技术领域
本发明涉及一种低分子量肝素产品的生产工艺，特别涉及一种高稳定性达肝素钠注射液的生产工艺。
背景技术
达肝素钠是一种低分子肝素的钠盐，系由猪小肠黏膜提取的肝素经亚硝酸降解获得的硫酸氨基葡聚糖片段的钠盐，为多糖混合物，平均分子量为6000道尔顿左右。
达肝素钠和其他低分子量肝素一样，被用来提高未裂解肝素应用的利益/危险比值。未裂解肝素是通过与凝血因子Ⅲ相结合而产生抗血栓形成或抗凝血作用的，它们结合后所形成的复合物促进对凝血因子Ⅱa(凝血酶)，Ⅸa、Ⅹa、Ⅺa、Ⅻa的灭活。与常规肝素相比，该结果具有更高的抗-Ⅹa/抗-Ⅱa比值；与未裂解肝素相比，低分子量肝素抑制血小板聚集的作用也有减弱，而肝素抑制血小板聚集的作用能促使出血。不论是常规肝素或者是低分子量肝素，它们抗血栓形成主要应归功于对凝血因子Ⅹa的抑制，因此低分子量肝素引起出血的可能性比普通肝素要小。与未分馏肝素相比，低分子量肝素还有其他一些潜在的优越性，包括它具有更强大的抗血栓形成作用、更高的皮下注射生物利用度，更长的消除半衰期(可以让院外患者每天皮下注射1次即可)；它降低了对血浆中脂肪分解活性的刺激、降低了发生肝素相关性血小板减少症的可能性，并且在使用未裂解肝素或口服抗凝血药有禁忌的患者中也能安全地使用。本品具有持久的抗血栓形成作用，是预防和治疗血栓栓塞性疾病的新药。临床前动物实验及临床研究表明，本品抗血栓形成活性强于抗凝血活性。因此，达肝素钠可用于普通外科、全髋或膝关节置换术、长期卧床或恶性肿瘤患者的下肢深静脉血栓形成(DVT)及预防肺栓塞(PE)、播散性血管内凝血(弥散性血管内凝血)等，可明显减少急性缺血性脑卒中患者下肢深静脉血栓形成(DVT)的发生率。
达肝素钠含有的杂质主要有核酸类、蛋白质和脂质等物质，其中，脂质杂质为主要的杂质。脂质杂质的存在对产品的质量存在潜在不利影响，为进一步提升达肝素钠的质量，有必要将其中的脂质杂质更好地去除。用于达肝素钠注射液的达肝素钠原料药，其脂质杂质的一般不高，配制规格为12500IU/ml注射液时，其含量一般在13～20ppm之间，含量在许可范围内，目的难以在保证注射液活性不降低或少降低的情况下进一步去除其中的杂质，这种达肝素钠注射液虽然是合格的，但是其质量有待进一步提高。
达肝素钠不能耐受高温灭菌工艺，高温灭菌会导致颜色变深、pH下降等问题，因此一般使用无菌生产工艺。达肝素钠注射液通常的生产工艺为：将达肝素钠原料药溶解在冷却后的注射用水中，然后无菌过滤和灌装，最后检查、包装。按照上述工艺生产出来的达肝素钠注射液在pH、颜色和活性稳定性方面较差，特别是加速实验过程中，加速实验后期，其颜色往往会深于相应的质量标准，并且活性会有一定幅度的下降、pH会有较大幅度的下降。按照普通无菌工艺生产的达肝素钠注射液虽然符合国家相关质量标准，但在放置过程中或者加速实验过程中，药液呈现稳定性不好的情况，包括pH出现较大幅度的下降、颜色发生明显变化、药液效价下降等，因此按照普通无菌工艺生产的注射液存在一定的质量问题。
有必要对现有工艺进行改进，得到质量更为稳定的达肝素钠注射液。
发明内容
本发明的目的在于提供一种高稳定性达肝素钠注射液的生产工艺。
本发明所采取的技术方案是：
一种高稳定性达肝素钠注射液的生产工艺，包括如下步骤：
1)将达肝素钠原料药溶解于注射用水中，搅拌使药液溶清；
2)在溶清后的药液加入0.08～0.15%w/w的活性炭，搅拌不低于25min，初滤，调节药液的pH在5.0～7.5之间；
3)过滤除菌、灌装，得到达肝素钠注射液；
其中，以上操作中，全程充氮气保护。
