一种钩藤总碱水解产物的制备方法.pdf

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1、(10)授权公告号 CN 102274319 B (45)授权公告日 2013.05.15 CN 102274319 B *CN102274319B* (21)申请号 201110206899.9 (22)申请日 2011.07.22 A61K 31/407(2006.01) A61K 36/74(2006.01) A61P 9/12(2006.01) A61K 135/00(2006.01) (73)专利权人 福建农林大学 地址 350002 福建省福州市仓山区建新镇金 山学区 (72)发明人 甘纯玑 甘琴琴 杨丹丹 谢苗 (74)专利代理机构 福州元创专利商标代理有限 公司 35100 代。

2、理人 蔡学俊 (54) 发明名称 一种钩藤总碱水解产物的制备方法 (57) 摘要 本发明提供了一种钩藤总碱水解产物的制备 方法， 该方法以钩藤总碱为反应底物， 进行酯水 解、 酰胺水解、 酸化， 经树脂脱盐和后续工艺， 制备 钩藤总碱水解产物。本发明的优点在于制备的钩 藤总碱水解产物可溶于水， 易于人体吸收。 另一方 面， 钩藤总碱水解产物可吸附在树脂上， 从而可以 利用树脂来纯化水解产物， 而树脂可不经再生而 循环使用， 进而简化生产工艺和降低生产成本， 也 有利于实现生产连续化。本专利方法反应过程简 单， 效率高， 易于控制， 工艺简单、 耗能低， 产物纯 度好。 经本方法制备的钩藤总碱水。

3、解产物， 产品在 224nm 处有特征吸收， 具有良好的水溶性， 可以较 好地保持药效， 毒性较低。 (51)Int.Cl. 审查员 赵帅眉权利要求书 1 页 说明书 5 页 附图 2 页 (19)中华人民共和国国家知识产权局 (12)发明专利 权利要求书1页 说明书5页 附图2页 (10)授权公告号 CN 102274319 B CN 102274319 B *CN102274319B* 1/1 页 2 1. 一种钩藤总碱水解产物的制备方法， 其特征在于包括如下步骤 ： 反应底物 ： 钩藤总碱 ； 碱解 ： 在反应底物中加入碱溶液进行碱解 ； 酸化 ： 碱解结束后， 过滤， 收集碱解液， 加。

4、入酸溶液进行酸化， 调节溶液至 pH2.0 pH5.0 ； 脱盐 ： 酸化结束后， 过滤， 收集酸化液， 将酸化液泵入装有树脂的容器中进行吸附， 饱 和后的树脂经乙醇解吸 ； 干燥、 粉碎 ： 将步骤得到的乙醇解吸液进行浓缩、 干燥处理， 得到的干燥粉末即为 钩藤总碱水解产物。 2. 根据权利要求 1 所述的钩藤总碱水解产物的制备方法， 其特征在于 ： 所述钩藤总碱 的制备方法如下 ： 将钩藤原料烘干、 粉碎后， 用乙醇于 4 80中提取 1 3 次， 过滤， 得到钩藤总碱提 取液 ； 钩藤总碱提取液经浓缩、 酸化至 pH1 pH3、 过滤、 滤液碱化至 pH9 pH10， 得到的碱 化液再经。

5、氯仿萃取 1 3 次， 静置分层， 收集氯仿液， 经浓缩后得到钩藤总碱。 3. 根据权利要求 2 所述的钩藤总碱水解产物的制备方法， 其特征在于 ： 钩藤总碱制备 中所述乙醇为体积比为 40% 100% 乙醇。 4. 根据权利要求 1 所述的钩藤总碱水解产物的制备方法， 其特征在于 ： 步骤所述 碱溶液的浓度为 0.1mol/L 5.0mol/L ； 碱解温度为 30 100 ； 碱解时间为 10min 60min ； 所述碱溶液中采用的碱为氢氧化钠、 氢氧化铵、 碳酸钠、 碳酸钾、 氢氧化钾、 碳酸氢 钠、 碳酸氢铵、 碳酸氢钾中的一种或几种的混合物。 5. 根据权利要求 1 所述的钩藤总碱。

