前列地尔脂质毫微球冻干注射剂及其制备方法.pdf

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1、(10)申请公布号 CN 102228446 A (43)申请公布日 2011.11.02 CN 102228446 A *CN102228446A* (21)申请号 201110195802.9 (22)申请日 2011.07.13 A61K 9/19(2006.01) A61K 31/5575(2006.01) A61K 47/40(2006.01) A61P 1/16(2006.01) A61P 7/02(2006.01) A61P 9/10(2006.01) A61P 15/08(2006.01) A61P 17/02(2006.01) (71)申请人 辽宁万嘉医药科技有限公司 地址 。

2、117000 辽宁省本溪市溪湖区经济开发 区生物医药产业园区 (72)发明人 董英杰 艾莉 王会芳 李乐 刘茁 邹晓峰 韩亚男 (74)专利代理机构 沈阳智龙专利事务所 ( 普通 合伙 ) 21115 代理人 宋铁军 (54) 发明名称 前列地尔脂质毫微球冻干注射剂及其制备方 法 (57) 摘要 本发明公开了一种前列地尔脂质毫微球冻干 注射剂及其制备方法， 属于药品技术领域。 前列地 尔脂质毫微球冻干注射剂， 它是由下述原料按重 量份数比制备而成 ： 前列地尔0.00050.1、 中链 油 15 60、 乳化剂 3.0 35、 聚乙二醇十二羟基 硬脂酸酯 8.5 48、 甘油 22、 海藻糖 。

3、20 200、 环 糊精 20 300。本发明前列地尔脂质毫微球冻干 注射剂复溶后粒径小于 100nm， 可以采用无菌过 滤的方式灭菌， 克服了前列地尔热不稳定的缺点， 增加了产品的稳定性。同时由于脂质毫微球具有 低于 100nm 的更小粒径， 更有利于前列地尔体内 非 RES 组织分布， 减少肺循环灭活和血液清除， 有 利于在体内长时间循环， 适于心脏和脑神经外科 疾病的治疗。 (51)Int.Cl. (19)中华人民共和国国家知识产权局 (12)发明专利申请 权利要求书 1 页 说明书 11 页 附图 3 页 CN 102228447 A1/1 页 2 1. 前列地尔脂质毫微球冻干注射剂，。

4、 其特征在于由下述组分按重量份数比制成 ： 前列地尔 0.0005 0.1 中链油 15 60 乳化剂 3.0 35 聚乙二醇十二羟基硬脂酸酯 8.5 48 甘油 22 海藻糖 20 200 环糊精 20 300。 2.2、 根据权利要求 1 所述的前列地尔脂质毫微球冻干注射剂， 其特征在于由下述组分 按重量份数比制成 ： 前列地尔 0.002 0.01 中链油 25 50 乳化剂 4.5 18 聚乙二醇十二羟基硬脂酸酯 10 42 甘油 22 海藻糖 55 145 环糊精 55 145。 3.3、 根据权利要求 1 或 2 前列地尔脂质毫微球冻干注射剂， 其特征在于所述的环糊精 为用于注射的。

5、羟丙基 - 环糊精、 羟丙基 - 环糊精、 SBE- 环糊精、 RM- 环糊精中 的一种或一种以上。 4.4、 根据权利要求 1 或 2 所述的前列地尔脂质毫微球冻干注射剂， 其特征在于所述的 乳化剂为磷脂酰胆碱含量低于 90% 的注射用大豆卵磷脂或蛋黄卵磷脂。 5.5、 权利要求 1 至 4 任意一项所述的前列地尔脂质毫微球冻干注射剂的制备方法， 其 特征在于包括下述步骤 ： 在无菌车间或百级净化车间内， 按所述重量份数比称取注射用油、 乳化剂和助乳化剂混合， 加热至 655， 加入符合所述重量份数比的前列地尔使其溶解 ； 在搅拌条件下， 缓慢加入 655符合所述重量份数比的甘油和适量水的混。

