技术领域
本发明涉及一种组合物、制备方法及其应用，涉及日用化学品领域。
背景技术
随着生活节奏不断加快，生活压力不断增大，人群中脱发现象日益突出，并且呈现年轻化。生理性脱发是指头发由于进入退行期与新进入生长期的毛发不断处于动态平衡，故能维持正常数量的头发。病理性脱发是指头发异常或过度的脱落，大多认为与下列因素有关：遗传因素、雄性激素分泌过多、精神过度紧张、情绪不稳定、睡眠不足、微量元素缺乏、应激能力低下、自身免疫内分泌功能失调、月经及产后调理失当、中年肾亏等。这些因素造成头皮营养供应失衡、血流循环不畅、油脂过多、毛囊阻塞等头部生态环境恶化，从而阻碍发根吸收营养，影响毛发生长，导致脱发。
发明内容
本发明的目的是为了解决人群中脱发现象日益突出，并且呈现年轻化趋势的技术问题，提供了一种治疗脱发组合物、制备方法及其应用。
治疗脱发组合物主要包括地龙蛋白截液与豆豉发酵的提取物。
所述治疗脱发组合物还包括防腐剂、保湿剂、营养调理剂和pH调节剂；
防腐剂占治疗脱发组合物总质量的0.3％～0.6％、保湿剂占治疗脱发组合物总质量的20％～30％、营养调理剂占治疗脱发组合物总质量的40％～50％、pH调节剂占治疗脱发组合物总质量的0.2％～0.3％。
所述防腐剂为尼泊金甲酯、苯甲酸、苯甲醇或山梨酸钾；
所述保湿剂为甘油、丙二醇、聚乙二醇或山梨醇；
所述pH调节剂为氢氧化钠或氢氧化钾；
所述营养调理剂是高碳醇、白油、鲸蜡醇及聚醚类中的一种或几种的混合物。
治疗脱发组合物的制备方法如下：
一、称取地龙，然后加入二次蒸馏水，二次蒸馏水加入量为地龙质量的3倍，分次匀浆得匀浆液，调节pH值为6.5-6.7，在20℃-30℃的调节下，经管式离心机离心，取匀浆上清液；
二、将步骤二得到的匀浆上清液采用截留分子量5万的超滤膜过滤，得到地龙蛋白截液；
三、豆豉发酵：
将大豆洗净沥干后，加入到地龙蛋白截液中浸泡10-18小时，于120℃灭菌，得到发酵基质；
每250g发酵基质接种2ml枯草孢杆菌浓度为107-109CFU/ml的枯草孢杆菌和地龙蛋白截液的复合溶液，摇匀，于4-8℃培养72-120小时，得到地龙蛋白截液与豆豉发酵的提取物。
步骤一中离心压力为0.25MPa。
步骤一中离心转速为200r/min。
治疗脱发组合物的制备方法如下：
一、称取地龙，然后加入二次蒸馏水，二次蒸馏水加入量为地龙质量的3倍，分次匀浆得匀浆液，调节pH值为6.5-6.7，在20℃-30℃的调节下，经管式离心机离心，取匀浆上清液；
二、将步骤二得到的匀浆上清液采用截留分子量5万的超滤膜过滤，得到地龙蛋白截液；
三、豆豉发酵：
将大豆洗净沥干后，加入到地龙蛋白截液中浸泡10-18小时，于120℃灭菌，得到发酵基质；
每250g发酵基质接种2ml枯草孢杆菌浓度为107-109CFU/ml的枯草孢杆菌和地龙蛋白截液的复合溶液，摇匀，于4-8℃培养72-120小时，得到地龙蛋白截液与豆豉发酵的提取物；
四、向地龙蛋白截液与豆豉发酵的提取物中添加防腐剂、保湿剂、营养调理剂和pH调节剂，即得治疗脱发组合物
治疗脱发组合物的应用，采用治疗脱发组合物制备治疗脱发药物、洗发水及头皮按摩膏用于治疗脱发。
