技术领域
本发明涉及一种兽用口服液，具体涉及一种黄栀口服液及其制备方法。
背景技术
大肠杆菌病是由大肠埃希氏杆菌(E．Coil)~I引起的以临症表现为急性败血症、卵黄性腹膜炎、关节炎、心包炎等多种症状为特征的一种细菌性传染病，目前已上升为危害养禽业最棘手的疾病之一。大肠杆菌病主要采取菌苗免疫、抗菌药物及中草药进行防治。其中菌苗免疫因其血清型、肠道微生物抗原和抗原决定簇复杂，免疫机制存在差异，从菌苗角度防治该病尚未取得突破性进展，免疫效果常不确切，因此抗菌药物仍是防治该病的主要手段。而抗菌药的滥用、饲料添加用药及无节制延长用药时间，均导致了大肠杆菌耐药性的产生、传播，同时造成了药物残留而危害人畜健康及公共卫生的可能。因此，寻求一种抗菌作用强、残留和毒性低、不易产生耐药性的中草药是该领域的发展趋势。
而传统的中草药提取多采用传统的水提醇沉方法，该法虽操作简单、对技术和设备要求不高，但是药材中原有的有效成分损失较多，且提取液中存在大量蛋白质、粘液质、果胶等大分子及许多微粒和絮状物等杂质，因而需进行多次提取，这不仅影响生产效率，增加生产成本，也使药物的有效性受到了较大的影响。选取适宜的提取剂，科学的制备方法，不仅可提高药材利用率，还可提高生产效率，规范工业化生产。
发明内容
本发明的目的在于提供一种兽用黄栀口服液及其制备方法，其可治疗动物大肠杆菌病，且药材有效成分提取率高，产品生物利用度高。
本发明有2个技术创新点，第一：部分原料经过混合有机溶剂的初提取，或是预处理、浸膏提取后，药材有效成分溶出度高，再将各成分初提取物、浸膏与其他原料汇总处理，这样可提高各中药材提取率，减少药材的浪费，所以治疗效果比常规的水提醇沉方法有一定的提高；第二：因为各辅料的辅助作用，产品稳定性高，不易絮凝沉积，在货架期内质量稳定，疗效有保障。
本发明技术方案如下：
本发明提供的兽用黄栀口服液包括下述重量配比的原辅料：
原料：黄连250-450份、黄芩500-700份、栀子300-500份、穿心莲200-400份、白头翁150-300份、甘草50-200份；
辅料：壳聚糖5.5-7.5份、Ⅱ型ZTC 1+1天然澄清剂2.5-3.5份、苯甲酸钠3-5份、羟苯乙酯1-3份、甜菊糖苷8-10份、柠檬酸0.6-0.8份；
其中，壳聚糖、Ⅱ型ZTC 1+1天然澄清剂为澄清剂，苯甲酸钠、羟苯乙酯为防腐剂，甜菊糖苷、柠檬酸为矫味剂，且Ⅱ型ZTC 1+1天然澄清剂购于北京正天成澄清技术有限公司，Ⅱ型ZTC 1+1天然澄清剂的A组份与B组份的质量比为1:1-5；
其制备方法如下：
澄清剂的配置：将Ⅱ型ZTC 1+1天然澄清剂中的A组份用蒸馏水配置成质量分数为1%的A组份水溶液备用，将Ⅱ型ZTC 1+1天然澄清剂中的B组份用质量分数为1%的醋酸配成质量分数为1%的B组份醋酸溶液备用；
黄连甘草初提物的制备：将黄连粉碎至100目备用；取12-30份甘草于苯、乙酸乙酯、异丙醇混合液中浸提2次，浸提温度60-80℃，每次20-40min，甘草与苯、乙酸乙酯、异丙醇混合液的质量比为1:10-16，且苯、乙酸乙酯与异丙醇的体积比为4-7:1-5:10-15，过滤后合并浸提液，将粉碎后的黄连加入甘草浸提液中混匀并闷润30-60min，减压回收苯、乙酸乙酯、异丙醇混合液，得黄连甘草初提物；
