一种治疗肿瘤的联合用药物组合物.pdf

本发明提供的一种治疗肿瘤的联合用药物组合物，包含活性成分和药学上可接受的辅料，其特征在于：所述的活性成分由吉西他滨和式I所示的二氮杂并咔唑类化合物或其药学可接受的盐组成，所述活性成分中吉西他滨和二氮杂并咔唑类化合物或其药学可接受的盐的质量比为(2‑8)：1。该药物组合物抗癌疗效好、毒副作用低；由于二氮杂并咔唑类化合物对吉西他滨的敏感性，两者联合用药产生了协同作用，从而降低了卡培他滨的临床使用剂量，减少大剂量使用卡培他滨所产生的毒副作用，提高临床治疗安全指数，具有较好的临床应用前景。

1.一种治疗肿瘤的联合用药物组合物，包含活性成分和药学上可接受的辅料，其特征在于：所述的活性成分由吉西他滨和式I所示的二氮杂并咔唑类化合物或其药学可接受的盐组成，所述活性成分中吉西他滨和二氮杂并咔唑类化合物或其药学可接受的盐的质量比为(2-8)：1；其中，二氮杂并咔唑类化合物或其药学可接受的盐的化学式为： 2.根据权利要求1所述的一种治疗肿瘤的联合用药物组合物，其特征在于：所述药学可接受的盐是指实施例1的二氮杂并咔唑类化合物与酸形成的药学上可接受的盐，所述的酸包括但不限于磷酸、硫酸、盐酸、氢溴酸、柠檬酸、马来酸、丙二酸、扁桃酸、琥珀酸、富马酸、醋酸、乳酸、硝酸。 3.根据权利要求1所述的一种治疗肿瘤的联合用药物组合物，其特征在于：所述活性成分中吉西他滨和二氮杂并咔唑类化合物或其药学可接受的盐的质量比为(3-5)：1。 4.根据权利要求1所述的一种治疗肿瘤的联合用药物组合物，其特征在于：所述活性成分中吉西他滨和二氮杂并咔唑类化合物或其药学可接受的盐的质量比为4：1。 5.吉西他滨和式I所示的二氮杂并咔唑类化合物或其药学可接受的盐组成的组合物在制备治疗与预防癌症药物中的应用。 6.如权利要求5所述的应用，其特征在于：所述癌症包括但不限于乳腺癌、结肠直肠癌、卵巢癌、前列腺癌、肺癌、肝癌、胰腺癌。

技术领域

本发明属于化学医药领域，一种治疗肿瘤的联合用药物组合物。

背景技术

吲哚胺2,3-双加氧酶(IDO)是肝脏以外唯一催化色氨酸沿犬尿氨酸途径代谢的限速酶，已被证实与肿瘤、阿尔兹海默病、抑郁症和老年性白内障等多种人类重大疾病密切相关，而IDO得表达或活性的异常增高，是导致上述疾病的一个重要因素，因此，筛选高效的IDO抑制剂可以为这些疾病提供有效治疗药物。近年来，研究证实IDO在多种实体瘤中如肺癌、肝癌、乳腺癌、结肠癌等肿瘤组织中表达明显增强，且与预后密切相关。因此，使用IDO抑制剂可能成为一种治疗肿瘤的有效方法。

癌症治疗中普遍存在的另一个问题是大多数的抗肿瘤剂伴随着严重的毒性。尽管传统的抗肿瘤药，例如吉西他滨和紫杉醇，具有抗药性和严重的毒性，但由于因为它们能减少肿瘤，这些药物在癌症治疗中仍然是非常重要的。

尽管抗癌剂的组合已被证明在癌症治疗方案中具有重大的进步，但对于难以治疗或对作为单一疗法的常规抗肿瘤剂表现出治疗抗性的癌症的治疗，仍有一些未满足的需求和改善癌症的药物治疗的空间。例如，临床治疗中虽然有以吉西他滨为基础的联合化疗治疗方案，但肿瘤耐药性最终导致胰腺癌预后很差，中位生存期仅为3-6个月，5年生存率小于5％。因此，开发用于递送具有不同作用机制的已知抗癌剂的新型组合途径是本领域的重要进步。虽然涉及具有不同作用机制的抗癌剂组合的方案可以在某些组合的情况下发挥作用，但相同的方式对于抗癌剂的其它组合可能不起作用，且这样的组合可能不总是产生具有有利治疗效果的组合。