6、合溶液， 搅 拌冷却至室温， 得前列地尔脂质毫微球液体 ； 另取适量水， 首先向其中加入所述重量份数比的海藻糖， 完全溶解后， 再加入所述重量 份数比的环糊精， 待完全溶解后， 再将制备的前列地尔脂质毫微球液体在搅拌条件下慢慢 加入， 混合均匀后， 采用 0.45m 的滤膜过滤， 再用 0.22m 滤膜过滤， 灌装， 冻干， 即得。 权 利 要 求 书 CN 102228446 A CN 102228447 A1/11 页 3 前列地尔脂质毫微球冻干注射剂及其制备方法 技术领域 0001 本发明涉及一种前列地尔脂质毫微球冻干注射剂及其制备方法， 该制剂主要用于 注射给药， 用于心血管及脑神经外。

7、科疾病的治疗， 属于药品技术领域。 背景技术 0002 前列地尔是一种疗效确切的血管扩张药， 是一种人体生理物质， 该药品临床上广 泛用于冠心病， 脉管炎， 脑血栓后遗症， 重症肝炎， 血栓病， 勃起障碍症的治疗。对溃疡性疾 病， 如糖尿病性溃疡， 肢末端缺血引起的溃疡也有较好疗效。 0003 前列地尔化学性质极不稳定， 对水、 热不稳定， 很容易降解。前列地尔体内静脉给 药， 血液经过肺循环一次可灭活 90% 以上， 首过效应明显， 因此需要连续给药。前列地尔对 血管刺激性很强， 直接使用前列地尔给药， 很多病人因为疼痛反应不能耐受， 对临床应用有 较大限制。因此， 本领域技术人员研究开发了。

8、一系列可以保护主药稳定性和减少生理降解 的新剂型， 如采用 环糊精包合技术制备的前列地尔包合物粉针， 脂微球技术制备的前 列地尔乳注射液， 以及前列地尔脂质体技术等。环糊精包合虽可提高药物体外稳定性， 但 在体内能被肺酶降解， 对肺首过效应没有明显帮助。脂质体技术由于包封率较低， 工业化 困难， 较少采用。使用脂微球技术， 可在体内、 外保护前列地尔药物， 减少主药在体内血液 循环首过效应， 延长药物作用时间， 并具有靶向作用， 减少药物对血管产生的刺激性， 临床 上取得了较好的效果， 如已经上市的凯时前列地尔脂微球注射液等， 以此技术申报的专利 已有较多， 如欧洲专利 EP0097481， 。

9、前列地尔脂肪乳制备方法。中国专利 200610034259.3， 前列地尔纳米乳及其制备方法。中国专利 200410021253.3， 前列地尔冻干乳剂及其制备方 法， 中国专利200710011921.8， 一种供静脉输液用的前列地尔乳剂及其制备方法。 中国专利 200910058187.X， 一种稳定的前列地尔注射乳剂及其制备方法。 中国专利200910091207.3， 一种前列地尔注射液制备方法。中国专利 200810064654.5， 一种前列地尔脂肪乳剂的无菌 制剂的制备方法等等。中国专利 200410021253.3， 前列地尔冻干乳剂及其制备方法， 上述 的专利技术方案都是关于。

10、制备前列地尔亚微乳剂 （脂微球） 的， 其乳剂处方中， 油相基本使 用包括大豆油等长链甘油三酸酯， 乳化剂使用磷脂为主的乳化剂， 最终得到的乳剂粒径一 般在 150nm 以上， 通常在 200nm-500nm 范围， 在这些专利公开的内容中， 其粒径都在 150nm 以上， 按照目前本领域公知的知识， 可以判定制备的乳剂属于亚微乳 （脂微球） 范畴。上述 前列地尔专利技术方案均没有揭示出本发明的制备低于 100nm 乳剂惊奇的技术效果。亚微 乳注射液灭菌方法主要包括热压灭菌和完全无菌操作， 无菌过滤方法不能使亚微乳所有乳 滴微球通过滤膜， 即使在正压下大粒径乳滴挤过滤膜， 也有可能因此破坏乳剂。