黄芩的预处理：加水煎煮3次，第一次2小时，第二、三次各1小时，每次添加黄芩质量8-12倍的水，合并煎液，离心过滤取上清液；上清液调pH值至1.0-2.0，80℃保温20-30min，静置，滤过取沉淀a，沉淀a加沉淀a质量1-2倍的水，搅匀，调pH值至7.0，再加沉淀a质量2-3倍的质量分数为60-70%的乙醇，搅拌使溶解，滤过得滤液；滤液调pH值至1.0-2.0，60℃保温，静置，滤过取沉淀b；沉淀b先以沉淀b质量3-5倍的水清洗，再以沉淀b质量3-5倍的质量分数60-80%的乙醇清洗，挥尽乙醇，真空干燥，得预处理后的黄芩备用；
黄芩提取浸膏的制备：于预处理后的黄芩中加入10倍黄芩质量的水，再加入纤维素酶，置于真空减压浓缩干燥塔中减压干燥提取，每克黄芩纤维素酶添加量为20U，PH为4-5，温度控制在40-50℃，真空度为﹣0.08~﹣0.06Mpa；反应1h后于80-90℃灭酶2min，再反应3h得黄芩提取浸膏；
将栀子、穿心莲、白头翁、余下的甘草和黄连甘草初提物混合均匀，加药材总重量12-15倍的水煎煮两次，合并煎液，往煎液里先加入Ⅱ型ZTC 1+1天然澄清剂的B组份醋酸溶液，于45-55℃保温3-5h，煮沸6-10min，降温至60-70℃加入Ⅱ型ZTC 1+1天然澄清剂的A组份水溶液，静置过滤得滤液，将该滤液与黄芩提取浸膏混匀，温度保持在55-65℃，减压浓缩至相对密度为1.05-1.20g/ml的浸膏，加入浸膏质量10-12倍的水，再加入壳聚糖、苯甲酸钠、羟苯乙酯、甜菊糖苷、柠檬酸，搅拌均匀，静置24小时，用微滤膜过滤，流速为3-6m/s，过滤压差为0.06-0.08Mpa，滤液补足水至800-2000份混匀，灌装，即得。
本发明配方中，黄连泻炎、解毒、清热、燥湿，具有抗菌、病毒及原虫、利胆等作用，用于湿热泻痢、目赤肿毒等症；黄芩清热、燥湿、解毒、止血，具有抗菌、镇静解热、抗炎及免疫的作用，用于发热烦渴、肺热咳嗽、泻痢热淋、湿热黄疸、痈肿疮毒等症；栀子泻火除烦、清热利湿、凉血散瘀，具有保肝利胆、抗火镇痛的作用，用于热病心烦、目赤、黄疸、热毒疮疡等症；穿心莲清热、消炎、解毒，具有解热、抗炎、抗病原微生物等作用，用于风热感冒、肠炎、痢疾、蛇毒咬伤等症；白头翁清热解毒、止泻止痢，具有抗阿米媚原虫、抗肿瘤、抗菌等作用，用于细菌性痢疾、阿米巴痢疾等症；甘草具有补脾益气、止咳祛痰、清热解毒、调和药性等作用。
本发明以甘草辅助预处理黄连，使两者有效成分溶出度提高，达到协同作用；黄芩也先进行预处理再进行浸膏提取，使其有效成分得以浓缩，最后各原辅料以及预处理后的药材进行煎煮、浓缩、微滤膜过滤，工艺流程合理连贯，有效成分损失降低，且在辅料和工艺的作用下，口服液澄清度、稳定性得以提高，提高生药材中有效成分的提取率，使药物抗菌作用显著增强，治愈率明显提高，且无毒性残留、不易产生耐药性。
具体实施方式：
下面结合具体实施例对本发明做进一步的说明，以助于理解本发明的内容。
实施例1：
本发明提供的兽用黄栀口服液包括下述重量配比的原辅料：
原料：黄连300份、黄芩600份、栀子450份、穿心莲250份、白头翁250份、甘草100份；
辅料：壳聚糖6.5份、Ⅱ型ZTC 1+1天然澄清剂3.0份、苯甲酸钠3.6份、羟苯乙酯2.4份、甜菊糖苷8.6份、柠檬酸0.7份；
其中，壳聚糖、Ⅱ型ZTC 1+1天然澄清剂为澄清剂，苯甲酸钠、羟苯乙酯为防腐剂，甜菊糖苷、柠檬酸为矫味剂，且Ⅱ型ZTC 1+1天然澄清剂购于北京正天成澄清技术有限公司，Ⅱ型ZTC 1+1天然澄清剂的A组份与B组份的质量比为1:2；
其制备方法如下：
