发明领域
本发明涉及包含蛋白水解酶和澄清剂的新型组合物以及使用这些组合物治疗和/或预防癌症的方法。
发明背景
选择的天然和合成消化(蛋白水解)酶用于与弹性细胞外基质模型人工相互作用，以观察细胞外基质中的蛋白质是否可被分解。因此，如果细胞外基质可被分解，则有机化合物(澄清剂)可用于与来自基质降解的产物形成离子键，以进行裂解过程来除去它们。
本文提供包含至少一种蛋白水解酶和澄清剂的新型组合物。还提供用这些新型组合物治疗癌症的方法。
发明概述
在本文公开的一些实施方案中，哺乳动物是人。在本文公开的一些实施方案中，哺乳动物是狗、猫、马或鸟。
在一些实施方案中，口服施用本文提供的组合物。在其他实施方案中，静脉内施用本文提供的组合物。
本文还提供制品，所述制品包括包装材料、在所述包装材料内的本文所述的酶和澄清剂以及标签，所述标签指示所述组合物用于治疗、预防或改善所治疗的疾病或病状的一种或多种症状。
本文所述的方法和组合物的其他目的、特征和优点将从以下详细描述变得显而易见。然而，应理解，详细说明和特定实施例当指示特定实施方案时仅通过说明给出，因为本公开的精神和范围内的各种变化和修改将从此详细描述为本领域技术人员显而易知。
以引用的方式并入
本说明书中提及的所有公布、专利和专利申请都以引用的方式并入本文，所述引用的程度就如同已特定地和个别地指示将各个别公布、专利或专利申请以引用的方式并入一般。
附图简述
本专利或申请文件包括至少一幅彩色绘图。在提出请求并支付必要费用后，本事务所将提供具有彩色附图的本专利或专利申请公布的副本。
本发明的细节可部分地通过研究附图来收集，所有附图都是在处理24小时之后拍摄且在200x下的照片，其中
图1：对照照片-在对照中，孢囊仅在没有其他处理的去离子水中生长24小时。孵化的存在通过沿壳的中部向下以创建部分分型线和用于孵化的开口的单一裂缝而明显。还存在完整的孵化无节幼体，这表明无节幼体能够在这种人工环境中生存(正常条件需要生理盐水/盐水条件)。壳不显示任何种类的退化图案的迹象，并且始终在颜色上保持纯色。孢囊在其壳中保持深褐色。这表明孢囊可在没有影响其生长的任何因素的去离子水中生长，以及去离子水不会促成孢囊壳或细胞外基质的退化。
图2：猕猴桃。用猕猴桃汁处理孢囊24小时后，可观察到孢囊壳内部显示无节幼体的发育，如通过一些孢囊上的孢囊中心中的圆形点所示。存在一个孵化的完整无节幼体(梨形)和一个破坏的无节幼体(弯曲质量)以进行比较。可观察到更浅色壳的存在，其显示不同于如对照(图1)中所示的原始处理前深褐色的不同孢囊壳颜色梯度。可观察到不同的网状或海绵样退化图案，其中在更浅色的总体全孢囊壳的顶部上，网状部分的颜色较深。还存在孢囊壳的清晰部分，所述部分还可被观察到在介质中漂浮，这表明主要孢囊壳发生退化，从而导致稀薄部分稍后分离。这与产生完整深褐色半壳的常规孵化不同。
图3：奇异莓。在处理这些孢囊24小时后，可观察到一些差异。可观察到透明样、具有一些圆形边缘的部分的孢囊壳碎片在介质周围漂浮。这表明孢囊外壳的部分被分离，这与深褐色的孵化半壳(图1)不同。在具有半透明体的照片中的一个孢囊上可观察到退化图案，其周围有深褐色斑点。孢囊完好无损，而壳正在退化。这表明对主孢囊的结构完整性没有影响。在照片中可观察到的其他孢囊仍然是相对纯色的深褐色，还不存在退化图案。
图4：奇异莓。图3的延续，来自相同的结果，不同的部分。透明的孢囊壳层与主孢囊分离，所述主孢囊与图1相比看起来是较浅的褐色色调。具有圆形边缘的这种透明样壳片段表明它以前包含它所位于其上的孢囊。透明样壳与产生仅深褐色半壳的常规无节幼体孵化的壳大不相同。从透明片段留下的孢囊的形状也较小。
图5：奇异莓。图3的延续，来自相同的结果，不同的部分。可观察到完整的无节幼体从孢囊孵化，从而表明它可在目前的处理条件下存活。在产生孵化无节幼体的同一个孢囊上，可观察到壳上的退化图案，同时无节幼体的孵化正在发生，不影响孵化过程。在此的退化图案包括从圆形孢囊的深褐色壳缺失的不同大小的斑点，从而揭示较浅色的内部身体。在同一照片中如在右下中观察到存在尚未受处理影响的另一个孢囊，仍然保持纯深褐色，没有任何种类的退化图案。
图6：香蕉。在处理24小时后，可进行不同的明显观察。观察到不同的孢囊梯度从深褐色到中等或浅褐色。观察到完整的孵化无节幼体，这表明它能够在目前的处理条件下存活和茁壮成长。照片右上角中的孢囊显示出一种孢囊，其展示“帽”样脱离和退化，其中整个壳与主细胞分离。颜色比“帽”片分离更浅的主细胞能够以不同的分型线孵化，不受退化过程的影响。还存在一个具有网状或海绵状退化图案的孢囊，在较浅褐色身体的顶部上具有黑色网状图案。
图7.硅溶胶。在处理24小时后，观察到不同的退化模式。在所述孢囊中的一个上，观察到“帽”样较大片段从孢囊中升起。从孢囊剥离的片段是深褐色的，而整个完整孢囊的其余部分的颜色是浅褐色。如图1中所示，与正常孵化孢囊半壳相比，与孢囊分离的片段的形状也不同。观察到另一个孢囊具有梯度、海绵样退化图案，其中海绵样图案在较浅、半透明褐色的整个完整孢囊之上是深褐色。所述孢囊当前正在活跃孵化，可观察到清楚的分型线，在远处具有无节幼体孵化。照片中存在其他孢囊细胞，颜色范围从深褐色到中等褐色而不同。
图8.硅溶胶。图7的延续，来自相同的结果，不同的部分。在这张照片中观察到的大多数孢囊与图1的那些相比具有较浅褐色。完整的孵化无节幼体表明孢囊可在目前的处理条件下繁殖和存活。观察到包含孢囊的整个透明壳，同时发生活性恶化，缺少黑色斑块，从而在下面露出较浅褐色半透明孢囊。当孢囊在照片的右半部分孵化时，观察到另一个具有“帽”样退化部分的孢囊。剩余的孢囊具有光滑样纹理，与其周围的其他孢囊不同，它获得一点光反射。
图9.菠萝+生姜+白蛋白。在24小时后使用组合的酶和澄清剂，无节幼体能够在当前处理条件下孵化，保持完整并存活。没有观察到受损的无节幼体。看似暗色的孢囊壳也具有相对于中等深褐色壳颜色观察到的微弱光裂纹图案，从而证明在发生活性孵化时出现退化。退化过程不影响孵化或生长过程。
图10.菠萝+生姜+白蛋白。图9的延续，来自处理的相同结果，不同部分。观察到整个孢囊细胞形状完整；然而，深褐色的壳衣正在退化，从而在下面露出较浅褐色半透明的整个孢囊。这发生于几个不同的孢囊，如在照片中看到。还存在漂浮着的分离和退化的深褐色壳衣的一些残留物，这与如在图1所观察到的孵化半壳不同。与少数仍然是纯深褐色孢囊相比，观察到网状或海绵样退化图案以及孢囊碎片的分离剥离。
发明详述
提供对公开的实施方案的以上描述来使本领域的任何技术人员能够制作或使用本发明。本领域的技术人员将容易明白对这些实施方案的各种修改，并且本文所述的一般原理可应用于其他实施方案而不背离本发明的精神和范围。因此，应理解，本文呈现的说明书表示本发明当前优选的实施方案并且因而表示本发明广泛考虑的主题。还应理解，本发明的范围完全包括可能对于本领域的技术人员显而易见的其他实施方案并且本发明的范围因此不受限制。
选择的天然和合成消化(蛋白水解)酶用于与弹性细胞外基质模型人工相互作用，以观察细胞外基质中的蛋白质是否可被分解。因此，如果细胞外基质可被分解，则有机化合物(澄清剂)可用于与来自基质降解的产物形成离子键，以进行裂解过程来除去它们。
消化酶是所有生命物种中天然存在的特征-充当选择性地将大的或复杂的大分子分解成更小的、更有用的分子(如可出于身体可识别的消化原因提取的营养物质)的机制。针对丰年虫(Artemia salina)的细胞外基质测试了来自天然和合成来源的一系列消化酶。丰年虫可在其孢囊状态保持休眠，相对未受伤害。它们的细胞外基质保护幼虫或无节幼体免受孵化二十年以上。选择这些不同的消化酶来研究其对丰年虫的细胞外基质的人工作用，以观察细胞外基质是否能够安全地溶解以暴露完整经历有丝分裂的无节幼体。
一小簇丰年虫休眠孢囊在体内生长，在不同条件和处理下的培养皿内的每个试验作为在对人进行实际测试之前研究恶性样肿瘤条件的普遍存在的模型。建立了每个试验运行的对照，其中一簇丰年虫在无对其生长因子的任何处理的情况下、仅悬浮于去离子水中生长。使用针对对照测试的UV暴露的单独处理来说明在生长期间影响休眠孢囊的细胞外基质的UV处理的作用。对丰年虫针对其个体表现单独测试了每种消化酶。进行每种测试的消化酶的稀释，以找到酶对细胞外基质表面积的影响的最佳浓度。每天进行观察以记录任何显著变化。针对其已知的消化性质选择酶的选择，但是基于丰年虫的细胞外基质的状态消除或稀释酶。
据发现稀释的天然来源的消化酶更快地且以较低浓度分解丰年虫的细胞外基质，对无节幼体生长的破坏较少。在无节幼体周围留有透明膜。在微观光源下，可观察到无节幼体的有丝分裂生长，直到它们孵化。成功的主要指标是溶解的细胞外基质，其中可观察到孢囊的内部是完全孵化的运动的生长丰年虫。消化酶的合成来源还表明细胞外基质的溶解和未孵化的无节幼体的观察。针对其与丰年虫的细胞外基质的功能测试的有机化合物显示不同于消化酶的可见退化图案，其导致细胞外基质的平滑逐渐退化。
因此，据发现使消化酶人工分解细胞外基质可以与有机化合物的组合使用进行，以进一步分解细胞外基质的部分，同时保持细胞的其余部分完整和存活。存在可用于溶解丰年虫中的这些细胞外基质的可持续和天然建立的消化酶和有机化合物，因此，这些酶可用作通过进一步人测试将恶性肿瘤安全地溶解在人体中的可行模型。
某些示例性术语
除非另外定义，否则本文中使用的所有技术和科学术语均具有与所要求保护的主题所属领域中的技术人员通常所理解的相同的含义。在本文的术语存在多个定义的情况下，以本章节中的那些为准。当提及URL或其他此类标识符或地址时，应了解此类标识符可改变，并且互联网上的特定信息可适当地发生变动，但是等效信息可通过搜索互联网来发现。对此类信息的提及显示了它们的可用性和公众传播。