所述头皮按摩膏由硬脂酸15g、单硬脂酸甘油酯8g、白油8g、液体石蜡8g、凡士林5g、鲸蜡醇5g、氢氧化钠0.3g、地龙蛋白截液与豆豉发酵的提取物30ml、丙二醇20ml、丙二醇10ml、黄芪提取物10ml和蒸馏水100ml组成。
地龙，又名蚯蚓，具有清热熄风、平喘、通络、利尿之功。现代药理研究发现，它具有抗凝、溶栓、抑制血小板聚集、抗心律失常、抗癌、镇痛、解热、平喘的作用。
地龙所含蛋白质比重大且种类丰富，占干重的56％-65％，有脂类蛋白、抗微生物蛋白、收缩血管蛋白、溶血和凝血兼具的蛋白、钙调素结合蛋白、蚯蚓新钙结合蛋白等。
豆豉中含有丰富的营养物质，主要包括蛋白质、游离氨基酸、必需脂肪酸、可溶性糖、无机盐、维生素等。除此之外，豆豉中还含有大豆异黄酮、大豆皂甙、褐色色素、豆豉纤溶酶、β-葡萄糖苷酶、抗菌素等生理活性物质。豆豉中这些活性物质部分来源于原料大豆中，部分来源于参与发酵过程中的各种微生物及酶对原料大豆中有机物的分解、重组等复杂的生化反应。
本发明的治疗脱发组合物对毛囊生长有明显促进作用，对脂溢性脱发有明显改善作用。
具体实施方式
本发明技术方案不局限于以下所列举具体实施方式，还包括各具体实施方式间的任意组合。
具体实施方式一：本实施方式治疗脱发组合物主要包括地龙蛋白截液与豆豉发酵的提取物。
具体实施方式二：本实施方式与具体实施方式一不同的是所述治疗脱发组合物还包括防腐剂、保湿剂、营养调理剂和pH调节剂；
防腐剂占治疗脱发组合物总质量的0.3％-0.6％、保湿剂占治疗脱发组合物总质量的20％-30％、营养调理剂占治疗脱发组合物总质量的40％-50％、pH调节剂占治疗脱发组合物总质量的0.2％-0.3％。其它与具体实施方式一相同。
具体实施方式三：本实施方式与具体实施方式一或二不同的是所述防腐剂为尼泊金甲酯、苯甲酸、苯甲醇或山梨酸钾；所述保湿剂为甘油、丙二醇、聚乙二醇或山梨醇；所述pH调节剂为氢氧化钠或氢氧化钾；所述营养调理剂是高碳醇、白油、鲸蜡醇及聚醚类中的一种或几种的混合物。其它与具体实施方式一或二相同。
所述营养调理剂是混合物时，各成分间为任意比。
具体实施方式四：具体实施方式一所述治疗脱发组合物的制备方法如下：
一、称取地龙，然后加入二次蒸馏水，二次蒸馏水加入量为地龙质量的3倍，分次匀浆得匀浆液，调节pH值为6.5-6.7，在20℃-30℃的调节下，经管式离心机离心，取匀浆上清液；
二、将步骤二得到的匀浆上清液采用截留分子量5万的超滤膜过滤，得到地龙蛋白截液；
三、豆豉发酵：
将大豆洗净沥干后，加入到地龙蛋白截液中浸泡10-18小时，于120℃灭菌，得到发酵基质；
每250g发酵基质接种2ml枯草孢杆菌浓度为107-109CFU/ml的枯草孢杆菌和地龙蛋白截液的复合溶液，摇匀，于4-8℃培养72-120小时，得到地龙蛋白截液与豆豉发酵的提取物。
具体实施方式五：本具体实施方式与具体实施方式四不同的是步骤一中离心压力为0.25MPa。其它与具体实施方式四相同。
具体实施方式六：本具体实施方式与具体实施方式四或五不同的是步骤一中离心转速为200r/min。其它与具体实施方式四或五相同。
具体实施方式七：具体实施方式二所述治疗脱发组合物的制备方法如下：