澄清剂的配置：将Ⅱ型ZTC 1+1天然澄清剂中的A组份用蒸馏水配置成质量分数为1%的A组份水溶液备用，将Ⅱ型ZTC 1+1天然澄清剂中的B组份用质量分数为1%的醋酸配成质量分数为1%的B组份醋酸溶液备用；
黄连甘草初提物的制备：将黄连粉碎至100目备用；取24份甘草于苯、乙酸乙酯、异丙醇混合液中浸提2次，浸提温度70℃，每次30min，甘草与苯、乙酸乙酯、异丙醇混合液的质量比为1:12，且苯、乙酸乙酯与异丙醇的体积比为5:3:13，过滤后合并浸提液，将粉碎后的黄连加入甘草浸提液中混匀并闷润40min，减压回收苯、乙酸乙酯、异丙醇混合液，得黄连甘草初提物；
黄芩的预处理：加水煎煮3次，第一次2小时，第二、三次各1小时，每次添加黄芩质量10倍的水，合并煎液，离心过滤取上清液；上清液调pH值至1.6，80℃保温25min，静置，滤过取沉淀a，沉淀a加沉淀a质量1.5倍的水，搅匀，调pH值至7.0，再加沉淀a质量2.5倍的质量分数为65%的乙醇，搅拌使溶解，滤过得滤液；滤液调pH值至1.5，60℃保温，静置，滤过取沉淀b；沉淀b先以沉淀b质量4倍的水清洗，再以沉淀b质量4倍的质量分数70%的乙醇清洗，挥尽乙醇，真空干燥，得预处理后的黄芩备用；
黄芩提取浸膏的制备：于预处理后的黄芩中加入10倍黄芩质量的水，再加入纤维素酶，置于真空减压浓缩干燥塔中减压干燥提取，每克黄芩纤维素酶添加量为20U，PH为4.5，温度控制在45℃，真空度为﹣0.07Mpa；反应1h后于85℃灭酶2min，再反应3h得黄芩提取浸膏；
将栀子、穿心莲、白头翁、余下的甘草和黄连甘草初提物混合均匀，加药材总重量13倍的水煎煮两次，合并煎液，往煎液里先加入Ⅱ型ZTC 1+1天然澄清剂的B组份醋酸溶液，于50℃保温4h，煮沸8min，降温至65℃加入Ⅱ型ZTC 1+1天然澄清剂的A组份水溶液，静置过滤得滤液，将该滤液与黄芩提取浸膏混匀，温度保持在60℃，减压浓缩至相对密度为1.10g/ml的浸膏，加入浸膏质量12倍的水，再加入壳聚糖、苯甲酸钠、羟苯乙酯、甜菊糖苷、柠檬酸，搅拌均匀，静置24小时，用微滤膜过滤，流速为4m/s，过滤压差为0.07Mpa，滤液补足水至1500份混匀，灌装，即得。
实施例2：
本发明提供的兽用黄栀口服液包括下述重量配比的原辅料：
原料：黄连250份、黄芩500份、栀子300份、穿心莲200份、白头翁150份、甘草50份；
辅料：壳聚糖5.5份、Ⅱ型ZTC 1+1天然澄清剂2.5份、苯甲酸钠3份、羟苯乙酯1份、甜菊糖苷8份、柠檬酸0.6份；
其中，壳聚糖、Ⅱ型ZTC 1+1天然澄清剂为澄清剂，苯甲酸钠、羟苯乙酯为防腐剂，甜菊糖苷、柠檬酸为矫味剂，且Ⅱ型ZTC 1+1天然澄清剂购于北京正天成澄清技术有限公司，Ⅱ型ZTC 1+1天然澄清剂的A组份与B组份的质量比为1:1；
其制备方法如下：
澄清剂的配置：将Ⅱ型ZTC 1+1天然澄清剂中的A组份用蒸馏水配置成质量分数为1%的A组份水溶液备用，将Ⅱ型ZTC 1+1天然澄清剂中的B组份用质量分数为1%的醋酸配成质量分数为1%的B组份醋酸溶液备用；
澄清剂的配置：将Ⅱ型ZTC 1+1天然澄清剂中的A组份用蒸馏水配置成质量分数为1%的A组份水溶液，将Ⅱ型ZTC 1+1天然澄清剂中的B组份用质量分数为1%的醋酸配成质量分数为1%的B组份醋酸溶液备用；
黄连甘草初提物的制备：将黄连粉碎至100目备用；取12份甘草于苯、乙酸乙酯、异丙醇混合液中浸提2次，浸提温度60℃，每次20min，甘草与苯、乙酸乙酯、异丙醇混合液的质量比为1:10，且苯、乙酸乙酯与异丙醇的体积比为4:1:10，过滤后合并浸提液，将粉碎后的黄连加入甘草浸提液中混匀并闷润30min，减压回收苯、乙酸乙酯、异丙醇混合液，得黄连甘草初提物；