应了解上文一般描述与下文详细描述仅是示例性和解释性的，并且不限制所要求保护的任何主题。在本申请中，除非另外明确陈述，否则使用单数包括复数。必须注意的是，除非上下文另外明确规定，否则如说明书和所附权利要求中所用，单数形式“一个/种(a/an)”和“所述”包括复数指示物。在本申请中，除非另外指明，“或”的使用意指“和/或”。此外，术语“包括”以及其他形式如“包括(include)”、“包括(includes)”和“包括(included)”的使用是非限制性的。
本文所用的章节标题仅出于组织目的，并且不应解释为限制所述主题。本申请中引用的所有文献或文献的部分，包括但不限于专利、专利申请、文章、书籍手册以及论文，皆据此出于任何目的以引用的方式明确地整体并入本文。
应了解本文所描述的方法和组合物不限于本文所描述的特定方法、方案和试剂，并且因此可变化。还应当了解，本文使用的术语是出于描述具体实施方案的目的，并且不意图限制本文描述的方法和组合物的范围。在不脱离本发明的情况下，本领域的技术人员现将会想到众多变化、改变和替代。应了解，本文描述的本发明的实施方案的各种替代方案可用于实践本发明。意图所附权利要求书限定本发明的范围并且由此覆盖在这些权利要求范围内的方法和结构以及其等同形式。
除非另外定义，否则本文中使用的所有技术和科学术语具有与本发明所属领域的技术人员通常所理解的相同的含义。
如本文所用，关于制剂、组合物或成分的术语“可接受的”意指对所治疗的受试者的总体健康没有持续不利影响。
如本文所用，通过施用特定药物组合物改善特定疾病、病症或病状的症状是指可归因于化合物或组合物的施用或与化合物或组合物的施用相关的严重性的任何减轻、发作延迟、进展减缓或持续时间缩短(不管是永久的还是暂时的，持续的还是短暂的)。
如本文所用，术语“施用(administer)”、“施用(administering)”、“施用(administration)”等是指可用于实现组合物递送到所需生物作用部位的方法。这些方法包括但不限于口服途径、十二指肠内途径、胃肠外注射(包括静脉内、皮下、腹膜内、肌内、血管内和/或输注)、局部和直肠施用。本领域的技术人员熟悉可与本文描述的组合物和方法一起使用的施用技术。在一些实施方案中，口服施用本文描述的组合物。
如本文使用的术语“共同施用”等意指涵盖将选择的治疗剂施用于单个患者，并且意图包括其中药剂通过相同或不同的施用途径或在相同或不同时间施用的治疗方案。共同施用包括以单独的组合物同时施用、以单独的组合物在不同时间施用、或者以其中存在两种药剂的组合物施用。
如本文所用的术语“有效量”或“治疗有效量”是指将在一定程度上缓解所治疗的疾病或病状的一种或多种症状的足够量的施用的药剂。所述结果可以是疾病的病征、症状或病因减轻和/或缓和，或生物系统的任何其他所需改变。例如，用于治疗用途的“有效量”是提供疾病症状的临床显著减轻所需的包含如本文所公开的酶和澄清剂的组合物的量。任何个别病例中适当的“有效”量可使用诸如剂量递增研究的技术来确定。
如本文所用的术语“增强(enhance)”或“增强(enhancing)”意指增加或延长所需作用的效力或持续时间。因此，对于增强治疗剂的作用而言，术语“增强”是指增加或延长其他治疗剂对系统的作用的效力或持续时间的能力。如本文所用的“增强有效量”是指足以增强另一种治疗剂在所需系统中的作用的量。
如本文中所用的术语“药物组合”意指由混合或组合多于一种活性成分得到的产物，并且包括活性成分的固定和非固定组合。术语“固定组合”意指活性成分和助剂两者以单一实体或剂量的形式同时施用于患者。术语“非固定组合”意指活性成分和助剂作为分开的实体同时、并发或顺序地但没有具体间隔时间限制地施用于患者，其中这种施用在患者体内提供有效水平的两种化合物。后者还应用于鸡尾酒疗法，例如施用三种或更多种活性成分。
术语“试剂盒”和“制品”用作同义词。
术语“受试者”或“患者”涵盖哺乳动物和非哺乳动物。哺乳动物的实例包括但不限于哺乳动物类别的任何成员：人、非人灵长类动物如黑猩猩和其他猿类；农场动物如牛、马、绵羊、山羊、猪；家养动物如兔、狗和猫；实验动物包括啮齿动物如大鼠、小鼠和豚鼠等。非哺乳动物的实例包括但不限于鸟、鱼等。在本文提供的方法和组合物的一个实施方案中，哺乳动物是人。
如本文所用的术语“治疗(treat)”、“治疗(treating)”或“治疗(treatment)”包括缓和、减轻或改善疾病或病状、症状，预防另外的症状，改善或预防症状的潜在代谢原因，抑制疾病或病状，例如阻止疾病或病状的发展，缓解疾病或病状，导致疾病或病状消退，缓解由疾病或病状引起的病状，或预防性地和/或治疗性地停止疾病或病状的症状。此外，治疗益处是通过根除或改善与潜在病症相关的一种或多种生理症状以使得在患者中观察到改善而实现，尽管所述患者仍可能被所述潜在病症困扰。对于预防性益处，可对处于发展特定疾病风险的患者或对报告疾病的一种或多种生理症状的患者(即使可能尚未作出所述疾病的诊断)施用所述组合物。症状的治疗或改善可基于客观或主观参数；包括身体检查、功能(自我)评价和/或任何形式的视觉评价的结果。
术语“体内”是指在受试者体内发生的事件。
癌症
在一些实施方案中，本文公开使用本文公开的组合物治疗癌症的方法。
如本文所用的术语“癌症”是指倾向于以不受控制的方式增殖并且在一些情况下转移(扩散)的细胞的异常生长。癌症的类型包括但不限于在有或无转移的疾病的任何阶段的实体瘤(如膀胱、肠、脑、乳腺、子宫内膜，心脏、肾、肺、肝、子宫、淋巴组织(淋巴瘤)、卵巢、胰腺或其他内分泌器官(甲状腺)、前列腺、皮肤(黑色素瘤或基底细胞癌)的那些)或血液肿瘤(如白血病和淋巴瘤)。
癌症的非限制性实例包括急性成淋巴细胞性白血病、急性骨髓性白血病、肾上腺皮质癌、肛门癌、阑尾癌、星形细胞瘤、非典型畸胎样/横纹肌样肿瘤、基底细胞癌、胆管癌、膀胱癌、骨癌(骨肉瘤和恶性纤维组织细胞瘤)、脑干神经胶质瘤、脑肿瘤、脑和脊髓肿瘤、乳腺癌、支气管肿瘤、伯基特淋巴瘤(Burkitt lymphoma)、宫颈癌、慢性淋巴细胞性白血病、慢性骨髓性白血病、结肠癌、结肠直肠癌、颅咽管瘤、皮肤T细胞淋巴瘤、硬纤维瘤、胚胎性肿瘤、子宫内膜癌、成室管膜细胞瘤、室管膜瘤、食道癌、肿瘤的尤文氏肉瘤家族(ewing sarcoma family of tumors)、眼癌、成视网膜细胞瘤、胆囊癌、胃(gastric/stomach)癌、胃肠道类癌肿瘤、胃肠道间质瘤(GIST)、胃肠道间质细胞瘤、生殖细胞瘤、神经胶质瘤、毛细胞白血病、头颈癌、肝细胞(肝)癌、霍奇金淋巴瘤(Hodgkin lymphoma)、下咽癌、眼内黑色素瘤、胰岛细胞肿瘤(内分泌胰腺)、卡波西肉瘤、肾癌、朗格汉斯细胞组织细胞增生症(Langerhans cell histiocytosis)、喉癌、白血病、急性成淋巴细胞性白血病、急性骨髓性白血病、慢性淋巴细胞性白血病、慢性髓细胞性白血病、毛细胞白血病、肝癌、非小细胞肺癌、小细胞肺癌、伯基特淋巴瘤、皮肤T细胞淋巴瘤、霍奇金淋巴瘤、非霍奇金淋巴瘤、淋巴瘤、瓦尔登斯特伦巨球蛋白血症(Waldenstrom macroglobulinemia)、成神经管细胞瘤、髓质上皮瘤、黑色素瘤、间皮瘤、口腔癌、慢性髓细胞性白血病、骨髓性白血病、多发性骨髓瘤、鼻咽癌、成神经细胞瘤、非霍奇金淋巴瘤、非小细胞肺癌、口腔癌、口咽癌、骨肉瘤、骨恶性纤维组织细胞瘤、卵巢癌、卵巢上皮癌、卵巢生殖细胞肿瘤、卵巢低恶性度潜在肿瘤、胰腺癌、乳头瘤病、甲状胖腺癌、阴茎癌、咽癌、中度分化的松果体实质肿瘤、成松果体细胞瘤和幕上原始神经外胚层肿瘤、垂体肿瘤、浆细胞肿瘤/多发性骨髓瘤、胸膜肺胚细胞瘤、原发性中枢神经系统淋巴瘤、前列腺癌，直肠癌、肾细胞(肾)癌、成视网膜细胞瘤、横纹肌肉瘤、唾液腺癌、肉瘤、塞扎莱综合征(Sezary syndrome)、皮肤癌、小细胞肺癌、小肠癌、软组织肉瘤、鳞状细胞癌、胃(stomach/gastric)癌、幕上原始神经外胚层肿瘤、T细胞淋巴瘤、睾丸癌、咽喉癌、胸腺瘤和胸腺癌、甲状腺癌、尿道癌、子宫癌、子宫肉瘤、阴道癌、外阴癌、瓦尔登斯特伦巨球蛋白血症和威尔姆斯肿瘤(Wilms tumor)。
在一些实施方案中，本文公开的组合物用于治疗卵巢癌、前列腺癌、乳腺癌、肺癌、黑色素瘤、头颈癌、肠癌(结肠直肠癌)、甲状腺癌、成胶质细胞瘤、滤泡性淋巴瘤、肾癌、霍奇金淋巴瘤、肝细胞癌、胰腺癌或黑色素瘤。
在一些实施方案中，本文公开的组合物用于治疗骨转移。
在一些实施方案中，本文公开的组合物用于治疗口腔癌、前列腺癌、直肠癌、非小细胞肺癌、唇和口腔癌、肝癌、肺癌、肛门癌、肾癌、外阴癌、乳腺癌、口咽癌、鼻腔和鼻旁窦癌、鼻咽癌、尿道癌、小肠癌、胆管癌、膀胱癌、卵巢癌、喉癌、下咽癌、胆囊癌、结肠癌、结直肠癌、头颈癌、甲状旁腺癌、阴茎癌、阴道癌、甲状腺癌、胰腺癌、食道癌、霍奇金淋巴瘤、白血病相关疾病、蕈样真菌病或骨髓增生异常综合征。
在一些实施方案中，本文公开的组合物用于治疗非小细胞肺癌、胰腺癌、乳腺癌、卵巢癌、结肠直肠癌或头颈癌。
在一些实施方案中，本文公开的组合物用于治疗癌、肿瘤、瘤、淋巴瘤、黑色素瘤、神经胶质瘤、肉瘤或胚细胞瘤。
