技术领域
本发明涉及一种细辛脑的注射制剂，具体讲，涉及一种注射用细辛脑组合物无菌冻干粉针制剂。
背景技术
细辛脑(2，4，5-三甲氧基-1-丙烯基苯)，主要存在于天南星科植物石菖蒲等植物的挥发油中，试验表明本品有明显的防止哮喘发作，和接近可待因样的止咳作用，并具一定的利胆、镇静作用。临床主要用于支气管哮喘、慢性支气管炎、肺炎及慢性阻塞性肺疾病伴肺部急性炎症等的治疗。
近几年来，由于大气污染的加重和化工工业的发展等因素影响，哮喘的发病率有逐渐增加趋势。40年代，发达国家的哮喘发病率约为0.5％左右。据美国报道，近30年来，美国哮喘的发病率增加了7倍，现为4％。我国上海、北京两个地区局部调查，前者哮喘的发病率，从1958年的0.46％提高到1979年的0.69％，后者的发病率从1959年的4.5％提高到1980年5.29％。这种趋势值得引起重视。
细辛脑是国内唯一的中药单体合成抗炎性祛痰止咳来喘药，比纯中药制剂的止咳止喘效果更明显，与化学合成的西药制剂相比治疗效果好，且无任何毒、副作用。其优点如下：
(1)细辛脑舒张支气管作用强，祛痰、平喘效果好；
(2)可静脉滴注，克服肌注时局部注水太多病人不愿接受的缺点，效果直接有效、安全可靠；
(3)为我国名贵中药材“石菖蒲”的主要活性成份，源于植物单体，无成瘾性，安全，不会产生蓄积中毒等副作用；
(4)显效快，疗效确切，快速吸收，快速吸收使病症得到迅速的缓解，作用时间长；
(5)适用范围广，临床广泛用于支气管哮喘、慢性支气管炎、肺炎及慢性阻塞性肺疾病伴肺部急性炎症等的治疗。
细辛脑注射液已广泛应用于临床，且有较好的临床疗效。
目前市场上已经有一些细辛脑注射液细辛脑作为亲脂性极强而亲水性极差的化合物，目前上市的细辛脑的片剂和胶囊，由于其水溶性极差，口服后不易分散溶出，与体液接触时有效比表面积小，例如普通口服制剂生物利用度仅为2～5％，根本无法实现预期的治疗效果。现有技术采用多种方式制备细辛脑的注射剂，但存在多种缺陷，例如CNl290495C公开了采用细辛脑，加上油、乳化剂、注射用水制成脂微球制剂，工艺复杂，成本高，长期存储脂微球的包裹容易破裂产生泄漏，不利于注射。
专利申请200410021105.1采用水或有机溶剂溶解细辛脑，再直接加入助溶剂和赋形剂后制成冻干制剂，但该专利申请并未公开辅料添加的比例，并且该制备方法制备的冻干粉复溶效果差，产生浑浊，影响使用。
专利ZL200510073418.6公开了一种添加有吐温80、亚硫酸氢钠、依地酸二钠和甘露醇的细辛脑注射用制剂，且公开了该细辛脑注射制剂的制备方法。该专利的缺陷为添加的辅料品种多，辅料添加的比例大，其复溶效果仍不甚理想。
发明内容
本发明的首要发明目的在于提供一种注射用细辛脑组合物。
本发明的第二发明目的在于提供注射用细辛脑组合物的制备方法。
为了完成本发明的发明目的，本发明采用的技术方案为：
本发明的提供了一种注射用细辛脑组合物冻干粉针，该注射用细辛脑组合物冻干粉针包括细辛脑4～8g，体积比为95％～100％乙醇40～80ml，甘露醇24～80g，注射用水加至1000～2000ml后冻干后制成500～1000瓶，其中，所述的细辛脑为反溶剂结晶法制备的超细微粒。
其中，所述细辛脑超细微粒的主粒度为350～600nm，优选400～500nm。
本发明的第一优选技术方案为：该注射用细辛脑组合物制剂中还含有聚山梨酯-80，所述聚山梨酯-80的量为0.01～10g，优选1～8g。
