技术领域
本发明涉及药物领域，具体地是葡萄柚种子提取物(GSE)在制备抗SARS 病毒药物中的应用。
背景技术
自正式确定非典型肺炎的病原体为SARS冠状病毒以来，对于非典型肺炎及 其病原体的防治和研究取得了极大进展，抗SARS冠状病毒药物和疫苗研制工作 也在全力进行。SARS病毒是一种新型的冠状病毒，具有较强的传染性和变异性。 目前SARS还缺乏特效的治疗，目前的治疗包括抗病毒治疗如利巴韦林，血清 疗法等，用激素降低免疫系统对肺的损伤，用抗生素治疗潜在的细菌感染，辨 证的中西医结合治疗；呼吸机的应用以及应激和ARDS的对症支持治疗等。抗 SARS药物研制目前尚处于初期阶段。
葡萄柚种子提取物(Grapefruit Seed Extract，简称GSE)是一种高效无毒 的广谱抗菌剂。二十世纪50年代，Jacob Harich发现了GSE。通过半个世纪的 研究，人们发现GSE具有神奇的功效，(如：1991年下半年，Allan Sachs博士 听说葡萄柚种子提取物(GSE)是一种新开发的抗微生物制剂，后来他长期坚持 研究GSE的临床应用，创建了至少25种含有GSE的药物处方，至今仍然在被全 世界的临床医生们使用。1997年，他编写出版了一本GSE专著《葡萄柚种子提 取物权威指南》。在这本书中，他用自己创立的标准对GSE进行分析论证，明确 支持GSE是一种十分理想的极具优良的抗微生物制剂，全面符合十项专门指标。
1.广谱抗菌：对40余种革兰氏阴性菌，30余种革兰氏阳性菌，以及真菌与酵 母菌，病毒(包括甲型单纯性疱疹病毒、A2型流感病毒、艾滋病病毒等)，寄生 虫(包括溶组织阿米巴和肠贾第虫等)。Allan Sachs博士称GSE是力克各种病 原体的“瑞士军刀”。
2.强力高效 对上述各种病原体的最低抑菌浓度仅在2ppm～200ppm，与同类 其他抗菌化合物比较，GSE的抗菌效力约高10至100倍。
3.安全无毒 1995年7月，美国加州贝克利Northview Pacific实验室发表 了一份关于GSE急性毒性毒理学的研究报告，认为每公斤体重摄入量超过5000mg 是安全的。也就是说，一个体重60公斤的人每日服下300,000mgGSE，在理论上 说是安全的，而这是一个异常巨大的剂量。这项急性毒性试验后来被许多实验 室重复做过，而每次重复的结果都是相同的，即GSE的半致死剂量(LD50)均 大于5000mg/Kg(体重)。
而慢性经口毒性试验(对实验动物持续喂食，然后对其后代进行24个月的 观察研究)结果表明，GSE的LD50为2500mg/Kg(田鼠和豚鼠)。根据化学物质 毒性分级标准，GSE属实际无毒类)。
4.对有益微生物无副作用。
5.已被深入研究过。
6.来源于自然资源。
7.无刺激或过敏反应。
8.具有可生物降解性能。
9.与其他天然药物可兼容。
发明内容
本发明的目的在于提供一种葡萄柚种子提取物在制备抗SARS病毒药物中的 应用。
本发明制备的抗SARS病毒药物含有中药活性成分葡萄柚种子提取物，其药 物毒性小，稳定性好，耐药性强。
本发明用葡萄柚种子提取物制备的抗SARS病毒药物可采用常规的制备工 艺，制备成不同的药物剂型供患者使用，如制成口服液、胶囊、粉剂、针剂等。
本发明用葡萄柚种子提取物制备的抗SARS病毒药物的抗病毒作用分述如 下：
1、药物对细胞的保护作用
以不同浓度药物加到长满单层Vero-E6细胞的96孔板中，培养2h后弃药液， 接种100TCID50的SARS-CoV病毒液，37℃吸附5％CO2培养48h，观察药物处 理后的细胞对SARS-CoV感染的影响。同时做单用病毒感染时的病毒对照、正 常细胞对照。用MTS/PMS法测定RD-09对Vero-E6的细胞毒性，结果如表1： 结果显示：在100ug/ml的浓度范围内RD-09对Vero-E6细胞没有毒性。