11、系统， 因此， 工业化生产不能采用过滤除菌方式进行亚微乳灭菌。 完全无菌操作在工业上应用具有较大 难度， 对于含有营养成分的乳剂来说， 被细菌污染可能性非常大， 产品保障系数较低， 所以 热压灭菌是亚微乳常见、 可靠的灭菌方式。 由于前列地尔极不耐热， 使用热压灭菌可能使产 品全部降解， 即使采用短时高温方法， 产品也将产生可能高达 60% 降解物， 而且由于高热产 生的磷脂降解物继续影响主药稳定性， 使产品保质期缩短， 如现在已经上市的产品就是采 说 明 书 CN 102228446 A CN 102228447 A2/11 页 4 用这样的方式生产， 所表现出的产品技术缺陷已经极大影响了产。

12、品的临床应用。中国专利 201010168597.2， 一种注射用前列地尔冻干乳剂及其制备方法， 其公开的技术方案中虽然 部分涉及到本专利注射油和乳化剂、 冻干保护剂环糊精和糖， 但该专利内容只涉及到了传 统脂肪乳和亚微乳剂的配方和制备工艺， 属于普通乳剂， 未涉及到制备低于 100nm 脂质毫 微球配方和工艺， 尽管说明书提到其粒径范围从 50-500nm， 但从阐述的技术方案和实施例 看， 其乳剂粒径不可能小于 100nm， 其发明说明书公开的实际乳液粒径基本超过了 100nm， 实施例 1 公布的技术方案粒径虽为 85nm， 但其内容显示采用橄榄油和大豆磷脂配方高压 均质法制备， 根据制。

13、备乳剂常识， 这个技术方案属于制备普通乳剂方案， 不可能制备出小于 100nm 粒径的乳剂。该专利公开的实施例技术方案基本是传统脂肪乳和亚微乳普通乳剂处 方常用的中长链甘油三酸酯和磷脂的组合， 没有一例实施例涉及到大豆磷脂与 HS15 或磷 脂与其他表面活性剂的组合乳化， 很难形成 100nm 以下乳剂。另外， 对于冻干保护剂如何保 护制备的乳剂保持复溶后小粒径， 按照其专利所述， 采用糖类和环糊精， 但其技术方案中加 入的环糊精只是起到包合可能泄露的前列地尔作用， 由于加入量较低 （最大 0.3%） 而很难起 到冻干保护作用， 这样的技术方案不能达到保持粒径的有效效果。该专利乳剂的制备必须 。

14、要通过高压均质外部获得能量的方法得到， 乳剂体系属于热力学不稳定系统， 该专利的技 术方案只适合于制备粒径超过 100nm 以上的亚微乳 （脂微球） 等普通乳剂制剂。中国专利中 为本发明人之前申报的专利， 通过中链油和磷脂、 HS-15 复配， 可以达到 100nm 以下毫微球 的粒径， 但是由于是水溶液的缘故， 其主药稳定性和运输、 贮藏仍然受到影响， 应用有一定 的局限性， 该专利没有涉及到其冻干制剂配方。 本发明人的中国专利201010101968.5， 前列 地尔纳米粒制剂及其制备方法， 是关于经皮给药的外用制剂， 不同于本发明的内容和目的。 0004 目前已有的乳剂类公知技术中， 载。

15、药脂肪乳按照粒径大小主要包括亚微乳和纳米 脂肪乳或微乳， 亚微乳也称为脂微球 （LM） ， 按照中国药典二部 （2010 版） 等文献分类， 乳粒 粒径大于 100nm， 通常分布在 200-500nm， 属于普通乳剂范畴， 是热力学不稳定体系， 制备一 般需要有外加能量参加， 纳米脂肪乳也称为脂质毫微球 (LN)， 即脂质纳米球， 是微乳的一 种， 乳粒粒径在10-100nm之间， 大多在50nm以下， 属于热力学稳定体系， 一般制备不需要能 量参加， 其配方通常由主药、 油相、 乳化剂和辅助乳化剂组成， 它对油相、 乳化剂、 助乳化剂 和工艺具有特殊要求。两者的配方、 工艺、 理化性质、 。

