一种 4- 氨基吡啶衍生物及其制备方法与应用 技术领域 本发明涉及一种化合物， 尤其是涉及一种 4- 氨基吡啶衍生物化合物及其制备方 法与应用。
背景技术 近年来的研究发现， 海洋生物毒素河豚毒素 (Tetrototoxin， TTX) 中毒是我国食 用水产品中毒的一个主要原因。在我国， 使用水产品引起的中毒事件中有相当一部分是由 河豚毒素引起。但是， 目前临床上对 TTX 中毒尚无特效药， 主要采取综合对症治疗措施， 早 期可催吐、 洗胃， 用 2％碳酸氢钠中和胃内毒素。
4- 氨基吡啶 (4-AP) 是近年深受重视的离子通道抑制剂， 它对传出神经的各类 突触传递均有易化作用， 其机制是通过促进神经肌肉传输， 进而调节离子通道的电导率， 促使中枢乙酰胆碱酯酶 (AchE) 从神经末段的释放， 兴奋正常动物的呼吸， 升高血压和加 快心率。由于 4-AP 的上述药理学特性使它有可能被发展为一种有效抑制 TTX 毒素中毒 的解毒剂药物 ([3]Chang F.T.C.， Spriggs D.L.， Benton， B.J.， Keller S.A.， Capacio B.R.Fundamental and Applied Toxicology 1997， 38， 75-88 ； [4]Chen H.M.， Lin C.H， Wang T.M.Toxicology and Applied Pharmacology1996， 141， 44-48)， 而且有文献报道了 4-AP 对 石房蛤毒素 STX 中毒小鼠的恢复可以达到 70％。
但 是， 4-AP 本 身 又 有 毒 性， 当 它 的 给 药 剂 量 超 过 2mg/kg/h 时， 动物实验会表 现出比如肌肉抽搐， 昏厥， 痉挛等诸多的副反应 ([5]Chang F.T.C， Robert M.， Capacio B.R.Toxican， 1996， 34， 671-690 ； [6] 洪专， 易瑞灶， 许晨， 杨志文， 张扬扬， 河豚毒素中毒机 理与临床救治探讨， 中国海洋药物， 2004， 3， 49-53)。所以， 为了减少 4-AP 的这些缺点， 对 4-AP 母体进行化学修饰和改造就显得非常有意义。
发明内容 本发明的目的在于提供一种条件温和、 成本较低的 4- 氨基吡啶衍生物及其制备 方法与应用。
所述 4- 氨基吡啶衍生物为 (O， O)- 二异丙基磷酰化氨基酸 - 吡啶 -4- 氨基甲酰 酯化合物的简称， (O， O)- 二异丙基磷酰化氨基酸 - 吡啶 -4- 氨基甲酰酯化合物的结构式如 下：
其中， R1 为 -CH3(A1)， -CH2CH(CH3)2(A2)， -CH(CH3)CH2CH3(A3)， -CH2CH2CH2-(A4)， -C H(CH3)2(A5)， -CH2Ph(A6)。(O， O)- 二异丙基磷酰化氨基酸 - 吡啶 -4- 氨基甲酰酯包括 ： (O， O)- 二异丙基磷 酰化丙氨酸 - 吡啶 -4- 氨基甲酰酯、 (O， O)- 二异丙基磷酰化亮氨酸 - 吡啶 -4- 氨基甲酰 酯、 (O， O)- 二异丙基磷酰化异亮氨酸 - 吡啶 -4- 氨基甲酰酯、 (O， O)- 二异丙基磷酰化脯 氨酸 - 吡啶 -4- 氨基甲酰酯、 (O， O)- 二异丙基磷酰化缬氨酸 - 吡啶 -4- 氨基甲酰酯、 (O， O)- 二异丙基磷酰化苯丙氨酸 - 吡啶 -4- 氨基甲酰酯等六种 4- 氨基吡啶衍生物。
所述 4- 氨基吡啶衍生物的制备方法， 包括以下步骤 ：
1) 在 N2 保护条件下， 在 Ph3P 和 C2Cl6 中加入 CH2Cl2， 冷却， 得反应液 A ；
在步骤 1) 中， 所述 Ph3P 和 C2Cl6 按摩尔比为 1 ∶ (1 ～ 1.3)， 所述冷却， 可冰浴冷 却至 -4 ～ -8℃。
2) 在 DiPP- 氨基酸和 4-AP 中加入四氢呋喃 (THF)， 同时注入缚酸剂， 溶解后， 将四 氢呋喃溶液加到反应液 A 中， 冰盐浴条件下反应， 得反应液 B ；