黄芩的预处理：加水煎煮3次，第一次2小时，第二、三次各1小时，每次添加黄芩质量8倍的水，合并煎液，离心过滤取上清液；上清液调pH值至1.0，80℃保温20min，静置，滤过取沉淀a，沉淀a加沉淀a质量1倍的水，搅匀，调pH值至7.0，再加沉淀a质量2倍的质量分数为60%的乙醇，搅拌使溶解，滤过得滤液；滤液调pH值至1.0，60℃保温，静置，滤过取沉淀b；沉淀b先以沉淀b质量3倍的水清洗，再以沉淀b质量3倍的质量分数60%的乙醇清洗，挥尽乙醇，真空干燥，得预处理后的黄芩备用；
黄芩提取浸膏的制备：于预处理后的黄芩中加入10倍黄芩质量的水，再加入纤维素酶，置于真空减压浓缩干燥塔中减压干燥提取，每克黄芩纤维素酶添加量为20U，PH为4，温度控制在40℃，真空度为﹣0.08Mpa；反应1h后于80℃灭酶2min，再反应3h得黄芩提取浸膏；
将栀子、穿心莲、白头翁、余下的甘草和黄连甘草初提物混合均匀，加药材总重量12倍的水煎煮两次，合并煎液，往煎液里先加入Ⅱ型ZTC 1+1天然澄清剂的B组份醋酸溶液，于45℃保温3h，煮沸6min，降温至60℃加入Ⅱ型ZTC 1+1天然澄清剂的A组份水溶液，静置过滤得滤液，将该滤液与黄芩提取浸膏混匀，温度保持在55℃，减压浓缩至相对密度为1.05g/ml的浸膏，加入浸膏质量10倍的水，再加入壳聚糖、苯甲酸钠、羟苯乙酯、甜菊糖苷、柠檬酸，搅拌均匀，静置24小时，用微滤膜过滤，流速为3m/s，过滤压差为0.06Mpa，滤液补足水至1200份混匀，灌装，即得。
实施例3：
本发明提供的兽用黄栀口服液包括下述重量配比的原辅料：
原料：黄连450份、黄芩700份、栀子500份、穿心莲400份、白头翁300份、甘草200份；
辅料：壳聚糖7.5份、Ⅱ型ZTC 1+1天然澄清剂3.5份、苯甲酸钠5份、羟苯乙酯3份、甜菊糖苷10份、柠檬酸0.8份；
其中，壳聚糖、Ⅱ型ZTC 1+1天然澄清剂为澄清剂，苯甲酸钠、羟苯乙酯为防腐剂，甜菊糖苷、柠檬酸为矫味剂，且Ⅱ型ZTC 1+1天然澄清剂购于北京正天成澄清技术有限公司，Ⅱ型ZTC 1+1天然澄清剂的A组份与B组份的质量比为1: 5；
其制备方法如下：
澄清剂的配置：将Ⅱ型ZTC 1+1天然澄清剂中的A组份用蒸馏水配置成质量分数为1%的A组份水溶液备用，将Ⅱ型ZTC 1+1天然澄清剂中的B组份用质量分数为1%的醋酸配成质量分数为1%的B组份醋酸溶液备用；
黄连甘草初提物的制备：将黄连粉碎至100目备用；取30份甘草于苯、乙酸乙酯、异丙醇混合液中浸提2次，浸提温度80℃，每次40min，甘草与苯、乙酸乙酯、异丙醇混合液的质量比为1: 16，且苯、乙酸乙酯与异丙醇的体积比为7: 5: 15，过滤后合并浸提液，将粉碎后的黄连加入甘草浸提液中混匀并闷润60min，减压回收苯、乙酸乙酯、异丙醇混合液，得黄连甘草初提物；
黄芩的预处理：加水煎煮3次，第一次2小时，第二、三次各1小时，每次添加黄芩质量12倍的水，合并煎液，离心过滤取上清液；上清液调pH值至2.0，80℃保温30min，静置，滤过取沉淀a，沉淀a加沉淀a质量2倍的水，搅匀，调pH值至7.0，再加沉淀a质量3倍的质量分数为70%的乙醇，搅拌使溶解，滤过得滤液；滤液调pH值至2.0，60℃保温，静置，滤过取沉淀b；沉淀b先以沉淀b质量5倍的水清洗，再以沉淀b质量5倍的质量分数80%的乙醇清洗，挥尽乙醇，真空干燥，得预处理后的黄芩备用；