16、体内组织分布和药效具有明显区别。 而冻干乳一般主要涉及到复溶后粒径和物理稳定性的保持， 在复溶时溶液避免或减少油滴 聚集是保持乳剂物理稳定性的关键， 冻干保护剂主要起到通过增加油滴间空间位阻或改变 油滴表面电位而达到阻止油滴聚集作用， 一种物理稳定良好的冻干乳通常只对应范围较窄 的冻干保护剂种类和比例， 如果一旦发生油滴聚集， 乳剂基本就被破坏了， 一般冻干乳都有 粒径增大趋势。 目前已经公开的前列地尔冻干乳剂专利主要涉及脂肪乳和亚微乳剂等普通 乳剂范畴， 未见有涉及到微乳或毫微球冻干制剂， 而其冻干保护剂主要为糖类物质， 种类繁 多， 但针对一种乳剂配方很难都实现保护乳剂粒径作用， 没有揭示。

17、出冻干保护剂实质上技 术内容。 0005 综上， 上述已经公开的专利技术方案， 没有涉及到前列地尔脂质毫微球冻干注射 剂技术方案， 没有揭示出本发明的技术方案。 发明内容 说 明 书 CN 102228446 A CN 102228447 A3/11 页 5 0006 本发明针对上述现有技术存在的问题而提供一种前列地尔脂质毫微球冻干注射 剂及其制备方法， 其复溶后粒径小于 100nm， 可以采用无菌过滤后冻干制备， 增加了产品的 稳定性， 同时由于脂质毫微球具有低于100nm的更小粒径， 更有利于前列地尔体内非RES组 织分布， 减少肺循环灭活和血液清除， 有利于在体内长时间循环， 适于心脏和。

18、脑神经外科疾 病的治疗。 0007 本发明前列地尔脂质毫微球冻干注射剂的技术方案如下 ： 一种前列地尔脂质毫微球冻干注射剂， 其特征在于由下述组分按重量份数比制成 ： 前列地尔 0.0005 0.1 中链油 ( 中链甘油三酸酯 MCT) 15 60 乳化剂 3.0 35 聚乙二醇十二羟基硬脂酸酯 8.5 48 甘油 22 海藻糖 20 200 环糊精 20 300。 0008 所述的乳化剂为注射用大豆卵磷脂或蛋黄卵磷脂， 其 PC 含量低于 90%。 0009 所述的中链油 ( 中链甘油三酸酯 MCT) 是油相。 0010 所述的海藻糖是冻干保护剂。 0011 所述的乳化剂为注射用大豆卵磷脂或。

19、蛋黄卵磷脂， 其磷脂酰胆碱 （PC） 含量低于 90%。 0012 所述的聚乙二醇十二羟基硬脂酸酯 （HS-15） 是辅助乳化剂。 0013 所述的冻干保护剂环糊精为可注射的羟丙基 - 环糊精， 羟丙基 - 环糊精、 SBE- 环糊精、 RM- 环糊精中一种或一种以上。 0014 所述冻干保护剂中也可以加入乳糖或甘露醇， 以保持冻干骨架更好。 0015 所述的甘油为等渗调节剂。 0016 本发明前列地尔脂质毫微球冻干注射剂的制备方法如下 ： 一种前列地尔脂质毫微球冻干注射剂制剂的制备方法， 其特征在于包括下述步骤 ： 在 无菌车间或百级净化车间内， 按所述重量份数比称取注射用油、 乳化剂和助乳。

20、化剂混合， 加热至 655， 加入符合所述重量份数比的前列地尔使其溶解， 在搅拌条件下， 缓慢加入 655符合所述重量份数比的甘油和适量水的混合溶液， 搅拌冷却至室温， 得前列地尔脂 质毫微球液体 ； 另取适量水， 首先向其中加入所述重量份数比的海藻糖， 完全溶解后， 再加 入所述重量比的环糊精， 待完全溶解后， 再将制备的前列地尔脂质毫微球液体在搅拌条件 下慢慢加入， 混合均匀后， 采用 0.45m 的滤膜过滤， 再用 0.22m 滤膜过滤， 灌装， 冻干。 即得。 0017 本发明的优点、 效果如下 ： 本发明前列地尔脂质毫微球冻干注射剂及其制备方法， 是在常规乳剂配方和工艺方法 制备的基。