发明内容

技术问题：为了解决现有技术的缺陷，本发明提供了一种治疗肿瘤的联合用药物组合物。

技术方案：本发明提供的一种治疗肿瘤的联合用药物组合物，包含活性成分和药学上可接受的辅料，其特征在于：所述的活性成分由吉西他滨和式I所示的二氮杂并咔唑类化合物或其药学可接受的盐组成，所述活性成分中吉西他滨和二氮杂并咔唑类化合物或其药学可接受的盐的质量比为(2-8)：1；其中，二氮杂并咔唑类化合物或其药学可接受的盐的化学式为：

作为改进，所述药学可接受的盐是指实施例1的二氮杂并咔唑类化合物与酸形成的药学上可接受的盐，所述的酸包括但不限于磷酸、硫酸、盐酸、氢溴酸、柠檬酸、马来酸、丙二酸、扁桃酸、琥珀酸、富马酸、醋酸、乳酸、硝酸。

作为改进，所述活性成分中吉西他滨和二氮杂并咔唑类化合物或其药学可接受的盐的质量比为(3-5)：1。

作为改进，所述活性成分中吉西他滨和二氮杂并咔唑类化合物或其药学可接受的盐的质量比为4：1。

本发明还提供了吉西他滨和式I所示的二氮杂并咔唑类化合物或其药学可接受的盐组成的组合物在制备治疗与预防癌症药物中的应用。

其中，所述癌症包括但不限于乳腺癌、结肠直肠癌、卵巢癌、前列腺癌、肺癌、肝癌、胰腺癌。

有益效果：与现有技术相比，本发明涉及的药物组合物具有如下优点和显著的进步：

(1)抗癌疗效好。本发明发现式I所示的二氮杂并咔唑类化合物增加了吉西他滨抗肿瘤生长的生物活性，二者联用具有抗肿瘤增殖的协同作用，渴望开发成临床上抗胰腺癌的一线用药。

(2)毒副作用低。由于二氮杂并咔唑类化合物对吉西他滨的敏感性，两者联合用药产生了协同作用，从而降低了卡培他滨的临床使用剂量，减少大剂量使用卡培他滨所产生的毒副作用，提高临床治疗安全指数，具有较好的临床应用前景。

具体实施方式

下面对本发明作出进一步说明。

实施例1 1-(2,3,5,10-四氢-[1,2]二氮杂并[3,4,5,6-def]咔唑-6(1H)-酮-10-基)-3-吡啶-3-基甲基脲

步骤1 2-溴-3-((3-氧代环己-1-烯-1-基)氨基)苯甲酸甲酯的合成

称取3.58g 3-氨基-2-溴苯甲酸甲酯、1.68g环己烷-1,3-二酮于反应瓶中，加入乙酸20ml溶解，80℃反应8h，反应结束后，减压蒸除溶剂，柱层析纯化得标题化合物。LC-MS m/z:[M+H]+＝325。

步骤2 4-氧代-2,3,4,9-四氢-1H-咔唑-5-羧酸甲酯的合成

称取1.62g步骤1所得物、0.23g乙酸钯、1.22g三(邻甲苯基)膦和0.63g三乙胺于密封管中，加入乙腈15ml，氮气氛围下100℃密封反应20小时，反应结束后，冷却，加入水15ml稀释，二氯甲烷萃取(50ml*3)，无水硫酸钠干燥，柱层析纯化得标题化合物。LC-MS m/z:[M+H]+＝244。