黄芩提取浸膏的制备：于预处理后的黄芩中加入10倍黄芩质量的水，再加入纤维素酶，置于真空减压浓缩干燥塔中减压干燥提取，每克黄芩纤维素酶添加量为20U，PH为5，温度控制在50℃，真空度为﹣0.06Mpa；反应1h后于90℃灭酶2min，再反应3h得黄芩提取浸膏；
将栀子、穿心莲、白头翁、余下的甘草和黄连甘草初提物混合均匀，加药材总重量15倍的水煎煮两次，合并煎液，往煎液里先加入Ⅱ型ZTC 1+1天然澄清剂的B组份醋酸溶液，于55℃保温5h，煮沸10min，降温至70℃加入Ⅱ型ZTC 1+1天然澄清剂的A组份水溶液，静置过滤得滤液，将该滤液与黄芩提取浸膏混匀，温度保持在65℃，减压浓缩至相对密度为1.20g/ml的浸膏，加入浸膏质量12倍的水，再加入壳聚糖、苯甲酸钠、羟苯乙酯、甜菊糖苷、柠檬酸，搅拌均匀，静置24小时，用微滤膜过滤，流速为6m/s，过滤压差为0.08Mpa，滤液补足水至2000份混匀，灌装，即得。
实施例4：
本发明提供的兽用黄栀口服液包括下述重量配比的原辅料：
原料：黄连200份、黄芩460份、栀子270份、穿心莲180份、白头翁120份、甘草60份；
辅料：壳聚糖3份、Ⅱ型ZTC 1+1天然澄清剂2份、苯甲酸钠2份、羟苯乙酯1份、甜菊糖苷5份、柠檬酸0.5份；
其中，壳聚糖、Ⅱ型ZTC 1+1天然澄清剂为澄清剂，苯甲酸钠、羟苯乙酯为防腐剂，甜菊糖苷、柠檬酸为矫味剂，且Ⅱ型ZTC 1+1天然澄清剂购于北京正天成澄清技术有限公司，Ⅱ型ZTC 1+1天然澄清剂的A组份与B组份的质量比为2:1；
其制备方法如下：
澄清剂的配置：将Ⅱ型ZTC 1+1天然澄清剂中的A组份用蒸馏水配置成质量分数为1%的A组份水溶液备用，将Ⅱ型ZTC 1+1天然澄清剂中的B组份用质量分数为1%的醋酸配成质量分数为1%的B组份醋酸溶液备用；
黄连甘草初提物的制备：将黄连粉碎至100目备用；取10份甘草于苯、乙酸乙酯、异丙醇混合液中浸提2次，浸提温度50℃，每次20min，甘草与苯、乙酸乙酯、异丙醇混合液的质量比为1:10，且苯、乙酸乙酯与异丙醇的体积比为3:1:9，过滤后合并浸提液，将粉碎后的黄连加入甘草浸提液中混匀并闷润20min，减压回收苯、乙酸乙酯、异丙醇混合液，得黄连甘草初提物；
黄芩的预处理：加水煎煮3次，第一次1.5小时，第二、三次各1小时，每次添加黄芩质量7倍的水，合并煎液，离心过滤取上清液；上清液调pH值至1.0，70℃保温10min，静置，滤过取沉淀a，沉淀a加沉淀a质量1倍的水，搅匀，调pH值至7.0，再加沉淀a质量1倍的质量分数为50%的乙醇，搅拌使溶解，滤过得滤液；滤液调pH值至1.0，50℃保温，静置，滤过取沉淀b；沉淀b先以沉淀b质量2倍的水清洗，再以沉淀b质量2倍的质量分数55%的乙醇清洗，挥尽乙醇，真空干燥，得预处理后的黄芩备用；
黄芩提取浸膏的制备：于预处理后的黄芩中加入10倍黄芩质量的水，再加入纤维素酶，置于真空减压浓缩干燥塔中减压干燥提取，每克黄芩纤维素酶添加量为20U，PH为4，温度控制在40℃，真空度为﹣0.08Mpa；反应1h后于80℃灭酶2min，再反应3h得黄芩提取浸膏；