6、水解产物的制备方法， 其特征在于 ： 步骤所述的 酸溶液的浓度为 0.1mol/L 5.0mol/L ； 酸化温度为 10 80 ； 所述酸溶液中采用的酸 为醋酸、 盐酸、 碳酸、 乳酸、 磷酸、 己二酸、 硫酸、 酒石酸、 柠檬酸中的一种或几种的混合物。 6. 根据权利要求 1 所述的钩藤总碱水解产物的制备方法， 其特征在于 ： 步骤所述的 树脂为大孔树脂 HPD100、 HPD100A、 HPD300、 HPD700、 D101、 X-5、 XAD-2、 XAD-4、 HP20 和离子 交换树脂D301中的一种或几种的混合物 ； 所述乙醇是体积比为40%100%的乙醇 ； 吸附时 间为 5。

7、 h 24h, 解吸时间为 5 h 24h。 权 利 要 求 书 CN 102274319 B 1/5 页 3 一种钩藤总碱水解产物的制备方法 技术领域 0001 本发明涉及了一种钩藤总碱水解产物的制备方法。 背景技术 0002 中药钩藤系茜草科植物钩藤的带钩枝条。钩藤 （Uncaria rhynchophylla） 品种繁 多， 包括钩藤、 大叶钩藤、 毛钩藤、 华钩藤或无柄果钩藤等 15 种， 广泛分布于我国西南部， 是 一种可人工栽培的药用植物， 资源丰富。钩藤总碱是钩藤的深加工产品， 可用于高血压、 头 痛眩晕、 感冒夹惊等症。然而， 随着钩藤总碱应用的不断推广， 其不溶于水的特点在一。

8、定程 度上限制了钩藤总碱的应用领域。 0003 中国发明专利申请 200710098441 和 20071009990 公开了一种钩藤总生物碱的生 产方法， 利用阳离子交换树脂从中药提取液中分离钩藤总生物碱。前者采用阳离子交换树 脂柱吸附呈中性的钩藤提取液， 再用 0.5% 15% 酸液洗脱， 洗脱液再经中和、 脱盐、 干燥工 艺制备钩藤总生物碱 ； 后者则是用 0.5% 20% 的盐溶液浸泡阳离子交换树脂柱， 再以含酸 或乙醇的 0.5% 20% 盐溶液洗脱， 洗脱液再经脱盐、 浓缩、 干燥工艺制得钩藤总生物碱。该 两项专利虽然改善了钩藤总碱的生产工艺， 但是制得的钩藤总碱不溶于水， 不利于。

9、人体吸 收。 发明内容 0004 本发明的目的在于提供一种钩藤总碱水解产物的制备方法， 该方法通过制备钩藤 总碱水解产物， 从而提高水溶性， 拓宽钩藤总碱的应用领域。 0005 本发明以钩藤总碱为反应底物， 进行酯水解、 酰胺水解和酸化， 然后通过脱盐和后 续工艺， 制备钩藤总碱水解产物。 0006 本发明通过以下技术方案实现 ： 0007 由于钩藤总碱的主要有效成分是钩藤碱， 故以下以钩藤碱为例说明技术方案的实 现。 0008 首先， 将碱溶液加入到装有钩藤总碱的容器中进行碱解， 反应使钩藤碱的酰胺键 和酯键断开， 脱去苯胺和甲醇基团， 生成易溶于水的羧酸盐。由于酰胺、 酯水解可以在过量 的。