21、础上， 进行大胆探索和创新， 提供了一种更加符合微乳的配方比例， 制出了完全不 同于普通乳剂效果的可复溶为微乳的脂质毫微球冻干剂， 以这些筛选出的油相、 乳化剂、 助 乳化剂、 水配方比值做图， 可形成可任意配比制备前列地尔毫微球的微乳区域， 见表1。 在符 合脂质毫微球形成条件的表 1 区域内选取任意比例的油相、 乳化剂、 助乳化剂、 水可制备成 说 明 书 CN 102228446 A CN 102228447 A4/11 页 6 透明的本发明前列地尔浓度的脂质毫微球液体， 进而加入冻干保护剂后制备成前列地尔脂 质毫微球冻干注射剂， 这与背景技术中普通乳剂相比具有显著的区别， 见表 2。 。

22、0018 表 1 形成前列地尔脂质毫微球液体配方比例的区域表 ： 说明 ： 按照表中的配方组成， 在本发明前列地尔浓度下， 就可以制备出粒径小于 100nm 的脂质毫微球液体， 同时此脂质毫微球液体可以无限稀释， 并且稀释后的液体仍为脂质毫 微球。 0019 符合上述组成的油相、 乳化剂、 助乳化剂比例的本发明脂质毫微球液体加入冻干 保护剂和冻干后加水复溶， 仍可以形成毫微球。 0020 表 2 背景技术中前列地尔普通乳剂与本发明毫微球液体区别及优势 说 明 书 CN 102228446 A CN 102228447 A5/11 页 7 本发明人通过研究发现， 主药前列地尔、 油相、 磷脂、 。

23、HS-15、 水在一定的比例范围内进 行工艺配比， 可以令人意外形成完全透明的毫微球液体， 这种毫微球液体完全符合微乳特 征。以符合上述条件的油相、 乳化剂、 助乳化剂、 水配方比值做图， 会形成一定范围的微乳 区域， 在该区域内选取上述材料按照本发明工艺配比， 就可以任意得到粒径在 10-100nm 的 脂质毫微球液体。另外还发现在这个组成中油相只有采用中链油和低纯度磷脂 （磷脂酰胆 碱 PC 含量小于 90%） 处方， 才可以得到可以复溶为透明液体的冻干脂质毫微球。这个体系 中， 如果采用高纯度 PC， 比如 PC 大于 98%， 制备的脂质毫微球粒径偏大或者冻干后复溶不 能得到小于 10。

24、0nm 的毫微球。在这样配方中还发现如果加入经过筛选得出的冻干保护剂， 即在 1000ml 溶液中含有不低于 2% 的环糊精和 2-20% 海藻糖保护剂， 才可以得到令人惊奇 的可迅速复溶的冻干的脂质毫微球， 如果使用低于 2% 含量比如 0.5% 的羟丙基 - 环糊 精， 这种脂质毫微球冻干剂复溶后溶液粒径明显变大， 粒径就超过 200nm 以上， 溶液变成白 色乳状液， 体系将变成热力学不稳定状态。这种冻干保护剂如果采用常规方案， 如加入一 些其他糖类物质或明胶等， 或者环糊精用量不能达到 2% 以上， 则或者不能复溶或者粒径超 过 100nm， 溶液不呈透明状， 只有采用海藻糖和高水溶性。

25、的衍生化环糊精按照本发明比例复 配， 才可以达到这种粒径小于 100nm 的透明效果。研究证明， 本发明技术方案中采用水溶性 环糊精和海藻糖， 通过衍生化环糊精对油滴表面的氢键作用及电位相斥和海藻糖的空间位 阻， 阻碍了油滴聚集， 从而达到保持冻干前小粒径的效果， 这种小粒径的前列地尔脂质毫微 球冻干注射剂比前述专利提供的液体技术方案具有更好的药学稳定性， 克服了前列地尔在 液体中不稳定的传统技术难点， 同时在工业化生产中更容易控制无菌和无热原。在鼠药代 动力学组织分布的试验中， 同大粒径的脂微球相比具有不同的组织分布行为， 更趋向于非 RES 组织， 血液清除时间更长， 这将有利于前列地尔长。