在一些实施方案中，癌选自由以下组成的组：癌、腺癌、腺样囊性癌、腺鳞癌、肾上腺皮质癌、高分化癌、鳞状细胞癌、浆液性癌、小细胞癌、浸润性鳞状细胞癌、大细胞癌、胰岛细胞癌、燕麦细胞癌、鳞状细胞癌、未分化癌、疣状癌、肾细胞癌、乳头状浆液性腺癌、梅克尔细胞癌(merkel cell carcinoma)、肝细胞癌、软组织癌、支气管腺癌、毛细管癌、巴氏腺癌(bartholin gland carcinoma)、基底细胞癌、癌肉瘤、乳头状瘤/癌、透明细胞癌、子宫内膜样腺癌、间皮瘤、转移癌、粘液表皮样癌、胆管癌、光化性角化病、囊腺瘤和肝腺瘤病。
在一些实施方案中，肿瘤选自由以下组成的组：星形细胞肿瘤、恶性间皮瘤、卵巢生殖细胞肿瘤、幕上原始神经外胚层肿瘤、威尔姆斯肿瘤(Wilm’s tumor)、垂体肿瘤、性腺外生殖细胞肿瘤、胃泌素瘤、生殖细胞肿瘤、妊娠滋养细胞肿瘤、脑肿瘤、松果体和幕上原始神经外胚层肿瘤、垂体肿瘤、生长抑素分泌肿瘤、内胚窦瘤、类癌、中枢性大脑星形细胞瘤、胰高血糖素瘤、肝腺瘤、胰岛瘤、髓质上皮瘤、浆细胞瘤、舒血管肠肽瘤(vipoma)和嗜铬细胞瘤。
在一些实施方案中，瘤选自由以下组成的组：上皮内瘤形成、多发性骨髓瘤/浆细胞肿瘤、浆细胞肿瘤、上皮内鳞状细胞瘤形成、子宫内膜增生、局灶性结节性增生、血管内皮瘤、淋巴管肌瘤病和恶性胸腺瘤。
在一些实施方案中，淋巴瘤选自由以下组成的组：神经系统淋巴瘤、AIDS相关淋巴瘤、皮肤T细胞淋巴瘤、非霍奇金淋巴瘤、套细胞淋巴瘤、滤泡淋巴瘤和瓦尔登斯特伦氏巨球蛋白血症。
在一些实施方案中，黑色素瘤选自由以下组成的组：肢端雀斑样痣黑色素瘤、浅表性扩散性黑色素瘤、葡萄膜黑色素瘤、恶性雀斑样痣黑色素瘤、黑色素瘤、眼内黑素瘤、腺癌结节性黑色素瘤和血管瘤。
在一些实施方案中，肉瘤选自由以下组成的组：腺瘤、腺肉瘤、软骨肉瘤、子宫内膜间质肉瘤、尤文氏肉瘤、卡波西肉瘤、平滑肌肉瘤、横纹肌肉瘤、肉瘤、子宫肉瘤、骨肉瘤和假肉瘤。
在一些实施方案中，神经胶质瘤选自由以下组成的组：神经胶质瘤、脑干神经胶质瘤以及下丘脑和视通路神经胶质瘤。
在一些实施方案中，胚细胞瘤选自由以下组成的组：肺胚细胞瘤、胸膜肺胚细胞瘤、成视网膜细胞瘤、成神经细胞瘤、成神经管细胞瘤、成胶质细胞瘤和成血管细胞瘤。
示例性酶
在本文提供的各种实施方案中，使用包含一种或多种天然和/或合成消化(蛋白水解)酶的组合物来分解弹性细胞外基质。
适用于本发明的蛋白水解酶的非限制性实例包括半胱氨酸蛋白酶家族，其可在来自番木瓜果实的木瓜蛋白酶和木瓜凝乳蛋白酶、无花果中的无花果蛋白酶、奇异果中的奇异果蛋白酶和中国醋栗/芒果/香蕉中找到。适用于本发明的新鲜蛋白水解酶的具体实例是在猕猴桃、奇异莓、姜黄、番木瓜、香蕉+果皮、芒果、姜黄+生姜和无花果中。还适用的是像蛋白酶如二芳基庚烷类代谢物(来自新鲜姜黄的姜黄素)一样起作用的酶。在具体实施方案中，一种或多种酶选自菠萝蛋白酶、奇异果蛋白酶、生姜蛋白酶(GP)或zingipain。
示例性澄清剂
一旦蛋白水解酶将细胞外基质分解成副产物，澄清剂就用于除去那些副产物。关于澄清剂的另一个特征是它们除去副产物以沉淀和或结合蛋白质的能力。因此，在本文提供的各种实施方案中，一旦细胞外基质倍分解，就使用诸如澄清剂的有机化合物来与来自基质降解的产物形成离子键以进行裂解过程来除去它们。
适用于本文所述的组合物中的澄清剂的非限制性实例是碳、明胶、酪蛋白、白蛋白、PVPP、鱼胶(鳔胶)(isinglass/ichtyocolle)、硅溶胶(kieselsol)、壳聚糖、硅溶胶+壳聚糖、藻酸钠、硅藻土、海藻酸和膨润土。在具体实施方案中，澄清剂是白蛋白。
示例性药物组合物
可使用一种或多种生理学上可接受的载体(包括赋形剂和助剂)以常规方式来配制药物组合物，所述载体有助于将活性组分加工成药学上可使用的制剂。适当制剂取决于所选择的施用途径。当适合时且如本领域中所了解，可使用任何熟知技术、载体和赋形剂。本文描述的药物组合物的总结可例如在以下文献中找到：Remington：The Science and Practice of Pharmacy，第十九版(Easton，Pa.：Mack Publishing Company，1995)；Hoover，John E.，Remington’s Pharmaceutical Sciences，Mack Publishing Co.，Easton，Pa.1975；Liberman，H.A.和Lachman，L.，编辑，Pharmaceutical Dosage Forms，Marcel Decker，New York，N.Y.，1980；以及Pharmaceutical Dosage Forms and Drug Delivery Systems，第七版(Lippincott Williams&Wilkins 1999)，对于这种公开其以引用的方式整体并入本文。
在一些实施方案中，本文所述的酶和澄清剂的组合在药物组合物中单独或与药学上可接受的载体、赋形剂或稀释剂组合施用。本文描述的组合物的施用可通过使酶和澄清剂递送到作用部位的任何方法来实现。这些方法包括但不限于经由肠内途径(包括口服、胃或十二指肠营养管、直肠栓剂和直肠灌肠剂)、胃肠外途径(注射或输注，包括动脉内、心脏内、皮内、十二指肠内、髓内、肌内、骨内、腹膜内、鞘内、血管内、静脉内、玻璃体内、硬脑膜上和皮下)、吸入、经皮、经粘膜、舌下、经颊和局部(包括表皮、真皮、灌肠剂、滴眼液、滴耳液、鼻内、阴道)施用递送，但是最合适的途径可取决于例如接受者的状况和病症。仅作为示例，本文所述的组合物可局部施用于需要治疗的区域，例如在手术期间的局部输注、局部应用如乳膏或软膏、注射、导管或植入物。施用也可通过在患病组织或器官的部位直接注射。
本文提供包含本文所述的酶和澄清剂以及药学上可接受的稀释剂、赋形剂和/或载体的药物组合物。此外，本文所述的组合物可与其他活性成分混合，如在组合疗法中。
如本文所用的药物组合物是指本文所述的一种或多种酶和澄清剂与其他化学组分(如载体、稳定剂、稀释剂、分散剂、悬浮剂、增稠剂和/或赋形剂)的混合物。药物组合物有助于向生物体施用这些组分。在实践本文提供的治疗或使用方法时，将治疗有效量的本文所述的酶和澄清剂在药物组合物中施用于患有待治疗的疾病或病状的哺乳动物。治疗有效量可根据疾病的严重程度、受试者的年龄和相对健康、所使用的酶和澄清剂的效力以及其他因素而广泛变化。本文提供的组合物中的组分可单独使用或与作为混合物的组分的一种或多种治疗剂组合使用。
可经口使用的药物组合物包括片剂、舌下片剂、可咀嚼/可溶解的片剂、由明胶制得的推合式(push-fit)胶囊以及由明胶和增塑剂(如甘油或山梨糖醇)制得的密封软胶囊。可通过压制或模制、任选使用一种或多种辅助成分来制成片剂。压制片剂可通过在合适的机器中压制任选与粘合剂、惰性稀释剂或润滑剂、表面活性剂或分散剂混合的，呈自由流动形式(如粉末或颗粒)的活性成分来制备。模制片剂可通过在合适的机器中模制用惰性液体稀释剂湿润的粉末状化合物的混合物来制备。在一些实施方案中，将片剂包衣或刻痕并且配制成提供其中的活性成分的缓慢或受控释放。用于口服施用的所有制剂应呈适合用于所述施用的剂量。推合式胶囊可包含与填充剂(如乳糖)、粘合剂(如淀粉)和/或润滑剂(如滑石或硬脂酸镁)以及任选的稳定剂混合的活性成分。在软胶囊中，酶和澄清剂可溶解或悬浮于合适的液体，如脂肪油、液体石蜡或液体聚乙二醇中。在一些实施方案中，添加稳定剂。糖锭剂核心具有适合的包衣。为此目的，可使用浓缩的糖溶液，所述浓缩的糖溶液可任选包含阿拉伯胶、滑石、聚乙烯吡咯啶酮、卡波姆胶、聚乙二醇、和/或二氧化钛、漆溶液、以及合适的有机溶剂或溶剂混合物。染料或色素可添加至片剂或糖锭剂包衣以用于鉴别或表征不同剂量。
在一些实施方案中，药物组合物被配制成通过注射(例如通过推注或连续输注)胃肠外施用。用于注射的制剂可以添加有防腐剂的单位剂型的形式呈现，例如，在安瓿中或在多剂量容器中。组合物可采用如在油性或水性媒介物中的悬浮液、溶液或乳液的这类形式，并且可包含配制剂如悬浮剂、稳定剂和/或分散剂。组合物可呈现于单剂量或多剂量容器，例如密封安瓿和小瓶中，且可以粉末形式或以冷冻干燥(冻干)状态储存，从而仅需要在使用之前即刻添加无菌液体载体例如生理盐水或无菌无热原水。即时注射溶液和悬浮液可从先前所述种类的无菌粉末、颗粒和片剂制备。
用于胃肠外施用的药物组合物包括所述组合物的水性和非水性(油性)无菌注射溶液，其可含有使制剂与预期接受者的血液等渗的抗氧化剂、缓冲剂、抑菌剂和溶质；以及可包含悬浮剂和增稠剂的水性和非水性无菌悬浮液。合适的亲脂性溶剂或媒介物包括脂肪油(如芝麻油)或合成脂肪酸酯(如油酸乙酯或甘油三酯)或脂质体。水性注射悬浮液可包含增加悬浮液的粘度的物质，如羧甲基纤维素钠、山梨糖醇或葡聚糖。任选地，悬浮液还可包含合适的稳定剂或增加酶和澄清剂的溶解度以允许制备高浓度溶液的试剂。
药物组合物还可被配制为贮库型制剂。此类长效制剂可通过植入(例如皮下或肌内)或通过肌内注射来施用。因此，例如，酶和澄清剂可与合适的聚合物材料或疏水性材料(例如，在可接受的油中的乳液)或离子交换树脂一起配制，或配制为微溶衍生物，例如，配制为微溶盐。
对于通过吸入的施用，药物组合物方便地从吹入器、喷雾器加压包装(nebulizer pressurized pack)或递送气溶胶喷雾的其他便利工具中递送。加压包装可包含合适的推进剂，如二氯二氟甲烷、三氯氟甲烷、二氯四氟乙烷、二氧化碳或其他合适气体。在加压气雾剂的情况下，可通过提供阀门以便递送计量的量来确定剂量单位。或者，对于通过吸入或吹入的施用，药物制剂可采取干粉组合物的形式，例如酶和澄清剂以及合适的粉末基质(如乳糖或淀粉)的粉末混合物。所述粉末组合物可在例如，胶囊、药筒、明胶或泡罩包装中以单位剂型呈现，所述粉末可借助于吸入器或吹入器从其中施用。