一、称取地龙，然后加入二次蒸馏水，二次蒸馏水加入量为地龙质量的3倍，分次匀浆得匀浆液，调节pH值为6.5-6.7，在20℃-30℃的调节下，经管式离心机离心，取匀浆上清液；
二、将步骤二得到的匀浆上清液采用截留分子量5万的超滤膜过滤，得到地龙蛋白截液；
三、豆豉发酵：
将大豆洗净沥干后，加入到地龙蛋白截液中浸泡10-18小时，于120℃灭菌，得到发酵基质；
每250g发酵基质接种2ml枯草孢杆菌浓度为107-109CFU/ml的枯草孢杆菌和地龙蛋白截液的复合溶液，摇匀，于4-8℃培养72-120小时，得到地龙蛋白截液与豆豉发酵的提取物；
四、向地龙蛋白截液与豆豉发酵的提取物中添加防腐剂、保湿剂、营养调理剂和pH调节剂，即得治疗脱发组合物；
防腐剂占治疗脱发组合物总质量的0.3％-0.6％、保湿剂占治疗脱发组合物总质量的20％-30％、营养调理剂占治疗脱发组合物总质量的40％-50％、pH调节剂占治疗脱发组合物总质量的0.2％-0.3％；
所述防腐剂为尼泊金甲酯、苯甲酸、苯甲醇或山梨酸钾；
所述保湿剂为甘油、丙二醇、聚乙二醇或山梨醇；
所述pH调节剂为氢氧化钠或氢氧化钾；
所述营养调理剂是高碳醇、白油、鲸蜡醇及聚醚类中的一种或几种的混合物。
所述营养调理剂为混合物时，各成分间为任意比
具体实施方式八：具体实施方式一至七之一所述的治疗脱发组合物的应用采用治疗脱发组合物制备治疗脱发药物、洗发水及头皮按摩膏用于治疗脱发。
采用下述实施例验证本发明效果：
实施例1：
豆豉发酵：
将大豆洗净沥干后，加入到水中浸泡10-18小时，于120℃灭菌，于4-8℃培养72-120小时，得到豆豉；
头皮按摩膏由硬脂酸15g、单硬脂酸甘油酯8g、白油8g、液体石蜡8g、凡士林5g、鲸蜡醇5g、氢氧化钠0.3g、豆豉30ml、丙二醇20ml、丙二醇10ml、黄芪提取物10ml、和蒸馏水100ml组成。
实施例2：
治疗脱发组合物的制备方法如下：
一、称取地龙，然后加入二次蒸馏水，二次蒸馏水加入量为地龙质量的3倍，分次匀浆得匀浆液，调节pH值为6.5，在20℃的调节下，经管式离心机离心，取匀浆上清液；
二、将步骤二得到的匀浆上清液采用截留分子量5万的超滤膜过滤，得到地龙蛋白截液；
三、豆豉发酵：
将大豆洗净沥干后，加入到地龙蛋白截液中浸泡浸泡10小时，于120℃灭菌，得到发酵基质；
每250g发酵基质接种2ml枯草孢杆菌浓度为107CFU/ml的枯草孢杆菌和地龙蛋白截液的复合溶液，摇匀，于4-8℃培养72小时，得到地龙蛋白截液与豆豉发酵的提取物。
头皮按摩膏由硬脂酸15g、单硬脂酸甘油酯8g、白油8g、液体石蜡8g、凡士林5g、鲸蜡醇5g、氢氧化钠0.3g、地龙蛋白截液与豆豉发酵的提取物30ml、丙二醇20ml、丙二醇10ml、黄芪提取物10ml和蒸馏水100ml组成。
实施例3：
治疗脱发组合物的制备方法如下：
一、称取地龙，然后加入二次蒸馏水，二次蒸馏水加入量为地龙质量的3倍，分次匀浆得匀浆液，调节pH值为6.5，在20℃的调节下，经管式离心机离心，取匀浆上清液；
二、将步骤二得到的匀浆上清液采用截留分子量1-4万的超滤膜过滤，得到地龙蛋白截液；
三、豆豉发酵：