在步骤 2) 中， 所述 DiPP- 氨基酸和 4-AP 按摩尔比为 1 ∶ (1 ～ 11)， 所述三乙胺 与 DiPP- 氨基酸的摩尔比为 1 ∶ (3 ～ 4) ； 所述冰盐浴的温度可为 -10 ～ -15℃， 所述反应 的时间可为 12 ～ 24h ； 所述 DiPP- 氨基酸可选自 DiPP- 丙氨酸， DiPP- 亮氨酸， DiPP- 异亮 氨酸， DiPP- 脯氨酸， DiPP- 缬氨酸， DiPP- 苯丙氨酸等中的一种 ； 所述缚酸剂可选自三乙胺， 二乙胺， 六氢吡啶等中的一种。 3) 将反应液 B 滤去白色固体， 减压浓缩除去有机溶剂， 加入水， 用 HCl 调节 pH ＝ 2 ～ 3， 用二氯甲烷萃取有机物， 弃去有机相， 水相用 NaOH 调 pH ＝ 10 ～ 11， 乙酸乙酯萃取， 有机相用无水 Mg2SO4 干燥， 过滤， 减压浓缩得到粗产物， 常压柱层析， 即得产物。
在步骤 3) 中， 所述将反应液 B 滤去白色固体， 可采用砂芯漏斗滤去白色固体物。
用本发明的方法制备的 (O， O)- 二异丙基磷酰化氨基酸 - 吡啶 -4- 氨基甲酰酯 (4- 氨基吡啶衍生物 )， 是一种全新结构的具有 TTX 解毒活性的化合物， 通过这个制备方法 1 合成不同 R 取代基的 4- 氨基吡啶衍生物， 并进行活性实验， 得到了满意的结果， 尤其具有 良好的生物活性， 对海洋生物毒素 TTX 中毒具有明显解毒作用， 因此本发明所述 4- 氨基吡 啶衍生物可用于制备一种含 4- 氨基吡啶子结构的 TTX 解毒剂前药。
附图说明
图 1 为化合物 A1 的 HPLC 高效液相色谱图。
图 2 为化合物 A1 的 ESI 质谱图。
图 3 为化合物 A1 的 1H NMR 氢谱图。
图 4 为化合物 A1 的 13C NMR 碳谱图。
图 5 为化合物 A1 的 31P NMR 磷谱图。
图 6 为化合物 A1 的红外光谱图。 具体实施方式
以下实施例将结合附图对本发明作进一步的说明。
实施例 1 ： 制备 (O， O)- 二异丙基磷酰化丙氨酸 - 吡啶 -4- 氨基甲酰酯化合物 (A1) 化合物 (A1) 的结构式为 ：
化合物的合成步骤如下 ：
1、 在 N2 保护条件下， 将 1.50mmol(0.39g)Ph3P 和 1.65mmol(0.39g)C2Cl625mL 装入 圆底烧瓶中， 并加入 10mL CH2Cl2， 冰浴冷却至 -4 ～ -8℃， 反应 30min， 待用。
2、 称取 1mmol DiPP- 丙氨酸 (0.253g) 和 1mmol 4-AP(0.094g) 于 50mL 圆底烧瓶 中， 加入 15mL 四氢呋喃 (THF)， 同时注入三乙胺 (0.8mL) 让它们完全溶解， 将 THF 溶液慢慢 滴加到上述 Ph3P 和 C2Cl6 的反应液中。冰盐浴 -10 ～ -15℃条件下， 反应 24h。
3、 反应液显悬浊状， 砂芯漏斗滤去白色固体， 减压浓缩除去有机溶剂， 加入 30mL 水， 用 1M HCl 调节 pH ＝ 2 ～ 3， 二氯甲烷萃取有机物， 弃去有机相。水相用 4％ NaOH 调 pH ＝ 10 ～ 11， 乙酸乙酯萃取 2 次， 有机相用无水 Mg2SO4 干燥 4 ～ 5h， 过滤， 减压浓缩得到粗产 物， 常压柱层析， 即得产物 A10.27g( 产率 ： 84％ )。
化合物的主要物理及化学性质如下 ：
m.p.117.8 ～ 119.5℃ ；
P NMR(CDCl3， δ： ppm) ： 4.92 ；
H NMR(400MHz， CDCl3， δ： ppm) ： 10.14(br， 1H， NH)， 8.47(d， J ＝ 6Hz， 2H， PyH)， 7.61(d， J ＝ 6Hz， 2H， PyH)， 4.61-4.58(m， 2H， 2OCH(CH3)2)， 4.09-4.06(m， 1H， CH)， 3.96(br， 1H， NH)， 1.49(t， J ＝ 4Hz， 3H， CH3)， 1.33-1.31(m， 12H， 2OCH(CH3)2) ； 13