将栀子、穿心莲、白头翁、余下的甘草和黄连甘草初提物混合均匀，加药材总重量12倍的水煎煮两次，合并煎液，往煎液里先加入壳聚糖，再加入Ⅱ型ZTC 1+1天然澄清剂的B组份醋酸溶液，于40℃保温2h，煮沸5min，降温至55℃加入Ⅱ型ZTC 1+1天然澄清剂的A组份水溶液，静置过滤得滤液，将该滤液与黄芩提取浸膏混匀，温度保持在55℃，减压浓缩至相对密度为1.05g/ml的浸膏，加入浸膏质量10倍的水，再加入苯甲酸钠、羟苯乙酯、甜菊糖苷、柠檬酸，搅拌均匀，静置24小时，用微滤膜过滤，流速为4m/s，过滤压差为0.06Mpa，滤液补足水至2000份混匀，灌装，即得。
实施例5
本发明提供的兽用黄栀口服液包括下述重量配比的原辅料：
原料：黄连500份、黄芩700份、栀子550份、穿心莲500份、白头翁150份、甘草50份；
辅料：壳聚糖9.5份、Ⅱ型ZTC 1+1天然澄清剂4.5份、苯甲酸钠6份、羟苯乙酯3份、甜菊糖苷12份、柠檬酸1份；
其中，壳聚糖、Ⅱ型ZTC 1+1天然澄清剂为澄清剂，苯甲酸钠、羟苯乙酯为防腐剂，甜菊糖苷、柠檬酸为矫味剂，且Ⅱ型ZTC 1+1天然澄清剂购于北京正天成澄清技术有限公司，Ⅱ型ZTC 1+1天然澄清剂的A组份与B组份的质量比为1:5.5；
其制备方法如下：
澄清剂的配置：将Ⅱ型ZTC 1+1天然澄清剂中的A组份用蒸馏水配置成质量分数为1%的A组份水溶液备用，将Ⅱ型ZTC 1+1天然澄清剂中的B组份用质量分数为1%的醋酸配成质量分数为1%的B组份醋酸溶液备用；
黄连甘草初提物的制备：将黄连粉碎至100目备用；取35份甘草于苯、乙酸乙酯、异丙醇混合液中浸提2次，浸提温度90℃，每次60min，甘草与苯、乙酸乙酯、异丙醇混合液的质量比为1:18，且苯、乙酸乙酯与异丙醇的体积比为5:6:16，过滤后合并浸提液，将粉碎后的黄连加入甘草浸提液中混匀并闷润70min，减压回收苯、乙酸乙酯、异丙醇混合液，得黄连甘草初提物；
黄芩的预处理：加水煎煮3次，第一次3小时，第二、三次各2小时，每次添加黄芩质量13倍的水，合并煎液，离心过滤取上清液；上清液调pH值至2.0，85℃保温40min，静置，滤过取沉淀a，沉淀a加沉淀a质量2.5倍的水，搅匀，调pH值至7.0，再加沉淀a质量3.5倍的质量分数为80%的乙醇，搅拌使溶解，滤过得滤液；滤液调pH值至2.0，60℃保温，静置，滤过取沉淀b；沉淀b先以沉淀b质量5.5倍的水清洗，再以沉淀b质量5.5倍的质量分数85%的乙醇清洗，挥尽乙醇，真空干燥，得预处理后的黄芩备用；
黄芩提取浸膏的制备：于预处理后的黄芩中加入10倍黄芩质量的水，再加入纤维素酶，置于真空减压浓缩干燥塔中减压干燥提取，每克黄芩纤维素酶添加量为20U，PH为5，温度控制在50℃，真空度为﹣0.05Mpa；反应1h后于95℃灭酶2min，再反应3h得黄芩提取浸膏；
将栀子、穿心莲、白头翁、余下的甘草和黄连甘草初提物混合均匀，加药材总重量15倍的水煎煮两次，合并煎液，往煎液里先加入Ⅱ型ZTC 1+1天然澄清剂的B组份醋酸溶液，于60℃保温5h，煮沸12min，降温至80℃加入Ⅱ型ZTC 1+1天然澄清剂的A组份水溶液和壳聚糖，静置过滤得滤液，将该滤液与黄芩提取浸膏混匀，温度保持在70℃，减压浓缩至相对密度为1.25g/ml的浸膏，加入浸膏质量12倍的水，再加入壳聚糖、苯甲酸钠、羟苯乙酯、甜菊糖苷、柠檬酸，搅拌均匀，静置24小时，用微滤膜过滤，流速为8m/s，过滤压差为0.09Mpa，滤液补足水至2000份混匀，灌装，即得。
对比例1
本发明提供的兽用黄栀口服液包括下述重量配比的原辅料：
原料：黄连300份、黄芩600份、栀子450份、穿心莲250份、白头翁250份、甘草100份；