10、碱溶液中反应彻底， 因此最终钩藤碱将完全水解。其反应式如下 : 0009 钩 藤碱 说 明 书 CN 102274319 B 2/5 页 4 0010 碱解结束后， 在体系中加酸调节 pH， 使生成的羧酸盐酸化生成羧酸， 将酸化液泵入 装有树脂的容器中， 通过吸附和乙醇解吸来纯化水解产物。 收集的乙醇解吸液经浓缩、 干燥 等后续工艺， 得到钩藤碱水解产物粉末。其反应式如下 : 0011 0012 钩藤碱水解产物 0013 本发明一种钩藤总碱水解产物的制备方法， 包括如下步骤 ： 0014 反应底物 ： 钩藤总碱 ； 0015 碱解 ： 在反应底物中加入碱溶液进行碱解 ； 0016 酸化 ： 碱。

11、解结束后， 过滤， 收集碱解液， 加入酸溶液进行酸化， 调节溶液至 pH2.0 pH5.0 ； 0017 脱盐 ： 酸化结束后， 过滤， 收集酸化液， 将酸化液泵入装有树脂的容器中进行吸 附， 饱和后的树脂经乙醇解吸 ； 0018 干燥、 粉碎 ： 将步骤得到的乙醇解吸液进行浓缩、 干燥处理， 得到的干燥粉末 即为钩藤总碱水解产物。 0019 步骤所述碱溶液的浓度为 0.1mol/L 5.0mol/L ； 碱解温度为 30 100 ； 碱解时间为 10min 60min ； 所述碱溶液中采用的碱包括氢氧化钠、 氢氧化铵、 碳酸钠、 碳酸 钾、 氢氧化钾、 碳酸氢钠、 碳酸氢铵、 碳酸氢钾中的一。

12、种或几种的混合物。 0020 步骤所述的酸溶液的浓度为 0.1mol/L 5.0mol/L ； 酸化温度为 10 80 ； 所述酸溶液中采用的酸包括醋酸、 盐酸、 碳酸、 乳酸、 磷酸、 己二酸、 硫酸、 酒石酸、 柠檬酸中 的一种或几种的混合物。 0021 步骤所述的树脂为非极性多孔聚合树脂， 包括大孔树脂 HPD100、 HPD100A、 HPD300、 HPD700、 D101、 X-5、 XAD-2、 XAD-4、 HP20 和离子交换树脂 D301 中的一种或几种的混 合物 ； 所述乙醇是体积比为40%100%的乙醇 ； 吸附时间为5 h24h,解吸时间为5 h 24h。 0022 。

13、所述钩藤总碱的制备方法如下 ： 0023 将钩藤原料烘干、 粉碎后， 用乙醇于 4 80中提取 1 3 次， 过滤， 得到钩藤总 碱提取液 ； 钩藤总碱提取液经浓缩、 酸化至 pH1 pH3、 过滤、 滤液碱化至 pH9 pH10， 得到 的碱化液再经氯仿萃取 1 3 次， 静置分层， 收集氯仿液， 经浓缩后得到钩藤总碱。钩藤总 碱制备中所述乙醇为体积比为 40% 100% 乙醇。 0024 本发明通过对钩藤总碱进行化学衍生， 制备钩藤总碱水解产物， 产品易溶于水， 可 较好地保持药效， 毒性较低， 而且工艺简单， 便于推广， 以便满足市场的大量需求。 0025 通过比较图 2 和图 3 发现。

14、， 相对于钩藤总碱的红外吸收光谱图， 钩藤总碱水解产 物在 1383.54cm-1、 1246.21 cm-1、 1191.40 cm-1、 1147.79 cm-1、 918.96 cm-1处没有吸收， 在 说 明 书 CN 102274319 B 3/5 页 5 3182.82 cm-1、 796.37 cm-1处却有吸收 ； 钩藤总碱水解产物与钩藤总碱的红外吸收不同处主 要集中指纹区， 说明钩藤总碱水解产物与钩藤总碱结构相似。 钩藤总碱水解产物在3182.82 cm-1有吸收， 说明其结构中存在羧酸基团， 与其溶于水有关 ； 而在1400 cm-1-900 cm-1范围内 是 C-O、 。