表1：MTS/PMS法测定RD-09对Vero-E6的细胞毒性 RD-09(μ g/mL) OD值 存活率 M+sd 100 1.803 1.798 1.794 1.795 1.802+0.004 1.805+0.007 1.800+0.009 1.805+0.011 1.804+0.005 1.808+0.011 1.754+0.006 1.805+0.011 99.60％ 99.50％ 99.50％ 99.50％ 99.30％ 99.50％ 99.20％ 50 1.795 1.801 1.802 1.786 25 1.799 1.797 1.785 1.807 12.5 1.796 1.793 1.783 1.811 6.25 1.791 1.799 1.794 1.787 3.13 1.7968 1.808 1.8 1.781 1.56 1.759 1.804 1.789 1.808 细胞对照 1.815 1.791 1.811 1.801 100％
2、药物对SARS-CoV增殖的影响
接种100TCID50的SARS-CoV于长满单层Vero-E6细胞的96孔板上，37℃ 吸附2h，换上含相应浓度药物的维持液，继续培养48h，观察药物对SARS-CoV 增殖的影响。结果显示：RD-09对SARS-CoV的半抑制剂量为2～4ug/ml。
3、药物对SARS-CoV的直接杀伤作用
含不同浓度药物的维持液与等量病毒液后，置37℃作用2h后，将孵育液加 入长满单层Vero-E6细胞的96孔板中，0.1ml/孔，37℃吸附1h，换上含相应浓 度药物的维持液，继续培养48h，观察药物对SARS-CoV的直接杀伤作用。结 果显示：不同浓度药物与病毒等量混合2h后，在4μg/ml时对细胞感染 SARS-CoV皆有全抑制作用。
4、药物对SARS-CoV感染细胞的综合作用
药物和病毒等量混合后直接加到长满单层Vero-E6细胞的96孔板上37℃吸 附2h，弃混合液加维持液，继续培养48h，观察药物对SARS-CoV感染细胞的 综合作用。结果显示：RD-09对SARS-CoV感染细胞的综合作用效果为：4ug/ml 时，对SARS-CoV病毒有100％的抑制效果。
5、药物对病毒感染细胞的预防作用
不同浓度药物预先与细胞作用2h后，接种病毒，RD-09在4μg/mL时可以 100％抑制SARS病毒感染的Vero-E6细胞病变。
6、药物对病毒感染细胞的治疗作用
药物对细胞感染SARS-CoV有全部抑制作用，表2是药物9不同方式作用 SARS-CoV感染的Vero-E6细胞情况。 表2 剂量代号 直接杀伤作用 预防作用 综合作用 治疗作用 1 ++++ ++++ ++++ ++++ 2 ++++ ++++ ++++ ++++ 3 ++++ ++++ ++++ ++++ 4 5 6 7 ---- ---- ---- ---- 细胞对照 ---- 病毒对照 ++++ SARS-CoV对照组：++++ 细胞对照组：----
注：“+”为CPE等级，0～25％为+、25％～50％为++、50％～75％为+++、75％～100％ 为++++
本发明与现有技术相比具有如下优点：
1、在安全剂量范围内，对SARS病毒的抑制率高。
2、有较强的预防SARS病毒感染的作用。
3、愈后快，可以减轻感染病人的综合症状。
附图说明
图1是Vero-E6正常细胞图
图2是Vero-E6细胞被SARS-CoV感染后病变图
图3是RD-09药物对被SARS-CoV感染的Vero-E6细胞的保护效果图
具体实施方式
如图1所示，正常Vero-E6细胞贴壁生长，具有贴壁细胞的一般特性，细 胞之间空隙小。
如图2所示，Vero-E6细胞被SARS-CoV感染后，细胞从壁上脱落，细胞 碎裂。
如图3所示，被SARS-CoV感染Vero-E6细胞加入药物处理后，仅有部分 细胞从壁上脱落，大部分细胞的形态与正常细胞相同，可见药物作用后 SARS-CoV感染Vero-E6细胞病变减轻。
实施例1
对人进行的临床试验，试验组用本发明制备的药物注射液，药物注射液的 用法与用量：一次50mg，一日一次，缓缓静脉滴注。对照组注射生理盐水，其病 情状况如表3所示，治愈时间如表4所示：
表3：病情状况 组别 n 减轻 稳定 加重 Ridit检验 试验组 对照组 30 28 18 2 10 13 2(0) 13(2) P＜0.05 该表结果显示：试验组(即使用RD-09治疗组)的病人比对照组的病人在病情上有较大的减 轻。
表4：治愈时间 组别 n 缩短 基本不变 延长 Ridit检验 试验组 对照组 30 28 22 2 7 10 1 16(2) P＜0.05
注：()号内的数字为死亡人数。 该表结果显示：试验组(即使用RD-09治疗组)的病人在治疗时间比对照组有较大的缩短。