本文所述的组合物可局部施用并且可配制成多种可局部施用的组合物，如溶液、悬浮液、洗剂、凝胶、糊剂、药物棒、香膏、乳膏或软膏。此类药物组合物可含有本领域中已知的增溶剂、稳定剂、张力增强剂、缓冲剂和防腐剂。
适合于经皮施用本文所述的组合物的制剂可使用经皮递送装置和经皮递送贴剂，并且可以是溶解和/或分散在聚合物或粘合剂中的亲脂性乳剂或缓冲水溶液。此类贴剂可被构造用于药剂的连续、脉冲式或按需递送。此外，本文所述的化合物的经皮递送可通过离子电渗贴剂等实现。另外，经皮贴剂可提供本文所述的组合物的受控递送。可通过使用速率控制膜或通过将酶和澄清剂捕获在聚合物基质或凝胶内来减缓吸收速率。相反，吸收增强剂可用于增加吸收。吸收增强剂或载体可包括可吸收的药学上可接受的溶剂以帮助穿过皮肤。例如，经皮装置呈绷带的形式，所述绷带包括背部构件、含有化合物(任选地)与载体的储库、任选地速率控制屏障(以将化合物以控制的和预定的速率在延长的一段时间内递送至宿主的皮肤)以及用于将所述装置固定至皮肤的器件。
应了解，除以上具体提及的成分之外，本文所述的化合物和组合物可包含与所讨论的制剂类型有关的本领域中常规的其他药剂，例如适用于口服施用的那些化合物和组合物可包含调味剂。
可使用一种或多种生理学上可接受的载体(包括赋形剂和助剂)以常规方式来配制药物组合物，所述载体有助于将活性化合物加工成药学上可使用的制剂。适当制剂取决于所选择的施用途径。当适合时且如本领域中所了解，可使用任何熟知技术、载体和赋形剂。包含本文所述的化合物的药物组合物可以常规方式制造，如(仅作为举例)通过常规混合、溶解、制粒、糖锭剂制备、研磨、乳化、包封、包埋或压片方法。
水性悬浮液还可含有一种或多种作为悬浮剂的聚合物。有用的聚合物包括水溶性聚合物，如纤维素聚合物，例如羟丙基甲基纤维素；和水不溶性聚合物，如交联的含羧基聚合物。有用的组合物还可包含选自例如羧甲基纤维素、卡波姆(丙烯酸聚合物)、聚(甲基丙烯酸甲酯)、聚丙烯酰胺、聚卡波非、丙烯酸/丙烯酸丁酯共聚物、藻酸钠和葡聚糖的粘膜粘附聚合物。口服悬浮液/液体可呈粉末形式，直到使用者添加水。在各种实施方案中，药物组合物是口服糖浆或口服g/mL溶液。
组合物还可包含增溶剂以有助于本文所述的酶和/或澄清剂的溶解。术语“增溶剂”通常包括导致药剂的胶束溶液或真正溶液形成的试剂。某些可接受的非离子型表面活性剂(例如聚山梨酸酯80)可用作增溶剂，眼睛可接受的二醇、聚二醇(例如聚乙二醇400)和二醇醚也可用作增溶剂。
组合物还可包含一种或多种pH调节剂或缓冲剂，包括酸如乙酸、硼酸、柠檬酸、乳酸、磷酸和盐酸；碱如氢氧化钠、碳酸钠、碳酸氢钠、磷酸钠、硼酸钠、柠檬酸钠、乙酸钠、乳酸钠和三羟甲基氨基甲烷；和缓冲剂如柠檬酸盐/右旋糖、碳酸氢钠和氯化铵。此类酸、碱和缓冲剂以将组合物的pH保持在可接受范围内所需的量包含。
其他组合物还可包含一种或多种防腐剂以抑制微生物活性。合适的防腐剂是本领域中已知的，并且包括但不限于含汞物质，如merfen和硫柳汞；稳定化二氧化氯；和季铵化合物如苯扎氯铵、溴化十六烷基三甲基铵和氯化十六烷基吡啶鎓。
其他组合物可包含一种或多种表面活性剂以增强物理稳定性或用于其他目的。合适的非离子型表面活性剂包括聚氧乙烯脂肪酸甘油酯和植物油，例如聚氧乙烯(60)氢化蓖麻油；和聚氧乙烯烷基醚和烷基苯基醚，例如辛苯聚醇10、辛苯聚醇40。
其他组合物可包含一种或多种抗氧化剂以在需要时增强化学稳定性。合适的抗氧化剂包括(仅作为举例)抗坏血酸和焦亚硫酸钠。
在一些实施方案中，本文提供的组合物包含防腐剂。适用于本发明的防腐剂的非限制性实例是对羟基苯甲酸酯(对羟基苯甲酸的烷基酯，例如对羟基苯甲酸甲酯和对羟基苯甲酸丙酯)、苯甲酸、山梨酸、苯甲醇、苯氧基乙醇、氯甲酚、苯扎氯铵、溴化十六烷基三甲胺(centrimide)、苄索氯铵、氯己定、氯丁醇、对羟基苯甲酸甲酯、苯乙醇、乙酸苯汞、硼酸苯汞、硝酸苯汞、对羟基苯甲酸丙酯和硫柳汞。
组合物的有效量可基于多种因素而变化，所述因素包括但不限于受试者的生理特征、待治疗病状的性质以及施用途径和/或方法。有利地，本文所述的方法允许治疗适应症，副作用、剂量水平、剂量频率、治疗持续时间、耐受性和/或其他因素降低。
示例性给药方法和治疗方案
本文所述的组合物可用于制备用于治疗或预防特定疾病或病状的药物。此外，用于治疗需要这种治疗的受试者的本文所述的任何疾病或病状的方法涉及以治疗有效量向所述受试者施用含有至少一种酶和澄清剂的药物组合物。
含有本文所述的化合物的组合物可出于预防性和/或治疗性治疗施用。在治疗性应用中，向已经罹患疾病或病状的患者施用组合物，其量足以治愈或至少部分地阻止所述疾病或病状的症状。对这种用途有效的量将取决于疾病或病状的严重性和病程、先前疗法、患者的健康状况、体重和对药物的反应以及主治医师的判断。据认为，通过常规实验(包括但不限于剂量递增临床试验)来确定此类治疗有效量显然在本领域技术人员的能力范围内。
在预防性应用中，将含有本文所述的化合物的组合物施用于易患特定疾病、病症或病状或另外处于特定疾病、病症或病状风险的患者。这种量被定义为“预防有效量或剂量”。在此用途中，精确量还取决于患者的健康状况、体重等。据认为，通过常规实验(例如，剂量递增临床试验)来确定此类预防有效量显然在本领域技术人员的能力范围内。当用于患者中时，对于此用途的有效量将取决于疾病、病症或病状的严重性和病程、先前疗法、患者的健康状况和对药物的反应以及主治医师的判断。
在患者的病状并未改善的情况下，根据医生的判断，本文所述的化合物的施用可长期施用，即持续延长的时间段，包括在患者生命的整个持续时间，以便改善或以其他方式控制或限制患者的疾病或病状的症状。
在患者状况确实改善的情况下，根据医生的判断，可连续给予本文所述的化合物的施用；或者，所施用的本文所述的化合物的剂量可暂时减少或暂时推迟一定时间(即，“休药期”)。休药期的长度可在2天与1年之间变化，仅作为举例包括2天、3天、4天、5天、6天、7天、10天、12天、15天、20天、28天、35天、50天、70天、100天、120天、150天、180天、200天、250天、280天、300天、320天、350天和365天。在休药期期间的剂量减少可以是10％至100％，仅作为举例包括10％、15％、20％、25％、30％、35％、40％、45％、50％、55％、60％、65％、70％、75％、80％、85％、90％、95％和100％。
一旦发生患者的病状改善，就在需要时施用维持剂量。随后，可根据症状将施用的剂量或频率或二者降低到维持疾病、病症或病状的改善状态的水平。然而，在症状有任何复发时，患者可能需要长期间歇治疗。
将对应于这种量的给定药剂的量将取决于诸如特定化合物、疾病状况及其严重性、需要治疗的受试者或宿主的身份(例如年龄、体重，性别等)等因素而变化，但是可根据病例周围的特定情况以本领域中已知的方式常规地确定，包括例如所施用的具体组合物、施用途径、所治疗的病状和所治疗的受试者或宿主。所需的剂量可方便地以单次剂量或作为同时施用(或在短时间段内)或以适当间隔施用(例如每天两次、三次、四次或更多次亚剂量)的分次剂量呈现。
本文所述的药物组合物可呈适于精确剂量的单次施用的单位剂型。在单位剂型中，将制剂分成含有适量的一种或多种化合物的单位剂量。单位剂量可呈含有离散量的制剂的包装形式。非限制性实例是包装的片剂或胶囊，和于小瓶或安瓿中的粉末。水性悬浮液组合物可包装在单剂量不可再封口的容器中。或者，可使用多剂量可再封口容器，在此情况下组合物中通常包含防腐剂。仅作为举例，用于胃肠外注射的制剂可以单位剂型呈现，所述单位剂型包括但不限于安瓿，或于添加有防腐剂的多剂量容器中。
治疗方案取决于个体和所寻求的治疗。在一些实施方案中，组合物每天一次、或每天两次、或每天三次、或每天四次、或每天五次或每天六次施用。在替代实施方案中，组合物在一天、或两天、或三天、或四天、或五天、或六天、或一周、或两周、或三周或一个月的过程内每小时、或每2小时、或每3小时、或每4小时、或每5小时施用。
在各种实施方案中，组合物在一天、两天、三天、四天、五天、六天、七天或每天的过程内施用持续一周、两周、三周或四周。在其他实施方案中，组合物在一天的过程内施用持续一个月、两个月、三个月、四个月、五个月或六个月。在具体实施方案中，治疗持续5至7天，但可根据需要继续。
在各种实施方案中，将组合物储存在室温下以保持酶和澄清剂的活性。
当向青少年施用组合物时，所施用的剂量是基于以下表1A中所示的标准：
表1A
癌症分期 剂量* 0至I 低 II至III 中等* IV 高*
当向成人施用组合物时，所施用的剂量是基于以下表1B中所示的标准：
表1B
癌症分期 剂量* 0至I 低至中等* II至III 中等至高* IV 高
*表1A和表1B中的剂量在下文的实施例38和39中进行了描述。可将低剂量注射到静脉中，但是中等剂量和高剂量必须在几小时内经由滴注(静脉内输注)施用。
现在已经一般性地描述了本发明，通过参考以下实施例将更容易理解本发明，所述实施例以说明的方式提供，并且不意图限制本发明，除非指明。
实施例
实施例1：来自理论值的菠萝
使用5mL刻度移液管将3滴新鲜磨碎的菠萝汁(从研钵和研杵)稀释到12.0mL的H2O中。
·12.0mL＝用于实验的100滴(100份)的量的3倍(3x).100滴＝4.0mL
·5mL容量刻度移液管＝25滴/mL
·25滴/mL＝0.04mL/滴
使用x体积/滴的菠萝的液滴＝用于稀释的菠萝汁的总体积。(3)x(0.04mL)＝0.12mL菠萝汁溶质。使用百分比溶液等式(vol/vol％)：