C NMR(100MHz， CDCl3， δ： ppm) ： 173.1(C ＝ O)， 150.5， 145.9， 113.6， 110.1(Py)， 71.7(OCH(CH3)2)， 51.9(CH)， 24.0(OCH(CH3)2)， 20.9(CH3) ； -1
IR(KBr)v(cm ) ： 3310(N-H)， 2979， 1703(C ＝ O)， 1595， 1524( 芳 环 骨 架 振 动 )， 1221(P ＝ O)， 998， 837(P-O-C) ；
MS m/z[M+H]+330， [M+Na]+352， 189， 301 ；
HRMS(TOF-MS)exact mass calcd for[C 14H 24N 3O 4P+H] +requires 330.1577 ， Found330.1574.
实施例 2 ： 制备 (O， O)- 二异丙基磷酰化亮氨酸 - 吡啶 -4- 氨基甲酰酯化合物 (A2)
化合物 (A2) 的结构式为 ：
131
化合物的合成步骤如下 ：
1、 在 N2 保护条件下， 将 1.50mmol(0.39g)Ph3P 和 1.65mmol(0.39g)C2Cl625mL 装入 圆底烧瓶中， 并加入 10mL CH2Cl2， 冰浴冷却至 -4 ～ -8℃， 反应 30min， 待用。
2、 称取 1mmol DiPP- 亮氨酸 (0.295g) 和 1mmol 4-AP(0.094g) 于 50mL 圆底烧瓶 中， 加入 15mL 四氢呋喃 (THF)， 同时注入三乙胺 (0.8mL) 让它们完全溶解， 将 THF 溶液慢慢 滴加到上述 Ph3P 和 C2Cl6 的反应液中。冰盐浴 -10 ～ -15℃条件下， 反应 24h。
3、 反应液显悬浊状， 砂芯漏斗滤去白色固体， 减压浓缩除去有机溶剂， 加入 30mL 水， 用 1M HCl 调节 pH ＝ 2 ～ 3， 二氯甲烷萃取有机物， 弃去有机相。水相用 4％ NaOH 调 pH ＝ 10 ～ 11， 乙酸乙酯萃取 2 次， 有机相用无水 Mg2SO4 干燥 4 ～ 5h， 过滤， 减压浓缩得到粗产 物， 常压柱层析， 即得产物 A20.27g( 产率 ： 73％ )。
化合物的主要物理及化学性质如下 ：
m.p.198.2 ～ 200.4℃ ； 31
P NMR(CDCl3， δ： ppm) ： 4.92 ； 1
H NMR(400MHz ， CDCl 3， δ： ppm) ： 10.04(br ， 1H ， NH) ， 8.49(d ， J ＝ 5Hz ， 2H ， PyH) ， 7.63(d ， J ＝ 5Hz ， 2H ， PyH) ， 4.55-4.63(m ， 2H ， 2OCH(CH 3) 2) ， 3.90-3.95(m ， 2H ， CHCH2)， 1.78-1.82(m， 1H， CHCH2)， 1.68-1.69(m， 1H， CHNH)， 1.58-1.61(m， 1H， CH(CH)3)， 13 1.27-1.33(m ， 12H ， 2OCH(CH 3) 2) ， 0.93-0.96(m ， 6H ， CH(CH 3) 2) ； C NMR(100MHz ， CDCl 3， δ： ppm) ： 173.4(C ＝ O)， 150.5， 145.6， 113.7(Py)， 72.1(OCH(CH3)2)， 71.9(OCH(CH3)2)， 55.3(NHCH)， 43.4(CH2CH)， 24.7(CH(CH3)2)， 23.8(OCH(CH3)2)， 21.9(CH(CH3)2) ； -1
IR(KBr)v(cm ) ： 3264(N-H)， 2977， 1690(C ＝ O)， 1594， 1531( 芳 环 骨 架 振 动 )， 1222(P ＝ O)， 990， 835(P-O-C) ； MS m/z[M+H]+372， [M+Na]+394， 205， 239 ；
HRMS(TOF-MS)exact mass calcd for[C 17H 31N 3O 4P+H] +requires 372.2047 ， Found372.2062.