26、效、 以及对心脏病和脑神经疾病的治 疗。 0021 本发明前列地尔脂质毫微球冻干注射剂， 加水可迅速复溶， 呈透明溶液， 平均粒径 在 20-100nm， 可无限加水稀释， 该液体属于热力学稳定体系， 制备工艺不需要高压均质等提 供额外能量， 可以采用无菌过滤的方式灭菌， 工艺简单， 溶液物理稳定性比大粒径的乳剂更 为稳定， 冻干剂比液体毫微球具有更好的稳定性和运输便捷性， 主药前列地尔长期放置两 年降解小于 2%， 杂质 PGA1 产生小于 5%， 药代动力学试验显示比大粒径脂微球 （脂肪乳） 具有 更长时间的体循环， 不容易被血液清除， 易于聚集在靶器官， 减少肺循环灭活和血液清除， 提高。

27、了药效。 附图说明 0022 图 1 为实施例 1 冻干前的粒径测定结果图。 0023 图 2 为实施例 1 冻干后复溶的粒径测定结果图。 0024 图 3 为实施例 8 冻干前的粒径测定结果图。 0025 图 4 为实施例 8 冻干后复溶的粒径测定结果图。 0026 图 5 为各组织中药物累积量 （60min） 测定结果。 具体实施方式 0027 下面结合实施例详细描述本发明 ： 说 明 书 CN 102228446 A CN 102228447 A6/11 页 8 实施例 1 本发明前列地尔脂质毫微球冻干注射剂， 由下述组分按重量份数比制成 ： 前列地尔 0.0005g 中链油 ( 中链甘。

28、油三酸酯 MCT) 15g 豆磷脂 （S-75） 3g 聚乙二醇十二羟基硬脂酸酯 12g 甘油 22g 海藻糖 100g 羟丙基 - 环糊精 20g 所述前列地尔脂质毫微球冻干注射剂制剂的制备方法包括下述步骤 ： 在无菌车间或 百级净化车间内， 按上述实施例给出的重量取中链油、 豆磷脂和聚乙二醇十二羟基硬脂酸 酯混合， 加热至 655， 加入符合所述重量的前列地尔使其溶解， 在搅拌条件下， 缓慢加 入 655符合所述重量的甘油和 430g 水的混合溶液， 并用注射用水定容至 500ml， 搅拌 冷却至室温， 得前列地尔脂质毫微球液体 ； 另取适量水， 首先向其中加入所述重量的海藻 糖， 完全溶。

29、解后， 再加入所述重量的羟丙基 - 环糊精， 待完全溶解后， 用注射用水定容 至 500ml， 再将制备的前列地尔脂质毫微球液体在搅拌条件下慢慢加入， 混合均匀后， 采用 0.45m 的滤膜过滤， 再用 0.22m 滤膜过滤， 西林瓶灌装， 冻干。即得。 0028 本实施例冻干前的粒径测定结果如图 1 所示。 0029 平均粒径 (v) ： 34.75nm PDI ： 0.102 90% 粒径累积 （v） ： 41.4nm 冻干复溶后的粒径测定结果如图 2 所示。 0030 平均粒径 (v) ： 66.56nm PDI ： 0.441 90% 粒径累积 （v） ： 45.7nm 实施例 2 本。

30、发明前列地尔脂质毫微球冻干注射剂是由下述组分按重量份数比制成 ： 前列地尔 0.0005g 中链油 ( 中链甘油三酸酯 MCT) 15g 豆磷脂 （S-75） 6.4g 聚乙二醇十二羟基硬脂酸酯 8.5g 甘油 22g 海藻糖 20g 羟丙基 - 环糊精 100g 本发明前列地尔脂质毫微球冻干注射剂制剂的制备方法包括下述步骤 ： 在无菌车间或 百级净化车间内， 按上述实施例给出的重量取中链油、 豆磷脂 （S-75） 和聚乙二醇十二羟基 硬脂酸酯混合， 加热至 655， 加入符合所述重量的前列地尔使其溶解， 在搅拌条件下， 缓 慢加入655符合所述重量的甘油和430g水的混合溶液， 并用注射用水。

31、定容至500ml， 搅 拌冷却至室温， 得前列地尔脂质毫微球液体 ； 另取适量的水， 首先向其中加入所述重量的海 说 明 书 CN 102228446 A CN 102228447 A7/11 页 9 藻糖， 完全溶解后， 再加入所述重量的羟丙基 - 环糊精， 待完全溶解后， 用注射用水定容 至 500ml， 再将制备的前列地尔脂质毫微球液体在搅拌条件下慢慢加入， 混合均匀后， 采用 0.45m 的滤膜过滤， 再用 0.22m 滤膜过滤， 西林瓶灌装， 冻干。即得。 0031 实施例 3 本发明前列地尔脂质毫微球冻干注射剂是由下述组分按重量份数比制成 ： 前列地尔 0.1g 中链油 ( 中链甘。