15、C-N 键型吸收区域， 结合碱解、 酸化的原理， 说明钩藤总碱经碱解后， 发生了酰胺键、 酯键断裂， 脱去了苯胺基团及甲醇基团。 因此， 钩藤总碱经碱解、 酸化处理后， 结构发生了一 些变化， 但其药效结构仍然存在， 故钩藤总碱水解产物可以较好地保持药效。 0026 本发明与传统方法相比， 具有以下优点 ： 0027 1、 提供了一种以钩藤总碱为原料， 通过对其碱解、 酸化和脱盐， 制备钩藤总碱水解 产物的方法， 可以提高钩藤总碱的水溶性。 0028 2、 树脂循环使用， 且树脂脱盐效果好， 得到的钩藤总碱水解产物中含有杂质少， 进 而简化生产工艺和降低生产成本。 0029 3、 本发明制备的。

16、钩藤总碱水解产物， 产品在 224nm 处具有特征吸收， 具有良好的 水溶性。 附图说明 0030 图 1 为本发明钩藤总碱水解产物的光谱图。 0031 图 2 为钩藤总碱的红外光谱图。 0032 图 3 为钩藤总碱水解产物的红外光谱图。 具体实施方式 0033 本发明的钩藤总碱的制备， 步骤如下 ： 0034 将钩藤原料烘干、 粉碎后， 以 40% 100% 乙醇于 4 80中提取 1 3 次， 料液 比为 1:10 1:50， 提取时间为 6 h 36h， 过滤， 得到钩藤总碱提取液 ； 将钩藤总碱提取液 浓缩至浸膏， 然后加入酸溶液酸化至 pH1 pH3、 过滤、 滤液碱化至 pH9 p。

17、H10， 得到的碱化 液再经氯仿萃取 1 3 次， 静置分层， 收集氯仿液， 经浓缩、 干燥后得到钩藤总碱粉末。所述 的酸溶液的浓度为 0.1 mol/L 5.0mol/L ； 酸化温度为 10 80； 所述酸溶液中采用的 酸包括醋酸、 盐酸、 碳酸、 乳酸、 磷酸、 己二酸、 硫酸、 酒石酸、 柠檬酸中的一种或几种的混合 物。 0035 其次， 有关钩藤总碱水解产物的制备通过以下实施例进一步描述本发明， 但是本 发明不仅限于此。 0036 实施例 1 0037 将钩藤原料烘干、 粉碎后， 用体积比为 70% 乙醇提取 3 次， 料液比为 1:30， 提取时 间为 12h， 过滤， 得到钩藤总。

18、碱提取液 ； 将钩藤总碱提取液浓缩至浸膏、 加入 0.1 mol/L 盐酸 溶解、 酸化至 pH2 pH3， 然后过滤、 滤液碱化至 pH9 pH10， 得到的碱化液再经氯仿萃取 3 次， 静置分层， 收集氯仿液， 经浓缩、 喷雾干燥后得到钩藤总碱粉末。 0038 称取 0.1g 钩藤总碱粉末置容器中， 加入 50ml 0.1mol/L 的氢氧化钠溶液， 控制反 应温度 80左右， 碱解 10min 。反应结束后， 收集碱解液， 用 0.2mol/L 的醋酸溶液酸化， 直 至溶液 pH 值为 2.6 。酸化结束后， 过滤， 收集酸化液， 将酸化液泵入装有 50g 离子交换树 脂 D301 的容。

19、器中， 循环流速为 5BV/h， 吸附时间为 20h， 再往容器中泵入 100ml 的 50% 乙醇 说 明 书 CN 102274319 B 4/5 页 6 水溶液解吸， 循环流速为 8BV/h， 解吸时间为 18h， 收集乙醇水溶液， 将乙醇水溶液经旋转浓 缩和喷雾干燥， 即得钩藤总碱水解产物， 产品得率为 60% 。将所得的产品用蒸馏水溶解， 结 果发现每 100ml 水能够溶解 10g 产品， 即产品的溶解度为 10g 。 称取 50mg 的钩藤总碱和 该产品， 将钩藤总碱用3% HCl溶解后， 用蒸馏水稀释至10mg/ml， 将该产品用50ml蒸馏水溶 解， 即浓度为 10mg/ml。