本发明的第二优选技术方案为：该注射用细辛脑组合物冻干粉针中的乙醇的浓度为95～98％，优选98％。
本发明的第三优选技术方案为：该注射用细辛脑组合物冻干粉针的组成为：由细辛脑4～8g，体积比为95％～100％乙醇40～80ml，聚山梨酯-80 2～6g，甘露醇24～64g，注射用水加至1000～2000ml后冻干后制成500～1000瓶；优选的由细辛脑4～8g，体积比为95％～100％乙醇40～60ml，聚山梨酯-80 2～6g，甘露醇24～48g，注射用水加至1000～2000ml后冻干后制成500～1000瓶。
本发明还提供了该细辛脑超细微粒的制备方法，其步骤为：
(1)配制聚山梨酯-80质量百分比为0.1～0.5％的去离子水溶液作为反溶剂；
(2)配制质量百分比为0.1～1g/ml细辛脑的乙醚溶液作为溶剂；
(3)在2～6℃、搅拌速度为600～1200转/分钟条件下，反溶剂中迅速加入溶剂，其中溶剂与反溶剂的体积比为1∶15～21；产生白色晶体后将晶体和溶液在42～55℃条件下陈化2～5小时，经过滤、洗涤、滤饼分散及喷雾干燥。
其制备方法优选为：
(1)配制聚山梨酯-80质量百分比为0.2～0.4％的去离子水溶液作为反溶剂，
(2)配制质量百分比为0.2～0.8g/ml细辛脑的乙醚溶液作为溶剂；
(3)在3～6℃、搅拌速度为800～1000转/分钟条件下，在反溶剂中迅速加入溶剂，其中溶剂与反溶剂的体积比为1∶15～18；产生白色晶体后将晶体和溶液在45～55℃条件下陈化3～4小时，经过滤、洗涤、滤饼分散及喷雾干燥。
本发明还提供了所述注射用细辛脑组合物冻干粉针的制备方法：
(1)将所述超细微粒细辛脑溶按比例溶溶解于95～100％乙醇中，得A液；
(2)将甘露醇按比例溶解于400～800ml注射用水中加热搅拌溶解，加活性炭搅拌，粗滤脱炭，得B液，添加活性炭的质量与溶液体积比为0.1～0.2％，优选0.1％；所述注射用水的温度为35～45℃，优选38～42℃；
(3)合并A、B液中，补加注射用水至全量，中间体检测合格后用0.22μm微孔滤膜过滤，分装、半加塞、冻干、压塞、轧盖、检验。
其制备方法优选为：
(1)将按比例将聚山梨酯-80溶解于注射用水中，加入活性炭搅拌，粗滤脱炭，滤液备用；按比例将超细微粒细辛脑溶于95～100％乙醇中，边搅拌边加入到聚山梨酯-80的滤液中，搅拌均匀，得A液；
(2)将处方量的甘露醇于400～800ml注射用水中加热搅拌溶解，加活性炭搅拌，粗滤脱炭，滤液为B液；添加活性炭的质量与溶液体积比为0.1～0.2％，优选0.1％；所述注射用水的温度为35～45℃，优选38～42℃；
(3)合并A、B液中，补加注射用水至全量，中间体检测合格后用0.22μm微孔滤膜过滤，分装、半加塞、冻干、压塞、轧盖、检验。
其中，所述的冷冻干燥过程中，将滤液于-35～-40℃的预冻3～5小时，抽真空，升温至-25～-20℃维持10～12小时，再升温至-10～-5℃维持6～8小时，最后升温至20～25℃维持6小时。
下面对本发明的技术方案进行进一步的详细说明：