vol/vol％＝1
新鲜菠萝汁储液＝在12.0mL的H2O中1％。然后将1滴菠萝储液添加至4.0mL的H2O中用于实验。使用稀释公式C1V1＝C2V2：
C1V1＝C2V2
C1＝起始浓度 C2＝最终浓度
V1＝起始体积 V2＝最终体积
C1＝1％ C2＝X
V1＝.04mL V2＝4.0mL
(.01)x(.04)＝X(4.0)
.0001＝X
理论结果：0.0001％最终菠萝汁浓度。
实施例2：菠萝实验值
使用5mL刻度移液管将3滴新鲜磨碎的菠萝汁(从研钵和研杵)稀释到13.2mL的H2O中。
·13.2mL＝用于实验的100滴(100份)的量的3倍(3x)。100滴＝4.4mL
·5mL容量刻度移液管＝22.7滴/mL
·22.7滴/mL＝0.044mL/滴
使用x体积/滴的菠萝的液滴＝用于稀释的菠萝汁的总体积。(3)x(0.044mL)＝0.132mL菠萝汁溶质。使用百分比溶液等式(vol/vol％)：
Vol/vol％＝1
新鲜菠萝汁储液＝在13.2mL的H2O中1％。然后将1滴菠萝储液添加至4.4mL的H2O中用于实验。使用稀释公式C1V1＝C2V2：
C1V1＝C2V2
C1＝起始浓度 C2＝最终浓度
V1＝起始体积 V2＝最终体积
C1＝1％ C2＝X
V1＝.044mL V2-4.4mL
(.01)x(.044)＝X(4.4)
.0001＝X
实验结果：0.0001％最终菠萝汁浓度。
实施例3：来自理论值的生姜根
使用5mL刻度移液管将3滴新鲜磨碎的生姜根(从研钵和研杵)稀释到12.0mL的H2O中。
·12.0mL＝用于实验的100滴(100份)的量的3倍(3x)。100滴＝4.0mL
·5mL容量刻度移液管＝25滴/mL
·25滴/mL＝0.04mL/滴
使用x体积/滴的生姜的液滴＝用于稀释的生姜根汁的总体积。(3)x(0.04mL)＝0.12mL生姜汁溶质。使用百分比溶液等式(vol/vol％)：
Vol/vol％＝1
新鲜生姜根汁储液＝在12.0mL的H2O中1％。然后将1滴生姜储液添加至4.0mL的H2O中用于实验。使用稀释公式C1V1＝C2V2：
C1V1＝C2V2
C1＝起始浓度 C2＝最终浓度
V1＝起始体积 V2＝最终体积
C1＝1％ C2＝X
V1＝.04mL V2＝4.0mL
(.01)x(.04)＝X(4.0)
.0001＝X
理论结果：0.0001％最终生姜根汁浓度用于实验。
实施例4：生姜实验值
使用5mL刻度移液管将3滴新鲜磨碎的生姜根汁(从研钵和研杵)稀释到13.2mL的H2O中。
·13.2mL＝用于实验的100滴(100份)的量的3倍(3x)。100滴＝4.4mL
·5mL容量刻度移液管＝22.7滴/mL
·22.7滴/mL＝0.044mL/滴
使用x体积/滴的生姜根汁的液滴＝用于稀释的生姜汁的总体积。(3)x(0.044mL)＝0.132mL生姜根汁溶质。使用百分比溶液等式(vol/vol％)：
Vol/vol％＝1
新鲜生姜根汁储液＝在13.2mL的H2O中1％。然后将1滴生姜储液添加至4.4mL的H2O中用于实验。使用稀释公式C1V1＝C2V2：
C1V1＝C2V2
C1＝起始浓度 C2＝最终浓度
V1＝起始体积 V2＝最终体积
C1＝1％ C2＝X
V1＝.044mL V2-4.4mL
(.01)x(.044)＝X(4.4)
.0001＝X
实验结果：0.0001％最终生姜根汁浓度。
实施例5：来自理论值的蛋白
使用5mL刻度移液管将2滴新鲜磨碎的菠萝汁(从研钵和研杵)稀释到12.0mL的H2O中。
·12.0mL＝用于实验的100滴(100份)的量的3倍(3x)。100滴＝4.0mL
·5mL容量刻度移液管＝25滴/mL
·25滴/mL＝0.04mL/滴
使用x体积/滴的蛋白的液滴＝用于稀释的蛋白的总体积。(2)x(0.04mL)＝0.8mL蛋白溶质。使用百分比溶液等式(vol/vol％)：
Vol/vol％＝.67
新鲜蛋白储液＝在12.0mL的H2O中0.67％。
然后将1滴蛋白储液添加至4.0mL的H2O中用于实验。使用稀释公式C1V1＝C2V2：
C1V1＝C2V2
C1＝起始浓度 C2＝最终浓度
V1＝起始体积 V2＝最终体积
C1＝0.67％ C2＝X
V1＝.04mL V2＝4.0mL
(.0067)x(.04)＝X(4.0)
.000067＝X
理论结果：0.000067％最终蛋白浓度。
实施例6：蛋白实验值
使用5mL刻度移液管将2滴新鲜蛋白(从研钵和研杵)稀释到13.2mL的H2O中。
·13.2mL＝用于实验的100滴(100份)的量的3倍(3x)。100滴＝4.4mL
·5mL容量刻度移液管＝22.7滴/mL
·22.7滴/mL＝0.044mL/滴
使用x体积/滴的菠萝的液滴＝用于稀释的蛋白的总体积。(2)x(0.044mL)＝0.088mL蛋白溶质。使用百分比溶液等式(vol/vol％)：
Vol/vol％＝0.67
新鲜蛋白储液＝在13.2mL的H2O中0.67％。然后将1滴蛋白溶液添加至4.4mL的H2O中用于实验。使用稀释公式C1V1＝C2V2：
C1V1＝C2V2
C1＝起始浓度 C2＝最终浓度
V1＝起始体积 V2＝最终体积
C1＝0.67％ C2＝X
V1＝.044mL V2＝4.4mL
(.0067)x(.044)＝X(4.4)
.000067＝X
实验结果：0.000067％最终蛋白浓度。
实施例7：猕猴桃汁实验值
使用3mL刻度移液管将2滴新鲜磨碎的猕猴桃汁(从研钵和研杵)稀释到4.0mL的H2O中。
·100滴(100份)用于实验。100滴＝4.0mL
·3mL容量刻度移液管＝25滴/mL
·25滴/mL＝0.04mL/滴
使用x体积/滴的猕猴桃的液滴＝用于稀释的猕猴桃汁的总体积。(2)x(0.04mL)＝0.08mL猕猴桃汁溶质。使用百分比溶液等式(vol/vol％)：
vol/vol％＝2
实施例8：示例性新鲜猕猴桃汁储液-浓度#2(中度)
*在稀释之前对新鲜猕猴桃汁储液进行测试
使用3mL刻度移液管将5滴新鲜磨碎的猕猴桃汁(从研钵和研杵)稀释到16.0mL的H2O中。
·16.0mL＝用于实验的100滴(100份)的量的4倍(4x)。100滴＝4.0mL
·3mL容量刻度移液管＝25滴/mL
·25滴/mL＝0.04mL/滴
使用x体积/滴的猕猴桃的液滴＝用于稀释的猕猴桃汁的总体积。(5)x(0.04mL)＝0.2mL猕猴桃汁溶质。[使用百分比溶液等式(vol/vol％)]
vol/vol％＝1.25
新鲜猕猴桃汁储液＝在16.0mL的H2中1.25％。然后将1滴猕猴桃储液添加至4.0mL的H2O中用于实验。[使用稀释公式C1V1＝C2V2]
C1V1＝C2V2
C1＝起始浓度 C2＝最终浓度
V1＝起始体积 V2＝最终体积
C1＝1.25％ C2＝X
V1＝.04mL V2＝4.0mL
(.0125)x(.04)＝X(4.0)
.000125＝X
.000125％最终猕猴桃汁浓度用于实验。
实施例9：奇异莓汁实验值-浓度#1(强)
使用3mL刻度移液管将2滴新鲜磨碎的奇异莓(其上有皮)汁(从研钵和研杵)稀释到4.0mL的H2O中。
-100滴(100份)用于实验。100滴＝4.0mL
-3mL容量刻度移液管＝25滴/mL
-25滴/mL＝0.04mL/滴
使用x体积/滴的奇异莓的液滴＝用于稀释的奇异莓汁的总体积。(2)x(0.04mL)＝0.08mL奇异莓汁溶质。[使用百分比溶液等式(vol/vol％)]
vol/vol％＝2
实施例10：示例性新鲜奇异莓汁储液-浓度#2(中度)
*在稀释之前对新鲜奇异莓汁储液进行测试
稀释的奇异莓：使用3mL刻度移液管将3滴新鲜磨碎的奇异莓(其上有皮)汁(从研钵和研杵)稀释到8.0mL的H2O中。
·8.0mL＝用于实验的100滴(100份)的量的2倍(2x)。100滴＝4.0mL
·3mL容量刻度移液管＝25滴/mL
·25滴/mL＝0.04mL/滴
使用x体积/滴的奇异莓的液滴＝用于稀释的奇异莓汁的总体积。(3)x(0.04mL)＝0.12mL奇异莓汁溶质[使用百分比溶液等式(vol/vol％)]
vol/vol％＝1.5
新鲜奇异莓汁储液＝在8.0mL的H2O中1.5％
然后将1滴奇异莓储液添加至4.0mL的H2O中用于实验。[使用稀释公式C1V1＝C2V2]
C1V1＝C2V2
C1＝起始浓度 C2＝最终浓度
V1＝起始体积 V2＝最终体积
C1＝1.5％ C2＝X
V1＝.04mL V2＝4.0mL
(.015)×(.04)＝X(4.0)
.00015＝X
.00015％最终奇异莓汁浓度用于实验。
实施例11：芒果汁实验值-浓度#1(强)
使用3mL刻度移液管将2滴新鲜磨碎的芒果汁(从研钵和研杵)稀释到4.0mL的H2O中。
-100滴(100份)用于实验。100滴＝4.0mL
-3mL容量刻度移液管＝25滴/mL
-25滴/mL＝0.04mL/滴
使用x体积/滴的芒果的液滴＝用于稀释的芒果汁的总体积。
(2)x(0.04mL)＝0.08mL芒果汁溶质。[使用百分比溶液等式(vol/vol％)]
vol/vol％＝2
实施例12：示例性新鲜芒果汁储液-浓度#2(中度)
*在稀释之前对新鲜芒果汁储液进行测试
稀释的芒果：使用3mL刻度移液管将3滴新鲜磨碎的芒果汁(从研钵和研杵)稀释到8.0mL的H2O中。
·8.0mL＝用于实验的100滴(100份)的量的2倍(2x)。100滴＝4.0mL
·3mL容量刻度移液管＝25滴/mL