20、 , 将这两种溶液通过微量注射泵以每小时 5ml/kg 注入雄性 Wistar 种大鼠股静脉中， 观察大鼠的平均动脉压 （MAP） 的变化， 以大鼠的 MAP 变化来间接说明钩藤 总碱和产品的药效。结果显示， 钩藤总碱使 MAP 降低 20.8%， 而该产品使 MAP 降低 20.5%， 因 此， 该方法制得的产品可以较好地保持药效。 0039 实施例 2 0040 称取 0.3g 钩藤总碱粉末置容器中， 再加入 30ml 0.8mol/L 的碳酸钠溶液， 控制反 应温度 70左右， 碱解 30min 。反应结束后， 收集碱解液， 用 2mol/L 的盐酸溶液酸化， 直至 溶液pH值为2.0 。

21、。 酸化结束后， 过滤， 收集酸化液， 将酸化液泵入装有20g大孔树脂HPD100 的容器中， 循环流速为10BV/h， 吸附时间为15h， 再往容器中泵入80ml 的60%乙醇水溶液进 行解吸， 循环流速为 12BV/h， 解吸时间为 20h， 收集乙醇水溶液， 将乙醇水溶液经旋转浓缩 和喷雾干燥， 即得钩藤总碱水解产物， 产品得率为 65% 。将所得的产品用蒸馏水溶解， 结果 发现每 100ml 水能够溶解 12g 产品， 即产品的溶解度为 12g 。称取 50mg 的钩藤总碱和该产 品， 将钩藤总碱用 3% HCl 溶解后， 用蒸馏水稀释至 10mg/ml， 将该产品用 50ml 蒸馏水。

22、溶解， 即浓度为 10mg/ml , 将这两种溶液通过微量注射泵以每小时 5ml/kg 注入雄性 Wistar 种大 鼠股静脉中， 观察大鼠的平均动脉压 （MAP） 的变化， 以大鼠的 MAP 变化来间接说明钩藤总碱 和产品的药效。结果显示， 钩藤总碱使 MAP 降低 20.8%， 而该产品使 MAP 降低 19.4%， 因此， 该方法制得的产品可以较好地保持药效。 0041 实施例 3 0042 称取 0.5g 钩藤总碱粉末置容器中， 再加入 40ml 1mol/L 的氢氧化铵溶液， 控制反 应温度 50左右， 碱解 40min 。反应结束后， 收集碱解液， 用 1.5mol/L 的碳酸溶液。

23、酸化， 直至溶液 pH 值为 3.2 。酸化结束后， 过滤， 收集酸化液， 将酸化液泵入装有 30g 大孔树脂 HPD100A的容器中， 循环流速为5 BV/h， 吸附时间为18h， 再往容器中泵入120ml 的70%乙醇 水溶液， 循环流速为 10BV/h， 解吸时间为 20h， 过滤， 收集乙醇水溶液， 将乙醇水溶液经旋转 浓缩和喷雾干燥， 即得钩藤总碱水解产物， 产品得率为82%。 将所得的产品用蒸馏水溶解， 结 果发现每 100ml 水能够溶解 10.3g 产品， 即产品的溶解度为 10.3g 。称取 50mg 的钩藤总碱 和该产品， 将钩藤总碱用3% HCl溶解后， 用蒸馏水稀释至1。