本发明提供了一种注射用细辛脑组合物冻干粉针剂，但是由于细辛脑不溶于水，现有技术中往往需要在细辛脑制剂中加入大量的助溶剂，而这些助溶剂若长期或者大量使用，其毒副作用还尚未明确。本发明通过制备细辛脑的超细微粒，大大的提高了细辛脑的溶解性能，从而在制备细辛脑制剂的时候，少量添加或者不添加助溶剂，同样可以得到稳定的、并且复溶性良好的冻干粉针剂。本发明通过反溶剂结晶法制备的细辛脑超细微粒，通过扫描电镜观察统计，其主粒度为350～600nm，并进一步在400～500nm范围内，在电镜下，细辛脑的超细微粒呈均匀的短棒状。通过激光粒度测量仪得到细辛脑超细微粒的CSD图如图1所示。
在其制备过程中，采用质量百分比为0.1～0.5％聚山梨酯-80的去离子水溶液作为反溶剂，发明人通过大量实验发现，在溶剂中添加少量的表面活性剂可控制细辛脑超细微粒的粒径，采用浓度为0.1～0.5％聚山梨酯-80的去离子水溶液，可控制细辛脑超细微粒的粒度范围在350～600nm之间。由于细辛脑在乙醚中的溶解性良好，故溶剂采用乙醚。在反溶剂结晶法制备过程中，温度为2～6℃、搅拌速度为600～1200转/分钟，这是由于反溶剂结晶过程中的温度和搅拌速度均对细辛脑超细微粒的形成有所作用，由于细辛脑的溶解度随着温度的降低而减小，降低温度可使细辛脑在溶液中形成较高的饱和浓度，从而得到粒度较小、分布较窄的细辛脑微粒。本发明中采用的溶剂与反溶剂的体积比为1∶15～21，可迅速降低细辛脑的溶解度，从而增大体系的过饱和度，使形成的超细微粒的粒度更小；搅拌的条件是为了使溶剂反溶剂更加均匀的混合，从而使细辛脑超细微粒的分布范围更窄，更加均匀。并且通过检测，溶剂乙醚在制备的细辛脑超细微粒中的残留符合国家标准。
本发明的注射用细辛脑组合物的制备方法，采用了分别溶解的方法，先主药细辛脑在乙醇中溶解，从而使细辛脑可以充分溶解，并且降低了乙醇溶剂的用量；甘露醇加注射用水加热溶解后并进行脱碳后制成B液，然后将A液和B液混合制得，从而使主药与辅料更加充分的混合。本发明的制备方法可进一步减少辅料的用量，并且保证了细辛脑组合物制剂的稳定性。
附图说明
图1为通过激光粒度测量仪得到细辛脑超细微粒的CSD图。
具体实施方式
实施例1
组成为：
细辛脑 8.0g
95％乙醇 40ml
甘露醇 80.0g
注射用水 加至1000ml
冻干后制成 500瓶。
(1)配制聚山梨酯-80质量百分比为0.1％的去离子水溶液作为反溶剂；
(2)配制质量百分比为0.1g/ml细辛脑的乙醚溶液作为溶剂；
(3)在2～6℃、搅拌速度为600转/分钟条件下，反溶剂中迅速加入溶剂，其中溶剂与反溶剂的体积比为1∶15；产生白色晶体后将晶体和溶液在42℃条件下陈化2小时，经过滤、洗涤、滤饼分散及喷雾干燥；所得的超细微粒细辛脑通过激光粒度测量仪得到CSD曲线与图1相同；
(4)将所述超细微粒细辛脑溶按比例溶溶解于95％乙醇中，得A液；
(5)将甘露醇按比例溶解于400ml注射用水中加热搅拌溶解，加活性炭搅拌，粗滤脱炭，得B液，添加活性炭的质量与溶液体积比为0.1％，注射用水的温度为35℃；
(6)合并A、B液中，补加注射用水至全量，中间体检测合格后用0.22μm微孔滤膜过滤，分装、半加塞、冻干、压塞、轧盖、检验，其中，所述的冷冻干燥过程中，将滤液于-35～-40℃的预冻3～5小时，抽真空，升温至-25～-20℃维持10～12小时，再升温至-10～-5℃维持6～8小时，最后升温至20～25℃维持6小时。
实施例2
处方为：
细辛脑 8.0g
100％乙醇 80ml
甘露醇 80.0g
注射用水 加至1000ml
冻干后制成 500瓶。