将大豆洗净沥干后，加入到地龙蛋白截液中浸泡10小时，于120℃灭菌，得到发酵基质；
每250g发酵基质接种2ml枯草孢杆菌浓度为107CFU/ml的枯草孢杆菌和地龙蛋白截液的复合溶液，摇匀，于4-8℃培养72小时，得到地龙蛋白截液与豆豉发酵的提取物。
头皮按摩膏由硬脂酸15g、单硬脂酸甘油酯8g、白油8g、液体石蜡8g、凡士林5g、鲸蜡醇5g、氢氧化钠0.3g、地龙蛋白截液与豆豉发酵提取物30ml、丙二醇20ml、丙二醇10ml、黄芪提取物10ml和蒸馏水100ml组成。
实施例4：
治疗脱发组合物的制备方法如下：
一、称取地龙，然后加入二次蒸馏水，二次蒸馏水加入量为地龙质量的3倍，分次匀浆得匀浆液，调节pH值为6.5，在20℃的调节下，经管式离心机离心，取匀浆上清液；
二、将步骤二得到的匀浆上清液采用截留分子量1-5万的超滤膜过滤，得到地龙蛋白截液；
三、豆豉发酵：
将大豆洗净沥干后，加入到地龙蛋白截液中浸泡10小时，于120℃灭菌，得到发酵基质；
每250g发酵基质接种2ml枯草孢杆菌浓度为107CFU/ml的枯草孢杆菌和地龙蛋白截液的复合溶液，摇匀，于4-8℃培养72小时，得到地龙蛋白截液与豆豉发酵的提取物。
头皮按摩膏由硬脂酸15g、单硬脂酸甘油酯8g、白油8g、液体石蜡8g、凡士林5g、鲸蜡醇5g、氢氧化钠0.3g、地龙蛋白截液与豆豉发酵的提取物地龙蛋白截液与豆豉发酵提取物30ml、丙二醇20ml、丙二醇10ml、黄芪提取物10ml和蒸馏水100ml组成。
实施例5：
对脂溢性小鼠脱发的抑制实验
1、实验材料
丙酸睾酮注射液25mg/1ml，购自宁波第二激素厂，生产批号：11025
色拉油90ml/瓶，金龙鱼有限公司
成年雄性B6CBAF1/J小鼠，体重18-22g，清洁级，购自北京维通利华实验动物技术有限公司【许可证号：SCXK(京)2017-0011】，室温23℃，湿度50-60％，每天通风2次，每次持续1小时，按照小鼠的自然生活模式，使B6CBAF1/J小鼠自由进行自由活动、饮水和进食。
2、实验方法
2.1实验分组
70只雄性小鼠中随机选出10只B6CBAF1/J小鼠作为实验空白对照组，其余60只B6CBAF1/J小鼠作为实验小鼠，分笼饲养。即脱发模型组、头皮按摩膏组(采用实施例1-4制备的头皮按摩膏)。
2.2动物模型制备和给药方法
脱发动物模型采用注射给药造模方式，注射部位为小鼠背部平行于脊柱区皮下，除空白对照组给予注射生理盐水外，其余6组给予注射丙酸睾酮，注射剂量为5mg/kg·d，注射时间为4周。
在B6CBAF1/J小鼠脱发动物模型成功造模第4周时，开始给予药物治疗，空白对照组与脱发模型组均在背部脱毛部位涂抹头皮按摩膏基质1ml，头皮按摩膏组实施例1-4组分别给予头皮按摩膏1ml涂抹于相同脱毛部位，治疗给药四周。观察小鼠脱毛部位小鼠的毛发生长状况，统计小鼠脱毛重量；并结合病理学观察，显微镜下计算终毛/毳毛的比值，计算出平均数。
3.数据统计分析
采用SPSS20.0软件进行数据处理，组间差异采用单因素方差分析，P＜0.05显著性差异，认为具有统计学意义。
4实验结果
(1)脱毛重量测定
