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1、(19)中华人民共和国国家知识产权局 (12)发明专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请号 201710114411.7 (22)申请日 2017.02.28 (71)申请人 北京智诚拓展广告传媒有限公司 地址 100012 北京市朝阳区北苑2号院3幢1 号平房 (72)发明人 彭师奇 吴滨 赵明 (74)专利代理机构 北京思元知识产权代理事务 所(普通合伙) 11598 代理人 余光军 曾晖 (51)Int.Cl. A61K 36/752(2006.01) A61P 39/02(2006.01) A61K 131/00(2006.01) (54)发明名称 鲜柚子皮纳米。
2、汁、 其制备、 排铅活性及应用 (57)摘要 本发明公开了鲜柚子皮纳米汁的制备方法、 公开了它的纳米溶液性质、 公开了它对铅中毒小 鼠的治疗作用。 因而本发明公开了它在制备治疗 和预防铅中毒药物中的应用。 权利要求书1页 说明书4页 附图2页 CN 108498606 A 2018.09.07 CN 108498606 A 1.一种鲜柚子皮汁， 其特征在于它是新鲜柚子皮的纳米汁， 具有排铅活性。 2.制备权利要求1的鲜柚子皮纳米汁的方法， 该方法包括: (1)表面无泥沙的新鲜柚子皮1000kg于浸泡池中用3000kg-5000kg自来水浸泡2小时， 之后用水清洗3-5次， 滤除水， 得到清洁的。
3、新鲜柚子皮； (2)将清洁的新鲜柚子皮放到水浪气饱清洗机中， 在链条传动下用反渗透纯化水再清 洗之后， 通过传递窗进入30万级洁净区； (3)将柚子皮送入离心式榨汁机破碎和榨汁， 获得100020kg鲜柚子皮原汁； (4)将鲜柚子皮原汁装桶并密封； (5)将密封的鲜柚子皮原汁桶经传递窗递出洁净区， 入5库放置待用； (6)按生产指令单用量从5库提出鲜柚子皮原汁， 在缓冲间用紫外灯照射30分钟对外 皮消毒； (7)经外皮消毒的鲜柚子皮原汁通过传递窗进入洁净配料间； (8)在200l配料罐中将消毒的鲜柚子皮原汁用纯净水稀释， 配制浓度为20的鲜柚子 皮汁， 搅拌30分钟后200目过滤， 得到鲜柚子。
4、皮汁滤液； (9)将鲜柚子皮汁滤液灌瓶装， 之后传出净化区； (10)瓶装鲜柚子皮汁滤液于0.16mpa灭菌20分钟、 冷却、 贴标； (11)灭菌后的瓶装鲜柚子皮汁滤液装箱,入阴凉成品库放储存待用； (12)测定鲜柚子皮汁中组分的纳米尺寸。 3.权利要求1和2的鲜柚子皮纳米汁在制备治疗和预防铅中毒药物中的应用。 权 利 要 求 书 1/1 页 2 CN 108498606 A 2 鲜柚子皮纳米汁、 其制备、 排铅活性及应用 发明领域 0001 本发明涉及一种鲜柚子皮纳米汁、 涉及它的制备方法、 涉及它的纳米溶液性质、 涉 及它对铅中毒小鼠的治疗作用。 因而本发明涉及它在制备治疗和预防铅中毒药。
5、物中的应 用。 本发明属于生物医药领域。 背景技术 0002 铅与人们的日常工作生活有广泛联系， 对人体是一种可以致病的重金属。 铅不仅 能够通过多种途径进入人体内， 并且能够在人体内蓄积， 从而对人体造成损伤。 铅进入人体 后， 可以与金属离子竞争与蛋白的结合位点， 从而影响人体的正常生理功能。 铅中毒对人体 健康有严重的影响， 对于处于发育期的儿童的影响是最为严重。 体内低水平的血铅浓度就 可对儿童的神经系统的发育产生影响， 导致其智力下降。 铅可造成的脂质过氧化， 可引起的 高血压等心血管疾病和老年性疾病， 其后果已被逐步重视。 由此重金属解毒排铅药物是目 前药物研究的重要方向。 当前临。