(1)配制聚山梨酯-80质量百分比为0.5％的去离子水溶液作为反溶剂；
(2)配制质量百分比为1g/ml细辛脑的乙醚溶液作为溶剂；
(3)在6℃、搅拌速度为1200转/分钟条件下，反溶剂中迅速加入溶剂，其中溶剂与反溶剂的体积比为1∶21；产生白色晶体后将晶体和溶液在55℃条件下陈化5小时，经过滤、洗涤、滤饼分散及喷雾干燥，所得的超细微粒细辛脑通过激光粒度测量仪得到CSD曲线与图1相同；
(4)将所述超细微粒细辛脑溶按比例溶溶解于100％乙醇中，得A液；
(5)将甘露醇按比例溶解于800ml注射用水中加热搅拌溶解，加活性炭搅拌，粗滤脱炭，得B液，添加活性炭的质量与溶液体积比为0.2％，注射用水的温度为45℃；
(6)合并A、B液中，补加注射用水至全量，中间体检测合格后用0.22μm微孔滤膜过滤，分装、半加塞、冻干、压塞、轧盖、检验，其中，所述的冷冻干燥过程中，将滤液于-35～-40℃的预冻3～5小时，抽真空，升温至-25～-20℃维持10～12小时，再升温至-10～-5℃维持6～8小时，最后升温至20～25℃维持6小时。
实施例3
处方为：
细辛脑 6.0g
98％乙醇 40ml
甘露醇 24.0g
注射用水 加至1000ml
冻干后制成 500瓶。
(1)配制聚山梨酯-80质量百分比为0.25％的去离子水溶液作为反溶剂；
(2)配制质量百分比为0.5g/ml细辛脑的乙醚溶液作为溶剂；
(3)在4℃、搅拌速度为1000转/分钟条件下，反溶剂中迅速加入溶剂，其中溶剂与反溶剂的体积比为1∶20；产生白色晶体后将晶体和溶液在45℃条件下陈化3小时，经过滤、洗涤、滤饼分散及喷雾干燥；所得的超细微粒细辛脑通过激光粒度测量仪得到CSD曲线与图1相同；
(4)将所述超细微粒细辛脑溶按比例溶溶解于98％乙醇中，得A液；
(5)将甘露醇按比例溶解于600ml注射用水中加热搅拌溶解，加活性炭搅拌，粗滤脱炭，得B液，添加活性炭的质量与溶液体积比为0.1％；注射用水的温度为38℃；
(6)合并A、B液中，补加注射用水至全量，中间体检测合格后用0.22μm微孔滤膜过滤，分装、半加塞、冻干、压塞、轧盖、检验，其中，所述的冷冻干燥过程中，将滤液于-35～-40℃的预冻3～5小时，抽真空，升温至-25～-20℃维持10～12小时，再升温至-10～-5℃维持6～8小时，最后升温至20～25℃维持6小时。
实施例4
处方为：
细辛脑 6.0g
98％乙醇 40ml
甘露醇 24.0g
聚山梨酯-80 1g
注射用水 加至1000ml
冻干后制成 500瓶。
(1)配制聚山梨酯-80质量百分比为0.45％的去离子水溶液作为反溶剂；
(2)配制质量百分比为0.8g/ml细辛脑的乙醚溶液作为溶剂；
(3)在5℃、搅拌速度为800转/分钟条件下，反溶剂中迅速加入溶剂，其中溶剂与反溶剂的体积比为1∶18；产生白色晶体后将晶体和溶液在50℃条件下陈化4小时，经过滤、洗涤、滤饼分散及喷雾干燥；所得的超细微粒细辛脑通过激光粒度测量仪得到CSD曲线与图1相同；
(4)将按比例将聚山梨酯-80溶解于注射用水中，加入活性炭搅拌，粗滤脱炭，滤液备用；按比例将超细微粒细辛脑溶于98％乙醇中，边搅拌边加入到聚山梨酯-80的滤液中，搅拌均匀，得A液；
(5)将处方量的甘露醇于400～800ml注射用水中加热搅拌溶解，加活性炭搅拌，粗滤脱炭，滤液为B液；添加活性炭的质量与溶液体积比为0.1％，注射用水的温度为42℃；
