液浓缩锅夹套开蒸汽进行蒸馏，蒸馏温度控制在60~65℃，蒸到适量后，停止蒸馏，等到第一萃取液浓缩锅内的混合液冷却到室温后，将第二萃取液抽至第一萃取液浓缩锅内，继续蒸馏，蒸馏温度控制在60~65℃，等到等到第一萃取液浓缩锅内的混合液变得粘稠时，停止蒸馏；
i、将步骤h得到的混合液放在干燥机中进行旋转干燥，水温调至70~80℃，干燥后进行粉碎至粉状，在60目的筛网中进行过筛，得到含有雷公藤有效成分的第一粉末。
下面测定实施例1得到的第一粉末中所含的雷公藤甲素的含量具体操作如下：
试验方法
1、抽样
按照GB/T1605-2001中“商品原药的采样”方法进行。用随机法确定抽样的包装件数，最终抽样量不少于10g。
2 、鉴别试验
在第一粉末中取试样约20mg，置于试管中，加无水乙醇1mL溶解后，加稀盐酸1mL，置水浴中加热约10min后，恢复至室温，用NaOH溶液中和至中性或弱碱性，加新鲜配制的碱性酒石酸铜试液0.5mL，在沸水水浴中加热5min，有棕红色沉淀生成。
在第一粉末中取试样3mg，置于试管中，加冰醋酸1mL溶解后，沿壁加入浓硫酸1mL，两液面交界处即呈现红色。
在第一粉末中取试样及对照品各约10mg，分别加5%乙醇三氯甲烷液0.3mL溶解，进行薄层法试验，取上述二种溶液各4μL，分别点于同一硅胶G薄层板上（事先经80℃活化30min，放干燥器内备用）。以环己烷：丙酮（5：3）为展开剂，展开后，晾干，喷浓硫酸，在105℃烘10min，供试品色谱中在对照品相应位置上显相同颜色的斑点。
3、雷公藤甲素含量的测定
3.1、方法提要
第一粉末试样用甲醇溶解，以甲醇 : 0.01mol/l磷酸二氢钾溶液(pH4.5) （40 : 60）为流动相，以十八烷基硅烷健合硅胶为填充剂，检测波长为225nm，对试样中雷公藤甲素进行高效液相色谱分离和测定。
3.2、试剂和溶液
甲醇：色谱纯
乙酸乙酯：分析纯
中性氧化铝：分析纯
雷公藤甲素标样：已知含量≥99.0%
3.3、仪器
高效液相色谱仪：具225nm的紫外检测器；
色谱数据处理机；
色谱柱：lichrospher CN (250mm×4.6mm) 不锈钢柱，内装十八烷基硅烷健合硅胶填充剂；
定量进样环：20 μL；
微量注射器：25 μL；
3.4、高效液相色谱操作条件
柱温：30℃
检测器波长：225nm
流动相溶液：甲醇 : 0.01mol/L磷酸二氢钾溶液 = 40 : 60
流速：1.0 ml/min
进样体积：20 μL
保留时间：约18 min
上述操作条件是典型的，可根据仪器特点，对给定参数作适当调整，以期获得最佳效果。
3.5、测定步骤
3.5.1 标样溶液的配制：准确称取雷公藤甲素标样0.01g（精确至0.00001g）于50mL容量瓶中，加甲醇适量，在超声波下振荡3min溶解，用甲醇定容至刻度，摇匀。用移液管移取上述溶液5mL于20mL容量瓶中，用甲醇稀释至刻度，摇匀。
3.5.2 试样溶液的配制：取试样约0.3g（精确至0.0001g），于容量瓶中，加入乙酸乙酯10mL，超声提取30min，倒入离心管中离心（3000r/min；20min）。吸取上清液5mL，加至已用乙酸乙酯湿法装好的中性氧化铝柱（3g）上，以30mL乙酸乙酯洗脱，收集流出液和洗脱液，旋转蒸发仪蒸除乙酸乙酯，残渣以甲醇少量多次转移至5mL容量瓶中，加甲醇定容至刻度，摇匀，微孔滤膜过滤，作为供试样溶液。
3.5.3测定：在上述操作条件下，待仪器基线稳定后，连续注入数针标准溶液，直至相邻两针雷公藤甲素响应值相对偏差小于1.2%后，按照标样溶液、试样溶液、试样溶液、标样溶液的顺序进行测定。
3.6、计算
将测得的两针试样溶液以及试样前后两针标样溶液中雷公藤甲素的峰面积分别进行平均。试样中雷公藤甲素质量百分数X1(％)按式(1)计算：
X 1 = A 2 × m 1 × P × n A 1 × m 2 . . . ( 1 ) ]]>
式中：
A1—标样溶液中，雷公藤甲素的峰面积的平均值；
A2—试样溶液中，雷公藤甲素的峰而积的平均值；
m1—雷公藤甲素标样的质量，g；
m2—试样的质量，g；
P-标样中雷公藤甲素质量分数，％；
n-试样的稀释倍数。
根据式（1），计算出X1为0.012%。
所以，通过本发明的方法提取的雷公藤有效成分的重量为植物雷公藤重量的0.012%。