24、0mg/ml， 将该产品用50ml蒸馏水 溶解， 即浓度为10mg/ml ,将这两种溶液通过微量注射泵以每小时5ml/kg注入雄性Wistar 种大鼠股静脉中， 观察大鼠的平均动脉压 （MAP） 的变化， 以大鼠的 MAP 变化来间接说明钩藤 总碱和产品的药效。结果显示， 钩藤总碱使 MAP 降低 20.8%， 而该产品使 MAP 降低 20.1%， 因 此， 该方法制得的产品可以较好地保持药效。 0043 实施例 4 0044 称取 0.8g 钩藤总碱粉末置容器中， 再加入 60ml 1.5mol/L 的氢氧化钾溶液， 控制 反应温度100左右， 碱解50min 。 反应结束后， 收集碱解液。

25、， 用0.5mol/L的磷酸溶液酸化， 直至溶液 pH 值为 4.0 。酸化结束后， 过滤， 收集酸化液， 将酸化液泵入装有 70g 大孔树脂 HPD700 的容器中， 循环流速为 13 BV/h， 吸附时间为 10h， 再往容器中泵入 150ml 的 80% 乙 说 明 书 CN 102274319 B 5/5 页 7 醇水溶液， 循环流速为 12BV/h， 解吸时间为 15h， 过滤， 收集乙醇水溶液， 将乙醇水溶液经旋 转浓缩和喷雾干燥， 即得钩藤总碱水解产物， 产品得率为70%。 将所得的产品用蒸馏水溶解， 结果发现每 100ml 水能够溶解 8.7g 产品， 即产品的溶解度为 8.7。

26、g 。称取 50mg 的钩藤总碱 和该产品， 将钩藤总碱用3% HCl溶解后， 用蒸馏水稀释至10mg/ml， 将该产品用50ml蒸馏水 溶解， 即浓度为10mg/ml ,将这两种溶液通过微量注射泵以每小时5ml/kg注入雄性Wistar 种大鼠股静脉中， 观察大鼠的平均动脉压 （MAP） 的变化， 以大鼠的 MAP 变化来间接说明钩藤 总碱和产品的药效。结果显示， 钩藤总碱使 MAP 降低 20.8%， 而该产品使 MAP 降低 19.6%， 因 此， 该方法制得的产品可以较好地保持药效。 0045 实施例 5 0046 称取 0.6g 钩藤总碱粉末置容器中， 再加入 50ml 0.5mol。

27、/L 碳酸氢钾溶液与 0.5mol/L碳酸钠溶液的混合液， 控制反应温度90左右， 碱解20min 。 反应结束后， 收集碱 解液， 用 0.8mol/L 的乳酸溶液酸化， 直至溶液 pH 值为 4.5 。酸化结束后， 过滤， 收集酸化 液， 将酸化液泵入装有 45g 大孔树脂 D101 的容器中， 循环流速为 7 BV/h， 吸附时间为 16h， 再往容器中泵入 110ml 的 45% 乙醇水溶液， 循环流速为 11BV/h， 解吸时间为 8h， 过滤， 收 集乙醇水溶液， 将乙醇水溶液经旋转浓缩和喷雾干燥， 即得钩藤总碱水解产物， 产品得率为 68%。将所得的产品用蒸馏水溶解， 结果发现每。

28、 100ml 水能够溶解 9.8g 产品， 即产品的溶解 度为 9.8g 。称取 50mg 的钩藤总碱和该产品， 将钩藤总碱用 3% HCl 溶解后， 用蒸馏水稀释 至10mg/ml， 将该产品用50ml蒸馏水溶解， 即浓度为10mg/ml ,将这两种溶液通过微量注射 泵以每小时 5ml/kg 注入雄性 Wistar 种大鼠股静脉中， 观察大鼠的平均动脉压 （MAP） 的变 化， 以大鼠的 MAP 变化来间接说明钩藤总碱和产品的药效。结果显示， 钩藤总碱使 MAP 降低 20.8%， 而该产品使 MAP 降低 18.2%， 因此， 该方法制得的产品可以较好地保持药效。 说 明 书 CN 102274319 B 1/2 页 8 图 1 图 2 说 明 书 附 图 CN 102274319 B 2/2 页 9 图 3 说 明 书 附 图 CN 102274319 B 。