(6)合并A、B液中，补加注射用水至全量，中间体检测合格后用0.22μm微孔滤膜过滤，分装、半加塞、冻干、压塞、轧盖、检验，其中，所述的冷冻干燥过程中，将滤液于-35～-40℃的预冻3～5小时，抽真空，升温至-25～-20℃维持10～12小时，再升温至-10～-5℃维持6～8小时，最后升温至20～25℃维持6小时。
实施例5
处方为：
细辛脑 8.0g
98％乙醇 40ml
甘露醇 64.0g
聚山梨酯-80 8g
注射用水 加至1000ml
冻干后制成 500瓶。
(1)配制聚山梨酯-80质量百分比为0.36％的去离子水溶液作为反溶剂；
(2)配制质量百分比为0.5g/ml细辛脑的乙醚溶液作为溶剂；
(3)在4℃、搅拌速度为800转/分钟条件下，反溶剂中迅速加入溶剂，其中溶剂与反溶剂的体积比为1∶19；产生白色晶体后将晶体和溶液在48℃条件下陈化5小时，经过滤、洗涤、滤饼分散及喷雾干燥，所得的超细微粒细辛脑通过激光粒度测量仪得到CSD曲线与图1相同；
(4)将按比例将聚山梨酯-80溶解于注射用水中，加入活性炭搅拌，粗滤脱炭，滤液备用；按比例将超细微粒细辛脑溶于98％乙醇中，边搅拌边加入到聚山梨酯-80的滤液中，搅拌均匀，得A液；
(5)将处方量的甘露醇于400～800ml注射用水中加热搅拌溶解，加活性炭搅拌，粗滤脱炭，滤液为B液；添加活性炭的质量与溶液体积比为0.15％；所述注射用水的温度为40℃；
(6)合并A、B液中，补加注射用水至全量，中间体检测合格后用0.22μm微孔滤膜过滤，分装、半加塞、冻干、压塞、轧盖、检验，其中，所述的冷冻干燥过程中，将滤液于-35～-40℃的预冻3～5小时，抽真空，升温至-25～-20℃维持10～12小时，再升温至-10～-5℃维持6～8小时，最后升温至20～25℃维持6小时。
实验例1：超细微粒细辛脑比较试验
超细微粒细辛脑与普通细辛脑的比较试验如下：
表1：
处方组成 处方1 处方2 处方3 处方4 处方5 超细微粒细辛脑 0.8g - - - - 普通细辛脑 - 0.8g 0.4g 0.4g 0.4g 95％乙醇 4ml 4ml 4ml 4ml 4ml 甘露醇 8g 8g 8g 8g 8g 聚山梨酯-80 - - 2g 4g 6g 水定容为 100ml 100ml 100ml 100ml 100ml
将处方1～5按照实施例5的步骤(4)、(5)、(6)制成冻干粉，冻干后观察并记录冻干物的复溶性，实验结果如表2所示：
表2
考察项目 处方1 处方2 处方3 处方4 处方5 溶解性 全溶 不溶 不溶 微溶 微溶
通过本实验可知，采用未经超细处理的细辛脑制剂复溶性差，在不添加助溶剂或者少量添加时，其冻干粉不溶或微溶。
实验例2：
赋形剂实验
将常用于注射剂的赋形剂：甘露醇、乳糖、右旋糖酐、葡萄糖、山梨醇的效果做比较试验如下：
表3：赋形剂比较试验
处方组成 处方6 处方7 处方8 处方9 处方10 细辛脑 0.8g 0.8g 0.8g 0.8g 0.8g 95％乙醇 4ml 4ml 4ml 4ml 4ml 甘露醇 8g - - - - 乳糖 - 8g - - - 右旋糖酐 - - 8g - - 葡萄糖 - - - 8g -
山梨醇 - - - - 8g 水定容为 100ml 100ml 100ml 100ml 100ml