辅料：壳聚糖6.5份、苯甲酸钠3.6份、甜菊糖苷8.6份、柠檬酸0.7份；
其余同实施例1。
对比例2
本发明提供的兽用黄栀口服液包括下述重量配比的原辅料：
原料：黄连300份、黄芩600份、栀子450份、穿心莲250份、白头翁250份、甘草100份；
辅料：Ⅱ型ZTC 1+1天然澄清剂3.0份、羟苯乙酯2.4份、甜菊糖苷8.6份、柠檬酸0.7份，且Ⅱ型ZTC 1+1天然澄清剂购于北京正天成澄清技术有限公司，Ⅱ型ZTC 1+1天然澄清剂的A组份与B组份的质量比为1:2；
其余同实施例1。
对比例3
本发明提供的兽用黄栀口服液包括下述重量配比的原辅料：
原料：黄连300份、黄芩600份、栀子450份、穿心莲250份、白头翁250份、甘草100份；
辅料：壳聚糖6.5份、Ⅱ型ZTC 1+1天然澄清剂3.0份、苯甲酸钠3.6份、羟苯乙酯2.4份、甜菊糖苷8.6份、柠檬酸0.7份；
其中，壳聚糖、Ⅱ型ZTC 1+1天然澄清剂为澄清剂，苯甲酸钠、羟苯乙酯为防腐剂，甜菊糖苷、柠檬酸为矫味剂；
其制备方法如下：
澄清剂的配置：将Ⅱ型ZTC 1+1天然澄清剂中的A组份用蒸馏水配置成质量分数为1%的A组份水溶液备用，将Ⅱ型ZTC 1+1天然澄清剂中的B组份用质量分数为1%的醋酸配成质量分数为1%的B组份醋酸溶液备用；
黄连的预处理：将黄连粉碎至100目，于60℃热水中浸提2次，每次30min，黄连与热水的质量比为1:12，过滤后合并浸提液，文火炒干干燥后，得预处理后的黄连备用；
黄芩的预处理：加水煎煮3次，第一次2小时，第二、三次各1小时，每次添加黄芩质量10倍的水，合并煎液，离心过滤取上清液；上清液调pH值至1.6，80℃保温25min，静置，滤过取沉淀a，沉淀a加沉淀a质量1.5倍的水，搅匀，调pH值至7.0，再加沉淀a质量2.5倍的质量分数为65%的乙醇，搅拌使溶解，滤过得滤液；滤液调pH值至1.5，60℃保温，静置，滤过取沉淀b；沉淀b先以沉淀b质量4倍的水清洗，再以沉淀b质量4倍的质量分数70%的乙醇清洗，挥尽乙醇，真空干燥，得预处理后的黄芩备用；
将栀子、穿心莲、白头翁、甘草和预处理后的黄连、预处理后的黄芩混合均匀，加药材总重量13倍的水煎煮两次，合并煎液，往煎液里先加入Ⅱ型ZTC 1+1天然澄清剂的A组份水溶液，于45-55℃保温3-5h，煮沸6-10min，降温至60-70℃加入Ⅱ型ZTC 1+1天然澄清剂的B组份醋酸溶液，静置过滤得滤液，温度保持在60℃，减压浓缩至相对密度为1.10g/ml的浸膏，加入浸膏质量12倍的水，再加入壳聚糖、苯甲酸钠、羟苯乙酯、甜菊糖苷、柠檬酸，搅拌均匀，静置24小时，过滤，滤液补足水至1500份混匀，灌装，即得。
对比例4：
中国农业信息网2010年5月26日公开了一种杆菌灵口服液配方，其处方为：黄连300g，黄芪600g，栀子450g，穿心莲250g，白头翁250g，甘草100g；其制备方法是将上述六味药加水煎煮两次，合并煎煮液，滤过，滤液浓缩成相对密度为1.10（60℃）的浸膏，加适量辅料及30%蔗糖，搅拌均匀，加水至1000ml，静置24小时，加水至1000ml，灌装，即得。
临床试验：
（1）随机挑选30日龄的健康鸡360只，平均体重0.85kg，随机分为12组，每组30只，并调整各组体重基本相同；分别作为实施例1-5、对比例1-4的实验组、常规用药组、阳性对照组和阴性对照组，除阴性对照组外，其余11组经胸腔注射大肠杆菌悬液0.8ml（6×108个菌/ml），6小时后实验组分别给予实施例1-5、对比例1-4中制得的药物，常规用药组给予恩诺沙星溶液，阳性对照组和阴性对照组给予等量的蒸馏水，连续给药／水7天。各组处理方法及给药剂量见表1：