步骤3 2,3,5,10-四氢-[1,2]二氮杂并[3,4,5,6-def]咔唑-6(1H)-酮的合成

称取0.73g步骤2所得物、1.5ml乙酸和8.6ml水合肼于反应瓶中，加入甲醇40ml，回流反应8小时，趁热过滤，水、乙酸乙酯和二氯甲烷洗涤，得标题化合物。

LC-MS m/z:[M+H]+＝226。

步骤4 10-(2-叔丁氧羰基氨基)乙基-2,3,5,10-四氢-[1,2]二氮杂并[3,4,5,6-def]咔唑-6(1H)-酮

称取10g N-叔丁氧羰基氨基乙醇和23.96g TsCl于反应瓶中，加入吡啶50ml溶解，室温反应过夜，反应结束后，减压蒸除吡啶，加水20ml，乙酸乙酯萃取(50ml*3)，无水硫酸镁干燥，柱层析纯化得(1-(叔丁氧羰基)氨基)乙醇-(4-甲苯磺酸)酯。

称取0.67g步骤3所得物和0.3g NaH于反应瓶中，加入10ml DMF溶解，45℃反应2h后，加入2.81g所得(1-(叔丁氧羰基)氨基)乙醇-(4-甲苯磺酸)酯，室温搅拌16h，反应结束后，加水10ml，乙酸乙酯萃取，无水硫酸镁干燥，过滤，柱层析纯化得标题化合物。

LC-MS m/z:[M+H]+＝369。

步骤5 10-氨乙基-2,3,5,10-四氢-[1,2]二氮杂并[3,4,5,6-def]咔唑-6(1H)-酮的合成

称取1.0g步骤4所得物于反应瓶中，加入二氯甲烷15ml溶解，室温搅拌下加入10ml三氟乙酸，反应5h，反应结束后，减压蒸除溶剂，用饱和碳酸氢钠水溶液至pH至8，乙酸乙酯萃取，无水硫酸镁干燥，过滤干燥得标题化合物。

LC-MS m/z:[M+H]+＝269。

步骤6 1-(2,3,5,10-四氢-[1,2]二氮杂并[3,4,5,6-def]咔唑-6(1H)-酮-10-基)-3-吡啶-3-基甲基脲的合成

称取0.24g3-氨甲基吡啶于反应瓶中，加30ml体积比为1:1的二氯甲烷/饱和碳酸氢钠水溶液的混合溶剂，0℃、搅拌下加入0.22g三聚光气，0℃下继续反应30min，反应结束后，分液，收集有机层，干燥后，加入10ml二氯甲烷溶解后，加入0.15g步骤5所得物，0℃下继续搅拌10h，反应结束后，柱层析纯化得标题化合物。

实施例2 1-(2,3,5,10-四氢-[1,2]二氮杂并[3,4,5,6-def]咔唑-6(1H)-酮-10-基)-3-(3-乙氧羰基)苯基脲

以3-氨基苯甲酸、实施例1步骤3所得物2,3,5,10-四氢-[1,2]二氮杂并[3,4,5,6-def]咔唑-6(1H)-酮、N-叔丁氧羰基氨基乙醇为原料，同实施例1的方法制得标题化合物。

1H NMR(400MHz,CDCl3,δppm):8.31-8.30(s,1H),7.84-7.79(m,3H),7.58-7.53(m,3H),7.38(m,1H),7.24-7.21(m,2H),4.69-4.67(m,2H),4.30-4.29(m,2H),3.65-3.63(m,2H),2.78-2.76(m,2H),2.11-2.09(m,2H),1.89-1.87(m,2H),1.31-1.29(m,3H)。

LC-MS m/z:[M+H]+＝460。

实验例1本发明化合物的体外激酶活性评价

建立IDO1/2酶活性抑制分子筛选模型，检测阳性对照药Epacadostat(INCB024360)在此模型上的抑制IC50值，结果表明Epacadostat对IDO1的IC50值为90nM左右，对IDO2的IC50值为3.0uM左右，与文献报道相近，说明筛选模型构建成功。在室温环境下，将40nM的IDO酶及900uM的L-色氨酸混合，并加入反应缓冲液(20mM ascorbate,3.5uMmethylene blue and 0.2mg/mL catalase in 50mM potassium phosphate buffer pH 6.5)，在室温反应3小时，然后在酶标仪上进行紫外测定，检测波长为321nm。酶活性百分率(％)＝(OD值给药孔－OD值本底)/(OD值对照孔－OD值本底)×100％，然后用PrismGraphPad sofeware软件拟合计算IC50值，结果见表1.