·25滴/mL＝0.04mL/滴
使用x体积/滴的芒果的液滴＝用于稀释的芒果汁的总体积。(3)x(0.04mL)＝0.12mL芒果汁溶质。[使用百分比溶液等式(vol/vol％)]
vol/vol％＝1.5
新鲜芒果汁储液＝在8.0mL的H2O中1.5％。
然后将1滴芒果储液添加至4.0mL的H2O中用于实验。[使用稀释公式C1V1＝C2V2]
C1V1＝C2V2
C1＝起始浓度 C2＝最终浓度
V1＝起始体积 V2＝最终体积
C1＝1.5％ C2＝X
V1＝.04mL V2＝4.0mL
(.015)x(.04)＝X(4.0)
.00015＝X
.00015％最终芒果汁浓度用于实验。
实施例13：香蕉汁实验值-浓度#1(强)
使用3mL刻度移液管将2滴新鲜磨碎的香蕉(其上有皮/果皮)汁(从研钵和研杵)稀释到4.0mL的H2O中。
-100滴(100份)用于实验。100滴＝4.0mL
-3mL容量刻度移液管＝25滴/mL
-25滴/mL＝0.04mL/滴
使用x体积/滴的香蕉的液滴＝用于稀释的香蕉汁的总体积。(2)x(0.04mL)＝0.08mL香蕉汁溶质。[使用百分比溶液等式(vol/vol％)]
vol/vol％＝0.08mL香蕉x100
4.0mL H2O
vol/vol％＝2
实施例14：示例性新鲜香蕉汁储液-浓度#2(中度)
*在稀释之前对新鲜香蕉汁储液进行测试
稀释的香蕉：使用3mL刻度移液管将4滴新鲜磨碎的香蕉(其上有皮/果皮)汁(从研钵和研杵)稀释到8.0mL的H2O中。
·8.0mL＝用于实验的100滴(100份)的量的2倍(2x)。100滴＝4.0mL
·3mL容量刻度移液管＝25滴/mL
·25滴/mL＝0.04mL/滴
使用x体积/滴的香蕉的液滴＝用于稀释的香蕉汁的总体积。(4)x(0.04mL)＝0.16mL香蕉汁溶质[使用百分比溶液等式(vol/vol％)]
vol/vol％＝2
新鲜香蕉汁储液＝在8.0mL的H2O中2％。然后将1滴香蕉储液添加至4.0mL的H2O中用于实验。[使用稀释公式C1V1＝C2V2]
C1V1＝C2V2
C1＝起始浓度 C2＝最终浓度
V1＝起始体积 V2＝最终体积
C1＝2％ C2＝X
V1＝.04mL V2＝4.0mL
(.02)x(.04)＝X(4.0)
.0002＝X
.0002％最终香蕉汁浓度用于实验
实施例15：姜黄实验值-浓度#1(中度)
使用3mL刻度移液管将2滴新鲜磨碎的姜黄汁(从研钵和研杵)稀释到4.0mL的H2O中。
-100滴(100份)用于实验。100滴＝4.0mL
-3mL容量刻度移液管＝25滴/mL
-25滴/mL＝0.04mL/滴
使用x体积/滴的姜黄的液滴＝用于稀释的姜黄汁的总体积。(2)x(0.04mL)＝0.08mL姜黄汁溶质[使用百分比溶液等式(vol/vol％)]
vol/vol％＝2
实施例16：示例性姜黄储液-浓度#2(强)
*对新鲜姜黄汁储液进行测试
使用3mL刻度移液管将3滴新鲜磨碎的姜黄汁(从研钵和研杵)稀释到4.0mL的H2O中。
-100滴(100份)用于实验。100滴＝4.0mL
-3mL容量刻度移液管＝25滴/mL
-25滴/mL＝0.04mL/滴
使用x体积/滴的姜黄的液滴＝用于稀释的姜黄汁的总体积。(3)x(0.04mL)＝0.12mL姜黄汁溶质[使用百分比溶液等式(vol/vol％)]
vol/vol％＝3
实施例17：新鲜木瓜汁实验值-浓度#1(非常强)
*在稀释之前对新鲜木瓜汁储液进行测试
使用3mL刻度移液管将1滴新鲜磨碎的木瓜汁(从研钵和研杵)稀释到4.0mL的H2O中。
-100滴(100份)用于实验。100滴＝4.0mL
-3mL容量刻度移液管＝25滴/mL
-25滴/mL＝0.04mL/滴
使用x体积/滴的木瓜的液滴＝用于稀释的木瓜汁的总体积。(1)x(0.04mL)＝0.04mL木瓜汁溶质[使用百分比溶液等式(vol/vol％)]
vol/vol％＝1
实施例18：新鲜木瓜汁实验值-浓度#2(强)
*在稀释之前对新鲜木瓜汁储液进行测试
使用3mL刻度移液管将2滴新鲜磨碎的木瓜汁(从研钵和研杵)稀释到4.0mL的H2O中。
-100滴(100份)用于实验。100滴＝4.0mL
-3mL容量刻度移液管＝25滴/mL
-25滴/mL＝0.04mL/滴
使用x体积/滴的木瓜的液滴＝用于稀释的木瓜汁的总体积。(2)x(0.04mL)＝0.08mL木瓜汁溶质[使用百分比溶液等式(vol/vol％)]
vol/vol％＝2
实施例19：新鲜木瓜汁实验值-浓度#3(中度)
稀释的木瓜：使用3mL刻度移液管将3滴新鲜磨碎的木瓜汁(从研钵和研杵)稀释到12.0mL的H2O中。
·12.0mL＝用于实验的100滴(100份)的量的3倍(3x)100滴＝4.0mL
·3mL容量刻度移液管＝25滴/mL
·25滴/mL＝0.04mL/滴
使用x体积/滴的木瓜的液滴＝用于稀释的木瓜汁的总体积。(3)x(0.04mL)＝0.12mL香蕉汁溶质[使用百分比溶液等式(vol/vol％)]
vol/vol％＝1
新鲜木瓜汁储液＝在12.0mL的H2O中1％。然后将1滴木瓜储液添加至4.0mL的H2O中用于实验。[使用稀释公式C1V1＝C2V2]
C1V1＝C2V2
C1＝起始浓度 C2＝最终浓度
V1＝起始体积 V2＝最终体积
C1＝1％ C2＝X
V1＝.04mL V2＝4.0mL
(.01)x(.04)＝X(4.0)
.0001＝X
.0001％最终木瓜汁浓度用于实验
实施例20：新鲜木瓜汁实验值-浓度#4(缓效)
稀释的木瓜：使用3mL刻度移液管将4滴新鲜磨碎的木瓜汁(从研钵和研杵)稀释到12.0mL的H2O中。
·12.0mL＝用于实验的100滴(100份)的量的3倍(3x)100滴＝4.0mL
·3mL容量刻度移液管＝25滴/mL
·25滴/mL＝0.04mL/滴
使用x体积/滴的木瓜的液滴＝用于稀释的木瓜汁的总体积。(4)x(0.04mL)＝0.16mL木瓜汁溶质[使用百分比溶液等式(vol/vol％)]
vol/vol％＝1.3
新鲜木瓜汁储液＝在12.0mL的H2O中1.3％。然后将1滴木瓜储液添加至4.0mL的H2O中用于实验。[使用稀释公式C1V1＝C2V2]
C1V1＝C2V2
C1＝起始浓度 C2＝最终浓度
V1＝起始体积 V2＝最终体积
C1＝1.3％ C2＝X
V1＝.04mL V2＝4.0mL
(.013)x(.04)＝X(4.0)
.00013＝X
.00013％最终木瓜汁浓度用于实验
实施例21：示例性组合酶-生姜+姜黄实验值-浓度#1(非常强)
*在稀释之前对新鲜生姜和姜黄汁储液进行测试
使用3mL刻度移液管将各自1滴新鲜磨碎的生姜和姜黄汁(从研钵和研杵)稀释到4.0mL的H2O中。
-100滴(100份)用于实验。100滴＝4.0mL
-3mL容量刻度移液管＝25滴/mL
-25滴/mL＝0.04mL/滴
使用x体积/滴的(生姜+姜黄)的液滴＝用于稀释的生姜和姜黄汁的总体积。(2)x(0.04mL)＝0.08mL生姜和姜黄汁溶质[使用百分比溶液等式(vol/vol％)]
vol/vol％＝2
新鲜生姜和姜黄汁储液＝在4.0mL的H2O中2％(*1％的新鲜生姜+1％新鲜姜黄＝2％)
实施例22：示例性组合酶-生姜+姜黄实验值-浓度#2(中度)
稀释的生姜+未稀释的姜黄：使用3mL刻度移液管将3滴新鲜磨碎的生姜汁(从研钵和研杵)稀释到12.0mL的H2O中。
·12.0mL＝用于实验的100滴(100份)的量的3倍(3x)。100滴＝4.0mL
·3mL容量刻度移液管＝25滴/mL
·25滴/mL＝0.04mL/滴
使用x体积/滴的生姜的液滴＝用于稀释的生姜汁的总体积。(3)x(0.04mL)＝0.12mL生姜汁溶质[使用百分比溶液等式(vol/vol％)]
vol/vol％＝1
新鲜生姜汁储液＝在12.0mL的H2O中1％。然后将1滴生姜储液添加至4.0mL的H2O中用于实验。[使用稀释公式C1V1＝C2V2]
C1V1＝C2V2
C1＝起始浓度 C2＝最终浓度
V1＝起始体积 V2＝最终体积
C1＝1％ C2＝X
V1＝.04mL V2＝4.0mL
(.01)x(.04)＝X(4.0)
.0001＝X
.0001％最终生姜汁浓度用于实验
使用3mL刻度移液管将1滴新鲜磨碎的姜黄汁(从研钵和研杵)稀释到4.0mL的H2O中。
-100滴(100份)用于实验。100滴＝4.0mL
-3mL容量刻度移液管＝25滴/mL
-25滴/mL＝0.04mL/滴
使用x体积/滴的姜黄的液滴＝用于稀释的姜黄汁的总体积。(1)x(0.04mL)＝0.04mL姜黄汁溶质[使用百分比溶液等式(vol/vol％)]
vol/vol％＝1
新鲜姜黄汁储液＝在4.0mL的H2O中1％。
最终生姜+姜黄汁浓度＝1％姜黄+.0001％生姜＝在4.0mL H2O中1.001％组合的生姜+姜黄汁
实施例23：鱼胶澄清剂实验值-浓度#1(快速-中度至稍强)
使用3mL刻度移液管将2滴鱼胶稀释到4.0mL的H2O中。
-100滴(100份)用于实验。100滴＝4.0mL
-3mL容量刻度移液管＝25滴/mL
-25滴/mL＝0.04mL/滴
使用x体积/滴的鱼胶的液滴＝用于稀释的鱼胶的总体积。(2)x(0.04mL)＝0.08mL鱼胶溶质[使用百分比溶液等式(vol/vol％)]
vol/vol％＝2
鱼胶储液＝在4.0mL的H2O中2％用于实验
实施例24：硅溶胶澄清剂实验值-浓度#1(缓慢)
使用3mL刻度移液管将2滴硅溶胶稀释到4.0mL的H2O中。