实施例 3 ： 制备 (O， O)- 二异丙基磷酰化异亮氨酸 - 吡啶 -4- 氨基甲酰酯化合物 (A3)
化合物 (A3) 的结构式为 ：
化合物的合成步骤如下 ：
1、 在 N2 保护条件下， 将 1.50mmol(0.39g)Ph3P 和 1.65mmol(0.39g)C2Cl625mL 装入 圆底烧瓶中， 并加入 10mL CH2Cl2， 冰浴冷却至 -4 ～ -8℃， 反应 30min， 待用。
2、 称取 1mmol DiPP- 异亮氨酸 (0.295g) 和 1mmol 4-AP(0.094g) 于 50mL 圆底烧 瓶中， 加入 15mL 四氢呋喃 (THF)， 同时注入三乙胺 (0.8mL) 让它们完全溶解， 将 THF 溶液慢 慢滴加到上述 Ph3P 和 C2Cl6 的反应液中。冰盐浴 -10 ～ -15℃条件下， 反应 24h。
3、 反应液显悬浊状， 砂芯漏斗滤去白色固体， 减压浓缩除去有机溶剂， 加入 30mL 水， 用 1M HCl 调节 pH ＝ 2 ～ 3， 二氯甲烷萃取有机物， 弃去有机相。水相用 4％ NaOH 调 pH ＝ 10 ～ 11， 乙酸乙酯萃取 2 次， 有机相用无水 Mg2SO4 干燥 4 ～ 5h， 过滤， 减压浓缩得到粗产 物， 常压柱层析， 即得产物 A30.30g( 产率 ： 81％ )。
化合物的主要物理及化学性质如下 ：
m.p.195.7 ～ 198.1℃ ； 31
P NMR(CDCl3， δ： ppm) ： 4.97 ； 1
H NMR(400MHz， CDCl3， δ： ppm) ： 10.08(br， 1H， NH)， 8.48-8.46(d， J ＝ 5Hz，
2H， PyH)， 7.64-7.62(d， J ＝ 5Hz， 2H， PyH)， 4.52-4.62(m， 2H， 2OCH(CH3)2)， 4.00(br， 1H， NH)， 3.73-3.78(m， 1H， CH)， 1.83-1.85(m， 1H， CHaHbCH3)， 1.68-1.70(m， 1H， CHaHbCH3)， 1.15-1.19(m ， 1H ， CHCH 3) ， 1.27-1.32(m ， 12H ， 2OCH(CH 3) 2) ， 0.97-0.98(m ， 3H ， CHCH 3) ， 0.91-0.88(m， 3H， CH2CH3) ； 13
C NMR(100MHz ，CDCl 3 ，δ ： ppm) ： 172.8(C ＝ O) ， 150.4 ， 145.6 ， 113.8 ， (Py) ， 72.0(OCH(CH 3 ) 2 ) ， 71.6(OCH(CH 3 ) 2 ) ， 61.5(CH) ， 38.7(CHCH 3 ) ， 24.8(CH 2 CH 3 ) ， 23.7(OCH(CH3)2)， 15.5(CHCH3)， 11.2(CH2CH3) ； -1
IR(KBr)v(cm ) ： 3256(N-H)， 2979， 1686(C ＝ O)， 1595， 1534( 芳 环 骨 架 振 动 )， 1224(P ＝ O)， 998， 832(P-O-C) ；
MS m/z[M+H]+372， [M+Na]+394， 239， 301 ；
HRMS(TOF-MS)exact mass calcd for[C 17H 31N 3O 4P+H] +requires 372.2047 ， Found372.2047.