6、床的驱铅药物均有着各种局限。 有些药物对脑铅驱排不彻 底、 有些药物没有将铅及时排出体外而造成铅在机体内再分布、 有些需要静脉注射用药不 便。 寻找安全、 疗效高、 选择性强且用药方便的排铅药物有很好的应用前景。 0003 柚子皮不仅是食材， 而且民间有柚子皮煮水可治小儿肺炎、 可治疗冻疮和可沐浴 的说法。 此外， 民间还有柚子皮可防虫和可去秽味的说法。 由于没有严格的药效学研究， 所 以这些说法的基础仅仅是经验。 此外， 这些说法与治疗及预防铅中毒没有丝毫牵连。 发明人 长期从事蔬菜鲜汁的治疗作用研究。 对柚子皮的全组分分析使发明人认识到， 柚子皮鲜汁 可以治疗及预防铅中毒。 对柚子皮的组分。
7、分析还使发明人认识到， 与民间烹制的柚子皮不 同， 柚子皮鲜汁不存在高温、 油盐和佐料的影响。 因而柚子皮的全组分有能力以它们的天然 状态发挥作用并形成纳米结构， 帮助口服吸收。 根据这些认识， 发明人提出了本发明。 发明内容 0004 本发明的第一个内容是提供一种鲜柚子皮纳米汁。 0005 本发明的第二个内容是提供鲜柚子皮纳米汁的方法， 该方法包括: 0006 (1)表面无泥沙的新鲜柚子皮1000kg于浸泡池中用3000kg-5000kg自来水水浸泡2 小时。 之后用3000kg-5000kg水至少洗3次， 滤除水， 得到清洁的新鲜柚子皮； 0007 (2)将清洁的新鲜柚子皮放到水浪气饱清洗。
8、机中， 在链条传动下用反渗透纯化水 再清洗之后， 通过传递窗进入30万级洁净区； 0008 (3)将柚子皮送入离心式榨汁机破碎和榨汁， 获得100020kg鲜柚子皮原汁； 0009 (4)将鲜柚子皮原汁装桶(10kg/桶)并密封； 0010 (5)将密封的鲜柚子皮原汁桶(10kg/桶)经传递窗递出洁净区， 入5库放置待用； 0011 (6)按生产指令单用量从5库提出鲜柚子皮原汁， 在缓冲间用紫外灯照射30分钟 对外皮消毒； 0012 (7)经外皮消毒的鲜柚子皮原汁通过传递窗进入洁净配料间； 说 明 书 1/4 页 3 CN 108498606 A 3 0013 (8)在200l配料罐中将消毒的。
9、鲜柚子皮原汁用纯净水稀释， 配制浓度为20(W/W) 的鲜柚子皮汁， 搅拌30分钟后200目过滤， 得到鲜柚子皮汁滤液； 0014 (9)将鲜柚子皮汁滤液灌装(100ml/瓶)， 之后传出净化区； 0015 (10)瓶装鲜柚子皮汁滤液于0.16mpa灭菌20分钟、 冷却、 贴标； 0016 (11)灭菌后的瓶装鲜柚子皮汁滤液装箱(12瓶/箱),入阴凉成品库放储存待用。 0017 (12)测定鲜柚子皮汁中组分的纳米尺寸。 0018 本发明的第三个内容是提供柚子皮纳米汁对铅中毒的治疗和预防作用。 附图说明 0019 图1鲜柚子皮汁的丁达尔效应。 0020 图2鲜柚子皮汁组分的纳米尺寸。 0021 。
10、图3鲜柚子皮纳米汁组分的Zeta电位。 具体实施方式 0022 为了进一步阐述本发明， 下面给出一系列实施例。 这些实施例完全是例证性的， 它 们仅用来对本发明进行具体描述， 不应当理解为对本发明的限制。 0023 实施例1制备鲜柚子皮纳米汁 0024 表面无泥沙的新鲜柚子皮1000kg于浸泡池中用3000kg-5000kg自来水水浸泡2小 时。 之后用3000kg-5000kg水至少洗3次， 滤除水， 得到清洁的新鲜柚子皮。 将自来水洗净的 新鲜柚子皮放到水浪气饱清洗机中， 在链条传动下用反渗透纯化水再清洗， 之后通过传递 窗进入30万级洁净区。 在30万级洁净区将柚子皮送入离心式榨汁机破碎。