32、油三酸酯 MCT) 60g 豆磷脂 （S-75） 12g 聚乙二醇十二羟基硬脂酸酯 48g 甘油 22g 海藻糖 200g 羟丙基 - 环糊精 300g 本发明前列地尔脂质毫微球冻干注射剂制剂的制备方法包括下述步骤 ： 在无菌车间或 百级净化车间内， 按上述实施例给出的重量取中链油、 豆磷脂 （S-75） 和聚乙二醇十二羟基 硬脂酸酯混合， 加热至 655， 加入符合所述重量的前列地尔使其溶解， 在搅拌条件下， 缓 慢加入655符合所述重量比的甘油和350g水的混合溶液， 并用注射用水定容至500ml， 搅拌冷却至室温， 得前列地尔脂质毫微球液体 ； 另取适量水， 首先向其中加入所述重量的海 。

33、藻糖， 完全溶解后， 再加入所述重量的羟丙基 - 环糊精， 待完全溶解后， 用注射用水定容 至 500ml， 再将制备的前列地尔脂质毫微球液体在搅拌条件下慢慢加入， 混合均匀后， 采用 0.45m 的滤膜过滤， 再用 0.22m 滤膜过滤， 西林瓶灌装， 冻干。即得。 0032 如下表所示。 0033 实施例 4-14 本发明前列地尔脂质毫微球冻干注射剂， 由下述组分按重量份数比制成 ： 如下表例 4 到例 14 所示。其制备方法同实施例 1。 0034 实施例 8 的粒径测定结果如图 3 所示。 0035 平均粒径 (v) ： 33.75nm PDI ： 0.110 90% 粒径累积 （v）。

34、 ： 40.3nm 实施例 8 冻干复溶后的粒径测定结果如图 4 所示。 0036 平均粒径 (v) ： 66.95nm PDI ： 0.429 90% 粒径累积 （v） ： 45.7nm 说 明 书 CN 102228446 A CN 102228447 A8/11 页 10 实施例 15 粒径测定 取以上实施例 1、 4、 5、 6、 8、 9、 12 所得到的前列地尔脂质毫微球冻干注射剂， 使用激光 散射光谱仪 （PCS） 进行冻干前和冻干后复溶粒径测定， 结果见下表及图 1 至图 4 ： 说 明 书 CN 102228446 A CN 102228447 A9/11 页 11 实施例 。

35、16 药物含量测定 称取实施例 4、 6、 8、 9、 12 所得到的各前列地尔脂质毫微球冻干注射剂样品适量， 约相 当于含前列地尔10ug， 分别加入5ml无水乙醇， 精密称定， 超声提取5分钟， 用无水乙醇补足 失重后， 过 0.45um 的膜， 取续滤液为供试品， 按照高效液相法， 用十八烷基硅烷键合硅胶为 填充剂， 以 0.0067mol/L 磷酸盐缓冲液 （pH 为 6.3） （取磷酸二氢钾 9.07g， 加水使溶解， 制 成 1000ml， 另取无水磷酸氢二钠 9.46g， 加水使溶解， 制成 1000ml， 将后者加到前者中， 直至 pH 为 6.3， 取此液 100ml 加水至。

36、 1000ml， 摇匀， 即得） - 乙腈 （3:1） 为流动相 ； 流速为每分钟 1ml ； 柱后反应液为 1mol/L 氢氧化钾溶液， 柱后反应管为聚四氟乙烯管 （0.5mm10m） ； 柱 温 60 ； 检测波长 278nm。按外标法测定， 测定结果见下表 : 实施例 17 药物包封率测定 称取实施例 4、 6、 8、 9、 12 所得到的各前列地尔脂质毫微球冻干注射剂样品 1000mg， 分 别加蒸馏水 5ml， 使溶解， 使用截留分子量 3000 道尔顿的超滤离心管， 以 5000rpm/ 分离心， 得滤液， 按照上述高效液相法测定， 结果见下表 ： 实施例 18 药物的稳定性研究 。