-100滴(100份)用于实验。100滴＝4.0mL
-3mL容量刻度移液管＝25滴/mL
-25滴/mL＝0.04mL/滴
使用x体积/滴的硅溶胶的液滴＝用于稀释的硅溶胶的总体积。(2)x(0.04mL)＝0.08mL硅溶胶溶质[使用百分比溶液等式(vol/vol％)]
vol/vol％＝2
硅溶胶储液＝在4.0mL的H2O中2％用于实验
实施例25：壳聚糖澄清剂实验值-浓度#1(缓慢)
使用3mL刻度移液管将1滴壳聚糖稀释到4.0mL的H2O中。
-100滴(100份)用于实验。100滴＝4.0mL
-3mL容量刻度移液管＝25滴/mL
-25滴/mL＝0.04mL/滴
使用x体积/滴的壳聚糖的液滴＝用于稀释的壳聚糖的总体积。(1)x(0.04mL)＝0.04mL壳聚糖溶质[使用百分比溶液等式(vol/vol％)]
vol/vol％＝1
壳聚糖储液＝在4.0mL的H2O中1％用于实验
实施例26：壳聚糖澄清剂实验值-浓度#3(适度快速)
稀释壳聚糖(基于包装说明书)按照包装说明书：2液盎司壳聚糖需要被稀释到30mL的温热H2O中。
1液盎司＝29.57mL
x＝对于12mL H2O需要23.65mL壳聚糖用于实验
使用3mL刻度移液管将591.25滴壳聚糖稀释到12.0mL的H2O中。
-12.0mL＝用于实验的100滴(100份)的量的3倍(3x)。100滴＝4.0mL
-3mL容量刻度移液管＝25滴/mL
-25滴/mL＝0.04mL/滴
使用x体积/滴的壳聚糖的液滴＝用于稀释的壳聚糖的总体积。(591.25)x(0.04mL)＝23.65mL壳聚糖溶质[使用百分比溶液等式(vol/vol％)]
vol/vol％＝197
稀释壳聚糖储液＝在12.0mL的H2O中197％用于实验。然后将1滴壳聚糖稀释储液添加至4.0mL的H2O中用于实验。[使用稀释公式C1V1＝C2V2]
C1V1＝C2V2
C1＝起始浓度 C2＝最终浓度
V1＝起始体积 V2＝最终体积
C1＝197％ C2＝X
V1＝.04mL V2＝4.0mL
(1.97)x(.04)＝X(4.0)
.0194＝X
.0194％最终壳聚糖浓度用于实验
实施例27：组合的硅溶胶+壳聚糖澄清剂实验值-浓度#1(快速)
使用3mL刻度移液管将各自1滴未稀释的硅溶胶和壳聚糖稀释到4.0mL的H2O中。
-100滴(100份)用于实验。100滴＝4.0mL
-3mL容量刻度移液管＝25滴/mL
-25滴/mL＝0.04mL/滴
使用x体积/滴的硅溶胶和壳聚糖的液滴＝用于稀释的硅溶胶和壳聚糖的总体积。(2)x(0.04mL)＝0.08mL硅溶胶和壳聚糖溶质。[使用百分比溶液等式(vol/vol％)]
vol/vol％＝2
实施例28：组合的硅溶胶+壳聚糖储液-浓度#2(缓慢)
使用3mL刻度移液管将1滴未稀释的硅溶胶稀释到4.0mL的H2O中。
-100滴(100份)用于实验。100滴＝4.0mL
-3mL容量刻度移液管＝25滴/mL
-25滴/mL＝0.04mL/滴
使用x体积/滴的硅溶胶的液滴＝用于稀释的硅溶胶的总体积。(1)x(0.04mL)＝0.04mL硅溶胶溶质[使用百分比溶液等式(vol/vol％)]
vol/vol％＝1
硅溶胶储液＝在4.0mL的H2O中1％用于实验。然后将1滴壳聚糖稀释储液添加至4.0mL的H2O中用于实验。[使用稀释公式C1V1＝C2V2]
C1V1＝C2V2
C1＝起始浓度 C2＝最终浓度
V1＝起始体积 V2＝最终体积
C1＝197％ C2＝X
V1＝.04mL V2＝4.0mL
(1.97)x(.04)＝X(4.0)
.0194＝X
.0194％最终壳聚糖浓度用于实验
最终硅溶胶+壳聚糖浓度＝在4.0mL的H2O中1.0194％用于实验。
实施例29：藻酸钠澄清剂实验值-浓度#1(快速)
1∶100稀释。使用3mL刻度移液管将.12g未稀释的藻酸钠稀释到12.0mL的H2O中。
-12.0mL＝用于实验的100滴(100份)的量的3倍(3x)100滴＝4.0mL
-3mL容量刻度移液管＝25滴/mL
-25滴/mL＝0.04mL/滴
按照包装说明书＝2克藻酸钠/200mL的H2O。[使用百分比溶液等式(重量/vol％)]
w/vol％＝1
藻酸钠储液＝在12.0mL的H2O中1％用于实验
实施例30：藻酸钠澄清剂实验值-浓度#2(缓慢)
1∶50稀释。使用3mL刻度移液管将.24g未稀释的藻酸钠稀释到12.0mL的H2O中。
-12.0mL＝用于实验的100滴(100份)的量的3倍(3x)。100滴＝4.0mL
-3mL容量刻度移液管＝25滴/mL
-25滴/mL＝0.04mL/滴
按照包装说明书＝2克藻酸钠/200mL的H2O。[使用百分比溶液等式(重量/vol％)]
w/vol％＝2
藻酸钠储液＝在12.0mL的H2O中2％用于实验
实施例31：膨润土澄清剂实验值-浓度#1(缓慢)
膨润土必须在实验之前进行再水化。将2茶匙的膨润土加1/2杯去离子H2O在60摄氏度下煮沸，然后室温静置4小时。比率：1汤匙/加仑。
使用3mL刻度移液管将1滴再水化的膨润土稀释到4.0mL的H2O中。
-100滴(100份)用于实验。100滴＝4.0mL
-3mL容量刻度移液管＝25滴/mL
-25滴/mL＝0.04mL/滴
使用x体积/滴的膨润土的液滴＝用于稀释的膨润土的总体积。(1)x(0.04mL)＝0.04mL膨润土溶质[使用百分比溶液等式(vol/vol％)]
vol/vol％＝1
膨润土储液＝在4.0mL的H2O中1％用于实验
实施例32：膨润土澄清剂实验值-浓度#2(中等)
膨润土必须在实验之前进行再水化。将2茶匙的膨润土加1/2杯去离子H2O在60摄氏度下煮沸，然后室温静置4小时。比率：2汤匙/加仑。
使用3mL刻度移液管将2滴再水化的膨润土稀释到4.0mL的H2O中。
-100滴(100份)用于实验。100滴＝4.0mL
-3mL容量刻度移液管＝25滴/mL
-25滴/mL＝0.04mL/滴
使用x体积/滴的膨润土的液滴＝用于稀释的膨润土的总体积。(2)x(0.04mL)＝0.08mL膨润土溶质[使用百分比溶液等式(vol/vol％)]
vol/vol％＝2
膨润土储液＝在4.0mL的H2O中2％用于实验
实施例33：硅藻土澄清剂实验值-浓度#1(缓慢)
1∶100稀释。使用3mL刻度移液管将.101g未稀释的硅藻土稀释到12.0mL的H2O中。
-12.0mL＝用于实验的100滴(100份)的量的3倍(3x)。100滴＝4.0mL
-3mL容量刻度移液管＝25滴/mL
-25滴/mL＝0.04mL/滴
按照包装说明书＝1茶匙/1杯H2O[使用百分比溶液等式(重量/vol％)]
w/vol％＝.8
藻酸钠储液＝在12.0mL的H2O中0.8％用于实验
实施例34：来自理论值的示例性溶液
通过组合在以下表中描述的组分来制备组合物的储液：
根据以下公式稀释在所述表中描述的储液：浓度x(最终体积/储备物体积)＝来自储备物的所需体积
250mL IV袋：0.000267％x(250mL/12.0mL)＝.0267x(250mL/12.0mL)＝0.5563mL储液。因此，250mL IV袋具有0.56mL的储液和249.44mL的IV特定注射水。
500mL IV袋：0.000267％x(500mL/12.0mL)＝.0267x(500mL/12.0mL)＝1.113mL储液。因此，500mL IV袋具有1.113mL的储液和498.9mL的IV特定注射水。
实施例35：来自实验值的示例性13.2mL H2O储液
通过组合在以下表中描述的组分来制备组合物的储液：
组分 浓度 体积 菠萝(实施例2) 0.0001％ 4.4mL H2O 生姜(实施例4) 0.0001％ 4.4mL H2O 蛋白(实施例6) 0.000067％ 4.4mL H2O 总计 0.000267％ 13.2mL H2O
根据以下公式稀释在所述表中描述的储液：浓度x(最终体积/储备物体积)＝来自储备物的所需体积。
250mL IV袋：0.000267％x(250mL/13.2mL)＝.0267x(250mL/13.2mL)＝0.5056mL储液。因此，250mL IV袋具有0.51mL的储液和249.49mL的IV特定注射水。
500mL IV袋：0.000267％x(500mL/13.2mL)＝.0267x(500mL/13.2mL)＝1.011mL储液。因此，500mL IV袋具有1.0mL的储液和499.00mL的IV特定注射水。
实施例36：来自实验值的250mL IV袋的示例性溶液
根据以下公式从储液制备250mL IV袋：0.000267％x(250mL/13.2mL)＝.0267x(250mL/13.2mL)＝0.5056mL储液。
实施例37：来自实验值的500mL IV袋的示例性溶液
根据以下公式从储液制备500mL IV袋：000267％x(500mL/13.2mL)＝.0267x(500mL/13.2mL)＝1.011mL储液。
500mL IV袋＝1.0mL储备物+499.00mL IV特定注射水。
实施例38：来自实验值的示例性250mL IV袋剂量
较低剂量：根据以下公式从储液制备250mL较低剂量IV袋：0.25mL储液+249.75mL IV特定注射水(.000134％浓度，中等剂量的1/2)。
中等剂量：根据以下公式从储液制备250mL中等剂量IV袋：0.51mL储液+249.49mL IV特定注射水(.000267％浓度)。