11、和榨汁， 获得1000 20kg鲜柚子皮原汁。 将鲜柚子皮原汁装桶(10kg/桶)并密封。 将密封的鲜柚子皮原汁桶 (10kg/桶)经传递窗递出洁净区， 入5库放置待用。 按生产指令单用量从5库提出的鲜柚 子皮原汁进入缓冲间， 并用紫外灯照射30分钟对外皮消毒。 经外皮消毒的鲜柚子皮原汁通 过传递窗进入洁净配料间。 在200l配料罐中将消毒的鲜柚子皮原汁用纯净水稀释， 配制浓 度为20(W/W)的鲜柚子皮汁。 搅拌30分钟后200目过滤， 得到鲜柚子皮汁滤液。 将鲜柚子皮 汁滤液灌装(100ml/瓶)， 之后传出净化区。 瓶装鲜柚子皮汁滤液于0.16mpa灭菌20分钟、 冷 却、 贴标。 灭菌。
12、后的瓶装鲜柚子皮汁滤液装箱(12瓶/箱),入阴凉成品库放储存待用。 0025 实施例2测定鲜柚子皮汁的丁达尔效应 0026 将5ml鲜柚子皮汁置于无色透明的玻璃瓶中， 用激光笔照射鲜柚子皮汁的中部。 波 长为650nm的激光使浅黄色透明的鲜柚子皮汁中部出现一条红色光道。 可见， 鲜柚子皮汁有 丁达尔效应(见图1)。 因为丁达尔效应是纳米溶液的特性， 所以浅黄色透明的鲜柚子皮汁是 纳米溶液。 鲜柚子皮汁的纳米形态是本发明的制备方法获得了意想不到的技术效果的证 据。 0027 实施例3测定鲜柚子皮汁中组分的纳米粒的平均粒径 0028 将2ml鲜柚子皮汁置于专用测定池中， 25在粒径分析仪(Nano。
13、-ZS90； Malvern Instruments Ltd,Malvern,UK)上测定平均粒径。 结果表明， 鲜柚子皮汁中组分形成的纳米 粒的平均粒径为704.0228.6nm(见图2)。 可见， 鲜柚子皮汁中组分形成的纳米粒的粒径处 在有利于人体吸收和输送的粒径范围。 这是本发明制备鲜柚子皮汁的方法获得的意想不到 说 明 书 2/4 页 4 CN 108498606 A 4 的技术效果的证据。 0029 实施例4测定鲜柚子皮汁中组分的纳米粒的Zeta电位 0030 将2ml鲜柚子皮汁置于专用测定池中， 25在Zeta电位分析仪(ZetaPlus S/N 21394,Brookhaven 。
14、Instruments Corporation)上测定纳米粒表面的Zeta电位。 结果表明， 鲜柚子皮汁中组分形成的纳米粒表面的Zeta电位为-3.58.2mV(见图3)。 可见， 鲜柚子皮 汁中组分形成的纳米粒的表面带电荷。 0031 实施例5制备鲜柚子皮水煎液 0032 表面无泥沙的新鲜柚子皮1000g于浸泡池中用3000g-5000g自来水水浸泡2小时。 之后用3000g-5000g水至少洗3次， 滤除水， 得到清洁的新鲜荷叶。 将自来水洗净的新鲜荷叶 切碎放到烧瓶中， 用3000g纯净化水加热至沸， 萃取30min， 倾出水提取液。 共提取3次。 得到 的水提取液减压浓缩， 获得100。
15、10g鲜柚子皮水煎液。 鲜柚子皮水煎液既没有测得丁达尔 效应， 也没有测得Zeta电位。 0033 实施例6测定鲜柚子皮纳米汁对铅中毒小鼠的治疗作用 0034 健康ICR雄性小鼠(体重为202g)， 腹腔注射用去离子水与Pb(CH3CO2)23H2O配 成的水溶液， 剂量是8.2mg/kg/天， 连续注射7天染毒， 得到普遍使用的铅中毒小鼠模型。 铅 中毒小鼠静息48h后随机分组， 每组10只小鼠， 开始给药。 将小鼠饲养于无垫料的鼠笼内， 鼠 笼及笼盖、 水瓶等在实验前以三蒸水洗净。 空白对照组小鼠每天口服生理盐水(剂量为 0.6mL/只/天)， 阳性对照组小鼠每天口服青霉胺的生理盐水溶液(。