由表1可知：与空白对照组相比，其他各实验小鼠均发生不同程度的脱毛现象，除实施例2存在显著性差异外(P<0.05)，其余各组均存在极显著性差异(p<0.01)；与模型组相比，实施例2、4组小鼠脱毛现象均有所改善，其中实施例2组小鼠脱毛现象较模型组改善极明显(P<0.01)，其他各实施例组均没有显著差异，对脱发没有改善趋势。
(2)小鼠终毛/毫毛比例测定
由表2可知，与空白对照组相比，模型组的终毛/毫毛的比例显著下降(P<0.01)；与模型组相比，实施例1、3终毛/毫毛比例没有改变，实施例2、4均能提高终毛/毫毛的比例，其中实施例2的提高效果更明显(P<0.01)。
(3)本发明头皮按摩膏实施例2(地龙(50000)+豆豉)对脂溢性脱发有明显改善作用，实施例4改善也具有改善效果，但是其作用并没有实施例2效果显著。
表1小鼠脱毛重量测定结果
*与空白对照组相比p<0.05、**与空白对照组相比p<0.01；
△与模型组相比p<0.05，△△与模型组相比p<0.01。
表2小鼠终毛/毫毛比例测定结果
*与空白对照组相比p<0.05、**与空白对照组相比p<0.01；
△与模型组相比p<0.05，△△与模型组相比p<0.01。
实验例6：头皮按摩膏对毛发生长期小鼠毛囊数目的影响
1、实验材料
松香购自于(深圳市吉田化工有限公司)；石蜡购自于(奥伟胶业蜡制品)；成年雌性C57BL/6小鼠，体重18-22g，清洁级，选择皮色粉红，毛发属于休止期的小鼠。购自北京维通利华实验动物技术有限公司【许可证号：SCXK(京)2017-0149】，室温23℃，湿度50-60％，每天通风2次，每次持续1小时，按照小鼠的自然生活模式，小鼠自由进行自由活动、饮水和进食。
2、实验方法
2.1实验分组
60只雌性C57BL/6小鼠随机分为6组，阴性对照组，头皮按摩膏组实施例1-4组，分笼饲养，阴性对照组涂抹空白基质。
2.2动物模型制备和给药方法
将松香与石蜡1:1混合加热融化后，均匀涂于小鼠背部，涂抹面积约2cm×3cm，冷却凝固后揭去，以去除背毛(一定确认毛发生长期处于休止期)。脱毛次日，局部皮肤直接用棉签涂抹给药，每天定时给药1次，每次给药量为1ml，连续给药20天。第20天时，取各组小鼠背部相同位置皮肤组织块，用10％福尔马林固定，石蜡包埋切片，切片厚约4-5微米，HE染色，高倍视野(×400)的毛囊数，取其均值，并进行统计学处理。
3.数据统计分析
采用SPSS20.0软件进行数据处理，组间差异采用单因素方差分析，P＜0.05显著性差异，认为具有统计学意义。
4实验结果
(1)毛囊密度的影响
实验第20天，各组小鼠毛囊数目见表3。与空白对照组相比，实施例1、3对C57BL小鼠的毛囊数目没有影响(P>0.05)；但是实施例2、4可增加空白小鼠的毛囊数目(P<0.01)，其中实施例2效果极明显，提示其可诱导C57BL/6小鼠毛囊进入生长期，延长生长期时间，并推迟进入退行期，具有促进毛囊生长的作用。
(2)本发明头皮按摩膏实施例2(地龙(50000)+豆豉)对毛囊生长有明显促进作用，实施例4改善也具有改善效果，但是其作用并没有实施例2效果显著。
表3各组小鼠毛囊数目
*与空白对照组相比p<0.05，**与空白对照组相比P<0.01。