实施例 4 ： 制备 (O， O)- 二异丙基磷酰化脯氨酸 - 吡啶 -4- 氨基甲酰酯化合物 (A4)
化合物 (A4) 的结构式为 ：
化合物的合成步骤如下 ：
1、 在 N2 保护条件下， 将 1.50mmol(0.39g)Ph3P 和 1.65mmol(0.39g)C2Cl625mL 装入 圆底烧瓶中， 并加入 10mL CH2Cl2， 冰浴冷却至 -4 ～ -8℃， 反应 30min， 待用。
2、 称取 1mmol DiPP- 脯氨酸 (0.279g) 和 1mmol 4-AP(0.094g) 于 50mL 圆底烧瓶 中， 加入 15mL 四氢呋喃 (THF)， 同时注入三乙胺 (0.8mL) 让它们完全溶解， 将 THF 溶液慢慢 滴加到上述 Ph3P 和 C2Cl6 的反应液中。冰盐浴 -10 ～ -15℃条件下， 反应 24h。
3、 反应液显悬浊状， 砂芯漏斗滤去白色固体， 减压浓缩除去有机溶剂， 加入 30mL 水， 用 1M HCl 调节 pH ＝ 2 ～ 3， 二氯甲烷萃取有机物， 弃去有机相。水相用 4％ NaOH 调 pH ＝ 10 ～ 11， 乙酸乙酯萃取 2 次， 有机相用无水 Mg2SO4 干燥 4 ～ 5h， 过滤， 减压浓缩得到粗产 物， 常压柱层析， 即得产物 A40.25g( 产率 ： 70％ )。
化合物的主要物理及化学性质如下 ：
m.p.88.7 ～ 90.8℃ ； 31
P NMR(CDCl3， δ： ppm) ： 7.36 ； 1
H NMR(400MHz ， CDCl 3， δ： ppm) ： 10.15(br ， 1H ， NH) ， 8.44(d ， J ＝ 5Hz ， 2H ， PyH) ， 7.50(d ， J ＝ 5Hz ， 2H ， PyH) ， 4.59-4.64(m ， 2H ， 2OCH(CH 3) 2) ， 4.26-4.30(m ， 1H ， CHCH2)， 3.18-3.22(m， 2H， CH2CH2)， 2.48(br， 1H， CH2CHaHb)， 1.91-1.99(m， 3H， CH2CHaHb)， 1.26-1.36(m， 12H， 2OCH(CH3)2) ； 13
C NMR(100MHz ， CDCl 3， δ： ppm) ： 171.8(C ＝ O) ， 150.5 ， 145.4 ， 113.4(Py) ， 71.9(OCH(CH3)2)， 71.8(OCH(CH3)2)， 61.6(CH2)， 47.8(CHCH2)， 28.8(CH2CH2)25.8(CH2CH2)， 23.9(OCH(CH3)2)， 23.6(OCH(CH3)2) ；
IR(KBr)v(cm-1) ： 3260(N-H)， 2977， 1708(C ＝ O)， 1598， 1520( 芳 环 骨 架 振 动 )，
1236(P ＝ O)， 981， 826(P-O-C) ；
MS m/z[M+H]+356， 189， 239， 301 ；
HRMS(TOF-MS)exact mass calcd for[C 16H 26N 3O 4P+H] +requires 356.1734 ， Found356.1727.