16、剂量为0.4mmol/kg/天)， 鲜柚子皮纳米汁组小鼠每天口服不稀释或稀释10倍或稀释100倍的鲜柚子皮纳米汁(剂量 为0.6mL/只/天)。 所有小鼠或连续口服7天生理盐水， 或连续口服7天青霉胺的生理盐水溶 液， 或连续口服7天鲜柚子皮纳米汁， 或连续口服7天鲜柚子皮水煎液。 每日给药后收集小鼠 尿液及粪便， 24时不间断， 持续7天。 每日每组小鼠的尿液及粪便分别作为一个样本。 最后一 次给药24h后， 小鼠乙醚麻醉， 脱颈椎处死。 取血、 大脑、 肝、 及左侧肾作为样本。 所用样品均 采用MARS-xpress微波硝解仪硝解(硝解液为双氧水/硝酸1/2的混合液)， 并用三蒸水定容 至。
17、20mL， 采用Varian ICP-710ES电感耦合等离子光谱仪测定各个样本的铅含量。 实验数据 见表1和表2， 统计均采用t检验和方差分析。 0035 表1的数据说明， 染铅小鼠连续口服7天口服青霉胺(剂量为0.4mmol/kg/天)可有 效降低血和肾的铅含量， 不能降低脑和肝的铅含量。 与连续口服7天服青霉胺(剂量为 0.4mmol/kg/天)的染铅小鼠不同， 染铅小鼠连续口服7天口服鲜柚子皮纳米汁血、 脑、 肝和 肾的铅含量都显著降低。 与临床用的络合治疗相比， 鲜柚子皮纳米汁在没有任何毒副作用 的前提下能够显著降低小鼠脑的铅含量。 这是本发明的意想不到的技术效果。 此外， 与生理 。
18、盐水一样， 鲜柚子皮水煎液不能降低器官和组织中的铅含量。 0036 表1鲜柚子皮汁治疗7天后小鼠血、 脑、 肝和肾的铅量(均值SD g铅/g器官)* 0037 说 明 书 3/4 页 5 CN 108498606 A 5 0038 0039 *n10； a)与生理盐水比p0.05； b)与生理盐水比p0.05。 0040 表2的数据说明， 染铅小鼠连续口服7天口服青霉胺(剂量为0.4mmol/kg/天)和未 稀释的鲜柚子皮汁都可有效提高尿和粪便的铅量。 服青霉胺和未稀释的鲜柚子皮汁都是将 堆积在器官和组织中的铅通过尿和粪便排出。 与临床用的络合治疗相比， 鲜柚子皮纳米汁 不仅没有任何毒副作用，。
19、 而且能够通过尿和粪便将堆积在血液、 器官和组织中的铅排出。 这 是本发明的意想不到的技术效果。 此外， 与生理盐水一样， 鲜柚子皮水煎液不能将堆积在器 官和组织中的铅通过尿和粪便排出。 0041 表2鲜柚子皮汁治疗7天后小鼠尿和粪便的铅量(均值SD g铅/g样本) 0042 组别尿铅粪便铅 染铅小鼠服生理盐水0.470.161.600.54 染铅小鼠服青霉胺2.340.774.391.28 染铅小鼠服鲜柚子皮水煎液0.450.171.620.53 染铅小鼠服鲜柚子皮纳米汁4.620.32a4.630.80b 0043 *n10； a)与生理盐水比p0.001,与青霉胺比p0.01； b)与生理盐水比p0.001, 与青霉胺比p0.05。 说 明 书 4/4 页 6 CN 108498606 A 6 图1 图2 说 明 书 附 图 1/2 页 7 CN 108498606 A 7 图3 说 明 书 附 图 2/2 页 8 CN 108498606 A 8 。