优选的，上述生产工艺中，活性炭的颗粒为100～400目。
优选的，上述生产工艺中，加入活性炭后，搅拌时间为25min～35min。
优选的，上述生产工艺中，活性炭的加入量为0.09～0.12%w/w。
优选的，上述生产工艺中，调节药物的pH时所使用的pH调节剂为氢氧化钠或盐酸，调节药液的pH至5.0～7.5，更佳的，调节药液的pH至6.5～7.5。
一种高稳定性达肝素钠注射液的生产工艺，包括如下步骤：
1)将达肝素钠原料药溶解于30～40℃的注射用水中，搅拌使药液溶清；
2)在溶清后的药液加入100目0.1%w/w的活性炭，搅拌30min，0.45μm滤膜初滤，调节药液的pH为6.5；
3) 0.2μm滤膜过滤除菌、灌装，得到达肝素钠注射液；
其中，以上操作中，全程充氮气保护。
本发明的有益效果是：
本发明的生产工艺，可以有效地去除达肝素钠注射液中的脂类杂质，产品的活性未有明显损失。使用本发明生产工艺制备的达肝素钠注射液稳定性高，低活性浓度和高活性浓度的注射液，加速实验3个月后，其活性、颜色均仍符合标准，明显优于现有工艺制备得到的达肝素钠注射液。
具体实施方式
一种高稳定性达肝素钠注射液的生产工艺，包括如下步骤：
1)将达肝素钠原料药溶解于注射用水中，搅拌使药液溶清；
2)在溶清后的药液加入0.08～0.15%w/w的活性炭，搅拌不低于25min，初滤，调节药液的pH在5.0～7.5之间；
3)过滤除菌、灌装，得到达肝素钠注射液；
其中，以上操作中，全程充氮气保护。
优选的，上述生产工艺中，活性炭的颗粒为100～400目。
优选的，上述生产工艺中，加入活性炭后，搅拌时间为25min～35min。
优选的，上述生产工艺中，活性炭的加入量为0.09～0.12%w/w。
优选的，上述生产工艺中，调节药物的pH时所使用的pH调节剂为氢氧化钠或盐酸，调节药液的pH至5.0～7.5，更佳的，调节药液的pH至6.5～7.5。
一种高稳定性达肝素钠注射液的生产工艺，包括如下步骤：
1)将达肝素钠原料药溶解于30～40℃的注射用水中，搅拌使药液溶清；
2)在溶清后的药液加入100目0.1%w/w的活性炭，搅拌30min，0.45μm滤膜初滤，调节药液的pH为6.5；
3)0.2μm滤膜过滤除菌、灌装，得到达肝素钠注射液；
其中，以上操作中，全程充氮气保护。
下面结合实施例，进一步说明本发明。
以下实施例或对比例中，用来调节药液pH的为NaOH溶液或盐酸。
实施例1：
1)往注射用水中通入氮气30min，进行预处理；
2)将达肝素钠原料药溶解于预处理后且冷却至30℃的注射用水中，搅拌使药液溶清；
3)在溶清后的药液加入0.1%w/w的活性炭，活性炭的目数为400目，搅拌30min，0.45μm滤膜初滤，调节药液的pH为5.0；
4)0.2μm滤膜过滤除菌、灌装，得到规格为0.2ml：2500IU的达肝素钠注射液；
其中，以上操作中，全程充氮气保护。
实施例2、3：同实施例1，不同之处在于药液的pH分别调整为6.5和7.5。
实施例4、5、6：分别同实施例1～3，不同之处在于活性炭的目数为300目，达肝素钠注射液的规格为0.2ml：5000IU。
实施例7：
1)往注射用水中通入氮气30min，进行预处理；
2)将达肝素钠原料药溶解于预处理后且冷却至35℃的注射用水中，搅拌使药液溶清；
3)在溶清后的药液加入0.1%w/w的活性炭，活性炭的目数为100目，搅拌30min，0.45μm滤膜初滤，调节药液的pH为6.5；