实施例 5 ： 制备 (O， O)- 二异丙基磷酰化缬氨酸 - 吡啶 -4- 氨基甲酰酯化合物 (A5)
化合物 (A5) 的结构式为 ：
化合物的合成步骤如下 ：
1、 在 N2 保护条件下， 将 1.50mmol(0.39g)Ph3P 和 1.65mmol(0.39g)C2Cl625mL 装入 圆底烧瓶中， 并加入 10mL CH2Cl2， 冰浴冷却至 -4 ～ -8℃， 反应 30min， 待用。
2、 称取 1mmol DiPP- 缬氨酸 (0.281g) 和 1mmol 4-AP(0.094g) 于 50mL 圆底烧瓶 中， 加入 15mL 四氢呋喃 (THF)， 同时注入三乙胺 (0.8mL) 让它们完全溶解， 将 THF 溶液慢慢 滴加到上述 Ph3P 和 C2Cl6 的反应液中。冰盐浴 -10 ～ -15℃条件下， 反应 24h。
3、 反应液显悬浊状， 砂芯漏斗滤去白色固体， 减压浓缩除去有机溶剂， 加入 30mL 水， 用 1M HCl 调节 pH ＝ 2 ～ 3， 二氯甲烷萃取有机物， 弃去有机相。水相用 4％ NaOH 调 pH ＝ 10 ～ 11， 乙酸乙酯萃取 2 次， 有机相用无水 Mg2SO4 干燥 4 ～ 5h， 过滤， 减压浓缩得到粗产 物， 常压柱层析， 即得产物 A50.26g( 产率 ： 73％ )。
化合物的主要物理及化学性质如下 ：
m.p.177.6 ～ 182.0℃ ； 31
P NMR(CDCl3， δ： ppm) ： 3.49 ； 1
H NMR(400MHz， CDCl3， δ： ppm) ： 10.32(br， 1H， NH)， 8.47-8.48(d， J ＝ 5Hz， 2H， PyH)， 7.69-7.70(d， J ＝ 5Hz， 2H， PyH)， 4.52-4.62(m， 2H， 2OCH(CH3)2)， 4.02-4.04(m， 1H ， CHNH) ， 3.69-3.74(m ， 1H ， CHNH) ， 2.05-2.13(m ， 1H ， CH(CH 3) 2) ， 1.21-1.34(m ， 12H ， 2OCH(CH3)2)， 1.03-1.01(m， 6H， CH(CH3)2) ； 13
C NMR(100MHz ， CDCl 3， δ： ppm) ： 173.0(C ＝ O) ， 149.6 ， 141.8 ， 113.9(Py) ， 71.9(OCH(CH 3 ) 2 ) ， 71.7(OCH(CH 3 ) 2 ) ， 62.4(CH) ， 32.0(CH(CH 3 ) 2 ) ， 23.76(OCH(CH 3 ) 2 ) ， 19.37CH(CH3)2， 18.19(CH(CH3)2) ；
IR(KBr)v(cm-1) ： 3260(N-H)， 2979， 1688(C ＝ O)， 1594， 1535( 芳 环 骨 架 振 动 )， 1224(P ＝ O)， 999， 831(P-O-C) ；
MS m/z[M+H]+358， [M+Na]+380， 301 ；
HRMS(TOF-MS)exact mass calcd for[C 16H 28N 3O 4P+H] +requires 358.1890 ， Found358.1898.
实施例 6 ： 制备 (O， O)- 二异丙基磷酰化苯丙氨酸 - 吡啶 -4- 氨基甲酰酯化合物 (A6) 化合物 (A6) 的结构式为 ：
化合物的合成步骤如下 ：
1、 在 N2 保护条件下， 将 1.50mmol(0.39g)Ph3P 和 1.65mmol(0.39g)C2Cl625mL 装入 圆底烧瓶中， 并加入 10mL CH2Cl2， 冰浴冷却至 -4 ～ -8℃， 反应 30min， 待用。
2、 称取 1mmol DiPP- 苯丙氨酸 (0.329g) 和 1mmol 4-AP(0.094g) 于 50mL 圆底烧 瓶中， 加入 15mL 四氢呋喃 (THF)， 同时注入三乙胺 (0.8mL) 让它们完全溶解， 将 THF 溶液慢 慢滴加到上述 Ph3P 和 C2Cl6 的反应液中。冰盐浴 -10 ～ -15℃条件下， 反应 24h。
3、 反应液显悬浊状， 砂芯漏斗滤去白色固体， 减压浓缩除去有机溶剂， 加入 3O mL 水， 用 1M HCl 调节 pH ＝ 2 ～ 3， 二氯甲烷萃取有机物， 弃去有机相。水相用 4％ NaOH 调 pH ＝ 10 ～ 11， 乙酸乙酯萃取 2 次， 有机相用无水 Mg2SO4 干燥 4 ～ 5h， 过滤， 减压浓缩得到粗产 物， 常压柱层析， 即得产物 A60.33g( 产率 ： 81％ )。