37、取实施例 8 所得到的前列地尔脂质毫微球冻干注射剂样品及自制前列地尔脂肪乳样 品 （121热压灭菌6分钟） ， 进行18个月的4长期留样考察。 以各取样时间点PGE1和PGA1 说 明 书 CN 102228446 A CN 102228447 A10/11 页 12 的含量作为评价指标。考察结果见下表 ： 实施例 19 氚标记示踪法测定前列地尔脂肪乳、 冻干 PGE1-LN 与 PGE1-LN( 冻干前 ) 的体内分布差 异 给药量 ： 50g/ kg 实验分组 ： 给药组 -1 ： 3H-PGE 1-LN 冻干注射剂 （毫微球冻干注射剂 ） 平均粒径 ： 50 nm 规格 ： 10g/ 瓶。

38、 给药组 -2 ： 3H-PGE 1-LN（毫微球） 平均粒径 ： 35 nm 规格 ： 5g/ml 给药组 -3 ： 3H-PGE 1-LM（脂肪乳） 平均粒径 ： 210 nm 规格 ： 5g/ml 实验前准备 ： 氘化标记 PGE1并制备 3H-PGE 1-LM（脂肪乳） 、 PGE1-LN（毫微球） 与 PGE1-LN 冻干注射剂 （毫微球冻干注射剂）（按照本发明制备的前列地尔脂质毫微球冻干注射剂） ， 加入纯水复溶， 制成 5g/ml 溶液， 稳定实验表明样品在 3 周内保持稳定， 配置闪烁液。 0037 实验过程 ： 昆明种小鼠 27 只 （雄性） ， 随即分成三组， 每组 9 只。

39、， 实验前禁食一夜。按 50g/ kg 给 说 明 书 CN 102228446 A CN 102228447 A11/11 页 13 药剂量分别尾静脉注射给予 3H-PGE 1-LM（脂肪乳） 、 3H-PGE 1-LN（毫微球）与 3H-PGE 1-LN 冻 干注射剂 （毫微球冻干注射剂） 。分别于给药后 5min,15min， 60min（每个时间点 3 只小鼠） 处死动物， 取出心、 肝、 脾、 肺、 肾、 脑生理盐水冲洗、 滤纸吸干后精确称重， 备用。液体闪烁 计数仪测定组织样品中放射性活度值 （R） ， 根据所测各组织放射活度值及组织重量计算各 组织单位放射性活度Rd， 按下面公式。

40、计算三个给药组在小鼠体内的 3H-PGE 1-LM（脂肪乳） 、 3H-PGE 1-LN（毫微球） 与 3H-PGE 1-LN 冻干注射剂 （毫微球冻干注射剂） 浓度 ： C=R3/R0 其中 ：R为组织中检测到的放射性活度值 ；R0为对照溶液的放射性活度值。 0038 绘制组织中药物浓度 （c） - 时间 （t） 曲线， 矩形法分别计算出各组织中药物的 AUC 值， 得出三组药物在体内的分布趋势如下 ： 3H-PGE 1-LM（脂肪乳） ： 脑脾心肾肝肺 3H-PGE 1-LN（毫微球） ： 脑肾心肺肝 = 脾 3H-PGE 1-LN 冻干注射剂 （毫微球冻干注射剂） ： 脑肾心肺肝 = 脾。

41、 结论 ： 由初步组织分布实验结果可以看出， PGE1-LN 冻干注射剂 （毫微球冻干注射剂） 冻干 前后其组织分布趋势基本相同， 药物在脑和心脏、 肾组织中均被检测到最多， 均显著超过 PGE1-LM（脂肪乳） 组， 趋向分布于非 RES 组织， 而 PGE1-LM 组趋向分布 RES 组织。 0039 上述各组织中的药物累积量 （60min） 测定结果如图 5 所示。 说 明 书 CN 102228446 A CN 102228447 A1/3 页 14 图 1 图 2 说 明 书 附 图 CN 102228446 A CN 102228447 A2/3 页 15 图 3 图 4 说 明 书 附 图 CN 102228446 A CN 102228447 A3/3 页 16 图 5 说 明 书 附 图 CN 102228446 A 。