4)0.2μm滤膜过滤除菌、灌装，得到规格为0.2ml：2500IU的达肝素钠注射液；
其中，以上操作中，全程充氮气保护。
实施例8：同实施例7，不同之处在于达肝素钠注射液的规格为0.2ml：5000IU，活性炭的用量为0.08%。
对比例1：
1)往注射用水中通入氮气30min，进行预处理；
2)将达肝素钠原料药溶解于35℃的注射用水中，搅拌使药液溶清；
3)在溶清后的药液0.45μm滤膜初滤；
4)0.2μm滤膜过滤除菌、灌装，得到规格为0.2ml：2500IU的达肝素钠注射液；
其中，以上操作中，全程充氮气保护。
对比例2：同对比例1，不同之处在于达肝素钠注射液的规格为0.2ml：5000IU。
对比例3：
1)往注射用水中通入氮气30min，进行预处理；
2)将达肝素钠原料药溶解于预处理后且冷却至35℃的注射用水中，搅拌使药液溶清；
3)在溶清后的药液加入0.5%w/w的活性炭，活性炭的目数为400目，搅拌30min，0.45μm滤膜初滤，调节药液的pH为5.0；
4)0.2μm滤膜过滤除菌、灌装，得到规格为0.2ml：2500IU的达肝素钠注射液。
其中，以上操作中，全程充氮气保护。
对比例4、5：同对比例3，不同之处在于其pH分别调节为6.5和7.5；
对比例6～8：分别同对比例3～5，不同之处在于活性炭的目数为100目，添加量为0.05%w/w。
脂质杂质和活性检测
分别检测溶清后的药液和终产品注射液中的脂质含量和抗FXa效价，评价活性炭除脂质的效率和对药液活性成分吸附的影响，检测结果如下表所示：
表1、各注射液溶清前后的情况对比
备注：效价检测一般有2%RSD，检测值较pH、脂质含量等检测值波动范围大。
从表中的数据可以看出，加入活性炭之后，可以有效地去除药液中的脂质杂质，0.08～0.15%w/w的活性炭即可有效地去除药液中的脂质杂质，综合操作、成本考虑，活性炭的添加量优选为0.08%w/w～0.15%w/w，更佳为0.09%w/w～0.12%w/w。
产品稳定性实验：
分别取上述实施例及对比例的达肝素钠注射液，于40℃，75±5%RH环境保存，进行加速稳定性实验，颜色标准：不深于BY5色度标准比色液（Ph.Eur.）判定为符合规定。
实验结果如下表所示：
表2、各注射液加速稳定性3个月实验结果一览表
表中，+表示符合标准，-表示不符合标准。
实施例7注射液6个月加速实验的结果如下表所示：
表3、实施例7注射液加速稳定性6个月实验结果一览表
从表2和表3中的数据可以看出，通过使用0.08～0.15%w/w的活性炭对溶清药液进行处理，不仅可以有效地去除药液中的脂质杂质，出乎意料还可以显著改善注射液的稳定性，对比使用0.08～0.15%w/w的活性炭处理的药液和未使用活性炭处理及其他量活性炭处理的药液，可发现使用0.08～0.15%w/w的活性炭处理的注射液在加速稳定性试验中关键指标优于普通工艺灌装注射液，除pH为5.0的情况下，加速实验3个月期间均未观察到药液的颜色有明显变化。而全程充氮保护下使用0.08～0.15%w/w的活性炭处理并结合调节注射液的pH至6.5～7.5，可以进一步提高注射液的稳定性，两者相结合具有显著的协同作用。
综上，在全程充氮的保护下，采用0.08%w/w～0.15%w/w，最佳0.1%w/w活性炭除脂后，调节药液的pH在6.5～7.5范围内，优选7.0～7.5范围内，可以有效去除注射液的脂质杂质，同时保证达肝素钠的活性不受影响，整个效期内的pH在质量范围内，质量最稳定。使用本发明工艺制备得到的达肝素钠注射液，质量优于原创产品。