较高剂量：根据以下公式从储液制备250mL较高剂量IV袋：0.76mL储液+249.24mL IV特定注射水(.0004005％浓度，中等剂量的1.5x倍)。
实施例39：来自实验值的示例性500mL IV袋剂量
较低剂量：根据以下公式从储液制备500mL较低剂量IV袋：0.51mL储液+499.49mL IV特定注射水(.000134％浓度，中等剂量的1/2)。
中等剂量：根据以下公式从储液制备500mL中等剂量IV袋：1.0mL储液+499.00mL IV特定注射水(.000267％浓度)。
较高剂量：根据以下公式从储液制备500mL较高剂量IV袋：1.5mL储液+498.5mL IV特定注射水(.0004005％浓度，中等剂量的1.5x倍)。
实施例40：示例性兽用肌内5mL注射液。
根据以下公式使用在实施例8中描述的储液来制备兽用注射液：0.000267％x(5mL/13.2mL)＝.0267x(5mL/13.2mL)＝0.01mL储液。
用0.1mL储备物+4.99mL IM特定注射水制备5mL常规剂量注射(0.000267％浓度)。
实施例41：示例性兽用肌内10mL注射液。
根据以下公式使用在实施例8中描述的储液来制备兽用注射液：0.000267％x(10mL/13.2mL)＝.0267x(10mL/13.2mL)＝0.02mL储液。
用0.2mL储液+9.8mL IM特定注射水制备10mL常规剂量注射。用0.3mL储液+9.7mL IM特定注射水制备10mL更高剂量注射(0.0004005％浓度，常规剂量的1.5x倍)。
实施例42：III期结肠癌的治疗
一名65岁的越南裔美国籍女性患者出现II-III期结肠癌。在2012年9月，所述患者被诊断患有II期癌症，并进行手术以除去其结肠的恶性部分。术后评价确认转入III期癌症。
替代治疗从2013年1月开始。这种治疗由以下组成：每日1/2的新鲜的菠萝+2cm片的新鲜生姜根榨汁以制备大约12盎司杯以及一个半熟蛋。每天消耗果汁和鸡蛋持续三个月；在放射和化疗前两个月，以及在放射和化疗期间一个月。
从2013年3月至2013年4月，患者接受放射+化疗。总计接受放射20次，且总计接受化疗4次。在2013年4月，患者基于无疫健康证明书(clean bill of health)出院。在放射+化疗治疗期间，没有副作用的迹象。
专科医生于2013年4月发布无疫健康证明书并且替代治疗被修改为每周两次，仅用于预防措施。
实施例43：III期子宫癌的治疗
47岁的越南籍女性患者出现了III期子宫癌。在2013年，进行了第一次手术以除去重量为1.6kg的肿瘤，并且于2014年2月进行了第二次手术，以除去在同一区域生长的另一个复发性肿瘤。
从2014年3月至2014年4月，每天一次施用包括1/3含新鲜菠萝+3-4cm片经榨汁的新鲜生姜+1个生蛋白以制备大约12盎司杯的替代治疗。在替代治疗消耗的第一天后，仅第一天注意到末端直肠出血。这种治疗消耗一个月。2014年4月的随访显示无疫健康证明书，没有鉴别到可剩余的癌细胞。
实施例44：0期乳腺癌的治疗
一名60岁的越南裔美国籍女性患者出现II-III期结肠癌。在2012年9月，患者被诊断患有乳腺癌。进行手术以除去非良性肿瘤或致密的乳腺组织部位。在2013年11月，乳房X线照片显示几个致密的乳腺组织斑点和增生细胞积聚的证据。活组织检查被建议用于恶性肿瘤的增生细胞积聚。
每天一次施用包含1/4新鲜菠萝+2-3cm经榨汁的新鲜生姜+1个生鸡蛋以制备大约16盎司杯的替代治疗，每天一次仅持续两个月。
在替代治疗之前，患者每天发热持续10-12+年。没有感冒或流感的症状，但每天出现发热，且控制它的唯一方式是每天服用泰诺林或布洛芬。此外，在此期间，患者具有至少170-180(收缩压)/95-100(舒张压)的恒定每日高血压。采取三种不同的血压药物以控制血压达到正常范围。替代治疗后一周开始，患者的发热已经消失，且血压恢复正常。
在患者的症状消退后进行活组织检查，且在致密乳房组织部位中未测试到恶性肿瘤。患者自2014年6月以来保持无癌症和无症状。
实施例45：IV期肺癌的治疗
73岁的越南裔美国藉男性患者出现了IV期肺癌。在2012年12月，预后估计四个月的寿命。
从2013年2月开始，2-3杯的替代治疗(每12盎司杯，其包含1/4的新鲜菠萝+2-4cm新鲜生姜片+1个生蛋白)每日消耗持续3个月。肺中的起始肿瘤大小的半径为2.5cm宽。在这种治疗3个月后，肿瘤再分期测试结果显示，肿瘤半径宽度下降到1.8cm。
患者在化疗输注的情况下从IV期下降至III期。在治疗的这一点上，仅服用化疗药丸，没有更多的输液。患者能够更多独立运作，其中化疗输液中几乎不再有副作用。
最终，患者放弃治疗并过世(返回到IV期，回到化疗，回到副作用药物)，但患者确实从4个月的原始预后延长了达14个月的寿命，共18个月。
实施例46：III-IV期肺癌的治疗
63岁的越南裔美国籍女性患者出现了III-IV期肺癌。在2013年，患者接受化疗药丸，且癌症从I期进展到III期。患者目前正在化疗且处于IV期。
从2013年7月至2013年10月，患者每日3次接受1/4的新鲜菠萝+3-4cm片的经榨汁的新鲜生姜根+1个生蛋白/12盎司杯的替代治疗。在替代治疗之前，患者卧床不起，皮肤灰白且具有瘙痒的肿块，颈中有柠檬大小的孔，严重体重不足和骨瘦如柴。三个月的消耗再次产生“正常”体质；增加体重，粉红色皮肤，没有发痒的肿块和病变，能够再次以正常的能量水平独立移动。
由于治疗单调，患者在2013年10月以后放弃替代治疗。癌症复发表明放弃导致癌症从III期进展到IV期。
实施例47：III-IV期结肠癌的治疗
68岁的越南裔美国籍女性患者出现了III-IV期结肠癌。在2014年5月，在III期癌症中进行手术以除去结肠的恶性部分。术后导致转入IV期癌症进展。
从2014年4月至今，患者开始1/4的新鲜菠萝+2-3cm片的经榨汁的新鲜生姜+1个生蛋白以制成12盎司杯的替代治疗，每天两次。治疗仍在进行中。
实施例48：IV期乳腺癌+淋巴癌+骨癌的治疗
64岁的俄裔美国籍女性患者出现了IV期乳腺癌+淋巴癌+骨癌。从2013年4月当诊断为扩散至淋巴结和骨组织的IV期乳腺癌时，辐射和化疗同时进行。
替代治疗程序正在进行，并且于2013年5月开始。替代程序包括每2天来自1个完整菠萝+6-7cm生姜片的汁和在消耗前1个新鲜蛋白至每杯。12盎司的组合物一天消耗两次。
实施例49：IV期前列腺癌+淋巴癌的治疗
71岁的美国藉男性患者出现了IV期前列腺+淋巴癌。以前，在膀胱上进行手术以除去癌性部分，但是癌症现在再次出现。
现在使用首先包含4-5cm片的经榨汁的新鲜生姜的替代治疗，然后1/2的菠萝来制备两个12盎司杯。早餐消耗一杯，另一杯被冷藏用于晚上。对于每杯，加入单个生蛋白，并摇匀到饮品中。患者一直每天消耗替代治疗持续两周以上。
在替代治疗之前，通过检查被诊断IV期癌症，从而表明癌症正在扩散到膀胱、结肠、淋巴结的部分。在两周的替代治疗后，PET扫描显示癌症现在仅局限于盆腔区域。患者每天能够独立移动，且食欲正常。治疗仍在进行中。
实施例50：所测试的示例性试剂//酶和结果
盐水：观察离子效应，成功地使细胞外基质在贴剂如澄清剂中退化。
白醋(醋酸)：被选择充当具有低毒性的消毒剂。然而，对于有效性，除去细胞外基质的实验的成功需要比蛋白水解酶更复杂的稀释，而不破坏细胞。
10％液体漂白剂(次氯酸钠)：出于足够强以成功除去血液、但有毒性且非常低的速率除去细胞外基质的消毒剂/漂白剂的性质而选择。
次氯酸钙：出于消毒水的性质选择，且充当漂白剂，与次氯酸钠不同，安全用于饮用水。在实验中成功除去细胞外基质，然而，以比蛋白水解酶慢得多的速率。
菠萝(菠萝蛋白酶+奇异果蛋白酶)：成功，但需要稀释以获得安全有效性以便不破坏整个细胞。一旦达到最佳浓度，就缓慢地显示出随时间推移与细胞外基质的可观察到的差异。
粉末状菠萝蛋白酶(肉嫩化剂)：使用新鲜菠萝的替代方案，不成功，因为它未实现除去细胞外基质的所需作用，而只是损坏的细胞。
生姜根(GP/Zingipain)：使用新鲜菠萝的替代方案，出于蛋白水解酶性质而选择。成功地除去细胞外基质并以与新鲜菠萝相似的速率进行，但需要稀释。
姜黄：出于其治愈伤口和减轻疤痕的性质而选择。
3％H2O2(过氧化氢)：出于对表面和伤口的消毒和漂白性质而选择。不能成功除去细胞外基质，因为它对其没有影响。
UV：被选择作为UV(和治疗思想)可对细胞进行的展示-在孵化前消除壳和胚胎。
蛋白(白蛋白)：虽然是蛋白质本身，但因其已知的酿酒澄清剂的性质而选择以除去杂质，同时对葡萄酒无毒。在实验中成功，需要稀释和非常小的比率使用以便不超过其使用。
70％乙醇：出于消毒剂的性质而选择，不成功，完全损坏细胞。
脱色剂：出于在微生物染色测试中的染料除去性质而选择，同时保持所研究的细胞完整。然而，成功地除去细胞外基质需要稀释，减慢细胞外基质退化的速率。
酸性酒精(丙酮)：出于清洁和剥离性质而选择，被证明是不成功的，因为细胞被严重损坏。
粉末状尿素：出于其在肾脏中用于除去含氮废物而选择。成功地除去细胞外基质，但需要牢固稀释以获得有效性。
氨：出于清洁性质而选择且类似于尿素，但比尿素更容易活动。成功，但牢固稀释。
碳酸氢钠(小苏打)：出于清洁和发酵性质而选择，具有低毒性，因为它可被消耗。有效除去细胞外基质，然而速率非常慢。
Purigen：由于其除去水中的杂质以及除去鱼缸中的含氮有机废物的性质而使用。由于在鱼类存在下使用是安全的，因此在盐水虾的存在下，它将具有与蛋白水解酶相似的有效性。