化合物的主要物理及化学性质如下 ：
m.p.197.9 ～ 201.1℃ ； 31
P NMR(CDCl3， δ： ppm) ： 5.29 ； 1
H NMR(400MHz， CDCl3， δ： ppm) ： 9.40(br， 1H ， NH) ， 8.45-8.50(d ， J ＝ 5Hz ， 2H， PyH)， 7.50-7.51(d， J ＝ 5Hz， 2H， PyH)， 7.17-7.30(m， 5H， PhH)， 4.41-4.50(m， 2H， 2OCH(CH3)2)， 4.14-4.20(m， 1H， CH)， 3.12-3.18(m， 2H， CH2)， 1.78(br， 1H， NH)， 1.16-1.31(m， 12H， 2OCH(CH3)2) ； 13
C NMR(100MHz， CDCl3， δ： ppm) ： 171.8(C ＝ O)， 150.7， 144.9， 113.6(Py)， 136.2， 129.5 ， 128.8 ， 127.2(Ph) ， 72.1(OCH(CH3) 2) ， 72.0(OCH(CH3) 2) ， 57.6(CH) ， 39.4(CHCH2) ， 23.7(OCH(CH3)2) ；
IR(KBr)v(cm-1) ： 3273(N-H)， 2980， 1691(C ＝ O)， 1596， 1535( 芳 环 骨 架 振 动 )， 1224(P ＝ O)， 991， 836(P-O-C) ；
MS m/z[M+H]+406， [M+Na]+428， 301， 189 ；
HRMS(TOF-MS)exact mass calcd for[C 20H 28N 3O 4P+H] +requires 406.1890 ， Found406.1899.
(O， O)- 二异丙基磷酰化氨基酸 - 吡啶 -4- 氨基甲酰酯化合物对 TTX 中毒小鼠解 毒或延长生存时间的应用， 应用效果如下 ：
TTX 毒素和解毒剂药物溶液在使用前几 min 配制使用。注射用 TTX 溶液是从储 备液的 TTX(1μg/mL in 0.03％乙酸 ； 本实验室自制 ) 配制而成。TTX 毒素的给药剂量是 0.45μg/mL( 腹腔注射 0.5mL)。4-AP 以及所合成的 4-AP 衍生物解毒剂的剂量是 0.75mg/ kg 和 1.5mg/kg( 腹腔注射 0.5mL)。 36 只昆明种实验小鼠从厦门大学医学院购置， 动物单独 关在带有食物和铺垫的塑料篮子里。
活性实验过程中， 以活体小鼠为对象， 将 36 只小鼠分成 6 组， 每组 6 只， 每组小鼠
都腹腔注射致死量的 TTX 毒素 (0.45μg/mL， 注射 0.5mL)， 实验小鼠从中毒到死亡的过程 中， 各组的小鼠基本表现出相同的症状， 死亡前会强烈抽搐， 跳跃， 最后呼吸衰竭死亡， 记录 死亡时间作为活性筛选的依据。
实验小鼠在致死剂量 TTX(0.45μg/mL， 注射 0.5mL) 作用下， 腹腔注射 4-AP 和所合 成的 A1 ～ A6 化合物 (0.75mg/kg)， 小鼠存活的时间 ( 单位 ： s) 如表 1 所示。
表1
以下给出 (O， O)- 二异丙基磷酰化丙氨酸 - 吡啶 -4- 氨基甲酰酯化合物毒性的测试。 考察了经过修饰的 4- 氨基吡啶衍生物 ----(O， O)- 二异丙基磷酰化丙氨酸 - 吡 啶 -4- 氨基甲酰酯 (A1) 的毒性， 我们设计以下实验， 实验小鼠在亚致死量 TTX(0.20μg/ kg) 作用下， 腹腔注射 4-AP(1.5mg/kg， 0.5mL) 和合成的 (O， O)- 二异丙基磷酰化丙氨酸 - 吡 啶 -4- 氨基甲酰酯化合物 (A1)(1.5mg/kg， 0.5mL)， 观察小鼠的死亡时间。表 2 给出毒性 实验， 小鼠存活的时间 ( 单位 ： s)， 从表 2 可以看出， 在亚致死剂量的 TTX 作用下， 腹腔注射 4-AP(1.5mg/kg， 0.5mL) 的小鼠， 其死亡率达到 67％， 说明达到一定计量的 4- 氨基吡啶具有 相当的毒性， 但是经过修饰的化合物 A1 在同样剂量的 TTX 下并没有出现死亡小鼠， 即修饰 过的 4- 氨基吡啶衍生物其毒性下降了。
表2