表1

化合物 IDO1(nM) IDO2(uM) Epacadostat 90 3.0 实施例1化合物 568 4.4 实施例2化合物 74 0.5

从以上实验结果可以看出，本发明的化合物对IDO1和IDO2激酶具有较好的抑制活性。

实验例2本发明化合物的体外细胞活性评价

采用磺酰罗丹明B(SRB)比色法，将对数生长期的HT29人结肠癌细胞吹打成单细胞悬液，接种于96孔培养板(5x103细胞/孔)，每孔加入培养基200μL，于37℃、5％CO2培养箱中培养过夜；待细胞贴壁后，加入适当浓度的受试化合物和阳性对照药后在培养箱中再培养72小时。加入10％三氯醋酸后于4℃下固定1小时。用双蒸水洗涤5次，干燥后，每孔加入70微升SRB溶液(4mg/mL)，室温染色20分钟，1％醋酸洗涤5次，干燥。每孔加入100μL10mM Tris-Base溶液使SRB溶解。酶标仪检测各孔OD值，记录结果，按下列公式计算抑制率：抑制率(％)＝(OD对照－OD给药)/OD对照×100％，并计算IC50。结果见表2。

表2

化合物 HT29细胞IC50值 Epacadostat 50.1 实施例1化合物 78.3 实施例2化合物 23.7

实验例3

人胰腺癌PANC-1细胞株，取出冻存管后，投入37℃水浴中，震荡解冻2min，酒精消毒管壁外侧后，将其转入超净台中，将管内细胞转移至离心管中，加入5ml37℃预热的含10％胎牛血清的DMEM培养基，并清洗冻存管一次，将离心管离心(1000rpm，5min)，弃去上清液，再加入2ml 37℃预热的含10％胎牛血清的DMEM培养基，转入培养瓶中，放置于37℃、50mL/L CO2饱和湿度的培养箱中培养，并以0.5％胰蛋白酶消化并常规传代。

SPF级BALB/c-nu裸小鼠，6周龄，雄性，体重18～20g。取处于对数生长期的人胰腺癌细胞PANC-1，接种于裸鼠右腋下，每只鼠约注射2×106个细胞，连续传代3代后，当第4代移植瘤生长至3周时，处死荷瘤裸鼠，取新鲜瘤组织，切成体积约8mm3瘤块，接种于实验裸鼠右侧腋下，以上操作全部于超净台内无菌条件下进行。

植后第8天肿瘤于局部成活并生长至直径约0.5cm，将造模成功的移植瘤模型小鼠随机平均分为四组，每组8只，各组分别按如下剂量的受试物进行治疗3周：

空白对照组：每只裸鼠灌胃1％羟甲基纤维素钠溶液0.1ml/10g，每日1次；

吉西他滨组：每只裸鼠按体质量灌胃800mg/kg的吉西他滨，以1％羟甲基纤维素钠溶液混悬后灌胃，每日1次；

化合物组一：每只裸鼠按体质量灌胃120mg/kg的实施例1的化合物，以1％羟甲基纤维素钠溶液混悬后灌胃，每日1次；

化合物组二：每只裸鼠按体质量灌胃120mg/kg的实施例2的化合物，以1％羟甲基纤维素钠溶液混悬后灌胃，每日1次；

联合组一：每只裸鼠按体质量灌胃75mg/kg的实施例1的化合物以及300mg/kg的吉西他滨，以1％羟甲基纤维素钠溶液混悬后灌胃，每日1次。

联合组二：每只裸鼠按体质量灌胃75mg/kg的实施例2的化合物以及300mg/kg的吉西他滨，以1％羟甲基纤维素钠溶液混悬后灌胃，每日1次。

给药结束后第2天，处死各组动物，分离移植瘤，称瘤重，抑瘤率＝(对照组瘤重-治疗组瘤重)/对照组瘤重×100％。各组平均瘤重及抑瘤率详见表5。

表5

组别 样本量 瘤重g 抑制率％ 空白对照组 10 1.39±0.69 - 吉西他滨组 10 1.16±0.66 16.55 化合物组一 10 0.75±0.24 46.04 化合物组二 10 0.64±0.21 53.96 联合组一 10 0.24±0.20 82.73 联合组二 10 0.18±0.12 87.05