将处方6～10按照实施例1的步骤和条件制成冻干粉，冻干后观察并记录冻干物的外观形态及其复溶性，实验结果如表4所示。
表4：
处方6 处方7 处方8 处方9 处方10 外观形态 疏松饱满 部分萎缩 部分萎缩 部分萎缩 部分萎缩 制品溶解性 全溶 全溶 全溶 全溶 全溶
通过本实验得知，本发明处方得到的冻干粉外形疏松饱满，并且复溶性良好，好于采用其它赋形剂制得的冻干粉。
实施例3：赋形剂用量试验
为了进一步确定甘露醇的最佳用量，做比较试验如下：
表5：甘露醇用量实验：
处方组成 处方11 处方12 处方13 处方14 处方15 处方16 细辛脑 0.8g 0.8g 0.8g 0.8g 0.8g 0.8g 95％乙醇 8ml 8ml 8ml 8ml 8ml 8ml 甘露醇 2g 4g 6g 8g 10g 12g 水定容为 100ml 100ml 100ml 100ml 100ml 100ml
按处方11～16的处方量称取各组分，按照实施例1的步骤和条件制成冻干粉，冻干后观察并记录冻干物的外观形态及其复溶性，实验结果如表6所示：
表6：
考察项目 处方11 处方12 处方13 处方14 处方15 处方16 外观形态 部分萎缩 疏松饱满 疏松饱满 疏松饱满 疏松饱满 疏松饱满 溶解性 全溶 全溶 全溶 全溶 全溶 全溶
通过本实验得知，当甘露醇用量为4g时，冻干粉外形疏松饱满，并且复溶性良好，随着甘露醇的增加、外观形态不断得到改善。
实验例4：稳定性试验
一、加速试验：
按照表7配方制备细辛脑冻干粉制剂：
处方组成 处方17 处方18 处方19 处方20 超细微粒细辛脑 0.8g 0.8g - - 普通细辛脑 - - 0.4g 0.4g 95％乙醇 4ml 4ml 4ml 4ml 甘露醇 8g 2.4g 8g 8g 聚山梨酯-80 - - 6g 8g 水定容为 100ml 100ml 100ml 100ml
将处方17～20按照实施例5的步骤(4)、(5)、(6)制成冻干粉，模拟市售包装，与恒温40±2℃，相对湿度75±5％干燥箱内放置六个月。在实验期间于第1、2、3和6个月各取样一次，按上述考察项目进行检测，并与0月结果比较，结果见表8。
表8：稳定性试验结果
经过加速试验可知，本发明的采用超细微粒细辛脑制备的细辛脑制剂的稳定性好于采用普通细辛脑制备的制剂。
将处方17～20按照实施例5的步骤(4)、(5)、(6)制成冻干粉，模拟上市包装，置密封洁净容器中，于40℃温度下放置6个月，在试验期间分别于1、2、3、6个月末取样一次，对各稳定性重点考察项目进行检验，结果见表9。
表9：加速试验结果：
将处方17～20按照实施例5的步骤(4)、(5)、(6)制成冻干粉，模拟市售包装，在温度6℃±2℃条件下放置36个月，在试验期间分别于第3、6、9、12、18、24、36个月末取样一次，对各检验项目进行检验。试验结果见下表10：
表10：长期试验结果：
同时随机抽取处方17、18的两个批次进行热源、无菌检查，结果如下表所示长期实验热源、无菌检查结果。
经过过敏性、溶血性和局部刺激性等主要与局部、全身给药相关的特殊安全性试验，结果表明：注射用细辛脑家兔耳缘静脉每日给药二次，连续5天，对家兔血管无明显刺激作用，亦未引起血管周围组织明显病变。
注射用细辛脑对家兔红细胞无明显体外溶血及致凝集作用。
在本实验条件下注射用细辛脑对豚鼠无致过敏作用。