表1 各组处理方法及给药剂量
组别 鸡数/只 处理方法 实施例1 30 感染，2.0ml/L混饮 实施例2 30 感染，2.0ml/L混饮 实施例3 30 感染，2.0ml/L 混饮 实施例4 30 感染，2.0ml/L 混饮 实施例5 30 感染，2.0ml/L 混饮 对比例1 30 感染，2.0ml/L 混饮 对比例2 30 感染，2.0ml/L混饮 对比例3 30 感染，2.0ml/L混饮 对比例4 30 感染，2.0ml/L混饮 常规用药组（恩诺沙星溶液） 30 感染，2.0ml/L混饮 阳性对照组 30 感染，不治疗 阴性对照组 30 不感染，不治疗
（2）试验期间观察和记录各组试验鸡的精神、食欲及粪便排出情况；感染后第8天，停止给药／水，全部试验鸡单只称重，计算各组相对增重率，并对治愈、有效、无效的试验鸡数量进行统计。相对增重率=用药组或阳性对照组的增重率÷阴性对照组的增重率×100%；治愈：试验期内病禽经过药物治疗临床症状如精神、食欲、粪便等正常与健康鸡症状无差别，有效：试验期内病禽经过药物治疗临床症状如精神、食欲、粪便均有所好转，无效：试验期内病禽经过药物治疗临床症状如精神、食欲、粪便无变化，甚至有加重现象出现象发生为无效。各组临床疗效见表2：
表2 各组临床疗效
组别 相对增重率（%） 治愈（只） 有效（只） 无效（只） 有效率（%） 实施例1 81.9 25 4 1 96.7 实施例2 75.4 20 8 2 93.3 实施例3 76.8 21 7 2 93.3 实施例4 52.6 12 12 6 80.0 实施例5 49.4 11 11 8 73.3 对比例1 71.9 19 7 4 86.7 对比例2 74.3 21 5 4 86.7 对比例3 50.6 15 8 7 76.7 对比例4 36.5 12 10 8 73.3 常规用药组 64.5 14 11 5 83.3 阳性对照组 -10.6 1 18 11 63.3 阴性对照组 100 — — — —
由上述实验可知，实施例1-3相对增重率和有效率普遍高于其他实施例组、对比例组、用药组和对照组，表明本发明制得的黄栀口服液通过合理的配方和科学的工艺处理后，可有效降低因大肠杆菌引发的鸡死亡率，缓解其因感染大肠杆菌而起的各种症状及病变的程度，保持鸡的食欲和精神，加速其康复的过程；且实施例1效果最佳。
长期稳定性试验:
将实施例1-5和对比例1-4制得的口服液，分别置于人工智能气温箱内，调节温度至37℃，相对湿度70%，放置12个月，检查其PH值、澄清度,结果见表3：
表3 稳定性情况表
组别 时间（月） PH值 澄清度 实施例1 12 4.24 澄清 实施例2 12 4.23 澄清 实施例3 12 4.11 澄清 实施例4 12 4.37 丝状沉淀 实施例5 12 4.21 丝状沉淀 对比例1 12 4.52 丝状及絮状沉淀 对比例2 12 4.39 丝状及絮状沉淀 对比例3 12 4.34 丝状沉淀 对比例4 12 4.07 丝状及絮状沉淀
由上述试验可知，实施例1-5和对比例3于试验条件下放置12个月，依然澄清，但是对比例1-2，对比例4存在丝状及絮状沉淀，表明合理的澄清剂配方和配比，可有效保证口服液在保质期内质量的稳定性。